SK12582003A3 - Použitie proteínu UK114 alebo jeho fragmentov, peptidy majúce 10 až 20 aminokyselín a farmaceutický prostriedok s ich obsahom - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka použitia UK114 proteínu alebo jeho fragmentov na liečenie a prevenciu endotoxického šoku.

Doterajší stav techniky

Šok je klinický syndróm charakteristický nedostatočným prekrvením tkanív a niekoľkými klinickými symptómami, ako napríklad úzkosťou, zmätením, kómou, hyperventiláciou, oligúriou, anúriou, nízkym tlakom, zúžením ciev a vazodilatáciou. Tieto symptómy môžu byť až také vážne, že sú často fatálne (Beal A. a ďalší, JAMA, 1990, 271:226-233).

Sepsa je v poradí treťou najčastejšou príčinou šoku, po hemorágii a infarkte myokardu. Najmä gram-negatívne baktérie sú hlavnou príčinou septického šoku, hoci takúto úlohu môžu zohrávať aj infekcie plesňami, riketsiami a vírusmi (Beal A. a ďalší, JAMA, 1990, 271:226-233).

Výskyt endotoxického šoku u zdravých jedincov, mladších ako 40 rokov je zriedkavý, ale jeho frekvencia sa môže zvýšiť v dôsledku cukrovky, endoskopických operácií, chronických hepatopatií, dyskrázie krvi a dlhodobého užívania imunosupresívnych liekov, ako napríklad kortikosteroidov a cyklosporínu A.

Doteraz neexistuje terapeutický prístup na liečenie endotoxického šoku. Z toho vyplýva veľmi vysoké riziko smrti u hospitalizovaných pacientov, najmä v prípade infekcií s gram-pozitívnymi baktériami, ktoré dosahuje približne 50 až 80 % (Beal A. a ďalší, JAMA, 1990, 271:226-233).

Podstata vynálezu

Teraz sa zistilo, že proteín UK114, opísaný vo WO 96/02567 a vo WO

00/63368, ktoré sú tu zahrnuté prostredníctvom ich citácie, ktorý bol doteraz študovaný z hľadiska sérií terapeutických aplikácií zahŕňajúcich liečenie neoplázie

-2(WO 96/02567), autoimunitných ochorení (WO 98/11909), TNF-indukovaných ochorení (WO 98/42366), AIDS (WO 98/11137), liečenie a prevenciu transplantovaných orgánov (WO 00/78329), môže byť výhode používaný na liečenie endotoxického šoku.

Podstatou vynálezu je teda použitie UK 114 proteínu alebo jeho fragmentov na výrobu lieku na liečenie a prevenciu endotoxického šoku.

Zistilo sa tiež, že rovnaká farmakologická aktivita je zdieľaná peptidmi majúcimi 10 až 20 aminokyselín, výhodne 12 až 18 aminokyselín, ktoré majú sekvencie zodpovedajúce 1-20 sekvencii (N-koncová) až 55-98 sekvencii natívneho UK114 proteínu.

Vynález sa preto týka aj uvedených peptidov a farmaceutických prostriedkov, ktoré ich obsahujú.

Výhodné peptidy podľa vynálezu majú nasledujúce sekvencie, zodpovedajúce polohám 1-15, 61-75 a 76-90 natívneho proteínu. Met-Ser-Ser-Leu-Val-Arg-Arg-lle-lle-Ser-Thr-Ala-Lys-Ala-Pro (sekvencia č. 1, peptid 1-15)

Asn-lle-Gly-Glu-lle-Leu-Lys-Ala-Ala-Gly-Cys-Asp-Phe-The-Asn (sekvencia č. 2, peptid 61-75)

Val-Val-Lys-Ala-Thr-Val-Leu-Leu-Ala-Asp-lle-Asn-Asp-Phe-Ser (sekvencia č. 3, peptid 76-90).

Výhodný je najmä peptid zodpovedajúci sekvencii 76-90.

Vynález zahŕňa aj peptidy, ktoré sú funkčne ekvivalentné peptidom definovaným vyššie.

Výraz „funkčne ekvivalentný peptid“ znamená peptid majúci porovnateľnú aktivitu ako nemodifikovaný peptid, a ktorý v porovnaní s uvedenými sekvenciami má konzervatívne aminokyselinové substitúcie a/alebo delécie a/alebo inzercie a/alebo substitúcie so zodpovedajúcimi aminokyselinami D série a/alebo je derívatizovaný na amino, hydroxy a tio skupinách a/alebo má retro-invertované aminokyseliny.

Uvedené modifikácie spadajú do rozsahu zručností akéhokoľvek experta a ich výsledkom môžu byť peptidy stabilnejšie voči enzymatickej hydrolýze a/alebo peptidy majúce odlišné farmakokinetické vlastnosti. Príprava peptidov sa

-3uskutočňuje bežnými metódami, výhodne použitím syntézy na tuhej fáze podľa Merrifielda, alebo podobných metód.

Na terapeutické použitia, ktoré prichádzajú do úvahy sa UK114 proteín a zodpovedajúce peptidy budú podávať parenterálne, vo forme vhodných farmaceutických prostriedkov, v dávkach, ktoré môžu klinický pracovníci jednoducho determinovať podľa farmakokinetických a toxikologických vlastností UK 114 proteínu alebo použitého peptidu, ako aj v súlade so závažnosťou ochorenia a stavu pacientov (hmotnosť a vek). Denné dávky budú zvyčajne v rozsahu od 0,1 do 10 mg UK 114 alebo peptidu, intramuskulárnym alebo subkutánnym spôsobom, voliteľne rozdelené do viacerých podaní.

Farmakologická aktivita UK114 a peptidov podľa vynálezu sa študovala na myšacom modeli ĽPS-indukovaného šoku, ako je uvedené v nasledujúcom príklade.

Príklad uskutočnenia vynálezu

Balb/c myšiam, starým 6 až 8 týždňov, sa i.p. podalo 30 pg UK114 v 100 μΙ PBS (skupina B) alebo 4 pg peptidu 76-90 (skupina C) 24 hodín a jednu hodinu pred podaním 500 pg LPS. Kontrolná skupina myší (skupina A) sa ošetrila so 100 pl PBS v súlade s rovnakým protokolom, ktorý bol použitý pre skupiny C a B.

Ďalšia skupina sa ošetrila len s UK114 jednu hodinu po podaní LPS (skupina D). Tento experimentálny prístup sa viac podobá klinickej praxi, kde je ťažké zasiahnuť profylaktický.

Počet úmrtí zvierat sa zaznamenával každých 12 hodín až do tretieho dňa po LPS injekcii.

Ako je ukázané v tabuľke, i.p. podávanie LPS spôsobilo smrť u väčšiny kontrolných zvierat (ošetrené s PBS) v rámci pozorovacej periódy (72 hodín po LPS). Zvieratá profylaktický ošetrené sUK114 alebo s peptidom 76-90 boli jasne chránené pred letálnymi účinkami LPS a výskyt smrti bol významne nižší ako v kontrolnej skupine. Tento ochranný účinok, hoci menej markantný, bol prítomný aj u myší terapeuticky ošetrených s UK114 len 1 hodinu po LPS podaní. Ochranný účinok UK114 nebol len prechodný, keďže žiadna z prežívajúcich myší neuhynula v nasledujúcom mesiaci, v ktorom sa myši sledovali.

-4Tieto údaje ukazujú, že podanie UK114 nie len, že môže predchádzať, ale môže aj „liečiť“ letálne účinky LPS injekcie na známom živočíšnom modeli endotoxického šoku. Získané údaje jasne naznačujú dôležitú úlohu UK114 v prevencii endotoxického šoku u rizikových subjektov a pri liečení subjektov, ktoré sú už postihnuté endotoxickým šokom.

Tabuľka

Účinky liečenia sUK114 a s peptidom 76-90 na LPS-indukovaný endotoxický šok u myší

Skupina (n)	Liečenie	Frekvencia a čas*	Výskyt smrti (po 72 hodinách)
A (50)	PBS	-24, -1	4/50 (80%)
B (50)	UK114	-24, -1	14/50 (28%)**
C (50)	pep. 76-9	-24, -1	25/50 (50%)***
D (50)	UK114	+1	25/50 (5%)***
* hodiny od podania	LPS

** p<0,0001 vs skupina A *** p=0,003 vs skupina A prostredníctvom štatistickej analýzy Chi štvorcov

-5Zoznam sekvencii <110> Zetesis Spa <120> Použitie UK114 proteinu alebo jeho fragmentu na liečenie a prevenciu endotoxického šoku <130> 690pct <160>3 <170> Patentln version 3.1 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Capra hircus <400> 1

Met Ser Ser Leu Val Arg Arg íle íle Ser Thr Ala Lys Ala Pro 15 10 15 <210>2 <211> 15 <212> PRT <213> Capra hircus <400> 2

Asn íle Gly Glu íle Leu Lys Ala Ala Gly Cys Asp Phe Thr Asn 15 10 15 <210>3

-6<211> 15 <212> PRT <213> Capra hircus <400>3

Val Val Lys Ala Thr Val Leu Leu Ala Asp íle Asn Asp Phe Ser 15 10 15

Claims (6)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Použitie UK 114 proteínu alebo jeho fragmentov na výrobu lieku na liečenie a prevenciu endotoxického šoku.
2. 2. Peptidy majúce 10 až 20 aminokyselín, ktoré majú sekvencie zodpovedajúce 1-20 sekvencii (N-koncovej) a 55-95 sekvencií natívneho UK114 proteínu.
3. 3. Peptidy podľa nároku 2, ktoré majú 12 až 18 aminokyselín.
4. 4. Peptidy podľa nároku 3, ktoré majú sekvenciu č. 1, č. 2 alebo č. 3.
5. 5. Peptidy podľa nárokov 2 až 4, ktoré sú modifikované prostredníctvom konzervatívnych aminokyselinových substitúcií a/alebo delécií a/alebo inzercií a/alebo substitúcií so zodpovedajúcimi aminokyselinami D sérií a/alebo sú derivatizované na amino, hydroxy a tio skupinách a/alebo obsahujú retroinvertovanú aminokyselinu.
6. 6. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje peptid podľa nárokov 2 až 5 v zmesi s vhodným nosičom.