SI8612249A8 - Postopek za pripravo azoniaspironortropanolestrov - Google Patents

Description

Azoniaspironortropanolestri, postopek za njihovo pripravo in farmacevtska sredstva

Izum se nanaša na nove azoniaspironortropanolestre; na pošto pek za pripravo azoniaspihonortropanolestrov in na farmacevtska sredstva, ki vsebujejo to spojino.

Novi azoniaspironortropanolestri imajo splošno formulo (I)

i v kateri pomenijo

R. enega od naslednjih ostankov

a) alkilenski ostanek s splošno formulo *3

-ICH₂)_n-CH-(CB₂)_ov kateri pomeni R^ atom vodika ali alkilno, benzilno, arilno ali alkoksikarbonilno skupino in n stoji za celo število od 1 do 4,

b) alkenilenski ostanek s splošno formulo

c)

X \ “^^CH2^n ^^CH2^ v kateri pomenita R^ in atom vodika ali alkilni celo število od 1 do 4, azaalkilenski ostanek s n

R^, ki sta lahko enaka ali različna, ali alkenilni ostanek, in n stoji za splošno formulo

-(CB₂)_n-l,-(CH₂)_n.

v kateri pomeni R^ atom vodika, alkilno, alkoksikarbonilno ali acilno skupino in n stoji za celo število od 2 do 4,

d) oksaalkilenski ostanek s splošno formulo

-(CH₂)_n-O-(CH₂)_nv kateri stoji n za celo število od 2 do 4,

e) epoksialkilenski ostanek s formulo

- CH- - CH — CH - CH’ ²

f) o-fenilenski ostanek s splošno formulo

h) 2,3-kinoksalinenski ostanek s splošno formulo

pri čemer v formulah f) do h) ostanka X in Ϊ neodvisno drug od drugega pomenita atom vodika ali alkilni ali alkoksi ostanek,

R₁ in R₂, ki sta lahko enaka ali različna, atom vodika ali atom halogena ali alkilni, alkoksi, alkoilni, cikloheksilni, fenilni, alkilfenilni, alkoksifenilni, halogenofenilni, tienilni ali furilni ostanek, pri čemer vsebujejo alkilne skupine, ki se nahaja jo v navedenih ostankih, 1 do 6 atomov ogljika in so lahko ravne ali razvejene, in po anion 1- do 3-valentne mineralne kisline.

Priprava derivatov azoniaspironortropana sledeči reakcijski shemi:

se vrši običajno

Tropin Nortropin

stopnja b alkiliranje stopnja b zaestrenje stopnja c zaestrenje

n.

II r

stopnja c’ alkiliranje’

9=4

O-C-R'

V tej shemi pomeni R’ ostanek karboksilne kisline in A aminsko, zaščitno skupino.

Oksidativno demetiliranje tropina v nortropin (stopnja a) je opisal S.P. Findley v J.Am.Chem.Soc. 75. 3204 (1953). Ta postopek, ki poteka s prenasičeno raztopino tropina pri 15 °C in ob reakcijskem času od 4 do 7 dni, pa v tehničnem merilu ni izvedljiv, ker pri teh reakcijskih pogojih koncentracije tropina, ki je potrebna za to reakcijo^ni mogoče vzdrževati stabilno, ker se tropin spontano izloča in je s tem nadaljnji reakciji odtegnjen. Tudi homogeniziranje izločenega tropina, npr. z inline-homogenizatorjem ni privedlo nikakršnega zaznavnega izboljšanja.

Znano je tudi, da se da demetiliranje izvesti z izmenjavo metilne skupine z N-alkoksikarbonilno skupino in temu sledečo hidrolizo alkoksikarbamata (J.C. Kirn, Org.Prep.Proč.Int.,

2, 1-4 (1977). V primeru 8-etoksikarbonilnortropina znaša najboljši dobitek nortropina, ki ga je moč najti v literaturi, 16 % glede na tropin. (G. Kraiss, K.Nador, Tetr.Lett., 1971, str. 7, 8). Kasneje so celo poročali, da kisla ali alkalna cepitev 8-etoksikarbonilnortropina ni možna (T.A. Monzka, J.D. Matiskella, R.A. Partyka, Tetr.Lett., 1974, str. 1325-1327).

Presenetljivo smo sedaj ugotovili, da se da pripraviti azoniaspironortropanolestre z dobrim dobitkom, če izvedemo demetiliranje tropina v prisotnosti C^-C^-kloroalkana, ki vsebuje skupino CCl^, tako dobljeni notropin alkiliramo z dihalogenidi v prisotnosti aminov in ustrezno azoniaspiro spojino zaestrimo s presnovo s kislinskim imidazolidom v prisotnosti katalizatorja.

Postopek za pripravo azoniaspironortropanolesfcrov 3 splošno formulo I, v kateri imajo R, R^, in Αθ navedene pomene, je označen z

a) demetiliranjem tropina v nortropin,

b) presnovo nortropina z dihalogenidi v ustrezne azonia spojine in

c) zaestrenjem azonia spojin tako, da

A) izvedemo demetHiranje tropina s formulo II

(II) tako, da bodisi delamo s C^-C^-kloroalkanom, ki vsebuje najmanj eno skupino CCl^, v prisotnosti oksidacijskega sredstva v bazični vodni raztopini, bodisi presnovimo tropin z estrom kloromravljinčne kisline v inertnem topilu v prisotnosti sredstva za vezanje kisline v 8-alkoksikarbonilnortropin in le-tega hidroliziramo v vodni raztopini z bazo.

presnavljamo v dipolarnem aprotičnem topilu s spojino s sploš no formulo

- 7 C)

A - R - A , v kateri imata A in R zgoraj navedene pomene, v prisotnosti sekundarnega ali terciarnega amina pri sobni temperaturi en do več dni, in tako dobljeno spojino s splošno formulo IV

v kateri imata R in A zgoraj navedene pomene, v brezvodnem dipolarnem aprotičnem topilu zaestrimo z imidazolidom s splošno formulo V

(V), v kateri imata R₁ in R₂ nosti katalizatorja zgoraj navedene pomene, v prisot8 in v primeru, da vsebuje ostanek R potem, ko je prešel sko zi stopnji B in/ali C, eno ali več olefinskih dvojnih vezi v azonijevem obroču, te nenasičene spojine hidriramo v polarnem topilu s pomočjo katalizatorja iz žlahtne kovine v ustrezne nasičene spojine, pri čemer dobimo spojino s splošno formulo I, v kateri ima R pomen ostanka kot a).

n je lahko v gornjih ostankih enak ali različen. Prednostno izberemo v gornjih ostankih n tako, da nastane 5- ali 6členski obroč.

Anion A Q je zlasti halogenidni ion, kot klorid, bromid ali jodid, fosfat, sulfat ali nitrat

Primeri za ostanek R so

-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂9

V okviru pričujočega izuma so lahko alkilni ostanki (vključno tisti _v alkoksi, acilnih, alkilamino skupinah in podobno) nerazvejeni ali razvejeni, lahko obsegajo 1 do 18 atomov ogljika, prednostno 1 do 6 in najbolj prednostno 1 do 4 atom^ ogljika.

Primerni ostanki so npr. metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, heksil, lavril, stearil.

Prednostna acilna ostanka sta acetil ali benzoil.

STOPNJA A

Ta stopnja postopka omogoča demetiliranje tropina tudi v tehničnem merilu in daje nortropin v dobitku, ki je v primerjavi s stanjem tehnike znatno večji. Pri tem sta uporabni dve varianti postopka, namreč oksidativno demetiliranje in karbamatna metoda.

Prednosti oksidativne metode temelje na uporabi C^-C^kloroalkana z najmanj eno skupino CCl^, ki je fino dispergiran v vodni fazi.

Primerni kloroalkani so npr. 1,1,1-trikloroetan in 1,1,1-tri kloropropan, prednostno kloroform. Količina kloroalkana je v območju od 1 do 10 vol.%, prednostno 1 do 5 vol. % in najbolj prednostno 2 do 4 vol. %.

Za demetiliranje lahko uporabimo vsako, za ta namen običajno uporabljano oksidacijsko sredstvo, prednostno pa uporabljamo kalijev heksacianoferat III.

Postopek lahko izvedemo v širokem temperaturnem območju, npr. v območju od 0 °C do 100 °C, prednostno pa delamo pri temperaturi 20 do 30 °C. Po končani reakciji produkt protitočno ekstrahiramo, prednostno s topilom, uporabljenim za demetiliranje.

Oksidativna metoda vodi v primerjavi z znanimi postopki do znatnega prihranka na času, kar še dodatno poveča gospodarnost postopka v smislu izuma.

Prednostno pa delamo po karbamatni metodi. V ta namen presnovimo tropin v inertnem topilu s 4- do 6-kratnim prebitkom estra kloromravljinčne kisline, v splošnem etil estra klorotnravl jinčne kisline. Kot topilo uporabljamo pri tem prednostno kloriran ogljikovodik, zlasti kloroform. Reakcijo izvajamo v prisotnosti sredstva za vezanje kisline, prednostno karbonatov ali bikarbonatov alkalijskih kovin. Delamo pri zvišani temperaturi, prednostno v območju od 40 do 80 °C.

Tako dobljeni 8-alkoksikarbonilnortropin po daljnosežnem oddestiliranju topila hidroliziramo z bazo v vodni raztopini. Kot bazo uporabljamo prednostno kalijev ali natrijev hidroksid, prednostno v 16-do 20-kratnem prebitku.

Nortropin ekstrahiramo iz vodne reakcijske zmesi tako, kot je opisano zgoraj za oksidativno demetHiranje.

Po postopku iz stopnje A se da dobiti nortropin, zlasti po karbamatni metodi, s skoro kvantitativnim dobitkom.

STOPNJA B

V stopnji A dobljeni surovi nortropin lahko uporabimo v stopnji B brez nadaljnjega čiščenja, za katerega je potrebno po stanju tehnike 48-urno kontinuirano ekstrahiranje in kristali11 zacija z dietil etrom. Presenetljivo smo namreč ugotovili, da se v surovem nortropinu kot onečiščenje še prisotni tropin pri reakcijskih pogojih stopnje B ne kvaternizira.

Za kvaterniziranje nortropina primerna topila so N,N-dimetil formamid, kloroform ali kloroform/acetonitril. Z dihalogenidi v prisotnosti sekundarnih ali terciarnih aminov dobimo po enodo večdnevni reakciji pri sobni temperaturi ustrezne azoniaspiro spojine v čisti obliki in z velikim dobitkom. Prednostno delamo v brezvodni raztopini in uporabimo nortropin, amin in dihalogenid v molskem razmerju 1:2:4. Kot smo že omenili, ima z dobrim dobitkom dobljeni produkt visoko čistoto tako, da lahko nadaljnja operacija Čiščenja odpade.

Za to presnovo primerni sekundarni amini so npr. dimetilamin, dietilamin, diizopropilamin, dicikloheksilamin ipd. Primerni terciarni amini so trimetilamin, trietilamin, piridin, kinolin ipd. Prednosten je dietilamin.

STOPNJA C

Tako iz stopnje B dobljene azoniaspiro spojine kot tudi imidazolidi karboksilnih kislin so v brezvodnih, dipolarnih aprotičnih topilih, kot acetonu, acetonitrilu, dimetilformamidu, tetrahidrofuranu ipd., ki se običajno uporabljajo za tovrstne presnove, na splošno slabo topni. Ce skušamo s tem povezane probleme premagati na običajen način z zvišanjem reakcijske temperature, so pri tem nastali produkti onečiščeni z visokim deležem stranskih produktov. Zlasti imidazolidi karboksilnih kislin, ki imajo nezaščiteno hidroksilno skupino, reagirajo pri zvišani temperaturi sami s seboj.

Sedaj pa smo presenetljivo ugotovili, da lahko izvedemo presnovo spojine s splošno formulo IV z imidazolidom karboksilne kisline s splošno formulo V v prisotnosti primernega katalizatorja tudi v zgoraj omenjenih brezvodnih, dipolarnih aprotičnih topilih tako, da presnovimo reakcijske partnerje v suspenziji. Prednost tega postopka je v tem, da proste hidroksilne skupine v imidazolidih karboksilne kisline ni treba zaščititi in da se reakcijski produkt izloči iz zgoraj omenjenih topil in ga zato lahko izoliramo na enostaven način. Reakcijski produkt ni onečišČen, kot bi lahko pričakovali, z enim od reaktantov, uvedenih v reakcijo v trd ni obliki. Razen tega poteka reakcija pri tako blagih pogojih, da ne potekajo nikakršne reakcije fragmentiranja in eliminiranja, ki bi jih lahko pripisali prisotnosti kvartarne amonijeve skupine. Zato tudi ne morejo nastati ustrezni stranski produkti.

Kot najugodnejši katalizator za ta postopek se je pokazal 4-(dimetilamino)-piridin. To spojino uporabljamo glede na imidazol benzilne kisline v količinah od 1 do 30 mol. %, prednostno 5 do 10 mol. %.

Kot topila uporabljamo že zgoraj omenjena brezvodna, dipolarna aprotična topila. Reakcijo izvedemo pri zvišani temperaturi, prednostno pri 60 do 80 °C.

Priprava imidazolidov karboksilnih kislin, ki jih uporablj mo pri tej presnovi, se vrši na sam po sebi znan način s presnovo Ν,Ν-karbonildiimidazola z ustreznimi karboksilnimi kislinami v suhem diklorometanu.

STOPNJA D

Ker dosežemo pri kvaterniziranju po stopnji B.) z dihalogenidi, substituiranimi ob dvojni vezi, npr. z bis-1,4-diklorobutenom veliko večjo reakcijsko hitrost, kot npr. namesto 18 dni 1 uro, je lahko ugodno, če izberemo za pripravo spojin s splošno formulo I, v kateri ima R pomen ostanka kot a), npr. benzoiloksinortropan8-spiro-1 ’-pirolidinijevih soli,pot.· preko ustreznih nenasičenih t

spojin s temu sledečim katalitskim hidriranjem, bodisi po pretečeni stopnji B) ali po stopnjah B) in C).

Hidriranje nenasičenih spojin izvedemo v polarnem topilu^ kot vodi ali alkoholu z 1 do 4 atomi ogljika, posebna izvedbena oblika za to je metanol, v prisotnosti katalizatorja iz žlahtne kovine, platinovega dioksida ali paladija na aktivnem oglju.

Pri uporabi nenasičenega halogenida uporabljamo pri kvaterniranju bistveno manjši prebitek dihalogenidov. Prednostno zgoraj označeno molsko razmerje med nortropinom, aminom in dihalogenidom 1:2:4 pri stopnji B) lahko takrat znižamo na 1:2:2.

v kateri imajo R, Rp in A® zgoraj navedene pomene, imajo izvrstne spazmolitične lastnosti.

Predmet izuma so zato tudi farmacevtska sredstva, ki vsebu jejo najmanj eno od spojin v smislu izuma, v danem primeru skupaj s farmacevtskimi nosilci in/ali dodatki.

PRIMER 1

3oc -rbenziloiloksi-nortropan-8-spiro-1 *-pirolidinijev klorid

Stopnja A: Demetiliranje tropina v nortropin.

V 300 1 mešalnem kotlu z nasajenim povratnim hladilnikom raztopimo 1,9 kg tropina (97 %-nega, kar ustreza 1,843 kg čiste snovi, kar ustreza 13 molom) v 240 1 kloroforma in vmešamo 5,7 kg natrijevega hidrogenkarbonata v prahu in 5,3 1 etil kloroformiata (>98 %-nega, kar ustreza 6,0 kg, kar ustreza 55,7 mola). Segrevamo do vrenja in nato še 2 uri pod refluksom. Napredovanje reakcije spremljamo s pomočjo tenkoslojne kromatografije (kremenični gel 60; dimetilformamid/dietilamin/etanol/etil acetat: 5:10:30:60).

Še vroče reakcijsko zmes filtriramo in kloroform oddestiliramo. Ostanku dodamo raztopino 18 kg kalijevega hidroksida (85 %-nega) v 90 1 vode. Segrevamo do vrenja in potem še 9 ur pod refluksom. Ohlajeno raztopino nato ekstrahiramo s Karrovo kolono s kloroformom. Ekstrakcijski pogoji: stacionarna faza je lahka faza (raztopina kalijevega luga), ki jo prevajamo z okoli 14 1/h. Dispergirana faza je težka faza (kloroform), ki jo prevajamo z okoli 35 do 40 1/h. Stresalna frekvenca: 200 gibov/min.

Temperatura: 26 do 28 °C.

Nastali nortropin na ta način skoraj kvantitativno ekstrahiramo iz raztopine kalijevega luga. Po odstranjenju topila uporabimo surovi produkt v stopnji B brez nadaljnjega čiščenja.

Dobimo 1,876 kg nortropina z vsebnostjo 87 % (HPLC: kolona μ-Bondapack C^g; eluent: metanol/voda: 1:9 s PIC-B7). To ustreza 1,632 kg čistega nortropina, kar ustreza dobitku 98 %.

Stopnja B: 3o< -hidroksinortropan-8-spiro-1^?-pirolidinijev klorid.

Sestava reakcijske zmesi se mora nanašati na čisti nortropin. Molsko razmerje nortropin:dietilamin: 1,4-diklorobutan mora biti natančno 1:2:4.

Iz stopnje A dobljeni surovi nortropin (1,186 kg, kar ustreza 1,632 kg čiste snovi, kar ustreza 12,85 mola) raztopimo v 52 1 N,N-dimetilformamida in dodamo 2,665 1 dietilamina ( 1,876 kg; 25,7 mola) in 5,736 1 1,4-diklorobutana (6,528 kg;

51,4 mola). Reakcijsko zmes pustimo stati 18 dni pri sobni temperaturi. Izločene kristale odsesamo, speremo z malo suhega acetonitrila in posušimo v vakuumskem sušilniku pri 50 °C. Dobimo 2,25 kg (80 % glede na tropin, uporabljen v prvi stopnji 1), čistega produkta s tališčem 250 °C.

Stopnja C: Trospijev klorid /(3«-benziloiloksi-nortropan-8-spiro1’-pirolidinijev)klorid/

a) Imidazolid benzilne kisline

Ob izključitvi zračne vlage raztopimo 1,944 kg (12 molov)

N,N-karbonildiimidazola v 19,2 1 suhega diklorometana. Med mešanjem dodamo pri 15 do 20 °C v teku 6 minut 2,736 kg (12 molov) suhe benzilne kisline. Mešamo 1 uro pri sobni temperaturi. Pri tem se benzilna kislina najprej raztopi, kmalu nato pa se začne izločati imidazolid benzilne kisline v trdni obliki. Odsesamo in speremo z 0,8 1 suhega diklorometana. Dobimo 2,4 kg imidazolida benzilne kisline.

b) Priprava naslovne spojine

V 300 1 mešalnem kotlu suspendiramo 1,3 kg spojine, dobljene po stopnji B, v 230 1 absolutnega acetonitrila in segrejemo na 78 °C. Temu dodamo raztopino 74,0 g 4-(dimetilamino)-piridina v 2 1 absolutnega acetonitrila. Temu dodamo v treh obrokih v presledkih po 30 minut pri 78 °C suspenzijo 2,086 kg imidazolida benzilne kisline v 9,0 1 absolutnega acetonitrila. Nato mešamo pri 78 °C, dokler ne dosežemo celotnega reakcijskega časa 4 h od prvega dodatka imidazolida benzilne kisline. Ohladimo na 20 °C in mešamo še preko noči. Nastalo suspenzijo odsesamo in speremo z nekaj acetonitrila. Ostanek, kot tudi z uparjenjem matične lužnice dobljeni nadaljnji produkt (skupno 2,14 kg) prekristaliziramo iz izopropanola. Dobimo 1,78 kg (70 %) čistega produkta s tališčem 258 do 263 °C (razkroj).

FD-MS : m/θ = 392 (molekulski kation)

IR (KBr):^ = 3150, 1735, 1498, 1452, 747

PRIMER 2

3ot -benziloiloksi-nortropan-8-spiro-l*-( 3 *-pirolinijev)klorid

Stopnja B: 3o(-hidroksi-nortropan-8-spiro-1* - (3*-pirolinijev)klorid V raztopino 635 mg (5 mmolov) nortropina v 9,5 ml Ν,Νdimetilformamida vmešamo 1,05 ml dietilamina (10 mmolov) in 1,05 ml (10 mmolov) cis-1,4-diklorobutena-2. Po 1 uri odsesamo čisti kristalni produkt. Matični lužnici dodamo etil acetat do začetne zamotnitve da dobimo nadaljnji produkt. Kristale odsesamo in speremo z malo acetona.

Dobitek: 984 mg (91 %).

Tal.: 204 °C.

FD-MS: m/. * 180 (molekulski kation)

IR (KBr): v « 3250, 1621 cm’^{* 1}.

¹H-NMR (90 MHz, D£0 vrednosti 6 -glede na TSP=O):

= 1,7-2,7 <8H? H-2, H-4, H-6, H-7), 3,92 (2H? H-1, H-5), 4,05 (IH; H-3), 4,14 u. 4,31 ( po 2H? H-2* in H-5'), 5,90 (2B; H-3‘, E-4').

Stopnja C: 3ol-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-1 ’-(3’-pirolinijev) klorid

530 mg (2,4 mmola) 3c<-hidroksi-nortropan-8-spiro-1’(3’-pirolinijevega)klorida suspendiramo v 353 ml absolutnega acetona in mešamo s 14 mg (0,12 mmola) 4-dimetilamino-piridina in 678 mg (2,4 mmola) iraidazolida benzilne kisline v avtoklavu 23 h pri 70 °C. Produkt izkristalizira iz reakcijske zmesi pri ohlajenju na sobno temperaturo. Odsesamo ga in izperemo z malo acetona.

Dobitek: 650 mg (62 %).

Tal. 267 °C.

FD-MS: ia/_e * 390 (molekulski kation).

IR (KBr): v «= 1722, 1595, 1490, 1445, 741 cm’¹.

¹H-NMR (90 MHZ, D^O,. vrednosti £ glede na TSP=0):

1,3-2,8 (8B; H-2, Ht4, H-6, H-7), 3,85 <2B? H-1, H-5), • *

4,09 m 4,37, (po 2B; H-2' H-5¹), 5,24 (IH; H-3),

5,95 (2H; H-3’, H-4’), 7,44 (1oH; aromat. protoni benzilne kisline).

Stopnja D: Prevedba 3oi-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-1’~ (3’-pirolinijevega)klorida v 3 -benziloiloksinortropan-8-spiro-1’-pirolidinijev klorid

500 mg 3pC-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-1 ’-(3’-pirolini jevega)klorida raztopimo v 15 ml metanola in po dodatku konice spatule platinovega dioksida hidriramo pri normalnem tlaku in pri temperaturi 25 °C do konca privzema vodika. Hidriranje se vrši v standardni aparaturi, kot je prikazana npr. v Houben-Weyl, Methoden der Organisehen Chemle, 4. Aufl., Bd. IV/1c, Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York, 1980, str. 33-39. Po odfiltriranju i

platine uparimo v vakuumu do suhega .Presnova je po H-NMR-spektrosko piji kvantitativna.Prekristalizacijo izvedemo tako, kot je prikazano v primeru 1, stopnja C.

PRIMER 3

3<y-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-2’ -izo-lndolini jev klorid

1) 3o(-hidroksi-nortropan-8-spiro-2’-izoindolinijev klorid

1,27 g (10 mmolov) nortropina raztopimo v 7 ml kloroforma in dodamo 1,46 g (20 mmolov) dietilamina in 7 g (40 mmolov)

1,2-bis-(klorometil)-benzena. Bistro reakcijsko raztopino pustimo stati zaprto 24 h pri sobni temperaturi. Nato uparimo na polovico in dodamo etil acetat, da uvedemo kristalizacijo. Kristale odsesamo in prekristaliziramo iz izopropanola/etil acetata.

Dobitek; ] _g (38%). Tal. :245 - 247°C.

FD-MS: ^a/_e c 230 (molekulski kation).

IR (KBr): v « 3168, 757, 742 cn'¹.

H-NMR (250 KHz, D^O, vrednosti'^ glede na TSP=O)I 2,09 (2H; H-6a, H-7a), 2,40 - 2,67 (4H; H-2, H-4), 2/59 (2H; H-6fc, B-7B), 4,03 (2H; H-1, H-5) , 4,24 (IH? H-3), 4,82 in 4,99 (4H; H-1* in H-3'),

7/47 (4H; H-4· do H-7 ’). ²

2) 3o<-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-2/-izo-indolinijev klorid

1,33 g (5 mmolov) 3<<-hidroksi-nortropan-8-spiro-1 ’izo-indolinijevega klorida suspendiramo v 210 ml absolutnega acetonitrila in segrejemo na 78 °C. Med mešanjem vmešamo najprej 62 mg (0,5 mmola) 4-dimetilaminopiridina, nato v teku 2,5 h po obrokih 3,2 g (11,5 mmola) imidazolida benzilne kisline. Mešamo še 5,5 h pri 78 °C, nato ohladimo na 22 °C in me šamo še preko noči. Raztopino uparimo na 1/4 volumna in produkt izkristaliziramo z dodatkom etil acetata.

- .21

Dobitek: 1,3 g (541).

Tal.363 - 265°C.

FD-MS: ^m/_e « 440 (molekulski kation).

IR (KBr): v« 1740, 757, 745, 703 cnT^{* 1}.

¹H-NMR (250 MHz, D₂0, vrednosti ^glede na TSP?O):

1,57 (2H; H-6a, H-7a), 2,03 (2H; B-2a, H-4a), 2,07 (2B? B-6b, H-7b), 2,70 (2H, B-2b, H-4b) , 3,86 (2B;

H-1, B-5), 4,69 i_n 4,96 (4B; H-1 ' in B-3'),

5,32 (1H; B-3), 7,40 - 7,51 (14H, B-4 ’ do H-7' in aromat. protoni benzilne kisline).

S

PRIMER 4 o(-benziloiloksi-no'rtropan-8-spiro-4 ^T-morfolini jev klorid

1) 3 o^-hidroksi-nortropan-8-spiro-4’-morfolinijev klorid

V raztopino 7,2 g (56,6 mmola) nortropina in 70 ml kloroforma vmešamo 11,8 ml (113,2 mmola) dietilamina in 26,6 ml (226,5 mmola) 2,2’-diklorodietil etra. Bistro reakcijsko raztopino pustimo stati 3 dni zaprto pri sobni temperaturi. Izločeno zmes olja in kristalov hamogeniziramo in dokristaliziramo preko noči pri 0 °C. Kristale odsesamo, speremo z malo kloroforma in sušimo 2 h v vakuumu pri 40 °C. Z uparjenjem matične lužnice in obdelavo z etil acetatom dobimo dodatno snov.

Dobitek: 12,5 g (951).

Tal.: 274 - 276°C (razkr .).

FD-MS: ^m/_e * 198 (molekulski kation).

IR (KBr): v « 3320, 892 cm’¹

H-NMR (250 MHz, DjO,vrednosti $ glede na TSP=O>:

2,00 (2H; H-6a, H-7a), 2,22 - 2,62 (6H? B-2, H-4,

H-6b, H-7b), 3,50 in. 3,65 (4H; B-2' in H-6'),

4,01 in 4,08 (4H? H-2' in H-6·), 4,18 (IH; H-3),

4,22 (2H; H-1 _in B-5).

2) 3 c<-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-4’-morfolinijev klorid

7,5 g (32 mmolov) 3c<-hidroksi-notropan-8-spiro-4’morfolinijevega klorida suspendiramo v 650 ml absolutnega acetonitrila in dodamo 0,587 g (4,8 mmola) 4-(dimetilamino)-piridina. Pri 79 °C dodamo med mešanjem v teku 3 h po obrokih 26,9 g (92,8 mmola) imidazolida benzilne kisline. Reakcijsko zmes pustimo stati 7 dni pri sobni temperaturi in nato čisti kristalni produkt odsesamo. Kristale sušimo 2 h pri 40 °C v vakuumu

Dobitek:.: 8,4 g (60%).

/

Tal..; 225°C (razkr.).

FD-MS: m/θ t 408 (molekulski kation).

IR (KBr): v « 3410, 3183, 1731, 1492, 703 cm*^{* 1}.

^-NMR (250 MHz, DjO, vrednosti §^glede na TSP=O):

1,51 (2H; H-6a, H-7a), 2,00 '4B; B-2a, H-4a, B-6b,

H-7b), 2,63 (2B; H»2b, H-4b), 3,38 in 3,64 (4H; H-2’ in H-6‘), 3,99 in 4,04 (4B; H-3’ ⁱⁿ H-5’), 4,09 (2H; H-1, H-5), 5,30 (1H; B-3), 7,46 (10H; aromat. protoni benzilne kisline).

PRIMER 5 o(-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-1’-pirolidino-/3’,4’-b/-kinoksa linijev bromid

1) 3 o(-hidroksi-nortropan -8-spiro-1 ’ - pirolidino-/3’ , 4 ’ -b/kinoksalinljev~ bromid

V raztopino 5,57 g (43,6 mmola) nortropina in 100 ml kloroforma vmešamo 4,58 ml (43,6 mmola) dietilamina in 13,85 g (43,6 mmola) 2,3-bis-(bromometil)-kinoksalina. Reakcijsko zmes, ki se je segrela, ohladimo na 20 °C, pri čemer dobimo produkt

- 23 v kristalni obliki. Odsesamo ga, speremo s kloroformom in sušimo 22 h pri 55 °C v vakuumu.

Dobitek: 11,1 g (71%) .

Tal.: 283°C (razkr.),.

FD-MS: ^m/_e * 282 (molekulski kation).

IR (KBr): v « 3345, 1504, 773 cm’¹.

¹H-NMR (250 MHz, DjO, vrednosti S glede na TSP=O„):

2,21 (2H; H-6a, B-7a), 2,53 - 2,89 (6H; H-2, H-4, H-€b,

B-7b) 4,29 (2H; H-1 ι_η H-5), 4,31 (IH; H-3), 5,21 in 5,41 po 2H; H-2' £n H-5’), 7,94 - 8,05 (2H; kinoksalinovi protoni), 8,11 - 8,22 (2B; kinokaalinovi m-protoni').

2) 3ot-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-1’-pirolidino-/3’,4’-b/kinoksalinijev bromid g (1,39 mmola) 3oč-hidroksi-nortropan-8-spiro-1’-pirolidino-/3’,4’-b/-kinoksalinijevega bromida suspendiramo v 130 ml suhega, diraetilsulfoksida in 100 ml suhega acetonitrila. Po dodatku 0,26 g (2,09 mmola) 4-dimetilaminopiridina segrejemo na 78 °C. Med močnim mešanjem dodamo v presledkih po 30 min v 3 obrokih 7,74 g (27,8 mmola) imidazolida benzilne kisline. Mešamo še 2,5 h pri 78 °C. Reakcijsko zmes ohladimo na 20 °C in filtriramo. Ostanek na filtru zavržemo. Filtrat uparimo pri okoli 0,2 mbar do suhega. Ostanek ekstrahiramo s 500 ml vrelega izopropanola In ga vroče filtriramo. Ostanek na filtru zavržemo. Filtrat uparimo na 200 ml. Produkt izkristalizira preko noči pri sobni temperaturi. Odsesamo ga, speremo z mrzlim izopropanolom in sušimo 2 h pri 55 °C ^{* v} vakuumu.

Dobitek: 3,5 g (44%).

Tal.: 205 °C (razkr.).

FD-MS: ®/_e * 492 (molekulski . kation).

IR (KBr): v = 3375, 1730, 1504, 763 c®’¹.

¹ H-NMR (250 MHz, CDC1₃/CD₃OD - 3:1, vrednosti S glede na TMS=O):

1,78 (2H; H-6a, H-7a) , 2,08 (2H; H-2a, H-4a) , 2,20 (2H; H-6b, H-7b), 2,85 (2H; H-2b, H-4b), 4,23 (2H;

H-1, H-5), 4,62 (4H; H-2', H-5’), 5,35 (IH; H-3),

7,30 - 7,48 (10H; protoni benzilne kislin^)7,84 - 7,97 (2H, kinoksalinovi o-protoni), 8,07 - 8,22 (2H; kinoksalinovi m-protoni).

PRIMER 6

3-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-2’-(2’-aza-3H-fenalenijev)bromid

Ό V raztopino 1,62 g (12,7 mmola) nortropina in 75 ml

N,N-dimetilformamida vmešamo 1,33 ml (12,7 mmola) dietilamina in 4 g (12,7 mmola) 1,8-bis-(bromometil)-naftalena. Iz reakcijske zmesi ki se je rahlo segrela,izkristalizira produkt v teku 2 h. Odsesamo ga, speremo z malo N,N-dimetilformamida in sušimo 2 h pri 55 °C v vakuumu.

Dobitek:: 3,5 g (76%).

TaL;: 33O°C (razkr.).

FD-MS: ^m/e “280 (molekulskih kation).

IR (KBr): v «3410, 1604, 1512 cm*¹.

¹ H-NMR (250 MHz, CDClj/CDjOD - 3:^vrednosti ^glgde >ha > TMS«0) :

2,02 (2H; H-6a, B-7a), 2,39 - 2,85 (6H; H-2, H-4, H-6b, H-7b), 3,92 (2H; H-1, H-5), 4,28 (IH; H-3), 5,01

5,16 (4H; H-1· ; in H-3*), 7,51 - 7,64 (4H; H-5’, H-6’, H-7', H-8‘), 7,93 (2H; H-4’, H-9’).

) 3 v(-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-2’-(2’-aza-3H-fenolenijev)bromid

W ...... ............. ^{1 1} ' ——- ' ' ....... I —

2,95 g (8,2 mmola) 3 </-hidroksi-nortropan-8-spiro-2’(2’-aza-3H-fenolenijevega)bromida suspendiramo v 1660 ml suhega acetonitrila in 160 ml suhega Ν,Ν-dimetilformamida. Po dodatku 152 mg (1,2 mmola) 4-dimetilaminopiridina segrejemo na 78 °C. Med močnim mešanjem dodamo v presledkih po 30 minut v 3 obrokih 4,56 g (16,4 mmola) imidazolida benzilne kisline. Mešamo še 2,5 h pri 78 °C in nato reakcijsko zmes uparimo na polovico. Izločeni surovi produkt odsesamo pri 20 °C in suspendiramo v metanolu.

V metanolu netopni del odfiltriramo in zavržemo. Filtrat uparevamo, dokler ne začne produkt kristalizirati. Po kristalizaciji preko noči pri sobni temperaturi odsesamo in sušimo 2 h pri 55 °C v vakuumu.

- 26 Dobitek:·?; 2,1 g (42%).

Tal.-: 322 °C (razjcr.).

FD-MS: ®/_e * 490 ‘(maleku.laki kation).

IR (KBr): v « 3428, 3240, 1738, 1603, 1497 cm’¹.

¹H-NMR (250 MHz, CDClj/CD^D = 3:1, vrednosti δ glede ...na TMS*0) :

1,75 (2B; B-6a, B-7a), 1,94 (2H? H-2a, H-4a), 2,20 (2H; H-6b, H-7b), 2,80 (2B; H-2b, H-4b), 3,85 (2B;

B-1, H-5), 4,93 «5,19 Cgfe 2H; H-1’ ⁱⁿ H-3’),

5,45 (IH; H-3), 7,31 - 7,46 (1OH;|protoni benzilne-kisline), 7,47 - 7,67 (4H? H-5‘, H-6’, H-7’, H-8'), 7,93(2H;

H-4’, H-9’).

Na analogen način pripravimo naslednje spojine s formulo I.

PRIMER 7 o<-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-1’-(4’-metil)-piperidinijev klorid

1) 3 o<-hidroksi-nortropan-8-3piro-1^,-(4^,-metil)-piperidinijev klorid

7,62 g (0,06 mola) nortropina raztopimo v 200 ml absolutnega Ν,Ν-dimetilformamida. Po vmešanju 8,76 g (0,12 mola) dietilami na in 37,18 g (0,24 mola) 1,5-dikloro-3-metilpentana pustimo stati reakcijsko zmes zaprto 18 dni pri sobni temperaturi. Izločene kristale odsesamo, speremo z malo suhega acetonitrila in posušimo v vakuumskem sušilniku pri 50 °C. Dobimo 7,84 g (23 %) čistega produkta.

- 27 Thl290 °C (razkr.)

FD-MS: ^m/e = 210 (molekulski kation)

IR (KBr): / = 3190 cm^-1

H-NMR (250 MHz, D₂0,vrednostiS^vppm,glede ha TSP = 0): 1,01 (_m; 3H; CH₃); 1,37 - 7,02 (m-, 7H; H-6a, H-7a, H-3’, H-4’, H-5’); 2,20 - 2,52 (m; 5H; H-2a, H-4a, H-6b, H-7b, OH); 2,60 ind 2,67 (2 x t; 2H; H-2b ±_n: H-4b); 3,10, 3,20, 3,63 in 3,74 (4 x m; 4H; H-2' in H-6'), 3,76 lin 4,24 (2 x m_; 2H-, H-l in H-5); 4,19 (t; IH; H-3)

2) 3 o(-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-1’-(4’-metil)-piperidinijev klorid

7,37 g (30 mmolov) 3 0t-hidroksi-nortropan-8-spiro-1’-(4*metil>)-piperidinijevega klorida suspendiramo v 650 ml absolutnega aoetonitrila in med mešanjem segrejemo na 78 °C. Pri tej temperaturi vmešamo najprej 587 mg (4,8 mmola) 4-(dimetil-amino)-piridina in nato v teku 2 h v 4 približno enakih obrokih 13,35 g (48 mmola) imi dazolida benzilne kisline. Mešamo še 1,5 ure pri 78 °C in pustimo nato stati reakcijsko zmes pri sobni temperaturi brez mešanja preko noči. Kristalni produkt odsesamo in speremo z malo acetona. Surovi kristalizat prekristaliziramo iz suhega izopropanola. Čiste kristale sušimo 2 h pri 40 °C v vakuumu.

Dobitek: 9,56 g (70 %) kot 1:1 zmesni kristalizat z izopropanolom Tal.: 256 - 259 °C

FD-MS: ^m/e = 420 (molekulski kation)

IR (KBr): /= 1735 cm^{1 1}H-NMR (250 MHz, D₂0, vrednosti G v ppm^glede; naTSP = 0): 0,98 ( m_; 3H_;

CH₃), 1,30 - 1,65 (m; 4H-, H-6a, H-7a, Η-3'a, Η-5'a), 1,65 - 2,03 (m-, 7H-,

H-2a, H-4a, H-6b, H-7b, Η-3'b, H-4’, H-5’b), 2,52 ±n 2,72 (m; 2H-, H-2b,

H-4b), 3,02, 3,19, 3,47, 3,72 (t, t; d, d; 4H; H-2’ in H-6’), 3,62 in:

4,10 (m, m; 2H; H-l in H-5), 5,30 (t; IH; H-3), 7,40 - 7,50 (m; 10H; aromatski protoni).

PRIMER 8 oC — (4,4 ’-difluoro-)benziloiloksinortropan-8-spiro-1 ’ -pirolidinijev klorid

2,17 g (0,01 mola) 3 (A-hidroksinortropan-8-spiro-1-pirolidinijevega klorida raztopimo z 2,02 g (0,01 mola) natrijeve soli heptan-1-sulfonske kisline ob segrevanju v 500 ml absolutnega acetonitrila. Po ohlajenju na 25 do 27 °C odsesamo od oborine natrijevega klorida ob izključitvi vlage. Raztopini dodamo 0,125 g 4-(dimetilamino)piridina in jo prenesemo v reakcijsko posodo , ki je povezana z mešalno bučko, v kateri pripravimo imidazolid 4,4’- difluorobenzilne kisline. Ta mešalna bučka je opremljena z dvema lijema-kapalnikoma. V en^xlij-kapalnik damo 2,64 g (0,01 mola) 4,4difluorobenzilne kisline (priprava analogno W. Rothweiler, Dt. 0L 2 034 943 z dne 14.07.1970), raztopljene v 100 ml absolutnega acetonitrila. V drugi lij-kapalnik damo raztopino 2,43 g (0,015 mola) N,N-karbonil-diimidazola v 150 ml absolut nega acetonitrila. Med mešanjem spustimo v mešalno bučko istočasno okoli 1/4 volumna vsake od obeh raztopin, nato mešamo še 15 minut in nastalo raztopino imidazolida prevedemo ob striktni izključitvi vlage v reakcijsko posodo, v kateri mešamo pri sobni temperaturi raztopino 3 o(-hidroksinortropan-8-spiro-1’-pirolidinijevega heptansulfonata. To operacijo ponovimo še trikrat, dokler niso združeni vsi reaktanti. Nato segrevamo 2 uri ob refluksu do vrenja^ nato pa ohladimo preko noči na sobno temperaturo. Reakcijsko zmes uparimo na rotacijskem uparjalniku v vakuumu do suhega. Ostanek očistimo kromatografsko preko kolone s kremeničnim gelom (npr. Kieselgel 60, 0,063 - 0,200 mm, Merck Nr. 7734). Mobilna faza 1,2-dikloroetan: ocetna kislina : metanol : voda, 57 : 23 : 13 : 7 (v,v,v,v). Dobitek: 870 mg (14 %) 3 c<-(4,4’-difluoro-)benziloiloksinortropan-8-spiro-1’-pirolidinijevega heptansulfonata. Po prehodu preko kolone, ki je napolnjena z močno bazičnim ionskim iz(r) menjevalnikom v kloridni obliki (npr. LewatitomMP500), dobimo naslovno spojino. Surovi produkt prekristaliziramo iz izopropanola, speremo z etil acetatom in sušimo do 40 °C v vakuumu do konstantne mase.

Dobitek: 470 mg kot 1 : 1 zmesni kristalizat z izopropanolom Tal.242 - 245 °C

FD-MS: ^m/e = 428 (molekulski kation)

IR (KBr): / = 1508, 1603, „1733 cm’¹ ^H-NMR (250 MHz, D₂0, vrednosti&<v ppm,glede na TSP = 0): 1,44 _ 1,57 (_m. 2H_; H-6a, H-7a), 2,00 - 2,20 (m; 8H; H-2a, H-4a, H-6b, H-7b, H-3', H-4'), 2,57 in 2,64 (2 x m; 2H; H-2b inH-4b), 3,38 in 3,60 (2 x m; 4H; H-2', H-5'),

3,73 (m; 2H; H-l, H-5), 5,27 (t; IH; H-3), 7,19 in 7,42 (2 x m; 8H; aromamatski protoni).

Delamo po primeru 8, le da uporabimo namesto 4,4’-difluoroPRIMER 9 o< —(4,4 *-dimetil-)benziloiloksinortropan-8-spiro-1’-pirolidinijev klorid benzilne kisline 4,4’-dimetilbenzilno kislino (priprava analogno J. G. Cannon; J. Org. Chem. 25, 959 - 962 (1960) kot izhodno snov. Dobitek: 1,68 g

Tal 275 °C

FD-MS: ^m/e = 420 (molekiilski kation)

IR (KBr): / = 1508, 1612 (šibek),. 1718 cm^{1 1}H-NMR (250 MHz, D^O, vrednosti§>V'Ppra,glede na TSP = 0): 1,47 - 1,51 (m; 2H; H-6a, H-7a), 1,79 - 2,21 (m; 8H; H-2a, H-4a, H-6b, H-7b, H-3', H-4'), 2,33 (s; 6H; 2 x CH₃), 2,48 - 2,66 (m; 2H; H-2b, H-4b), 3,34 in; 3,58 (2 x m; 4H; H-2' vinH-5'), 3,67 (m; 2H; H-l, H-5), 5,23 (t; IH·, H-3), 7,20 - 7,31 (m; 8H; aromatski prot oni;).

PRIMER 10 o(-(4,4’-di-n-butiloksibenziloiloksi· )-nortropan-8~spiro-1’pirolidinijev klorid

Delamo po primeru 8, le da uporabimo namesto 4,4’-difluoro benzilne kisline 4,4’-di-n-butiloksibenzilno kislino (priprava analogno J. G. Cannon, J. Org. Chem. 25, 959 - 962 (1960) kot izhodno snov.

Dobitek: 240 mg kristalov, ki pri sobni temperaturi raztečejo. FD-MS: ^m/e = 536 (molekulski (kation)

IR (KBr): / = 1508, 1580 (šibek)_k 1608, 1734 cm¹

H-NMR (250 MHz, CDCL₃ vrednosti^v ppnr,glede naTMS = 0): 0,96 (t·, 6H_; 2 x ^CH3 iz n-butiloksi) 1,47 (t, q_; 4H; 2 x CH₃ iz n-butiloksi-), 1,53 - 1,63 (m; 2H;H-6a, H-7a), 1,76 (t, t; 4H; 2 x CH₂ iz n-butiloksi) , 1,80 - 2,30 (m; 8H; H-2a, H-4a, H-6b, H-7b,H-3', H-4'), 2,62 - 2,77 (m_; 2H_; H-2b, H-4b), 3,65 in 3,99 (2 x m; 4H; H-2' in H-5'), 3,94 (t; 4H; 2 x CH^iz n-butiloksi-), 4,16 (m, 2H; H-l, H-5), 5,28 (t; IH; H-3), 6,84 in 7,25 ( 2 x d; 8H*, aromatski protoni).

PRIMER 11 o(-(4-n-butiloksibenziloiloksi )nortropan-8-spiro-1’-pirolidinijev klorid

Delamo po primeru 8, le da uporabimo namesto 4,4’-difluorobenzilne kisline 4-n-butiloksibenzilno kislino (priprava analogno C. D. Shacklett in H. A. Smith, J. Am. Chem. Soc. 75, 2654 - 2657 (1953) kot izhodno snov.

Dobitek: 250 mg

Tal.206 °C

FD-MS: ^m/e = 464 (molekulski kation)

IR (KBr): / = 1512, 1609, 1742 cm^-1

1_H-NMR (250 MHz, CDCLg.vretoosti^V'ppm;glede na TMS = 0): 0,97 (t; 3H; CHg ίζ n-butiloksi)j. 1.50 (t, q; 2H; CH₂ izf n-butxlokisi),· ^{1,58 _ 1,64 2H}’

H-6a, H-7a), 1,77 (t, t; 2H-, CH₂ n-butilokši)>, ^X’^{84 2}’^{45 (m; 8H; H_2a}’ H-4a, H-6b, H-7b, H-3’, H-4'). 2,65 - 2,85 (m·, 2H; H-2b, H-4b), 3,58 3,95 (2 x m·, 4H-, H-2' in H-5'), 3,95 (t-, 2H; CH₂ tž'n-bUtil0ksi), ^{4,08 2H}’

H-l in H-5), 5,30 (t; IH; H-3), 6,84 (d) m 7,26 - 7,37 (m_; 9H; aromatski protoni).

Galenski primeri

1. Tablete

mg 20 mg	azoniaspironortropanolestra laktoze	po kemijskih primerih
30 mg	škroba
0,5 mg	magnezijevega stearata
74,5 mg	celuloze mikrokrist.
Supozitorij
120 mg	azoniaspironortropanolestra	po kemijskih	primerih

mg Aerosila 200 (kremenice)

2278	mg	Witepsola (modificirani trigliceridi nasičenih rastlinskih maščobnih kislin)
Raztopina za	intravensko injekcijo
20	mg	azoniaspironortropanolestra po kemijskih primerih
4,6	mg	citronske kisline monohidrata
14,8	mg	Na-citrat-2-hidrata
ad 2	ml
Raztopina za	intravensko infuzijo
500	mg	azoniaspironortropanolestra po kemijskih primerih
130	mg	citronske kisline monohidrata
370	mg	natrijevega citrata-2-hidrata
ad 50	ml

5. Retardna oblika:

difuzijski peleti brez inicialne na trdo želatinsko kapsulo z doze inicialno dozo

sladkorne kroglice	150	mg		150	mg
azoniaspironor tropanolester	80	mg	učinkovi-	60	mg
po kemijskih primerih			na
hidroksipropilceluloza (Klucel)	10	mg		8	mg
estri akrilatov oz. metakrilatov:
Endragit RL	2	mg		2	mg
Endragit RS	8	mg		8	mg
polietilenglikol 8000	1	mg		1	mg
smukec	5	mg		5	mg
			učinkovina	20	mg
			Klucel	2	mg

6. Retardna oblika: matrična tableta

80 mg	azoniaspironortropanolestra po kemijskih primerih
120 mg	laktoze
15 mg	etilceluloze
20 mg	škroba
2 mg	magnezijevega stearata
3 mg	polietilenglikola 8000

7. Retardna oblika: dvoslojna tableta z inicialno dozo

	1 . sloj	2. sloj
	retardna tableta	inicialna doza
azoniaspironortropanolester	60 mg	20 mg
laktoza	90 mg	10 mg
et ilceluloza	12 mg
škrob	15 mg	15 mg
magnezijev stearat	1,5 mg	0,3 mg
polietilenglikol 8000	2 rag

celuloza mikrokrist. ------ 37,2 mg

8. Dozirni aerosol za inhalacijo Receptura na dozo/pršilni sunek:

0,1 mg azoniaspironortropanolestra po kemijskih primerih 0,02 mg Špana 85 (sorbitanestri mono- in tri-maščobnih kislin na osnovi oleinske kisline) pl Frigena 11 (triklorofluorometan) pl Frigena 12 (diklorodifluorometan)

- 34 9. Dozirno razpršivo za nadaljnjo uporabo:

Receptura na dozo/pršilni sunek:

mg azoniaspironortropanolestra po kemijskih primerih 90 jul fiziološke raztopine kuhinjske soli

Sledeče spojine v smislu izuma smo testirali glede spazmolitske učinkovitosti:

Spojina iz primera:

= 3-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-1’-(3’-pirolinijev)klorid = 3 ol-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-2’-izo-indolinijev klorid = 3 o(-benziloiloksl-nortropan-8-spiro-4’-morfolinijev klorid = 3 o(.-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-1’-pirolidino-/3’,4’7b/kinoksalinijev bromid =3 c<-benziloiloksi-nortropan-8-spiro-2’-(2’-aza-3H-fenalenijev) bromid

Kot znano primerjalno spojino smo uporabili trospijev klorid (spojina iz primera 1).

Poskus smo izvedli na izoliranem črevesu podgane.

Živalski material Živalska vrsta Živalski sev Poreklo

Spol podgana

Wistar

Mus rattus AG, Brunnthal ženski in moški

Telesna teža

Privajalni čas

Gojenje živali

Hlevski prostor

Temperatura

Rel. zračna vlaga

Razsvetljava prostora

Kletke

Krma

Pitna voda

Snovi, doziranja

Testirane snovi’.

Spojine iz primerov 1 do 6

Topilo

Koncentracija

150 do 250 g teden zaprta zgradba, neklimatiziran prostor s prevoznimi ogrodji za kletke + 2 °C + 10 % dnevna svetloba, dodatno neonska razsvetljava v dnevnem/nočnem ritmu od 7.00 do 18.00 ure kletke iz Makrolona Typ 4, zasedene s po 10 podganami, žagovinska stelja ssnif f CBi-standardfutter

Versuchstierdiaten-GmbH, 4770 Soest, ad libitum vodovodna voda iz plastenk z napajalnimi cevkami iz plemenitega jekla ad libitum demineralizirana voda —8

1,185 x 10“ g/ml vsebine posode kopeli (proti karbaholu)

Aplikacijski volumen

Čas učinkovanja pred dajanjem spazmodika

Celotni čas učinkovanja Nadaljnje snovi

Oznaka:

Bruto formula

Topilo

Koncentracije

0,25 ml min min karbamoilholin (karbahol) hidroklorid

Fa. Merek, Darmstadt Art. Nr. 500 940 ^C6^H15^C1N2°2 demineralizirana voda

Aplikacijski volumen Čas učinkovanja

4	X	10~9	g/ml	vsebnosti kopeli	posode
2	X	ίο’8	g/ml	vsebnosti kopeli	posode
1	X	10-7	g/ml	vsebnosti kopeli	posode
5	X	107	g/ml	vsebnosti kopeli	posode
2,5	X	10-6	g/ml	vsebnosti kopeli	posode
1,25	X	10“5	g/ml	vsebnosti kopeli	posode
6,25 0,25 ml 5 min	X	oo5	g/ml	vsebnosti kopeli	posode

Hranilna raztopina po Ringerju s sledečo sestavo

NaCl	= 9,000	g	E.	Merck,	Darmstadt
KC1	= 0,210	g	E.	Merck,	Darfflgtšdtt
NaHCO^	= 0,500	g	E.	Merck,	Darmstadt
c6h12o6 x h2o	= 0,500	g	E.	Merck,	Darmstadt
CaCl2 x H20	= 0,318	g	E.	Merck,	Darmstadt

Izvedba poskusa

Podgano usmrtimo z udarcem po tilniku. Trebušni prostor odpremo vzdolž medianske črte, odvzamemo okoli 10 cm dolg kos ileuma, ga takoj prenesemo v fiziološko temperirano hranilno raztopino in nato s pomočjo 10 ml brizgalke in toto previdno preplaknemo dvakrat s hranilno raztopino, da odstranimo črevesno vsebino. Za temu sledeči poskus odrežemo dva kosa črevesa z dolžino 2 cm in preostali kos črevesa hranimo v hladilniku. Z obeh kosov črevesa odstranimo v hranilni raztopini tkivo, ki se ju eventualno še drži. Okoli enega konca zavežemo iz svilenih niti izdelano zanko za pritrditev kosa črevesa v kopeli za organ, medtem ko namestimo okoli drugega konca daljšo nit s priključno sponko za pritrditev na pisalni vzvod. Košček organa nato obešimo v posodo s kopeljo, napolnjeno s hranilno raztopino, skozi katero prepihavamo karbogen in obtežimo z 0,5 g. Po 30 minutni mirovalni fazi se lahko poskus začne.

Najprej ugotovimo odnos med dozo in učinkom spazmodika. Testno raztopino injiciramo v tekočino kopeli s pomočjo tuberkulinske brizgalke z nataknjeno kanilo za enkratno uporabo. Ustrezno volumnu, ki ga je treba injicirati, odvzamemo vedno pred tem

- 38 hranilno raztopino, da se natančno držimo vsebnosti kopeli.

Izberemo koncentracije, ki kažejo v geometričnih stopnjah za faktor 5 spazmodične učinke od 10 % do 100 %, pri čemer smatramo 100 %-ni učinek kot mejno koncentracijo, katere prekoračenje ne povzroči nobenega večjega učinka. Mejno koncentracijo uporabimo kot primerjalno veličino in učinke nižjih koncentracij izračunamo glede na to 100 %-no vrednost. Na enem kosu črevesa izdelamo popolno krivuljo koncentracije proti učinku.

Čas učinkovanja spazmodika na organ znaša 5 minut, nato trikrat izmenjamo vsebino kopeli v posodi s splakovanjem in priključimo 30 minutno mirovalno fazo (nobenega dodajanja snovi).

Po ugotovitvi odnosa med koncentracijo in učinkom spazmodika proučimo antagonistično moč učinka testirane snovi. V ta namen injiciramo preizkusno snov v konstantni koncentraciji v vsebino posode kopeli 3 minute pred dajanjem spazmodika. Temu sledeči potek poskusa ustreza že opisanemu: dajanje spazmodika v naraščajočih koncentracijah, trikratno splakovanje, 30 minutna mirovalna faza.

V odvisnosti od učinka variiramo koncentracije preizkušane snovi, pri čemer izvedemo za vsako koncentracijo 10 poskusov.

Analize in _x nrjorave

Preiskovalna aparatura sestoji iz vodoravno pritrjenega, okoli 66 cm dolgega valjastega steklenega oplaščenja z dotočnimi in odtočnimi pipami na koncih, v katero sta vstavljeni dve predgrevaln spirali, ki sta od zunaj opremljeni z dovodnimi nastavki in ki segata vsaka v posodo s kopeljo - volumen 25 ml, ki se da spodaj zapreti s pipami. Iz ultratermostata firme Colora prečrpavamo obtočno skozi stekleno oplaščenje na 34 °C segreto demineralizirano vodo tako, da je hranilna raztopina, ki se nahaja v predgrevalnih spiralah in v posodah s kopeljo, vedno enakomerno segreta. Po potrebi jo dovajamo iz višje stoječe založne steklenice preko cevnega sistema v predgrevalne spirale. Na dnu posod s kopeljo se nahajajo za kontinuirno prepihavanje hranilne raztopine s karbogenom (95 % in 5 % CC^) cevi za oskrbo s plinom, na katerih krakih so vtaljeni v spodnji tretjini stekleni kavlji, na katerih so z enim koncem obešeni pripravljeni koščki črevesa, medtem ko je drugi konec s svojo daljšo nitjo povezan s kovinskim pisalnim vzvodom za MP-zapisovanje. Končno naravnamo na pisalnem vzvodu obremenitev in čelno pisalo vzvoda prislonimo na MP-papir na zapisovalnem bobnu (0 200 mm) kimografa. MP-papir se med poskusom navija na boben iz namiznega ogrodja z zanko. Pomik papirja znaša 2,62 mm x min~\ Širino zapisa lahko uravnavamo preko MP-generatorja z vgrajenim potenciometrom. Za boljši pretok toka dodatno prislonimo na MP-papir kontaktni valj, ki je povezan z ožemijitveno vtičnico MP-generatorja.

Po koncu poskusa fiksiramo zapise na MP-papirju s specialnim fiksirnim razpršivom.

Vse za registriranje potrebne priprave smo nabavili pri firmi Braun, Melsungen.

Ovrednotenje

Za vsako koncentracijo v g/ml ugotovimo aritmetične srednje vrednosti in njihove standardne odmike (x % + s) spazmodičnega učinka .

Rezultati %-ni spazem smo dosegli s samim karbaholom — 8 (slepi poskus) pri koncentraciji 4,3 x 10” g/ml.

Pri uporabi zgoraj navedenih spazmolitično učinkujočih 8 testnih snovi v koncentraciji 1,18 x 10” g/ml so bile potrebne za povzročitev 50 %-nega spazma koncentracije karbahola okoli 10 & g/ml

Claims (11)

1. Postopek za pripravo azoniaspironortropanolestrov s splošno formulo I

O *®

OB (I) v kateri pomenijo

R enega od naslednjih ostankov

a) alkilenski ostanek s splošno formulo

-(CB₂)_n-CB-(CH_z)_nv kateri pomeni R^ atom vodika ali alkilno, benzilno, arilno, ali alkoksikarbonilno skupino in n stoji za ešlo število od 1 do 4,

b) alkenilenski ostanek s splošno formulo n

-(ch₂) \>_n v kateri pomenita R^ in R^, ki sta lahko enaka ali različna, atom vodika ali alkilni ali alkenilni ostanek, in n stoji za celo število od 1 do 4,

c) azaalkilenski ostanek s splošno formulo r₆

-(CB₂)_n-N-(CH₂)_n- · v kateri pomeni R^ atom vodika, alkilno, alkoksikarbonilno ali acilno skupino in n stoji za celo število od 2 do 4,

d) oksaalkilenski ostanek s splošno formulo

-<CH₂>_n-O-^,CH2^,n ’ v kateri stoji n za celo število od 2 do 4,

e) epoksialkilenski ostanek s formulo — CE- ^— CH CH — CH, — » ^{2 2}

f) o-fenilenski ostanek s splošno formulo

g) peri-naftilenski ostanek s splošno formulo in

- 43 h) 2,3-kinoksalinenski ostanek s splošno formulo

X . .— pri čemer v formulah f) do h) ostanka X in Ϊ neodvisno drug od drugega pomenita atom vodika ali alkilni ali alkoksi ostanek,

R^ in Rp, ki sta lahko enaka ali različna, atom vodika ali atom halogena ali alkilni, alkoksi, alkoilni, cikloheksilni, fenilni, alkilfenilni, alkoksifenilni, halogenofenilni , tienilni ali furilni ostanek, pri čemer vsebujejo alkilne skupine, ki se nahaja jo v navedenih ostankih, 1 do 6 atomov ogljika in so lahko ravne ali razvejene, in

A θ anion 1.- do 3-valentne mineralne kisline» z

a) deraetiliranjem tropina v nortropin,

b) presnovo nortropina z dihalogenidi v ustrezne azonia spojine in

c) zaestrenjem azonia spojin označen s tem, da

A) izvedemo demetiliranje tropina s formulo II %

(II)

OB

B) tako, da bodisi delamo s C^-C^-kloroalkanom, ki vsebuje najmanj eno skupino CCl^, v prisotnosti oksidacijskega sredstva v bazični vodni raztopini, bodisi presnovimo tropin z estrom kloromravljinčne kisline v inertnem topilu v prisotnosti sredstva za vezanje kisline v 8-alkoksikarbonilnortropin in le-tega hidroliziramo v vodni raztopini z bazo, tako dobljeni nortropin s formulo III (III) presnavljamo v dipolarnem aprotičnem topilu s spojino s sploš no formulo

A - R - A v kateri imata A in R zgoraj navedene pomene, v prisotnosti sekundarnega ali terciarnega amina pri sobni temperaturi en do več dni, in

C) tako dobljeno spojino s splošno formulo IV

- H5 - (IV) , o >

v kateri imata H in A ^v zgoraj navedene pomene, v brezvodnem dipolarnem aprotičnem topilu zaestrimo z imidazolidom s splošno formulo V

N - C v kateri imata R_] in R₂ zgoraj navedene pomene, v prisotnosti katalizatorja,

D) in v primeru, da vsebuje ostanek R potem, ko je prešel skozi stopnji B in/ali C, eno ali več olefinskih dvojnih vezi v azonijevem obroču, te nenasičene spojine hidriramo v polarnem topilu s pomočjo katalizatorja iz žlahtne kovine v ustrezne nasičene spojine, pri čemer dobimo spojino s splošno formulo I, v kateri ima R pomen ostanka kot a).

2. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da izvedemo v stopnji A, prva varianta, demetiliranje s kalijevim heksacianoferatom III, kloroformom in NaOH.

3. Postopek po zahtevku 1 ali 2, označen s tem, da uporabimo v stopnji A, prva varianta, 1 do 5-kratno molsko količino kloroalkana, računano na tropin.

4. Postopek po enem od prejšnjih zahtevkov, označen s tem, da znaša reakcijska temperatura v stopnji A, prva varianta,

20 do 30 °C.

5. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da izvedemo v stopnji A, drugo varianto v kloroformu in v prisotnosti hidrogenkarbonata alkalijske kovine.

6. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da znaša v stopnji B razmerje nortropin: amin : dihalogenid 1:2 : 4.

7. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da je katalizator v stopnji C 4-N,N-dimetilaminopiridin.

8. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da uporabimo v stopnji B kot amin dietilamin.

9. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da uporabljamo v stopnji C kot dipolarno aprotično topilo acetonitril.

10. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da uporabimo v stopnji B kot dipolarno aprotično topilo dimetilformamid ali acetonitril in/ali kloroform.

11. Postopek po zahtevku 1, označen s tem, da izvedemo v stopnji D hidriranje v vodi ali alkoholu z 1 do 4 atomi ogljika in s platinovim dioksidom ali paladijem na aktivnem oglju.

- 47 12. Postopek po zahtevku 11, označen s tem, da uporabimo kot polarno topilo metanol.