SI8511013A8 - Postopek pridobivanja kristalnega kalcijevega psevdomonata ali hidrata le-tega - Google Patents

Description

POSTUPAK ZA DOBIVANJE KRISTALNOG KALCIJUM PSEUDOMONATA ILI NJEGOVOG HIDRATA

OBLAST_TEHNIKE

Pronalazak spada u oblast proizvodnje farmaceutski i veterinarski korisnih organskih jedinjenja, a posebno se odnosi na postupak za dobivanje kristalnog kalcijum pseudomonata ili njegovog hidrata, koji je našao primenu u humanoj i veterinarskoj medicini i kao sredstvo za izazivanje rasta kod životinja.

Prema Medjunarodnoj klasifikaciji patenata pronalazak je svrstan u klase C 07 D 407/06; A 61 K 31/35.

TEHNIČKI_PROBLEM

Pronalaskom se na ekonomičan način rešava problem proizvodnje kristalnog kalcijum pseudomonata ili njegovog hidrata oslobodjenog amorfnog oblika ove soli.

STANJE_TEHNIKE

Pseudomonska kiselina je antibiotik koji se proizvodi aerobnim kultivisanjem Pseudomonas fluorescens. Jedinjenje nize formule (I), i njegove soli i estri su opisani i zaštičeni u Britanskom patentu

Kalcijumova so pseudomonske kiseline je opisana u Britanskim paterltima br. 1, 577, 545 i 1, 577, 730.

Amorfni oblik ove soli koji se lako izoluje je, kako je sa iznenadjenjem utvrdjeno, teško rastvoran u vodi sa niskom tačkom topljenja i slabom termičkom stabilnišču.

O PIS _ _REšETEH[NIČiK C>G_ P^_OB_LE MA_ _SA_ _P_R IMERI[MA_ _I_Z VODJENJ_A_

Sada je pronadjeno da kalcijum pseudomonat, kada se izoluje u kristalnom obliku, ima visoku tačku topljenja i pokazuje izrazito dobru termičku stabilnost u odnosu kako na amorfni kalcijum pseudomonat tako i u odnosu na samu pseudomonsku kiselinu.

Kristalni kaleijum pseudomonat nije specifično opisan u gore pomenutim patentima ili u ma kojoj drugoj publikaciji te je stoga nov.

Prema torne, ovaj pronalazak obezbedjuje kristalni kaleijum pseudomonat ili njegov hidrat.

U daljem aspektu pronalazak obezbedjuje kristalni kalcijum pseudomonat ili njegov hidrat, oslobodjen amorfnog kalcijum pseudomonata.

Poželjni kristalni kalcijum pseudomonat hidrat je dihidrat.

Podesan kalcijum pseudomonat dihidrat u kristalnom obliku, oslobodjen amorfnog' kalcijum pseudomonata daje difraktogram praha sa X-zracima (primenom bakar Ktzračenja) kao što se prikazan na Slici 1.

Podesan kalcijum pseudominat dihidrat u kristalnom obliku i oslobodjen amorfnog kalcijum pseudomonata daje infra crveni spektar (u nužolu) kao što je prikazan na Slici 2.

Anhidrovani kristalni kalcijum pseudomonat, kada je oslobodjen amorfnog kalcijum pseudomonata daje difraktogram praha sa X-zracima (primenom bakar K«^ zračenja) kao što je prikazan na Slici 3 i infra crveni spektar (u nužolu) kao što je prikazan na Slici 4.

Kako se ovde koristi, izraz anhidrovani kristalni kalcijum pseudomonat se odnosi na kristalni kalcijum pseudomonat oslobodjen kri-’ stalizacione vode, na primer koji sadrži ispod 0.5% mas. vode.

Podesno anhidrovani kristalni kalcijum pseudominat, oslobodjen ♦

amorfnog kalcijum pseudomonata ima tačku topljenja u opsegu od 105° do 137°C, poželjno u opsegu od 125° do’137°C, još bolje u opsegu od 130° do 135°C. ’

Pronalazak obezbedjuje kristalni kalcijum pseudomonat ili njegov hidrat za upotrebu u lečenju ljudskog i životinjskog tela.

Pronalazak dalje obezbedjuje postupak za dobivanje kristalnog kalcijum pseudomonata ili njegovog hidrata, koji obuhvata reakciju pseudominatnih jona sa kalcijumovim jonima u rastvoru u vcdenom rastvaraču, izolovanje kristalnog kalcijum pseudomonat hidrata iz rastvora, i posle toga, ako se želi, uklanjanje kristalizacione vode.

Podesno se postupak izvodi dodavanjem izvora kalcijumovih jona u vodeni rastvor pseudomonske kiseline ili pseudomonatne soli.

Podesno je rastvor pseudomonske kiseline ili pseudomonatnih jona proizvod aerobnog kultivisanja Pseudominas fluroescens (NCIB 10586). Ovakav rastvor može biti kultivaciona sredina u kojoj su organizmi gajeni ili se može proizvesti prečišcavanjem takve sredine, na primer ekstrakcijom pseudomonske kiseline iz takve kultivacione sredine upotrebom polarnog, organskog, u vodi nemešljivog rastvarača kao što je opisano u EP 0 005 614 i potom ponovnom ekstrakcijom pseudomonske kiseline u’vodenom rastvoru, poželjno u slabo alkalnom vodenom rastvoru. Alternativno rastvor pseudomonske kiseline ili pseudomonatnih jona se može proizvesti rastvaranjem pseudomonske kiseline ili njene soli, uvodenom rastvoru.

Vodeni rastvarač za postupak može biti voda ili smeša vode i organkog ko-rastvarača.

Organski korastvarač može biti meščjiv ili nemešljiv sa vodom. Poželjno je organski korastvarač mesij iv sa vodom.

Podesni organski korastvarači su metanol, propanol i aceton.

v

Poželjni organski korastvarači su metanol i aceton.

Kristalni kalcijum pseudomonat hidrat se podesno izoluje u obliku dihidrata. «

Izolovanje kalcijum pseudomonat dihidrata se pogodno izvodi kristalizacijom ili taloženjem iz vodenog rastvarača, poželjno iz vode.

Kada je vodeni rastvarač smeša vode i organskog korastvarača, izolovanje se može ol'akšati razblaživanjem vodenog rastvora sa vodom ili selektivnim uklanjanjem organskog korastvarača. Poželjan oblik selektivnog uklanjanja je uparavanje.

U poželjnom obliku postupka rastvor pseudomonske kiseline u vodenom rastvaraču. reaguje sa izvorom kalcijumovih jona. Poželjan izvor kalcijumovih jona je kalcijum oksid.

Podesno je vodeni rastvarač smeša vode i metanola, pri čemu se metanol selektivno uklanja pre izolovanja, poželjno uparavanjem.

Poželjno kalcijum pseudomonat dihidrat se izoluje taloženjem ili kristalizacijom, poželjno iz vode.

U alternativnom poželjnom obliku postupka rastvor soli pseudomonske kiseline u vodenom rastvaraču reaguje sa izvorom kalcijumovih jona, poželjno sa rastvornom kalcijumovom solju.

Poželjne soli pseudomonske kiseline su litijumove, natrijumove i kalijumove soli. Posebno poželjna so je natrijumova so.

Podesno je rastvorna kalcijumova so kalcijum hlorid, ili kalcijum acetat, poželjno kalcijum hlorid.

Poželjno se kalcijum pseudomonat dihidrat izoluje taloženjem ili kristalizacijom, poželjno iz vode.

Kalcijum pseudomonat dihidrat se takodje može dobiti rastvaranjem kalcijum pseudomonata u vodenom rastvarači i potom izolovanjem dihidrata kristalizacijom ili taloženjem, poželjno iz vode.

Kristalizaciona voda se može ukloniti iz tako dobivenog kristalnog hidrata da bi se dobio kristalni anhidrovani kalcijum. pseudomonat'.

Podesno se kristalizaciona voda^ uklanja zagrevanjem kristalnog kalcijum pseudomonat hidrata, poželjno dihidrata, do temperature dovoljne da se ukloni voda iz hidrata, poželjno preko 70°C.

Alternativno se kristalni kalcijum pseudomonat hidrat može osušiti na vakuumu u prisustvu sretstva za sušenje kao što je fosfor pentoksid. Temperature od 18-80°C se podesno koriste poželjno tokom perioda od oko '21 h.

Konverzovan kristalni kalcijum pseudomonat se može ostaviti radi uravnoteženja u oblik dihidrata izlaganjem atmosferi.

Kada se ovde koristi izraz kalcijum pseudomonat se odnosi na oblik kalcijumove soli koji je amorfan i nije hidratisan.

Publikovana· Britanska patentna prijava br.2097670 opisuje upotrebu pseudomonske kiseline i njenih soli i estara kao promotora rasta živih organizama. Iznenadjujuča termička stabilnost kristalnog kalcijum pseudomonata obezbedjuje stabilniji oblik pseudomonske kiseline za upotrebu kao promotora rasta, naročito u formulacijama leka koje zahtevaju povišene temperature.

»

Prema torne, ovaj pronalazak obezbedjuje postupak za poboljšavanje rasta težine i efikasne upotrebe hrane za životinje, koji obuhvata davanje životinjama promotora rasta, ne-toksične količine kristalnog kalcijum pseudomonata ili njegovog hidrata.

Poželjno kristalni kalcijum pseudomonat dihidrat se koristi u postupku. Kristalni kalcijum pseudomonat ili njegov hidrat se mogu davati bilo kokvoj stoci, na primer svonjama, živini i preživarima kao što je goveče i ovca. Naročito je podesan za poboljšavanje težine i efikasnosti koriščenja hrane kod svinja.

Kristalni kalcijum pseudomonat ili njegov hidrat, poželjno dihidrat, može se davati oralno, poželjno u hrani ili pijačoj vodi koja se obezbedjuje za stoku. Podesno se daje u hrani od 2 do 300 ppm, podesno manje od 100 ppm, -na primer od 10 do 40 ppm.

Za davanje u hrani kristalnog kalcijum pseudomonata ili njegovog hidrata, poželjno dihidrata, on je podesno formulisan kao premiks z

zajedno sa podesnim nosačem. '

Prema daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbedjuje veterinarski prihvatl jivu mremiks formulaciju koja obuhvata kristalni kalcijum pseudomonat ili njegov hidrat, poželjno dihidrat, zajedno sa veterinarski prihvatljivim nosačem.

Podesni nosači su inertni konvencionalni agensi kao što je sprašeni škrob. Drugi konvencionalni premiks nosači se takodje mogu upotrebiti.

Infekcije kod ljudi protiv kojih su jedinjenja twog pronalaska naročito korisna uključuju seksom prenošljive bolesti; infekcije respiratornog trakta; bakterijski meningitis; i infekcije kože i glatkog tkiva.

Kod životinja ona se mogu upotrebiti za tretiranje mastitisa kod krava, dizinteriju svinja, i infekcija mikoplazne i infekcija oka kod životinja kao što su čurke, kokoši, svinje i krave.

Neke od bolesti kod čoveka ili u veterini bilo prouzrokovane mikoplazmatičnim vrstama ili kod kojih one ,igraju značajnu ulogu, i protiv kojih su jedinjenja ovog pronalaska efikasna, su sledeče : Perad

M.gallisepticum - hrohične respiratorne bolesti (vazdušni sakulitis) kokoši i čurki

Goveče

M.bovis - mastitis, respiratorna obolenja i artritis kod krave

M.dispar - pneumonija govečeta

Svinja

M.hyopneumoniae - enzootična pneumonija kod svinja

M.hyorhinis - artritis kod svinja

M.hyosynoviae

Čovek

M.pnepaoniae - primarna atipična pneumonija v

Jedinjenja ovog pronalaska su naročito korisna u tretiranju mikopla zmatičnih i/ili bakterijskih pneumonija kod životinja kao što su svinje, goveče i ovca, jer su takodje efikasna· protiv bakterija Bordetella bronchiseptica,' Pasteurella multocida i' Haemophilus spp, koje se često javljaju kod ovih obolenja.

Ovaj pronalazak takodje obezbedjuje farmaceutski ili veterinarski preparat koji obuhvata kristalni kalcijum pseudomonat ili njegov hidrat (ovde kasnije naznačen kao lek) zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ili veterinarski prihvatljivim nosačem ili ekscipi# jentom.

- 7 Preparati se mogu formulisati za davanje ma kojim putem,.i zavisiče od bolesti koja se leči. Preparat može biti u obliku tableta, kapsula, praškova, granula, lozengi, tečnih ili gel preparata, kao što su oralne, površinske ili sterilne parenteralne suspenzije.

Tablete i kapsule za oralno davanje mogu biti u obliku jedinične doze, i mogu da sadrže konvencionalne ekcipijente kao što šu sretstva za vezivanje, na primer sirup, akacija, želatin, sorbitol, tragantovu gumu ili polivinil-pirolidon; punioce, na primer laktozu, šečer, kukuruzni škrob, kalcijum fosfat, sorbitol ili glicin; maziva za tabletiranje, na primer magnezijum stearat,' talk, polietilen glikol ili silicijum dioksid; dezintegrante, na primer krompirov škrob; ili prihvatljiva sretstva za kvašenje kao što je natrijum lauril sulfat. Tablete se mogu obložiti prema dobro poznatim metodama u normalnoj farmaceutskoj praksi. Oralni tečni preparati mogu biti u obliku, na primer, vodenih ili uljnih suspenzija, rastvora, emulzija, sirupa ili eliksira, ili mogu biti u obliku suvih proizvoda za rekonstituisanje sa vodom ili drugim podesnim nosačem pre upotrebe. Ovakvi tečni preparati mogu da sadrže konvencionalne aditive kao što su sretstva za suspendovanje, na primer sorbutol, sirup, metil celuloza, glukozni sirup, gelatin, hidrogenovane jestive masti; emulziona sretstva, na primer lecitin, sorbitol monooleat, ili akacija; nevodeni nosači (koji mogu uključivati jestiva ulja), na primer ulje badema, frakcionisano kokosovo ulje, uljne estre kao što je glicerin, propilen glikol, ili etil alkohol; prezervative, na primer metil ili propil p-hidroksibenzoat ili sorbinska kiselina, i ako se želi konvencionalna sretstva za ukus i bojenje.

Za površinsku primenu na kožu, lek može da se napravi u obliku krema, losiona ili masti. Formulacije krema i masti koje se .mogu upotrebiti za lek su konvencionalne, u nauči dobro poznate formulacije, na' primer, kao što je opisano u standardnim udžbenicima farmacije i kozmetike, kao što je Harry's Cosmetocology publikovano od Leonard Hill Books-a, i British Pharmacopoeia. Ove formulacije mogu, ako se želi, da se unesu u tkivo.

Ove formulacije mogu da sadrže dodatne teraoeutske agense kao što su antibakterijski, antifungicidni, antiviralni i antiinflamatorni agensi, na primer hlortetraciklin, mikonazol, idoksuridin i penazon.

*

Supozitorije če sadržavati konvencionalnu bazu za supozitorije, npr. kakao-buter ili druge gliceride.

Za parenteralno davanje, oblici fluidnih jediničnih doza se dobivaju upotrebom leka i sterilnog nosača. Lek, u zavisnosti od nosača i upotrebljene koncentracije, mogu se suspendovati u nosaču. Podesno se, adjuvanti, kao što su lokalni anastetici, prezervativi i sretstva za puferovanje mogu rastvoriti u nosaču. Da bi se povečala stabulnost preparat se može zamrznuti nakon punjenja u staklene bočice i voda ukloni pod vakuumom. Suvi liofilizirani prah se potom zalije u bodicama. Lek se može sterilisati izlaganjem etilen oksidu pre suspendovanja u sterilnom nosaču. Podesno, površinski aktivno ili sretstvo za kvašenje se može uneti u preparat da bi se olakšala jednoobrazna raspodela leka.

Za površinsku primenu na vazduhu, lek se može napraviti u suspenziji u podesnom tečnom nosaču, kao što je voda, glicerol, razblaženi etanol, propilen glikol, polietilenglikol ili fiksirana ulja.

Za površinsko nanošenje· u oči, lek se formuliše kao suspenzija u podesnom, sterilnom vodenom ili ne-vodenom nosaču. Aditivi, na primer puferi kao što je natrijum metabisulfit ili natrijum edetat; prezervativi, uključujuči baktericidne i fungicidne agense, kao što je fenilmerkuri acetat ili nitrat, benzalkonijum hlorid ili hlorheksidin, isretstva za zgušnjavanje kao što je hipromeloza, mogu se takodje uključiti.

Lek može takodje da se primeni na koži kao aerosol.

Primenjena doza za preparat koji se daje površinski če, svakako, zavisiti od veličine površine koja treba da se tretira. Za uši i oči doza če tipično biti u opsegu od 10 do 100 mg leka.

Veterinarski preparati za ^tretiranje mlečnih žlezdi bolesti mlečnih žlezdi kod životinja, naročito mastitisa govečeta, če obično sadržavati suspenziju leka u uljastom nosaču.

I

Preparat može da sadrži od 0.1$ do 99% težinski, poželjno od 10-60% težinski, leka, u zavisnosti od metode davanja. Kada su preparati u obliku jedinične doze, svaka jedinična doza če poželjno sadržavati od 50-500 mg leka. Doza koja se koristi kod odraslih ljudi za lečenje če poželjno biti u opsegu od 100 mg do 3 g, na dan, na primer 250 mg do 2 g leka na dan, u zavisnosti od načina i frekfencije davanja.

Alternativno, lek se može davati kao deo ukupne dijete. U tom slučaju količina upotrebljenog leka može biti manja od 1% težinski od dijete a poželjno je ne više od 0.5% težinski. Pijeta se za živocinje može sastojati od normalne hrane kojoj se može dodati lek ili se lek može uključiti u premiks za mešanje sa hranom.

Podesan metod za davanje leka životinjama je da se on dodaje u pijaču vodu za životinje. U tom slučaju koncentracija leka u pija čoj vodi od oko 5-500/Ug/ml, na primer 5-200/Ug/ml, je podesna.

Ovaj pronalazak dalje obezbedjuje postupak za tretiranje bakterijskih ili mikroplazmatičnih infekcija kod ljudi ili životinja , i obuhvata davanje ljudima ili životinjama kojima treba, efikasne netoksične količine kristalnog kalcijum pseudomonata ili njegovog hidrata.

Posebne bakterijske i/ili mikoplazmatične infekcije kod ljudi ili životinja koje se mogu tretirati na ovaj način uključuju venerične bolesti, respiratorne infekcije, kao što je bakterijski bronhitis, bakterijski meningitis, ne-specifični uretritis i pneumonija kod ljudi, respiratorne infekcije, mastitis, dizenterija svinje i pneumonija kod životinja.

Pronalazak je ilustrovan sledečim primerima.

Primer 1

Kalcijum pseudomonat dihidrat

Rastvoru pseudomonske kiseline (100 g, 0.2 mola) u 50% vodenom metanolu (1.5 1) dodat je u porcijama kalcijum oksid (7.1 g, 0.127 mola) da bi se dobio neutralan rastvor (pH 7.0). Rastvor je mešan .

na sobnoj temperaturi 1 h pre nego što je rastvarač uparen pod sniženim pritiskom dajuči penu. Pena je dodata u porcijama uz mešanje u vodu (2 1) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja 1 h rastvor je procedjen i filtrat ostavljen da stoji 48 h na sobnoj' temperaturi.

Kristalni proizvod je procedjen.dajuči naslovno jedinjenje (31.0 g,

29%), t.t. 135-137°C; V (KBr)'< 3600-3100 , 1710, 1650 i 1600-1530 cm^{* 1};

i max λ ²²⁰ nm (c 30840); „(CD,OD) 5.75 (IH, s, 2-H) , 4.08 (2H, t, 9'-H₂), 3.9-3.7 (4H, m, 5-H, 7-H, 13-H. 16_a-H), 3.58 (IH, m, 16_b-H), 3.37 (IH, dd, 6-H), 2.8 (IH, m, 10-H), 2.7 (IH, dd,

11-Η), 2.6 (IH, m, 4_a-H), 2.22 (3H, m, 4 -H, 2'-H₂),

2.2 (3H, s, 15-H₃), 1.95 (IH, m, 8-H), 1.75 - 1.5 (6H, m, 9- 2» 3'-H₂, 8'-H₂), 1.4 - 1.3 (9H, m, 12-H, 4'

-H₂, 5'-H₂, 6'-H₂, 7'-H₂), 1.22 (3H, d, 14-H₃) i 0.95 (3H, d, 17-H₃ ); 6_C(CD₃OD) 184.5 (C-l'), 168.1 (C-l),

159 (C-3), 118.2 (C-2), 76 (C-5), 71.6 (C-13), 70.6 (C-7), 69.9 (C-6), 66.2 (C-16'), 64.7 (C-9'), 61.2 (C-ll), 56.8 (C-10), 43.8 (C-4), 43.6 (C-12), 41.4 (C-8), 38.5 (C-2'), 32.9 (C-9), 30.7, 30.5, 30.3, (C-4‘, 5' i 6'), 29.8·-(C-8'), 27.2, 27.1 (C-3' i

7’), 20.4 (C-14), 19.4 (C-15) i 12.3 ppm (C-17) (nadjeno C, 57.97; H, 8.35; Ca, 3.68. C5₂HggO]_3Ca.2H₂O zahteva C, 58.08; H, 8.44; Ca, 3.73%. Sadržaj vode, nadjeno:

3.70. 2H₂O zahteva 3.35%). Matične tečnosti kristalizacije su uparene pod sniženim pritiskom do pola zapremine dajuči nakon stajanja od 24 h drugi prinos kalcijum pseudomonat dihidrata (39 g, 36%) t.t.132-134°C'(sadržaj vode 3.44%).

Primer 2

Kalcijum pseudomonat dihidrat

Pseudomonska kiselina (93%) (1400 g, 2.6 mola) je rastvorena u metanolu (71) i procedjena pre pažljivog rastvaranja sa vodom (5 1). Izmešananrastvoru pseudomonske kiseline je u porcijama dodat kalcijum oksid (92 d, 1.64 mola). Kada je pH rastvora dostiglo 7, smeša je procedjena dajuči bistar žuti rastvor koji je dostigao pH 7.9. Posle uparavanja metanola pod sniženim pritiskom dajuči finalnu zapreminu od 5.6 l_r, rastvor je razblažen sa vodom (400 ml) i ostavljen da kristališe. Posle stajanja tokom 24 h smeša je ponovo razblažena sa vodom 2.51) i kristalizacija nastavljena tokom 18 h. Kristalni proizvod je mešan dajuči suspenziju koja je procedjena i sakupi j eni proizvod je ‘ispran suspendovanjem sa vodom (2.5 1). Beli granulasti proizvod je procedjen i osušen preko noči i peči sa fenom na sobnoj temperaturi. Proizvod je malo isitnjen pre sušenja u fluidizovanom sloju u vazdušnoj sušnici tokom 2 h na sobnoj temperaturi dajuči kalcijum pseudomonat dihidrat (1125 g, 80%) t.t,135°C; Nadjeno: voda, po Karl Fischer-u, 3,6%; 2H₂O zahteva 3.35%.

Dobivanje je ponovljeno i dobiveni su prinosi od 1300 g, (93%) i 1275 g (91%) .

Primer 3

Kalciju pseudomonat dihidrat

Procedjenom rastvoru pseudomonske kiseline (200 g, 0.4 mola) u metanolu (1 1) i vodi (750 ml) dodat je u porcijama kalcijum oksid (13.5 g, 0.24 mola) dajuči neutralan rastvor (pH 7.2). Rastvor je procedjen i metanol uparen iz filtrata pod sniženim pritiskom. Vodeni koncentrat je razblažen do zapremine od približno 1 lit. i t

ostavij en da kristališe tokom 24 h na sobnoj temperaturi. Beli kristalni proizvod je procedjen i ispran sa vodom (500 ml) i osušen na 55°C, pod sniženim pritiskom. Proizvod je potom ostavljen radi uravnoteženja pod atmosferskim uslovima tokom 12 h dajuči kristalni kalcijum pseudomonat dihidrat (165 g, 77%) t.t.125-132°C (sadržaj vode (Karl Fischer) 3.4%).

Primer 4

Kalcijum pseudomonat dihidrat

Pseudomonska kiselina (1.0 g, 2.0 mola) je mešana u vodi (20 ml) i neutralisana polako sa rastvorom natrijum hidroksida (1.8 ml, IM) (pH 7.1). Kalcijum hlorid (0.25 g, 2.25 mmola) je dodat u smešu i mešanje je vršeno do dobivanja bistrog rastvora. Posle stajanja tokom 18 h kristalni proizvod je procedjen, ispran sa vodom (5 ml) i osušen dajuči kalcijum pseudomonat dihidrat (0.5 g, 48%), t.t. 133-136°C.

Primer 5

V

Kalcijum pseudomonat dihidrat

Pseudomonska kiselina (100 g) je rastvorena u smeši aceton/voda (100 ml i 50 ml respektivno) . Natrijum hidroks-idni rastvor (10% t/v) t

i još vode je dodato da bi se Aobio približno 10-12% t/v rastvor natrijumove soli pri pH 8. Kalcijum hlorid (23 g) u vodenom rastvoru je dodat, pelcovan ako je potrebno, i kalcijum pseudomonat je ostavljen da kristališe na 20-30°C. Proizvod je potom izolovan, ispran i osušen dajuči 100 g kristalnog dihidrata.

Primer 6

Kalcijum pseudomonat dihidrat

Pseudomonska kiselina u obliku čorbe je ekstrahovana sa metil izobutil ketonom. Organski ekstrakt je potom koncentrovan i ponovo ekstrahovan sa vodenim natrijum hidroksidom do pH 8.

Dobiveni ponovni ekstrakt je koncentrovan ukoliko je potrebno da bi se dobilo oko 10% t/v rastvora natrijum pseudomonata. Kalcijum pseudomonat dihidrat je potom dobiven dodavanjem podesnog sretstva za taloženje kao u Primeru 5.

Primer 7

Kristalni, anhidrovani' kalcijum pseudOmonat

Kristalni kalcijum pseudomonat dihidrat (15 g) je osušen na vakuumu preko fosfor pentoksida na temperaturi od 50°C tokom perioda od 21 h dajuči kristalni kalcijum pseudomonat oslobodjen kristalizacione vode t.t. 13l-133°C (sadržaj vode (Karl Fischer) 0.3%).

Opis 1

Amorfni anhidrovani kalcijum pseudomonat A

Rastvoru pseudomonske kiseline A (35 g, 0.07 mola) u 50% vodenom metanolu (0.51) dodat je u porcijama kalcijum oksid (2.75 g, 0.049 mola) dajuči neutralan rastVor (pH 7.1). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 1 h, procedjen i filtrat uparen pod sniženim pritiskom dajuči čvrstu penu. Pena je triturisana sa suvim etrom (0.51) tokom 1 h pre filtriranja dajuči naslovno jedinjenje kao beli prašak (33g, 90%) t.t. 70-76°C; _7raax (KBr) 3600 - 3100,

2915,1710, 1650 i 1600 - 1530 cm “1; <_max (EtOH) 220 nm (e_m 29840); δ_Η (CD₃OD) 5.75 (IH, s, 2-H), 4.08 (2H, t,9’-H₂), 3.9 - 3.7 (4H, m, 5-H, 7-H, 13-H,

16_a-H), 3.58 (IH, m, 16_b-H), 3.37 (IH, dd, 6-H)‘, 2.8 (IH, m, 10-H), 2.7 (IH, dd,ll-H)‘, 2.6 (IH, m, 4_a-H),

2.22 (3H,ra,4_b-H, 2’-H2), 2.2 (3H, s, 15-H₃), 1.95 (IH, m, 8-H), 1.75 - 1.5 (6H, m, 9-H₂, 3'-H₂, 8’-H₂). 1.4 1.3 (9H,m,12-H, 4’-H₂, 5'-H₂, 6’-H₂, 7'-H₂), 1.22 (3H, d, 14-H₃) i 0.95 (3H, d, 17-H₃); 6_c(CD₃OD) 168.1

76.1	(C-13)	, 70.
64.7	(C-9),	61.3
43.6	(C-12)	, 41.
30.6,	30.5,	30.3
(C-3 ’	i 7'	), 20

(C-l), 158.9(G-3), 118.2 (C-2), (C-7), 69.9 (C-6), 66.3 (C-16), (C-ll), 56.8 (C-1O),43.8 (C-4), (C-8), 38.1 (C-2’), 32.9(C-9), 5’, i 6'), 29.8 (C-8’), 27.0 (C-14), 19.4 (C-15) i 12.3ppm (C-17); m/e (rel.int.) (+ve ion FAB) 539 [(pseudomonat ) Ca]⁺, 78%] (Nadjeno:c, 60.16; H, 8.77; Ca, 3.86. C52Hs60l8^Ca zahteva C, 60.09;H, 8.34; Ca, 3.86%)..

Podaci o termičkoj stabilnosti : za kristalni kalcijum pseudomonat dihidrat, amorfni kalcijum pseudomonat i pseudomonsku kiselinu.

Uzorak	Kristalna kalcijum dihidratna. so	Anhidrovana amorfna .kalcijumova ' so	Pseudomonska kiselina
Tačka topljenja	125-137°C (kao anhidrat)	70-76°C	73-75°
Procenat čistoče u masi*	92.1	89.9	91.9

Procenat početne potencije posle stokiranja** od 10 dana 50°C 8 dana 80°C	98.9 97	k 83.3 29	77.9 « 0
2 sedmice		t 1	«
37°C	100.2	97.7	98.6
50°C	98.7	80.1	55.7
80°C	94	14	0

* izraženo kao procenat čiste slobodne pseudomonske kiseline.

** Izraženo kao procenat početne čistoče.

Biološki podaci

a) Mikoplazma

Aktivnost jedinjenja iz primera protiv različitih mikoplazmatičnih organizama je isprobana in vitro u Friis-ovoj čorbi očvrsnutoj sa 0.9% agaroza i inokulisanoj sa 10 do 10 C.F.U. Minimalne koncentracije inhibicije (MIC's) su odredjene nakon 6 dana inkubiranja na 37°C i prikazane su u Tablici 1.

b) Veterinarske bakterije

Aktivnost jedinjenja iz primera protiv različitih veterinarski važnih bakterija je isprobana in vitro upotrebom dvostrukih serijskih razblaženja u Dijagnostički osetljivom agaru za testiranje ' 4 inokulisanih sa 10 orgartizama. MIC su odredjene posle inkubiranja od 18 h na 37°C i prikazane su u tablici 2.

c) Bakterije kod ljudi '

Aktivnost jedinjenja iz primera protiv različitih bakterija koje su značajne u obolenjima kod ljudi, isprobana je in vitro upotrebom serije razblaženja u hranljivoj podloži agara sa 5% čokoladne konjske krvi. MIC su odredjene posle inkubiranja od 18 h na 37°C i prikazane su u tablici 3.

U sledečim tablicama su upotrebljene sledeče skračenice :

NT - nije testirano NG - nema rasta C - kontaminirano

I

Tablica 1

MIC‘s (pg/ml) protiv Mycoplasma za Calcium Pseudomonate dihydrate

ORGANIZAM	MIC (pg/ml)
M.hyopneumoniae NB12	NG
M.hyopneumoniae JF 435	2.5
M.hyopneumoniae HK (2)	2.5
M.hyopneumoniae Str 11	2.5
M.hyopneumoniae J2206/l83b	2.5
M.hyopneumoniae MS16	2.5
M.hyopneumoniae PU/C/210	2.5
M.hyopneumoniae LABER	2.5
M.hyopneumoniae UCD1	2.5
M.hyopneumoniae TAM 6N	2.5
M.hyopneumoniae ATTCC 25095	2.5
M.hyopneumoniae NCTC 10110	2.5
+ MEAN	2.5
M.hyorhinis ATCC 23234	1.0
M.byorbinis ATCC 25021	1.0
M.hyosynoviae ATCC 25591	0.5
M.bovis NCTC 10131	.025
M.bovigenitalium ATCC 14173	0.1
M.dispar NCTC 10125	NG
M.gallisepticum S6	>10
M.pneumoniae ATCC 15492	5

I

Tablica 2

MIC's (pg/ml) protiv Veterinary Bacteria za Calcium Pseudomonate dihydrate

ORGANIZAM	MIC na agaru
E.coli NCTC 10418	80
E.coli El	80
S.dublin S7	80
S.typhimurium S18	80
Bord.bronchiseptica B08	5.0
Bord.bronchiseptica BČ9	1.3
Past.multocida PA1	.07
Past.multocida PA2	NG
Past.haemolytica PA5	2.5
Erysipelothrix rhusiopathiae NCTC 8163	20
Corynebacterium pyogenes CY1	>80
Staph.aureus B4 ( otporan na penicilin)	.16
Staph.aureus 152 (pen. osetljiv)	.16
Staph.aureus Oxford	<.l
Strep.suis ( grupa D) SPS11	.63
Strep.uberis SPU1	.07
Strep.dysgalaciae SPD1	.16
Strep.agalactiae SPAl	0.16
B.subtilis ATCC 6633	.07
Staph.aureus (Mexi)	.16
Staph.aureus ΜδΟ^	0.16
Moraxella Bovis	.31

I

Tablica 3

MIC's (pg/ml) protiv Human Bacteria za Calcium Pseudomonate dihydrate

ORGANIZAM	MIC (pg/ml)
E.coli NCTC 10418	128
E.coli ESS	2
R.mirabilis 889	128
K.aerogenes A ·	>128
P.aeruginosa 10662	>128
Pasteurella multocida-1633	0.5
Haemophilus influenzae Q1	0.13
Haemophilus influenzae Wy21	0.13
Neisseria catarrhalis 1502	0.13
Bacillus subtilis 6633	0.5
Corynebacterium xerosis 9755	>128
Sarcina lutea 8340	>128
S.aureus Oxford	0.13
S.aureus Russeli	0.25
S.aureus W2827	0.25
S.aureus T2P-	0.25
S.aureus T22P-	0.25
S.aureus T63P+	0.25
S.aureus T67P+	0.5
S.aureus V331	0.5
S.aureus V352	0.5
S.pyogenes BcA	0.5
S.pyogenes CN10A	0.03
S.pyogenes 1947A	0.13
S.pyogenes 1953-A	0*. 13
S.agalactiae 2788-B	0.5
S.agalactiae 2798B , · ..	0.5
S.agalactiae 2866B ’	0.5
S.spp.64/848-C	0.5
Streptococcus Spp 2465C	0.5
Streptococcus Spp 2761C	0.5
Streptococcus Spp 2373C	0.5
S.faecalis Tunisia	128
S.faecalis I(ER+)	128 *
S.faecalis PAGE	128
S.faecalis I	128
S.pneUmoniae CN33	0.03 I

Dos .74322

Claims (2)

1. Postupak za dobivanje kristalnog kalcijum pseudomonata ili njegovog hidrata, naznačen time, što obuhvata reakciju jona pseudomonata sa jonima kalcijuma u rastvoru u vodenom rastvaraču, izolovanje kristalnog kalcijum pseudomonat hidrata iz rastvora i potom,ukoliko se želi,uklanjanje kristalizacione vode.

2. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što obuhvata dodavanje izvora kalcijumovih jona, kao što je kalcijum oksid, u rastvor pseudomonske kiseline ili njene soli u vodenom rastvaraču.