SE535425C2 - Förfarande för separation av embryosuspensionsmassa - Google Patents

Description

25 30 535 425 2 tionen, orsakar centrifugen dessutom ofta skjuvning- och komprimerings- skada av cellerna.

Således föreligger det ett behov av ett förfarande för separation av en ESM som möjliggör tillförlitlig separation av ESM till en relativt låg kostnad samt minimering av risken för skada eller kontaminering av ESM.

Sammanfattning Denna sammanfattning tillhandahålls i syfte att introducera ett urval av koncept i förenklad form, vilka beskrivs ytterligare nedan under rubriken Detaljerad beskrivning. Denna sammanfattning är inte avsedd att identifiera huvudsärdragen för det i patentanspråk tagna föremålet och år heller ej av- sedd att användas som ett hjälpmedel för bestämning av omfånget av det i patentanspråk tagna objektet.

Ett förfarande för separation av en embryosuspensionsmassa till- handahålls. Förfarandet inkluderar tillförsel av en embryosuspensionsmassa- kultur med ett flertal första partiklar med en första storlek och ett flertal andra partiklar med en andra storlek som åtminstone delvis skiljer sig från den för- sta storleken för de första partiklarna. Förfarandet inkluderar även nedsänk- ning av embryosuspensionsmassakulturen i en vätska för åstadkommande av en blandning och pressning av blandningen genom ett filter under upprätthåll- ande av blandningen i vätskan för separation av de första partiklarna från de andra partiklarna.

Beskrivning av ritningarna Ovannämnda aspekter och flera av de åtföljande fördelarna med före- liggande uppfinnlng lnses lättare genom hänvisning till efterföljande detaljera- de beskrivning, betraktad tillsammans med de åtföljande ritningarna.

I Figur 1 visas i perspektiv en filtreringsanordning som konstruerats enligt en utföringsforrn av föreliggande uppfinnnlng. l Figur 2 visas itvärsnittsvy från sidan ett tillverkat frö.

I Figur 3 visas i perspektiv en sprängvy av filtreringsanordningen i Figur 1.

I Figur 4 visas i perspektiv en tvärsnittsvy av en filtreringsanordning enligt kravet 1. 10 15 20 25 30 535 425 Detal'|erad beskrivning En filtreringsanordning 120 konstruerad enligt en utföringsform av före- liggande uppfinning framgår bäst av Figur 1. Filtreringsanordningen 120 kan vara utformad på lämpligt sätt för inklusion i ett automatiserat aggregat an- vänt för odling av embryon för användning vid framställning av artificiella frön.

Alternativt är en sådan filtreringsanordning 120 på lämpligt sätt anpassad till att agera ensam som ett separat aggregat för skörd av antingen embryon eller kultur som används för odling av embryon för insättning i välkända till- verkade frön. l förklarande syfte och som en bakgrund beskrivs strukturen för ett till- verkat frö 20 med hänvisning till Figur 2. Det tillverkade fröet 20 inkluderar en cylindriskt lock 22 ("cylcap"), ett fröhölje 24, ett näringsmedium 26, såsom en gametofyt, och en bottentillslutning 28. Fröhöljet 24 är lämpligtvis format av en sektion av rörforrnigt material. Vid en utföringsfomt är fröhöljet 24 en sek- tion av ett sugrör av fibröst material, såsom papper. Sektionerna av sugröret kan vara förbehandlade i ett lämpligt beläggningsmaterial, såsom vax.

Det cylindriska locket 22, även känt som begränsning, är lämpligtvis tillverkat med utgångspunkt från ett poröst material med en hårdhet som är tillräckligt stark för att motstå punktering eller fraktur orsakad av ett groende embryo, såsom ett keramik- eller porslinsmaterial, och inkluderar en ändtill- slutningsdel 30 och en hjärtbladsbegrängningsdel 32. Hjärtbladsbegräns- ningsdelen 32 är lämpligtvis integralt eller enhetligt formad tillsammans med ändtillslutningsdelen 30. Det cylindriska locket 22 inkluderar även en sig longitudiellt sträckande hålighet 34 som sträcker sig genom ändtillslutnings- delen 30 och partiellt genom en ände av hjärtbladsbegränsningsdelen 32.

Håligheten 34 är storleksanpassad för mottagning av ett växtembryo 42 däri.

Vid vissa utföringsformer, såsom när det cylindriska locket 22 på lämpligt sätt är tillverkat av ett poröst material, kan det vara önskvärt att belägga det cylindriska locket 22 med ett barriärmaterial för reduktion av graden av vattenförlust och för begränsning eller reduktion av mikrobiellt inträde. Sådana barriärer inkluderar vax, polyuretan, glasyr, nagellack och en beläggning som säljs av Airproducts Airflex 4514. 10 15 20 25 30 535 425 4 Embryot 42 är anordnat inuti hàligheten 34 och är inneslutet på lämp- ligt sätt däri med hjälp av en levande ändtillslutning 43. Den levande ändtill- slutningen 43 inkluderar en primär ändtillslutning 44 och en sekundär ändtill- slutning 21. Den primära ändtillslutningen 44 är lämpligtvis fonnad av ett PCL-material, såsom beskrivits ovan, och inkluderar en centralt belägen öppning 50. Öppningen 50 är storleksanpassad så att den motsvarar dia- metern för hàligheten 34 för det cylindriska locket 22 för möjliggörande av att ett groende embryo 42 passerar därigenom. Den primära ändtillslutningen 44 kan lämpligtvis fästas till ändtillslutningsdelen 30 med hjälp av ett flertal metoder, inkluderande lim- eller värmebindning. Slutligen inkluderar det till- verkade fröet 20 en bottentillslutning 28 och kan inkludera en tertiär tillslutning 60.

Såsom bäst framgår genom hänvisning till Figurerna 3 och 4 inkluderar filtreringsanordningen 120 en bägare 122, ett roterande aggregat 124 och en korg 126. En välkänd luftningsanordning 128 är fäst till bägaren 122. En så- dan luftningsanordning 128 inkluderar ett luftningsrör 130, ett lock 132 och en klämma 134. Luftningsanordningen 128 är lämpligtvis arrangerad inuti bägar- en 122 och, vilket är välkänt, luftar innehållet i bägaren 122.

Det roterande aggregatet 124 inkluderar ett inmatningsrör 140, en spindelhylsa 142, en magnet 144 och ett stift 146. lnmatningsröret 140 är ”brutet” i belysande syfte och inkluderar en inloppsöppning 150 som sträcker sig genom en sidovägg av röret 140. Ena änden av lnmatningsröret 140 de- finierar en inmatningsände 152 medan den andra änden definierar en förank- ringsände 154. Förankringsänden 154 är storleksanpassad till att glidbart mottaga stiftet 146 däri.

Stiftet 146 är lämpligtvis ett cyllndriskt format element och inkluderar en sfäriskt formad spets 160 som sträcker sig från ena änden av stiftet 146.

Den andra änden av stiftet 146 inkluderar en ansats 162. Spetsen160 är före- trädesvis sfäriskt formad för minimering av skada av partikelformigt material, såsom embryosuspensionsmassa ("ESM"), som tillförs genom inloppsänden 152 till lnmatningsröret 140, såsom beskrivs mer detaljerat nedan.

Efter det att stiftet 146 förts in i förankringsänden 154 till inmatnings- röret 140, sätts en skruv 148 in i en motsvarande öppning (ej visad) som bild- 10 15 20 25 30 535 435 5 ats i ansatsen 162 hos stiftet 146. lnsättningen av skruven 148 i öppningen av stiftet 146 orsakar att änden av stiftet 146 expanderar in iförankringsänden 154 till inmatningsröret 140, vilket fäster stiftet 146 i inmatningsröret 140 genom kompressionspassning. Därefter sätts magneten 144 in via en kanal 164 som sträcker sig genom ena änden av spindelhylsan 142.

Det roterande aggregatet 124 är fäst till korgen 126 via en impeller 170. lmpellern 170 inluderar ett externt gängat skaft 172 som är storleksan- passat till att på ett gångbart sätt ingripa med motsvarande inre gängori spindelhylsan 142. I anslutet tillstånd roterar impeliern 170 med det roterande aggregatet 124 med hjälp av ett välkänt magnetiskt drivaggregat (ej visat), som lämpligtvis är beläget under bägaren 122. lnmatningsänden 152 till in- matningsröret 140 sträcker sig genom korgen 126 och genom ett bägarlock 180 och försluts till detta med hjälp av ett ändlock 182 och en O-ring 184.

Såsom bäst framgår av Figur 4 inkluderar korgen 126 ett flertal porer 190 som är storleksanpassade till att filtrera ESM. Närmare bestämt inklu- derar ESM ett flertal första partiklar med en första storlek och ett flertal andra partiklar med en andra storlek. Såsom är känt inom teknikområdet är ESM en population av kluster med variabla storlekar och associationer av enstaka embryonala celler med suspensorceller och individuella suspensorceller och cellulär debris. Det iföreliggande beskrivning använda uttrycket "partikel" är således avsett att inkludera enstaka embryonala celler, multipla embryonala celler, suspensorceller, cellulär debris, embryon etc, och vilken kombination som helst därav.

Vid drift av filtreringsanordningen 120 filtreras ESM genom korgen 126 för segregering av mångfalden av partiklar som utgör ESM. Porerna 190 kan tex ha en diameter som sträcker sig mellan 0,25 mm och 1,5 mm. Porerna 190 kan såsom icke-begränsande exempel vara 0,5 mm, 0,75 mm, 1,00 mm eller 1,25 mm i diameter. l ett icke-begränsande exempel på en korg 126 med porer 190 med en diameter av 0,5 mm möjliggör ESM som filtrerats genom korgen 126 att partiklar med en diameter av ca 0,5 mm och mindre passerar genom porerna 190. Korgen 126 filtrerar som sådan åtminstone partiklar med en diameter av ca 0,5 mm från partiklar med en diameter av mer än 0,5 mm. 10 15 20 25 30 535 425 6 Driflen av filtreringsanordningen 120 inses lättast genom hänvisning till Figurerna 1 och 4. Ett inflöde av ESM tillhandahålls till inmatningsröret 140 via inmatningsänden 152. ESM-materialet flödar in i inmatningsröret 140, från vilket det matas in i korgen 126 genom inmatningsöppningen 150. Korgen 126 är belägen i bägaren 122, som är fylld med ett suspensionsmedium, så- som en vätska. Såsom noterats ovan är flödet av ESM dämpat för begräns- ning av skada på parlikelformigt material i ESM med hjälp av den sfäriska änden 160.

ESM som suspenderats i vätskan i bägaren 122 skapar en blandning som pressas genom fiitret eller korgen 126 med hjälp av t ex centrifugalkraft.

När blandningen pressas genom porerna 190 i korgen 126 separeras ett fler- tal första partiklar med en första storlek från ett flertal andra partiklar med en andra storlek som åtminstone delvis skiljer sig från den första storleken för de första partiklarna. Om de första partiklarna t ex är celler av större, mera mogna embryon och de andra partiklarna är mindre i storlek än de mer mogna cellerna, passerar de mindre cellerna genom porerna 190 om de är mindre än diametern för öppningarna 190 och in i botten av bägaren 122. Om tex korgen 126 drivs magnetiskt för induktion av en rotationskraft, driver centrifugalkraften för den roterande korgen 126 de andra partiklarna genom porerna 190. Även om belysande utföringsformer har illustrerats och beskrivits, in- ses det att olika förändringar kan göras avseende detta utan att frångå ande- meningen och skyddsomfånget för uppfinningen. Såsom ett icke-begräns- ande exempel kan filtreringsanordningen 120 inkludera en andra korg eller ett filtrerande skikt där den andra korgen inkluderar porer med en annan dia- meter jämfört med den första korgen. Vid en sådan utföringsform tillhanda- håller filtreringsanordningarna två filtreringsskikt för segregering av partiklar från ESM-materialet till separata steg. Även om två korgar beskrivs, är det uppenbart att flera korgar kan vara inkluderade för åstadkommande av så många filtreringsskikt som är önskvärda.

Claims (9)

10 15 20 25 30 535 425 PATENTKRAV

1. Förfarande för separation av en embryosuspensionsmassa, varvid förfar- andet inbegriper z (a) tillhandahållande av en embryosuspensionsmassakultur med ett flertal första partiklar med en första storlek och ett flertal andra partiklar med en andra storlek som åtminstone delvis skiljer sig från den första stor- leken av de första partiklarna; (b) nedsänkning av embryosuspensionsmassakulturen i en vätska för åstadkommande av en blandning; och (c) pressning av blandningen genom åtminstone ett första filter under upprätthållande av blandningen i vätskan för separation av de första partiklarna från de andra partiklarna.

2. Förfarande enligt kravet 1, varvid pressningen av blandningen genom åtminstone ett första filter inkluderar applicering av en centrifugalkraft på blandningen under upprätthållande av blandningen i vätskan.

3. Förfarande enligt kravet 1, varvid nedsänkningen av embryosuspensíons- massakulturen inkluderar avsättning av embryosuspensionsmassakulturen i en korg med ett flertal porer som är storleksanpassade till att möjliggöra att åtminstone de andra partiklarna, men inte de första partiklarna, passerar genom mångfalden av porer.

4. Förfarande enligt kravet 3, varvid pressningen av blandningen genom åt- minstone ett första filter inkluderar applicering av en roterande rörelse på korgen för pressning av åtminstone de andra partiklarna genom mångfalden av porer under kvarhållning av åtminstone de första partiklarna i korgen.

5. Förfarande för separation av en embryosuspensionsmassa, varvid förfar- andet inbegriper: (a) tillhandahållande av en embryosuspensionsmassakultur med ett flertal första partiklar med en första storlek och ett flertal andra partiklar med 10 15 20 25 30 b) (O) 535 425 8 en andra storlek som åtminstone delvis skiljer sig från den första stor- leken för de första partiklarna; nedsänkning av embryosuspensionsmassakulturen i en vätska för åstadkommande av en blandning; och applicering av en roterande rörelse på blandningen för pressning av blandningen genom ett filter för separation av de första partiklarna från de andra partiklarna under upprätthållande av blandningen i vätskan.

6. Förfarande enligt kravet 5, varvid appliceringen av en roterande rörelse på blandningen inkluderar applicering av en centrifugalkraft på ett filter som håll- er blandningen.

7. Förfarande enligt kravet 5, varvid filtret är en korg med ett flertal porer som är storleksanpassade till att filtrera åtminstone de första partiklarna från de andra partiklarna.

8. Förfarande enligt kravet 7, varvid appliceringen av en roterande rörelse på blandningen inkluderar applicering av en centrifugalkraft på korgen.

9. Förfarande för separation av en embryosuspensionsmassa, varvid förfar- andet inbegriper: (a) tillhandahållande av en embryosuspensionsmassakultur med ett flertal b) (C) (d) första partiklar med en första storlek och ett flertal andra partiklar med en andra storlek som åtminstone delvis skiljer sig från den första stor- leken för de första partiklarna; avsättning av embryosuspensionsmassakulturen i en korg med ett flertal porer som är storleksanpassade för filtrering av åtminstone de första partiklarna från de andra partiklarna; nedsänkning av korgen innehållande embryosuspensionsmassa- kulturen i en vätska för åstadkommande av en blandning; och applicering av en roterande rörelse på blandningen för pressning av blandningen genom mångfalden av porer i korgen för separation av de första partiklarna från de andra partiklarna under upprätthållande av blandningen i vätskan.