SE459008B - Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar - Google Patents

Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar

Info

Publication number
SE459008B
SE459008B SE8603711A SE8603711A SE459008B SE 459008 B SE459008 B SE 459008B SE 8603711 A SE8603711 A SE 8603711A SE 8603711 A SE8603711 A SE 8603711A SE 459008 B SE459008 B SE 459008B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
cells
monoclonal antibodies
human
vitro
human monoclonal
Prior art date
Application number
SE8603711A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8603711L (sv
SE8603711D0 (sv
Inventor
C Borrebaeck
L Danielsson
S Moeller
Original Assignee
Bioinvent Int Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bioinvent Int Ab filed Critical Bioinvent Int Ab
Priority to SE8603711A priority Critical patent/SE459008B/sv
Publication of SE8603711D0 publication Critical patent/SE8603711D0/sv
Priority to AU79138/87A priority patent/AU7913887A/en
Priority to JP50538487A priority patent/JP2648318B2/ja
Priority to AT87906018T priority patent/ATE91709T1/de
Priority to PCT/SE1987/000389 priority patent/WO1988001642A1/en
Priority to EP87906018A priority patent/EP0342188B1/en
Priority to DE19873786673 priority patent/DE3786673T2/de
Priority to CA000546024A priority patent/CA1340099C/en
Publication of SE8603711L publication Critical patent/SE8603711L/sv
Publication of SE459008B publication Critical patent/SE459008B/sv
Priority to US08/323,593 priority patent/US5567610A/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0081—Purging biological preparations of unwanted cells
    • C12N5/0087—Purging against subsets of blood cells, e.g. purging alloreactive T cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • C12N5/163—Animal cells one of the fusion partners being a B or a T lymphocyte

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

459 008 Utvecklingen har därför skett inom sk. in vitro lmmuniserifig, där icke-immuna humana lymfocyter har immuniserats i cellodlingsmiljö för att på sä sätt möjliggöra att alla typer av antigener kan användas. Dessa in vitro immuniserade humana lymfocyter fuseras sedan med myelom eller lymfoblastoida celler för kontinuerlig produktion av humana monoklonala antikroppar. De immuna lymfocyterna kan alternativt transfekteras med lämpligt viralt eller bakteriellt genom för att på detta sätt immortalisera f cellerna. in vitro immunisering år således det enda sätt som humana monoklonala antikroppar kommer att kunna tillverkas på ett praktisk och etiskt acceptabelt sätt. Denna metod har utvecklats under flera år i det murina systemet och för musceller finns idag väl fungerande in vitro immuni- seringsförfarande (Borrebaeck, 1986). . inom det humana systemet, där en stor resurssatsning skett för att ta fram in vitro immunlsering. finns idag inget som motsvarar mussystemet.
Detta beror på att humana celler delvis har andra aktiveringskrav och framförallt på att perifera blodlymfocyter har använts vilka eventuellt existerar i ett 'djupare vilotlllstånd. En del rapporter finns dock om human in vitro immunisering mot några få typer av haptener, t.ex. bombesin (Ho et al. 1985) och DNP-HSA (Teng et al. 1985), samt röda blodkroppar (Strike et al. 1984; Hoffman & Hlrst l985). Dessa in vitro lmmuniseringssystem har inte någon minsta gemensamma nämnare utan olika tillvägagångssätt har använts med mycket olika resultat, oftast med mycket låga utbyten av specifika hybridom. Dessutom finns f.n. inget system som överhuvudtaget-kan producera ett tillfredställande primärt lmmunsvar in vitro mot tymus- beroende antlgener. Att använda olika typer av T cells-deriverade lymfokiner är ett sätt som fungerat bra med 459 G08 musceller (Borrebaeck & Möller 1986) men som inte ensamt räcker i det humana systemet. Övriga angreppssätt som provats för att understödja en human in vitro lmmuniserlng för produktion av humana monoklonala antikroppar är användning av: l. ad juvanspeptider, t.ex. muramyldipeptid. 2. monokinsupplementerat medium. 3. separation av cellpopulatloner med Sepharose/Sephadex-, gelatirïsf, * plast-, nylonulladherens, antlkroppspanning, komplementlysis, affinitets- kolonn. 4. polyklonala aktivatorer, t.ex. endotoxiner (LPS), lektlner (PHA,Pwr1,Con A), Staphyloccoccus aureus celler, protein A eller G. 5. speciella sera, tex. ABO, FCS, kanin serum.
Problemen verkar dock mer vara att bl.a. ta bort cellsubpopulationer (eventuellt cytotoxiska) som har förmåga att supprlmera, eller på annat sätt förhindra, det antigen-specifika immunsvaret in vitro. F.n. finns inget publicerat sätt som löser detta problem.
Uppfinningens ändamål och kännetecken Föreliggande uppfinning möjliggör att avlägsna för in vitro immuni- seringen oönskade celler, för att på så sätt tillåta att ett tillräckligt antal antigen-specifikt in vitro aktiverade humana lymfocyter produceras, som därefter skall vidareanvändas som f usions- eller transfektionspartner vid produktion av humana monoklonala antikroppar. Denna metod att ta bort oönskade subpopulatloner av celler från humant blod, tonsiller, lymfnoder, mjältceller, benmärg etc. vilka hittills omöjliggjort ett högt utbyte av specifikt in vitro immuniserade humana lymfocyter, kännetecknas av 459 008 användningen av s.k. lysosomotropiska agens. Dessa agens har den specifika förmågan att döda alla lysosomlnnehållande celler, t.ex. monocyter/ makrofager, NK-celler, samt eventuellt andra f.n. okända cellsubpopu- lationer på 30-40 minuter. Denna metod skapar således möjligheten att utan omfattande celiseparationsexperiment (där vi f.n. inte har tillfredsställande metoder och tillyttermeravisso inte vet exakt vilken cell vi letar efter) på några tiotals minuter anpassa iymfocytw v populationen, så att den kan användas vid in vitro immuniserings- experiment för produktion av humana monoklonala antikroppar. Detta sker p.g.a. att lymfocytpopulations B cellerna nu givits möjlighet att aktiveras antigen-specifikt utan negativ inverkan från lysosomal-positiva celler. På så sätt har vi skapat en immun-population lymfocyter som kan användas som den enda idag tillgängliga källan för produktion 'av humana monoklonala antikroppar. Detta medför vidare att humana monoklonala antikroppar kan börja produceras i samma utsträckning som musmonoklonala antikroppar. Den oerhörda potential som humana monoklonala antikroppar har in vivo vid behandling av tumörsjukdommar, tumörlokalisering, förgiftningar, förhindrandet av transplantatrejektioner etc kan därefter börja att exploateras.
De lysosomotropiska agens som metoden utnyttjar år aminosyraestrar (Goldman 8. Kaplan 1973) typ L-leucin-metyl ester(Leu-0r1e), L-glutamin- syra-dimetyl ester etc. Dessa agens penetrerar plasmacellmembranet och diffunderar fritt in i lysosomerna där de snabbt metaboliseras till fria aminosyror. Dessa fria och mer polära aminosyror kan inte diffuhdera ut från lysosomerna lika snabbt som metylestrarna diffunderar in, vilket medför en snabb ökning I det intralysosomala osmotiska trycket samt en påföljande bristning av dessa organeller. Vi vill inte emellertid inte binda 459 008 upp verkningssättet för de lysosomotropiska ämnena vid någon speciell teori. Metoden att utnyttja dessa L-aminosyra e-estrar beskrivs närmare i utförlngsexemplen.
REFERENSER Borrebaeck, CAK (1986) TlBTECH. 4, 147.
Borrebaeck, C.A1<.& Möller, SA (1986) J. immunol. 136, 3710.
Goldman, R. & Kaplan, A (1973) Biochim. Biophys. Acta 318, 205.
Ho, MK, Rand, N., Murray, J., Kato, K & Rabin, H. (1985) J. immunol. 135, 3831 Hoffman, M.i<, & Hirst, JA (1985) in HLMAN HYBRIDOMAS AND MONOCLONAL ANTIBODIES (Engleman, Foung, Larrick & Raubitscnek, Eds.), pp. 277-289, Plenum Press.
Strike, LE., Devens, B.H. &Lundak, R.L. (1984) J. lmmunol. 132, 1798.
Teng, N.N.H., Reyes, GR., Bieber, M., Fry, KE., Lam, KS. & Hebert, JM. (1985) in HUMAN HYBRIDOMAS AND MONOCLONAL ANTIBODIES (Engleman et ai.
Eds.), pp. 71-91, Plenum Press. 459 008 e Beskrivning av utföringsexempel Exempel l: Humana perlfera lymfocyter framrenades med hjälp av densitetscentrlfugerlng på Flcoll gradient. Lymfocyterna (l0 x 105 celler/ml) behandlades med 0.45 mg L-leucin metyl ester/ml l 40 minuter vid 25 °C. Medlet skall vara lågt i serumnlvå och därför användes RO (RPMl 1640 med 0% fetalt kalv serum (FCS)). Cellerna tvåttades därefter 2 ggr l Rz-s (Rrrll 1640 med 2-5 x Fcs) varefter de sattes tlllïil* vltro lmmuniseringen för produktion av humana monoklonala antikroppar. in vltro immunlseringens längd var 6 dagar och i ug KLH/ml användes som immunogen. Kulturen innehöll också lymfokinerna TRF, BCDF, IL-l/2. Dag 6 testades hur många antigen-specifika plaque-bildande celler som bildats.
Detta antal ger ett mått på hur väl in vitro lmmuniseringen fungerat. lcke-Leu-Orie behandlade celler användes som kontroll. Utfallet framgår av tabellen nedan: celler Antal plaque-bildande eeller/ 105 ß celler KLH Gelatin* Leu-Orie behandlade celler** l 156 19 Obehandlade celler 7 li * gelatin anvädes som kontrollantigen i plaque testet. ** i detta exempel användes humana perlfera blodlymfocyter. 459 008 ' Exempel 2: Humaha perifera lymfocyterfPßLl som in vitro immuniserats enligt utföringsexempel 1 (ovan) med 1 ug KLH/ml i 6 dagar, immortaliseras genom fusion med Sp2/0-Ag14 myelomceller eller wiL2-UC729HF2 lymfoblastoida celler m.h.a. polyetylenglykol. Efter 14-21 dagar testades de växande hybridernas produktion av antigen-specifika antikroppar och i nedanstående tabell framgår utfallet: ""1? (Sellers antal hybriderlt/antal testade specifik effektivitet (S) Ubehandlade PBL 0/96 0 Leu-Orie behandlade PBL . 17/96 18 *Humana lymfocyter som fuserats med SP2/0-Agl4. Utfallet med WiL2-UC729HF2 var samma, med absolutsiffror som var ca. 30% lägre.
*Antal hybrider som vid testet visade sig producera antigen-specifika antikroppar.

Claims (4)

“459 008 PATENTKRAV
1. Sätt vid in vitro ímmunisering för framställ- ning av humana monoklonala antikroppar, k ä n n e - t e c k n a t av att lysosomotropiska agens bringas att verka in vitro pà humana lymfocytinnehàllande cellpopulationer, för borttagandet av cellsubpopulationer med negativ inverkan på in vitro immuniseringen, var- efter lymfocyterna in vitro immuniseras antigen- fikt och immortaliseras. *zw- speci-
2. Sätt enligt krav l, k ä n n e t e c k n a t av att som lysosomotropiskt agens används lysosomo- tropiska aminosyraderivat.
3. Sätt enligt krav l eller 2, k ä n n e t e c k - n a t av att de immuna, antigen-specifika cellerna immortalíseras genom fusion med murina eller humana myelom, lymfoblastoida cellinjer eller lymfomceller.
4. Sätt enligt krav l eller 2, k ä n n e t e c k - n a t av att de immuna, antigen-specifika cellerna immortaliseras genom transfektion med virala eller bakteriella genom.
SE8603711A 1986-09-04 1986-09-04 Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar SE459008B (sv)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8603711A SE459008B (sv) 1986-09-04 1986-09-04 Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar
DE19873786673 DE3786673T2 (de) 1986-09-04 1987-09-01 Verfahren zur entfernung unerwünschter zellen aus menschlichen lymphozytenpopulationen, anwendung des verfahrens zur herstellung monoklonaler antikörper und dafür geeigneter kit.
PCT/SE1987/000389 WO1988001642A1 (en) 1986-09-04 1987-09-01 Method for the removal of undesired cells from human lymphocyte populations, application of the method in monoclonal antibody production and kit therefor
JP50538487A JP2648318B2 (ja) 1986-09-04 1987-09-01 ヒトモノクローナル抗体製造法、およびそのキット
AT87906018T ATE91709T1 (de) 1986-09-04 1987-09-01 Verfahren zur entfernung unerwuenschter zellen aus menschlichen lymphozytenpopulationen, anwendung des verfahrens zur herstellung monoklonaler antikoerper und dafuer geeigneter kit.
AU79138/87A AU7913887A (en) 1986-09-04 1987-09-01 Method for the removal of undesired cells from human lymphocyte populations, application of the method in monoclonal antibody production and kit therefor
EP87906018A EP0342188B1 (en) 1986-09-04 1987-09-01 Method for the removal of undesired cells from human lymphocyte populations, application of the method in monoclonal antibody production and kit therefor
CA000546024A CA1340099C (en) 1986-09-04 1987-09-03 Method for in vitro immunisation of lymphocytes for use in production ofhuman monoclonal antibodies and kit therefor
US08/323,593 US5567610A (en) 1986-09-04 1994-10-17 Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8603711A SE459008B (sv) 1986-09-04 1986-09-04 Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE8603711D0 SE8603711D0 (sv) 1986-09-04
SE8603711L SE8603711L (sv) 1988-03-05
SE459008B true SE459008B (sv) 1989-05-29

Family

ID=20365487

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8603711A SE459008B (sv) 1986-09-04 1986-09-04 Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP0342188B1 (sv)
JP (1) JP2648318B2 (sv)
AU (1) AU7913887A (sv)
CA (1) CA1340099C (sv)
DE (1) DE3786673T2 (sv)
SE (1) SE459008B (sv)
WO (1) WO1988001642A1 (sv)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE461985B (sv) * 1988-09-13 1990-04-23 Bioinvent Int Ab In vitro immunisering av lymfocytinnehaallande cellpopulationer och materialsats daerfoer
AU645488B2 (en) * 1989-02-21 1994-01-20 Terumo Corporation A process for the generation of proliferating CD4 lymphocytes
CA1340565C (en) * 1989-06-29 1999-05-25 Thomas B. Okarma Device and process for cell capture and recovery
US6143508A (en) * 1989-06-29 2000-11-07 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Device and process for cell capture and recovery
AU6044090A (en) * 1989-07-21 1991-02-22 E.I. Du Pont De Nemours And Company Preparation of human adherent lymphokine-activated killer (a-lak) cells
AU657482B2 (en) * 1990-05-22 1995-03-16 Regents Of The University Of California, The Novel methods for producing antigen-specific, high-affinity human monoclonal antibodies
EA023179B1 (ru) 2009-08-13 2016-05-31 Круселл Холланд Б.В. Антитела против респираторного синцитиального вируса (pcb) и способы их применения
NZ603488A (en) 2010-07-09 2015-02-27 Crucell Holland Bv Anti-human respiratory syncytial virus (rsv) antibodies and methods of use
FR2998579B1 (fr) 2012-11-27 2015-06-19 Commissariat Energie Atomique Methode pour obtenir des anticorps humains specifiques d'un antigene par immunisation in vitro

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4849329A (en) * 1986-05-30 1989-07-18 E. I. Du Pont De Nemours And Company Process for preparing lymphokine activated killer cells

Also Published As

Publication number Publication date
WO1988001642A1 (en) 1988-03-10
DE3786673D1 (de) 1993-08-26
JPH01503754A (ja) 1989-12-21
EP0342188B1 (en) 1993-07-21
DE3786673T2 (de) 1993-12-16
SE8603711L (sv) 1988-03-05
JP2648318B2 (ja) 1997-08-27
AU7913887A (en) 1988-03-24
CA1340099C (en) 1998-10-27
SE8603711D0 (sv) 1986-09-04
EP0342188A1 (en) 1989-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5567610A (en) Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
Melchers et al. Lymphocyte Hybridomas: Second Workshop on “Functional Properties of Tumors of T and B Lymphoyctes”
Kozbor et al. The production of monoclonal antibodies from human lymphocytes
Melchers Murine embryonic B lymphocyte development in the placenta
Greenberg et al. Characterization of the antibody-dependent cytotoxic cell. A non-phagocytic monocyte?
Kolb et al. Suppression of the humoral immune response by plasmacytomas: mediation by adherent mononuclear cells
US4381292A (en) Anti-human T-lymphocyte monoclonal antibody
FI75365B (fi) Foerfarande foer framstaellning av monoklonal antikropp till maensklig protymocytantigen medelst deras hybridcellinje.
Knapp et al. VIL-A1, a monoclonal antibody reactive with common acute lymphatic leukemia cells
US4364937A (en) Monoclonal antibody to a human T cell antigen and methods of preparing same
FI75362B (fi) Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp mot maenniskans t-celler, medelst en ny hybridcellinje.
Hulliger et al. Synthesis of antibodies by blood leucocytes of the rabbit
SE459008B (sv) Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar
Metcalf et al. The nature of the cells generating B‐lymphocyte colonies in vitro
RU2431667C9 (ru) Слитые клетки-партнеры
Bainbridge et al. Circulation of lymphoid cells in mice infected with Friend leukemia virus
US4647535A (en) Human nonsecretory plasmacytoid cell line
Tai et al. Differential natural killer cell reactivity against T cell lymphomas by cells from normal or stimulated mice.
Rodriguez et al. Helper activity by human large granular lymphocytes in in vitro immunoglobulin synthesis
SE461985B (sv) In vitro immunisering av lymfocytinnehaallande cellpopulationer och materialsats daerfoer
Yakulis et al. Surface Immunoglobulins of Circulating Lymphocytes in Mouse Plasmacytoma III. The Effect of Plasmacytoma RNA on the Immune Response
US4614720A (en) Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human T cell antigen, antibody, and methods
Kosinski et al. A human monoclonal antibody against HLA‐A25
Kunori et al. Polyclonal antibody secretion induced in human mixed lymphocyte cultures
US4798806A (en) Compositions and methods using a monoclonal antibody to a human T cell antigen

Legal Events

Date Code Title Description
NAL Patent in force

Ref document number: 8603711-6

Format of ref document f/p: F

NUG Patent has lapsed

Ref document number: 8603711-6

Format of ref document f/p: F