SE459008B - Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar - Google Patents
Saett att framsstaella humana monoklonala antikropparInfo
- Publication number
- SE459008B SE459008B SE8603711A SE8603711A SE459008B SE 459008 B SE459008 B SE 459008B SE 8603711 A SE8603711 A SE 8603711A SE 8603711 A SE8603711 A SE 8603711A SE 459008 B SE459008 B SE 459008B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- cells
- monoclonal antibodies
- human
- vitro
- human monoclonal
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0081—Purging biological preparations of unwanted cells
- C12N5/0087—Purging against subsets of blood cells, e.g. purging alloreactive T cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
- C12N5/163—Animal cells one of the fusion partners being a B or a T lymphocyte
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
459 008 Utvecklingen har därför skett inom sk. in vitro lmmuniserifig, där icke-immuna humana lymfocyter har immuniserats i cellodlingsmiljö för att på sä sätt möjliggöra att alla typer av antigener kan användas. Dessa in vitro immuniserade humana lymfocyter fuseras sedan med myelom eller lymfoblastoida celler för kontinuerlig produktion av humana monoklonala antikroppar. De immuna lymfocyterna kan alternativt transfekteras med lämpligt viralt eller bakteriellt genom för att på detta sätt immortalisera f cellerna. in vitro immunisering år således det enda sätt som humana monoklonala antikroppar kommer att kunna tillverkas på ett praktisk och etiskt acceptabelt sätt. Denna metod har utvecklats under flera år i det murina systemet och för musceller finns idag väl fungerande in vitro immuni- seringsförfarande (Borrebaeck, 1986). . inom det humana systemet, där en stor resurssatsning skett för att ta fram in vitro immunlsering. finns idag inget som motsvarar mussystemet.
Detta beror på att humana celler delvis har andra aktiveringskrav och framförallt på att perifera blodlymfocyter har använts vilka eventuellt existerar i ett 'djupare vilotlllstånd. En del rapporter finns dock om human in vitro immunisering mot några få typer av haptener, t.ex. bombesin (Ho et al. 1985) och DNP-HSA (Teng et al. 1985), samt röda blodkroppar (Strike et al. 1984; Hoffman & Hlrst l985). Dessa in vitro lmmuniseringssystem har inte någon minsta gemensamma nämnare utan olika tillvägagångssätt har använts med mycket olika resultat, oftast med mycket låga utbyten av specifika hybridom. Dessutom finns f.n. inget system som överhuvudtaget-kan producera ett tillfredställande primärt lmmunsvar in vitro mot tymus- beroende antlgener. Att använda olika typer av T cells-deriverade lymfokiner är ett sätt som fungerat bra med 459 G08 musceller (Borrebaeck & Möller 1986) men som inte ensamt räcker i det humana systemet. Övriga angreppssätt som provats för att understödja en human in vitro lmmuniserlng för produktion av humana monoklonala antikroppar är användning av: l. ad juvanspeptider, t.ex. muramyldipeptid. 2. monokinsupplementerat medium. 3. separation av cellpopulatloner med Sepharose/Sephadex-, gelatirïsf, * plast-, nylonulladherens, antlkroppspanning, komplementlysis, affinitets- kolonn. 4. polyklonala aktivatorer, t.ex. endotoxiner (LPS), lektlner (PHA,Pwr1,Con A), Staphyloccoccus aureus celler, protein A eller G. 5. speciella sera, tex. ABO, FCS, kanin serum.
Problemen verkar dock mer vara att bl.a. ta bort cellsubpopulationer (eventuellt cytotoxiska) som har förmåga att supprlmera, eller på annat sätt förhindra, det antigen-specifika immunsvaret in vitro. F.n. finns inget publicerat sätt som löser detta problem.
Uppfinningens ändamål och kännetecken Föreliggande uppfinning möjliggör att avlägsna för in vitro immuni- seringen oönskade celler, för att på så sätt tillåta att ett tillräckligt antal antigen-specifikt in vitro aktiverade humana lymfocyter produceras, som därefter skall vidareanvändas som f usions- eller transfektionspartner vid produktion av humana monoklonala antikroppar. Denna metod att ta bort oönskade subpopulatloner av celler från humant blod, tonsiller, lymfnoder, mjältceller, benmärg etc. vilka hittills omöjliggjort ett högt utbyte av specifikt in vitro immuniserade humana lymfocyter, kännetecknas av 459 008 användningen av s.k. lysosomotropiska agens. Dessa agens har den specifika förmågan att döda alla lysosomlnnehållande celler, t.ex. monocyter/ makrofager, NK-celler, samt eventuellt andra f.n. okända cellsubpopu- lationer på 30-40 minuter. Denna metod skapar således möjligheten att utan omfattande celiseparationsexperiment (där vi f.n. inte har tillfredsställande metoder och tillyttermeravisso inte vet exakt vilken cell vi letar efter) på några tiotals minuter anpassa iymfocytw v populationen, så att den kan användas vid in vitro immuniserings- experiment för produktion av humana monoklonala antikroppar. Detta sker p.g.a. att lymfocytpopulations B cellerna nu givits möjlighet att aktiveras antigen-specifikt utan negativ inverkan från lysosomal-positiva celler. På så sätt har vi skapat en immun-population lymfocyter som kan användas som den enda idag tillgängliga källan för produktion 'av humana monoklonala antikroppar. Detta medför vidare att humana monoklonala antikroppar kan börja produceras i samma utsträckning som musmonoklonala antikroppar. Den oerhörda potential som humana monoklonala antikroppar har in vivo vid behandling av tumörsjukdommar, tumörlokalisering, förgiftningar, förhindrandet av transplantatrejektioner etc kan därefter börja att exploateras.
De lysosomotropiska agens som metoden utnyttjar år aminosyraestrar (Goldman 8. Kaplan 1973) typ L-leucin-metyl ester(Leu-0r1e), L-glutamin- syra-dimetyl ester etc. Dessa agens penetrerar plasmacellmembranet och diffunderar fritt in i lysosomerna där de snabbt metaboliseras till fria aminosyror. Dessa fria och mer polära aminosyror kan inte diffuhdera ut från lysosomerna lika snabbt som metylestrarna diffunderar in, vilket medför en snabb ökning I det intralysosomala osmotiska trycket samt en påföljande bristning av dessa organeller. Vi vill inte emellertid inte binda 459 008 upp verkningssättet för de lysosomotropiska ämnena vid någon speciell teori. Metoden att utnyttja dessa L-aminosyra e-estrar beskrivs närmare i utförlngsexemplen.
REFERENSER Borrebaeck, CAK (1986) TlBTECH. 4, 147.
Borrebaeck, C.A1<.& Möller, SA (1986) J. immunol. 136, 3710.
Goldman, R. & Kaplan, A (1973) Biochim. Biophys. Acta 318, 205.
Ho, MK, Rand, N., Murray, J., Kato, K & Rabin, H. (1985) J. immunol. 135, 3831 Hoffman, M.i<, & Hirst, JA (1985) in HLMAN HYBRIDOMAS AND MONOCLONAL ANTIBODIES (Engleman, Foung, Larrick & Raubitscnek, Eds.), pp. 277-289, Plenum Press.
Strike, LE., Devens, B.H. &Lundak, R.L. (1984) J. lmmunol. 132, 1798.
Teng, N.N.H., Reyes, GR., Bieber, M., Fry, KE., Lam, KS. & Hebert, JM. (1985) in HUMAN HYBRIDOMAS AND MONOCLONAL ANTIBODIES (Engleman et ai.
Eds.), pp. 71-91, Plenum Press. 459 008 e Beskrivning av utföringsexempel Exempel l: Humana perlfera lymfocyter framrenades med hjälp av densitetscentrlfugerlng på Flcoll gradient. Lymfocyterna (l0 x 105 celler/ml) behandlades med 0.45 mg L-leucin metyl ester/ml l 40 minuter vid 25 °C. Medlet skall vara lågt i serumnlvå och därför användes RO (RPMl 1640 med 0% fetalt kalv serum (FCS)). Cellerna tvåttades därefter 2 ggr l Rz-s (Rrrll 1640 med 2-5 x Fcs) varefter de sattes tlllïil* vltro lmmuniseringen för produktion av humana monoklonala antikroppar. in vltro immunlseringens längd var 6 dagar och i ug KLH/ml användes som immunogen. Kulturen innehöll också lymfokinerna TRF, BCDF, IL-l/2. Dag 6 testades hur många antigen-specifika plaque-bildande celler som bildats.
Detta antal ger ett mått på hur väl in vitro lmmuniseringen fungerat. lcke-Leu-Orie behandlade celler användes som kontroll. Utfallet framgår av tabellen nedan: celler Antal plaque-bildande eeller/ 105 ß celler KLH Gelatin* Leu-Orie behandlade celler** l 156 19 Obehandlade celler 7 li * gelatin anvädes som kontrollantigen i plaque testet. ** i detta exempel användes humana perlfera blodlymfocyter. 459 008 ' Exempel 2: Humaha perifera lymfocyterfPßLl som in vitro immuniserats enligt utföringsexempel 1 (ovan) med 1 ug KLH/ml i 6 dagar, immortaliseras genom fusion med Sp2/0-Ag14 myelomceller eller wiL2-UC729HF2 lymfoblastoida celler m.h.a. polyetylenglykol. Efter 14-21 dagar testades de växande hybridernas produktion av antigen-specifika antikroppar och i nedanstående tabell framgår utfallet: ""1? (Sellers antal hybriderlt/antal testade specifik effektivitet (S) Ubehandlade PBL 0/96 0 Leu-Orie behandlade PBL . 17/96 18 *Humana lymfocyter som fuserats med SP2/0-Agl4. Utfallet med WiL2-UC729HF2 var samma, med absolutsiffror som var ca. 30% lägre.
*Antal hybrider som vid testet visade sig producera antigen-specifika antikroppar.
Claims (4)
1. Sätt vid in vitro ímmunisering för framställ- ning av humana monoklonala antikroppar, k ä n n e - t e c k n a t av att lysosomotropiska agens bringas att verka in vitro pà humana lymfocytinnehàllande cellpopulationer, för borttagandet av cellsubpopulationer med negativ inverkan på in vitro immuniseringen, var- efter lymfocyterna in vitro immuniseras antigen- fikt och immortaliseras. *zw- speci-
2. Sätt enligt krav l, k ä n n e t e c k n a t av att som lysosomotropiskt agens används lysosomo- tropiska aminosyraderivat.
3. Sätt enligt krav l eller 2, k ä n n e t e c k - n a t av att de immuna, antigen-specifika cellerna immortalíseras genom fusion med murina eller humana myelom, lymfoblastoida cellinjer eller lymfomceller.
4. Sätt enligt krav l eller 2, k ä n n e t e c k - n a t av att de immuna, antigen-specifika cellerna immortaliseras genom transfektion med virala eller bakteriella genom.
Priority Applications (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE8603711A SE459008B (sv) | 1986-09-04 | 1986-09-04 | Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar |
DE19873786673 DE3786673T2 (de) | 1986-09-04 | 1987-09-01 | Verfahren zur entfernung unerwünschter zellen aus menschlichen lymphozytenpopulationen, anwendung des verfahrens zur herstellung monoklonaler antikörper und dafür geeigneter kit. |
PCT/SE1987/000389 WO1988001642A1 (en) | 1986-09-04 | 1987-09-01 | Method for the removal of undesired cells from human lymphocyte populations, application of the method in monoclonal antibody production and kit therefor |
JP50538487A JP2648318B2 (ja) | 1986-09-04 | 1987-09-01 | ヒトモノクローナル抗体製造法、およびそのキット |
AT87906018T ATE91709T1 (de) | 1986-09-04 | 1987-09-01 | Verfahren zur entfernung unerwuenschter zellen aus menschlichen lymphozytenpopulationen, anwendung des verfahrens zur herstellung monoklonaler antikoerper und dafuer geeigneter kit. |
AU79138/87A AU7913887A (en) | 1986-09-04 | 1987-09-01 | Method for the removal of undesired cells from human lymphocyte populations, application of the method in monoclonal antibody production and kit therefor |
EP87906018A EP0342188B1 (en) | 1986-09-04 | 1987-09-01 | Method for the removal of undesired cells from human lymphocyte populations, application of the method in monoclonal antibody production and kit therefor |
CA000546024A CA1340099C (en) | 1986-09-04 | 1987-09-03 | Method for in vitro immunisation of lymphocytes for use in production ofhuman monoclonal antibodies and kit therefor |
US08/323,593 US5567610A (en) | 1986-09-04 | 1994-10-17 | Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE8603711A SE459008B (sv) | 1986-09-04 | 1986-09-04 | Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SE8603711D0 SE8603711D0 (sv) | 1986-09-04 |
SE8603711L SE8603711L (sv) | 1988-03-05 |
SE459008B true SE459008B (sv) | 1989-05-29 |
Family
ID=20365487
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SE8603711A SE459008B (sv) | 1986-09-04 | 1986-09-04 | Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0342188B1 (sv) |
JP (1) | JP2648318B2 (sv) |
AU (1) | AU7913887A (sv) |
CA (1) | CA1340099C (sv) |
DE (1) | DE3786673T2 (sv) |
SE (1) | SE459008B (sv) |
WO (1) | WO1988001642A1 (sv) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE461985B (sv) * | 1988-09-13 | 1990-04-23 | Bioinvent Int Ab | In vitro immunisering av lymfocytinnehaallande cellpopulationer och materialsats daerfoer |
AU645488B2 (en) * | 1989-02-21 | 1994-01-20 | Terumo Corporation | A process for the generation of proliferating CD4 lymphocytes |
CA1340565C (en) * | 1989-06-29 | 1999-05-25 | Thomas B. Okarma | Device and process for cell capture and recovery |
US6143508A (en) * | 1989-06-29 | 2000-11-07 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Device and process for cell capture and recovery |
AU6044090A (en) * | 1989-07-21 | 1991-02-22 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Preparation of human adherent lymphokine-activated killer (a-lak) cells |
AU657482B2 (en) * | 1990-05-22 | 1995-03-16 | Regents Of The University Of California, The | Novel methods for producing antigen-specific, high-affinity human monoclonal antibodies |
EA023179B1 (ru) | 2009-08-13 | 2016-05-31 | Круселл Холланд Б.В. | Антитела против респираторного синцитиального вируса (pcb) и способы их применения |
NZ603488A (en) | 2010-07-09 | 2015-02-27 | Crucell Holland Bv | Anti-human respiratory syncytial virus (rsv) antibodies and methods of use |
FR2998579B1 (fr) | 2012-11-27 | 2015-06-19 | Commissariat Energie Atomique | Methode pour obtenir des anticorps humains specifiques d'un antigene par immunisation in vitro |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4849329A (en) * | 1986-05-30 | 1989-07-18 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for preparing lymphokine activated killer cells |
-
1986
- 1986-09-04 SE SE8603711A patent/SE459008B/sv not_active IP Right Cessation
-
1987
- 1987-09-01 JP JP50538487A patent/JP2648318B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1987-09-01 AU AU79138/87A patent/AU7913887A/en not_active Abandoned
- 1987-09-01 EP EP87906018A patent/EP0342188B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-09-01 DE DE19873786673 patent/DE3786673T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-09-01 WO PCT/SE1987/000389 patent/WO1988001642A1/en active IP Right Grant
- 1987-09-03 CA CA000546024A patent/CA1340099C/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1988001642A1 (en) | 1988-03-10 |
DE3786673D1 (de) | 1993-08-26 |
JPH01503754A (ja) | 1989-12-21 |
EP0342188B1 (en) | 1993-07-21 |
DE3786673T2 (de) | 1993-12-16 |
SE8603711L (sv) | 1988-03-05 |
JP2648318B2 (ja) | 1997-08-27 |
AU7913887A (en) | 1988-03-24 |
CA1340099C (en) | 1998-10-27 |
SE8603711D0 (sv) | 1986-09-04 |
EP0342188A1 (en) | 1989-09-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5567610A (en) | Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor | |
Melchers et al. | Lymphocyte Hybridomas: Second Workshop on “Functional Properties of Tumors of T and B Lymphoyctes” | |
Kozbor et al. | The production of monoclonal antibodies from human lymphocytes | |
Melchers | Murine embryonic B lymphocyte development in the placenta | |
Greenberg et al. | Characterization of the antibody-dependent cytotoxic cell. A non-phagocytic monocyte? | |
Kolb et al. | Suppression of the humoral immune response by plasmacytomas: mediation by adherent mononuclear cells | |
US4381292A (en) | Anti-human T-lymphocyte monoclonal antibody | |
FI75365B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av monoklonal antikropp till maensklig protymocytantigen medelst deras hybridcellinje. | |
Knapp et al. | VIL-A1, a monoclonal antibody reactive with common acute lymphatic leukemia cells | |
US4364937A (en) | Monoclonal antibody to a human T cell antigen and methods of preparing same | |
FI75362B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp mot maenniskans t-celler, medelst en ny hybridcellinje. | |
Hulliger et al. | Synthesis of antibodies by blood leucocytes of the rabbit | |
SE459008B (sv) | Saett att framsstaella humana monoklonala antikroppar | |
Metcalf et al. | The nature of the cells generating B‐lymphocyte colonies in vitro | |
RU2431667C9 (ru) | Слитые клетки-партнеры | |
Bainbridge et al. | Circulation of lymphoid cells in mice infected with Friend leukemia virus | |
US4647535A (en) | Human nonsecretory plasmacytoid cell line | |
Tai et al. | Differential natural killer cell reactivity against T cell lymphomas by cells from normal or stimulated mice. | |
Rodriguez et al. | Helper activity by human large granular lymphocytes in in vitro immunoglobulin synthesis | |
SE461985B (sv) | In vitro immunisering av lymfocytinnehaallande cellpopulationer och materialsats daerfoer | |
Yakulis et al. | Surface Immunoglobulins of Circulating Lymphocytes in Mouse Plasmacytoma III. The Effect of Plasmacytoma RNA on the Immune Response | |
US4614720A (en) | Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human T cell antigen, antibody, and methods | |
Kosinski et al. | A human monoclonal antibody against HLA‐A25 | |
Kunori et al. | Polyclonal antibody secretion induced in human mixed lymphocyte cultures | |
US4798806A (en) | Compositions and methods using a monoclonal antibody to a human T cell antigen |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
NAL | Patent in force |
Ref document number: 8603711-6 Format of ref document f/p: F |
|
NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8603711-6 Format of ref document f/p: F |