SE447029B - Forfarande och reagens for detektering av endotoxin vilket reagens innehaller ett lysatkenslighetsforhojande ytaktivt medel - Google Patents
Forfarande och reagens for detektering av endotoxin vilket reagens innehaller ett lysatkenslighetsforhojande ytaktivt medelInfo
- Publication number
- SE447029B SE447029B SE8104016A SE8104016A SE447029B SE 447029 B SE447029 B SE 447029B SE 8104016 A SE8104016 A SE 8104016A SE 8104016 A SE8104016 A SE 8104016A SE 447029 B SE447029 B SE 447029B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- lysate
- carbon atoms
- endotoxin
- surfactants
- sensitivity
- Prior art date
Links
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 title claims description 52
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 15
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 64
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 37
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 31
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 21
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 15
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 15
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 12
- 239000012480 LAL reagent Substances 0.000 claims description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 claims description 8
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 8
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 claims description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 7
- 239000011734 sodium Chemical group 0.000 claims description 7
- 241000239218 Limulus Species 0.000 claims description 6
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 claims description 6
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical group C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical group [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Chemical group 0.000 claims description 3
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 claims description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 2
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 claims 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical group [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 3
- 125000003258 trimethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 claims 3
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 claims 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 claims 1
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 19
- -1 hydroxypropyl Chemical group 0.000 description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 8
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 8
- 239000003760 tallow Substances 0.000 description 8
- PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N (dimethylsulfonio)acetate Chemical compound C[S+](C)CC([O-])=O PSBDWGZCVUAZQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 229940117986 sulfobetaine Drugs 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 6
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 5
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 4
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 4
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N tetradecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCO HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BHATUINFZWUDIX-UHFFFAOYSA-N Zwittergent 3-14 Chemical group CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O BHATUINFZWUDIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 150000008055 alkyl aryl sulfonates Chemical class 0.000 description 3
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000011082 depyrogenation Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTMWOUBCEZXSHN-BTJKTKAUSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;(z)-but-2-enedioic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)\C=C/C(O)=O HTMWOUBCEZXSHN-BTJKTKAUSA-N 0.000 description 2
- XYYUAOIALFMRGY-UHFFFAOYSA-N 3-[2-carboxyethyl(dodecyl)amino]propanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCN(CCC(O)=O)CCC(O)=O XYYUAOIALFMRGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 210000000087 hemolymph Anatomy 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 2
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910001427 strontium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- POSZUTFLHGNLHX-KSBRXOFISA-N tris maleate Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)\C=C/C(O)=O POSZUTFLHGNLHX-KSBRXOFISA-N 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- GODZNYBQGNSJJN-UHFFFAOYSA-N 1-aminoethane-1,2-diol Chemical compound NC(O)CO GODZNYBQGNSJJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOHZKUSWWGUUNR-UHFFFAOYSA-N 2-(4,5-dihydroimidazol-1-yl)ethanol Chemical compound OCCN1CCN=C1 GOHZKUSWWGUUNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYEJMVLDXAUOPN-UHFFFAOYSA-N 2-dodecylphenol Chemical compound CCCCCCCCCCCCC1=CC=CC=C1O CYEJMVLDXAUOPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TXPKUUXHNFRBPS-UHFFFAOYSA-N 3-(2-carboxyethylamino)propanoic acid Chemical class OC(=O)CCNCCC(O)=O TXPKUUXHNFRBPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYJNVSAUBGJVLV-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylazaniumyl)propane-1-sulfonate Chemical compound CN(C)CCCS(O)(=O)=O GYJNVSAUBGJVLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RRRHSSRMQAVLCO-UHFFFAOYSA-N 4,5-dihydro-1h-imidazole-4,5-dicarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1NC=NC1C(O)=O RRRHSSRMQAVLCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100494468 Arabidopsis thaliana CAD1 gene Proteins 0.000 description 1
- KMKBEESNZAPKMP-UHFFFAOYSA-N Biphenylindanone a Chemical compound CC=1C(C)=C2C(=O)C(C3CCCC3)CC2=CC=1OCC(C=1)=CC=CC=1C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 KMKBEESNZAPKMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical class NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529572 Chaceon affinis Species 0.000 description 1
- RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N Diethylenetriamine Chemical compound NCCNCCN RPNUMPOLZDHAAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000239220 Limulus polyphemus Species 0.000 description 1
- HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N Lithium ion Chemical compound [Li+] HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101100496858 Mus musculus Colec12 gene Proteins 0.000 description 1
- GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N N-ethyl-succinimide Natural products CCN1C(=O)CCC1=O GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IGFHQQFPSIBGKE-UHFFFAOYSA-N Nonylphenol Natural products CCCCCCCCCC1=CC=C(O)C=C1 IGFHQQFPSIBGKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241001302191 Polyphemus Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IYFATESGLOUGBX-YVNJGZBMSA-N Sorbitan monopalmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O IYFATESGLOUGBX-YVNJGZBMSA-N 0.000 description 1
- VBIIFPGSPJYLRR-UHFFFAOYSA-M Stearyltrimethylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C VBIIFPGSPJYLRR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- IFZPTPZMISZREH-UHFFFAOYSA-N [2,4-bis(hydroxymethyl)-1h-imidazol-5-yl]methanol Chemical compound OCC1=NC(CO)=C(CO)N1 IFZPTPZMISZREH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001413 alkali metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPDKMELSVLIAOG-UHFFFAOYSA-N azanium;decyl sulfate Chemical compound N.CCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O VPDKMELSVLIAOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005521 carbonamide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- BUZRUIZTMOKRPB-UHFFFAOYSA-N carboxycarbamic acid Chemical class OC(=O)NC(O)=O BUZRUIZTMOKRPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 108010045487 coagulogen Proteins 0.000 description 1
- MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N cocamidopropyl betaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- ZRKZFNZPJKEWPC-UHFFFAOYSA-N decylamine-N,N-dimethyl-N-oxide Chemical compound CCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] ZRKZFNZPJKEWPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- KSDGSKVLUHKDAL-UHFFFAOYSA-L disodium;3-[2-carboxylatoethyl(dodecyl)amino]propanoate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCCCCCCCCN(CCC([O-])=O)CCC([O-])=O KSDGSKVLUHKDAL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N dodecyl benzenesulfonate;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCOS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SYELZBGXAIXKHU-UHFFFAOYSA-N dodecyldimethylamine N-oxide Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] SYELZBGXAIXKHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- RXHDXDIEHWVFOC-UHFFFAOYSA-M ethyl-dimethyl-octadecylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC RXHDXDIEHWVFOC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- ATJCASULPHYKHT-UHFFFAOYSA-N hexadecane-1,16-diamine Chemical compound NCCCCCCCCCCCCCCCCN ATJCASULPHYKHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000002462 imidazolines Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000012454 limulus amebocyte lysate test Methods 0.000 description 1
- 229910001416 lithium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- JZMJDSHXVKJFKW-UHFFFAOYSA-M methyl sulfate(1-) Chemical compound COS([O-])(=O)=O JZMJDSHXVKJFKW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940043348 myristyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229940078490 n,n-dimethylglycine Drugs 0.000 description 1
- IBOBFGGLRNWLIL-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylhexadecan-1-amine oxide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] IBOBFGGLRNWLIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RSVIRMFSJVHWJV-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyloctan-1-amine oxide Chemical compound CCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] RSVIRMFSJVHWJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHXSGTCOHZCUKB-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyltridecan-1-amine oxide Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] VHXSGTCOHZCUKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N nonylphenol Chemical compound CCCCCCCCCC1=CC=CC=C1O SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000006259 organic additive Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- 229960005141 piperazine Drugs 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- DQFWABVCOIFBPO-UHFFFAOYSA-M potassium;tetradecyl sulfate Chemical compound [K+].CCCCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DQFWABVCOIFBPO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 229940080264 sodium dodecylbenzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- GGHPAKFFUZUEKL-UHFFFAOYSA-M sodium;hexadecyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O GGHPAKFFUZUEKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FTWCSAMTIKSPAT-UHFFFAOYSA-M sodium;nonyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O FTWCSAMTIKSPAT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NWZBFJYXRGSRGD-UHFFFAOYSA-M sodium;octadecyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O NWZBFJYXRGSRGD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 235000011071 sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001570 sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 229940031953 sorbitan monopalmitate Drugs 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/579—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving limulus lysate
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
1U __.
Ur 20 'Jr .n 'J1 LH) 447 029 2 Hittills har ovan angivna lösningsmedelsextraktionsförfaran- de utgjort den snabbaste metoden för förbättrande av LAL-känslig- heten. Olyckligtvis uppvisar denna metod åtskilliga olägenheter.
Pâ grund av det absoluta kravet att endotoxinfria betingelser bi- bohällefi under lysatframställningen utnyttjas ett mödosamt ex- trnktionsförlopp och efterföljande centrifugcríng som ökar sanno- likheten för att en otillräcklig produkt erhålles. Som påpekats i nämnda patentskrift reducerar lösningsmedelsbehandlingen lysat- stabiliteten så att framställningen måste fullbordas snabbt i kyla. Dessutom innehåller fällningen avlägsnad från lysatet ge- nom lösníngsmedelsbehandlingen en avsevärd mängd koagulogen, dvs det erforderliga hopklumpningsproteinet. Bibehållande av adekvat proteinhalt är ett krav för att kraftig gelning skall uppstå under endotoxintestet. Under sistnämnda omständigheter är uppenbarli- gen reglering av reagenskänsligheten svåratt genomföra. Kloroform som utgör det lösningsmedel som används med bästa resultat är välkänt för dess icke önskvärda verkningar i människan. Fram- ställningspersonalens "hälsa och säkerhet måste därför beaktas.
Det är uppenbart att ett förfarande som undanröjer dessa olägen- heter och ändock förbättrar känsligheten i önskvärd utsträckning skulle innebära ett tekniskt framsteg.
Föreliggande uppfinning avser följaktligen ett förfarande för enkel och snabb förhöjning av känsligheten av LAL.
Enligt uppfinningen tillhandahålles ett förfarande för be- handling under lysatbehandlingsbetingelser av LAL uppvisande minskad känslighet mot endotoxin på grund av närvaron av en endo- gen inhibitor med en förhöjande mängd av ett lysatkänslighets- förhöjande medel för neutraliseríng eller partiell neutralise- ring av.lysatinhibitorn varigenom LAL-känsligheten mot endotoninz ökas. _ 7 Det finns vissa minimikriterier som kan beskriva LAL-käns- lighetsförhöjande karnkteristika, dvs LALfkänslighetsförhöjande medel som är användbara i förfarandet enligt uppfinningen bör uppvisa (u) förmåga att öka lysatkänsligheten till en lämplig känslighet, exempelvis genom en tvåfaldig eller större ökning, (b) förmågan att motstå depyrogenering, dvs avlägsnande eller destruktion av endotoxin, genom ultrafiltrering eller syrabe- handling vid ett pH-värde lägre än 5 eller basbehandling vid ett pH-värde högre än 8, (c) förmågan att steriliseras, exempelvis genom behandling i autoklav, t.ex. vid eller över 12100 vid x 7 'JS LH “U -_,-v 3 447 029 0,1 MPa under 15 minuter, (d) förmåga att bilda vattenhaltiga lös- ningar av cirka 2 % (vikt/volym) vid ZSOC, (e) förmåga att verka i pH-området från cirka 6,0 till cirka 9, (f) förmåga att vara kombinerbar med buffertsubstanser och andra beståndsdelar som an- vändes í LAL-reagenset och (g) förmåga att vara kombinerbart med avseende på LAL och dess reaktion med endotoxiner.
Sådana förhöjande medel innefattar amfotera ytaktiva medel som uppvisar såväl en anjonísk som en katjonisk grupp i sin struk- tur. Belysande fÖTSådmH1äTsulfobetainer representerade av följan- de formel (betecknas hädanefter formel AJ: o Rz -If- _ _ ß _ _ ® (RS c inom 114 k a] S03 3 v vari RI betecknar alkylen med från 1 till cirka 4 kolatomer, Y betecknar en icke-skadlig, kemiskt lämplig substituent innefat- tande (1) väte, (2) substituerad eller icke-substituerad lågalkyl, exempelvis innehållande 1-4 kolatomer, såsom metyl, etyl, propyl eller hydroxi, etc; R2 och R3 utgöres var och en av substituerad eller icke-substi- tuerad lågalkyl innehållande 1-4 kolatomer, exempelvis metyl, etyl, propyl, hydroxietyl, hydroximetyl, hydroxipropyl, etc; n har värdet 0 eller 1, och när n har värdet 0 är R4 substítuerad eller icke-substítue- rad alkyl, exempelvis innehållande från cirka 8 till cirka 18 kolatomer, och när n har värdet 1 är R4 alkylen med från cirka 1 till cirka 6 kolatomer, och RS betecknar suhstituerad eller icke-substítuerad alkyl, exempelvis innehållande cirka 8 till cirka 18 kolatomer.
Uttrycket "alky1en“ är avsett att innefatta såväl polymetylen som andra tvüvärdn mättade alifatiska grupper och följaktligen kan förgrening finnas i bindningen som åstadkommes genom alkylen- gruppen. Med uttrycket "låg" avses en grupp innehållande 1-4 kol- atomer.
Sulfobetninerna som användes i kompositionerna enligt upp- finningen är tidigare kända och har beskrivits såsom zwitterjonis- ka ytaktiva medel. Framställningen av sådana föreningar heskrives exempelvis av G.W. Fernley i Journal of American Oil Chemists Society, januari 1978 (vol. 55), sid 98-103 och i den amerikanska Focal o* :mer in 40 447 029 4 patentskriften 3 280 179 vartill härmed hänvisas.
I föredragna sulfobetain-ytaktiva medel betecknar R2 och R3 i ovanstående struktur metyl. Det är att föredraga att R1 beteck- nar propylen.
En typ av sulfobetain-ytaktivt medel som kan användas upp- visar ovanstående struktur vari n har värdet 0 och R4 beteck- nar alkyl med från cirka 8 till 18 kolatomer, företrädesvis rak alkyl. För sådana sulfobetain-ytaktiva medel är en lämplig källa för R4-komponenten talgfettalkohol som består av en blandning av olika kedjelängder med en typisk komposition av cirka 66 procent C18, 30 procent C16 och 4 procent C14 och övriga. En annan lämp- lig källa är mellanfraktionen av destillerad kokosnötfettalkohol som också består av en blandning av olika kedjelängder med en ty- pisk komposition som är cirka 66 procent C12, 23 procent C14, 9 procent Cló och 2 procent C10_ Specifika sulfobetain-ytaktíva medel med ovanstående struk- tur vari n ,= 0 anges i den amerikanska patentskriften 3 539 521 vartill härmed hänvisas. Ett ytaktivt medel av denna typ som spe- ciellt föredrages är N-tetradecyl-N,N-dimetyl-3-ammonio-1-propan- sulfonat som är kommersiellt tillgängligt från Calbiochem-Behring Corporation under varubeteckníngen ZWITTERGENT 3-14.
En annan typ av sulfobetain-ytaktivt medel som kan användas har ovan angivna struktur varvid n = 1 och R4 betecknar alkylen med cirka 1 till cirka 6 kolatomer. I sådana sulfobetainer vari n = 1 betecknar RS alkyl med från cirka 8 till cirka 18 kolatomer.
Det föredrages att R5 är rak. Såsom diskuterats tidigare utgör lämpliga källor för alkylgrupper med från cirka 10 till cirka» 18 kolatomer talgiettalkohol och kokosnötfettalkohol.
Specifika sulfobetain-ytaktiva medel med ovan angivna struk- tur vari n = 1 anges i den tidigare nämnda amerikanska patent- skriften 3 280 179. 1 Speciellt föredragna sulfobetain-ytaktiva medel för använd- ning i kompositioner enligt uppfinningen är 3-(N,N-dimetyl-N- acylamidopropylammonio)-2-hydroxipropan-1-sulfonat vari acylgrup- pen härstammar frän talgfettalkohol eller kokosnötfettalkohol, varvid kokosnötfettalkohol föredrages.Det är uppenbart för fack- mannen att vid normal framställning av sådana derivat av talg- eller kokosnötfettalkoholer kommer en blandning av sulfobetainer med varierande kolkedjelängder i acylgrupperna att uppstå. Såsom diskuterats tidigare innehåller dessa fettalkoholer till större Poor: Qariiirïš, -7- . 1_ I' 5 447 029 delen kolkedjelängder som ger acylgrupper med önskvärt antal kol- atomer, dvs från cirka 8 till cirka 18 kolatomer. Följaktligen är dessa blandningar som erhålles från talg- eller kokosnötfett- alkoholer användbara för tillhandahållande av su]fobetain-ytak- tiva medel i kompositionerna enligt uppfinningen. Ett material av denna typ som speciellt föredrages för användning i kompositio- nen enligt uppfinningen är N-kokosamido-propyl-N,N-dimety1-N-2- -hydroxipropylsulfobetain och ett exempel på detta är LONZAINE CS som är kommersiellt tillgängligt från Lonza Inc, Fair Lawn, New Jersey och ett annat exempel är VARION CAS som är kommersiellt tillgängligt från Sherex Chemical Company, Inc.
Andra amfotera ytaktiva medel innefattar N-(lågkedjig alkyl)- amínokarboxylsyror som kan åskådliggöras med formeln (betecknas i det följande formel B): R -N-R -CooM 1 U Y Y' 5 N-(lângkedjíg alkyl)iminodíkarboxylsyror som kan belysas med for~ meln (betecknas i det följande formel C): RsN($1 Y - cooM)2 och N~(lâgkedjig alkyß~ eller -amidobetainer som kan belysas med formeln (betecknas hädanefter formel D): o fz (RS-c-HN)n - R4 - næ -R1 -cod3 R3 i vari R1, H2, R3, R4, Y och n har samma betydelse som angivits för formel A, M betecknar väte eller en saltbildande metall och Y' har samma betydelse som Y i formel A. Y och Y' kan vara lika eller olika. Exempel på specifika amfotera detergenter är N-alkyl-beta-aminopropionsyra, N-a1ky1-beta-íminodipropionsyra och N-a1kyl-N,N-dimetylglycín; varvid alkylgruppen exempelvis kan härstamma frmikokosfettalkohol, laurylalkohol, myristylalko- hol (eller lauryl-myristylblandningl, hydrernd tnlgalkohol, cetyl, stearyl eller blandningar av sådana alkoholer. De substituerade aminoproplon- och iminodipropionsyrorna tillhandahålles ofta så- som natriumsalt eller i annan saltform, som likaledes kan använ- das vid tíllämpande av uppfinningen. Specifika exempel innefattar kokosbetaín som säljes av Witco Chemical Corporation under beteck- PÛOR QUALiTY 'i K) k: bl b! -_,_ 447 029 ° ningen EMCOL CC 37-18; kokosamidopropylbetain som säljes av Lonza Tnc och Sherex Chemical Company under beteckningarna LONZAINE CO och VARION CADG; natrium-N-kokos-beta-aminopropionat som säljes av Henkel Corporation under beteckningen DERIPHAT 151; dinatrium- N-1auryl-beta-imínodipropionat som säljes av Henkel Corporation under beteckningen DERIPHAT 160 och dinatríum-N-talg-beta-imino- dipropionat som säljes av Henkel Corporation under beteckningen DERIPHAT 154.
I Exempel på andra amfotera detergenter är fettimidazolínerna, såsom sådana framställda genom reaktionaï en långkedjíg fettsyra (exempelvis med 10-20 kolatomer) med dietylentriamin och mono- halogenkarboxylsyror uppvisande 2-6 kolatomer, exempelvis 1-kokos-5-hydroxiety1-5-karboximetylimidazolin.
Specifika exempel innefattar kokosimidazolin som är kommer- siellt tillgänglig under varubeteckningen AMPHOTERGE K-2 från Lonza, Inc, kaprin-dikarboxíimidazolin som är kommersiellt till- gänglig under beteckningen AMPHOTERGE KJ2 från Lonza, Inc och kokosdíkarboxiimidazolin blandad med sulfaterade ytaktiva medel som är kommersiellt tillgänglig under beteckningen. AMPHOTERGE 2 NAS MOD från Lonza, Inc.
Andra exempel på förhöjande medel innefattar anjoniska syn- tetiska ytaktiva medel som i allmänhet beskrives såsom sådana fö- reningar som innehåller hydrofila och lipofila grupper i sin mo- Iekylstruktur och joníseras i ett vattenhaltigt medium vilket ger anjoner innehållande såväl den lipofila gruppen som den hydrofila gruppen. Alkylarylsulfonaterna, alkansulfaten och sulfaterade oxietylerade alkylfenoler är belysande för anjontypen av ytaktíva föreningar. Alkylarylsulfonaterna utgör en grupp av syntetiska anjoníska ytaktiva medel representerad av den allmänna formeln (betecknas hädanefter formel E): (R6)nl- (Y)Ar-(SO3M)n2.
RÖ betecknar en rak eller grenad kolvätegrupp uppvisande från cirka 1 till cirka 24 kolatomer, varvid åtminstone en R6 uppvisar åtminstone 8 kolatomer; n1 har ett värde av från 1 till 3; nz har ett värde av från 1 till 2; Ar betecknar fenyl eller naftyl och Y och M har samma betydelse som'í formel B. R6 kan exempelvis ut- Kgöras av metyl, etyl, hexyl, oktyl, tetradecyl, isooktyl, nonyl, dccyl, dodecyl, oktadecyl och liknande. _ ¿ Föreningar som kan nämnas som exempel på alkylarylsulfonaten _3~i _*_"““"“ n., IR ÅIIUI-q: qnçfitfl w- v v_5¥§~_» -~ws»W; _ß”-sëi-äiaÃaï-åíåigfïïr 'fl 10 20 7 447 029 innefimtar natriumdodecylbensensulfonat, natriumdecylbensensulfo- nat, ammoniummetyldodccylbensensulfonat, ammoniumdodecylbensen- sulfonat, natriumoktadecylbensensulfonat, natriumnonylbensensulfo- nat, natriumdodecylnaftalensulfonat, natriumhexadecylbensensulfo- nat, kaliumeíkososylnaftalensulfonat, etylaminundecylnaftalensul- (enat och natriumdokosylnaftalensulfonat.
Alkylsulfnten utgör en grupp av syntetiska anjoniska ytaktí- va medel som representeras av den allmänna formeln (betecknas hä- danefter formel F): R5OSO3M vari R5 och M har samma betydelse som angivits för formel B.
Föreningar som kan nämnas såsom ekempel på alkylsulfatgrup- pen av anjoniska ytaktiva medel innefattar natriumoktadecylsulfat, natriumhexadecylsulfat, natríumdodecylsulfat, natriumnonylsulfat, ammoníumdecylsulfat, kaliumtetradecylsulfat, dietanolaminooktyl- sulfnt, trietanolaminoktadecylsulfat och ammoniumnonylsulfat.
De sulfaterade oxietylerade alkylfenolerna utgör en grupp av syntetiska anjoniska ytaktiva medel uppvisande den allmänna for- meln (betecknas hädanefter formel G): R T--A-[cnzcnzo/Z - cnzcaz - osozii vari A är antingen syre, svavel, karbonamid, tíokarbonamid, karb- oxi eller tiokarboxiester, z betecknar ett heltal med ett värde av 3-8 och RS och M har samma betydelse som angivits för formel B.
Föreningar som kan belysa anjoníska ytaktiva medel av typen sulfaterad oxietylerad alkylfenol innefattar ammoniumnonylfenoxyl- tetraetylenoxisulfat, natriumdodecylfenoxitrietylenoxisulfat, etanolamindecylfenoxitetraetylenoxísulfat och kaliumoktylfenoxi- trietylenoxisulfat.
Andra exempel på LAL-förhöjande medel innefattar icke jonis- ka ytaktiva föreningar och kan allmänt beskrivas såsom föreningar som ej joniseras men erhåller hydrofila karakteristika från en oxi- generad sídokedja, såsom polyoxietylen och den lipofila delen av molekylen kan härstamma från fettsyror, fenol, alkoholer, amíder eller aminer. Föreningarna framställes vanligen genom reaktion av en nlkylenoxid, såsom otylenoxid, butylenoxid, propylenoxid och liknande, med fettsyror, raka eller grenade alkoholer innehållan- de en eller flera hydroxigrupper, fenoler, tiofenoler, amíder och amíner för bildning av polyoxialkylenglykoetrar och -estrar, Pwizaliàliiiy 20 iJ-l 447 029 8 polyoxíalkylenalkylfenoler, polyoxialkylentiofenoler, polyoxi- alkylonamider och liknande. I allmänhet föredrages det att från cirka 3 till cirka 30, och företrädesvis 10 till 30, mol alkylen- oxid reageras per mol fettsyror, alkoholer, fenoler, tiofenoler, amider eller aminer. šelysande för dessa icke-joníska ytaktíva model är produkter- na erhållna från reaktionen av alkylenoxid med en alifatisk alko- hol uppvisande 8-18 kolatomer, såsom oktyl, nonyl, decyl, okta- decyl, dodecyl, tetradecyl och liknande; med monoestrar av sex- värda alkoholer, vari estergruppen innehåller 10-20 kolatomer, såsom sorbítanmonolaurat, sorbitanmonooleat och sorbitanmonopalmi- tat; med en alkylfenol vari alkylgruppen innehåller mellan 4 och 20 kolatomer, såsom butyl, dibutyl, amyl, oktyl, dodecyl, tetra- decyl och liknande; och med en alkylamin vari alkylgruppen inne- håller mellan 1 och 8 kolatomer.
Föreningar som kan belysa syntetiska icke-joniska ytaktiva model innefattar produkterna som erhållits från kondensation av etylenoxid eller propylenoxid med följande: propylenglykol, etyl- endiamin, dietylenglykol, dodecylfenol, nonylfenol, tetradecylal- kohol, N-oktadecyldíetanolamid, N-dodecylmonoetanolamid, polyoxí- etylen(20)sorbitanmonooleat som säljes under beteckningen TWEEN80 och polyoxietylen(20)sorbitanmonolaurat som säljes under beteck- ningen TWEEN 20.
Andra icke-joniska ytaktiva medel innefattar långkedjiga tertiära aminoxider motsvarande följande allmänna formel (beteck- nas hädanefter formel H): Rsnhzsn-è o, vari RS har samma betydelse som angivits för formel A och R7 och RS betecknar var och en metyl eller etyl. Pilen i formeln är en konventionell representation av en semi-polär bindning. Exempel pa amínoxider som lämpar sig att användas enligt uppfinningen innefattar dímetyldodecylaminoxid, dimetyloktylaminoxid, dimetyl- decylaminoxid, dimetyltridecylaminoxid'och dimetylhexadecylamín- oxíd. __ _Katjoniska ytaktiva medel kan också användas såsom LAL-för- höjnnde medel. Sådana medel är sådana ytaktiva föreningar som in- nehåller en organisk hydrofobgrumaod1cnkatjonisk lösliggörande grupp. Typiska katjoniska lösliggörande grupper är amin och kva- rcrnära grupper. Sådana katjoniska ytaktiva medel representeras 'Jl H) .Éü 9 447 029 av följande allmänna formel (betecknas hädanefter formel I) vari R5, Y och Y' har samma betydelse som angivits för formel C.
Ett exempel är QUATERNARY 0 tillgängligt från Cíba-Geigy Corp.
Andra exempel på lämpliga syntetiska katjoniska ytaktiva me- del innefattar diaminerna, såsom sådana med formeln (betecknas hädanefter formel J): 2H4NH2 vari R9 betecknar alkyl med cirka 12-22 kolatomer, såsom N-2-aminoetylsterarylamin och N-2-aminoetylmyristylamin; amíd- bundna aminer, såsom sådana med följande formel (betecknas hädan- RQNHC *efter formel K): R5CONHC2H4NH3 såsom N-2~aminoetylsteary1amid och N-amínoetylmyristylamid; kvaternära ammoniumföreningar, vari en typisk grupp bunden till kväveatomen är alkyl som innehåller 1-3 kolatomer, inklusive alkylgrupper med 1-3 kolatomer uppvisande inerta substituenter, såsom fenyl, och varvid en anjon finns närvarande, såsom halogen, acetat, metylsulfat, etc. Typiska kvaternära ammoníumföreningar är etyl-dimetyl-stearylammoniumkloríd, bensyl-dimety1-stearylam- moniumklorid, bensyldimetyl-stearylammoniumklorid, trimetylstearyl- ammoniumklorid, trimetylcetylammoníumbromíd, dímetyletyldílauryl- ammoniumklorid, dimetyl-propyl-myrístylammoníumklorid och motsva- rande metosulfat och acetat.
Andra lämpliga katjoniska ytaktiva medel är sådana med for- eln (betecknas hädanefter formel L): Rs _ N/,(CH2CH2O)aH \ccnzcuzo) an vari RS har samma betydelse som för formel A och varje a beteck- nar ett heltal med ett värde av 1-15. Ett exempel är polyetylen- glykolamin av hydrerud talg vari Rs betecknar talg-gruppen och a+a uppvisar ett medelvärde av 5. Denna är tillgänglig från Cíbn-Geigy Corporation under varubeteckningen BINA COBA 3001.
POOR QUAT-ITV 10 447 029 10 Såsom påpekats användes det lysatförhöjflflåe medlet i för- höjande mängder, dvs tillräckliga för neutralisering eller parti- ell neutralisering av den endogena endotoxininhibitorn i lysatet.
I allmänhet är detta en mängd av från cirka 0,001 till 1,0 % (vikt/volym) och företrädesvis från cirka 0,01 till cirka 0,05 % (vikt/volym) baserad på den totala volymen av lysatet. Ofta in- turferurar mängder överstigande en förhöjandc mängd med förmågan av LAL att reagera med endotoxín under testet.
LAL kan framställas med inom denna teknik kända metoder, exempelvis den metod som beskrives i den brittiska patentskríften 1 522 127 vartill härmed hänvisas.
Exempelvis uppsamlas hemolymfa från friska individer av Límulus polyphemus i en salin-antikoaguleringslösning som gene- rellt är sådan som beskrives av Levin och Bang -- "Clottable Protein in Limulus: Its Localization and Kinetics of Its Coagul- ation by Endotoxin", Thromb. Diath. Haemorrh. 19: 186-197 (1968).
, Amebocyterna tillvaratages och tvättas med salin-antikoagulerings- in* h) .n v! 'J“I 40 5,2 lösningen varvid amebocyten separeras från anti-koaguleringsmed- let genom centrifugering.
De separerade amebocyterna uppslammas i vatten och osmotisk sönderSPTflflflüH§ av cellerna kompletteras med mekanisk omröring.
Cellulärt sönderfallsmateríal separeras från lysatet genom centri- fugering och lysatfraktionerna kombineras och lagras vid 0-4°C. I För framställning av LAL-reagenset buffras ovannämnda LAL- fraktioner i allmänhet till ett lämpligt pH-intervall, exempelvis 5,5-8,5, och företrädesvis 6,5-7,5 medelst en lämplig buffert, exempelvis tris(hydroxímetyl)aminometan, tris(hydroximetyl)amino- metanmaleat, 1,4-piperazindíetansulfonsyra, morfolínopropansulfon- syra, N-2-hydroxietylpiperazín-N'-2-etansulfonsyra, trietanolamín, ímidazol.och tris(hydroximetyl)imidazol. Därefter kan LAL-reagen- set fördelas i serumbehållare, exempelvis innehållande 1,2 eller ml av lösning och lyofiliseras. Normalt förseglas behållarna efter lyofiliseríng och kyles (1-SOC).
Enligt uppfinningen behandlas normalt LAL genom tillsats av lysatkünslighetsförhöjande medel till LAL efter det att LAL har sseparerats från cellulärt amebocyt-sönderfallsmaterial. Vanligen tillsättes det före eller samtidigt med framställning av LAL-rea- gcnset, exempelvis simultant med bufferten och andra beståndsdelar.
Känsljghetcn av LAL-reagensct mot endotoxin förhöjs ytterli- gare genom att låga koncentrationer av tvåvärda och envärda kat- Peelèfeufiiïíffïiffiïai 3* vi 'Jfi 10 10 11 447 029 joner inneslutes. Kalcium- och manganjoner är föredragna tvåvärda joner fastän andra jordalkalijoner, såsom magnesium- och strontíum- joner eller andra tvävärda joner kan användas. Magnesium- och strontíumjoner utgör också föredragna tvåvärda joner. Natriumjoner utgör föredragna envärda joner men andra envärda joner, speciellt' alkalimetalljoner, såsom litiumjoner, kan användas. Kloriderna (CaCl2, NaCl, etc) utgör lämpliga källor för sådana tillsatsjoner fastän andra salter också kan användas. Företrädesvis tillsättes dessa elektrolyter i endotoxin-känslighetsförhöjande mängder, exempelvis är för den tvåvärda katjonen (t.ex. Ca+2) koncentratio- nen i området 0,0001-0,4 molar och för den envärda katjonen (exem- pelvis Na+) är koncentrationen i området 0,01-0,4 molar.
LAL-reagenset kan också innehålla konventionella hjälpmedel, såsom stabiliseringsmedel inklusive laktos. Dessa hjälpmedel till- handuhálles,när de användes,i mindre mängder som är tillräckliga för att avsedda egenskaper skall uppnås men som ej ogynnsamt på- verkar önskvärda egenskaper hos LAL-reagensen. 0 Alla dessa operationer genomföras under lysatbehandlingsbe- tingelser som innefattar att det garanteras att slutprodukten är steril och fri från endotoxin. Metoder som garanterar frihet från endotoxíner är kända inom tekniken. Exempelvis kan oorganiska tillsatser (CaCl2, NaC1, etc) göras endotoxinfria genom upphett- ning av de torra salterna vid Z50°C under åtminstone 120 minuter.
Organiska tillsatser måste på grund av deras smältpunkter, etc vanligen lösas, göras sura (pH <5) eller alkaliska (pH >9)ïoch lösningen autoklaveras vid 121°C under 30-60 minuter eller längre tid för förstöring av eventuella närvarande endotoxiner.
Såsom påpekats är en annan utföringsform av uppfinningen in- riktad på ett LAL-reagens som såsom väsentlig beståndsdel inne- håller en vattenhaltig dispersion av LAL, ett LAL-känslighetsför- höjande medel såsom beskrivits tidigare i en lysatförhöjande mängd och en lämplig buffert såsom beskrivits tidigare i en buffert- åstudkommunde mängd. Eventuellt kan envärda och tvåvärda katjoner såsom beskrivits ovan inneslutas i lysatkänslighetsförhöjande mängder för att lysatets känslighet mot endotoxin skall ökas yt- terligare. i Normalt ingår lysatet i reagenset enligt uppfinningen i en endotoxinbestämmande mängd, exempelvis en mängd tillräcklig för bestämning av endotoxiner i ett efterföljande LAL-test med avse- ende på endotoxiner och i allmänhet är detta en mängd som detek- Poon QUALITY »a 1_f\ 10 20 DJ :Jq 40 llymfa 447 029 12 terar cirka 0,007 till cirka 0,5 ng/ml, och företrädesvis från cirka 0,007 till cirka 0,050 ng/ml av FDA referens-endotoxíner EC-2. Ovannämnda LAL-reagens kan lyofilíseras, vilket är att fö- redraga.
I enlighet med uppfinningen kan LAL-reagenset användas för bestämning av endotoxin under endotoxinbestämningsbetingelser en- ligt ett konventionellt förfarande, exempelvis såsom beskrives i den brittiska patentskriften 1 522 127 och i efterföljande exempel.
Följande exempel belyser uppfinningen närmare; samtliga de- lar är baserade på vikt/volym om ej annat angives.
Framställning av Limulus-lysat Limulus-lysat framställdes genom modifiering av ett förfa- rande som ursprungligen beskrivits av Levin och Bang (Thromb.
Díath. Haemorrh. 19, 186 (1969). Kungskrabbor, Limulus polyphemus, togs från Atlanten i närheten av Beaufort, North Carolina. Heme- (cirka 500 ml) avlägsnades genom kardialpunktur med en nål nr 16 som uppsamlades i en endotoxinfri en-liters glascentri- fugkolv som innehöll 500 ml 0,125 % N-etylmaleimid i endotoxin- fri 3-procentig salin värmt till 4Z°C. Centrifugkolven innehål- lande hemolymfa-antikoaguleringslösning värmdes till 420 under 8 minuter och centrifugerades därefter vid 150 x g under 10 minu- ter. Plasmaövervätskan dekanterades och amebocytpelletten åter- uppslammades i antikoaguleringslösning. Cellerna överfördes åter till pelletter genom centrifugering såsom tidigare. De packade cellerna återuppslammades i 0,9-procentig pyrogenfri salinïoch överfördes till ett depyrogenerat 50-ml plastcentrifugrör. De tvättade cellerna centrifugerades åter vid 150 x g. Efter dekan- uteriug av salincn spräcktcs de packade amebocyterna genom till- sats av pyrogenfritt vatten för injektion i ett förhållande av 7 ml vatten till 3 ml packade celler. Efter blandning i en cyk- lon under 10-15 sekunder lagrades de lyserade cellerna under 24-; timmar vid 1-SOC. Cellavfall sedimenterades genom centrifugering vid 1500 x g under cirka 15 minuter. Lysatet dekanterades och _ lagrades vid 0-4°C. Cellavfallet kastades bort. I Framställning av standard-endetoxinlösningar Standnrdlösningur av referens-standard-ondotoxin typ EC-2 från Food and Drug Administration (FDA) framställdes i pyrogen- fritt vatten för injektion. Rekonstítuering av 1 pg endotoxin tillfört i en behållare med 10 ml vatten gav en initiell koncent- ration av 0,1 pg/ml. Behållaren skakades 1 en fram och återgående 10 20 t» .n in 13 447 029 skakanordning under 1 timme. Seriespädningar framställdes för âstadkommande av följande endotoxinkoncentrationer: 10 ng/ml, 1 ng/nri, soo pg/mi, 250 pg/mi, 125 pg/mi, 62,5 pg/mi, 31,25 pg/mi, 15,6 pg/ml och 7,8 pg/ml. När de väl framställts lagrades endo- toxinlösningarna upp till 48 timmar och därefter kastades de bort.
Andra endotoxin~standardlösningar som användes var lösningar av FDA referensendotoxin typ nr 1 från Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli endotoxín typ 071857 (Difco) och en nyberedning av referens av typ EC-2 som framställts i laboratoriet. Endotox- in-standardlösningar framställda av E. coli typ 071857 endotoxin hade följande koncentrationer: 6,25, 12,5, 50, 75, 100, 150 och 200 pg/ml; lysat-testmetod Lysatspädningar av 25-70 % framställdes i en 0,1 M buffert pH 7,0 som vanligen utgjordes av tris, dvs tris(hydroximety1)ami- nometan. Andra buffertar som användes innefattar imidazol, tris- imidazol, trietanolamin, tris-maleat, N-2-hydroxietylpiperazin- -N-2~etansulfonsyra (HEPES), 1,4-piperazindietansulfonsyra (PIPHS), och morfolinopropansulfonsyra (MOPS).
För bestämning av lysatkänsligheten, kombinerades 0,1 ml av var och en av endotoxinspädningarna med 0,1 ml lysat i depyro- generat glasrör med skruvlock med måtten 10 mm x 75 mm och ínku- berades under 1 timme vid 37°C. Resultaten bestämdes genom för- siktig omvändning av varje rör 1800. Ett sammanklumpat material som förblev intakt efter omvändningen indikerade ett positivt endotoxintest. 1 __ _ _ ap _ _ p Framställníng och depyrogenering av lösningar av ytaktivt räls; Förrådslösningar av LAL-känslighetsförhöjande ställdes i koncentrationer upp till 10 % aktiv beståndsdel i vat- tenhaltig lösning (vikt/volym). Oftast var koncentrationen 1 % (vikt/volym). Fastän förfarandet varierade med avseende på mäng- der från ett medel till ett annat löstes tillräckligt med mate- riul i 50 ml vattonhaltig lösning för att önskvärd koncentration medel fram- skulle uppnås om man spådde till 100 ml. Lösningen innehöll ock- så 7,5 ml 0,05 M tris(hydroximetyl)aminometan (dvs TRIZMA BASE, Sigma Chemical Company) och 1 ml av'2 N Na0H vilket gav ett slut- ligt pH-värde 2 11. Medlet lagrades i alkalisk lösning under 12 timmar eller mer vid O-40 för att fullständig depyrogenering skulle garanteras. Efter justering av lösningen till cirka pH 8 POOR QUALITY' (fl u; 'Jl 3 Û 447 029 '4 autoklaverades den vid 2 12100 vid 0,1 MPa under 15 minuter el- ler mer. Värdet av pH justerades slutligen till pH 7,0 1 0,5.
Koncentrationen av medlet beräknades och spädningen justerades så att slutlig önskvärd koncentration erhölls. Alkalilabila medel depyrogenerades genom syrabehandling varvid HCl och tris-buffert användes i stället för NaOH respektive TRIZMA BASE.
Tillsats av medel till lysat Lösningar av medlet som framställts såsom beskrivits ovan sattes till lysatet under spädning med buffert. Mängden som till- sattes varierade med det använda medlet men koncentrationsinter- vallct för alla som testades var 0,001-1,0 % (vikt/volym) slut- koncentration i lysatlösningen. Tillsatsordningen av komponenter- na ändrade ej erhållen lysatkänslighet. ßxempei 1. LAL-känsughetsförhöjande medel, zIvITTBRGENT TM 3-14, N,N-dimetyl~3-ammonio-1-propansulfonat, ett sulfobetain som säl- jes av Calbíochem-Behring Corporation, depyrogenerades såsom be- skrivits ovan och späddes till en slutlig koncentration av 1 % (vikt/volym). Lysat av typ 9CZC framställdes såsom en 50-procen- tig spädning med 0,1 M tris-maleatbuffert pH 7,0. Tillsats av det förhöjande medlet genomfördes för åstadkommande av en slut- koncentration i lysat av 0,005, 0,01, 0,02, 0,05, 0,075 och 0,10 procent (vikt/volym). Ett kontrollprov innehöll pyrogenfrítt vat- ten i stället för ytaktívt medel. Lysatspädningarna lagrades över natten vid 0-4°C och testades följande dag med en speciellt be- redd EC-endotoxinserie av spädningar (betecknad EC). Resultaten (tabell I) indikerar både det effektiva koncentratíonsomrâdet för fürhöjande medel och den totala ökningen i lysatkänslighet mot cndotoxin i jämförelse med kontroll-lysatet.
Tabell I 7 Prov Förhöjande medel (%) Lysatkänslighet* Kontroll 0 _ 500 LAL plus 0,005 1000,0 Förhöjande medel 0,01 500,0 0,02 31,2 0,05 10 000,0 0,075 10 000,0 0,10 10 000,0 ^ Uttryckt såsom den lägsta cndotoxínkoncentrationvn (pg/ml) som ger ett positivt íhopklumpningstest “S 447 029 Exemoel 2.
, Standard-endotoxinlösningar framställdes av E. coli endntoxin 071857, FDA referensendotoxin EC-Z och K. pneumoniae FDA roferenssats nr 1. Lysat späddes med 0,1 M trisbuffert pH 7,0 och förhöjande medel, ZWITTERGENTTM 3-14, i lösning vilket gav en 30-procentig lysatspädning innehållande 0,02 % ZWITTERGENT 3-14 (vikt/volym). Medlet ersattes med vatten i kontrollprovet.
Lysuttestet genomfördes med varje endotoxinspädningsseríe.
Tabell II Endotoxin Lysat- Prov känslighet * E. coli 071857 Kontroll 75,0 LAL-förhöjande medel 25,0 FDA referens EC~Z Kontroll 500,0 LAL-förhöjande medel 62,5 FDA K. pneumoniae Kontroll 1000,0 LAL-förhöjande medel 125,0 * Uttryckt såsom den lägsta endotoxinkoncentrationen (pg/ml) smngerettpositivt ihopklumpningstest §§gmQgl_§. 22 kommersiellt tillgängliga LAL-förhöjningsmedel un- dersöktes för bestämning av deras effekter på lysatkänslighet mot endotoxin. Lösningar av vart och ett framställdes och sattes till lysatsats 9FI i slutliga koncentrationer som varierade från 0,001 till 0,20 % (vikt/volym). Lysatprover testades därefter med nyberett FDA EC-endotoxin (EC). I tabell III finns medlen samman- ställda i ordningen för minskande effektivitet. Den mest effek- tiva koncentrationen som testades i lysat och dess motsvarande lysatkänslighet finns angivna. Känsligheten för kontroll-lysat (50 0 spädning) som ej innehöll något medel anges också.
POÛR QUALITY 447 029 hmww>Ho>æ Goësom mxmficoficm :mv »ß sm U«> Q vmwummflfiflmëøfiåmosfi v>«vflmom www hmm Eon nHE\w&v floflumhunmufloxnwxovowcw mummmfl Eomwm uxuæhupb m o.m~_ ....................................................................... -- »«m>H-HHo»~=oM @.omN ~oo.o xmfiaofinoz .u=H m@u«»@a< HQH ON qwmsw o.omN No.o xm«:ofid< Gofiumsomhoo Hmuflâmsu Hmxmnd xmm Hocmfiø o.mN_ _oo.o »w«o«s< .U=H «~:oA w m.No ~oo.o xm«cofi:< znmmëou Hmufiëønu :mmmpm ß~|< mmuwæflom m.~@ ~o.o »@~o«a< m“~@ _oo.Q »w~ome<@ .u=H «~:0A Nlwz @w»@po;@e< m.N@ ~oQ.o ~mfl=°fi=< >=«@eou Hmufiswsu nmnwum m,-< @«~m>Ho@ m.~@ ~@o.° »w»ome<@ m.~@ ~o.@ ~m~o«e< cofiymgomhou »wfl@w-m@fiu @o_-w @=»@oq m.No No.o HwpowE< .QGH mwcoq Nnz wm»ouosmE< m.No oN.c Mwfiøofinoz .UQH wmufi»mE< HUH ow cmwzß ~.Pm Poo.o Mm«=ofiG< xnmmäou Hmufiamcu fiæßwuw mnm mopm>Hom N.~w N@@.° Mwfinofipßa øofipwgomflou >wfi@w-@@flU Q >»«=»wp«:ø ~.Pm Fo.o xmficofimoz .u:H mudoq NP Kofihmm N.~m ~o.o Mmfløofiuma flofiwmnomnou ßmflmwlmnfiu Foom mnou wmfim ~._m Po.o ~w~°«e< N.Fm No.o Hm@owE ~.~m No.o HmuomE< .UHH .ßfimnäou Hmufiämnu xwnwsw w @.mP No.o nmuowE< .UGH wucoq mo mcfimwcoq @.wP ~c.o HwuowE< .ucfi mwcog ou w:fiwNcoq o.mF No.o nmuowE< .UCH .znmmëoo Hmuflëøsu xmaosm wQ @.mP ~°.o »@»°«e< wnfi~;@m-a@@Uofl@HwU «_-m p=@@H@~pH=N umcmfifimcmx fiæv flofiumæucmunox -p~m>Q« >H~M««wm w=fi=Mu@~@@=»«> HHH Hfiwßww 40 17 447 029 §§gmggl_í. För bestämning av att.den ökade känsligheten som iakttogs för lysat behandlat med förhöjande medel bibehölls un- der lyofilisering, framställdes en 30 % 0,05 M tris-buffert med och utan 0,02 % ZWITTERGENTTM 3-14 (slutkoncentration i lysat). Lysatlösningen (1,2 ml) fördelades spädningav lysat i i varje 10-ml serumbehållare. Prov frystes vid -SSOC och lyofi- líserades under 50 Pm vakuum med en torktíd av cirka 32 timmar.
Behållarna förseglades med en delad gummipropp och metallkapsy- ler. Det frystorkude lysatet rekonstituerades med 1,2 ml pyro- genfrítt vatten för injektion och testades därefter med FDA re- ferens-endotoxin sats EC-2. Kontroll-lysat utan förhöjande me- del hade en känslighet av 62,5 pg/ml. I närvaro av förhöjande medel förbättrades känsligheten av lysatet två gånger till 31,2 pg/m1.
Exemgel 5. Limulus-lysat Day Pool Lot ODH som var cirka 1 vecka gammalt framställdes såsom en 40-procentig spädning i 0,05 M tris(hydroximetyl)aminometanmaleatbuffert, pH 7,0, innehållande slutliga koncentrationer av 0,06 M CaCl2 och 0,01 M MnCl2 och 0,03 $ ZWITTHRGENTTM 3-14. Denna lösning fördelades såsom 1,2-ml alíkvota mängder i 8-ml behållare och frystes vid -45°C och lyofíliserades under 50 Pm vakuum med en torktid av cirka 28 timmar. Behållarna förseglades med delade gummiproppar och till- slöts med plastskruvproppar. Det frystorkade lysatet rekonsti- tuerades med 1,2 ml pyrogenfritt vatten för injektion och tes- tades med FDA referensendotoxin sats EC-Z. känsligheten av lyo- filiserat lysat som behandlats med förhöjande medel var 62 pg/ml.
En 40-procentig kontrollspädning av LAL utan förhöjande medel som hade testats före lyofiliseríng hade aikänslhflæt av 1 ng/ml. §§gmngl_§. Limulus-lysat Day Pools av en känslighet lika med eller större än 500 pg/ml E. coli endotoxín 1CF kombinerades och framställdes såsom en 40-procentig spädning i 0,025M tris(hydr- oximotyllnminomctunmnloatbuffert, pH 7,0, innehållande slutkon- centrationer av 0,02 M MgCl2, 0,01 M SrCl2, 0,01 M CaCl2 och 0,025 z ZWITTERGENTTM 3-14. Denna iösning fördelades 1 1,2-mi och 5,2-m1 alikvota delar i 10-ml behållare och frystcs vid -FDUC. Proverna lyofiliserades under 100 pm vakuum med en tork- tid av cirka 72 timmar. Den lyofiliserade produkten rekonstitue- rades med 1,2 ml eller 5,2 ml pyrogenfrítt vatten för injektion beroende på utgângsvolymen av lysat. Vid testning med E. coli endotoxin 1CF efter lyofilíseríng var känsligheten av lyofili- POÛR QÜÉLITY 447 029 18 sernt lysat behandlat med förhöjancle medel för bägge provstorle- karma 25 pg/ml í jämförelse med kontrollkänslígheten av 500 pg/ml.
Claims (15)
1. Förfarande för detektering av endotoxin med användning av Limulus amehocytlysat uppvisande minskad känslighet mot endotoxin på grund av närvaro av endogen lysatinhibitor, varvid en förhöjande mängd av ett lysatkänslighetsförhöjande medel sättes till en testlösning, så att lysatinhibitorn neutraliseras åtminstone partiellt, före mätning av mängden endotoxin i lös- ningen, k ä n n e t e c k n a t därav, att det lysatkänslig- hetsförhöjande medlet utgöres av ett eller flera av följande ylnktlva medel: (I) amfotära ytaktiva medel uppvisande följande formler: O 2 (A) (Rs-ÉÉ-nrnn-Rli-f -ífsof z (B) RS-n-xic-coon Y Y' (c) Rsuulzfcoonyz r o z (n) (RS-c-nunl-Rll-NC* - ïfcoda z vari R1 betecknar alkylen med 1-4 kolatomer; Y och Y' var och en är (1) väte, (2) lågalkyl eller (3) hydroxi- Iàgalkyl; R2 och R3 var och en är (1) lâgalkyl eller (2) hydroxilàgalkyl; n är 0 eller 1, och när n är 0 är R4 alkyl innehållande cirka 8-18 kolatomer; och när n är 1, är R4 alkylen med från 1 till cirka 6 kolatomerg RS betecknar alkyl med från cirka 8 till cirka 18 kolatomer; M betecknar väte, natrium, kalium eller ammonium; (II) anjoniska ytaktiva medel uppvisande följande formler: (E) (R6]n1 ' (Y)Ar ' (SO3M)n2 (F) RSOSOSM vari Rs, Y och M har samma betydelse som angivits ovan, R6 betecknar alkyl med 8-24 kolatomer, n1 är ett heltal med ett värde av 1-3, nz är 1 eller 2, Ar är fenyl eller naftyl; I%Dc1ä:ç?UUíL_I? 20 447 029 (III) katjoniska ytaktiva medel uppvisande följande formel: -- + N /” RS - c/ \cn \_ 2 \ /ÖHZ / N\ Y Y' vari RS, Y och Y' uppvisar samma betydelse som angivits ovan; och (IV) icke-joniska ytaktíva medel uppvisande följande formel: (n) R5R7R8N_> 0 vari RS har samma betydelse som angivits ovan, R7 och R8 är vardera metyl eller etyl; och sådana icke-joniska ytnktivn medel som utgöres av kondensationsprodukter av cirka 10-30 mol etylenoxid med en monoester av en sexvärd alkohol inne- hållande 6 kolatomer varvid estergruppen innehåller 10-20 kol- atomer.
2. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att det förhöjande medlet utgöres av amfotera ytaktiva medel med» formeln (A) enligt krav 1.
3. Förfarande enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a t därav, att Rz och R3 betecknar var och en metyl, n har värdet 0 eller 1, R4 betecknar tetradecyl och när n är 0 betecknar k1 trimetylen och när n är 1 betecknar kï -CH2-QH-CH2. Y Y OH
4. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att det förhöjande medlet utgöres av amfotera ytaktiva medel med formeln (D) i krav 1.
5. Förfarande enligt krav 4, k ä n n e t e c k n a t därav, att n är 1, R4 är propylen, R2 och R3 är var och en metyl och }§1 Y är metylen.
6. Förfarande enligt krav 4, k ä n n e t e c k n a t därav, att n är 0, R2 och R3 är var och en metyl och ¥1 är metylen. _-Y
7. Limulus-amebocytlysatreagens för bestämning av endotoxin, k ä n n e t e c k n a t därav, att det innefattar en buffrad vattenhaltig dispersion av Limulus-amebocytlysat,ingående i en endotoxin-bestämmande mängd och uppvisande förbättrad känslighet mot endotoxin,samt 0,001-1,0 % (viktvolym), baserat på lysatets 'totala volym av ett lysatkänslighetsförhöjande medel uppvisande lysatkänslighetsförhöjande karakteristika, vilket lysatkänslig- -f _ s. . 447 029 hctsförhöjande medel utgöres av ett eller flera av följande ytaktiva medel: (I) amfotera ytaktiva medel uppvisande följande formler: o Rz (A) (RS-c-rxunl-Rzt-Næ -nfsof 3 Y (B) RS-n-xIg-coon v Y' (c) Rswífï-COOMJZ v 9 lz e (n) (ns-c-nnnl-nLt-r? - ïfcoo 3 vari R1 betecknar alkylen med 1-4 kolatomer; Y och Y' betecknar var och en (1) väte, (2) làgalkyl eller (3) hydroxilågalkyl; R2 och R3 betecknar var och en (1) lâgalkyl eller (2) hydroxí- lågalkyl; n är 0 eller 1, och när n är 0 är R4 alkyl innehållande från cirka 8 till cirka 18 kolatomer; när n är 1 är R4 alkylen innehållande från 1 till cirka 6 kol- atomer; Rs betecknar alkyl innehållande från cirka 8 till cirka 18 kol- atomer; M betecknar väte, natrium, kalium eller ammonium; (II) anjoniska ytaktiva medel uppvisande följande formler: (E) (R6)n1 - (Y)Ar° (S03M)n2 (F) R50S03M vari RS, Y och M har samma betydelse som angivits ovan, R6 betecknar alkyl med från 8 till 24 kolatomer, n1 är ett heltal med ett värde av 1-3, n är I eller 2, Z Ar betecknar fenyl eller naftyl; (III) katjoniska ytaktiva medel uppvisande följande formel:“ N\ + _ C// cnz s \N/¿H2 f N- (G) R PooR QUALITY g 22 447 029 i vari RS, Y och Y' uppvisar samma betydelse som angivits ovan; och (IV) icke joniska ytaktiva medel uppvisande följande formel: (H) R5R7R8N--> C vari RS uppvisar samma betydelse som angivits ovan, R7 och R8 betecknar var och en metyl eller etyl; och icke joniska ytaktiva medel som utgöres av kondensationsprodukten av cirka 10-30 mol etylenoxid med en monoester av en sexvärd alkohol inne- hållande 6 kolatomer varvid estergruppen innehåller 10-20 kol- ' atomer. _
8. Reagens enligt krav 7, k ä n n e t e c k n a t därav, att det dessutom innehåller katjonerna, Na+, Mn++ och Ca++ i lysat- känslighetsförhöjande mängder.
9. Reagens enligt krav 7, k ä n n e t e c k n a t därav, att det dessutom innehåller katjonerna, Na+, Sr++, Ca++ och Mg++ i lysatkänslighetsförhöjande mängder.
10. Reagens enligt krav 8, k ä n n e t e ck n a t därav, att det förhöjande medlet utgöres av amfotera ytaktiva medel med formeln A i krav 7. _
11. Reagens enligt krav 9, k ä n n e t e c k n a t därav, att Rz och R3 är var od1en1mnyl, n är 0 eller 1, R4 är tetrade- cyl och kï är trimetylen, när n är Q,och R4 är trimetylen och kï är -Cšz-CHOH-CHZ när n är 1. Y
12. Reagens enligt krav 8, k ä n n e t e c k n a t därav, att det förhöjande medlet utgöres av amfotera ytaktiva medel med formeln D i krav 7.
13. Reagens enligt krav 12, k ä n n e t e c k n a t därav, att n är 1, R4 är propylen, R2 och R3 är var och en metyl och ¥1 är metylen. Y
14. Reagens enligt krav 12, k ä n n e t e c k n a t därav, att n är 0, R2 och RS var och en är metyl och k1 är metylen. _ Y
15. Förfarande för bestämning av endotoxin under endotoxin- bestämningsbetingelser, k ä n n e t e c k n a t därav, att endo- toxinet bríngas att reagera med ett Limulus-amebocytlysatreagens, vilket reagens utgöres av reagenset enligt krav 7. Poor: QUALITY
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US16345680A | 1980-06-27 | 1980-06-27 | |
| US06/254,233 US4322217A (en) | 1980-06-27 | 1981-04-14 | Process for preparing Limulus lysate |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8104016L SE8104016L (sv) | 1981-12-28 |
| SE447029B true SE447029B (sv) | 1986-10-20 |
Family
ID=26859656
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8104016A SE447029B (sv) | 1980-06-27 | 1981-06-26 | Forfarande och reagens for detektering av endotoxin vilket reagens innehaller ett lysatkenslighetsforhojande ytaktivt medel |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4322217A (sv) |
| AU (1) | AU545395B2 (sv) |
| CH (1) | CH647871A5 (sv) |
| DE (1) | DE3125181A1 (sv) |
| FR (1) | FR2485740A1 (sv) |
| GB (1) | GB2080524B (sv) |
| IT (1) | IT1211070B (sv) |
| NL (1) | NL8103113A (sv) |
| SE (1) | SE447029B (sv) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8827557D0 (en) * | 1988-11-25 | 1988-12-29 | Radiometer Corporate Dev Ltd | Process for handling horseshoe crab amoebocyte lysate |
| US5002015A (en) * | 1988-12-09 | 1991-03-26 | Aerotrace Hydraulics, Inc. | Submerged treadmill system for exercising animals |
| DE69029785T2 (de) * | 1989-10-30 | 1997-05-28 | Biowhittaker Inc | Kinetische Bestimmungsmethode für Endotoxin unter Verwendung von Limulus-Amoebocyten-Lysat und chromogenem Substrat |
| JP2957251B2 (ja) * | 1990-09-28 | 1999-10-04 | 生化学工業株式会社 | エンドトキシンの測定法 |
| DE69211973T2 (de) * | 1991-12-25 | 1996-12-19 | Maruha Corp | Reagenzien und Verfahren zur Bestimmung von Beta-Glucanen |
| JP2737514B2 (ja) * | 1992-01-24 | 1998-04-08 | 和光純薬工業株式会社 | エンドトキシン測定用試料の前処理方法 |
| CA2112776C (en) * | 1993-01-21 | 2002-11-12 | Masakazu Tsuchiya | Process for inhibiting activity of endotoxin |
| JP3242733B2 (ja) * | 1993-02-26 | 2001-12-25 | 生化学工業株式会社 | エンドトキシン特異的測定剤 |
| JP3429036B2 (ja) * | 1993-09-30 | 2003-07-22 | 生化学工業株式会社 | エンドトキシンの特異的測定剤 |
| US5716834A (en) * | 1994-08-19 | 1998-02-10 | National University Of Singapore | Cloned factor C cDNA of the Singapore horseshoe crab, Carcinoscorpius rotundicauda and purification of factor C proenzyme |
| US5637474A (en) * | 1994-10-31 | 1997-06-10 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for measuring amount of endotoxin or (1→3)-β-D-glucan by kinetic turbidimetric method |
| US6270982B1 (en) | 1997-10-09 | 2001-08-07 | Charles River Laboratories | Methods and compositions for the detection of bacterial endotoxins |
| AU2002330860C1 (en) * | 2001-06-28 | 2009-05-14 | Lonza Walkersville, Inc. | Methods and reagents for detecting endotoxin |
| US7828741B2 (en) * | 2002-12-20 | 2010-11-09 | The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Utilizing lipopolysaccharide in exhaled breath condensate to diagnose gram negative pneumonia |
| EP1571985B1 (en) * | 2002-12-20 | 2009-04-01 | The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Disposable hand-held device for collection of exhaled breath condensate |
| WO2004073497A2 (en) * | 2003-02-14 | 2004-09-02 | The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority | Device and method for collection of exhaled alveolar breath condensate |
| EP1606414B1 (en) | 2003-03-17 | 2009-12-23 | Charles River Laboratories, Inc. | Methods and compositions for the detection of microbial contaminants |
| US20050048655A1 (en) * | 2003-04-18 | 2005-03-03 | Novitsky Thomas J. | Kit for detecting endotoxin |
| US20050026239A1 (en) * | 2003-04-18 | 2005-02-03 | Associates Of Cape Cod, Inc. | Kit for detecting endotoxin in aqueous solutions |
| WO2007078268A2 (en) * | 2004-12-02 | 2007-07-12 | Charles River Laboratories, Inc. | Methods and compositions for the detection and/or quantification of gram positive bacterial contaminants |
| US7479375B2 (en) * | 2005-01-13 | 2009-01-20 | Charles River Laboratories, Inc. | Method for classifying a microorganism in a biological sample |
| WO2009137244A1 (en) * | 2008-04-15 | 2009-11-12 | Charles River Laboratories, Inc. | Cartridge and method for sample analysis |
| EP2147981A1 (en) | 2008-07-25 | 2010-01-27 | Biotype AG | Kit and method for evaluating detection properties in amplification reactions |
| JP5437660B2 (ja) | 2009-02-19 | 2014-03-12 | 興和株式会社 | コアギュロゲン原料及びその製造方法、それを用いた生物由来の生理活性物質の測定方法及び測定装置 |
| MY155541A (en) * | 2010-10-29 | 2015-10-30 | Universiti Malaysia Terengganu | Process for the preparation of amoebocyte lysate from the haemolymph of the horseshoe crab |
| CU24073B1 (es) | 2011-12-27 | 2015-01-29 | Ct De Investigación Y Desarrollo De Medicamentos Cidem | COMPOSICIÓN A PARTIR DE EXTRACTO DE HEMOCITOS DE LANGOSTA PARA LA DETECCIÓN DE LIPOPOLISACÁRIDOS, PEPTIDOGLICANOS Y 1,3-ß-D-GLUCANOS |
| EP3494226B1 (en) | 2016-08-03 | 2021-09-22 | Lonza Walkersville, Inc. | Method of detecting an endotoxin using limulus amebocyte lysate substantially free of coagulogen |
| US12158471B2 (en) | 2022-02-11 | 2024-12-03 | Charles River Laboratories, Inc. | Recombinant amebocyte lysate and uses thereof |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3280179A (en) * | 1961-03-16 | 1966-10-18 | Textilana Corp | Processes for producing acyclic surfactant sulfobetaines |
| US3368978A (en) * | 1964-12-28 | 1968-02-13 | Monsanto Co | Builder compositions and detergent compositions using same |
| US3539521A (en) * | 1965-05-03 | 1970-11-10 | Procter & Gamble | Detergent composition |
| US3915805A (en) * | 1970-05-25 | 1975-10-28 | Univ Johns Hopkins | Quantitative detection of endotoxin in biological fluids |
| US3954663A (en) * | 1972-12-18 | 1976-05-04 | Teikoku Horinine Mfg. Co. Ltd. | Process for the preparation of Limulina lysate |
| US4096091A (en) * | 1974-07-17 | 1978-06-20 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Limulus lysate having improved capacity to precipitate in the presence of low endotoxin concentrations, and reconstituting solutions therefor |
| US3944391A (en) | 1974-12-27 | 1976-03-16 | Preventive Systems, Inc. | In vitro process for detecting endotoxin in a biological fluid |
| US4107077A (en) * | 1975-07-14 | 1978-08-15 | Associates Of Cape Cod, Inc. | Limulus lysate of improved sensitivity and preparing the same |
| US4038029A (en) * | 1976-01-20 | 1977-07-26 | Worthington Biochemical Corporation | Limulus lysate turbidity test for pyrogens |
| GB1522127A (en) | 1976-07-23 | 1978-08-23 | Mallinckrodt Inc | Limulus amebocyte lysate reagent compositions |
| GB2019563B (en) | 1978-04-20 | 1982-07-28 | Harvard College | Assay of gram-negative bacteria |
| DE2927103A1 (de) * | 1978-10-06 | 1980-04-17 | Baxter Travenol Lab | Optisches verfahren zur bestimmung von endotoxin |
| US4273557A (en) * | 1980-03-31 | 1981-06-16 | Mallinckrodt, Inc. | Limulus lysate procedure for determining endotoxins |
-
1981
- 1981-04-14 US US06/254,233 patent/US4322217A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-06-23 GB GB8119357A patent/GB2080524B/en not_active Expired
- 1981-06-26 DE DE19813125181 patent/DE3125181A1/de active Granted
- 1981-06-26 SE SE8104016A patent/SE447029B/sv not_active IP Right Cessation
- 1981-06-26 CH CH4249/81A patent/CH647871A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-06-26 NL NL8103113A patent/NL8103113A/nl not_active IP Right Cessation
- 1981-06-26 IT IT8122595A patent/IT1211070B/it active
- 1981-06-26 AU AU72321/81A patent/AU545395B2/en not_active Expired
- 1981-06-26 FR FR8112598A patent/FR2485740A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3125181C2 (sv) | 1991-09-05 |
| FR2485740A1 (fr) | 1981-12-31 |
| AU7232181A (en) | 1982-01-07 |
| IT8122595A0 (it) | 1981-06-26 |
| US4322217A (en) | 1982-03-30 |
| GB2080524A (en) | 1982-02-03 |
| SE8104016L (sv) | 1981-12-28 |
| DE3125181A1 (de) | 1982-03-04 |
| FR2485740B1 (sv) | 1985-05-24 |
| GB2080524B (en) | 1984-04-18 |
| CH647871A5 (fr) | 1985-02-15 |
| NL8103113A (nl) | 1982-01-18 |
| IT1211070B (it) | 1989-09-29 |
| NL192139C (sv) | 1997-02-04 |
| AU545395B2 (en) | 1985-07-11 |
| NL192139B (sv) | 1996-10-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SE447029B (sv) | Forfarande och reagens for detektering av endotoxin vilket reagens innehaller ett lysatkenslighetsforhojande ytaktivt medel | |
| De Crombrugghe et al. | The Properties of Thyroglobulin: XI. THE REDUCTION OF THE DISULFIDE BONDS | |
| Maček et al. | Kinetics of hemolysis induced by equinatoxin, a cytolytic toxin from the sea anemone Actinia equina. Effect of some ions and pH | |
| KR101606878B1 (ko) | 헴 단백질의 안정화방법 및 보존용액 | |
| US4273557A (en) | Limulus lysate procedure for determining endotoxins | |
| Nagaki et al. | A new method for the preparation of EAC14 cell with human or guinea-pig serum | |
| EP2881738B1 (en) | Latex agglutination inhibition immunoassay | |
| US4188188A (en) | High density lipoprotein cholesterol assay | |
| CA1159754A (en) | Process for preparing limulus lysate | |
| US3983099A (en) | Thyroxine-and triiodothyronine-tyrosine dipeptide derivatives | |
| EP2997355B1 (en) | Degradable cationic surfactants and use thereof in enhancing chemiluminescence | |
| US5876955A (en) | Endotoxin stabilizing agent, endotoxin composition and method for assaying endotoxin | |
| Butler et al. | Studies in synthetic immuno-chemistry: Observations on antisera against aspirin-protein complexes With a note on the serological reactions by AA Miles | |
| CA1083158A (en) | Electroplating baths for nickel and brightener- leveler compositions therefor | |
| SUNAMOTO et al. | Liposomal membranes. XVIII. Interaction of spermicidal agents with liposomal membranes | |
| US4891311A (en) | Stabilized enzyme conjugate composition | |
| Ahmed et al. | Sodium binding by rat brain lipoprotein | |
| JP3652738B2 (ja) | エンドトキシン安定化剤、エンドトキシン組成物およびエンドトキシンの測定法 | |
| US2802789A (en) | Polyoxypropylene glycol disulfate detergent compositions | |
| CN1996022A (zh) | 一种检测新霉素的酶联免疫试剂盒 | |
| Jorpes et al. | Studies on the A-Antigenic Polysaccharide from the Abomasus of Cattle | |
| DE2729618A1 (de) | Reagens zur bestimmung von endotoxin und verfahren zu seiner herstellung | |
| KR930008149A (ko) | 배양세포로 부터 프로트롬빈 시간 테스트에 사용이 적절한 트롬보플라스틴 시약의 제조방법 | |
| US2906664A (en) | Maurice | |
| JPH04297869A (ja) | 水分標準試料 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAL | Patent in force |
Ref document number: 8104016-4 Format of ref document f/p: F |
|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8104016-4 Format of ref document f/p: F |