SE446986B - Enkefalinderivat - Google Patents

Description

l0 15 20 25 30 35 446 986 2 Detaljerad beskrivning av föredragna utföringsformer Encefalinderivaten enligt föreliggande uppfinning representeras av formeln H (i) H-2,6-C-diMeTyr-(D)Met-Gly-Phe-N(CH2)mCOOR i vilken: m är 3 eller 5; och R är lägre alkyl; och i vilken (1) hänför sig till den visade föreningen, dess spegelbild eller en blandning av racemat; eller farmaceutiskt acceptabla salter därav.

I den ovan angivna formeln betecknar “C-diMe“ di- metylsubstitution på tyrosinets aromatiska ring. Sub- stitutioner av tyrosin i den kända tekniken har varit N-substitutioner, och man har funnit att C-substitutionen oväntat ökar föreningarnas aktivitet.

Alla aminosyrarester som här identifierats är i den naturliga eller L-konfigurationen, om ej annat spe- cifiseras, med undantag av glycin som inte har något symmetricentrum, och standardförkortningar för amino- syraresterna har använts.

Dimetyltyrosinresten kan vara i L-, D- eller DL-kon- figurationen.

Uttrycket "lägre alkyl" hänför sig till rakkedjiga eller grenkedjiga Cl-C6-alkylradikaler, dvs metyl, etyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, tert-butyl, n-hexyl, etc.

Uttrycket “farmaceutiskt acceptabla salter", som användes här, hänför sig till icke toxiska syraadditions- salter, vilka i allmänhet framställes antingen in situ eller genom reaktion mellan en förening enligt förelig- gande uppfinning och den önskade organiska eller oorga- niska syran, enligt de metoder som är välkända på om- rådet. Representativa salter inkluderar hydrokloriden, hydrobromiden, sulfatet, bisulfatet, acetatet, oxalatet, 5 valeratet, oleatet, lauratet, boratet, bensoatet, lakta- 10 l5 20 25 30 35 446 986 3 tet, fosfatet, tosylatet, citratet, maleatet, fumaratet, succinatet, tartratet, tosylatet, napsylatet etc.

Den analgetiska aktiviteten för föreningarna en- ligt föreliggande uppfinning fastställdes först vid undersökning medelst het platta och PBQ-vridningsunder- sökning på möss. _ Metoder 2§Q:inëus§§ëê-!riêain9_b9§_槧§ Grupper om minst 10 CD-l (Charles River) hanmöss, 18-25 g, fick svälta över natten och förbehandlades intragastriskt (i.g.) med vehikeln (1-2 droppar av en l:l blandning av propylenglykol: Tween 80 per 10 ml 0,9 % NaCl) l0 ml/kg eller läkemedlet antingen i lösning eller som en homogeniserad suspension. PBQ administre- rades i.p. 30 min senare som en 0,025 % lösning i 5 % etylalkohol. Med början 5 min efter PBQ-administreringen placerades varje mus individuellt i en glasbägare och antalet vridningar räknades under den följande 10 min perioden. En vridning ansågs bestå av en kombination eller sekvens av krökning av ryggen, bäckenrotation och bakbensutsträckning (l). För att uppnå maximal sensi- bilitet, antogs signifikant analgesi vara när ett indi- viduellt djurs vridningsfrekvens var SO % eller mindre jämfört med kontrollgruppens genomsnittsfrekvens (2).

Uppskattningar av ED50 och dosresponslinjens lutning bestämdes från data pà allt-eller-intet basis med an- vändning av Berksons logistiska metod (3). EDSO defi- nierades som den dos vilken minskade vridningen med 50 % eller mera av kontrollgruppgenomsnittet i 50 % av testdjuren.

Testningsförfarande med användning av het platta Den använda metoden var en modifiering av den som beskrivits av Eddy och Leimback. Två grupper om 14 möss hämtades till experimentrummet ungefär en halvtimme innan testning. Mössen placerades individuellt under (D) på en het plat- ta (Pyro-magnistir, Lab-Line Instruments, Inc. Melrose en inspärrningscylinder (600 ml Pyrex Park, IL) varvid temperaturen reglerades medelst en 446 986 l0 20 25 30 35 4 YSI model 72 proportionell temperatur-regleranordning (Yellow Springs Instruments C0,. Yellow Springs, Ohio) vid 55 1 O,5°C. Reaktionstiden för varje mus att slicka en fot eller hoppa mättes, (Lab-chron timer, Lab-Line Instruments, Inc., Melrose Park, IL) tre gånger vid 20 min intervaller. Möss som inte reagerade inom l5 s kasserades. 10 möss gavs en dos av testläkemedlet och tio fick 0,9 % fysiologisk saltlösning intravenöst 20 min efter den sista reaktionstidsmätningen. Djuren testa- des såsom innan 10, 30 och 60 min efter denna injektion.

Möss som inte reagerade inom 30 s avlägsnades från den heta plattan och gavs en responstid av 30 s. Analgesi ansågs ha påvisats hos en mus om dess reaktionstid efter läkemedlet var större än den för kontrollgruppgenomsnit- tet plus två standardavvikelser. Antalet djur som upp- visade analgesi i läkemedelsgruppen jämfördes med samma värde för kontrollgruppen medelst Fishers exakta sanno- likhetstest. EDSO analys med användning av procenten av möss som uppvisade -värden beräknades genom Log-probit- analgesi i varje läkemedelsgrupp minus samma sammantagna värde för kontrollprovet.

Den analgetiska aktiviteten för representativa föreningar jämfördes med den för morfin, med följande resultat: Föreningarna enligt föreliggande uppfinning kan administreras antingen oralt eller parenteralt för att lindra smärta hos däggdjurspatienter som lider därav, vid orala doser av från 0,5 till 5 mg/kg kroppsvikt och från 0,05 till 3 mg/kg kroppsvikt per dygn, företrä- desvis i uppdelade doser, dvs var fjärde till sjätte timme efter behov för lindring av smärta.

Föreliggande uppfinning belyses vidare med följan- de exempel. 10 15 20 25 30 35 446 986 EXEMPEL l ÉÉÉEÉÉëllEħ9_ë!-ÉÉšÉIÉEÉYl9§iÉëšÉQDYlZÉÉEYÄÉÉÉEYÄZEÉI E2l:s:sæ¿n9:Es2§9§: Till en kall lösning av 2,65 g (l0,0 mmol) tert- -butyloxikarbonyl (Boc)-fenylalanin och 2,00 g (ll,0 mmol) metylkaproat-hydroklorid i 25 ml metylenklorid sattes 1,25 ml (ll,2 mmol) dicyklohexylkarbodiimid och sl,25 ml (l,l0 mmol) N-metylmorfolin. Reaktionsbland- ningen omrördes i 30 min vid rumstemperatur och kyldes sedan under flera dygn. _ Den vid reaktionen bildade dicyklohexylurean fil- trerades och filtratet extraherades flera gånger med vatten, torkades över vattenfritt magnesiumsulfat och filtrerades samt industades slutligen. Den resulteran- de oljan stelnade snart för att ge ett kvantitativt utbyte av produkt. TLC [kloroform:metanolzättiksyrazvat- ten (83:l5:l:l vol/vol/vol/vol)]~RfO,8S. Strukturen bekräftades med NMR.

EXEMPEL 2 Ersws:ållnin9_sy_2szëzëesxleëåkërèenyl:šsaxlëlë9yl:@s: sxl:z:s@in9§u2!:e2 Titelföreningen framställdes på ett sätt som var identiskt med det i exempel l utgående från 2,65 g Boc- -Phe, l,69 g (ll,0 mmol) metyl-v-aminobutyrat-hydro- kloridsalt, 1,25 ml N-metylmorfolin och 2,27 g (ll,0 mmol) dicyklohexylkarbodiimid i 25 ml metylenklorid.

Blandningen fick reagera i 24 h för att ge ett kvantita- tivt utbyte av produkten (TLC i samma lösningsmedels- system som ovan, Rf 0,84).

EXEMPEL 3 šzëustëllala9_ë!_§saylsls§xl:æsëyl:s:ëæèseësezestzhyëz ësëlerlë Tert-butyloxikarbonyl-fenylalanyl-metyl-e-amino- kaproat (l0,0 mmol) löstes i 37 ml isättika och behand- lades med 18 ml 5,6n klorvätesyra i dioxan under 20 min vid rumstemperatur. Lösningsmedlen avdunstades och lO 15 20 25 30 35 446 986 6 vattenfri eter tillsattes för att bilda en fällning.

Den kalla fällningen filtrerades och tvättades med eter, varpå den torkades i vakuum vid 650C i 3 h för att ge 2,79 g av produkt (84,8 % utbyte).

EXEMPEL 4 Förfarandet enligt exempel 3 följdes med användning av identiska mängder material för att ge 2,85 g av pro- dukt (98,4 % utbyte). _ EXEMPEL 5 ëëereëë Till 2,45 g (7,45 mmol) av dipeptiden i exempel 2 och 2,04 g (8,57 mmol, l5 % överskott) av Boc-gly- -2,4,5-triklorofenylester (OCP) i 15 ml dimetylformamid sattes 0,85 ml (7,65 mmol) N-metylmorfolin och reak- tionsblandningen fick stå vid rumstemperatur i 48 h.

Tillsättning av l75 ml kallt, 5 % kaliumbisulfat gav en gummiaktig fällning, vilken extraherades (3 x 50 ml) i etylacetat. De kombinerade organiska skikten tvätta- des med vatten, därpå saltlösning och torkades över vattenfritt magnesiumsulfat och, efter filtrering, in- dunstades för att ge en olja.

Produkten renades via làgtrycksvätskekromatogra- fi med användning av silikagel och eluerades med en 100 % kloroform till lOO % etylacetat lineär gradient.

Den oljiga produktens vikt var 3,17 g (94,6 % utbyte).

TLC[kloroform:etylacetat (l:l vol/vol)] Rf 0,09.

EXEMPEL 6 ësëxšëë Den ovan angivna föreningen framställdes fràn 2,55 9 (8,49 mmol) av dípeptiden i exempel 4, 3,47 g (9,77 mmol, 15 % överskott) av Boc-Gly-OCP och l,l ml (9,9 mmmol) 10 15 20 25 30 EXEMPEL 7 446 986 7 av N-metylmorfolin i 17 ml dimetylformamid, genom att följa förfarandet i exempel 5. Den efterföljande upp- arbetningen utfördes såsom i exempel 5, produkten rena- des genom lågtrycksvätskekromatografi med användning av en 95 % kloroform/5 % Skellysolve B till 100 % etyl- acetat lineär gradient på en 25 x 100 mm silikagelkolonn för att ge 2,52 g (70,4 %) av produkt. TLC [kloroform:- metanol:ättiksyra:vatten (83:l5:l:l vol/vol/vol/vol] Rf 0,74; TLC kloroform:etylacetat (lzl vol/vol) Rf 0,06.

Ešemäëëlèains_ëy-9lx§xl:šeayle;ëarl:ue§rl:§:ëæi§95ëH: EQÉÉIÉYÉÉQEÄQEÄQ Föreningen enligt exempel 5 (3,l7 9, 7,05 mmol) löstes i 26 ml ättiksyra och behandlades vid rumstem- peratur med l3 ml ättiksyra samt behandlades vid rums- temperatur med l3 ml 5,7 M klorvätesyra/dioxan under 25 min. Lösningsmedlen avdunstades och det resulterande, kristallina fastämnet tvättades med eter samt torkades 1 vakuum vid so°c under 2,5 h för att ge 2,68 q (9s,s 2 utbyte). TLC kloroform:metanol:ättiksyra:vatten (83:l5:l5:l:l vol/vol/vol/vol) gav en fläck, Rf 0,09.

EXEMPEL 8 šëëzbzêäekleëiê Boo-peptiden enligt exempel 6 (2,52 g, 5,99 mmol) löstes i 22 ml ättiksyra och behandlades enligt för- farandet i exempel 7 med 10,7 ml 5,6n klorvätesyra i dioxan. Efter upparbetning och torkning i vakuum vid s5°c under 3 h erhölls ett 98,6 % utbyte av produkt (2,l4 g). Elementaranalys visade att det var ett l/4 hydrat. TLC [metanol-ättiksyra-vatten-kloroform (l5:l:l:83 vol/vol/vol/voll, Rf 0,07 (homogen). lO 15 20 25 30 35 446 986 EXEMPEL 9 Ešëwäëëllai§¶-ë!-§9§:lELl:2lšlêzêiæstxlëyzeëxlzlâlzæefie: axlzïlxsxlzšsazlalenxlmszzlzz:eæiaeëaëxae: En lösning av (DL) -metionin (l,37 g, 3,05 och 0,72 ml (6,48 mmol) -6o°c och 0,42 mi (3,2o kloroformiat tillsattes Boc-2,6-C-dimetyltyrosyl-(D)- mmol) i l8,5 ml dimetylformamid N-metylmorfolin kyldes till mmol, 5 % överskott) isobutyl- allt pà en gång. Lösningen om- rördes i 10 min medan temperaturen steg till ~50°C, varefter 1,21 g (3,35 mmol) av tripeptid-hydrokloriden från exempel 8 i 9 ml dimetylformamid tillsattes under en tidsperiod av 20 min, varvid temperaturen hölls vid lägre än -ZOOC. Reaktionsblandningen omrördes vid -lO°C under 30 min, varpå den fick inta rumstemperatur och hölls vid rumstemperatur i 20 h. l Reaktionsblandningen sattes sedan till 300 ml, kallt, 5 % kaliumbisulfat för att ge en vit fällning, vilken filtrerades, tvättades med vatten och torkades för att ge 1,97 g (86,8 % utbyte) av produkt. TLC [klo- roform:metanol:ättiksyrazvatten (83:l5:l:l vol/vol/vol/- vol]-två fläckar med samma intensitet (diastereomerer) vid Rf 0,70 och 0,76.

EXEMPEL 10 -----__-__-- _----_-_ __ __ -_-~---__ ..._- __ _ _--_-~..

EYÉISÄYSYLIÉÉEYÄÉÄÉEYÅIEÉÉYÄZEIÉEÉQQEÉEEQÉÉ Titelföreningen framställdes från l,29 g (3,35 mol) av tripeptidhydrokloriden från exempel 7 och sam- ma molära överskott av Boc-(DL)-2,6-C-dimetyltyrosyl- -(D)-metionin, N-metylmorfolin och iso-butylkloroformiat samt lösningsmedel tillsattes pà samma sätt som i exem- pel 9. Upparbetning såsom i exempel 9 gav 2,19 g av produkt (93,2 %). TLC i lösningsmedelssystemet enligt exempel 9 gav tvà fläckar med lika intensitet, Rf 0,64 och 0,72. 10 l5 20 25 30 35 446 986 EXEMPEL ll E§a@§2ëll§;n¶_ëy_l9ël:2l§:9:ëims:yl:yrQ§yl:l2l:m§§i9: axlzslxsyl:âsaxlëlëßylzmszylzxzëmiaeëuëyrafëxëzeklez Eisï.

Den skyddade peptiden i exempel 9 (l,97 q, 2,65 mmol) behandlades under 20 min vid rumstemperatur i 10 ml ättiksyra och 5 ml 5M klorvätesyra i dioxan och lösnings- medlen avdunstades. Tillsättningen av eter och finför- delning gav ett pulver, vilket filtrerades, tvättades med eter och torkades i vakuum vid 60°C under 3 l/2 h för att ge l,8l g (96,8 % utbyte) av produkt som en hyarokioria 1 1/2 H20, Mv 107,28 [alås +s,o° (c=o,1, metanol). Elementaranalys och NMR-analys bekräftade strukturen.

EXEMPEL 12 ____________ ____ __ __ _________ __ ___ __ _ ___-___ __ ___ ___-_ _____ ____ ______ _________.....___...__ Den skyddade pentapeptiden i exempel 10 (2,l9 g, 2,84 mmol) behandlades såsom ovan med klorvätesyra i dioxan för att ge, efter torkning vid 6000 i 2,5 h i vakuum, l,89 g (9l,9 %) av produkt som en hydroklorid l l/2 H20. [u]š5 +3,O0 (c=O,l, metanol). Elementaranalys och NMR-analys bekräftade strukturen.

Det är uppenbart för fackmännen på området att syrorna, amiderna och andra lägre alkylestrar enligt uppfinningen lätt kan erhållas genom val av de lämp- liga mellanprodukterna. Representativa föreningar en- ligt föreliggande uppfinning inkluderar, men är inte begränsade till: (DL)-2,6-C-dimetyltyrosyl-(D)-metionyl-glycyl-fenyl- alanyl-e-amino-kapronsyra; (DL)-2,6-C-dimetyltyrosyl-(D)-metionyl-glycyl-fenyl- alanyl-Y-aminosmörsyra; (DL)-2,6-C-dimetyltyrosyl-(D)-metionyl-glycyl-fenylala- nyl-isopropyl-s-amino-kaproat-hydrobromid; (DL)-2,6-C-dimetyltyrosyl-(D)-metionyl-glycyl-fenyl- alanyl-N-metyl-a-amino-kaproamid; etc. 10 15 20 25 30 35 446 986 10 Föreliggande uppfinning innefattar inom sitt skydds- omfång farmaceutiska kompositioner som omfattar, såsom en aktiv beståndsdel, åtminstone en av föreningarna med formeln I i association med en farmaceutisk bärare eller ett farmaceutiskt spädmedel, Föreningarna enligt _föreliggande uppfinning kan administreras oralt, paren- teralt, nasalt, vaginalt, rektalt eller sublingualt och kan beredas i dosformer som är lämpliga för varje administreringssätt.

Fasta dosformer för oral administrering inbegriper kapslar, tabletter, piller, pulver och granuler. I så- dana fasta dosformer blandas den aktiva föreningen med minst ett inert spädmedel, såsom sackaros, laktos eller stärkelse. Sådana dosformer kan även omfatta, vilket de gör i normala fall, ytterligare substanser utöver inerta spädmedel, t ex smörjmedel, såsom magnesiumstea- rat. Ifràga om kapslar, tabletter och piller kan dos- formerna även omfatta buffertar. Tabletter och piller kan dessutom framställas med tarmöverdrag.

Vätskeformiga dosformer för oral administrering inkluderar farmaceutiskt acceptabla emulsioner, lös- ningar, suspensioner, syrupi och elixir som innehåller inerta spädmedel som vanligen användes på området, så- som vatten. Förutom inerta spädmedel kan sådana komposi- tioner även inkludera adjuvans, såsom vätmedel, emulger- medel och suspenderingsmedel samt sötningsmedel, smak- sättningsmedel och parfymeringsmedel.

Preparaten enligt föreliggande uppfinning för pa- renteral administrering inkluderar sterila, vattenhal- tiga eller icke vattenhaltiga lösningar, suspensioner eller emulsioner. Exempel på icke vattenhaltiga lös- ningsmedel eller vehikler är propylenglykol, vegetabi- liska oljor, såsom olivolja, och injicerbara organiska estrar, såsom etyloleat. Sådana dosformer kan även inne- hålla adjuvans, såsom konserveringsmedel, vätmedel, emulgermedel och dispergeringsmedel. De kan sterilieras 10 15 446 986 ll genom exempelvis filtrering genom ett bakterikvarhàllan- de filter, genom införlivning av steriliseringsmedel i kompositionerna. De kan även tillverkas i form av sterila, fasta kompositioner, vilka sedan kan lösas i sterilt vatten, eller något annat sterilt, injicer- bart medium, omedelbart före användning.

Dosen av aktiv beståndsdel i kompositionerna enligt föreliggande uppfinning kan variera; det är emellertid nödvändigt att mängden av aktiv beståndsdel skall vara sådan att en lämplig dosform erhålles. Den valda dosen beror på den önskade terapeutiska effekten, på admini- streringssättet och på behandlingens varaktighet. Van- ligen administreras dosnivàer av mellan 0,5 och 5 mg/kg kroppsvikt dagligen åt däggdjur för att erhålla effek- tiv smärtlindning.

Claims (5)

5 10 15 446 986 12 PATENTKRAV

1. Encefalinderivat, k ä n n e t e c k n a t därav, att den har formeln H I (i) H-z , e-c-aimeæyr- ( nnaet-e1y-Pne-N < caz >mcooR i vilken: m är 3 eller 5; och R är lägre alkyl; och i vilken (i) hänför sig till den visade föreningen, dess spegelbild eller en blandning av racemat; eller farmaceutiskt acceptabla salter därav.

2. Förening enligt krav l, därav, att m är 3.

3. Förening enligt krav 2, därav, att den är (DL)-2,6-C-dimetyl-tyrosyl-(D)-metio- nyl-glycyl-fenylalanyl-metyl-Y-amino-butyrat eller ett farmaceutiskt acceptabelt salt därav.

4. Förening enligt krav 1, därav, att m är 5.

5. Förening enligt krav 4, därav, att den är (DL)-2,6-C-dimetyl-tyrosyl-(D)-metio- nyl-glycyl-fenylalanyl-metyl-s-aminokaproat eller ett farmaceutiskt acceptabelt salt därav. k ä n n e t e c k n a d k ä n n e t e c k n a d k ä n n e t e c k n a d k ä n n e t e c k n a d