SE443576B - ANTIBIOTIC NEPLANOCINES AND PROCEDURE FOR PREPARING THEM THROUGH CULTIVATION OF AMPULLARIAL SP A 11079 NRRL 11451 - Google Patents

ANTIBIOTIC NEPLANOCINES AND PROCEDURE FOR PREPARING THEM THROUGH CULTIVATION OF AMPULLARIAL SP A 11079 NRRL 11451

Info

Publication number
SE443576B
SE443576B SE7903672A SE7903672A SE443576B SE 443576 B SE443576 B SE 443576B SE 7903672 A SE7903672 A SE 7903672A SE 7903672 A SE7903672 A SE 7903672A SE 443576 B SE443576 B SE 443576B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
neplanocin
water
following formula
group
give
Prior art date
Application number
SE7903672A
Other languages
Swedish (sv)
Other versions
SE7903672L (en
Inventor
M Otani
S Yaginuma
M Tsujino
N Muto
T Saito
T Fujii
Original Assignee
Toyo Jozo Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP6289978A external-priority patent/JPS54154792A/en
Priority claimed from JP9802778A external-priority patent/JPS5524157A/en
Priority claimed from JP820579A external-priority patent/JPS55100388A/en
Priority claimed from JP2120179A external-priority patent/JPS55113786A/en
Application filed by Toyo Jozo Kk filed Critical Toyo Jozo Kk
Publication of SE7903672L publication Critical patent/SE7903672L/en
Publication of SE443576B publication Critical patent/SE443576B/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/38—Nucleosides
    • C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Description

7903672-9 10 15 20 25 30 MW 263 nm, 151% = 602,1 1 cm vid 6114/6666 s: 71 m = 261 mn, 51% = 566,4 1 cm 1% 1 cm vid pH-varde 10: kmqx = 263 nm, s = 595,0 (7) Infrurödobsorptionsspekfrum (KBr): visas i Fíg.2. 7903672-9 10 15 20 25 30 MW 263 nm, 151% = 602.1 1 cm at 6114/6666 s: 71 m = 261 mn, 51% = 566.4 1 cm 1% 1 cm at pH value 10: kmqx = 263 nm, s = 595.0 (7) Infrared Observation Spectrum (KBr): shown in Fig.2.

Abmrpfionsrmnd 17160360, 3200, 2920, 1640, 1600, 1570, 1480, 1415, 1370, 1330, 1300, 1250, 1205, 1160, 1115, 1080, 1050, 1005, 910, 850, 790, 730 61151. (8) Körnspínnresononsspektrum: visat i fíg.3 (ínre.stondord DSS, i Deuterium dímefylsulfoxid, 100 Hz). (9) Löslíghet: Löslígf i vatten, dimefylsulfoxíd, dímetylformamíd, üftíksyro och vattenhultigt oceton.Abmrpfionsrmnd 17160360, 3200, 2920, 1640, 1600, 1570, 1480, 1415, 1370, 1330, 1300, 1250, 1205, 1160, 1115, 1080, 1050, 1005, 910, 850, 790, 730 61151. (8) Körnspínnresononspektrum : visat i fíg.3 (ínre.stondord DSS, i Deuterium dímefylsulfoxid, 100 Hz). (9) Solubility: Solubility in water, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, hydroxy acid and aqueous ocetone.

Olöslígt: etylocetot,.kloroform, benzen, hexon. (10) Förgreoktioner: Positiv: avfärgning av kclíumpermonganut, períodotoxídatíon och onísoldehyd.Insoluble: ethyl acetate, chloroform, benzene, hexone. (10) Pre-reactions: Positive: decolorization of cclíumpermonganut, periodoxidation and onisoldedehyde.

Negufív: jörn(III)kloríd,nínhydrín, unílínftulot, Molisch och Fehlíng. (11) Natur: svagt basískt. (12)) Färg: Vito nålkrístuller. , (13) R,-värde (kíselsyragel, Tokyo Kusei Co., kíselsyrugel . f): n-bufonol: öffíksyrczvoften (6:1:1); Rf-värde = 0,36 n-butunol: koncentrerad vattenlösning av ommoníokzvatten (10:0,5:2); Rf~vörde = 0,27 n-propunol: koncenfrerud vottenlösníng ov ommoniukzvntten (10:1:1); Rf-värde = 0,41 10 15 20 25 30 7903672-9 acetonzvatten (10:1); Rf-värde = 0,34 efylacetatzmetanol:vaffen (10:2:1); Rf-värde = 0,21 kloroformzmetanol:öttíksyra (l0:2:1) ; RF-värde = 0,17 (14) Kemisk struktur: _ NH, N k, N Ho-Hzc H ' OH OH 'De biologiska egenskaperna av neplanocin Å ör följande. (1) Tíllvöxtinhiberande aktivitet på växtpatogena svampar; 100 ug/ml lösning av neplanocin A på en agarplatta med Helminthosporium oryzae M 0306 visar en ínhibitíonszon på 18,9 mm i diameter. (2) Anfi-tumörakrivitet: Murin leukemi L-1210 tumörceller (106 celler) ínokulerades intra- perironealt på mus och en dag.efter transplanrationen , neplano- cin A (vardera 0,16 mg/kg, 0,32 mg/kg, 0,63 mg/kg, 1,25 mg/kg, 2,5 mg/kg och 5,0 mg/kg respektive) admínísrrerades infraperíro- nealf en gång om dagen under 5 dagar. 10 möss i en kontroll- grupp på 7 möss_i varje behandlad grupp användes. Resulraten vi- sas i fig.4. Efter 15 dagars observation var medelöverlevnads- tiden för kontrollgruppen 7,4 dagar. Förlängning av livslängden 7903672-9 10 15 20 25 30 jämfört med kontrollgruppen observerades för de läkemedelsbe- handlade grupperna, dvs 158 % för 0,16 mg/kg, 170% för 0,32 mg/kg, ingen mortalitet observerades för 2,5 mg/kg och 5 mg/kg.-grupper- HG, Liksom för L-1210 observerades remarkabla förlängningar av livslängden mot Ehrlich ascites-tumör, Sarcoma-180, P-388 leukemi- bärande möss och rått-Yoshida sarcoma när mässan administrera- des neplanocin A. (3) Akut toxícitet: LD50:13,7 mg/kg.(i.p. ,mus) Ingen mortalitet observerades vid administration intraperitoneellt under 14 dagar med 5 mg/kg/dag.Negufív: ferric chloride, ninhydrin, unilínftulot, Molisch and Fehlíng. (11) Nature: slightly alkaline. (12)) Color: Vito needle crystals. , (13) R, -value (silica gel, Tokyo Kusei Co., silica gel. F): n-bufonol: öffíksyrczvoften (6: 1: 1); Rf value = 0.36 n-butunol: concentrated aqueous ammonium water solution (10: 0.5: 2); Rf ~ vörde = 0.27 n-propunol: koncenfrerud vottenlösníng ov ommoniukzvntten (10: 1: 1); Rf value = 0.41 acetone water (10: 1); Rf value = 0.34 efylacetate methanol: the weapon (10: 2: 1); Rf value = 0.21 chloroform-methanol: acetic acid (10: 2: 1); RF value = 0.17 (14) Chemical structure: - NH, N k, N Ho-Hzc H 'OH OH' The biological properties of neplanocin are as follows. (1) Growth inhibitory activity on plant pathogenic fungi; 100 μg / ml solution of neplanocin A on an agar plate with Helminthosporium oryzae M 0306 shows an inhibition zone of 18.9 mm in diameter. (2) Anfi tumor tumor: Murine leukemia L-1210 tumor cells (106 cells) were inoculated intraperironeally into mice and one day after transplantation, neplanocin A (0.16 mg / kg, 0.32 mg / kg each, respectively). 0.63 mg / kg, 1.25 mg / kg, 2.5 mg / kg and 5.0 mg / kg, respectively, were administered infraperironeal once daily for 5 days. 10 mice in a control group of 7 mice in each treated group were used. The result is shown in Fig. 4. After 15 days of observation, the mean survival time of the control group was 7.4 days. Life extension 7903672-9 10 15 20 25 30 compared to the control group was observed for the drug-treated groups, ie 158% for 0.16 mg / kg, 170% for 0.32 mg / kg, no mortality was observed for 2.5 mg / kg and 5 mg / kg.- groups- HG, As for L-1210, remarkable prolongations of life were observed against Ehrlich ascites tumor, Sarcoma-180, P-388 leukemia-bearing mice and rat-Yoshida sarcoma when the mass was administered- des neplanocin A. (3) Acute toxicity: LD50: 13.7 mg / kg (ip, mouse) No mortality was observed when administered intraperitoneally for 14 days at 5 mg / kg / day.

Föreskrifter och doser: För terapi av akut leukemi skall läkemedlet administreras intra- venöst i en dosform av från 5-20,mg/dag upplöst i fysiologisk koksaltlösning en gång om dagen under 7 dagar. Neplanocin A är också effektivt för terapi av kronisk leukemi, gastroentero carcinom, pulmcnärt carcinom, uterin cancer, cancer mammae och malign lymfatisk leukemi.Prescriptions and doses: For the treatment of acute leukemia, the drug should be administered intravenously in a dosage form of from 5-20 mg / day dissolved in physiological saline solution once a day for 7 days. Neplanocin A is also effective in the therapy of chronic leukemia, gastroentero carcinoma, pulmonary carcinoma, uterine cancer, breast cancer and malignant lymphatic leukemia.

Neplanocin A kan användas i form av ett fysiologiskt acceptabelt salt av en mineralsyra eller en organisk syra, såsom hydroklorid- en, acetatet, tartratet, citratet eller succinatet.Neplanocin A can be used in the form of a physiologically acceptable salt of a mineral acid or an organic acid, such as the hydrochloride, acetate, tartrate, citrate or succinate.

Neplanocin C är en svagt basisk substans med följande fysiologiskt kemiska egenskaper. (1) Elementäranalys: 10 15 20 25 30 7903672-9 Erhållet: C; 47,59% H; 4,64 X N; 25,10% Beräknat: C; 47,311 H; 4,66% N; 25,09 X (2) Molekylvikt (beräknat ur masspektral ana1ys): 279 [fetruacetyl neplanocín C: 447] (3) Molekylformel : C11H]3N504 (4) Smöltpunkt: (bestämd gènom termisk onalys): 22ó°C (sönderdeln.) (5) specifik vr13ning= [6]21 = _43,6° (6= 0,67%, H20) (6) Ultrnvioleff absorpfíogsspekfrumz (16/ug/ml) i H20§')\ max = 263 nm, E1% = 538,9 (visad i fíg.5) 1 cm vid pH-värde 3:>\m0x= 259 nm, E1% 510,8 1 cm vid pH_v3rd6 10=Å m6x=263 nm, 51% 534,4 1 cm (7) Infrarött ußšorptíonsspektrum (KBr): visat i fig.6.Neplanocin C is a weakly basic substance with the following physiological chemical properties. (1) Elemental analysis: 10 15 20 25 30 7903672-9 Obtained: C; 47.59% H; 4.64 X N; 25.10% Calculated: C; 47,311 H; 4.66% N; 25.09 X (2) Molecular weight (calculated from mass spectral analysis): 279 [Fetruacetyl neplanocin C: 447] (3) Molecular formula: C11H] 3N504 (4) Melting point: (determined by thermal analysis): 22 ° C (dec.) (5) specific vr13ning = [6] 21 = _43.6 ° (6 = 0.67%, H 2 O) (6) Ultrinvioleff absorbing phosphorous cell (16 μg / ml) in H 2 O 2 ') \ max = 263 nm, E1% = 538.9 (shown in Fig. 5) 1 cm at pH value 3:> \ m0x = 259 nm, E1% 510.8 1 cm at pH_v3rd6 10 = Å m6x = 263 nm, 51% 534.4 1 cm (7) Infrared absorption spectrum (KBr): shown in Fig. 6.

Ab56rp116nsb6nd vid 3450-3100, 2920, 2740, 2630, 1630, 1630, 1600, 1560, 1500, 1460, 1420, 1330, 1360, 1330, 1300, 1240, 1200, 1170, 1100, 1050, 1020, 960, 920, 900, 330, 330, 730, 720, 630 6m'1. (8) Kürnspínnresonansspektrum: visat 1 fig.7. (inre standard DSS í Deuterium dimefylsulfoxíd, 100 MHz). (9) Solubilífefz 4 Löslig 1 vatfen, dímetylsulfoxid, dímetylformamíd.Ab56rp116nsb6nd vid 3450-3100, 2920, 2740, 2630, 1630, 1630, 1600, 1560, 1500, 1460, 1420, 1330, 1360, 1330, 1300, 1240, 1200, 1170, 1100, 1050, 1020, 960, 920, 900, 330, 330, 730, 720, 630 6m'1. (8) Grain Spin Resonance Spectrum: shown in Fig. 7. (internal standard DSS in Deuterium dimethyl sulfoxide, 100 MHz). (9) Solubilífefz 4 Soluble 1 vatfen, dimethylsulfoxide, dimethylformamide.

Olöslíg: etylacefai, kloroform, bensen, hexan. (10) Förgreaktíon: Positiv avfärgning av kalíumpermanganot, periodat och Tollens.Insoluble: ethyl acetate, chloroform, benzene, hexane. (10) Pre-reaction: Positive decolorization of potassium permanganate, periodate and Tollens.

Negafív jörn(III)k1oríd, ninhydrin, anisaldehyd och Nolísch. (11) Natur: svagt basísk. (12) Fürg:vít (färglösa, plana kristaller) 7903672-9 10 15 20 25 30 (13) Rf-värde (kíselsyragel-flückfilm, Tokyo Kaseí Co., kisel- syragel f): I n-butanolz öttíksyra: vatten (6:1:1) ; Rf-värde = 0,33 n~butanol: koncentrerad vattenlösníng av ammoníakzvatten (1o=o,§=2); R,-värde = 0,19 n-propanol: koncentrerad vattenlösning av ammoníakzvatten (10:1:1); Rf-värde = 0,30 aceton: vatten (10:1); Rf-värde = 0,43 efylacefat:metanal:vaften (10:2:1); Rf-värde = 0,27 kloroformzmetanol:üttíksyra (10:2:1); Rf-värde = 0,20 (14) Kemisk Struktur: H0 "O nan-ou eDe biologiska egenskaperna hos neplanocín C är följande: (1) Tillvöxtínhíberande aktivítef på vöxfpafogena svampar: 100 ug/ml lösning, pappersskivor med en diameter av 7 mm; Helmínthosgorium orxzae M 0306: 31,4 mm (ínhíbítíonszon) Cladasgoríum herbarum M 4278: 14,0 mm ( " ") Ålternaria kíkuchíana M 4588: 12,0 mm ( " ") (2)_Akut toxicítet: LD50:55 mg/kg (íntraperifonealt mus) 10 15 20 25 30 7903672-9 Neplonocín C kan användas i form ev fysio1ogískt_ucceptobelt salt av en minerolsyro eller organisk syra, såsom hydroklorid, ocefut, furfraf, cítruf eller succíncf. (3) Anti-tumöruktívífef:_ Neplonocin C inhiberor fullständigt tillväxt av murin leuke- mísk cellkultur av L-5178Y vid koncentrationen av 0,8/ug/ml in vítro.Negative iron (III) chloride, ninhydrin, anisaldehyde and Nolish. (11) Nature: slightly alkaline. (12) Color: white (colorless, flat crystals) 7903672-9 10 15 20 25 30 (13) Rf value (silica gel flux film, Tokyo Kaseí Co., silica gel f): In n-butanolz acetic acid: water ( 6: 1: 1); Rf value = 0.33 n ~ butanol: concentrated aqueous solution of ammonia water (10 = =, § = 2); Rf value = 0.19 n-propanol: concentrated aqueous ammonia water (10: 1: 1); Rf value = 0.30 acetone: water (10: 1); Rf value = 0.43 ethyl acetate: methanal: vaften (10: 2: 1); Rf value = 0.27 chloroform-methanol: acetic acid (10: 2: 1); Rf value = 0.20 (14) Chemical Structure: H0 "O nan-ou eThe biological properties of neplanocin C are as follows: (1) Growth inhibitory activity on growth pathogenic fungi: 100 ug / ml solution, 7 mm diameter paper discs Helminthosgorium orxzae M 0306: 31.4 mm (inhibition zone) Cladasgorium herbarum M 4278: 14.0 mm ("") Ålternaria kíkuchíana M 4588: 12.0 mm ("") (2) _Act toxicity: LD50: 55 mg / kg (intraperiphoneal mouse) Neplonocin C can be used in the form of any physiologically-acceptable salt of a mineral acid or organic acid, such as hydrochloride, ocephut, furfraf, citruf or succincf. (3) Anti-tumor octopilophine: inhibits complete growth of murine leukemic cell culture of L-5178Y at the concentration of 0.8 ug / ml in vitro.

Neplunocin C har en lívsförlüngonde effekt på 131 1 i T/C (behandlade/konfroll) mot murín leukemi L-1210 när den admini- streras introperitoneolt med en dos av 10 mg/kg.Neplunocin C has a life-prolonging effect of 131 l in T / C (treated / control) against murine leukemia L-1210 when administered intraperitoneally at a dose of 10 mg / kg.

Neplanocín D har följande fysikalisk?-kemiska egenskaper. (1) Elemenfuronolys: C; 49,701, H; 4,64%, N; 21,201 (2) molekylviktz (beräknat ur mosspektro1onolys): 264 (3) molekylformel: C,,H12N¿04 (4) sma1fpun| (5) Specifík vridning: [a]23 = -145° (c= o,6%, H20) (6) Ulfrovioleft obsorptíogsspektrum: i vatten visat i fíg.8, )\mux=251 nm, E1% = 479 1 cm í sur vatfenlösníng: >\nmx = 251 nm, E]% = 453 1 cm i clkolísk vutten1ösníng:§ max = 256 nm, E1% = 508 1 cm (7) Infraröd ubsorptíonsspekfrum (KBr): visat í fíg.9.Neplanocin D has the following physicochemical properties. (1) Elemental furonolysis: C; 49,701, H; 4.64%, N; 21,201 (2) Molecular weight (calculated from moss spectrolysis): 264 (3) Molecular formula: C ,, H12N¿04 (4) sma1fpun | (5) Specific rotation: [α] 23 = -145 ° (c = 0.6%, H 2 O) (6) Ulfrovioleft absorption spectrum: in water shown in fig.8,) \ mux = 251 nm, E1% = 479 1 cm in acidic hydrogen solution:> \ nmx = 251 nm, E]% = 453 1 cm in cyclic hydrogen solution: § max = 256 nm, E1% = 508 1 cm (7) Infrared absorption spectroscopy (KBr): shown in fig.9.

Absorpfíonsbond vid 3420-3120, 2940-2880, 1680, 1580, 1545, 1510, 1440, 1390, 1305, 1210, 1110, 1075, 1040, 1000, 990, 975, 900, 845, 780 cmf1. 79036720-9 10 15 20 25 30 (8) Kärnspinnresonunsspektrum: visat i fig.10. (inre standard DSS, i Deuterium dimetylsulfoxid, 100 MHz) (9) Löslighet: Löslig í vatten, dimetylsulfoxid, dimetylformumid, öttiksyra och pyridin.Absorption bond at 3420-3120, 2940-2880, 1680, 1580, 1545, 1510, 1440, 1390, 1305, 1210, 1110, 1075, 1040, 1000, 990, 975, 900, 845, 780 cmf1. 79036720-9 10 15 20 25 30 (8) Nuclear spin resonance spectrum: shown in Fig.10. (internal standard DSS, in Deuterium dimethylsulfoxide, 100 MHz) (9) Solubility: Soluble in water, dimethylsulfoxide, dimethylformumide, acetic acid and pyridine.

Olöslígz efylccetot, kloråform, bensen och hexun. (10) Fürgreoktion: (Positiv: avfärgning av kulíumpermcngunuf och periodat oxidation.Insoluble in ethyl acetate, chloroform, benzene and hexane. (10) Fürgreoktion: (Positive: decolorization of collimation permutation and periodic oxidation.

Negativ: ninhydrín, Fehling och jörn(III)klorid. (11) Färg; vita nålkristoller. (12) Rf~vörden (kiselgel, Tokyo Kasei Co., kíselgel f): n-butanol: üttíksyrc:vuften (6:1:1); Rf-värde = 0,27 n-butunol: koncentrerad vuttenlösning ummoniukzvctten (10:O,5:2): Rf~vörde = 0,07 n-proponol: koncenfrerad vctfenlösning, ummoniokzvatten (10:1:1); Rf-vörde = 0,18 ocefonzvutten (10:1); Rf-värde = 0,33 (13) Kemisk struktur: H0 H0 DZH-OH _... <: Nššï . _ N HU Akut toxicitef för neplunocín-D enligt följande.Negatives: ninhydrin, Fehling and ferric chloride. (11) Color; white needle crystals. (12) Rf ~ vörden (silica gel, Tokyo Kasei Co., silica gel f): n-butanol: üttíksyrc: vuften (6: 1: 1); Rf value = 0.27 n-butunol: concentrated aqueous solution ummoniukzvctten (10: 0, 5: 2): Rf ~ value = 0.07 n-proponol: concentrated viftfen solution, ummoniokz water (10: 1: 1); Rf value = 0.18 ocefonzvutten (10: 1); Rf value = 0.33 (13) Chemical structure: H0 H0 DZH-OH _... <: Nššï. N HU Acute toxicitif for neplunocin-D as follows.

Ingen död observerades när 100 mg/kg neplonocin D udminisfre- rudes íntruperítoneult.till mus. <7 7903672-9 Hcplanøcín B har följande fysika1isk1-kemiska egenskaper: (1) (2) (3) (H) (5) ucs) (7) Elementäranalysz C N7,hu 1; H 0,63 E; N 25,07 1.No death was observed when 100 mg / kg neplonocin D was administered intruperitoneult to mouse. <7 7903672-9 Hcplanøcín B has the following physic1-chemical properties: (1) (2) (3) (H) (5) ucs) (7) Elemental analysis C N7, hu 1; H 0.63 E; N 25.07 1.

Motvikt: (beräknad ur masspektroanalys) 279.Counterweight: (calculated from mass spectral analysis) 279.

Molekylformelz Cl1H13N50q.Molecular formula Cl1H13N50q.

Smältpunktz 269-272°C (sönderdelning). 2H Optisk vridning: (0<)D = - 3,5 (c = 1,0 ß dimetyl-sulfoxid).Melting point 269-272 ° C (dec.). 2H Optical rotation: (0 <) D = - 3.5 (c = 1.0 ß dimethyl sulfoxide).

Ultraviolett absorptíonsspektrum: 1 H20: visar 1 fig. 11,1max = 202 mm, 21* = 530,0 i surt vatten: 1 cm (en droppe 0,1N H01) >\max = 259 mm, râæcm = 500,7 - i alkaliskt vatten: 1% (en arappe 0,1 N Naou) Amax = 203 mm, nl cm = 522,2 Infrarödabsorptionsspektrum (KBr): visat i fig. 12.Ultraviolet absorption spectrum: 1 H 2 O: shows 1 Fig. 11.1max = 202 mm, 21 * = 530.0 in acidic water: 1 cm (one drop 0.1N H01)> \ max = 259 mm, râæcm = 500.7 - in alkaline water: 1% (a monkey 0.1 N Naou) Amax = 203 mm, nl cm = 522.2 Infrared absorption spectrum (KBr): shown in Fig. 12.

Absorptionsband vid 3380, 3280, 3100, 2920, 2880, 2700, 1700, 1610, 1570, 1520, 1000, 1020, 1300, 1350, 1300, 1250, 1220, 1170, 1100, 1100, 1000, 1030, 1020, 900, 970, 070, 000, 790, 730, 710 cm' (8) (9) (10) (11) (12) 1 Kärnspínnresonansspektrum: (visas i fig. 13) (inre standard DSS, i deuteríumdimetylsulfoxid, 100 MHz) Löslighet: Löslig: vatten, dimetylsulfoxíd _ Olösligz etylacetat, kloroform, bensen och etyleten.Absorption band at 3380, 3280, 3100, 2920, 2880, 2700, 1700, 1610, 1570, 1520, 1000, 1020, 1300, 1350, 1300, 1250, 1220, 1170, 1100, 1100, 1000, 1030, 1020, 900, 970, 070, 000, 790, 730, 710 cm -1 (8) (9) (10) (11) (12) 1 Nuclear magnetic resonance spectrum: (shown in Fig. 13) (internal standard DSS, in deuterium dimethyl sulfoxide, 100 MHz) Solubility : Soluble: water, dimethylsulfoxide - Insoluble ethyl acetate, chloroform, benzene and ethylene.

Färgreaktion1 Lätt positiv: avfärgning av kaliumpermanganat.Color reaction1 Slightly positive: decolorization of potassium permanganate.

Negativ: ninhydrin, Molish och anisaldehyd.Negatives: ninhydrin, Molish and anisaldehyde.

Natur: svagt basisk.Nature: slightly alkaline.

Färg: vit (vita flakformiga kristaller). /\ 7903672-9 10 (13) Rf-värde: (kíselgel f , Tokyo Kasei Co.) n-butanolz ättíksyra 2 vatten (6:l:1) Rf_ = 0,N2 n-butanolz konc vattenl. av ammoniak:vatten (l0:0,5:2) Rf = 6,27 n-propanol: konc. vattenlösn. av ammoniakzvatten (l0:1:l) Rf = 9,Hl aceton: vatten (10:l)} Rf = 0,U8 (lä) Strükturforpel NH2 k.. N HO-Hvil OII OH 10 15 20 25 30 79Û3672'9 :Il Neplunocin F hur följande fysikoliskt-kemiska egenskaper. (1) Elemenförunnlysz C; 48,741, H; 4,83fl, N; 25,71¶ (innehål- ler kristullisotionsvotten) (2) Molvikt (beräknad vr m0sspektro1onolys): 268 (s) 11°1e1 (4) smaufpunkf; 22a°c (safiaeraaning) (s) spgcmk vridning; nå' = 8,8 (.~.=0,8z, 820) (6) Ultroviolett obsorptíonsspektrum: _ i H20: visat i fíg.1f, Ä max: 263 nm, E1$cm=548,7 i surf yutten (en droppe av 0,1 N HC1): Å|nux=2ÖO nm, EI; = 52711 i ulkuliskt vatfen (en droppe 0,1 N No0H):Åm0X=2Ö3nh]E: Ücm = 53118 Cm (7) Infrurötf obsorptíonsspektrum (KBr): visat i fíg.15, Absorpfionsbund vid 3320, 3210, 2920, 1650, 1610, 1580, 1480, 1420, 1880, 1840, 1810, 1270, 1220, 1180, 1110, '1070, 1020, 980, 900, 840, 800, 7:10 8.1.4. (8) Körnspínnresonønsspektrum:_visot i fíg.16. (inre standard DSS, i Deuterium dimefy1su1foxid,100.MHz) (9) Löslighetf Löslíg i vatten, dimetylsulfoxid och öttiksyru.Color: white (white flaky crystals). (13) Rf value: (silica gel f, Tokyo Kasei Co.) n-butanolz acetic acid 2 water (6: 1: 1) Rf_ = 0, N2 n-butanolz conc waterl. of ammonia: water (10: 0.5: 2) Rf = 6.27 n-propanol: conc. aqueous solution. of ammonia water (10: 1: 1) Rf = 9, H1 acetone: water (10: 1)} Rf = 0, U8 (lä) Structure structure NH2 k .. N HO-Hvil OII OH 10 15 20 25 30 79Û3672'9 : Il Neplunocin F how the following physicochemical properties. (1) Elemenförunnlysz C; 48,741, H; 4.83fl, N; 25.71¶ (contains crystalline isotope mites) (2) Molecular weight (calculated in mouse spectrolysis): 268 (s) 11 ° 1e1 (4) smaufpunkf; 22a ° c (sa fi aeraaning) (s) spgcmk twist; now '= 8.8 (. ~. = 0.8z, 820) (6) Ultraviolet observation spectrum: _ in H20: shown in fig.1f, Ä max: 263 nm, E1 $ cm = 548.7 in surf yutten ( a drop of 0.1 N HCl): Å | nux = 2ÖO nm, EI; = 52711 in the ulcerative fluid (one drop 0,1 N NoOH): Åm0X = 2Ö3nh] E: Ücm = 53118 Cm (7) Infrared red absorption spectrum (KBr): shown in fig.15, Absorption bond at 3320, 3210, 2920, 1650, 1610, 1580, 1480, 1420, 1880, 1840, 1810, 1270, 1220, 1180, 1110, '1070, 1020, 980, 900, 840, 800, 7:10 8.1.4. (8) Körnspínnresonønspektrum: _visot i fíg.16. (internal standard DSS, in Deuterium dimefyl sulfoxide, 100 MHz) (9) Solubility Soluble in water, dimethyl sulfoxide and acetic acid.

Olöslig i etylocetut, kloroform, bensen och etyleter. (10) Förgreokfíun: Lötf positiv , avfärgning av kuliumpermangunuf.Insoluble in ethyl acetate, chloroform, benzene and ethyl ether. (10) Pre-treatment: Lötf positive, decolorization of potassium permanganuf.

Negafiv: jörn(III)k1orid, ninhydrin øch Fehlíng. (11) Nufur: svagt bosisk. _ (12) Färg: vit (vita ,p1unu kristaller). (13) Rf-värde (kiselgel f, Tokyo Kcsei Co.): n-buiunolz öttiksyrozvutfen (6:1:1); Rf=0,51 9 n-ßutonolz koncentrerad vattenlösning av nmnoníuk:vutten _ (10:O,5:2); Rf-värde = 0,43 79os672¿9 12 n-prapanol: koncentrerad vattenlösning av ammaníakzvatten (10:1:1); Rf-vörde = 0,59 aceton: vatten (10:1); Rf-värde = 0,48 (IQ) Kemisk struktur: 10 BOHZC 15 Néplanocin-B och*-F har följande. fysikaliskt kemiska egenskaper. (1) Åküt toxicitet: Ingen mortalitet observerades vid intraperitoneal administration till mus på 100 mg/kg av neplanocin-B eller -F. 20 _(2) üelltillvöxtínhiberande aktivitet: Tillväxt av muslymfoma celler L 5178Y kultur inhiberades vid en koncentration av 0,8/ug/hl neplanocin B och 2q/ug/hl neplanocin F. 25 , _ (3) Anti-tumöraktivítet: Neplanocin B hade en livsförlöngande effekt av 1421 i T/C (behandlad/kontroll) mot murin-leukemi L-1210 när den administre- rades intraperitonealt f med en dos av 50 mg/kg. 30 '(4) Annan aktivitet: Neplanocin B har en antidepressiv aktivitet. 10 15 20 25 30 7903672-9 13 Ncplanocin-bildande mikroorganismer isolerade: från ett jord- prov insamlat på ett lökfölt i Niigato-ken, Japan och hör till genus Ampullariella. Stammen betecknas Åmpullariella cp.A 11079 och har deponerats i den permanenta samlingen vid Institute for Microbial Industry and Technology , Japan com FERM-P nr 4494.Negative: iron (III) chloride, ninhydrin and Fehlíng. (11) Nufur: slightly bosic. _ (12) Color: white (white, p1unu crystals). (13) Rf value (silica gel f, Tokyo Kcsei Co.): n-buiunolz acetic acid (6: 1: 1); Rf = 0.51 n-ßutonolz concentrated aqueous solution of nmnoníuk: vutten _ (10: 0, 5: 2); Rf value = 0.43 79os672¿9 12 n-prapanol: concentrated aqueous solution of ammonia water (10: 1: 1); Rf value = 0.59 acetone: water (10: 1); Rf value = 0.48 (IQ) Chemical structure: BOHZC Néplanocin-B and * -F have the following. physicochemical properties. (1) Åküt toxicity: No mortality was observed during intraperitoneal administration to mice at 100 mg / kg of neplanocin-B or -F. (2) Growth inhibitory activity: Growth of mouse lymphoma cells L 5178Y culture was inhibited at a concentration of 0.8 μg / hl neplanocin B and 2 μg / hl neplanocin F. 25, (3) Anti-tumor activity: Neplanocin B had a life-prolonging effect of 1421 in T / C (treated / control) against murine leukemia L-1210 when administered intraperitoneally at a dose of 50 mg / kg. 30 '(4) Other activity: Neplanocin B has an antidepressant activity. 10 15 20 25 30 7903672-9 13 Ncplanocin-forming microorganisms isolated: from a soil sample collected on an onion field in Niigato-ken, Japan and belonging to the genus Ampullariella. The strain is designated Åmpullariella cp.A 11079 and has been deposited in the permanent collection at the Institute for Microbial Industry and Technology, Japan com FERM-P no. 4494.

Ampullariella sp. A 11079 NRRL l1H51 har följande taxono- miska egenskaper.Ampullariella sp. A 11079 NRRL 11H51 has the following taxonomic characteristics.

(I) Morfologiska egenskaper: Observationer på aorganiskt salt-stärkelse-agarmedium vid 30°C under 10-15 dagars kultur var följande.(I) Morphological properties: Observations on inorganic salt-starch agar medium at 30 ° C during 10-15 days of culture were as follows.

Stammen A 11079 gav eü böjt och granat substratmycelium, 0,5-0,8/um i diameter och ett autvecklat luft-mycelium.Strain A 11079 gave a bent and garnet substrate mycelium, 0.5-0.8 .mu.m in diameter and an undeveloped aerial mycelium.

Sporongiofor-tillväxt på substrat mycelium hade sporongia och formen has sporangium var cylindrisk eller flaskfarmad och uppmöttes från 5-15 x 10 - 25/um. Många sporangi-sporer var ordnade i parallella kedjor i sporangium. Sporangiesporerna hade en rörlighet genom en knippe polöra flagella i vatten och är stavformade och möter från 0,5 - 1,0 x 1,0 - 2,0/um.Sporongiophorous growth on substrate mycelium had sporongia and the form has sporangium was cylindrical or bottle-shaped and was measured from 5-15 x 10 - 25 .mu.m. Many sporangia spores were arranged in parallel chains in the sporangium. The sporangia spores had a mobility through a bunch of polar flagella in water and are rod-shaped and meet from 0.5 - 1.0 x 1.0 - 2.0 / um.

(II) Sammansöttning av diaminopimelinsyra: Diaminopimelinsyra bestämdes vid hel cellanalys i meso- och _ hydroxityp.(II) Composition of diaminopimelic acid: Diaminopimelic acid was determined by whole cell analysis in meso- and hydroxy-type.

(III) Kulturella egenskaper på olika media: Observatianer av kulturella egenskaper på olika media vid 30°C under 20 dagar visas i tabell 1. Inget luftmycelium observerades *x utom en lött bildning av en' icke utvecklad tillväxt av luft- ' 7903672-9 10 15 20 25 mycelium på oorganiska salf-siörkelse-agarmedium och veíemjöls- agarmedium. Ångivanáet av färg baserar sig på definitionen i “Color Harmony Manual", fjärde upplagan, 1958, publicerad av Container Corpora- fion of America.(III) Cultural properties on different media: Observations of cultural properties on different media at 30 ° C for 20 days are shown in Table 1. No aerial mycelium was observed * x except a loose formation of an 'undeveloped growth of air-' 7903672-9 Mycelium on inorganic ointment agar medium and whey flour agar medium. The rendering of color is based on the definition in the "Color Harmony Manual", fourth edition, 1958, published by the Container Corporation of America.

(IV)_Fysio1ogiska egenskaper: De fysiologiska egenskaperna illustreras nedan. 1) Utnyttjande av kolkëllorz (+: positiv -: negativ) Kolkölla utnytfjande Kolkölla utnyttjande Lparabinas + salicín + D-xylos + D-galaktos D-glukos + glycerol D-frukios + L-sorbas - D-mannos + frehalos + D-mannitol + a-melibios - ínosiiol - D-ribas - L-famnas + maltos + saakaras + melezifos - B-laktos - D-cellobias + paffinos_ - D-sorbitol - - cellulas - dulcitol - sförkelsep + ---- s 1 9 _ ut. wa ^w»mv Hwcox - m^unmv ~caun¶H:m | vomnwwounso »www umcm mmflwv homo mmcmnmz ww . mwwwæs xfip ac Eamvos cosmxoïv W/ wwmcw finwwv naëoß I mmflmumw umnm lfiwwøs fiflww umfiww ammo +om+w:|nox:H0 _ x^~ ac Eawwuë cosuxolv vwmcw Anwwv union I nmumuww. omcm mwwwmzflwvos homo «on+mc|Houoo>Ho , _ _ . nom x^mN ac Eamwøs coemxozv .ñmxxxwv tshßššš 38 .ämåäwcux åfi S? mfiåsfløvw... ba.. +v_.afi.~tw.?...°v_=~w m=«c¶H«mxuu> _ ^onmV . comwc .m«++wE .umv vowumwounfio væmfi ¶wmflm*owmæww»^ocov mono* ommflmw .ufluwuë Hama vom homo +HoE|wwwñ wwmcfl unfios wawflnfiupmv vomumwuuneo Eamvue vom homo m:>umuu>o: _ mmvwws . wwmcm fiumnv vumumwouneo uwmfl omcw lfiuvoë Ham» mmflww homo cæmou>h Aomwv . mwvwws homo om tea wmcohoàïtunfišuv Rakävše.. .än 42:e 23 »om åäzwïifiä twvamflå mwwvwë 1 . +ømc« Aoumv owonHuwn|^nwNv :sann omcm ufiouws wflwu mmfimv uomo c«mouonwo|Houwu>Hø . _ “aims . vwmcw fiouwv omonanmnl ^nwNV :neon ohmmc |~m¶wE fiflwæ mwflww homo cmmouomwomwoxafiø 1.23 mmtæa vømcm Mnmcoaws wmwfi | Aounv Omouflumn ouwø: lfiwwmë Hflma mmflmv homo vouwmclnouoxuom +cwEmMa vmflfinm s:««uu>E~ou«wnan mn mumw Eammcouonm vxm>HH«P Eamwoz ; uowvuë oxmfio wa uøaoxwcmmø ofifiuuavfiox .f flflmnoh u v. .ou n:«xH«3 4 wsomfiwï .^mmß_v ~«_ .uw .H°fl«~*u°m .w XXXX .^ß@@.V .~. .H°~«> .w XXX .flnwmpv vw .NN ..u°m .How .H~@=°««= uxnwfiw .w xx . =»-~u>s°=««°< ~;»= ..<.w .==Emxu=x ,~.~v . «c:«nx«Hwwc ñøpnvfiwcoxa ^o«nvvomum»~mEo1 umcw vom xxxx nomm cwwmux hflnvv tsh߶¶>~x vxkwe Avfimv wumhmwukßsu +«w~ =m=« mmfimw ~H«« m«««»eH@vwe «°m°=«wm «»mfi|=°«@»m um. «c:»nx«Hmwc ^umnv+«> ««uE1^omnv cnnanwmfl omcm . mmfiww xxxx Homo c«wou>P 1 wwmcm Aucmaopnv vownmwuußsu Damm: vom Hfl««.m«v«mEHwvmE koma vxonaxøvnmm mxmamflu 1 ^manv flupmv wnmnmwounsu . caupwflnm vxwfin |^u«nvvomumwuunEn vvmfi oumwc vom HH«« mmævmsfiowme ummo_wxmmuNu ucownum :wš ¶ _ . _ - xfion Hc Eawvuë cusmxozv cnkprfino wxwfin Awcnv N0ao+|^wnmv¶omuwwonnEu umcw mmvwwëfluvms Hawa vom namn w+w:cwm Amßwomnnv _ xñww ac Eamvwë cusmxoïv cnunwfiaw ^wmnvflmEox|^w~nv wumnmwfimcox cmzm mwvawsfiwwwë Hawa woo homo mcomumëm æcvêwfin +m«HmmH E:mHøo>E+uu«mp:w mn mmm» Eammcouønm +xw>~Hwh ESMÜUE 79Û3672~9 .nauow .P Hflmßoh 10 15 20 25 30 "fi 7903672-9 1o_4s°c. 3) Verkan på skummjölk: peptonisering och koogulering positiv. 2) Tillväxt-temperatur : 4) Melaminproduktion: Tyrosín-agarmedium: negativ.(IV) Physiological properties: The physiological properties are illustrated below. 1) Utilization of carbon monoxide (+: positive -: negative) Utilization of carbon dioxide Alkylene utilization Lparabinas + salicin + D-xylose + D-galactose D-glucose + glycerol D-fructose + L-sorbas - D-mannose + frehalose + D-mannitol + a-melibios - ynosiiol - D-ribase - L-famnas + maltos + saakaras + melezifos - B-lactose - D-cellobias + paffinos_ - D-sorbitol - - cellulas - dulcitol - sförkelsep + ---- s 1 9 _ out. wa ^ w »mv Hwcox - m ^ unmv ~ caun¶H: m | vomnwwounso »www umcm mm fl wv homo mmcmnmz ww. mwwwæs x fi p ac Eamvos cosmxoïv W / wwmcw fi nwwv naëoß I mm fl mumw umnm l fi wwøs fifl ww um fi ww ammo + om + w: | nox: H0 _ x ^ ~ ac Eawwuë cosuxolv vwmcw Anwwv union. omcm mwwwmz fl wvos homo «on + mc | Houoo> Ho, _ _. nom x ^ mN ac Eamwøs coemxozv .ñmxxxwv tshßššš 38 .ämåäwcux å fi S? m fi ås fløvw ... ba .. + v_.a fi. ~ tw.?...°v_=~w m = «c¶H« mxuu> _ ^ onmV. comwc .m «++ wE .umv vowumwoun fi o væm fi ¶wm fl m * owmæww» ^ ocov mono * omm fl mw .u fl uwuë Hama vom homo + HoE | wwwñ wwmc fl un fi os waw fl n fi upmv vomumwuuneu homo>>:. wwmcm fi umnv vumumwouneo uwm fl omcw l fi uvoë Ham »mm fl ww homo cæmou> h Aomwv. mwvwws homo om tea wmcohoàïtun fi šuv Rakävše .. .än 42: e 23 »om åäzwïi fi ä twvam fl å mwwvwë 1. + ømc «Aoumv owonHuwn | ^ nwNv: sann omcm u fi ouws w fl wu mm fi mv uomo c« mouonwo | Houwu> Hø. _ “Aims. vwmcw fi ouwv omonanmnl ^ nwNV: neon ohmmc | ~ m¶wE fifl wæ mw fl ww homo cmmouomwomwoxa fi ø 1.23 mmtæa vømcm Mnmcoaws wmw fi | Aounv Omou fl umn ouwø: l fi wwmë H fl ma mm fl mv homo vouwmclnouoxuom + cwEmMa vm flfi nm s: «« uu> E ~ ou «wnan mn mumw Eammcouonm vxm> HH« P Eamwoz; uowvuë oxm fi o wa uøaoxwcmmø o fifi uuav fi ox .f flfl mnoh u v. .ou n: «xH« 3 4 wsom fi wï. ^ mmß_v ~ «_ .uw .H ° fl« ~ * u ° m .w XXXX. ^ ß @@. V. ~. .H ° ~ «> .w XXX .fl nwmpv vw .NN ..u ° m .How .H ~ @ = °« «= uxnw fi w .w xx. = »- ~ u> s ° =« «° <~;» = .. <. W. == Emxu = x, ~. ~ V. «C:« nx «Hwwc ñøpnv fi wcoxa ^ o« nvvomum »~ mEo1 umcw vom xxxx nomm cwwmux h fl nvv tsh߶¶> ~ x vxkwe Av fi mv wumhmwukßsu +« w ~ = m = «mm fi mw« H «« @ vwe «° m ° =« wm «» m fi | = ° «@» m um. «C:» nx «Hmwc ^ umnv +«> «« uE1 ^ omnv cnnanwm fl omcm. mm fi ww xxxx Homo c «wou> P 1 wwmcm Aucmaopnv vownmwuußsu Damm: vom H fl« «. m« v «mEHwvmE koma vxonaxøvnmm mxmam fl u 1 ^ manv fl upmv wnmnmwounsu. caupw fl nm vxw fi n | ^ u «nvvomumwuunEn vvm fi oumwc vom HH« «mmævms fi owme ummo_wxmmuNu ucownum: wš ¶ _. _ - x f on Hc Eawvuë cusmxozv cnkpr fi no wxw f n Awcnv N0ao + | ^ wnmv¶omuwwonnEu umcw mmvwwë al uvms Nobles vom name w + w: CWM Amßwomnnv _ xñww ac Eamvwë cusmxoïv cnunw fi aw + wmnv al mEox | ^ w ~ nv wumnmw fi mcox cmzm mwvaws fi wwwë Nobles woo homo mcomumëm æcvêw f n + m « HmmH E: mHøo> E + uu «mp: w mn mmm» Eammcouønm + xw> ~ Hwh ESMÜUE 79Û3672 ~ 9 .nauow .P H fl mßoh 10 15 20 25 30 "fi 7903672-9 1o_4s ° c. 3) Effect on skim milk: peptonization and coagulation positive 2) Growth temperature: 4) Melamine production: Tyrosine agar medium: negative.

Peptonjöst-jörnagarmedium: positiv. 5) Störkelsehydralys: 6) Cellulósohydrolys: 7) Kaseinhydrolys: positiv. positiv. negativ. 8) Gelatinsmältningz positiv. 9) Tyrosinsönderdelningz negativ. 10) Xantinsönderdelning: negativ. 11) hypoxantinsönderdelning: negativ. 12) H25-bildning: negativ. 13) Nitratreduktion: negativ.Peptone yeast iron agar medium: positive. 5) Starch hydrolysis: 6) Cellulose hydrolysis: 7) Casein hydrolysis: positive. positive. negative. 8) Gelatin meltingz positive. 9) Tyrosine breakdownz negative. 10) Xanthine decomposition: negative. 11) hypoxanthine breakdown: negative. 12) H25 formation: negative. 13) Nitrate reduction: negative.

Enligt ovanstöende taxonamiska data där stammen Å 11079 har sporangia uppbörande sporangiofar tillväxt på ett grenat sub- strat-mycelium, cylindriska eller flaskformade sporangiêr, sporangiosparer arrangerade i parallella kedjor i sporangium,- stavformade sporangiosporer med ett knippe polöra flagellum och meso-diamina-pimelinsyra, vilken stam tillhör genus Ampullariel- lg vid genomgång av "key to the genera of family Actínoplana- ceae " i Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, 8:e upp- lagan, 1974, sid. 707-708. Därför betecknas denna stam Åmpullariella sp. A 11079.According to the above taxonomic data where the strain Å 11079 has sporangia-bearing sporangiophars growing on a branched substrate mycelium, cylindrical or bottle-shaped sporangia, sporangiospar arranged in parallel chains in sporangium, which strain belongs to the genus Ampullariel- lg when reviewing "key to the genera of family Actínoplana- ceae" in Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, 8th edition, 1974, p. 707-708. Therefore, this strain is called Åmpullariella sp. A 11079.

Enligt föreliggande uppfinning tillhandahålles den nya antibiotiska neplanocin-A, -C, -D samt derivaten därav, -B och -F.According to the present invention there is provided the novel antibiotic neplanocin-A, -C, -D and the derivatives thereof, -B and -F.

Ett annat ändamål med föreliggande uppfinning är att tillhanda- hålla antibiotika av neplanacin1gruppen}yi1ka är aktiva mot vöxtpatogena svampar, tumörceller och liknande. 7903672-9 10 15 20 25 30 19.Another object of the present invention is to provide antibiotics of the neplanacin group which are active against plant pathogenic fungi, tumor cells and the like. 7903672-9 10 15 20 25 30 19.

Föreliggande uppfinning heskrives i detalj med hänvisning till bifogade ritningar, dör fig.1 visor ett ultraviolett absorp- tionsspektrum för neplanocin Å, fig.2 visar infraröda absorptions- spektrum för neplanocin A, fig.3 visar körnspinnresonansspektrum för neplanocin A, fig.4 visar effekten av neplanocin A på L~121O leukemi-börande möss, fig.5 visar ultraviolett absorptionsspek- trum för neplanocin C, fig.6 visar infrarödabsorptionsspektrum för neplanocin C, fig.7 visar körnspinnresonansspektrum för neplanocin C, fig.8 visar ultraviolett absorptionsspektrum för neplanocin D, fig.9 visar infrarödabsarptiansspektrum för neplano- cin D, fig.10 visar körnspinnresonansspektrum för neplanocin D, fig.1l visar ultraviolett absorptionsspektrum för neplanocin B, fig.12 visar infrarödabsorptionsspektrum för neplanocin B, fig.13 visar körnspinnresonansspektrum för neplanocin B, fig.14 visar ultraviolett absorptionsspektrum för neplanocin F, fig.15 visar infraröd absorptionsspektrum för neplonocin F och fig.l6 visar körnspinnresonansspektrum för neplanocin F.The present invention is described in detail with reference to the accompanying drawings, Fig. 1 shows an ultraviolet absorption spectrum for neplanocin Å, Fig. 2 shows infrared absorption spectra for neplanocin A, Fig. 3 shows the nuclear spin resonance spectrum of neplanocin A, Fig. 4 shows the effect of neplanocin A on L ~ 121O leukemia-bearing mice, Fig. 5 shows the ultraviolet absorption spectrum of neplanocin C, Fig. 6 shows the infrared absorption spectrum of neplanocin C, Fig. 7 shows the nuclear spin resonance spectrum of neplanocin C, Fig. 8 shows the ultraviolet absorption spectrum of neplanocin D, Fig. 9 shows the infrared absorption spectrum of neplanocin D, Fig. 10 shows the nuclear spin resonance spectrum of neplanocin D, Fig. 11 shows the ultraviolet absorption spectrum of neplanocin B, Fig. 12 shows the infrared absorption spectrum of neplanocin B, Fig. 13 shows the nuclear spectrum Fig. 14 shows ultraviolet absorption spectrum for neplanocin F, Fig. 15 shows infrared absorption spectrum for neplonoc in F and Fig. 16 shows the nuclear spin resonance spectrum of neplanocin F.

Enligt föreliggande uppfinning bildas neplanocinerna vid exempel- vis inokulering av stammen Ampullariella sp. A 11079 NRRL llU5li ett lämpligt nüringsmedium. Odlingen av mikroorganismen kan genomföras på ett antal olika sött, såsom i ett syntetiskt medium eller ett naturligt medium, flytande eller fast kultur.According to the present invention, the neplanocins are formed by, for example, inoculating the strain Ampullariella sp. A 11079 NRRL 11U5li a suitable nutrient medium. The culture of the microorganism can be carried out on a number of different sweeteners, such as in a synthetic medium or a natural medium, liquid or solid culture.

Vid industriell produktion föredrages ett flytande medium. För_ sammansättning av medium kan användas en assimilerbar kolkö1la,e kvövekölla, oorganiskt salt och andra för antibiotiska neplano- cinbildande mikroorganismer. Exempel på kolköllor ör glukos, sackaros, glycerin, löslig stärkelse, melass och liknande.In industrial production, a liquid medium is preferred. For the composition of medium, an assimilable carbon dioxide, nitrogen nitrogen, inorganic salt and other antibiotics forming antibiotic neplanocin can be used. Examples of carbon dioxide are glucose, sucrose, glycerin, soluble starch, molasses and the like.

Assimilerbaro kvöveköllor ör pepton,-majsstöpvötska, sojabön- pulver, köttextrakt, riskli, kaseinhydrolysat, nitrat, ammonium- salt och liknande. Ett oorganiskt salt, såsom natriumklaridh 10 15 20 25 30 7903672-9 fosfat (kalcium, magnesium, jörn(lI) eller mangan) kan också an- vändas. Anti-skummedel som silikonalja eller sojabönolja kan tillsüttas.Assimilate baro nitrogen sources of peptone, corn steep liquor, soybean powder, meat extract, rice bran, casein hydrolyzate, nitrate, ammonium salt and the like. An inorganic salt, such as sodium claride phosphate (calcium, magnesium, iron (II) or manganese) can also be used. Anti-foaming agents such as silicone oil or soybean oil can be added.

För flytande kulturer kan lämpligen kulturen tillföras luftning under ytan. I detta fall väljas odlingstemperaturen för optimal temperatur hos mikroorganismerna lämpligen till 25-3006. Odlings- tiden beror på villkoren och kan vanligen vara 2-4 dagar. pHfvördet i mediet under odlingen regleras lämpligen genom neutralt eller lött surt tillstånd.For liquid cultures, aeration can suitably be added to the culture below the surface. In this case, the culture temperature for optimum temperature of the microorganisms is suitably selected to 25-3006. The cultivation time depends on the conditions and can usually be 2-4 days. The pH of the medium during the cultivation is suitably controlled by a neutral or solder acid state.

Detpå detta sött odlade mediet innehåller antibiatiska neplana- ciner. Isolering av de antibiatiska neplanocinerna kan utföras genom konventionell isolering eller separationsförfaranden för mikroarganism-metaboliter. Emedan neplanociner är svagt basiska ämnen kan de isoleras genom absorption på lämpliga absorptions- medel, följt av eluering med ett lämpligt lösningsmedel. Exempel på absorptionsmedel är aktivt kol, katjonbytareharts, aktivt alu- miniumhydroxid eller kiselsyragel. Elueringslösningsmedel völjes med detanvënda absorptiansmedlet, exempelvis vattenblandbara or- ganiska lösningsmedel som en vattenhaltig metanol, vattenhaltig aceton eller vattenhaltigt dioxan eller sura, alkaliska lösningar eller saltlösningar.This sweet-cultured medium contains antibiotic neplanacins. Isolation of the antibiotic neplanocins can be performed by conventional isolation or separation procedures for microorganism metabolites. Because neplanocins are weakly basic substances, they can be isolated by absorption on suitable absorbents, followed by elution with a suitable solvent. Examples of absorbents are activated carbon, cation exchange resin, activated aluminum hydroxide or silica gel. Elution solvents are selected with the absorbent used, for example water-miscible organic solvents such as an aqueous methanol, aqueous acetone or aqueous dioxane or acidic, alkaline solutions or brines.

Vidare kan neplanocinerna isoleras och renas beroende på den svagt -basiska naturen hos ämnena. Antibiotika absorberas exempelvis på katjonbytarharts som Åmberlite IRC-50 (handelsnamnet från Rahm och Haas Co., USA) eller Dowex 50 (handelsnamn från Dow Chem.Furthermore, the neplanocins can be isolated and purified depending on the weakly basic nature of the substances. Antibiotics are absorbed, for example, on cation exchange resins such as Åmberlite IRC-50 (trade name of Rahm and Haas Co., USA) or Dowex 50 (trade name of Dow Chem.

' Co.,USA) och elueras med lämpliga sura, alkaliska eller saltlös- ningar. 7903672-9 10 _15 20 25 30 En kombination av absorptionsmedel och jonbytorharts kan lämp- ligen utnyttjas för'isolering, eluering och rening av antibio- tika. Exempelvis kan odlingsfiltrotet överföras till ett katjon- bytarharts Amberlite IR-120 (handelsnamn) för att absorbera antibiotika och elueras med en alkalisk lösning, såsom 3,7 N am- moniaklösning i vatten för erhållande av en aktiv fraktion och sedan pH-värdet justerots till neutralt eller svagt basiskt pH absorberas'antibiotika på aktivt kol följt av eluering med 70% metanol. Elueringsvötskan absorberades på en anjonbytarharts Amberlite IRA-410 och eluerodes åter med vatten för uppsamlande av deloktiva fraktionerna. De sammanslagna fraktionerna koncen- trerades för erhållande av orent material och renades slutligen genom kiselsyragelabsorptionskromatografi. Ytterligare rening erhölls genom omkristallisotion. Renheten som ett enda ömne kan provas genom att följa en amältpunkt eller en fläck på vitt papperskromatografi, tunnskiktskromatografi och papper-elektro- fores med 263 nm ultraviolett ljus.Co., USA) and eluted with appropriate acidic, alkaline or saline solutions. 7903672-9 10 _15 20 25 30 A combination of absorbent and ion exchange resin can be suitably used for isolation, elution and purification of antibiotics. For example, the culture filter root can be transferred to a cation exchange resin Amberlite IR-120 (trade name) to absorb antibiotics and eluted with an alkaline solution such as 3.7 N ammonia solution in water to obtain an active fraction and then the pH is adjusted to neutral or weakly basic pH antibiotics are absorbed on activated carbon followed by elution with 70% methanol. The eluent was absorbed on an Amberlite IRA-410 anion exchange resin and eluted again with water to collect the deluctive fractions. The combined fractions were concentrated to give crude material and finally purified by silica gel absorption chromatography. Further purification was obtained by recrystallization ion. The purity as a single substance can be tested by following a melting point or spot on white paper chromatography, thin layer chromatography and paper electrophoresis with 263 nm ultraviolet light.

Neplonocin Å kan syntetiseras ur neplonocin D via neplanocin; D derivat på följande sött.Neplonocin Å can be synthesized from neplonocin D via neplanocin; D derivatives on the following sweet.

Tre hydroxigrupper i cyklopentenringen i neplanocin D skyddas ge- nom reaktion med bensoylklorid. En hydroxigrupp i adeninstruk- turen i neplanocin D omvandlas till en merkaptogrupp genom reak- tion med exempelvis fosforpentasulfid, varefter de skyddade groo- perno för hydroxigrupperna avlägsnas , varvid erhålles neplanacin D-derivat (III). Metylering med metyljodid gav neplanocin“D=” i derivat (IV). Neplanocin D derivatet (IV) behandlades med metanolisk ammoniak för bildning av neplanocin A.Three hydroxy groups in the cyclopentene ring of neplanocin D are protected by reaction with benzoyl chloride. A hydroxy group in the adenine structure of neplanocin D is converted to a mercapto group by reaction with, for example, phosphorus pentasulfide, after which the protected grooperno for the hydroxy groups are removed to give neplanacin D derivatives (III). Methylation with methyl iodide gave neplanocin “D =” in derivative (IV). The neplanocin D derivative (IV) was treated with methanolic ammonia to give neplanocin A.

Vidare acylerades de tre hydraxigrupperna i cyklopentenringen i 2* 79oå672-9 neplonocín D för off skydda genom reokiion med öiiiksyroonhydrid varefter nömndo förening omvondlodes fill neplonocin D-derivat [3] genom 'àeokfion med iionylklorid. Neplonocin D derívotei [3] kon omvnndlos fill neplonocín Å vio neplonocin D derívofei [4] genom behandling med metonollösning ov ommoniok.Furthermore, the three hydroxy groups in the cyclopentene ring were acylated in 2 * 79o 672-9 neplonocin D for off-protection by reaction with hydrochloric anhydride, after which the said compound was converted into neplonocin D derivatives [3] by aeocycling with ionyl chloride. Neplonocin D derivative [3] con omvnndlos fill neplonocin Å vio neplonocin D derivative [4] by treatment with methanol solution ov ommoniok.

Desso reaktioner kon illustreras på följande sött. ( 7903672-9 22 / N N N N a ~--» § B \N ' benzoyl N \ N BZOHZC (I) su _ n > P z S 5 k N N (III) Rep] anocin D derivat za 7903672-9 Q; 1- _ l Nepïanocln A 3 * meianoliaki ammoniak Hon,o on H Neplanocin D derivat.. ' (IV) (2) ou °¿ u N N N š ___-_» § llcplanocin D --°°"*>' š H H öttik§yra- N N 59512 onhydrid - Ae OH: c Acblizß om' unc om: om: [2] Neplanucin D åeriva-nt. ' ß) >- Ncpïanocïn A 79Û3672~9 10 15 20 25 30 714 Fysikaliska kemiska egenskaper hos neplanocin D derivat ör följande.Desso reactions could be illustrated on the following sweet. (7903672-9 22 / NNNN a ~ - »§ B \ N 'benzoyl N \ N BZOHZC (I) su _ n> P z S 5 k NN (III) Rep] anocin D derivative za 7903672-9 Q; 1 - _ l Nepïanocln A 3 * meianoliaki ammoniak Hon, o on H Neplanocin D derivat .. '(IV) (2) ou ° ¿u NNN š ___-_ »§ llcplanocin D - °°" *>' š HH öttik §Yra- NN 59512 onhydride - Ae OH: c Acblizß om 'unc om: om: [2] Neplanucin D åeriva-nt.' Ss)> - Ncpïanocïn A 79Û3672 ~ 9 10 15 20 25 30 714 Physical chemical properties of neplanocin D derivatives are as follows.

I Neplanocin D derivat (III) I (IV) Molvikf _ (beräknad ur masspekfralunalys ) 280 294 flolekylarformel C1]H12N403S C12H14N403S smanpunkf 26o-2 deln.) . 2 - [a]D3 = -141,7 I (c=Û, 7, H20) Specifik_vridning - Ultravioleti absorpfions- 226 nm âââ nm_ Fpektrum (i H20) 324 nm 295 Hm . flm Följande exempel belyser föreliggande uppfinning men ör icke be- grönsande.e Exemgel l 100 ml av efi vattenbaltigt medium (pH-värde 6,5) innehållande glykas 2%, stärkelse 2%, jösfexfraki IX, kaseinhydrolysat IX och kalciumkarbonat 0,21 infördes i en 500 ml kalv och sterilise- rades vid 120°C under 15 minuter. I två kolvar av deffa medium överfördes en full ögla av en snedkulfur av Åmgulluriella sp. Å HÛ79_ NRRL 111451 ning vid 3000. Efter 4 dagar överfördes dei odlade mediet till och inockulerades och adlades under skak- 20 l av samma sferiliserade medium som ovan i en 30 1. odlings- behållare och adlades vid 3009 under omrörning vid 300wvarv/min. 10 15 20 25 30 7903672-9 25 och luftning med 20 l/min. under 48 timmar.I Neplanocin D derivative (III) I (IV) Molvikf _ (calculated from mass spectral analysis) 280 294 lek olekylar formula C1] H12N403S C12H14N403S smanpunkf 26o-2 deln.). 2 - [a] D3 = -141.7 I (c = Û, 7, H20) Specific_distortion - Ultraviolet absorption- 226 nm âââ nm_ Fpectrum (in H20) 324 nm 295 Hm. The following examples illustrate the present invention but are not limiting. Example gel in 100 ml of effluent aqueous medium (pH 6.5) containing 2% glycate, 2% starch, IX refractory IX, casein hydrolyzate IX and calcium carbonate 0.21 were introduced. in a 500 ml calf and sterilized at 120 ° C for 15 minutes. In two flasks of deffa medium, a full loop of a slanted flask of Åmgulluriella sp. At 4 days, the cultured medium was transferred to and inoculated and cultured under shaking of the same spherilized medium as above in a 30 L culture vessel and cultured at 3009 with stirring at 300 rpm. 10 15 20 25 30 7903672-9 25 and aeration at 20 l / min. for 48 hours.

Detta odlade medium överfördes till 200 1. vattenhaltigt me- dium (pH 6,5) innehållande glykos 41, sojabönpulver 11, köttextrakt 0,41, pepton 0,41, jöstextrakt 0,11 , NaCl 0,251 och kalciumkarbonat 0,11 och odlades vid 30°C under omrör- ing med 180 varv/min och luftning med 130 l/min under 40 timmar.This cultured medium was transferred to 200 l of aqueous medium (pH 6.5) containing glucose 41, soybean powder 11, meat extract 0.41, peptone 0.41, yeast extract 0.11, NaCl 0.251 and calcium carbonate 0.11 and cultured at 30 ° C with stirring at 180 rpm and aeration at 130 l / min for 40 hours.

Den ovan erhållna odlingsvötskan (omkring 200 1.)-filtreraöes och myceliet tvöttodes med vatten. Filtratet och tvöttvattnet sammanslogs varvid erhölls 140 1. klart filtrat (potens 57/ug/ml som neplanocin A).The culture broth obtained above (about 200 l) was filtered and the mycelium was washed with water. The filtrate and wash water were combined to give 140 l of clear filtrate (potency 57 ug / ml as neplanocin A).

Exempel 2 Filtratet erhållet i exempel 1 fördes genom en kolonn av 20 l. katjnnbytarharts Åmberlite IR-120 (h+ typ) för att absorbera materialet och tvöttades med 100 l. vatten. Elutionen genomför- des med 3,7 N ammoniak i vattenlösning och det ursprungliga eluat- et kastades (30 1.). 90 liter av det följande eluatet uppsamla-- des, och pH-värdet justerades till 8 genom tillsats av åN HCI och fördes sedan genom 4 1. aktivt kol i en kolonn, tvöttades med vatten, varefter den eluerades med 90 l. 701-ig metanol- lösning. Det Ph detta sött erhållna eluatet koncentrerodes un- der förminskat tryck, varvid erhölls 1,5 l. av ett koncentrat.Example 2 The filtrate obtained in Example 1 was passed through a column of 20 l of cotton swab resin Umberlite IR-120 (h + type) to absorb the material and washed with 100 l of water. The elution was performed with 3.7 N ammonia in aqueous solution and the original eluate was discarded (30 L). 90 liters of the following eluate were collected, and the pH was adjusted to 8 by the addition of ÅN HCl and then passed through 4 l of activated carbon in a column, washed with water, after which it was eluted with 90 l. methanol solution. The Ph eluate thus obtained was concentrated under reduced pressure to give 1.5 l of a concentrate.

Koncentratet överfördes till en kolonn av 10 1. Åmöerlite IRA-410 (0H_ typ) och eluerades med vatten samt justerades till pH-vördet 7 genom tillsats av 4N HCl¿_Éluatet koncentrerades i vakuum, fölldes under kylning och filtrerades , varvid erhölls 41,8 g orent neoplanocin A (rening omkring 12%).The concentrate was transferred to a column of 10 l of Amorite IRA-410 (OH type) and eluted with water and adjusted to pH 7 by adding 4N HCl2. The eluate was concentrated in vacuo, filled under cooling and filtered to give 41.8 g pure neoplanocin A (purification about 12%).

Det arena neoplanocin A (41,8 g) upplöstes i en liten möngd vat- ten och överfördes till 2 l. kiselgelsyra i en kolonn (8,3 x 40 cm) 7905672-9 10 15 20 25 30 26' packad med en lösningsmedelsblandning av n-butanal: 281 ammoniak i vatten: vatten (ïO:0,2:1) och eluerades därefter med samma lösningsmedelsblandning.The arena neoplanocin A (41.8 g) was dissolved in a small amount of water and transferred to 2 l of silica gel in a column (8.3 x 40 cm) packed with a solvent mixture. of n-butanal: 281 ammonia in water: water (10: 0.2: 1) and then eluted with the same solvent mixture.

Eluatet fraktionerades i fraktioner på 150 ml och aktiva frak- tioner visade sig vara , fraktionerna nr 24-52. Nämnda aktiva fraktioner uppsamlades, kancentrerades i vakuum och tilläts stå under kylning.The eluate was fractionated into 150 ml fractions and active fractions were found to be fractions Nos. 24-52. Said active fractions were collected, concentrated in vacuo and allowed to stand under cooling.

Föllningen 'uppsamlades genom filtrering för erhållande av 2,6 g orent kristallint neplanocin Å (utbyte 32%).The precipitate was collected by filtration to give 2.6 g of crude crystalline neplanocin Å (yield 32%).

Det arena neplanocinet Å upplöstes i omkring 60 ml hett'vatten. och tilläts stå vid rumstemperatur. De utföllda vita nålkristal- lerna uppsamlades genom filtrering , varvid erhölls 2,01 g kristaller av neplanocin Å (utbyte 25,21).The arena neplanocin Å was dissolved in about 60 ml of hot water. and allowed to stand at room temperature. The precipitated white needle crystals were collected by filtration to give 2.01 g of crystals of neplanocin Å (yield 25.21).

Exemgel 3 Filtratet (140 1., potens 300/ug/ml neplanocin C) , erhållet vid samma förfarande som i exempel 1 fördes-genom en kolonn av 20 l. katjonbytarharts Amberlite IR-120 (H+ typ) att absorbera materialet och tvöttades med omkring 100 1. vatten. Eluering genomfördes med 3,7 N ammaniaklösning i vatten och det primära eluatet kastades (20 1) . 100 liter av det följande eluatet upp- samlades, justerades till pH-vördet 8 genom tillsats av konceh- trerad saltsyra, fick sedan passera genom_fi_l. aktivt kol i en kolonn, tvöttades med vatten och eluerades därefter med 70 1. 70% metanollösning. Det på detta sött erhållna eluatet koncen- trerades under förminskat tryck, varvid erhölls 1,5 1. av ett koncentrat. Detta koncentrat frystorkodes , varvid erhölls 83,6 g av ett orent pulver (renhet 29,5%). 7903672-9 27 83 g av ett orent pulver upplöstes i vatten mättad n-butanol- lösning och överfördes på 2 l. kiselsyragel i en kolonn (8,3 x 40 cm) packad med n-butonol och därefter eluerades det med en lösningsmedelsblandning av n~butanol: koncentrerad 5 ammoniaklösning i vatten , vatten (10:0,2:1). fraktioner på 150 ml eluat uppsamlades och de aktiva fraktionerna visade sig vara fraktionerna 53-108. Nämnda aktiva fraktioner uppsamlades, koncentrerades vid-låg temperatur och tillöts stå. Föllningen uppsamlades genom filtrering, varvid erhölls 18,2 g neplanocin 10 C som vita kristallerfi (renhet 961, utbyte 41,61).Example 3 The filtrate (140 L, potency 300 .mu.g / ml neplanocin C), obtained in the same procedure as in Example 1, was passed through a column of 20 l of cation exchange resin Amberlite IR-120 (H + type) to absorb the material and washed with about 100 1. water. Elution was performed with 3.7 N ammonia solution in water and the primary eluate was discarded (20 L). 100 liters of the following eluate were collected, adjusted to pH 8 by the addition of concentrated hydrochloric acid, then passed through. activated carbon in a column, washed with water and then eluted with 70 1. 70% methanol solution. The eluate thus obtained was concentrated under reduced pressure to give 1.5 l of a concentrate. This concentrate was lyophilized to give 83.6 g of a crude powder (purity 29.5%). 83 g of a crude powder were dissolved in water-saturated n-butanol solution and transferred to 2 l of silica gel in a column (8.3 x 40 cm) packed with n-butonol and then eluted with a solvent mixture of n-butanol: concentrated ammonia solution in water, water (10: 0.2: 1). fractions of 150 ml of eluate were collected and the active fractions were found to be fractions 53-108. Said active fractions were collected, concentrated at low temperature and allowed to stand. The precipitate was collected by filtration to give 18.2 g of neplanocin 10 DEG C. as white crystals (purity 961, yield 41.61).

Dessa upplöstes i varmt vatten och tillöts stå vid rumstemperatur för föllning av neplanocin C som förglösa plana kristaller, vil- ka frönfiltrerades , varvid erhölls rent neplanocin C. 15 Exempel 4 Till filtratet som erhölls vid samma förfarande som i exempel 1- sottes 3,6 kg aktivt kolpulver. Efter omröring under 40 minuter uppsamlades det aktiva kolet genom filtrering och tvöttades nog- 20 grant med vatten. Elueringen genomfördes med 701 metanollösning. 40 l. eluat torkades i vakuum , varvid erhölls 80 g av ett orent pulver innehållande neplanocin O. 80 g orent pulver överfördes till 6 liter kiselsyragel i en 25 kolonn packad med n-propanol: koncentrerad ammoniak : vatten _ (10:1:1) och därefter eluerades med samma lösningsmedelsbland- ning.-Fraktioner på 600 g uppsomlades och neplanocin 0 erhölls i fraktionerna 20-37. Nämnda aktiva fraktioner uppsamlades,kon- centrerades i vakuum till 30nñ och tilläts stå under kylning. 1 30 Föllningen uppsamlades genom filtrering och dörvid erhölls 460 mg orent kristallint neplanocin D.' r7903672-9 10 15 20 25 30 28 De efhanno 460 mg omm kfisfqnefne uppxasm i a m1 hm vatten och överfördes till en kolonn Sephadex G-15 (1850 ml, packad med vatten), varefter den eluerades med vatten. Frak- tioner på 100 ml uppsamlades och de uppsamlade eluatfraktioner- na 15-16 (200 ml) koncentrerades under förminskat tryck till 20 ml och fick stå vid rumstemperatur. 314 mg utföllt neplano-_ cin D erhölls som vita nålkristaller.These were dissolved in hot water and allowed to stand at room temperature to precipitate neplanocin C to anneal flat crystals, which were seed filtered to give pure neplanocin C. Example 4 To the filtrate obtained by the same procedure as in Example 1, sweeten 3.6 kg of active carbon powder. After stirring for 40 minutes, the activated carbon was collected by filtration and washed thoroughly with water. The elution was performed with 701 methanol solution. 40 l of eluate were dried in vacuo to give 80 g of a crude powder containing neplanocin. 80 g of crude powder were transferred to 6 liters of silica gel in a column packed with n-propanol: concentrated ammonia: water (10: 1: 1). ) and then eluted with the same solvent mixture. Fractions of 600 g were collected and neplanocin 0 was obtained in fractions 20-37. Said active fractions were collected, concentrated in vacuo to 30nñ and allowed to stand under cooling. The precipitate was collected by filtration to give 460 mg of crude crystalline neplanocin D. De efhanno 460 mg omm kfisfqnefne was dissolved in a m1 hm water and transferred to a column Sephadex G-15 (1850 ml, packed with water), after which it was eluted with water. 100 ml fractions were collected and the collected eluate fractions 15-16 (200 ml) were concentrated under reduced pressure to 20 ml and allowed to stand at room temperature. 314 mg of precipitated neplano-cin D were obtained as white needle crystals.

Exempel 5 (1) 376 mg neplanocin D upplöstes i 10 ml vattenfritt pyridin kfoffigf vid ss°c. 0,9 m1 bens°y1k1°rad f111_ och amrördes sattes droppvis och omrördes under 2 timmar vid 60-65°C.Example 5 (1) 376 mg of neplanocin D was dissolved in 10 ml of anhydrous pyridine kfoffigf at ss ° c. 0.9 ml of benzyl chloride and stirred were added dropwise and stirred for 2 hours at 60-65 ° C.

Dörefter hölls lösningen vid 40-45°C under 2 timmar och tillöts stå över natten vid rumstemperatur. 10 ml vatten tillsattes under omröring och efter 25ninuter torkades lösningen under för- minskat tryck i en indunstare. Det torkade materialet upplöstes i 30 ml kloroform, tvöttodes tre gånger med 10 ml 1 N HCl och två gånger med 1 N natriumvötekarbonatlösning, varefter mate- rialet tvöttades två gånger med 20 ml vatten. Kloroformfasen dehydrerades med vattenfritt magnesiumsulfat och-koncentrerades, varvid erhölls 747 mg av en blekt krömförgad förening (I).Thereafter, the solution was kept at 40-45 ° C for 2 hours and allowed to stand overnight at room temperature. 10 ml of water were added with stirring and after 25 minutes the solution was dried under reduced pressure in an evaporator. The dried material was dissolved in 30 ml of chloroform, washed twice with 10 ml of 1 N HCl and twice with 1 N sodium bicarbonate solution, after which the material was washed twice with 20 ml of water. The chloroform phase was dehydrated with anhydrous magnesium sulfate and concentrated to give 747 mg of a pale chromium-colored compound (I).

(Ufbyfe 91%) . _ Fysikalisk-kemiska egenskaper hos föreningen (I) var följande.d [a]â3 = -199° (c=0,6, metanol) Molekylformel: C32H24N407 Holvikt: 576 (masspektrum) sma1+punkf= 116-117°c.(Ufbyfe 91%). Physico-chemical properties of the compound (I) were as follows. [Α] D = = -199 ° (c = 0.6, methanol) Molecular formula: C32 H24 N4 O7 Hollow weight: 576 (mass spectrum) sma1 + punk = 116-117 ° c.

Ultraviolett absorptionsspektrum: max = 232 nm, E11 = 704 R?-vörde (kloroform:metanol=10:1); Rf-vörde = 0,53.1 om 10 15 20 25 30 7903672-9 29 (2) 735 mg av en förening (I) erhöllen ovan (1) och l,0736 g fosforpentasulfid upplöstes i 19 ml pyridin och omrördes nog- grant , varefter 0,19 ml vatten tillsattes droppvis. Efter åter- flödeskokning under 4 timmar och med omröring kyldes reak- tionsblandningen och koncentrerade: i vakuum, varvid erhölls ett brunt oljigt material. Detta oljiga material slogs i kokan- de vatten och amrördes ytterligare under 30 minuter, varvid erhölls ek gulaktigt'ömne. Detta filtrerades för uppsamling' av föllningen, tvöttades med en blandning av etanol:eter (lzl) och tvöttades ytterligare med eter och torkades, varvid erhölls 561 mg av en förening (Il). (Utbyte 74,31).Ultraviolet absorption spectrum: max = 232 nm, E11 = 704 Rf value (chloroform: methanol = 10: 1); Rf value = 0.53.1 if 735 mg of 7903672-9 29 (2) 735 mg of a compound (I) obtained above (1) and 1.03636 g of phosphorus pentasulfide were dissolved in 19 ml of pyridine and stirred thoroughly, then 0.19 ml of water was added dropwise. After refluxing for 4 hours and with stirring, the reaction mixture was cooled and concentrated in vacuo to give a brown oily material. This oily material was soaked in boiling water and stirred for a further 30 minutes to give an oaky yellowish appearance. This was filtered to collect the precipitate, washed with a mixture of ethanol: ether (IIz) and further washed with ether and dried to give 561 mg of a compound (II). (Yield 74.31).

Fysikaliskt-kemiska egenskaper av föreningen (II) ör följande. (423 = _2863 (c-o,«s, cHc13) M°1få| Holekylvikt: 592 Smöltpunkt: 235 - 239°C (sönderdelning under skumning) Ultravialettspektrum (i metanol): 232 nm (filxcm = 327,5) Rf-vörde (kloroform:metanol=l0:]); Rf-vörde = 0,82 (3) 525 mg av en förening (II) erhöllen ovan (2) upplöstes i 31 ml vattenfri metanol. 0,62 ml nyframstölld 2 N lösning av natriummetylat i metanol tillsattes och kokades under återflöde i 2 timmar för att avlögsna bensoylgruppen.Physicochemical properties of the compound (II) are as follows. (423 = _2863 (co, «s, cHc13) M ° 1few | Molecular weight: 592 Melting point: 235 - 239 ° C (decomposition during foaming) Ultraviolet spectrum (in methanol): 232 nm (fi lxcm = 327.5) Rf value ( chloroform: methanol = 10:]); Rf value = 0.82 (3) 525 mg of a compound (II) obtained above (2) was dissolved in 31 ml of anhydrous methanol, 0.62 ml of freshly prepared 2 N solution of sodium methylate in methanol was added and refluxed for 2 hours to remove the benzoyl group.

Efter avdestillering av metanolen tillsattes omkring 50 ml vat- ten och pH-vördet justerades till 7,5 genom tillsats av ättik- syra. Lösningen extraherades två gånger med 20 ml etylacetat och koncentreratian av vattenfasen ledde till bildning av nepla- nocin D derivat (III) som nålkristaller. Omkristallisationen skedde ur hett vatten, varvid erhölls 110 mg neplanocin D deri-I 7903672-9 10 15 20 25 30 30 vat (III) (utbyte 44,31).After distilling off the methanol, about 50 ml of water were added and the pH was adjusted to 7.5 by adding acetic acid. The solution was extracted twice with 20 ml of ethyl acetate and the concentration of the aqueous phase led to the formation of neplanano D derivatives (III) as needle crystals. The recrystallization took place from hot water to give 110 mg of neplanocin D in which (III) (yield 44.31).

Fysikaliskt-kemiska egenskaper hos neplanacin D derivat (III) ör följande.Physicochemical properties of neplanacin D derivative (III) are as follows.

Specifik vridning: omöjlig att möta beroende på variationer under mätningen.Specific rotation: impossible to meet due to variations during the measurement.

Molekylformel: C11Hï2N403S Malvikt: 280 (masspektrum) sma1fpunkf= 2eo-262°c (sanae=ae1n.) UV-spektrum i H20: 226 nm,(E:%cm = 388,6) a24'fim, (s'% = 968,0) 1 cm Rf-värde (propanol: koncentrerad ammoniak i vatten:vatten= 10 : 1 : 1); Rf-värde = 0,21 Exempel 6 Till 37 mg neplanocin D derivat (III)erhållet enligt exempel 5 upplöst i 0,3 ml av 0,4 N Na0H tillsattes 0,009 ml metyljodid och skakades vid rumstemperatur under 10 minuter. Därefter till- sattes 0,05 ml av 0,4 N Na0H och ytterligare 0,009 ml metyl- jodid, varefter de åter skakades och tilläts stå vid rumstempe- ratur. Till denna lösning tillsattes 10 ml vatten, varefter bland- ningen koncentrerades i vakuum till 2 ml och överfördes till _ en Sephadex G-15 kolonn (1,4 x 49 cm) . Kolonnen eluerodes med vatten och fraktioner på 3 g eluat uppsamlades. Fraktionerna 17-19 sammanslags, koncentrerades och kyldes , varvid erhölls 35 mg kristallin neplanocin D derivat (IV) (utbyte 901).Molecular formula: C11H12N4O3S Density: 280 (mass spectrum) melting point = 2eo-262 ° C (sanae = ae1n.) UV spectrum in H2 O: 226 nm, (E:% cm = 388.6) a24 'fi m, (s'% = 968.0) 1 cm Rf value (propanol: concentrated ammonia in water: water = 10: 1: 1); Rf value = 0.21 Example 6 To 37 mg of neplanocin D derivative (III) obtained according to Example 5 dissolved in 0.3 ml of 0.4 N NaOH was added 0.009 ml of methyl iodide and shaken at room temperature for 10 minutes. Then 0.05 ml of 0.4 N NaOH and an additional 0.009 ml of methyl iodide were added, after which they were shaken again and allowed to stand at room temperature. To this solution was added 10 ml of water, after which the mixture was concentrated in vacuo to 2 ml and transferred to a Sephadex G-15 column (1.4 x 49 cm). The column was eluted with water and fractions of 3 g of eluate were collected. Fractions 17-19 were combined, concentrated and cooled to give 35 mg of crystalline neplanocin D derivative (IV) (yield 901).

Fysikaliskt-kemiska egenskaper av neplanocin D derivat (IV) är följande. 10 15 20 25 30 7903672-9 3] [u]23 D = -141,7 (e=o,7, H20) Malekylformelz C12H]4N403S Halekylvikt: 294 (masspektrum) sma11punk1= 177-17a°c UV-spektrum i vatten: 222 nm, (Elx = 415,8) 1 cm 288 nm, (E11 = 678,3) 1 cm 1% 295 nm (E = 670,7) 1 cm Rf-värde (propanolz koncentrerad ammoniak i vatten: vatten= 10:1:1); Rf-värde = 0,42 Exempel 7 Syntes av neplanocin A ur neplanacin D derivat (IV) 50 mg neplanocin D derivat (IV) erhållet med samma förfarande som beskrevs i exempel 6 upplöstes i 1,5 ml metonolisk ammoniak - (OOQ möttnad) och överfördes till-iñtslutet rör och upphettades till 146-148°C under 7 timmar. Efter avlägsnande av lösnings- medlet vid reducerat tryck, upplöstes återstoden i 3 ml hett vatten, varefter den kyldés och 33 mg neplonocin A erhölls som nålkristaller (utbyte 741), axemEe1 s ' ' * I _ (1) Till 1,Mg neplanocin D upplöst i 12 ml vattenfritt pyridin tillsattes 1 ml öttiksyraanhydrid och blandningen tillöts stå vid rumstemperatur över natten; 30 ml n-hexan tillsattes och blandningen kyldes på is-vatten, varvid erhölls 1 g av före- ningen [2] som kristaller. 7903672-9 10 15 20 25 30 32 (2) 1 g av föreningen [2] upplöstes i 25 ml kloroformlösning in- nehållande 0,8 ml tionylklorid och 0,4 ml dimetylformamid och kokades under återflöde vid rumstemperatur i tre timmar. Kloro- form avdestillerades under förminskat tryck. Återstoden slogs i 100 ml is-vatten under omröring. Extroktion skedde med 100 ml klorofarm, tvöttades med natriumvötekarbanat och vatten och torkning med natriumsulfat. Neplanocin D derivat (3) erhölls efter torkning i vakuum.Physicochemical properties of neplanocin D derivatives (IV) are as follows. 10 15 20 25 30 7903672-9 3] [u] 23 D = -141.7 (e = 0.7, H 2 O) Molecular formula C12H] 4N403S Tail weight: 294 (mass spectrum) sma11punk1 = 177-17a ° c UV spectrum i water: 222 nm, (Elx = 415.8) 1 cm 288 nm, (E11 = 678.3) 1 cm 1% 295 nm (E = 670.7) 1 cm Rf value (propanolz concentrated ammonia in water: water = 10: 1: 1); Rf value = 0.42 Example 7 Synthesis of neplanocin A from neplanacin D derivative (IV) 50 mg of neplanocin D derivative (IV) obtained by the same procedure as described in Example 6 was dissolved in 1.5 ml of metonolic ammonia - (OOQ meeting) and transferred to sealed tubes and heated to 146-148 ° C for 7 hours. After removal of the solvent under reduced pressure, the residue was dissolved in 3 ml of hot water, after which it was cooled and 33 mg of neplonocin A were obtained as needle crystals (yield 741), axemEe1 s '' * I _ (1) To 1, Mg neplanocin D dissolved in 12 ml of anhydrous pyridine, 1 ml of acetic anhydride was added and the mixture was allowed to stand at room temperature overnight; 30 ml of n-hexane were added and the mixture was cooled on ice-water to give 1 g of the compound [2] as crystals. 7903672-9 10 15 20 25 30 32 (2) 1 g of the compound [2] was dissolved in 25 ml of chloroform solution containing 0.8 ml of thionyl chloride and 0.4 ml of dimethylformamide and refluxed at room temperature for three hours. Chloroform was distilled off under reduced pressure. The residue was poured into 100 ml of ice-water with stirring. Extraction was performed with 100 ml of chloropharm, washed with sodium hydrogen carbonate and water and dried over sodium sulfate. Neplanocin D derivative (3) was obtained after drying in vacuo.

Exempel 9 Framstüllning av neplanocin A ur neplanocin D derivat [3].Example 9 Preparation of neplanocin A from neplanocin D derivatives [3].

Till neplanocin D derivat [3],erhållet i exempel 8 sattes i det slutna stålröret 35 ml av en mättad metanolisk ammoniak och reaktionen fick ske vid 100°C under 5 timmar. Efter kylning torkades reoktionsblandningen i vakuum, varvid erhölls ett krístallint pulver, vilket renades genom kiselgelkolonnkromato- grafi , varvid erhölls 286 mg neplanocin Å.To neplanocin D derivatives [3] obtained in Example 8, 35 ml of a saturated methanolic ammonia were added to the closed steel tube, and the reaction was allowed to proceed at 100 ° C for 5 hours. After cooling, the reaction mixture was dried in vacuo to give a crystalline powder which was purified by silica gel column chromatography to give 286 mg of neplanocin Å.

Fysikaliskt-kemiska egenskaper var identiska med de hos neplano- cin A erhållna i exempel 7.Physico-chemical properties were identical to those of neplanocin A obtained in Example 7.

Exemgel 10 Filtratet (140 1, potens omkring 50/ug/ml som neplanocin B erhål- let vid samma förfarande som i exempel 1 fördes genom en kolonn innehållande 20 1 katjonbytarharts Amberlite IR-120 (H+typ) för absorption av materialet och tvöttades med omkring 100 l vatten. Eluering genomfördes med 3,7 N ommoniakvatten och det första eluatet (30 1.) kastades. 90 l. av det följande eluatet uppsomlades, pH-vördet justerades till 8 genom till- sats 6 N HCI, varefter eluatet överfördes på en kolonn inne- 10 15 20 25 30 7903672-9 3 3 hållande 4 1, aktivt kol, tvöttodes med vatten, elucrodcs dör- efter med 90 l. av en 701-ig vattenlösning av metanol. Dd på så sött erhållna eluatet koncentrerades till 500 ml koncentrat, vilket tilläts stå vid låg temperatur för föllning av materialet.Example gel The filtrate (140 L, potency about 50 .mu.g / ml as neplanocin B obtained in the same procedure as in Example 1 was passed through a column containing 20 liters of cation exchange resin Amberlite IR-120 (H + type) to absorb the material and washed. with about 100 l of water, eluting with 3.7 N of ammonia water and the first eluate (30 L) was discarded, 90 l of the following eluate was collected, the pH was adjusted to 8 by the addition of 6 N HCl, after which the eluate was transferred to a column containing 4 l of activated carbon, washed with water, elucrodcs then with 90 l of a 701 g aqueous solution of methanol. was concentrated to 500 ml of concentrate, which was allowed to stand at low temperature to precipitate the material.

Föllníngen uppsamlades och torkades varvid erhölls orent neplano- cin B (5,1 g, renhet omkring 601, utbyte 442).The precipitate was collected and dried to give crude neplanocin B (5.1 g, purity about 601, yield 442).

Exempel 11 Neplanocin B erhållet enligt exempel 10 (5,1 g) överfördes till en kolonn kiselsyragel (8,3 x 40 cm, 2 1.) packad med en bland- ning av acetonzvatten (10:0,5) och eluerades med samma lösnings- medelsblandning. Eluatet uppsamlades i fraktioner på 80 g och fraktionerna 16-24 sammanslogs. Nämnda aktiva fraktioner tilläts stå vid låg temperatur för utföllning av neplanocin B som vita plana kristaller. 2,57 9 kristallin neplanocin B erhölls. (Ut- syfe 32,81). ' Ekempel 12 Odlingen genomfördes på det sött som angavs i exempel 1 , var- vid erhölls en odlingsmassa på omkring 200 1. vilken filtrera- des och cellerna tvöttades med vatten. Filtratet och tvöttvatt- net sammanslogs till 140 1. (potens omkring 1,5/ug/ml).Example 11 Neplanocin B obtained according to Example 10 (5.1 g) was transferred to a column of silica gel (8.3 x 40 cm, 2 l) packed with a mixture of acetone water (10: 0.5) and eluted with the same solvent mixture. The eluate was collected in 80 g fractions and fractions 16-24 were pooled. Said active fractions were allowed to stand at low temperature to precipitate neplanocin B as white flat crystals. 2.57 crystalline neplanocin B was obtained. (Excerpt 32,81). Example 12 The culture was carried out on the sweet given in Example 1, whereby a culture mass of about 200 l was obtained which was filtered and the cells were washed with water. The filtrate and wash water were combined to 140 l (potency about 1.5 .mu.g / ml).

Lösningen fördes genom en kolann innehållande 20 l katjonbytar- hurts Amberlite IR-120 (H+ typ) för absorption av materialet och tvöttades med omkring 100 1, vatten. Elutionen genomfördes med 3,7 N ammoniak i vattenlösning och det första eluatet (30 1.) kastades. 90 1. av följande eluat uppsamlades, I justerades till pH-värdet 8 genom tillsats av 6 N HC1, och överfördes till en kolonn innehållande 4 1. aktivt kol, tvöttades med vatten och elaerades därefter med 90 l. 7OX-ig vattenlösning av metanol. 7903672-9 5 10 15 20 25 314 Det på så sött erhållna eluatet kancentrerades, varvid erhölls 500 ml av ett koncentrat, vilket frystorkades, varvid erhölls 31,2 g_av en aren neplanacin F (renhet omkring O,5X).The solution was passed through a flask containing 20 L of cation exchange resin Amberlite IR-120 (H + type) to absorb the material and washed with about 100 L of water. The elution was performed with 3.7 N ammonia in aqueous solution and the first eluate (30 L) was discarded. 90 l of the following eluate was collected, I was adjusted to pH 8 by the addition of 6 N HCl, and transferred to a column containing 4 l of activated carbon, washed with water and then eluted with 90 l of 7.7XX aqueous methanol . 314 The eluate thus obtained was concentrated, yielding 500 ml of a concentrate, which was lyophilized to give 31.2 g of an arena neplanacin F (purity about 0.5X).

Exempel 13 Orent pulver av neplanocin F erhållet i exempel 12 (31,2 g) över- fördes till en kalann kiselsyragel (800 ml) packad med en blandninå av n-butanal: 28%-ig ammaniók°i vattenlösning; vatten (10:0,2:1) och eluerades med samma lösningsmedelsblandning.Example 13 Crude neplanocin F powder obtained in Example 12 (31.2 g) was transferred to a calcaneic silica gel (800 ml) packed with a mixture of n-butanal: 28% ammonia in aqueous solution; water (10: 0.2: 1) and eluted with the same solvent mixture.

Fraktianer på 150 ml uppsamlades och sammanslogs , varvid frak- tionerna 5-10 koncentrerades i vakuum. Kancentratet överfördes till en kiselsyragelkolann (240 ml) , packad med en blandad lös- ning av klaroformzmetanal:öttiksyra (10:2:O,2) och eluerades med samma lösningsmedelsblandning varvid fraktioner på 20 g uppsamlades. Fraktionerna 67-120 sammanfördes och koncentrera- des och tarkades , varvid erhölls arena kristaller av neplano- C15 r (108 mg, ufbyfe 511).Fractions of 150 ml were collected and pooled, concentrating fractions 5-10 in vacuo. The concentrate was transferred to a silica gel column (240 ml), packed with a mixed solution of claroformzmethanal: acetic acid (10: 2: 0, 2) and eluted with the same solvent mixture to collect 20 g fractions. Fractions 67-120 were combined and concentrated and triturated to give arena crystals of neplano-C15r (108 mg, ufbyfe 511).

Exempel 14 I _ Orena kristaller av neplanacin F (108 mg) erhållna enligt exempel '13 överfördes till en kolonn innehållande Sephadex G-15 (186 ml) packad med vatten och eluerades med vatten. Fraktioner på 10 g uppsamlades och fraktíonerna 22-27 sammanslogs och koncentre- rades till 5 ml 3 varefter de fick stå vid rumstemperatur för utföllning av neplanocin F som vita nålkrístaller. Föllningen ' filtrerades och torkades, varvid erhölls kristallint nepla ~ F. (87 mgflmaed ett ufbyfe på 41%).Example 14 Unclean crystals of neplanacin F (108 mg) obtained according to Example 13 were transferred to a column containing Sephadex G-15 (186 ml) packed with water and eluted with water. Fractions of 10 g were collected and fractions 22-27 were combined and concentrated to 5 ml 3 after which they were allowed to stand at room temperature to precipitate neplanocin F as white needle crystals. The precipitate was filtered and dried to give crystalline nepla-F. (87 mg with a 41% yield).

Claims (2)

1. _ 7903672-9 P A T E N T K R A V 1, Antibiotiska neplanociner k ä n n e t e c k n a d e av följande formel: x Nš Lšn N r z \ 'R där X betecknar NH2,-OH, -SH,-SCH3 eller Cl, där R betecknar väte eller en skyddande grupp för hydroxigrupper och där Z betecknar gruppen Y R0'H ZC 'R där Y betecknar -O- eller en valensbindning och där R beteck- nar väte eller en skyddande grupp för en hydroxígrupp eller en grupp: OH Honzc f i vilken Y betecknar -O- eller en valensbindning. 1. 7903672-9 CLAIMS 1, Antibiotic neplanocins characterized by the following formula: x Nš Lšn N rz \ 'R where X represents NH2, -OH, -SH, -SCH3 or Cl, where R represents hydrogen or a protecting group for hydroxy groups and where Z represents the group Y R0'H ZC 'R where Y represents -O- or a valence bond and where R represents hydrogen or a protecting group for a hydroxy group or a group: OH Honzc in which Y represents -O- or a valence bond. 2. Neplanocin A enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av följande formel: NB , 2 IN n > kn N 301120 OH ofl 7903672-9 343 3. Neplanocin C enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av följande formel: - NH; L§}J N 0 HD-HZC 1 OH ßH H. Neplanocin D enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av följande formel: OH tš _//N N - H Honan _ _ on oH 5. Neplanocln D-derivat enllgt krav l, k ä n n e - t e c k n a d av följande formel: SH N ' Ešu N Hb-Bzc Oli OH 3:1 7903672-9 E. Neplanocín D-derivat enligt krav l, k ä n n e t e c k - n a d av följande formel: 3333 N . N > _ Ešfl N uoflzc ' OH QB 7. Neplanocin D-derivat enligt krav 1, k ä n n e t e c k - n a d av följande formel 9 N _ N > b' n AcOH2c 0Ac(Mc där Ae betecknar en acetylgrupp. 8. Neplanocín B enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av följande formel: NM Ná¿;m:$> se H . HOH2 0 OH 7903672-9 gg 9. Neplanocin F enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av följande formel: wmz f, F' I N$ k" N OH HOHZC H 10. Förfarande för framställning av neplanociner enligt krav l med formeln: X “in f'\'\ ou ' där X betecknar NH2 eller -OH och där Z betecknar gruppen Y H0-H OH zc Hon c ïï 0" 2 JJ eller en grupp ~> i vilken Y betecknar -O- eller en valensbindníng, k ä n n e t e c k n a t av att en neplanocinproducerande mikroorganísm, Amgullariella sp. A 11079 NRRL l1U5lodlas i ett näríngsmedium bestående av en assímilerbar kolkälla och en assímilerbar kvävekälla och oorganiska ämnen, varefter neplanocin -A, -C, -D, -B och -F isoleras ur odlingsmassan. 830119 CHE/EWNeplanocin A according to claim 1, characterized by the following formula: NB, 2 IN n> kn N 301120 OH o fl 7903672-9 343 3. Neplanocin C according to claim 1, characterized by the following formula: - NH; LN} JN 0 HD-HZC 1 OH ßH H. Neplanocin D according to claim 1, characterized by the following formula: OH tš _ // NN - H Female _ _ on oH 5. Neplanocln D derivative according to claim 1, k characterized by the following formula: SH N 'Ešu N Hb-Bzc Oli OH 3: 1 N 7903672-9 E. Neplanocin D derivative according to claim 1, characterized by the following formula: 3333 N. N> _ Eš fl N uo fl zc 'OH QB 7. Neplanocin D derivative according to claim 1, characterized by the following formula 9 N _ N> b' n AcOH2c 0Ac (Mc where Ae represents an acetyl group. 8. Neplanocin B according to claim 1, characterized by the following formula: NM Ná¿; m: $> se H. HOH2 OH 7903672-9 gg 9. Neplanocin F according to claim 1, characterized by the following formula: wmz f, F 'IN $ A process for the preparation of neplanocins according to claim 1 of the formula: X 'in f' \ '\ ou' where X represents NH 2 or -OH and where Z represents the group Y H0-H OH zc Hon c ïï 0 "2 JJ or a group ~> in which Y represents -O- or a valence bond, characterized in that a neplanocin-producing microorganism, Amgullariella sp. A 11079 NRRL l1U5 is grown in a nutrient medium consisting of an assimilable carbon source and an assimilable inorganic nitrogen source. substances, after which neplanocin -A, -C, -D, -B and -F are isolated from the culture mass 830119 CHE / EW
SE7903672A 1978-05-25 1979-04-26 ANTIBIOTIC NEPLANOCINES AND PROCEDURE FOR PREPARING THEM THROUGH CULTIVATION OF AMPULLARIAL SP A 11079 NRRL 11451 SE443576B (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP6289978A JPS54154792A (en) 1978-05-25 1978-05-25 Novel antibiotic a-11079-b1b and its preparation
JP9802778A JPS5524157A (en) 1978-08-10 1978-08-10 Novel antibiotic substance a-11079-b2 and its preparation
JP820579A JPS55100388A (en) 1979-01-29 1979-01-29 Novel substance neplanocin d and its derivative
JP2120179A JPS55113786A (en) 1979-02-23 1979-02-23 Novel substance, nepranosin b or f and its preparation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SE7903672L SE7903672L (en) 1979-11-26
SE443576B true SE443576B (en) 1986-03-03

Family

ID=27454901

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE7903672A SE443576B (en) 1978-05-25 1979-04-26 ANTIBIOTIC NEPLANOCINES AND PROCEDURE FOR PREPARING THEM THROUGH CULTIVATION OF AMPULLARIAL SP A 11079 NRRL 11451

Country Status (13)

Country Link
CA (1) CA1128882A (en)
CH (1) CH641804A5 (en)
DE (2) DE2917000C2 (en)
DK (1) DK149313C (en)
ES (1) ES480384A1 (en)
FR (1) FR2426688A1 (en)
GB (1) GB2021582B (en)
HU (1) HU192741B (en)
IT (1) IT1115245B (en)
MX (1) MX5788E (en)
NL (1) NL182231C (en)
SE (1) SE443576B (en)
SU (1) SU906388A3 (en)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3148363A1 (en) * 1980-12-12 1982-09-16 Toyo Jozo K.K., Shizuoka NEPLANOCIN A DERIVATIVES
US4742064A (en) * 1985-09-10 1988-05-03 Regents Of The University Of Minnesota Antiviral carbocyclic analogs of xylofuranosylpurines
ZA894534B (en) * 1988-06-20 1990-03-28 Merrell Dow Pharma Novel neplanocin derivatives
US5145960A (en) * 1989-04-24 1992-09-08 E. R. Squibb & Sons, Inc. Pyrimidinyl tetrahydrofurans
NZ232993A (en) * 1989-04-24 1992-10-28 Squibb & Sons Inc Purinyl and pyrimidinyl tetrahydrofurans
US5059690A (en) * 1990-03-01 1991-10-22 E. R. Squibb & Sons, Inc. Purinyl tetrahydrofurans
US5164520A (en) * 1989-04-24 1992-11-17 E. R. Squibb & Sons, Inc. Intermediates for purinyl and pyrimidinyl tetrahydrofurans

Also Published As

Publication number Publication date
DK149313C (en) 1986-10-20
DE2917000A1 (en) 1979-11-29
SU906388A3 (en) 1982-02-15
FR2426688A1 (en) 1979-12-21
DK177079A (en) 1979-11-26
GB2021582B (en) 1982-10-20
NL182231B (en) 1987-09-01
MX5788E (en) 1984-07-11
CA1128882A (en) 1982-08-03
HU192741B (en) 1987-07-28
CH641804A5 (en) 1984-03-15
NL7903318A (en) 1979-11-27
IT7922957A0 (en) 1979-05-24
DE2917000C2 (en) 1985-10-03
NL182231C (en) 1988-02-01
IT1115245B (en) 1986-02-03
SE7903672L (en) 1979-11-26
GB2021582A (en) 1979-12-05
DE2954197C2 (en) 1990-09-27
DK149313B (en) 1986-04-28
ES480384A1 (en) 1980-04-01
FR2426688B1 (en) 1982-03-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Shimojima et al. (Studies on AI-77s, microbial products with pharmacological activity) structures and the chemical nature of AI-77s
US4552842A (en) Process for producing rebeccamycin
US4487925A (en) Rebeccamycin and process for its preparation
US4321376A (en) Neplanocin-B and -F
SE443576B (en) ANTIBIOTIC NEPLANOCINES AND PROCEDURE FOR PREPARING THEM THROUGH CULTIVATION OF AMPULLARIAL SP A 11079 NRRL 11451
US4578383A (en) CL 1565 antibiotic compounds
KR920001448B1 (en) Bbm-2478 antibiotic complex
EP0110155B1 (en) Novel anthracycline derivatives, a process for preparing the same by a microorganism strain, the novel strain streptomyces cyaneus, and use of the anthracycline derivatives as medicaments
KR830001688B1 (en) Manufacturing method of novel antibiotic neplanosin
CN112500348A (en) Geldanamycin derivatives, preparation method thereof and application thereof in preparing antitumor drugs
US4725621A (en) CL-1957E antibiotic compound and its production
JPH08512330A (en) A novel thiodepsipeptide isolated from marine actinomycetes
JPH0578322A (en) New antibiotic sf2738 substance, its production and carcinostatic agent
US3962427A (en) Antibiotic nebramycin factor VII
WO1998043955A1 (en) Tetramic acid compound
JP2594085B2 (en) SF2575, a new antitumor antibiotic, and method for producing the same
JPS60226892A (en) Antitumoral
KR830002381B1 (en) Preparation of antitumor antibacterial agents
JP2786267B2 (en) New substance DC116
JPH09157266A (en) New antibiotic epoxynomicin a and b and their production
KR0177585B1 (en) Antitumor Substance B E-13793C-producing strain
JPS63146784A (en) Novel strain streptomyces rubropurpureus
JPH0272167A (en) Bu-3862t anti-tumor antibiotic
JPH0426625A (en) Antitumor agent containing lysolipins as active ingredient
JPS61199797A (en) New adechlorine and its preparation

Legal Events

Date Code Title Description
NUG Patent has lapsed

Ref document number: 7903672-9

Effective date: 19880822

Format of ref document f/p: F