JP2786267B2 - New substance DC116 - Google Patents
New substance DC116Info
- Publication number
- JP2786267B2 JP2786267B2 JP1233342A JP23334289A JP2786267B2 JP 2786267 B2 JP2786267 B2 JP 2786267B2 JP 1233342 A JP1233342 A JP 1233342A JP 23334289 A JP23334289 A JP 23334289A JP 2786267 B2 JP2786267 B2 JP 2786267B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- strain
- substance
- medium
- streptomyces
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はアンスラキノンピラン構造を有する新規抗腫
瘍抗生物質DC116およびその製法に関する。The present invention relates to a novel antitumor antibiotic DC116 having an anthraquinone pyran structure and a method for producing the same.
従来の技術 従来、キノン骨格を持つ抗腫瘍抗生物質として、アン
スラキノン系化合物、アンスラサイクリン系化合物、マ
イトマイシン系化合物などの多くの化合物が報告されて
いる。2. Description of the Related Art Conventionally, many compounds such as anthraquinone-based compounds, anthracycline-based compounds, and mitomycin-based compounds have been reported as antitumor antibiotics having a quinone skeleton.
〔シーアールシー ハンドブック オブ アンタイバイ
オテック コンパウンズ、シーアールシープレス(CRC
Handbook of Antibiotic Compounds,CRC Press)U.S.A.
1981〕。[CRC Handbook of Anti-Biotech Compounds, CRC Press (CRC
Handbook of Antibiotic Compounds, CRC Press) USA
1981].
DC116はアンスラキノンピラン構造を有する。現在ア
ンスラキノンピラン系化合物として知られている物質に
は下記式(I) (式中、Rは あるいは で表わす。)で表わされるDC−92BあるいはDC−92D(特
公昭62−504380号公報) 下記式(II) で表わされるSF2587(特開平1−193265号公報)などが
あるが、DC116はこれらの物質とは明らかに異なる新規
な物質である。DC116 has an anthraquinone pyran structure. Substances currently known as anthraquinone pyran compounds include the following formula (I) (Where R is Or Expressed by DC-92B or DC-92D (JP-B-62-504380) represented by the following formula (II) The DC116 is a novel substance distinctly different from these substances, for example, SF2587 (JP-A-1-193265).
発明が解決しようとする課題 本発明の目的は、優れた抗生物質、抗腫瘍性化合物を
提供することにある。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide excellent antibiotics and antitumor compounds.
課題を解決するための手段 本発明者らは、東京都町田市の土壌から分離した微生
物(以下、DO−116株という。)を培地に培養して得ら
れた培養物の中に抗腫瘍活性を有する抗生物質が生産さ
れることを見出した。Means for Solving the Problems The present inventors have developed an antitumor activity in a culture obtained by culturing a microorganism (hereinafter referred to as DO-116 strain) isolated from soil in Machida-shi, Tokyo in a medium. Was found to be produced.
この物質を単離、精製し、理化学的性質を調べた結
果、新規物質であることがわかり、DC 116と命名した。This substance was isolated, purified, and examined for its physicochemical properties. As a result, the substance was found to be a novel substance, and was named DC116.
本発明によれば、下記の一般式 で表わされる抗腫瘍作用および抗菌活性を有する新規物
質DC116が提供される。According to the present invention, the following general formula A novel substance DC116 having an antitumor effect and an antibacterial activity represented by the formula: is provided.
この化合物はストレプトマイセス属に属する微生物を
培養することによって得られる。This compound is obtained by culturing a microorganism belonging to the genus Streptomyces.
以下に本発明を詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.
以下にDC116の理化学的性質を示す。 The physicochemical properties of DC116 are shown below.
分子量:462 分子式:C25H18O9 質量分析:SIMS 465(M+3)+,464(M+2)+,463
(M+1)+ 比旋光度:▲〔α〕24 D▼=+270゜(c=0.012,CHCl
3) 紫外線吸収スペクトル:(メタノール中で測定) λmax:242nm(ε=63,000), 264nm(sh,ε=29,000), 380nm(ε=5,700), 506nm(ε=11,000), 赤外線吸収スペクトル:(KBr錠剤法で測定)(c
m-1) 3700−2400,3430,1755,1734,1654,1629,1585,1454,12
24, PMRスペクトル:(CDCl3−CD3OD中で測定,内部標準T
MS) 1H−NMR(500MHz):δ(ppm) 8.18(1H,s),7.39(1H,d,J=9.3Hz),7.34(1H,d,J
=9.3Hz),6.47(1H,s),5.85(1H,ddq,J=11.2,1.0,7.
1Hz),5.15(1H,ddq,J=11.2,8.5,1.8Hz),4.40(1H,d,
J=16.6Hz),4.36(1H,d,J=16.6Hz),3.96(1H,d,J=
8.5Hz),1.99(3H,s),1.85(1H,dd,J=7.1,1.8Hz). CMRスペクトル:(CDCl3−CD3OD中、内部標準TMS) 13C−NMR(125MHz):δ(ppm) 185.30,185.28,178.8,172.5,166.7,157.89,157.88,15
6.7,144.1,137.0,134.4,130.8,129.1,126.9,126.5,122.
6,121.8,113.4,112.5,110.9,62.2,61.3,42.1,19.9,13.
8. 溶解性:クロロホルム、ジメチルスルホキシド(DMS
O)、メタノール、酢酸エチルおよびアセトンに可溶、
水およびn−ヘキサンには難溶。Molecular weight: 462 Molecular formula: C 25 H 18 O 9 Mass spec: SIMS 465 (M + 3) + , 464 (M + 2) + , 463
(M + 1) + specific rotation: ▲ [α] 24 D ▼ = +270 ゜ (c = 0.012, CHCl
3 ) UV absorption spectrum: (measured in methanol) λ max : 242 nm (ε = 63,000), 264 nm (sh, ε = 29,000), 380 nm (ε = 5,700), 506 nm (ε = 11,000), infrared absorption spectrum: ( Measured by KBr tablet method) (c
m -1 ) 3700−2400,3430,1755,1734,1654,1629,1585,1454,12
24, PMR spectrum: (measured in CDCl 3 -CD 3 OD, internal standard T
MS) 1 H-NMR (500 MHz): δ (ppm) 8.18 (1 H, s), 7.39 (1 H, d, J = 9.3 Hz), 7.34 (1 H, d, J
= 9.3Hz), 6.47 (1H, s), 5.85 (1H, ddq, J = 11.2,1.0,7.
1Hz), 5.15 (1H, ddq, J = 11.2, 8.5, 1.8Hz), 4.40 (1H, d,
J = 16.6Hz), 4.36 (1H, d, J = 16.6Hz), 3.96 (1H, d, J =
8.5Hz), 1.99 (3H, s), 1.85 (1H, dd, J = 7.1, 1.8Hz). CMR spectrum: (CDCl 3 -CD 3 OD, internal standard TMS) 13 C-NMR (125 MHz): δ (ppm) 185.30, 185.28, 178.8, 172.5, 166.7, 157.89, 157.88, 15
6.7,144.1,137.0,134.4,130.8,129.1,126.9,126.5,122.
6,121.8,113.4,112.5,110.9,62.2,61.3,42.1,19.9,13.
8. Solubility: chloroform, dimethyl sulfoxide (DMS
O), soluble in methanol, ethyl acetate and acetone,
Poorly soluble in water and n-hexane.
呈色反応:ヨード試薬に陽性。Color reaction: positive for iodine reagent.
物質の色、性質:赤色の酸性物質 薄層クロマトグラフィー:シリカゲル薄層(HPTLC pl
ate Art.15647 E.Merck社製)トルエン:アセトン:酢
酸(7:2:0.1v/v/v)の展開溶媒でRf0.60。Color and properties of substance: Red acidic substance Thin layer chromatography: Silica gel thin layer (HPTLC pl
ate Art.15647 E. Merck) Rf 0.60 with a developing solvent of toluene: acetone: acetic acid (7: 2: 0.1 v / v / v).
CHCl3:酢酸(100:1v/v)でRf0.30。CHCl 3 : Rf 0.30 with acetic acid (100: 1 v / v).
展開後DC116のスポットは、バチルス ズブチリス(B
acillus subtilis)を用いるバイオアッセイ、熱硫酸お
よび紫外部吸収により検出できる。After deployment, the spot of DC116 is Bacillus subtilis (B
acillus subtilis), hot sulfuric acid and ultraviolet absorption.
次にDC116の生物活性について説明する。 Next, the biological activity of DC116 will be described.
(A)抗菌作用 各種、細菌に対する最小生育阻止濃度(MIC)を寒天
希釈法(pH7.0)により測定した。その結果を第1表に
示す。(A) Antibacterial activity The minimum inhibitory concentration (MIC) for various kinds of bacteria was measured by an agar dilution method (pH 7.0). Table 1 shows the results.
(B)急性毒性(LD50) マウスへの静脈内投与では6.9mg/kgであった。 (B) Acute toxicity (LD 50 ) It was 6.9 mg / kg by intravenous administration to mice.
(C)抗腫瘍作用 リンホサイティック・リューケミア P−388腫瘍に対する治療効果 体重約22gのCDF1雄マウス1群5匹に、リンホサイテ
ィック・リューケミア(Lymphocytic Leukemia)P−38
8腫瘍細胞1×106個を腹腔内移植した。移植後24時間目
にDC116を含むリン酸緩衝液生理食塩水(PBS)溶液0.2m
lを1回腹腔内に投与した。PBSの組成はNaCl 0.8g/dl、
KCl 0.02g/dl、pH7.2である。比較例として、腫瘍細胞
移植後24時間目にマイトマイシンCを含むPBS溶液0.2ml
を腹腔内投与した群を設けた。移植後の延命効果をT/C
〔T:試験例の平均生存日数、C:対照(PBS溶液0.2mlを腹
腔内投与したもの)の平均生存日数〕として第2表に示
す。(C) in CDF 1 1 group 5 male mice of the therapeutic effect weighing approximately 22g for antitumor activity lymphoblastoid Sai tick Ryukemia P-388 tumor, lymphoblastoid Sai tick Ryukemia (Lymphocytic Leukemia) P-38
1 × 10 6 tumor cells were implanted intraperitoneally. 24 hours after transplantation, 0.2m of phosphate buffered saline (PBS) solution containing DC116
l was administered intraperitoneally once. PBS composition is NaCl 0.8g / dl,
KCl 0.02 g / dl, pH 7.2. As a comparative example, 0.2 ml of a PBS solution containing mitomycin C 24 hours after tumor cell transplantation
Was administered intraperitoneally. T / C for survival benefit after transplant
The results are shown in Table 2 as [T: average number of surviving days of the test example, C: average number of surviving days of control (0.2 ml of PBS solution administered intraperitoneally)].
サルコーマ180腫瘍に対する治療効果 体重約20gのddy雄マウス1群6匹にサルコーマ180腫
瘍細胞5×106個を腋窩部皮下に移植した。移植後1日
目から5日目まで24時間毎に5回第2表に示す濃度のDC
116を含むPBS溶液0.2mlを腹腔内に投与した。 Therapeutic Effect on Sarcoma 180 Tumors 5 × 10 6 sarcoma 180 tumor cells were subcutaneously implanted subcutaneously into 6 ddy male mice weighing about 20 g per group. 5 times every 24 hours from day 1 to day 5 after transplantation
0.2 ml of a PBS solution containing 116 was administered intraperitoneally.
比較例として腫瘍細胞移植後24時間目にマイトマイシ
ンCを含むPBS0.2mlを腹腔内に投与した群を設けた。As a comparative example, a group in which 0.2 ml of PBS containing mitomycin C was intraperitoneally administered 24 hours after tumor cell transplantation was established.
移植10日後のT/C〔T:試験例の平均腫瘍体積(mm3)、
C:対照(PBS溶液0.2mlを腹腔内投与したもの)の平均腫
瘍体積(mm3)〕を測定した。T / C 10 days after transplantation [T: average tumor volume of test example (mm 3 ),
C: Average tumor volume (mm 3 ) of control (0.2 ml of PBS solution administered intraperitoneally)] was measured.
その結果を第3表に示す。 Table 3 shows the results.
次にDC116の製造法について説明する。 Next, a method for manufacturing DC116 will be described.
DC116はストレプトマイセス属に属し、DC116を生産す
る能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中にDC11
6を生成蓄積させ、該培養物からDC116を採取することに
よって得ることができる。DC116 belongs to the genus Streptomyces, a microorganism capable of producing DC116 is cultured in a medium, and DC11 is added to the culture.
6 can be obtained by accumulating and accumulating DC116 from the culture.
DC116生産菌株としてはストレプトマイセス属に属
し、DC116生産能を有する菌株であればいずれの菌株で
も用いることができる。またこれらの菌株の人工的変異
方法、たとえば紫外線照射、X線照射、変異誘起剤処理
などによって変異された変異株あるいは自然的に変異し
た変異株でもDC116を生産するものであれば本発明に用
いることができる。代表的菌株としてDO−116株があげ
られる。As a DC116 producing strain, any strain belonging to the genus Streptomyces and having a DC116 producing ability can be used. In addition, if any of these strains can be used in the present invention as long as they produce DC116 even in a mutant strain or a mutant strain naturally mutated by an artificial mutation method such as ultraviolet irradiation, X-ray irradiation, treatment with a mutagenic agent, etc. be able to. A representative strain is DO-116 strain.
DO−116株の菌学的性質について以下に述べる。該性
質の特定は、国際ストレプトマイセス(Streptomyces)
プロジェクト(ISP)がストレプトマイセス種の特性決
定のために推奨する方法〔E.B.シェリング(E.B.Shirli
ng)およびD.ゴットリープ(D.Gottlieb)らのインター
ナショナル・ジャーナル・システマティック・バクテリ
オロジー(Int.J.Syst.Bacteriol.)16,313〜340(196
6)〕に従った。全細胞の加水分解物中のジアミノピメ
リン酸の異性体はビー・ベッカー(B.Becker)らの方式
〔アプライド・ミクロバイオロジー(Appl.Microbio
l.)12巻:421〜423(1964)〕によって確認した。形態
学的検討は、光学顕微鏡を用いておこない、とくに胞子
表面の形態については走査型電子顕微鏡によった。色の
名称の割当てには、カラー・ハーモニー・マニュアル
(Color Harmony Manual)〔コンティナー・コーポレー
ション・オブ・アメリカ(Container Corporation of A
merica)、第4版 1958〕を使用した。DO−116株の菌
学的性質は次の通りである。The bacteriological properties of the DO-116 strain are described below. The identification of the property can be performed by using International Streptomyces.
Recommended methods for characterization of Streptomyces species [EB Schering (EBShirli)
ng) and D. Gottlieb et al., International Journal of Systematic Bacteriology (Int. J. Syst. Bacteriol.) 16 , 313-340 (196).
6)]. The isomer of diaminopimelic acid in whole cell hydrolysates was determined by the method of B. Becker et al. [Appl. Microbio
l.) 12: 421-423 (1964)]. The morphological examination was performed using an optical microscope, and the morphology of the spore surface was measured using a scanning electron microscope. Color names are assigned in the Color Harmony Manual [Container Corporation of America].
merica), 4th edition 1958]. The bacteriological properties of the DO-116 strain are as follows.
(1) 形態 気菌糸:分枝する。(1) Form Aerial hyphae: branched.
基生菌糸:分枝するが、分断はしない。 Underlying hypha: Branches but does not break.
胞子:気菌糸上に分節胞子(10個から30個もしくはさ
らに多数)の長い連鎖として着生する。連鎖の形態は屈
曲状もしくはループ状。Spores: settle on aerial hyphae as long chains of segmented spores (10 to 30 or more). The form of the chain is bent or looped.
胞子の表面:平滑(Smooth) 胞子の運動性:なし 胞子の形・大きさ:楕円形(0.5×0.7μm) なお、菌核、胞子のうは観察されない。 Spore surface: Smooth Spore motility: None Spore shape / size: elliptical (0.5 × 0.7 μm) No sclerotia or spores are observed.
(2) 色調 気菌糸:灰色 基生菌糸:淡黄色〜黄茶色 可溶性色素:茶色 メラニン色素:なし (3) 細胞壁の化学組成 ジアミノピメリン酸の立体型:LL型 (4) 生理的性質 炭素源の同化性: 同化する:グルコース、キシロース、イノシトール、
マンニトール、アラビノース、ラムノース、ラフィノー
ス、ラクトース、シュークロース、サリシン、ガラクト
ース 同化しない:なし ゼラチンの液化:陰性 スターチの加水分解:陽性 脱脂牛乳の凝固:陰性 脱脂牛乳のペプトン性:陽性 繊維素の分解:陽性 生育温度範囲:16〜37℃(至適28〜32℃) なお、生育温度範囲については2日後、ゼラチン、脱
脂牛乳および繊維素に対する作用については、28℃、1
ヶ月後の結果を、そのほかの性質は28℃2週間後の結果
を示した。(2) Color tone Aerial hyphae: Gray Underlying hyphae: pale yellow to yellow brown Soluble pigment: Brown Melanin pigment: None (3) Chemical composition of cell wall Stereotype of diaminopimelic acid: LL type (4) Physiological properties Gender: assimilate: glucose, xylose, inositol,
Mannitol, arabinose, rhamnose, raffinose, lactose, sucrose, salicin, galactose Not assimilated: none Gelatin liquefaction: negative Starch hydrolysis: positive Coagulation of skim milk: negative Peptone property of skim milk: positive Fiber degradation: positive Growth temperature range: 16 to 37 ° C (optimal 28 to 32 ° C) The growth temperature range is 2 days later, and the effects on gelatin, skim milk and fibrin are 28 ° C and 1 ° C.
Monthly results and other properties are shown at 28 ° C for 2 weeks.
(5) 各種寒天培地における生育状態 各種寒天培地で28℃、28日間、DO−116株を培養した
結果を第4表に示す。(5) Growth state on various agar media Table 4 shows the results of culturing DO-116 strain on various agar media at 28 ° C for 28 days.
(6) DO−116株の同定 DO−116株はLL型のジアミノピメリン酸が検出される
ことから、エム・ピー・レチェバリエとエイチ・エー・
レチェバリエ(M.P.Lechevalier and H.A.Lechevalie
r)による放線菌の分類〔インターナショナル・ジャー
ナル・システマティック・バクテリオロジー(Int.J.Sy
st.Bacteriol.)20巻、435−443(1970)〕によると細
胞壁I型と分類される。さらに該菌株の形態学的特徴を
組み合わせると、この菌株をストレプトマイセス属に帰
属させるのが適当である。 (6) Identification of DO-116 strain Since the LL-type diaminopimelic acid is detected in DO-116 strain, MP Rechevalier and H.A.
MPLechevalier and HALechevalie
r) Classification of actinomycetes [International Journal of Systematic Bacteriology (Int. J. Sy
St. Bacteriol.), Vol. 20, 435-443 (1970)]. Further combining the morphological characteristics of the strain, it is appropriate to assign this strain to the genus Streptomyces.
本属における種の同定においては、灰色系の気菌糸、
屈曲状もしくはループ状の胞子連鎖、平滑な胞子表面、
メラニン様色素非産生、可溶性色素の産生および炭素源
の資化パターンなどの本菌株の特徴をもとに、細菌学名
承認リスト〔ヴィー・ビー・ディー・スカーマン(V.B.
D.Skerman)らの、Int.J.Syst.Bacteriol.30巻、225〜4
20(1980)〕で承認されている種名より、分類的特徴が
類似している種をISPの記載〔Int.J.Syst.Bacteriol.18
巻、69〜189、(1968)、同誌、18巻、279〜392、(196
8)、同誌、19巻、391〜512、(1969)、同誌、22巻、2
65〜394(1972)およびアール・イー・ブカナン(R.E.B
uchanan)とエヌ・イー・キボンズ(N.E.Gibbons)編、
バージーズ・マニュアル・オブ・デターミネイティブ・
バクテリオロジィ(Bergey's Manual of Deter−minati
ve Bacteriology)第8版〕で検索した。In the identification of species in this genus, gray aerial hyphae,
Bent or looped spore chains, smooth spore surface,
Based on the characteristics of this strain, such as non-melanin-like pigment production, soluble pigment production, and carbon source assimilation patterns, a bacteriological name approval list [VBD Scarman (VB
D. Skerman) et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 30, Vol.
20 (1980)], a species with similar taxonomic characteristics is described in the ISP [Int. J. Syst. Bacteriol. 18
Vol. 69-189, (1968), Journal, Vol. 18, 279-392, (196
8), same magazine, 19 volumes, 391-512, (1969), same magazine, 22 volumes, 2
65-394 (1972) and R.E. Buchanan (REB
uchanan) and NE Kibons (NEGibbons)
Barges Manual of Determinant
Bacteriology (Bergey's Manual of Deter-minati
ve Bacteriology) 8th edition].
検索の結果、ストレプトマイセス・ニグラ(Streptom
yces nigra)がDO−116株の近縁の種として挙げられた
が、種を特定することは困難であり、ストレプトマイセ
ス・エスピー(Streptomyces sp.)DO−116と命名し
た。As a result of search, Streptomyces nigra (Streptom
yces nigra) was named as a closely related species of the DO-116 strain, but it was difficult to identify the species, and the strain was named Streptomyces sp. DO-116.
該菌株はブタペスト条約に基づき、工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研条寄第2559号(FERM BP−255
9)として寄託されている(原寄託日:平成元年8月22
日)。Based on the Budapest Treaty, the strain was supplied to the Institute of Microbial Industry and Technology by the Ministry of Industrial Science and Technology, No. 2559 (FERM BP-255).
9) (Original deposit date: August 22, 1989)
Day).
次に培養法について述べる。 Next, the culture method will be described.
本発明の培養においては通常の放線菌の培養法が一般
に用いられる。培地としては資化可能な炭素源、窒素
源、無機物および必要な生育、生産促進物質を程よく含
有する培地であれば合成培地、天然培地いずれでも使用
可能である。In the culture of the present invention, a usual method of culturing actinomycetes is generally used. As a medium, any of a synthetic medium and a natural medium can be used as long as the medium contains assimilable carbon sources, nitrogen sources, inorganic substances, and necessary growth and production promoting substances.
炭素源としてはグルコース、澱粉、デキストリン、マ
ンノース、フラクトース、シュクロース、ラクトース、
キシロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜などが
単独または組み合わせて用いられる。さらに、菌の資化
能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸なども用
いられる。As a carbon source, glucose, starch, dextrin, mannose, fructose, sucrose, lactose,
Xylose, arabinose, mannitol, molasses and the like are used alone or in combination. Further, hydrocarbons, alcohols, organic acids and the like may be used depending on the assimilation ability of the bacteria.
窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素、ペプト
ン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチー
プ・リカー、大豆粉、カザミノ酸などが単独または組み
合わせて用いられる。As the nitrogen source, ammonium chloride, ammonium sulfate, ammonium nitrate, sodium nitrate, urea, peptone, meat extract, yeast extract, dried yeast, corn steep liquor, soybean powder, casamino acid and the like are used alone or in combination.
そのほか、必要に応じて食塩、塩化カリウム、硫酸マ
グネシウム、炭酸カルシウム、リン酸二水素カリウム、
リン酸水素二カリウム、硫酸第一鉄、塩化カルシウム、
硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸銅などの無機塩類を加え
る。In addition, if necessary, salt, potassium chloride, magnesium sulfate, calcium carbonate, potassium dihydrogen phosphate,
Dipotassium hydrogen phosphate, ferrous sulfate, calcium chloride,
Add inorganic salts such as manganese sulfate, zinc sulfate and copper sulfate.
さらに使用菌の生育やDC116の生産を促進する微量成
分を適当に添加することができる。Further, a trace component that promotes the growth of the bacterium used and the production of DC116 can be appropriately added.
培養法としては、液体培養法、とくに深部撹拌培養法
がもっとも適している。培養は、温度16〜37℃、好まし
くは25〜32℃、pH4〜10、好ましくは6〜8でおこなわ
れ、通常1〜7日で完了し、目的物質DC116が培養液中
および菌体中に生成蓄積される。As a culture method, a liquid culture method, particularly a deep stirring culture method, is most suitable. The cultivation is carried out at a temperature of 16 to 37 ° C., preferably 25 to 32 ° C., pH 4 to 10, preferably 6 to 8, usually completed in 1 to 7 days, and the target substance DC116 is contained in the culture solution and the cells. Generate and accumulate.
培地のpH調整にはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶
液などが用いられる。Ammonia water, ammonium carbonate solution, or the like is used to adjust the pH of the medium.
培養物中の生成量が最大に達したときに培養を停止す
る。The culture is stopped when the production in the culture reaches a maximum.
培養物からDC116の単離精製は、微生物代謝生産物を
その培養物から単離精製するために常用される方法に従
っておこなわれる。たとえば培養物を過により培養
液と菌体に分け、菌体をクロロホルム、アセトンなどで
抽出する。ついで、抽出液と培養液とを合わせて、ポ
リスチレン系吸着剤たとえばダイヤイオンHP20(三菱化
成社製)などに通塔して活性成分を吸着させ、ついで酢
酸エチル、アセトンなどで溶出する。溶出液を濃縮し、
シリカゲルによるカラムクロマトグラフィー、高速液体
クロマトグラフィーなどにより、DC116の赤色粉末を得
る。Isolation and purification of DC116 from the culture is performed according to a method commonly used for isolating and purifying a microbial metabolite from the culture. For example, the culture is separated into a culture solution and cells by filtration, and the cells are extracted with chloroform, acetone, or the like. Next, the extract and the culture solution are combined and passed through a polystyrene-based adsorbent such as Diaion HP20 (manufactured by Mitsubishi Kasei) to adsorb the active ingredient, and then eluted with ethyl acetate, acetone or the like. Concentrate the eluate,
A red powder of DC116 is obtained by column chromatography on silica gel, high performance liquid chromatography, or the like.
なお、培養、精製操作中のDC116の動向はバチルス・
ズブチリスNo.10707を用いるバイオアッセイ、または薄
層クロマトグラフィーによるDC116の紫外線吸収を目安
として追跡することができる。During the culture and purification operations, the trend of DC116
Bioassay using Subtilis No. 10707 or UV absorption of DC116 by thin layer chromatography can be followed as a guide.
以下に本発明の実施例を示す。 Hereinafter, examples of the present invention will be described.
実施例1. 種菌としてストレプトマイセス・エスビーDO−116を
用いる。該菌株を2容量の三角フラスコ中のバクト・
トリブトン(Difco社製)5g/、酵母エキス5g/、肉
エキス3g/、可溶性澱粉10g/、グルコース10g/、
炭酸カルシウム5g/の組成からなる種培地(殺菌前pH
7.2)300mlに植菌し、30℃で48時間振盪(200rpm)培養
した。Example 1. Streptomyces SB DO-116 is used as an inoculum. The strain was placed in a 2 volume Erlenmeyer flask.
Tribton (Difco) 5g /, Yeast extract 5g /, Meat extract 3g /, Soluble starch 10g /, Glucose 10g /,
Seed medium consisting of 5 g / calcium carbonate (pH before sterilization)
7.2) The cells were inoculated into 300 ml and cultured at 30 ° C. for 48 hours with shaking (200 rpm).
得られた種培養液を30容培養槽中の下記組成からな
る発酵培地15に10%(容量)の割合で移し、28℃で通
気撹拌方式(回転数200rpm,通気量15/min)により培
養をおこなった。The obtained seed culture solution is transferred at a rate of 10% (volume) to a fermentation medium 15 having the following composition in a 30-volume culture tank, and cultured at 28 ° C. by aeration and agitation (200 rpm, aeration 15 / min). Was done.
発酵培地組成:グリセロール25g/、グルコース25g/
、乾燥酵母15g/、KH2PO40.5g/、MgSO4・7H2O0.5g
/、炭酸カルシウム5g/(殺菌前pH7.0、NaOHで調
整) 培養中、培地のpHはとくに制御しないで、150時間培
養した。培養液にn−プロパノール15を添加し撹拌し
た後、培養物から菌体および沈殿物を別し、液28
を得た。Fermentation medium composition: glycerol 25g /, glucose 25g /
, Dried yeast 15g /, KH 2 PO 4 0.5g /, MgSO 4 · 7H 2 O0.5g
/, Calcium carbonate 5 g / (pH 7.0 before sterilization, adjusted with NaOH) During the culture, the culture was cultured for 150 hours without particular control of the pH of the medium. After adding n-propanol 15 to the culture and stirring, the cells and sediment were separated from the culture,
I got
液を濃縮後、水で希釈しポリスチレン系吸着剤ダイ
ヤイオンHP20(10)のカラムに通塔して活性物質を吸
着させた。After concentration, the solution was diluted with water and passed through a column of polystyrene adsorbent Diaion HP20 (10) to adsorb the active substance.
脱イオン水および50%メタノールで不純物を溶出後酢
酸エチルで活性物質を溶出した。活性画分を濃縮後、水
に加えダイヤイオンHP20SS(2)のカラムに通塔し、
活性物質を吸着させた。The active substance was eluted with ethyl acetate after eluting the impurities with deionized water and 50% methanol. After the active fraction was concentrated, it was added to water and passed through a column of Diaion HP20SS (2),
Active substance was adsorbed.
50%メタノールで不純物を溶出後90%メタノールで活
性物質を溶出させた。活性画分を濃縮後、酢酸エチルで
抽出した。After eluting impurities with 50% methanol, the active substance was eluted with 90% methanol. The active fraction was concentrated and extracted with ethyl acetate.
酢酸エチル層を濃縮後、セファデックスLH20にかけメ
タノールで溶出させた。活性物質を含む画分を濃縮し、
得られた物質を次に逆相系シリカゲル(YMC ODS SH−36
3−5、ワイエムシー社製)を用い、80%メタノールを
溶媒として高速液体クロマトグラフィーをおこなった。
DC116を含む画分をクロロホルムで抽出後、濃縮乾固
し、DC116の赤色粉末30mgを得た。After concentrating the ethyl acetate layer, it was applied to Sephadex LH20 and eluted with methanol. Concentrating the fraction containing the active substance,
The obtained substance was then used for reverse phase silica gel (YMC ODS SH-36).
High-performance liquid chromatography was performed using 80% methanol as a solvent, using a method described in "3-5, YMC".
The fraction containing DC116 was extracted with chloroform and concentrated to dryness to obtain 30 mg of DC116 red powder.
発明の効果 本発明により抗菌、抗腫瘍活性を有する新規発酵生産
物DC116が提供される。Effects of the Invention The present invention provides a novel fermentation product DC116 having antibacterial and antitumor activities.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 FI (C12N 1/20 C12R 1:465) (C12P 17/16 C12R 1:465) (58)調査した分野(Int.Cl.6,DB名) C12P 17/00 - 17/18 C07D 407/04 303 CA(STN) REGISTRY(STN)──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 6 Identification symbol FI (C12N 1/20 C12R 1: 465) (C12P 17/16 C12R 1: 465) (58) Investigated field (Int.Cl. 6 , DB name) C12P 17/00-17/18 C07D 407/04 303 CA (STN) REGISTRY (STN)
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1233342A JP2786267B2 (en) | 1989-09-08 | 1989-09-08 | New substance DC116 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1233342A JP2786267B2 (en) | 1989-09-08 | 1989-09-08 | New substance DC116 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0394693A JPH0394693A (en) | 1991-04-19 |
JP2786267B2 true JP2786267B2 (en) | 1998-08-13 |
Family
ID=16953648
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1233342A Expired - Fee Related JP2786267B2 (en) | 1989-09-08 | 1989-09-08 | New substance DC116 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2786267B2 (en) |
-
1989
- 1989-09-08 JP JP1233342A patent/JP2786267B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0394693A (en) | 1991-04-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2598116B2 (en) | New substance DC113 | |
EP0271581A1 (en) | Novel compounds dc-88a and dc-89a1 and process for their preparation | |
JP4521145B2 (en) | Antibiotic caprazomycin and its production | |
HOEHN et al. | 3'-Demethoxy-3'-hydroxystaurosporine, a novel staurosporine analogue produced by a blocked mutant | |
JP2786267B2 (en) | New substance DC116 | |
JP2811881B2 (en) | WS7622A, B, C and D substances, their derivatives, their preparation and their use | |
DE68916659T2 (en) | WS-9326 A, WS-9326B and their derivatives. | |
US4843008A (en) | Novel microorganisms and a novel process for producing antibiotics | |
JP2583554B2 (en) | New substance DC-107 | |
JP2766351B2 (en) | New substance DC114-C | |
JP2862986B2 (en) | Diterpene compound and method for producing the same | |
US5334613A (en) | Antibacterial substance BE-24566B | |
US4647693A (en) | Antibiotics DO-248-A and B and process for preparing the same | |
JP2795489B2 (en) | New substance DC115A compound | |
JP2854671B2 (en) | New substance UCF1 | |
JPH10114777A (en) | Antibiotic substance spiroximicin and its production | |
JP3112342B2 (en) | New compound UCE6 | |
US5066817A (en) | Dc115a compounds produced by streptomyces sp. | |
JPH05125071A (en) | Dc 8118 compound | |
KR0177585B1 (en) | Antitumor Substance B E-13793C-producing strain | |
WO1998043955A1 (en) | Tetramic acid compound | |
JPS63146784A (en) | Novel strain streptomyces rubropurpureus | |
JPH01121296A (en) | Novel substance dc-105 and production thereof | |
JPH11217382A (en) | Antibiotic tubelactomicin and its production | |
JPH08208644A (en) | New antibiotic substance cremimycin, its production and use |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |