SE423820B - Bakteriologiskt testsystem och forfarande for pavisande av smorsyrabakterier i mjolk - Google Patents

Description

8005859~9 smörsyra samt gas (väte och koldioxid) - osten jäser. Det är därför nödvändigt att fortlöpande kontrollera förekomsten av smörsyrabakterier i mjölk. Detta har hittills i allmänhet gjorts genom det s.k. Weinzirl'ska provet på följande sätt: 1. I ett sterilt provrör försatt med ca. l g paraffin till- sättes l ml av en glykos-mjölksyrablandning samt l0 ml av det undersökta mjölkprovet eller en lämplig spädning av detta. 2. Röret med mjölkprovet förvaras ca. 10 minuter i vattenbad vid 80°C, varigenom vegetativa bakterieceller dödas och luften drives ur provet. Paraffinet smälter och lägger sig' på mjölkytan och hindrar luften att komma ned i mjölken. 3. Provet inkuberas 7-10 dygn vid 3o°c. 4. Förekomsten av smörsyrabakterier visas genom att gas ut- vecklas i provet - paraffinproppen lyftes. Med hjälp av en särskild tabell kan man sedan fastställa det mest sanno- lika antalet smörsyrabakteriesporer i mjölkprovet.

Denna metod har visat sig vara dyr och arbetskrävande och till och med direkt ohanterlig, när ett stort antal prover måste tas. Det har därför funnits ett behov av ett förenklat och lätthanterligt testsystem för att fastställa närvaron av smör- syrabakterier i mjölk.

De krav som ställts på det nya systemet är att det skall vara enkelt att hantera, substratet skall vara sterilt och sterili- teten skall upprätthållas under längre tidsperioder, helst under månader och till och med år. Substratet skall utan väsent- liga kemiska förändringar kunna förvaras under en lång tidrymd.

Testsystemet skall lätt kunna transporteras och förvaras även efter inokulering, och en tydlig reaktion (gasbildning) skall även utvecklas vid mycket låga inokulat (< l0 sporer per ml prov). Produkten skall vara billig i jämförelse med nuvarande hantering. 8003859-9 Dessa problem har lösts med testsystemet enligt uppfinningen, som innefattar en vid l2l°C i 15 minuter genom autoklavering steriliserad flaska som försatts med ett sterilt substrat för anaerob eller mikroaerofil odling, såsom Reinforced Clostridial Medium (RCM) eller annat likvärdigt substrat, och ett mot substratet inert ämne, som stelnar vid en temperatur under ungefär 40°C och har lägre densitet än substratet, såsom silikon eller företrädesvis paraffin med en smältpunkt av 56-58°C, och som förslutits med gummimembran och metallbleck.

Det mot substratet inerta ämnet såsom silikon eller paraffin skall användas i en mängd, som vid den eventuella gasutveckling som sker om smörsyrabakterier finns närvarande vid testet till- låter gasen att expandera genom att silikon- eller paraffin- proppen skjutes uppåt av gastrycket.

För att underlätta paraffin- eller silikonproppens förskjut- ning vid gasbildning skall flaskan företrädesvis vara cylin- drisk och förhållandet mellan flaskans tvärsnittsdiameter och dess höjd skall vara 1:5 till l:2,5, företrädesvis 1:3.

För att ytterligare underlätta hantering och transport av flaskorna kan dessa förpackas stående i ett tåligt emballage av standardtyp.

Förhållandet mellan flaskans volym och substrat skall vara 4:1 till 3:1, företrädesvis 4:1, och mellan substrat och paraffin eller silikon 3:1 till 1:1, företrädesvis 2:l,5.

Med uttrycket “cylindrisk" avses en yta, som genereras genom parallellförskjutning av en rät linje utefter en sluten kurva.

Uppfinningen innefattar vidare ett sätt att påvisa smörsyra- bakterier i mjölk, enligt vilket mjölken som skall testas med en plastkanyl för engångsbruk tillsättes i den förslutna, genom autoklavering vid 12100 i 15 minuter steriliserade flaskan 8003859-9 genom gummimembranet, varefter flaskan med kanyl placeras i vattenbad vid 80°C i 10 minuter och därefter inkuberas vid 3l°C i 4-7 dygn, varpå gasbildningen i provet avläses.

De substrat och material, som användes i testsetet samt vid sättet enligt uppfinningen, är företrädesvis: Reinforced Clostridial Medium (RCM) CM 149, OXID Paraffin, smp. 56-58°C nr l-3643, KEB0 Oxford-spruta Plastkanyl (engångsbruk) l ml OXFORD LABORATORIES Flaska 4-10 ml, metallbleck, gummimembran Exempel. 6,5 ml flaskor fylles med l l/2 ml smält paraffin. Då detta stelnat, fylles flaskorna ytterligare med 2 ml RCM. Därefter tillslutes flaskorna med metallbleck och gummimembran samt auto- klaveras i 15 minuter vid l2l°C. De autoklaverade flaskorna förpackas stående i ett tåligt emballage av standardtyp och transporteras till användaren.

Fyllningen av paraffin och RCM kan genomföras i ett eller tvâ steg.

För att fastställa närvaron av smörsyrabakteriesporer i de med substrat och paraffin försatta, förslutna och autoklaverade flaskorna tillsättes ca. l ml mjölkprov genom gummimembranet med en steril plastkanyl för engångsbruk, varefter flaskorna med kanyl placeras i vattenbad vid 80°C i 10 minuter och slutligen flyttas till inkubatorn, där inkubering sker vid 31°c i 4-7 dygn.

Substratet har visat sig vara hållbart upp till sex månader utan att funktionen på något sätt försämras. Visserligen kan en viss grumling efter någon tid uppträda i substratet, men denna försvinner vid värmebehandlingen. Emballaget som sådant samt 8003859-9 förslutningen tål såväl transport som förvaring. Vid positiv reaktion (gasbildning) kan kanylen avlägsnas och kulturen överföras till speciallaboratorium för identifiering.

För kontroll av förekomsten av smörsyrabakteriesporer i mjölk tillsättes l ml mjölk medelst Oxford-spruta och plastkanyl för engångsbruk. Kanylen får sitta kvar i gummimembranet. Flaskan värmes l0 minuter vid 80°C i vattenbad för att avdöda vegeta- tiva celler. Paraffinet smälter. Provet inkuberas 4-7 dygn vid 3lOC. Paraffinet stelnar åter och lägger sig ovanpå bland- ningen av substrat-mjölkprov.

Efter inkuberingen avläses provet med avseende på gasbildning.

I de fall gasbildning föreligger visar den sig genom att paraf- finproppen pressas uppåt i flaskan och på så sätt antyder före- komsten av smörsyrabakterier i provet. Ett prov utan smörsyra- bakterier visar ingen gasutveckling.

Uppfinningen åskådliggöres närmare under hänvisning till bifo- gade ritning vari Fig. l visar en flaska (a) försatt med substrat (b) och paraf- fin (c) samt försluten med gummimembran (d) och metall- hylsa (e). Flaskan autoklaveras 15 minuter vid l2l°C.

Flaskan förpackas i standardemballage och är klar för leverans.

Fig. 2 visar flaskan l försatt med mjölkprovet (g) medelst en spruta och plastkanyl (f) genom gummimembranet.

Kanylen får sitta kvar i gummimembranet.

Fig. 3 visar flaskan uppvärmd 10 minuter vid 8000 i vattenbad för att avdöda vegetativa celler. Paraffinet har smält.

Fig. 4 visar flaskan efter inkubation 4-7 dygn vid 3l°C. Paraf- finet har åter stelnat och ligger ovanpå blandningen substrat-prov. 8003859-9 Fig. 5 visar en flaska med prov utan smörsyrabakterier, vilket inte ger någon gasbildning.

Fig. 6 visar gasbildning (i) efter inkubering. Paraffinproppen har pressats uppåt i flaskan, vilket indikerar förekomst av smörsyrabakterier i ursprungsprovet.

Claims (7)

1. 8003859-9 PATENTKRAV l. Testset för påvisande av smörsyrabakterier i mjölk, k ä n n e t e c k n a t därav, att det innefattar en försluten, genom autoklavering steriliserad cylindrisk flaska med huvud- sakligen parallella väggar och ett förhållande mellan flaskans tvärsnittsdiameter och höjd av 1:5 till l:2,5, vilken flaska är försatt med ett sterilt substrat för anaerob och mikro- aerofil odling såsom Reinforced Clostridial Medium (RCM) eller ett annat likvärdigt substrat och ett mot substratet inert ämne, som stelnar vid en temperatur av under ungefär 40oC, har en smältpunkt av 56-58°C och en densitet som är lägre än substratets densitet, ett förhållande mellan flaskans volym och volymen substrat + mot substratet inert ämne av 2:1 till l,5:l odiett finmålhufle mellan substrat och mot substratet inert ämne av 3:1 till 1:1 och mæfl.mjölken som skall testas medelst en kanyl tillsättes under aseptiska betingelser.

2. Testset enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k n a t därav, att det mot substratet inerta ämnet är paraffin.

3. Testset enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k n a t därav, att förhållandet mellan flaskans tvärsnittsdiameter och höjd är 1:3 och förhållandet mellan fläskans volym och volymen substrat + mot substratet inert ämne är 2:1.

4. Testset enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k n a t därav, att förhållandet mellan substrat och mot substratet inert ämne är 2:l,5.

5. Sätt att påvisa smörsyrabakterier i mjölk, k ä n n e - t e c k n a t därav, att mjölken som skall testas medelst en kanyl tillsättes i en försluten, genom autoklavering vid l2l°C i l5 minuter steriliserad cylindrisk flaska med huvudsakligen parallella väggar och ett förhållande mellan flaskans tvärsnitts- diameter och höjd av l:5 till l:2,5, innehållande ett sterilt 8003859-9 substrat såsom Reinforced Clostridial Medium (RCM) eller ett annat likvärdigt substrat och ett mot substratet inert ämne som stelnar vid en temperatur under ungefär 40àC, har en smält- punkt av 56-58°C och en densitet som är lägre än substratets densitet, ett förhållande mellan substrat och mot substratet inert ämne av 3:1 till l:l och mellan flaskans volym och voly- men substrat + mot substratet inert ämne av 2:1 till l,5:l och att flaskan med kanyl placeras i vattenbad vid 80OC i 10 minu- ter och inkuberas i 4-7 dygn vid 3l°C, varefter eventuell gas- bildning avläses.

6. Sätt enligt patentkravet 5, k ä n n e t e c k n a t därav, att flaskan är försluten med gummimembran och metallbleck och att mjölken tillsättes medelst en steril plastkanyl för engångsbruk genom gummimembranet.

7. Sätt enligt patentkravet 5, k ä n n e t e c k n a t därav, att förhållandet mellan substrat och mjölk är 4:1 till 2:1, företrädesvis ungefär 2:1.