SA519402070B1 - مصفوفة تشمل مادة أولية في متوالية وكيان غير متوالٍ - Google Patents

مصفوفة تشمل مادة أولية في متوالية وكيان غير متوالٍ Download PDF

Info

Publication number
SA519402070B1
SA519402070B1 SA519402070A SA519402070A SA519402070B1 SA 519402070 B1 SA519402070 B1 SA 519402070B1 SA 519402070 A SA519402070 A SA 519402070A SA 519402070 A SA519402070 A SA 519402070A SA 519402070 B1 SA519402070 B1 SA 519402070B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
poly
group
sequencing
entity
sequence
Prior art date
Application number
SA519402070A
Other languages
English (en)
Inventor
جيمس تساى
يوكسيانج هوانج
Original Assignee
.الومينا، إنك
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by .الومينا، إنك filed Critical .الومينا، إنك
Publication of SA519402070B1 publication Critical patent/SA519402070B1/ar

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J19/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J19/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J19/0046—Sequential or parallel reactions, e.g. for the synthesis of polypeptides or polynucleotides; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making molecular arrays
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
    • B01L3/5085—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • C12Q1/6874—Methods for sequencing involving nucleic acid arrays, e.g. sequencing by hybridisation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00279—Features relating to reactor vessels
    • B01J2219/00306—Reactor vessels in a multiple arrangement
    • B01J2219/00313—Reactor vessels in a multiple arrangement the reactor vessels being formed by arrays of wells in blocks
    • B01J2219/00315—Microtiter plates
    • B01J2219/00317—Microwell devices, i.e. having large numbers of wells
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B01J2219/0061—The surface being organic
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00639—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being trapped in or bound to a porous medium
    • B01J2219/00644—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being trapped in or bound to a porous medium the porous medium being present in discrete locations, e.g. gel pads
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00718—Type of compounds synthesised
    • B01J2219/0072—Organic compounds
    • B01J2219/00722—Nucleotides
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/069—Absorbents; Gels to retain a fluid
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0819—Microarrays; Biochips
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0896—Nanoscaled
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/12—Specific details about materials
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/16—Surface properties and coatings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
    • C12Q2527/125—Specific component of sample, medium or buffer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
    • C12Q2527/143—Concentration of primer or probe
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2565/00—Nucleic acid analysis characterised by mode or means of detection
    • C12Q2565/50—Detection characterised by immobilisation to a surface
    • C12Q2565/513—Detection characterised by immobilisation to a surface characterised by the pattern of the arrayed oligonucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2565/00—Nucleic acid analysis characterised by mode or means of detection
    • C12Q2565/50—Detection characterised by immobilisation to a surface
    • C12Q2565/518—Detection characterised by immobilisation to a surface characterised by the immobilisation of the nucleic acid sample or target
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
    • C40B40/06—Libraries containing nucleotides or polynucleotides, or derivatives thereof

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بمثال على مصفوفة array يتضمن دعمًا بما في ذلك عدد وافر من العيون المستقلة discrete wells، ومادة هلامية gel material موجودة في كل عين من العيون المستقلة، ومادة أولية في متوالية sequencing primer تم التطعيم بها في مادة الهلام، والكيان الذي لا يوجد في متوالية non-sequencing entity والمطعم في مادة الهلام. وكل من مادة الهلام المتوالية والكيان غير المتوالي يكون في شكل الطعمة. شكل1

Description

صفوفة تشمل مادة أولية في متوالية وكيان غير متوالٍ ‎ARRAY INCLUDING SEQUENCING PRIMER AND NON-SEQUENCING‏ ‎ENTITY‏ ‏الوصف الكامل
خلفية الاختراع
يستند هذا الطلب إلى اسبقية الطلب الأميركي المؤقت رقم 62/438.294 المودع في 22 ديسمبر
6 والذي تم تضمين محتواه هنا بالكامل للمرجعية.
قائمة المتواليات المقدمة هنا عبر ‎EFS-Web‏ تم تضمينها هنا بالكامل للمرجعية. اسم الملف
‎(ILI102BPCT_IP-1486-PCT_sequence_listing_ST25.txt 5‏ وحجمه 647 بايت؛ وتاريخ إنشائه
‏0 ديسمبر 2017.
‏تعد المصفوفات البيولوجية ‎Biological arrays‏ من بين مجموعة واسعة من الأدوات المستخدمة
‏للكشف عن الجزيئات وتحليلها؛ ‎Lay‏ في ذلك الحمض النووي ديوكسي ‎deoxyribonucleic acid su)‏
‎(DNA)‏ وحمض الريبي النووي ‎(RNA) ribonucleic acid‏ في هذه التطبيقات؛ تم تصميم 0 المصفوفات لتشمل تحقيقات تسلسل النيوكليوتيدات ‎nucleotide sequences‏ الموجودة في الجينات
‏في البشر والكائنات الحية الأخرى. وفي بعض التطبيقات؛ على سبيل المثال؛ قد يتم إرفاق أدوات
‏الحمض النووي ديوكسي ريبو وحمض الريبي النووي الفردية في مواقع صغيرة في شبكة هندسية
‎geometric grid‏ (أو عشوائيًا) في دعم المصفوفة ‎Larray support‏ قد تتعرض الشبكة لعينة اختبار
‏على سبيل ‎JE‏ من شخص أو ‎GIS‏ معروف؛ بحيث يتم تهجين الأجزاء التكميلية ‎complementary fragments 5‏ مع الأدوات في المواقع الفردية في المصفوفة. ويمكن بعد ذلك فحص
‏المصفوفة عن طريق مسح ترددات ‎frequencies‏ محددة من الضوء فوق المواقع لتحديد الأجزاء
‏الموجودة في ‎cial‏ عن طريق ومضان المواقع التي تم تهجينها.
‏يمكن استخدام المصفوفات البيولوجية للتسلسل الجيني ‎genetic sequencing‏ بشكل عام؛ يتضمن
‏التسلسل الجيني تحديد ترتيب النيوكليوتيدات أو الأحماض النووية ‎nucleic acids‏ بطول المادة الوراثية ‎«genetic material 0‏ مثل جزءِ من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. يجري تحليل تسلسلات
‏أطول فأكثر للأزواج القاعدية ‎(Sag chase pairs‏ استخدام معلومات التسلسل الناتجة في أساليب
المعلوماتية الحيوية المختلفة ‎Jay)‏ الشظايا ‎fragments‏ منطقياً معًا من أجل تحديد تسلسل أطوال ‎of gall‏ الوراثية ‎genetic materials‏ الواسعة التي استُخلصت منها الأجزاء . لقد تم تطوير الفحص الآلي المعتمد على الكمبيوتر للشظايا المميزة واستخدم في رسم خرائط الجينوم ‎genome mapping‏ وتحديد الجينات ووظيفتها وتقييم مخاطر حالات معينة وحالات الأمراض وما إلى ذلك. خارج هذه التطبيقات؛ يمكن استخدام المصفوفات البيولوجية للكشف عن وتقييم مجموعة واسعة من الجزيئات؛ وعائلات الجزيئات؛ ومستويات التعبير الجيني؛ وأشكال النوكليوتيدات المفردة؛ والتنميط الجيني. الوصف العام للاختراع يتضمن مثال على مصفوفة دعمًا ‎Lay‏ في ذلك عدد وافر من العيون المنفصلة؛ والمواد الهلامية ‎gel‏ ‎materials‏ الموجودة في كل من العيون المنفصلة ‎ediscrete wells‏ ومادة أولية في متوالية ‎sequencing primer 0‏ مطعمة في مادة هلامية ‎«gel material‏ وكيان لا يخضع لمتوالية ‎non-‏ ‎sequencing entity‏ مطعم في مادة هلامية. وكل من المادة الأولية التي تخضع لمتوالية والكيان الذي لا يخضع لمتوالية في حالة الطعمة. كما يتضمن مثال ‎AT‏ على مصفوفة ‎lied‏ بما في ذلك عدد ‎ly‏ من العيون المنفصلة» والمواد الهلامية الموجودة في كل من العيون المنفصلة؛ ومادة أولية في متوالية مطعمة في مادة هلامية؛ 5 ومحدد مواضع مطعم في مادة هلامية. ويتم اختيار الفاصل ‎spacer‏ من المجموعة التي تتكون من دندرايمر ‎cdendrimer‏ بولي ديكستران ‎cpolydextran‏ ميثاكربلوبلوكسي إيثيل فوسفوريل كولين ‎emethacryloyloxyethyl phosphorylcholine‏ بولي (إيقلين جليكول) ‎«poly(ethylene glycol)‏ بولي (إيثيلين إمين) ‎cpoly(ethylene imine)‏ بولي ‎L‏ ليسين ‎epoly-L-lysine‏ برويارجيل ميثاكريلات ‎¢propargyl methacrylate‏ بولي (ميثيل ميثاكريلات) ‎¢poly(methyl methacrylate)‏ بولي ‎N)‏ - 0 أيزو بروييل ‎epoly(N-isopropylacrylamide) (ul‏ بولي (إيثيلين جليكول) أكريليت ‎cpoly(ethylene glycol) acrylate‏ بوتي (بروبيلين إيمين) ‎cpoly(propylene imine)‏ بولي (كحول فينيل) ‎«poly(vinyl alcohol)‏ بولي (2- إيثيل -2 أوكسازولين) ‎«poly(2-ethyl-2-oxazoline)‏ ‏حمض بولي أكريليك ‎epolyacrylic acid‏ بولي (إستر ترولوكس) ‎cpoly(trolox ester)‏ ومجموعات منها. 5 ويتضمن مثال على طريقة يتم وضع هلام في كل مجموعة من العيون المنفصلة للدعم؛ ومادة أولية في متوالية مطعمة في مادة هلامية؛ وكيان لا يخضع لمتوالية مطعم في مادة هلامية.
شرح مختصر. للرسومات
ستظهر ميزات وجوانب أمثلة الكشف الحالي بوضوح عند الرجوع إلى الوصف والرسومات التفصيلية
التالية؛ ‎lly‏ تتطابق فيها الأرقام المرجعية مع المكونات المشابهة؛ وإن لم تكن غير متطابقة. من
أجل الإيجازء قد يتم أو لا يتم وصف الأرقام المرجعية أو الميزات التي لها وظيفة مذكورة مسبقًا فيما يتعلق بالرسومات الأخرى التي تظهر فيها.
الشكل 1 هو تمثيل تخطيطي لمثال على مصفوفة وفقًا للكشف الحالي؛ ويوضح التخطيط العام
للمصفوفة ويفصل ترتيب المواقع الفردية؛
الأشكال 2 إلى 2 د عبارة عن مقاطع عرضية توضح مع بعضها البعض مثال على الطريقة التي
يتم الكشف عنها هنا؛
0 الشكل 3 عبارة عن قطاع مقطعي مكبر لأحد المواضع الفردية في الأشكال 1 و2د. الشكل 4 هو رسم بياني يصورء؛ في أحد الأمثلة؛ نتائج مراقبة جودة ‎(QC) quality control‏ رابع كلوريد فلوريسين ‎¢(TET) tetrachloro fluorescein‏ من حيث ‎(liad‏ بالنسبة إلى الممرات بما في ذلك النسب المولارية المختلفة لمادة أولية ليس لها متوالية ‎non-sequencing primer‏ مع مادة أولية ذات متوالية؛
5 الشكل 5 هو رسم بياني يصور» في أحد الأمثلة؛ شدة قراءة 2 ‎CIA‏ بالنسبة إلى النسب المولارية المختلفة لمادة أولية ليس لها متوالية مع مادة أولية ذات متوالية؛ الأشكال 16 و 6 ب ‎Ble‏ عن رسومات بيانية تصورء في مثال واحدء النسبة المئوية للمجموعات التي تمر عبر مرشح ‎filter‏ للنسب المولية المختلفة لكيان لا يخضع لمتوالية لجديلة بوليمر ‎polymer‏ ‏0 إلى مادة أولية متوالية تخضع لمتوالية؛ و
الأشكال 7 و7ب عبارة عن رسومات بيانية تصور»؛ في مثال واحد» النسبة المئوية لمجموعة التنقل للنسب المولية المختلفة لكيان لا يخضع لمتوالية لجديلة بوليمر إلى ‎ale‏ أولية متوالية تخضع لمتوالية. الوصف التفصيلي: في جانب أول من المصفوفة التي يتم الكشف عنها ‎cbs‏ تشتمل المصفوفة على دعم بما في ذلك عدد ‎ily‏ من العيون المنفصلة؛ والمواد الهلامية الموجودة في كل من العيون المنفصلة؛ ومادة أولية
5 في متوالية مطعمة في ‎Bale‏ هلامية؛ وكيان لا يخضع لمتوالية مطعم في مادة ‎adhe‏ وكل من المادة الأولية التي تخضع لمتوالية؛ والكيان الذي لا يخضع لمتوالية يكونا في صورة طعمة.
في الجانب الأول من المصفوفة؛ تتراوح نسبة المولية للكيان الذي لا يخضع لمتوالية إلى المادة الأولية التي تخضع لمتوالية من حوالي 0.25: 1 إلى حوالي 5: 1. في أحد أمثلة جانب أول من المصفوفة؛ يتم اختيار الكيان الذي لا يخضع لمتوالية من المجموعة التي تتكون من دندرايمر» بولي ديكستران» ميثاكريلويلوكسي إيثيل فوسفوريل كولين» بولي (إيثيلين جليكول)؛ ‎doo‏ (إيثيلين إمين)؛ بولي ‎L‏ ليسين» بروبارجيل ميثاكريلات»؛ بولي (ميثيل ميثاكريلات)؛ بولي ‎N)‏ - أيزو بروبيل أكريلاميد)؛ بولي (إيثيلين جليكول) أكريليت؛ بولي (بروبيلين إيمين)؛ بولي (كحول فينيل)؛ بولي (2-إيثيل -2 أوكسازولين)» حمض بولي أكريليك؛ بولي (إستر ترولوكس) ويبتيد ‎peptide‏ ومادة أولية غير وظيفية ‎non-functional primer‏ وبتم تطعيم الكيان الذي لا يخضع لمتوالية مع مادة هلامية عبر مجموعة وظيفية طرفية ‎-terminal functional group‏ في 0 بعض الأمثلة؛ يتم اختيار المجموعة الوظيفية من المجموعة التي تتكون من ألكاين ‎alkyne‏ ‏ونوربورنيل ‎cnorbornyl‏ وجزيء خالية من النحاس ‎copper free click moiety‏ وثيول 01ن. كمثال في هذا الجانب الأول؛ الكيان الذي لا يخضع لمتوالية هو المادة الأولية غير الوظيفية؛ والمادة الأولية غير الوظيفية هي بولي 7 ‎polyT‏ أو بولي ‎polyA A‏ كمثال آخر في هذا الجانب الأول؛ الكيان الذي لا يخضع لمتوالية هو بولي (إيثيلين جليكول) له وزن جزيئي ‎molecular weight‏ يتراوح من 5 حوالي 0.5 كيلو دالتون إلى أقل من حوالي 10 كيلو دالتون. في مثال آخر للجانب الأول للمصفوفة؛ يشتمل الكيان الذي لا يخضع لمتوالية على ‎linker Jay‏ و مخفف الحالة ‎triplet state quencher AED‏ أو مضاد للأكسدة ‎anti-oxidant‏ مرتبط بالرابط. في بعض الأمثلة؛ يتم اختيار الرابط من المجموعة التي تتكون من ‎ahaa‏ بولي ديكستران؛ ميثاكريلويلوكسي إيثيل فوسفوريل كولين؛ بولي ‎ll)‏ جليكول)؛ بولي (إيثيلين إمين)؛ بولي ‎L‏ ‏0 ليسين؛ بروبارجيل ‎ed Sine‏ بولي (ميثيل ميثاكريلات)؛ بولي؛ بولي ‎N)‏ - أيزو ‎dug‏ أكريلاميد)؛ بولي (إيثيلين جليكول) أكريليت» بولي (بروبيلين إيمين)؛ بولي (كحول فينيل)؛ بولي (2-إيثيل -2 أوكسازولين)؛ حمض بولي أكربليك؛ وبولي (إستر ترولوكس). في بعض الأمثلة على هذا الجانب؛ يتم اختيار مخفف الحالة الثلاثية من المجموعة التي تتكون من سيكلو أوكتيل تيترين -ماعنن ‎octyltetracne‏ (07©)؛ ترولوكس ‎«Trolox‏ وكحول التتروينزيل ‎¢(NBA) nitrobenzyl alcohol‏ وفي بعض الأمثلة؛ يتم اختيار مضاد الأكسدة من المجموعة التي تتكون من أسكوريات ‎ascorbate‏
جلوتاثيون ‎glutathione‏ حمض الجاليك ‎¢gallic acid‏ كاتشين ‎ccatechin‏ ترلوكس؛ وفيتامين ه
.vitamin E
في مثال ‎AT‏ للجانب الأول للمصفوفة؛ يشتمل الكيان الذي لا يخضع لمتوالية على رابط ونقل طاقة
الرنين الفلورية ‎(FRET) fluorescence resonance energy transfer‏ مرتبط بالرابط. في بعض
الأمثلة؛ يتم اختيار الرابط من المجموعة التي تتكون من دندرايمر؛ بولي ديكستران» ميثاكريلويلوكسي
‎Ji‏ فوسفوريل كولين؛ بولي (إيثيلين جليكول)؛ بولي (إيثيلين إمين)؛ بولي .1 ليسين؛ بروبارجيل
‏ميثاكريلات؛ بولي (ميثيل ميثاكريلات)؛ بولي ((إيثيلين جليكول) أكربليت؛ بولي (بروبيلين إيمين)؛
‏بولي (كحول ‎(did‏ بولي (2-إيثيل -2 أوكسازولين)» حمض بولي ‎edi‏ ويولي (إستر
‏ترولوكس). في بعض الأمثلة على هذا الجانب؛ يتم اختيار متبرع نقل طاقة الرنين الفلورية من 0 المجموعة التي تتكون من صبغة متبرع إلى نقل طاقة الرنين الفلورية مع صبغة خضراء باعثة
‏وصبغة متبرع إلى نقل طاقة الرنين الفلورية مع صبغة حمراء اللون.
‏يجب أن يكون مفهوما أنه قد يتم دمج أي من سمات الجانب الأول من المصفوفة ‎ie‏ بأي طريقة و
‏/ أو تكوين مرغوب فيهما.
‏يتضمن مثال ثان على مصفوفة يتم الكشف عنها هنا على دعم بما في ذلك عدد وافر من العيون 5 المنفصلة؛ والمواد الهلامية الموجودة في كل من العيون المنفصلة؛ ومادة أولية في متوالية مطعمة
‏في مادة هلامية؛ ومحدد مواضع مطعم في مادة هلامية. في بعض الأمثلة يتم اختيار الفاصل من
‏المجموعة التي تتكون من دندرايمر؛ بولي ديكستران» ميثاكربلويلوكسي إيثيل فوسفوريل كولين؛ بولي
‏(إيثيلين جليكول)؛ بولي (إيثيلين إمين)؛ بولي .1 ليسين؛ برويارجيل ميثاكريلات؛ بولي (ميثيل
‏ميثاكريلات)؛ بولي (إيثيلين جليكول) أكريليت؛ بولي (بروبيلين إيمين)؛ بولي (كحول فينيل)؛ بولي 0 (2-إيثيل -2 أوكسازولين)» حمض بولي أكربليك؛ بولي (إستر ترولوكس)؛ ومجموعات منها.
‏في الجانب الثاني من المصفوفة 10؛ تتراوح نسبة المولية للفاصل إلى المادة الأولية التي تخضع
‏لمتوالية من حوالي 0.25: 1 إلى حوالي 5: 1.
‏يشتمل أحد الأمثلة على الجانب الثاني من المصفوفة ‎Lia‏ على مخمدات ثلاثية الحالة؛ أو ‎ple‏
‏للتأكسد؛ أو ‎mile‏ لنقل طاقة صدى التألق ‎(FRET)‏ متجه إلى الفاصل. في بعض الأمثلة على هذا 5 الجانب؛ يتم اختيار مخفف الحالة الثلاثية من المجموعة التي تتكون من سيكلو أوكتيل تيترين؛
‏ترولوكس» وكحول التتروينزيل؛ ‎Ag‏ بعض الأمثلة؛ يتم اختيار مضادات الأكسدة من المجموعة التي
تتكون من أسكوربات؛ جلوتاثيون» حمض الجاليك؛ كاتشين؛ ترلوكس؛ وفيتامين ه. ‎Ag‏ بعض الأمثلة على هذا الجانب؛ يتم اختيار متبرع نقل طاقة الرنين الفلورية من المجموعة التي تتكون من صبغة متبرع إلى نقل طاقة الرنين الفلورية مع صبغة خضراء باعثة وصبغة متبرع إلى نقل طاقة الرنين الفلورية مع صبغة حمراء اللون.
في أحد أمثلة الجانب الثاني من المصفوفة يتم تطعيم الفاصل في مادة هلامية عبر مجموعة وظيفية طرفية. في بعض الأمثلة؛ يتم اختيار المجموعة الوظيفية من المجموعة التي تتكون من ألكاين؛ ونوربورنيل» وجزيء خالية من النحاس؛ وثيول. يجب أن يكون مفهوما أنه قد يتم دمج أي من سمات الجانب الثاني من المصفوفة ‎sb be‏ طريقة و / أو تكوين مرغوب فيهما. علاوة على ذلك» ينبغي إدراك أن أي مجموعة من ميزات الجانب الأول
0 و / أو الجانب الثاني يمكن استخدامها معًاء و / أو أنه قد يتم الجمع بين أي ميزات من أي من هذه الجوانب أو كليهما مع أي من الأمثلة التي تم الكشف عنها هنا. يتضمن جانب من الطريقة يتم وضع هلام في كل مجموعة من العيون المنفصلة للدعم؛ وعمل طعمة لمادة أولية في متوالية في مادة هلامية؛ وعمل طعمة لكيان لا يخضع لمتوالية في مادة هلامية. في أحد الأمثلة لهذا الجانب من الطريقة؛ يتم عمل طعمة من المادة الأولية التي تخضع لمتوالية مع
5 المادة الهلامية قبل أو بعد عمل طعمة من الكيان الذي لا يخضع لمتوالية في مادة هلامية. في مثال ‎AT‏ لهذا الجانب من الطريقة؛ يتم عمل طعمة مشتركة من المادة الأولية التي تخضع لمتوالية والكيان الذي لا يخضع لمتوالية في مادة هلامية. ويتم التطعيم المشترك عن طريق إيداع خليط من المادة الأولية التي تخضع لمتوالية والكيان الذي لا يخضع لمتوالية على الدعم الذي يحتوي على مادة هلامية؛ وتحضين الدعم في درجة حرارة محددة سلفا.
0 في هذا الجانب من الطريقة؛ يتم اختيار الكيان الذي لا يخضع لمتوالية من المجموعة التي تتكون من دندرايمر» بولي ديكستران» ميثاكريلويلوكسي إيثيل فوسفوربل كولين؛ بولي (إيثيلين جليكول)؛ بولي (إيثيلين إمين)؛ بولي .1آ ‎(Od‏ برويارجيل ميثاكريلات؛ بولي (ميثيل ميثاكريلات)؛ بولي (ايثيلين جليكول) أكربليت؛ بولي (بروبيلين إيمين)؛ بولي (كحول فينيل)؛ بولي (2-إيثيل -2 أوكسازولين)؛ حمض بولي أكريليك؛ بولي (إستر ترولوكس) ‎cating‏ ومادة أولية غير نشطة؛ ويتم تطعيم الكيان
5 الذي لا يخضع لمتوالية مع مادة هلامية عبر مجموعة وظيفية طرفية. في بعض الأمثلة؛ يتم اختيار
المجموعة الوظيفية الطرفية من المجموعة التي تتكون من ألكاين» ونوربورنيل» وجزيء خالية من النحاس؛ وثيول. في بعض جوانب الطريقة؛ يشتمل الكيان الذي لا يخضع لمتوالية على مخمدات ثلاثية الحالة؛ أو مضادات للتأكسد؛ أو ‎mile‏ لنقل طاقة صدى التألق مرتبطه.
يجب أن يكون مفهوما أنه قد يتم دمج هذه السمة من الطريقة بأي شكل. علاوة على ذلك؛ ينبغي إدراك أن أي مجموعة من هذا ‎clad)‏ من الطريقة يمكن جمعها مع أي جوانب من المصفوفة و / أو أي من الأمثلة التي يتم الكشف عنها هنا. تشمل أمثلة المصفوفات التي يتم الكشف عنها هنا عدة مواضع؛ كل منها له مادة أولية وكيان لا يخضع لمتوالية مرتبط في ‎Bale‏ هلامية. يمكن استخدام المادة الأولية الخاضعة لمتوالية في ريط
0 وتضخيم أحماض الديوكسي الرببي النووي المضاد أو الأحماض النووية الريبية ‎ribonucleic acids‏ » بينما لا يشارك الكيان الذي لا يخضع لمتوالية في الربط أو التضخيم. بدلاً من ذلك؛ يعمل الكيان الذي لا يخضع لمتوالية كفاصل بين المواد الأولية المتوالية ‎sequencing primers‏ قد يؤدي الفصل بين المادة البادئة التي تخضع للمتوالية إلى تعزيز التضصخيم عن طريق الحد من العائق الجامد للبروتينات المشاركة في عملية التضخيم ‎-amplification process‏
5 بالإضافة إلى العمل كفاصل؛ قد يقدم الكيان الذي لا يخضع إلى متوالية أيضًا إلى وظائف أخرى للمصفوفة. على سبيل ‎Bal)‏ يؤدي الكيان الذي لا يخضع لمتوالية إلى: (1) الحد من الارتباط غير المحدد للأنزيمات ‎enzymes‏ والبروتينات و / أو الجزيئات الصغيرة الأخرى ‎sald‏ الهلام أثناء التضخيم وعمل المتوالية؛ (2) زيادة قابلية المادة الهلامية للماء؛ والتي يمكن أن تساعد في منع انهيارها في الظروف الجافة؛ (3) تعزيز خصائص ومضان الأصباغ المرتبطة بالمواد الهلامية؛ و
0 / أو 4) مجموعات من 1 و/أو 2 و / أو 3. علاوة على ذلك؛ قد يساعد الكيان الذي لا يخضع لمتوالية في عرض المواد الأولية للسطح الوظيفي ‎functional surface primers‏ من السطح. يجب فهم أن المصطلحات المستخدمة هنا لها معناها المعروف في المجال ذي الصلة ما لم ينص على خلاف ذلك. وترد أدناه العديد من المصطلحات المستخدمة هنا ومعانيها. تشير صيغ الإفراد إلى الجمع إلا إذا تم تحديد غير ذلك صراحة.
كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ يشير "الألكايل ‎"alkyl‏ إلى سلسلة هيدروكريون ‎hydrocarbon‏ ‎chain‏ مستقيمة أو متفرعة مشبعة بالكامل (أي لا تحتوي على روابط مزدوجة أو ثلاثية). قد تحتوي
مجموعة الألكايل على 1 إلى 0958320 ‎atoms‏ «دطتهن. تتضمن مجموعات الألكيل الميثيل ‎cmethyl‏ الإيثيل ‎ethyl‏ البروبيل ‎١ propyl‏ لأيزوبروبيل ‎cisopropyl‏ البوتيل ‎butyl‏ الإيزويوتيل ‎isobutyl‏ ثلاثي البوتيل ‎certiary butyl‏ البنتيل ‎cpentyl‏ الهكسيل ‎chexyl‏ وما شابه. على سبيل المتال» يشير "61-4 ‎alkyl JS‏ 01-4" إلى وجود ذرة واحدة إلى ‎al‏ ذرات كربون في سلسلة الألكايل. أي يتم اختيار سلسلة الألكايل من المجموعة التي تتكون من الميثيل والإيثيل والبروبيل والأيزو بروييل» ‎=n‏ بوتيل ‎n-butyl‏ إيزوبوتيل» ع6؟-بوتيل ‎tg sec-butyl‏ - بوتيل ‎t-butyl‏ ‏كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ يشير "ألكينيل ‎alkenyl‏ إلى سلسلة هيدروكربون مستقيمة تحتوي على رابط مزدوج ‎double bonds‏ أو أكثر. قد تحتوي مجموعة الألكينيل على 2 إلى 20 ذرة كربون. تتضمن مجموعات ألكينيل ‎alkenyl groups‏ إيثينيل ‎cethenyl‏ بروبينيل 000801 بوتينيل ‎cbutenyl 0‏ بنتينيل الإدعادءم» هكسينيل ‎chexenyl‏ وما شابه. يمكن أن تكون مجموعة الألكينيل» على سبيل المثال» "02-4 ألكينيل ‎alkenyl‏ 02-4"؛ مما يشير إلى أن هناك ذرتين إلى ‎al‏ ذرات كربون في سلسلة الألكينيل. كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ يشير "الكاينيل ‎alkynyl‏ إلى سلسلة هيدروكريون مستقيمة تحتوي على رابط ثلاثي ‎triple bonds‏ أو أكثر. قد تحتوي مجموعة الألكاينيل على 2 إلى 20 ذرة كريون. 5 يمكن أن تكون مجموعة الألكاينيل» على سبيل المثال» "2-4 ألكاينيل ‎alkynyl‏ 2-4"؛ مما يشير إلى أن هناك ذرتين إلى أربع ذرات كريون في سلسلة الألكاينيل. تشير المجموعة الوظيفية "الأمينية" ‎“amino” functional group‏ إلى مجموعة ‎(NRuRp~‏ حيث يتم اختيار كل من ‎Ry‏ و ‎Ry‏ بشكل مستقل من الهيدروجين» 1-6© ألكيل ‎«C1-6 alkyl‏ 02-6 ألكينيل ‎«C2-6 alkenyl‏ 02-6 ألكاينيل ‎«C2-6 alkynyl‏ 03-7 كريوسككليل ‎«C3-7 carbocyclyl‏ 6-10 أريل ‎«C6-10 aryl‏ 5 -10 عضو أريل غير متجانس ‎membered heteroaryl‏ 5-10< و 10-5 عضو سيكليل غير متجانس ‎membered heterocyclyl‏ 5-10» على النحو المحدد هنا. ‎WS‏ هو مستخدم هناء يشير مصطلح ‎"aryl Jf‏ إلى نظام أو ‎dala‏ عطرية ‎aromatic ring‏ أو نظام عطري ‎ring system‏ (أي حلقتان مندمجتان ‎fused rings‏ أو أكثر التي تشترك في ذرتين من الكريون المتجاورتين) يحتوي على الكريون فقط في العمود الفقري للحلقة ‎.ring backbone‏ عندما 5 يكون الأريل نظام حلقي» فإن كل حلقة في النظام تكون عطرية. يمكن أن تحتوي ‎de sane‏ الأريل
على 6 إلى 18 ذرة كربون؛ ‎Ally‏ يمكن تعيينها على أنها 06-18. أمثلة على مجموعات الأريل
تشمل فيئيل ‎phenyl‏ تفقيل ‎naphthyl‏ آزولينيل ‎cazulenyl‏ وأنتراسينيل ‎.anthracenyl‏
تشير عبارة ‎JS‏ يشبه مطعمة” إلى حالة المادة الأولية و / أو الكيان الذي لا يخضع إلى متوالية
حيث يتم إرفاقه بمادة الهلام نتيجة التطعيم؛ ودون أي تغيير. في الأمثلة التي تم الكشف عنها هناء فإن الكيان الذي ليس له متوالية في شكله الطعمة غير قادر على الخضوع لمتوالية الحمض النووي
أو الحمض النووي الريبي. بمعنى ‎AT‏ من النقطة التي يتم عندها تطعيم الكيان الذي لا يخضع
لمتولية إلى مادة الهلام؛ فإنه غير قادر على عمل المتوالية. على هذا النحو» لا يلزم اتخاذ خطوات
معالجة إضافية لجعل الكيان الذي لا يخضع لمتوالية غير تفاعلي أثناء المتوالية. بدلاً من ذلك؛
عندما يتم تطعيم الكيان غير الخاضع لمتوالية» فلن يكون قادرًا على التسلسل.
‎LS 10‏ هو مستخدم هناء يشير المصطلح 'مرفق" إلى ‎Ala‏ عنصرين يتم ضمهما أو تثبيتهما أو ربطهما أو إلصاقهما ببعضهما البعض. على سبيل المثال؛ يمكن ربط الحمض النووي بمادة؛ مثل مادة الهلام؛ بواسطة رابطة تساهمية ‎covalent bond‏ أو رابطة غير تساهمية ‎non-covalent‏ ‏40. تتميز الرابطة التساهمية بتقاسم أزواج الإلكترونات ‎electrons‏ بين الذرات. الرابطة غير ‎Leal all‏ هي رابطة كيميائية ‎chemical bond‏ لا تنطوي على مشاركة أزواج من الإلكترونات
‏5 ويمكن أن ‎cain‏ على سبيل المثال» روابط الهيدروجين ‎chydrogen bonds‏ والروابط الأيونية ‎conic bonds‏ وقوى فان دير فال؛ والتفاعلات المحبة للماء ‎hydrophilic interactions‏ والتفاعلات الكارهة تلماء ‎hydrophobic interactions‏ تشير المجموعة الوظيفية "أزيد ‎"azide‏ أو "أزيدو ‎"azido‏ إلى ‎N3‏ ‏كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ فإن "الكربوسيكليل ‎"carbocyclyl‏ يعني حلقة أو نظام حلقة غير
‏0 عطري ‎non-aromatic cyclic ring‏ يحتوي على ذرات الكريون فقط في العمود الفقري لنظام الحلقة. عندما يكون الكريوسيكليل عبارة عن نظام حلقات» قد يتم ربط حلقتين أو أكثر ‎lie‏ بطريقة تتصهر أو تجسر أو متصلة بحلقة دوارة. قد يكون الكربوسيكليل أي درجة من التشبع» شريطة ألا تكون هناك حلقة واحدة على الأقل في نظام الحلقة عطرية. وبالتالي فإن الكريوسيكليل يشتمل على سيكلو ألكيل حلقي منولتدماعىي» سيكلو الكينيل ‎ccycloalkenyls‏ وسيكلو الكاينيل ‎.cycloalkynyls‏ قد
‏5 تحتوي مجموعة الكريوسيكليل على 3 إلى 20 ذرة كربون (أي 03-20). تتضمن أمثلة حلقات الحلقات الكريونية ‎ccyclopropyl Jug pels oll carboeyclyl rings‏ والسيكلوبوتيل ‎ccyclobutyl‏
والسيكلوينتيل ‎coyclopentyl‏ والسيكلو هكسيل ‎coyclohexyl‏ والسيكلى هكسينيل ‎«cyclohexenyl‏ ‏و2 +3 ثنائي هيدرو إندين ‎«2.3-dihydro-indene‏ وباي سيكلو [2.2.2] أوكتانيل ‎cbicyclo[2.2.2]octanyl‏ وأدامانتيل ‎cadamantyl‏ وسبيرو [4.4] تونائيل ‎.spiro[ 4.4]nonanyl‏ كما هو مستخدم ‎(lis‏ يشير المصطلح "حمض الكريوكسيل ‎"carboxylic acid‏ أو "الكريوكسيل ‎"carboxyl 5‏ كما هو مستخدم هنا إلى ‎.C )0( OH-‏ كما هو مستخدم هناء يعني 'سيكلوألكيل ‎"cycloalkyl‏ نظام حلقة أو حلقة مشبعة تمامًا من الكريوسيكليل ‎fully saturated carbocyclyl ring‏ ومن الأمثلة على ذلك ‎(dag pels ull‏ والسيكلوبوتيل» والسيكلوبنتيل؛ والسيكلو هكسيل. كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ يعني 'سيكلو ألكيلين ‎"cycloalkylene‏ حلقة أو حلقة كريوسيكليل 0 مشبعة بالكامل متصلة بباقي الجزيء عبر نقطتين من الارتباط. كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ فإن "سيكلو الكاينيل انردعءالدما»رن" أو "سيكلو ألكان ‎‘cycloalkane‏ تعني نظام حلقي أو حلقة كريوكسيل تحتوي على رابطة مزدوجة واحدة على ‎(JY‏ ‏حيث لا توجد حلقة في نظام الحلقة عطرية. ومن الأمثلة على ذلك سيكلو هكسيئيل أو سيكلو هكسين ‎cyclohexene‏ ونوريورنين ‎norbornene‏ أو نوربورنيل الإ00:00:060. كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ فإن "'سيكلو ألكينيل غير متجانس ‎"heterocycloalkenyl‏ أو "يكلو ألكين غير متجانس ‎"heterocycloalkene‏ تعني نظام حلقي أو حلقة كريوكسيل تحتوي على رايطة مزدوجة واحدة على الأقل» حيث لا توجد حلقة في نظام الحلقة عطرية. كما هو مستتخدم في هذه الوثيقة؛ فإن 'اسيكلو ألكاينيل الإ«ولادم0ن" أو يكلو ألكاين ع«روللدما»ره" تعني نظام حلقي أو حلقة كريوكسيل تحتوي على رابطة ثلاثية واحدة على الأقل؛ 0 حيث لا توجد حلقة في نظام الحلقة عطرية. من الأمثلة عليها سيكلو أوكتين ‎.cyclooctyne‏ ‏وكمثال ‎AT‏ باي سيكلونونين ‎Lbicyclononyne‏ كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ فإن سيكلو ألكاينيل غير متجانس ‎"heterocycloalkynyl‏ أو "سيكلو ألكاين غير متجانس ‎"heterocycloalkyne‏ ‏تعني نظام حلقي أو حلقة كربيوكسيل تحتوي على رابطة ثلاثية واحدة على ‎(BY)‏ حيث لا توجد حلقة في نظام الحلقة عطرية. 5 يشير مصطلح "الترسيب"؛ كما هو مستخدم هناء إلى أي أسلوب مناسب والذي قد يكون يدويًا أو ‎JS‏ عام؛ يمكن إجراء عملية الترسيب باستخدام تقنيات ترسيب البخار أو تقنيات الطلاء أو
تقنيات التطعيم أو ما شابه. بعض الأمثلة المحددة تشمل ترسيب البخار الكيميائي ‎chemical‏ ‎¢(CVD) vapor deposition‏ طلاء الرش ‎espray coating‏ طلاء الدوران ‎coating‏ صزم؟؛ طلاء الغمرء التصريفء أو ما شابه. المقصود من المصطلح ‎(US‏ عند استخدامه في الإشارة إلى مجموعة من العناصر؛ تحديد عنصر فردي في المجموعة ولكنه لا يشير بالضرورة إلى كل عنصر في المجموعة. يمكن أن تحدث استثناءات إذا كان الكشف الصريح أو السياق صريحًا يفرض خلاف ذلك. 'محسن التألق ‎"fluorescence enhancer‏ هو أي جزيء يمكنه تحسين خاصية التألق أو يمكن أن يقلل من التلف الناتج عن الصورة. على سبيل المثال؛ قد يكون مُحيّن التألق مضادًا للأكسدة يعمل على تحسين قابلية الصور الضوئية لصبغة ومضان ‎fluorescence dye‏ (أو النيوكليوتيدات 0 الوظيفية بالكامل ‎(FEN) fully functional nucleotide‏ المدمجة في التسلسل بعملية التوليف ‎sequencing by synthesis‏ (585). في مثال آخرء قد يكون ‎(tak‏ الومضان جهة ‎dale‏ لنقل طاقة صدى التألق » والتي تمتص الطاقة في منطقة من طيف الامتصاضص ‎absorption spectrum‏ وتتبرع بالطاقة لإثارة الأصسباغ ‎Je)‏ سبيل المثال» قد تكون مرتبطة بالنيوكليوتيدات) في مكان آخر. قد يكون متبرع نقل طاقة الرنين الفلورية صبغة مانحة لنقل طاقة الرنين الفلورية مع دمج 5 الصبغة والكشف عنها في تسلسل سير عمل التوليف. بالنسبة إلى مثال آخر؛ قد يكون ‎rin‏ ‏الومضان عبارة عن مخفف ثلاثي الحالة يمكن أن يخفف من الأضرار الناجمة عن الصور (على سبيل المثال؛ للأحماض النووية) التي قد تكون ناجمة عن فلوروفورات ثلاثية الحالة ‎triplet-state‏ ‎fluorophores‏ شديدة التفاعل. قد تقلل أداة إخماد الحالة الثلاثية من العمر الافتراضي للمركب المثير ‎excited compound‏ في ‎Als‏ ثلاثية؛ مما يقلل من مقدار الوقت الذي يمكن أن يسببه مركب 0 الحالة الثلاثية ‎ triplet-state compound‏ ضرر ناتج عن الصورة لمكون آخر مرتبط بمادة الهلام. كما هو مستخدم ‎Liab (ld‏ بمصطلح 'مادة الهلام' مادة شبه صلبة ‎semi-rigid material‏ منفذة للسوائل والغازات. ‎Bale‏ ما تكون ‎sale‏ الهلام عبارة عن هلام ‎hydrogel Fle‏ يمكن أن ينتفخ عند أخذ السائل ‎Sarg‏ أن يتقلص عند إزالة السائل عن طريق التجفيف. 5 كما هو مستخدم هناء يشير مصطلح ‎Jf‏ غير متجانس" إلى نظام عطري أو حلقة عطرية (أي حلقتان أو أكثر من الذرات المندمجة تشترك في ذرتين متجاورتين) تحتوي على واحدة أو أكثر من
ذرات مغايرة ‎<heteroatoms‏ أي عنصر ‎Al‏ غير الكريون؛ بما في ذلك ولكن لا يقتصر على النيتروجين ‎nitrogen‏ والأكسجين 8ع والكبربت «90100»؛ في العمود الفقري للحلقة. ‎Lexie‏ يكون الأريل غير المتجانس عبارة عن نظام ‎(ls‏ فإن كل حلقة في النظام تكون عطرية. قد يكون لمجموعة الأريل غير المتجانس أعضاء حلقة 18-5.
كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ فإن التعبير "حلقي غير متجانس ‎"heterocyclyl‏ يعني حلقة أو نظام حلقة غير عطري يحتوي على ذرات الكريون فقط في العمود الفقري لنظام الحلقة. يتم ريط الحلقات غير المتجانسة ‎lie Heterocyclyls‏ بطريقة مدمجة أو موصولة أو حلقية. قد يكون للحلقات غير المتجانسة أي درجة من التضبع شريطة ألا تكون هناك حلقة واحدة على الأقل في النظام عطرية. في النظام الحلقي؛ قد تكون الحلقات غير المتجانسة موجودة سواء في حلقة غير
0 عطرية أو عطرية. قد تحتوي مجموعة حلقية غير متجانسة ‎heterocyclyl group‏ على 3 إلى 20 من أعضاء الحلقة ‎(gf)‏ عدد الذرات التي تشكل العمود الفقري للحلقة؛ بما في ذلك ذرات الكريون وذرات غير متجانسة). يمكن تعيين مجموعة حلقية غير متجانسة على أنها ' أعضاء 6-3 حلقية غير متجانسة" أو تسميات مماثلة. في بعض الأمثلة؛ تكون الأضداد غير المتجانسة هي 0 أو ‎N‏ ‏أو 5.
5 يشير المصطلح "هيدرازين ‎"hydrazine‏ أو "هيدرازينيل ‎"hydrazinyl‏ كما هو مستخدم هنا إلى مجموعة -11111112. كما هو مستخدم هناء يشير المصطلح "هيدرازون ‎"hydrazone‏ أو "هيدروزونيل 17020071 كما
1 NH, ‏و م8 مسبقًا هنا.‎ Ry ‏حيث تم تعريف‎ A Ry ‏هو مستخدم هنا إلى مجموعة‎ .011- ‏عبارة عن مجموعة‎ "hydroxyl ‏فإن "الهيدروكسيل‎ cla ‏كما هو مستخدم‎
0 كما هو مستخدم ‎(Us‏ يشير مصطلح "المنطقة الخلالية ‎"interstitial region‏ إلى منطقة في الركيزة ‎substrate‏ / الدعم أو على سطح يفصل مناطق أخرى من الركيزة أو السطح. على سبيل ‎(Jal‏ ‏يمكن للمنطقة الخلالية فصل ميزة واحدة من المصفوفة عن ميزة أخرى للمصفوفة. يمكن أن تكون الميزتان منفصلتان عن بعضهما البعض؛ بمعنى أنهما لا يتصلا ببعضهما البعض. في مثال ‎OAT‏ ‏يمكن أن تفصل المنطقة البينية الجزءِ الأول من الميزة عن ‎gall‏ الثاني من الخاصية. في العديد
من الأمثلة؛ تكون المنطقة الخلالية مستمرة في حين أن الميزات منفصلة؛ على سبيل المثال؛ كما
هو الحال بالنسبة لمجموعة العيون المحددة في سطح متصل ‎continuous surface‏ آخر. يمكن أن يكون ‎Jail)‏ الذي توفره المنطقة البينذية فصل جزئي أو كامل. قد تحتوي المناطق الخلالية ‎Interstitial regions‏ على مادة سطحية ‎surface material‏ تختلف عن المواد السطحية للمميزات المحددة في السطح. على سبيل ‎(JB)‏ يمكن أن تحتوي ميزات المصفوفة على كمية أو تركيز المادة الهلامية؛ المادة (المواد) الأولية ذات المتوالية؛ والكيانات غير المتوالية ‎non-sequencing‏ ‎entities‏ التي تتجاوز الكمية أو التركيز الموجود في المناطق الخلالية. في بعض الأمثلة؛ قد لا تكون المواد الهلامية؛ المادة (المواد) الأولية ذات المتوالية؛ والكيانات غير المتوالية موجودة في المناطق الخلالية. "أكسيد النيتريل ‎Nitrile oxide‏ كما هو مستخدم ‎(lia‏ يُقصد به مجموعة "0 + ‎"~RaC=N‏ التي تم 0 تعريف ‎Ra‏ فيها من قبل. تشمل الأمثلة على تحضير أكسيد النتريل في التوليد الموضعي من الألدوكسيمات ‎aldoximes‏ عن طريق المعالجة باستخدام الكلوراميد- ‎chloramide-T T‏ أو من خلال عمل القاعدة على كلوريد إيميدويل ‎.[RC (C1) = NOH] imidoyl chlorides‏ 'النيترون ع(72000؛ كما هو مستخدم ‎(ld‏ يعني مجموعة '0 + 1166 = ‎"“RaRbC‏ التي تم تعريف ‎Ra‏ و ‎Rb‏ مسبقًا عليها هنا ويتم تحديد ‎Re‏ من 61-6 ألكيل؛ 62-6 ألكينيل» 2-6 ألكاينيل» 03-7 5 كربوسيكل؛ أريل 06-10؛ 5-10 مغاير الأعضاء؛ و 10-5 أريل غير متجانس؛ كما هو محدد هنا. كما هو مستخدم هناء يشمل 'النيوكليوتيد" قاعدة نيتروجينية تحتوي على قاعدة حلقية غير متجانسة ‎nitrogen containing heterocyclic base‏ وسكر ومجموعة فوسفات ‎phosphate‏ واحدة أو أكثر . النيوكليوتيدات هي وحدات أحادية التسلسل ‎monomeric units‏ للحمض النووي ‎‘nucleic acid‏ في الحمض النووي الريبي؛ يكون السكر عبارة عن ريبوز ©7004 وفي الحمض النووي ديوكسيريبوز ‎cdeoxyribose 0‏ أي السكر الذي يفتقر إلى مجموعة الهيدروكسيل الموجود في الموضع 2 "في الريبوز. النيتروجين الذي يحتوي على قاعدة غير متجانسة ‎heterocyclic base‏ يمكن أن يكون قاعدة البيورين ‎purine base‏ أو قاعدة ‎pyrimidine base (pain‏ تشمل قواعد البيورين ‎Purine‏ ‎bases‏ الأدينين ‎(A) adenine‏ و جوانين ‎¢(G) guanine‏ والمشتقات المعدلة ‎modified derivatives‏ أو النظائر منها. تشمل قواعد البيريميدين ‎Pyrimidine bases‏ السيتوزين ‎¢(C) cytosine‏ الثايمين ‎¢(T) thymine 5‏ والبوراسيل ‎uracil‏ (نآ)؛ والمشتقات المعدلة أو النظائر منها.ء ترتبط ذرة ‎C-1‏ من
دايوكسي رايبوز ‎C-1 atom of deoxyribose‏ ب 11-1 لبيريميدين ‎N-1 of pyrimidine‏ أو 119 من
.N-9 of purine ‏البيورين‎
قد يكون "الكيان غير المتوالي" المشار إليه هنا هو جزيء المتفرج الذي لا يشارك بنشاط في تخليق
الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. يمكن استخدام الكيان غير المتوالي لتوفير التباعد بين المواد الرئيسية التي تخضع لمتوالية والمطعمة. قد يكون للكيان الذي لا يخضع لمتوالية أيضًا
وظيفة ‎of)‏ وظائف) ‎coal‏ مثل الحد من الارتباط غير المحدد؛ زيادة ماء المادة الهلامية؛ تعزيز
خصائص الومضان؛ أو توليفات منها. على هذا النحوء قد يكون الكيان الذي لا يخضع لمتوالية
أحادي الوظيفة؛ أو ثنائي الوظيفة؛ أو متعدد الوظائف. تتضمن أمثلة الكيان الذي لا يخضع
لمتوالية المادة الأولية غير الوظيفية؛ وجديلة البوليمر» والببتيد؛ و / أو مُحسّن ومضان.
‎sald 0‏ الأولية غير الوظيفية" هو أي متوالية ذات جديلة للحمض النووي ‎stranded nucleic acid‏ ‎sequence‏ وحيدة ولن تشارك في تخليق الحمض النووي أو الحمض النووي ‎٠. Dl‏ تتضمن أمثلة المواد الأولية غير الوظيفية ‎non-functional primers‏ متوالية بولي أو متوالية بولي ‎A‏ يمكن تحديد طول المادة الأولية غير الوظيفية بحيث لا يحدث تهجين غير محدد. كمثال؛ قد يتراوح طول المادة الأولية غير الوظيفية من 3 إلى 10. في بعض الحالات؛ يكون طول المادة الأولية
‏5 غير الوظيفية أقل من 10 قواعد. "جديلة ‎adsl)‏ هي جزيء يتكون من عدد قليل من وحدات المونومر ‎monomer units‏ المتكررة (أي الأوليجمومرات ‎(oligomer‏ أو العديد من وحدات المونومر المتكررة (أي البوليمرات). قد تكون جديلة البوليمر خطية أو متفرعة أو مفرطة التفرع. ‎Jai‏ أمثلة البوليمرات المتفرعة ‎branched‏ ‎polymers‏ البوليمرات النجمية ‎star polymers‏ والبوليمرات المشطية ‎comb polymers‏ والبوليمرات
‏0 ذات الفرشاة ‎brush polymers‏ والبوليمرات المتشعبة ‎dendronized polymers‏ والسلمية ‎ladders‏ ‏والتخليقية المتشعبة ‎dendrimers‏ في الأمثلة التي تم الكشف عنها ‎(ba‏ تشتمل جديلة البوليمر على مجموعة وظيفية طرفية في طرف واحد يمكنها التفاعل مع مادة الهلام. في بعض الحالات؛ قد تشمل الطرف الآخر من جديلة البوليمر مجموعة وظيفية طرفية ترتبط مع مخمد ثلاثي الحالة؛ أو مضاد للأكسدة؛ أو صبغة. في هذه الحالات؛ قد تعمل جديلة البوليمر كحلقة وصل (ملحقة)
‏5 المخمد ثلاثي الحالة؛ ومضاد الأكسدة؛ أو الصبغة لمادة الهلام.
‎"aif‏ عبارة عن سلسلة قصيزرة من مونومرات الأحماض الأمينية ‎amino acid monomers‏ ‎day yall‏ بستدات الببتيد (أميد) ‎.peptide (amide) bonds‏ كما هو مستخدم في هذه الوثيقة؛ يتم تعريف "المادة الاولية التي تخضع ‎"algal‏ على أنها تسلسل وحيد للحمض النووي أحادي الجديلة ‎le) single stranded nucleic acid‏ سبيل المثال» الحمض النووي المفرد للحمض النووي أو الحمض النووي الريبي المنتفصسل) الذي يعمل كنقطة انطلاق لتوليف الحمض النووي الريبي النووي. يمكن تعديل نهاية 5 'من المادة الأولية التي تخضع لمتوالية للسماح بتفاعل اقتران ‎coupling reaction‏ مع مادة هلام. طول المادة البادئة التي تخضع لمتوالية يمكن أن يكون أي عدد من القواعد ويمكن أن يمل مجموعة متنوعة من النيوكليوتيدات غير الطبيعية ‎-non-natural nucleotides‏ في أحد الأمثلة؛ تمثل المادة الأولية جديلة قصيرة؛ تشتمل من 0 20 قاعدة إلى 40 قاعدة. كما هو مستخدم هناء يشير "الموقع' إلى موقع محدد في دعم حيث يمكن ربط مادة الهلام؛ والمادة الأولية لمتوالية؛ والكيان الذي لا يخضع لمتوالية. يتم استخدام مصطلحي "الركيزة" و "الدعم” بالتبادل هناء وتشير إلى السطح الذي يوجد فيه الموقع. يكون الدعم صلبًا عمومًا وغير قابل للذوبان في سائل مائي ‎aqueous liquid‏ قد يكون الدعم 5 خاملًا للكيمياء المستخدمة لتعديل ‎sale‏ الهلام. على سبيل المثال؛ يمكن أن يكون الدعم الصلب ‎Sali solid support‏ كيميائيا ومستتخدم لإرفاق المواد الأولية المتوالية والكيان الذي لا يخضع لمتوالية؛ بمادة الهلام بالطريقة الموضحة هنا. تشمل الأمثلة على الدعامات المناسبة: الزجاج والزجاج المعدل أو الوظيفي؛ والبلاستيك (بما في ذلك الأكريليك ‎acrylics‏ والبوليسترين ‎polystyrene‏ والبوليمرات المشتركة ‎copolymers‏ للستايرين ‎styrene‏ والمواد الأخرى ؛ والبولي 0 بروبيلين ‎polypropylene‏ والبولي إيثيلين ‎polyethylene‏ والبولي بيوتيلين ‎polybutylene‏ والبولي يوريثان ‎polyurethanes‏ والبولي تترا فلورو إيثيلين ‎(PTFE) polytetrafluoroethylene‏ (مثل ‎TEFLON®‏ من ‎(Chemours‏ بوليمرات سيكلو — أولفين ‎cyclic olefins/cyclo-olefin‏ ‎(COP) polymers‏ (مثل ‎ZEONOR®‏ من ‎«(Zeon‏ بوليميدات 6ع010ة(ا0م» إلخ)؛ النايلون السيراميك» السيليكا ‎silica‏ أو المواد التي أساسها السيليكا ‎silica-based materials‏ 5 السيليكون ‎silicon‏ والسيليكون المعدل ‎(Ge SI modified silicon‏ المعادن؛ النظارات غير العضوية ‎«inorganic glasses‏ وحزم الألياف الضوئية ‎.optical fiber bundles‏
كما هو مستخدم هناء يشير المصطلحان ‎"tetrazine (bE‏ و 'تترازينيل ‎"tetrazinyl‏ إلى مجموعة ‎dul‏ غير متجانس المكونة من ستة أعضاء والتي تضم أريع ذرات نيتروجين. يمكن استبدال تترازين اختيارياً؛ تشير كلمة 'تترازول ع7600201”؛ كما هو مستخدم هناء إلى مجموعة حلقية غير متجانسة مكونة من خمسة أعضاء بما في ذلك ‎of‏ ذرات نيتروجين. يمكن استبدال تترازول اختيارياً. يشير مصطلح المجموعة الوظيفية الطرفية” إلى مجموعة وظيفية معلقة على كيان غير متسلسل وبالتالي يمكن الوصول إليها للتفاعل مع مادة الهلام. تشير المجموعة الوظيفية 'ثيول" إلى -511. كما هو مستخدم هناء يشير المصطلح "عين" إلى وحدة مقعرة منفصلة في دعامة لها فتحة سطح 0 محاطة بالكامل بالمنطقة (المناطق) الخلالية لسطح الدعم. يمكن أن يكون لأي من العيون أشكال متعددة عند فتحتها على السطح؛ بما في ذلك على سبيل المثال الأشكال؛ الدائرية؛ البيضاوية؛ المريعة؛ متعددة الأضلاع؛ على شكل نجمة (بأي عدد من الرؤوس)؛ إلخ. يمكن أن يكون منحني المقطع العرضي للعين المتعامد مع السطح؛ مربعاء؛ متعدد الأضلاع؛ عديد الأضلاع؛ مخروطي؛ زاوي» إلخ. 5 يمكن فهم الجوانب والأمثلة الموضحة هنا وعناصر الحماية المذكورة في ضوء التعاريف المذكورة أعلاه. بالرجوع إلى الشكل 1؛ يتم عرض مثال على المصفوفة 10. بشكل عام؛ تحتوي المصفوفة 10 على ركيزة أو دعم 12 وخطوط أو قنوات تدفق ‎flow channels‏ 14 عبر الدعم 12. تتضمن كل قناة من قنوات التدفق 14 مواقع متعددة 16 مفصولة عن بعضها البعض بواسطة المناطق الخلالية 0 18. في كل موقع 16 يتم إيداع مادة (مواد) أولية خاضةة لمتوالية 20 وكيان / كيانات غير خاضعة لمتوالية 22 وإرفاقهما بمادة الهلام )24 24"؛ على سبيل المثال؛ في الشكل 2د). المصفوفة 10 الموضحة في الشكل 1 والمناقشة في هذا الكشف قد يتم وضعها أو تشكيلها كجزء من خلية التدفق ‎«flow cell‏ وهي غرفة ‎Jodi‏ سطحًا ‎solid surface Ghia‏ تتدفق عبره سوائل حاملة ‎carrier fluids‏ مختلفة؛ وكواشف ‎reagents‏ وما إلى ذلك. في أحد الأمثلة؛ قد تشتمل خلية التدفق 5 على المصفوفة 10 المرتبطة بالركيزة العليا ‎top substrate‏ من خلال مادة مانعة للتسرب ‎sealing‏ ‎material‏ (على سبيل المثال؛ بوليميد أسود ‎black polyimide‏ أو مادة ريط ‎bonding material‏
أخرى مناسبة). يحدث الترابط في مناطق الترابط ‎bonding regions‏ للدعم 12» والمواد المانعة للتسرب» والركيزة العليا. قد تقع مناطق الترابط بين قنوات التدفق بحيث تفصل مادة منع التسريب ‎Gale‏ قناة التدفق ‎flow channel‏ 14 عن قناة التدفق المجاورة 14 (لمنع التلوث المتبادل) وقد تكون موجودة في محيط خلية التدفق (لغلق التدفق من من التلوث الخارجي). ومع ذلك؛ يجب أن يكون مفهوما أن مناطق الترابط ومواد ‎Cay will wie‏ قد تكون موجودة في أي منطقة مطلوية حب التنفيذ. يمكن تحقيق الترابط عن طريق الترابط بالليزر ‎laser bonding‏ أو الترابط بالانتشفار ‎diffusion bonding‏ أو الترابط الأنودي ‎anodic bonding‏ أو أو الترابط بالبلازما ‎plasma‏ ‎activation bonding‏ أو الترابط بالزجاج ‎glass frit bonding‏ أو الطرق الأخرى المعروفة في
المجال.
0 تم توضيح أمثلة أخرى لخلايا التدفق ‎flow cells‏ وأنظمة الموائع ‎fluidic systems‏ ذات الصلة ومنصات الكشضف ‎detection platforms‏ التي يمكن دمجها مع المصفوفة 10 و / أو المستخدمة بسهولة في طرق الكشف الحالي» على سبيل المثال» في ‎Nature 456: 53-59 «Bentley et al.‏ 8) والبراءة الدولية 04/018497؛ البراءة الأمريكية 7.057.026؛ البراءة الدولية 8 البراءة الدولية 07/123744؛ البراءة الأمريكية 7.329.492؛ البراءة الأمريكية
5 7.211.414؛ البراءة الأمريكية 7.315.019؛ البراءة الأمريكية 7.405.281 و البراءة الأمريكية 2 ولتي تم دمج كل منها هنا بالكامل للمرجعية. في بعض التطبيقات؛ تُستخدم خلية التدفق لأداء تفاعلات كيميائية أو تفاعلات كيميائية حيوية يتم التحكم فيها في جهاز أتمتة التفاعل ‎automation device‏ 060800007 كما في مُسلسل النوكليوتيدات ‎sequencer‏ عل00010110. يمكن حفر المنافذ ‎Ports‏ 26 من خلال الدعم 12. من خلال الاتصال
0 بالمنافذ 26( يمكن لجهاز أتمتة التفاعل التحكم في تدفق ‎Ci all‏ (المنتجات) في قنوات التدفق المختومة ‎sealed flow channels‏ 14. قد يقوم جهاز أتمتة التفاعل في بعض التطبيقات بضبط الضغط ودرجة الحرارة وتكوين الغاز والظروف البيئية الأخرى لخلية التدفق. علاوة على ذلك في بعض التطبيقات؛ قد يتم حفر المنافذ 26 في الركيزة العليا أو في كل من الدعم 12 والركيزة العليا. في بعض التطبيقات؛ يمكن مراقبة التفاعلات التي تحدث في قنوات التدفق المحكمة 14 من خلال
5 الركيزة ‎Wall‏ و / أو الدعم 12 عن طريق التصوير أو قياسات الحرارة وانبعاث الضوء و / أو الومضان.
يجب أن يكون مفهوما أن الاتجاه المحدد لقنوات التدفق 14 والمواقع 16 وما إلى ذلك قد يختلف عن تلك الموضحة في الشكل 1. في بعض ‎Abia)‏ تكون المواقع 16 متجاورة؛ ‎July‏ لا يلزم فصلها عن طريق المناطق البينية 18. سيتم الآن وصف المصفوفة 10 من الشكل 1 وأمثلة عن كيفية عمل المصفوفة 10 ‎Whar‏ من التفصيل وبالإشارة إلى الأشكال 2 إلى 2د. الشكل 2 يصور الدعم 12 له مواقع 16 محددة فيه وتفصلها المناطق الخلالية 18. هذا الدعم 12 له سطح مكرر ‎surface‏ 00116060. يشير "السطح المتكرر" إلى ترتيب المناطق المختلفة (أي المواقع 16) في أو على طبقة مكشوفة ‎exposed layer‏ من الدعم الصلب 12. على سبيل ‎(Jbl‏ ‏يمكن أن يكون موقع واحد أو أكثر من المواقع 16 ميزات حيث يوجد واحد أو أكثر من المواد 0 الأولية لمتوالية (التضخيم) 20 والكيانات غير الخاضعة لمتوالية 22. يمكن فصل المميزات عن طريق المناطق الخلالية 18( ‎Cus‏ لا توجد مواد أولية متوالية 20 وكيانات غير غير متوالية 22. يمكن تصور العديد من التنسيقات المختلفة للمواقع ¢16 بما في ذلك الأنماط العادية والتكرارية وغير العادية. في أحد الأمثلة؛ يتم التخلص من المواقع 16 في شبكة سداسية ‎hexagonal grid‏ للتغليف الوثيق وتحسين الكثافة. قد تتضمن التنسيقات الأخرى؛ على سبيل ‎(Ji‏ تخطيطات 5 مستطيلة الشكل (مثل؛ مستطيلة)؛ تخطيطات ثلاثية؛ وما إلى ذلك. على سبيل المثال» يمكن أن يكون التنسيق أو النمط عبارة عن تنسيق س ص للمواقع 16 الموجودة في صفوف وأعمدة. في بعض الأمثلة الأخرى؛ يمكن أن يكون التنسيق أو النمط ‎Gy‏ متكررًا للمواقع 16 و / أو المناطق الخلالية 18. في بعض الأمثلة الأخرى؛ يمكن أن يكون التنسيق أو النمط ترتيبًا عشضوائيا للمواقع 516 / أو المناطق الخلالية 18. قد يشتمل النمط على ‎(bali‏ منصات؛ ‎(ge‏ شرائط خطوط 0 دوامات؛ مثلثات» مستطيلات؛ دوائر» أقواس؛ اختبارات» اسطح؛ أقطارء أسهم؛ مربعات؛ و / أو بوابات متقاطعة. ولا تزال هناك أمثلة أخرى على الأسطح المتكررة ‎patterned surfaces‏ التي يمكن استخدامها في الأمثلة الموضحة في هذه الوثيقة موصوفة في براءات الاختراع الأمريكية رقم 9 9.079.148؛ ¢8.778.848 و 2014/0243224؛ ‎aig‏ دمج كل منها هنا للمرجعية بالكامل. 5 قد يتم تمييز التصميم أو النمط فيما يتعلق ‎BES‏ المواقع 16 ‎(gl)‏ عدد المواقع 16) في منطقة محددة. على سبيل المثال؛ قد تكون المواقع 16 موجودة بكثافة تقارب 2 مليون لكل ملم 2. يمكن
ضبط الكثافة على كثافات مختلفة ‎Ly‏ في ذلك؛ على سبيل المثال» كثافة لا تقل عن 100 لكل ملم حوالي 1000 لكل ملم » حوالي 0.1 مليون لكل ملم *» حوالي 1 مليون لكل ملم *» حوالي 2 مليون لكل ملم © حوالي 5 مليون لكل ملم © حوالي 10 مليون لكل ملم *» حوالي 50 مليون لكل ملم *؛ أو أكثر. بشكل بديل أو إضافي؛ يمكن ضبط الكثافة بحيث لا تزيد عن 50 مليون لكل ملم 2 حوالي 10 مليون لكل ملم 2 حوالي 5 مليون لكل ملم » حوالي 2 مليون لكل ملم @ حوالي 1 مليون لكل ملم 2 حوالي 0.1 مليون لكل ملم * حوالي 1000 لكل ملم 2 أو حوالي 100 لكل ملم أو أقل. يجب أن يكون مفهوما أن كثافة المواقع 16 على الدعم 12 يمكن أن تكون بين واحدة من القيم الأدنى وواحدة من القيم العليا المحددة من النطاقات أعلاه. على سبيل المثال؛ قد يتم وصف المصفوفة ‎dle‏ الكثافة ‎high density array‏ بأنها تحتوي على مواقع 16 مفصولة بأقل من 0 حوالي 15 ميكرون؛ وقد يتم وصف مصفوفة متوسطة الكثافة ‎medium density array‏ على أنها تحتوي على مواقع 16 مفصولة بحوالي 15 ميكرومتر إلى حوالي 30 ميكرومتر؛ وقد تكون مصفوفة منخفضة الكثافة ‎low density array‏ تتميز بوجود مواقع 6 مفصولة بأكثر من حوالي 0 ميكرون. قد يتم أيضًا تمييز أو تخطيط المخطط أو النمذجة من حيث متوسط المستوىء أي التباعد من 5 مركز الموقع 16 إلى مركز المنطقة البينية المجاورة 18 (تباعد من مركز إلى وسط). يمكن أن يكون النموذج منتظمًا بحيث يكون معامل التباين ‎coefficient of variation‏ حول متوسط المسار صغيرًا؛ أو قد يكون النموذج غير منتظم في هذه الحالة يمكن أن يكون معامل التباين ‎BS‏ نسبيًا. في كلتا الحالتين» يمكن أن يكون المتوسط؛ على سبيل المثال» حوالي 10 نانومتر» حوالي 0.1 ميكرون؛ حوالي 0.5 ميكرون؛ حوالي 1 ميكرون؛ حوالي 5 ميكرون؛ حوالي 10 ميكرون» حوالي 0 100 ميكرون؛ أو ‎ST‏ بشكل بديل أو إضافي؛ يمكن أن يكون المتوسط على سبيل المثال؛ حوالي 100 ميكرون؛ حوالي 10 ميكرون؛ حوالي 5 ميكرون؛ حوالي 1 ميكرون» حوالي 0.5 ميكرون حوالي 0.1 ميكرون؛ أو أقل. يمكن أن يكون متوسط درجة الدقة لنمط معين من المواقع 6 بين إحدى القيم الأدنى وواحدة من القيم العليا المحددة من النطاقات أعلاه. في أحد الأمثلة؛ المواقع 16 لها مسافة (تباعد من مركز إلى وسط) يبلغ حوالي 1.5 ميكرون. 5 في بعض الأمثلة؛ تكون المواقع 16 هي العيون 16 وبالتالي يتضمن الدعم 12 مجموعة من العيون 16" على سطحها. قد يتم تصنيع العيون 16 (أو المواقع الأخرى 16 ذات التكوينات
المختلفة؛ مثل ‎(Jal)‏ المقطع العرضيء وما إلى ذلك) باستخدام مجموعة متنوعة من التقنيات؛ بما في ذلك» على سبيل ‎(Jud)‏ الطباعة الليثوغرافية؛ الطباعة الحجرية النانوية؛ تقنيات الختم؛ تقنيات النقش؛ تقنيات التشكيل؛ تقنيات الحفر الدقيق؛ تقنيات الطباعة؛ الخ كما سيكون موضع تقدير من قبل العاملين في المجال؛ ستعتمد التقنية المستخدمة على تكوين وشكل الدعم 12.
قد تكون العيون 16 ‎lige’‏ صغيرة (لها بعد واحد على الأقل على مقياس ميكرون» على سبيل المثال» من حوالي 1 ميكرومتر إلى حوالي 1000 ميكرومتر) أو عيونا متناهية الصغر (لها بعد واحد على الأقل في مقياس النانوء على سبيل المثال؛ حوالي 1 نانومتر إلى 1000 نانومتر). قد تتميز كل عين 16 " بحجمها ومساحة فتحة ‎Jill‏ وعمقها و / أو قطرها. يمكن أن يحتوي كل عين 16 ' على أي حجم قادر على حصر السائل. يمكن تحديد الحد الأدنى
0 أو الحد الأقصى للحجم؛ على سبيل ‎(Jal‏ لاستيعاب الإنتاجية (على سبيل المثال؛ تعدد الإرسال)؛ أو الدقة»؛ أو تركيبة التحليل ‎analyte composition‏ أو تفاعلية التحليلات المتوقعة للاستخدامات النهائية للمصفوفة 10. على سبيل المثال؛ يمكن أن يكون الحجم على الأقل حوالي ‎x 1‏ 710 ميكرو متر مكعب أو حوالي 1 7 10 * ميكرو متر مكعب أو حوالي 0.1 ميكرو متر مكعب أو حوالي 1 ميكرو متر مكعب أو حوالي 10 ميكرو متر مكعب أو حوالي 100 ميكرو متر
5 مكعب أو أكثر. بدلا من ذلك إو بالإضافة ‎ead]‏ يمكن أن يكون الحجم على الأقل حوالي 1 ‎x‏ 10 * ميكرو متر مكعب أو حوالي 1 ‎X‏ 10 3 ميكرو متر مكعب أو حوالي 100 ميكرو متر مكعب أو حوالي 10 ميكرو متر مكعب أو حوالي 1 ميكرو متر مكعب أو حوالي 0.1 ميكرو متر مكعب أو أقل. ينبغي إدراك أن ‎sale‏ الهلام 24 يمكن أن تملاً كل أو جزءِ من حجم العين 16 '. يمكن أن يكون حجم ‎sald)‏ الهلامية 24 في عين فردية 16 ‎ST‏ من أو أقل من أو بين القيم المحددة أعلاه.
0 يمكن اختيار المنطقة التي تشضغلها كل فتحة عين على السطح بناءً على معايير مماثلة ‎AS‏ ‏المذكورة أعلاه لحجم العين. على سبيل المثال؛ يمكن أن تكون مساحة كل فتحة عين على السطح حوالي 1 ‎x‏ 10 7 ميكرومتر 2 وحوالي 1 ‎x‏ 10 * ميكرومتر 2 وحوالي 0.1 ميكرومتر 2 وحوالي 1 ميكرومتر 2 وحوالي 10 ميكرومتر 2 وحوالي 100 ميكرومتر 2؛ أو أكثر. بدلاً من ذلك أو بالإضافة إلى ذلك» يمكن أن تكون المنطقة على الأكثر حوالي 1 ‎x‏ 10 3 ميكرومتر 2؛
5 حوالي 100 ميكرومتر؛ حوالي 10 ميكرومتر؛ حوالي 1 ميكرومتر؛ حوالي 0.1 ميكرومتر © حوالي 1 ‎x‏ 10 * ميكرومتر “؛ أو أقل.
يمكن أن يكون عمق كل عين 16 على الأقل حوالي 0.1 ميكرومتر؛ حوالي 1 ميكرومتر؛ حوالي 0 ميكرومتر؛ حوالي 100 ميكرومتر؛ أو ‎ST‏ بشكل بديل أو إضافي؛ يمكن أن يكون العمق على الأكثر حوالي 1 ‎x‏ 103 ميكرون؛ حوالي 100 ميكرون؛ حوالي 10 ميكرون» ‎dss‏ 1 ميكرون؛ ‎ss‏ 0.1 ميكرون؛ أو أقل. في بعض الحالات؛ يمكن أن يكون قطر كل ‎yi‏ 16 'على الأقل حوالي 50 نانومتر» وحوالي 0.1 ميكرون» وحوالي 0.5 ميكرون؛ ‎(ong «Og fae 1 (ong‏ 10 ميكرون؛ وحوالي 100 ميكرون؛ أو ‎ST‏ بشكل بديل أو إضافي؛ يمكن أن يكون القطر على الأكثر حوالي 1 ‎x‏ 103 ميكرون؛ حوالي 100 ميكرون؛ حوالي 10 ميكرون؛ حوالي 1 ميكرون؛ حوالي 0.5 ميكرون؛ حوالي 0.1 ميكرون» حوالي 50 ميكرومتر» أو أقل.
0 في المجموعة 10 التي يتم تشكيلهاء يتم وضع مادة الهلام 24 في كل من العيون المنفصلة 16 '. يمكن تحقيق موضع مادة الهلام 24 في كل عين 16 'عن طريق طلاء السطح المتكرر للدعم 12 ‎Yl‏ بمادة الهلام 24؛ كما هو موضح في الشكل 2ب؛ ثم إزالة مادة الهلام 24 على سبيل المثال عن طريق تلميع المواد الكيميائية أو الميكانيكية؛ على الأقل من المناطق الخلالية 18 على سطح الهيكل المهيكلي ‎structured support‏ 12 بين العيون 16 '. في بعض الأمثلة؛ يمكن إزالة ‎sale‏
5 الهلام من المناطق الخلالية بغسل الخطوات التي لا تتطلب تلميعًا كيميائيًا أو ميكانيكيًا. تحتفظ هذه العمليات على الأقل ببعض المواد الهلامية 24 في الآبار 16 'ولكنها تزيل أو تعطل على الأقل كل المواد الهلامية 24 على الأقل من المناطق الخلالية 18 على سطح الداعم المهيكل 12 بين الآبار 16'. على هذا النحوء تُنشئ هذه العمليات متصات هلام ‎Jal)’ 24 gel pads‏ 2( تُستخدم للتسلسل والتي يمكن أن تكون مستقرة على مدار التسلسل مع عدد كبير من الدورات. في
0 أمثلة أخرى؛ يتم وضع ‎sale‏ الهلام 24 في كل عين 16 'من خلال تقنيات الترسيب الانتقائية التي لا تتطلب أيضًا خطوات تلميع كيميائية أو ميكانيكية لإزالة المادة الهلامية من المناطق الخلالية. تتوافق مواد الهلام المفيدة 24 بشكل خاص مع شكل الموقع 16 ‎Cua‏ يتواجد. بعض المواد الهلامية المفيدة 24 (أ) تتوافق مع شكل الموقع 16 (على سبيل المثال؛ العين 16 "أو مكان آخر مقعر) حيث يوجد و (ب) لا يتجاوز حجمها بشكل أساسي على الأقل موقع 16.
5 يشتمل أحد أمثلة مادة الجل المناسبة 24 على بوليمر مع وحدة متكررة من الصيغة ():
0 ‎hl‏ ‎NH‏ ‏7 ‏يت ‎o NH‏ ‎Lot‏ ‏تج ‎R!‏ ‏)0( ‏حيث: ‎R!‏ هو 11 أو اختياريا ألكيل به استبدال ‎¢substituted alkyl‏ يتم اختيار ‎RA‏ من المجموعة التي تتكون من أزيدوء أمينو به استبدال ‎substituted amino‏ اختيارياء ألكينيل به استبدال ‎substituted alkenyl‏ اختياريًا» هيدرازون به استبدال ‎substituted hydrazone‏ ‎(Ula‏ أو مجموعات بها استبدال بديل من هيدرازين ‎substituted hydrazine‏ كربوكسيلء هيدروكسي ‎eb) chydroxy‏ 3530 به استبدال ‎substituted tetrazole‏ اختياري؛ رباعي البروم به استبدال ‎substituted tetrazine‏ بديل اختياري؛ أكسيد النيتربل» النيترون؛ وثيول؛ وبتم اختيار ‎R5‏
0 من المجموعة التي تتكون من ‎H‏ وألكيل به استبدال اختياري؛
يمكن استبدال كل -م(0112)- اختيارياً؛
‎p‏ عدد صحيح في المدى من 1 إلى 50؛
‏« عدد صحيح في حدود 1 إلى 50.000؛ و ‎22m‏ صحيح في حدود 1 إلى 100.000.
‏5 يتم وصف البوليمرات المناسبة مثل الصيغة (1)» على سبيل المثال» في براءات الاختراع الأمريكية رقم 2014/0079923 أو أ 1 2015/0005447< والتي تم دمج كل منها هنا للمرجعية بالكامل. في بنية الصيغة (1)؛ يدرك صاحب المهارة العادية في المجال أن الوحدات الفرعية "0" و 01" هي وحدات فرعية متكررة ‎recurring subunits‏ موجودة بترتيب عشوائي عبر البوليمر. أمثلة محددة لطلاء البوليمرات مثل الصيغة ‎(I)‏ هي بولي )5( -18-أزيدو أسيتاميديل بنتيل)
‎poly(N-(5-azidoacetamidylpentyl)acrylamide-co-acrylamide ‏لأكربلاميد‎ b— ‏لأكربلاميد - كو‎ ١ 0
‎(PAZAM)‏ الموصوفة؛ على سبيل المثال»؛ في براءات الاختراع الأمريكية رقم أ1 3 أ 11 7 حت الذي يضم الهيكل الموضح أدناه: ‎°N Ns‏ ‎NH‏ ‏و 0 0 حيث ‎An‏ عدد صحيح في حدود 200000-1؛ و ‎m‏ عدد صحيح في حدود 100:000-1. كما في الصيغة (1)؛ يدرك صاحب المهارة العادية في المجال أن الوحدات الفرعية "0" و 01" هي وحدات فرعية متكررة موجودة بترتيب عشوائي عبر البوليمر. قد يتراوح الوزن الجزيئي لبوليمر الصيغة )1( أو بوليمر بولي (5) -83-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد من حوالي 10 كيلو دالتون إلى حوالي 1500 كيلو دالتون» أو قد يكون؛ في مثال محدد؛ حوالي 312 كيلو دالتون.
0 في بعض الأمثلة؛ يكون بوليمر الصيغة (آ) أو بوليمر بولي (5) -17-أزبدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد - كو -| لأكربلاميد عبارة عن بوليمر خطي ‎linear polymer‏ في بعض النماذج الأخرى؛ يكون بوليمر الصيغة )1( أو بولي (5) -17-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - ‎١‏ لأكربلاميد عبارة عن بوليمر متشابك ‎lightly cross-linked polymer Sus‏ في أمثلة أخرى ‘ يشتمل بوليمر الصيغة ‎(I)‏ أو بولي (5) -18-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد
5 على المتفرعة. البوليمرات المناسبة الأخرى هي بوليمرات مشتركة لمادة سيلان خالية من مادة لأكربلاميد ‎(SFA) silane free acrylamide‏ و مادة سيلان خالية من مادة أ لأكربلاميد مشتقة مع ‎de gens‏ أسيتاميد البرومو ‎bromo-acetamide group‏ (على سبيل المثال» 17-[5-(2- برومو أسيتيل) أمينوينيل] الأكربلاميد ‎«((BRAPA) N-[5-(2-bromoacetyl) aminopentyl]acrylamide‏ أو بوليمرات مشتركة من مادة سيلان خالية من مادة الأكريلاميد و مادة سيلان خالية من مادة
‎١٠ 0‏ لأكربلاميد مشتقة مع مجموعة ‎al‏ أسيدو ‎.azido-acetamide group‏ تشمل الأمثلة الأخرى للمواد الهلامية المناسبة 24 تلك التي لها بنية غروية ‎«colloidal structure‏ مقل أجاروز ‎¢agarose‏ أو فيكل شبكة البوليمر ‎Jie polymer mesh structure‏ الجيلاتين
متاداعع. أو بنية بوليمرية متقاطعة ‎Mie cross-linked polymer structure‏ بوليميرات البولى أكربلاميد ‎polyacrylamide polymers‏ والبوليمرات المشتركة منهاء أو ‎sale‏ سيلان خالية من مادة الأكريلاميد (انظرء على سبيل المثال» البراءة الأمريكية رقم 2011/0059865 المضمنة هنا للمرجعية بالكامل)؛ أو نسخة معالجة بأزيدول 2210017280 من مادة سيلان خالية من ‎sale‏ ‏5 الأكربلاميد. قد تتشكل أمثلة من بوليميرات بولي أكربلاميد ‎polyacrylamide polymers‏ مناسبة من الأكريلاميد ‎acrylamide‏ وحمض ‎١‏ لأكربليك ‎acrylic acid‏ أو حمض | ‎ell SY‏ الذي يحتوي على مجموعة فينيل ‎vinyl group‏ كما هو موصوف؛ على سبيل المثال؛ في البراءة الدولية 8 المضمنة هنا للمرجعية بالكامل) أو من المونومرات التي تشكل تفاعلات تحميل الصورة ‎photo-cycloaddition reactions‏ [2+2]؛ على سبيل المثال؛ كما هو موضح في البراءة 0 الدولية 2001/001143 أو 2 (تم دمج كل منها هنا بالرجوع إليها بأكملها). كما أن مادة الهلام 24 قد تكون مادة هلام مشكلة مسبقا. قد يتم طلاء مواد الهلام المشكّلة مسبقًا ‎Dally‏ الدوار أو الغمس أو تدفق الهلام تحت ضغط إيجابي أو سلبيء أو التقنيات الموضحة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 9.012.022 والتي تم دمجها هنا بالرجوع إليها بأكملها. قد يكون الغمس أو الطلاء بالغمس تقنية ترسيب انتقائية؛ اعتمادًا على الدعم 12 والمواد الهلامية 24 المستخدمة. على سبيل المثال؛ يتم غمس الدعم المتكرر 12 في مادة هلامية سابقة التشكيل 24؛ وقد ‎sale Sas‏ الهلام 24 المواقع 16 بشكل انتقائي (أي؛ ‎sale‏ الهلام 24 لا تترسب في المناطق الخلالية 18)؛ وقد تكون عملية التلميع (أو أي عملية إزالة أخرى) غير ضرورية. يمكن طلاء البوليمر المشكل أو بولي (5) -83-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكربلاميد على دعامة مكررة 12 باستخدام طلاء ‎(loa‏ أو الغمس؛ أو تدفق هلام تحت ضغط 0 إيجابي أو سلبي؛ أو التقنيات المبينة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 9.012.022. قد يتم أيضًا ربط البوليمر أو بولي (5) -17-أزبدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد عبر بلمرة جذرية تنقل ذرات السطح ‎(SI-ATRP) surface initiated atom transfer radical polymerization‏ إلى سطح سيلاني ‎silanized surface‏ في هذا المثال؛ قد تتم معالجة سطح الدعم ‎support‏ ‎surface‏ 12 مسبقًا بأيه بى تى أس 5 (ميثوكسي ‎methoxy‏ أو سيلان إيتثوكسي ‎ethyoxy‏ ‎(silane 5‏ لربط السيليكون تساهميًا بواحد أو أكثر من ذرات الأكسجين على السطح (دون التمسك ‎AL‏ قد يرتبط كل سيليكون بذرة؛ أو ذرتين أو ثلاث ذرات أكسجين). يتم تسخين هذا اللسطح
المعالج كيميائياً ‎chemically treated surface‏ ليشكل طبقة أحادية من أمين ‎amine group‏ ‎monolayer‏ يتم بعد ذلك تفاعل مجموعات الأمين مع ‎Sulfo-HSAB‏ لتشكيل مشتق من الأزيدو ‎derivative‏ 82100. يؤدي تنشيط الأشعة فوق البنفسجية ‎(UV) ultraviolet‏ عند درجة حرارة 21 مثوية مع 1 جول / سم2 إلى 30 جول / سم2 من الطاقة إلى إنشاء أنواع نيترين ‎nitrene‏ نشطة؛ والتي يمكن أن تخضع بسهولة لمجموعة متنوعة من تفاعلات الإدراج ‎insertion reactions‏ مع بولي (5) -17-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكربلاميد. توجد أمثلة أخرى لطلاء بولي (5) -17-أزبدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد.- كو - الأكريلاميد على الدعم 12 موصوقفة في براءة الاختراع الأمريكي رقم 2014/0200158؛ والتي تم تضمينها هنا بالكامل للمرجعية)» وتشمل ربط الأشعة فوق البنفسجية بوسائل مونومرات بولي (5) ‎SIN‏ ‏0 أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد.- كو - الأكريلاميد بسطح متعدد الوظائف ‎amine-functionalized‏ ‎«surface‏ أو تفاعل الارتباط الحراري ‎thermal linkage reaction‏ الذي يشتمل على مجموعة نشطة ‎active group‏ (كلوريد ‎١‏ لأكريلويل ‎acryloyl chloride‏ أو جزيء آخر يحتوي على ألكين ‎alkene‏ أو ألكاين ‎(alkyne‏ مع ترسب لاحق لبولي (5) -18-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد وتطبيق الحرارة. في بعض الأمثل؛ يتم تعديل السطح 30 بمجموعات ألكينيل أو سيكلو 5 ألكينيل ؛ والتي يمكن أن تتفاعل بعد ذلك مع البوليمرات الوظيفية للأزيدو ‎azido-functionalized‏ ‎Jie polymers‏ بولي )5( -18-أزبدو أسيتاميديل بنتيل) الأكربلاميد- كو - الأكربلاميد أو تلك التي ‎Ja‏ على مادة سيلان خالية من مادة الأكريلاميد ‎dell‏ 31( من الأزيدات؛ تحت ظروف ‎Jie‏ ‏كيمياء ‎click chemistry Jal‏ لتشضكيل روابط تساهمية ‎covalent bonds‏ بين السطح المعدل ‎modified surface‏ والبوليمر. في أمثلة أخرى؛ يمكن إيداع بولي )5( -18-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد على الدعم 12 والذي يتضمن؛ على سطحه سيلان؛ أو مشتق سيلان يمكن إرفاقه بمجموعة وظيفية من بولي (5) -17-أزبدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد. على سبيل ‎JU‏ قد يحتوي سيلان أو مشتق سيلان على مجموعة غير مشبعة ‎unsaturated moiety‏ (على سبيل المثال» سيكلو ألكينات ‎ceycloalkenes‏ سيكلو ألكاينات ‎eycloalkynes‏ سيكلو ألكينات غير 5 متجانسة ‎cheterocycloalkenes‏ سيكلو ألكاينات متجانسة ‎cheterocycloalkynes‏ بدائل منهاء ومجموعات منها) يمكن أن ترفق تساهميًا بمجموعة وظيفية من بولي (5) -؟1-أزيدو أسيتاميديل
بنتيل) الأكريلاميد.- كو - الأكريلاميد. من أمثلة الجزيئات غير المشضبعة من الألكينات الحلقية ‎cycloalkene unsaturated moieties‏ النوربورنين» ومشتق التورورنين ‎norbornene derivative‏ ‎Je)‏ سبيل المثال؛ النوريورين (غير المتجانس) ‎(hetero)norbornene‏ بما في ذلك الأكسجين أو النيتروجين ‎Ya‏ من واحدة من ذرات الكريون) » أو ترانس سيكلو أوكتين ‎ctranscyclooctene‏ أو مشتق ترانس سيكلو أوكتين ‎«transcyclooctene derivatives‏ أو ترانس سيككلو بنتين ‎ctranscyclopentene‏ ترانس سيككلو هبتين ‎ctranscycloheptene‏ ترانس سككلونونين ‎trans-‏ ‎ccyclononene‏ باي سايلو [3؛ 3؛ 1] نون - 1 إين ‎ebicyelo[3.3.1]non-1-ene‏ باي سيكلو [4؛ 3 1] ديك -1 )9( - إين ‎bicyclo[4.3.1]dec-1 (9)-ene‏ با سيكلو [4؛ 2 1] نون ‎I=‏ )8( - إين ‎[4.2.1]non-1(8)-ene‏ ماءوعننا» وباي سيكلو ]4 2 1] نون - 1 - إين ‎bicyclo[4.2.1]non-‏ ‎lene 0‏ يمكن الاستعاضة عن أيّ من مركبات سيكلو ألكينات كما هو موضح في براءة الاختراع الأمريكي رقم 2015/0005447 والتي تم دمجها هنا كمرجعية بالكامل. من أمثلة ‎Fide‏ النوربورن ‎doi‏ ])5 - باي سيكلو ]2 2 1] هبت - 2 إينيل)إيثيل] ‎Sse hi‏ سللان -6)] ‎.bicyclo[2.2.1]hept-2-enyl)ethyl]trimethoxysilane‏ من أمثلة الأنواع غير المضبعة من السيكلوالكاين ‎cycloalkyne unsaturated moieties‏ تلك التي تشتمل على السيكلوأوكتين» أو مشتق 5 السيكلوأوكتين» أو باي سيكلو نونينات ‎bicyclononynes‏ (على سبيل المثال؛ باي سيكلو [6؛ 1 0] نون -4-إين ‎bicyclo[6.1.0Jnon-4-yne‏ أو مشتقاته؛ باي سيكلو ]6 1« 0] نون -2-إين ‎¢bicyclo[6.1.0]non-2-yne‏ أو باي سيكلو [6. 1. 0] [ نون -3-إين ‎bicyclo[6.1.0]non-3-‏ ‏©«ر). يمكن ‎Load‏ استبدال مركبات سيكلو ألكاين كما هو موضح في براءة الاختراع الأمريكية رقم 2015/0005447. في هذه الأمثلة؛ يمكن إيداع بولي )5( -17-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد على سطح الدعامة المعالج بالسيلان 12 باستخدام طلاء الدوران؛ أو طلاء الغمس أو الغمس؛ أو تدفق الجزيء الوظيفي ‎functionalized molecule‏ تحت ضغط إيجابي أو سلبيء؛ أو التقنيات المبينة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 9.012.022. للترسيب؛ قد يوجد بولي (5) -81-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد في محلول (على سبيل المثال؛ خليط من 5 الإيثانول ‎ethanol‏ والماء). بعد الترسيب؛ قد يتعرض محلول بولي )5( -17-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد.- كو - الأكريلاميد أيضًا لعملية معالجة ‎curing process‏ لتشكيل ‎sale‏ الهلام 24.
كما أن مادة الهلام 24 قد تكون مادة هلام مشكلة مسبقا. وكمثال على تطبيق السائل الذي يشكل فيما بعد مادة الهلام 24 هو طلاء مجموعة من المواقع 16 مع مادة الأكريلاميد الخالية من السيلان و 17-[5-(2- برومو أسيتيل) أمينوبنيل] الأكريلاميد في شكل سائل والسماح للكواشف بتشكيل هلام عن طريق البلمرة على السطح. وهناك مثال آخر يتضمن طلاء مصفوفة مواقع 16 بمونومرات بولي (5) -13-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد في شكل سائل والسماح الكواشف بتشكيل هلام عن طريق البلمرة على السطح. يمكن لطلاء المصفوفة بهذه الطريقة استخدام الكواشف الكيميائية ‎chemical reagents‏ والإجراءات كما هو موضح في براءات
الاختراع الأمريكي رقم 2011/0059865. قد تكون مادة الهلام 24 مرتبطة تساهميًا بالدعم 12 (في المواقع 16) أو قد لا تكون مرتبطة
0 تساهيًا بالدعم 12. يساعد الارتباط التساهمي لمادة الهلام 12 مع المواقع 16 في الحفاظ على الهلام في المواقع المهيكلة ‎structured sites‏ 16 طوال عمر المجموعة 10 خلال مجموعة متنوعة من الاستخدامات. فيما يلي بعض أمثلة التفاعلات التي يمكن أن تحدث بين بولي (5) -88-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد ومشتق سيلان أو سيلان على بعض أمثلة الدعم 2 والتي تؤدي إلى روابط تساهمية.
5 عندما يشتمل مشتق السيلان أو السيلان الموجود على الدعم 12 على مشتق نوربورنين أو مشتق من نوريورنين باعتباره غير المشبع؛ فإن نوربورنين أو مشتق من نوربورنين يمكن: ‎(i‏ أن يخفضع لتفاعل تحميل 1 3 بولار ثنائي حلفي ‎1,3-dipolar cycloaddition reaction‏ مع مجموعة أزيد / أزيدو من بولي (5) -17-أزبدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد؛ 2) أن يخفضع لتفاعل الاقتران مع مجموعة التترازين المرتبطة ببولي (5) -18-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد --
كو -ا لأكربلاميد ؛ أن يخضع لتفاعل تحميل حلقي ‎cycloaddition reaction‏ مع مجموعة هيدرازون ملحقة ببولي (5) -17-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد؛ أن يخضع لتفاعل نقرة الصور ‎photo-click reaction‏ مع مجموعة التترازول المرتبطة ببولي )5( -١1-أزيدو‏ أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد؛ أو يخضع لتفاعل تحميل حلقي مع مجموعة من أكسيد النيتريل متصلة ببولي (5) -13-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد.
5 عندما يتضمن السيلان أو مشتق السيلان الموجود على الدعم 12 تفاعل سيكلو أوكتين أو مشتق سيكلو أوكتين كعنصر غير مشبع؛ يمكن لمشتق سيكلو أوكتين أو مشتق سيكلو أوكتين: )1(
hg strain-promoted azide- ‏الخضوع لتفاعل محفز بالجديلة من الأزيد-ألكاين 1 +3 -لإضافة السيكلو‎ ‏مع أزيد / أزيدو من بولي (5) -17-أزيدو أسيتاميديل بنتيل)‎ (SPAAC) alkyne 1.3-cycloaddition ‏الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد؛ أو (2) يخضع لتجرية تفاعل الأكسيد -الألكين-نيتريل المحسّن من‎
N-) ‏مع مجموعة أكسيد النيتريل المرتبطة ببولي‎ strain-promoted alkyne-nitrile oxide ‏الإجهاد‎ ‏5-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد.‎ 5 bicyclononyne ‏عندما يشتمل مشتق السيلان أو السيلان على الدعم 12 على باي سيكلو نونين‎ - ‏كجزيء غير مشبع؛ يمكن لباي سيكلو نونين الخضوع لتفاعل إضافة محفز بالجديلة من الأزيد‎ ‏متصلة‎ nitrile oxides ‏أو أكاسيد نيتريل‎ azides ‏ألكاين 1 .3-لإضافة السيكلو ألكاين مع أزيدات‎ ‏ببولي (5) -18-أزيدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد بسبب الشد في النظام ثنائي‎ bicyclic ring system ‏الحلقة‎ 0 ‏بينما يتم توفير العديد من الأمثلة على الروابط التساهمية بين الدعم 12 والمواد الهلامية 24 كما‎ ‏الهلام 24 بالمواقع 16 تساهميا. على‎ sale ‏هو مذكور أعلاه وفي كثير من الأمثلة؛ لا يلزم ربط‎ ‏سبيل المثال؛ مادة الأكريلاميد الخالية من السيلان؛ مادة سيلان خالية من مادة الأكريلاميد؛ غير‎ .12 ‏من الدعم‎ ein ‏مرتبطة تساهميًا بي‎ ‏وكما هو مذكور أعلاه يوضح الشكل 2 ج إزالة مادة الهلام 24 من المناطق الخلالية 18. يمكن‎ 5 ‏تحقيق الإزالة عن طريق التلميع. قد يكون التلميع عملية معالجة ميكانيكية و / أو كيميائية.‎ ‏على سطح الدعامة‎ abrasive forces ‏إجراء التلميع الميكانيكي عن طريق تطبيق قوى كشط‎ Sa ‏بملاط من الخرز‎ JST ‏هلامية 24 على ذلك). تتضمن الطرق‎ sale ‏الصلبة 12 (تحتوي على‎ ‏أو الكشط أو ما شابه. من المفهوم‎ ila ‏أو المسح باستخدام ورقة أو قطعة‎ cslurry of beads ‏ويمكن أن يكون له أشكال غير منتظمة؛‎ Bg) ‏أن الخرز المستخدم للتلميع قد يكون أو لا يكون‎ 0 ‏وأشكال متعددة الأضلاع؛ وأشكال بيضاوية؛ وأشكال ممدودة؛ وأشكال أسطوانية؛ إلخ. يمكن أن‎ ‏أن تكون مفيدة كخرز‎ (Sa ‏أو خشنًا. أي مجموعة متنوعة من الجزيئات‎ lel AN ‏يكون سطح‎ ‏للتلميع. يتضمن أحد الأمثلة على التلميع استخدام مسحوق (بدرجة الغرفة النظيفة) يمسح بملاط‎ ‏بحجم 3 ميكرومتر (710 وزن / حجم في الماء) لإزالة مادة‎ silica bead slurry ‏من خرزة السيليكا‎ polishing ‏استخدام عجلة / طاحونة تلميع‎ Lai ‏الهلام 24 من المناطق الخلالية 18. يمكن‎ 5 ‏مع هذا الملاط أو أي ملاط آخر.‎ wheel/grinder
وهناك مثال آخر على التلميع الميكانيكي باستخدام نفاثة سائلة ‎fluid jet‏ أو غاز (مثل الهواء أو الغاز الخامل ‎Jie inert gas‏ الأرجون ‎argon‏ أو النيتروجين) لإزالة الهلام من المناطق الخلالية 18 يمكن ‎Lad‏ استخدام تقنيات التلميع الكيميائي؛ مثل التحلل المائي ‎hydrolysis‏ أو التحلل الجذري للأكريل اميد (على سبيل المثال؛ عن طريق التعرض لفوق أكسيد البنزويل ‎benzoyl peroxide‏ أو فوق أكسيد الهيدروجين المخفف ‎٠ (dilute hydrogen peroxide‏ خلال هذا النوع من التلميع؛ يمكن توفير المواد الكيميائية في حالة صلبة أو سائلة أو غازية أو بلازما. ‎Gy‏ لذلك» يمكن أن يكون تلميع البلازما مفيدًا في بعض الأمثلة. يمكن أن يشتمل التلميع ‎Lal‏ على مجموعة من طرق التلميع الكيميائية والميكانيكية حيث يتم 0 استخدام الملاط الكيميائي ‎chemical slurry‏ الذي يحتوي على معلق غرواني ‎colloidal‏ ‏0 للجزيئات للتقشير الميكانيكي ثم حل الأجزاء الكيميائية النازحة ‎chemically‏ ‎displaced portions‏ من مادة الهلام 24 كيميائيًا من المناطق الخلالية 18. في أحد ‎(ABN‏ يمكن استخدام نظام تلميع ميكانيكي كيميائي ‎«chemical mechanical polishing system‏ على سبيل المثال؛ جهاز تلميع الطبقات ‎wafer polisher‏ بما في ذلك ‎¢Strasbaugh ViPRR II‏ أو رأس تلميع ‎polishing head 15‏ مناسب آخرء لإزالة مادة الهلام 24 من المناطق الخلالية 18 دون التأثير بشكل ضار على الدعم الأساسي 12 في تلك المناطق 18. يمكن استخدام هذا النوع من نظم التلميع مع ملاط خرز السيليكا الموصوف سابقًاء أو مع ملاط كيميائي لطيف ‎-gentler chemical slurry‏ وفي أحد الأمثلة؛ الملاط الكيميائي اللطيف هو ملاط مائي أساسي ‎basic aqueous slurry‏ بما في ذلك جسيم كشط ‎abrasive particle‏ تم اختياره من المجموعة التي تتكون من كريونات الكالسيوم ‎(Ass (CaCOs) calcium carbonate 0‏ (ميثيل ميثاكريلات) ‎poly(methyl methacrylate)‏ ‎(PMMA)‏ قد يتراوح متوسط حجم جسيمات كربونات الكالسيوم من حوالي 15 نانومتر إلى حوالي 5 ميكرون؛ وفي مثال واحد حوالي 700 نانومتر. بالإضافة إلى كريونات الكالسيوم؛ فإن الملاط المائي ‎١‏ لأساسي قد يشتمل أيضًا على مادة منظمة ‎cbuffer‏ وعامل مخلبي ‎«chelating agent‏ وخافض للتوتر السطحي ‎esurfactant‏ و / أو مشتت ‎dispersant‏ يشمل مثال على المحلول المنظم 5 يتضمن قاعدة تريس ‎tris base‏ (أي؛ تريس (هيدروكسي ميثيل) أمينوميثان ‎Ally ((tris(hydroxymethyl)aminomethane‏ قد تكون موجودة في محلول يحتوي على رقم
هيدروجيني يبلغ نحو 9. من أمثلة العامل المخلبي حمض الإيثيلين دي أمينيتراسيتيك ‎(EDTA) ethylenediaminetetraacetic acid‏ والذي قد يكون موجودذًا في محلول له درجة حموضة تقارب 8. ومن أمثلة مخفضات التوتر السطحي كبريتات دوديسيل الصوديوم ‎sodium‏ ‎dodecyl sulfate‏ يمكن استخدام مشتتات بولي أكريلات ‎Polyacrylate dispersants‏ ذات أوزان جزيثية ‎molecular weights‏ مختلفة. من أمثلة ‎ci fal)‏ بولي (ملح صوديوم حمض الاكريليك)
.poly(acrylic acid sodium salt) ‏تشمل الطرق الأخرى لتلميع أو تنظيف المناطق الخلالية 18 التقنيات القائمة على اللصق؛ على‎ rigid planar adhesive film ‏سبيل المثال؛ التقنيات التي يتم فيها تطبيق فيلم لاصق صلب مستي‎ ‏عبر الريط‎ JU ‏(على سييل‎ cpl ‏ذي صلة بمادة الهلام 24؛ مما يؤدي إلى التلامس‎
الكيميائي) مع هلام المادة 24 في المناطق الخلالية 18. ستؤدي الإزالة / التقشير الميكانيكي لهذا الغطاء اللاصق إلى الإزالة الميكانيكية لمادة الهلام 24 من المناطق الخلالية 18؛ مع ترك ‎Bale‏ ‏الهلام 24 في المواقع 16. في أحد الأمثلة؛ يمكن إزالة مادة سيلان خالية من مادة الأكريلاميد المطعمة بثيو الفوسفات ‎thiophosphate‏ من المناطق الخلالية 18 على سطح دعم 12 على النحو التالي: يمكن وضع
5 مسح ‎Whatman‏ المبللة بالماء في أكسيد الألومنيوم ‎aluminum oxide‏ )~ 100 مجم؛ 0.3 ميكرو متر) أو كريات الصلب؛ ثم يمكن فرك الملاط المتشكل على سطح الدعم (مع وجود مادة سيلان خالية من مادة الأكريلاميد المطحون به ثيوفوسفات)؛ في دوائر صغيرة متحدة ‎Sal‏ باستخدام ضغط متساوي»؛ ومن ثم ‎(Sa‏ استخدام مسح ‎Whatman‏ الرطب بالماء لإزالة الملاط مادة سيلان خالية من مادة الأكريلاميد المطعم بالثيو فوسفات من السطح.
0 يمكن أيضًا استخدام طرق التلميع الميكانيكية والكيميائية الموضحة هنا لإزالة المواد الهلامية 24 من المناطق الخلالية 18 لتثبيط مادة الهلام في المناطق الخلالية 18 سواء تمت إزالة المادة الهلامية 24 أم لا. على سبيل ‎Jal!‏ يمكن تعطيل ‎sale‏ الهلام 24 ‎Lad‏ يتعلق بالقدرة على إرفاق المادة الأولية الخاضعة لمتوالية 20 والكيان غير غير الخاضع لمتوالية 22. بعد وضع مادة الهلام 24 في كل بثر 16 يتم تطعيم ‎Sale‏ (مواد) الأولية المتوالية 20 والكيان /
5 الكيانات غير الخاضعة لمتوالية 22 لمادة الهلام 24. في بعض الأمثلة؛ قد يتم تطعيم مادة (مواد)
أولية 20 قبل أو بعد تطعيم كيان/كيانات غير متوالية 22 في مادة الهلام 24. في أمثلة أخرى يتم تطعيم مادة (مواد) أولية 20 والكيان / الكيانات غير المتوالية 22 بشكل مشترك بمادة الهلام 24. يمكن تحقيق التطعيم المتوالي عن طريق تعريض الدعم 12 (مع وجود مادة الهلام 24 في المواقع 6) إلى محلول أو خليط يحتوي على مادة ‎(alge)‏ أولية لمتوالية 20 مع التحضين؛ ثم إلى محلول أو خليط يحتوي على الكيان غير المتوالي 22 مع التحضين. بدلا من ذلك؛ يمكن تحقيق التطعيم المتوالي عن طريق تعريض الدعم 12 (مع وجود مادة الهلام 24 في المواقع 16) إلى محلول أو خليط يحتوي على كيان غير متوالي 22 مع التحضين؛ ثم إلى محلول أو خليط يحتوي على مادة (مواد) أولية لمتوالية 20 مع التحضين. يمكن تحقيق التطعيم المشترك عن طريق تعريض الدعم 12 (في وجود مادة الهلام 24 في المواقع 0 16) إلى محلول أو خليط يحتوي على مادة ‎(alge)‏ أولية لمتوالية 20 والكيان غير المتوالي 22؛ ثم يتم التحضين. يمكن تعريض الدعم 12 لهذا المحلول أو الخليط عن طريق إيداع خليط من المادة (المواد) الأولية 20 والكيان غير المتوالي 22 إلى الدعم 12. في مثال؛ يمكن سحب المحلول أو الخليط عبر مادة الهلام 24 المطلية بالدعم 12 (كما هو موضح في الشكل 2ج). في أي من أمثلة ‎caudal‏ تحدث الحضانة عند درجة حرارة محددة مسبقًا والتي تعتمد ‎Wha‏ على مادة (مواد) أولية 20 والكيان المتوالي 22 المستخدم. على سبيل المثال؛ يمكن عمل التحضين عند درجة ‎Ba‏ تتراوح من درجة حرارة الغرفة (أي حوالي 25 درجة مئوية) إلى حوالي 60 درجة مئوية. ‎Lally‏ في أي من أمثلة التطعيم؛ قد يتضمن المحلول مادة (مواد) أولية 20 و / أو الكيان غير المتوالي 22 ‎colally‏ ومادة منظمة؛ ومحفز ‎catalyst‏ تتراوح النسبة المولية للكيان الذي لا يخضع لمتوالية 22 إلى المادة البادئة المتوالية 20 سواء كان موجودًا في نفس المحلول / الخليط أو 0 المحاليل / المخاليط المنفصلة؛ من حوالي 0.25: 1 إلى حوالي 5: 1. من أمثلة المواد الأولية التي تخضع لمتوالية المناسبة 20 تلك التي تشتمل على مواد أولية للتضخيم أو مواد أولية خاصة بالتضخيم العكسي. وتتضمن أمثلة المواد الأولية المتوالية المناسبة 20 مواد أولية ‎PS‏ أو 77. يتم استخدام مادتي أوليتان ‎P5‏ و 77 على سطح خلايا التدفق التجارية التي تبيعها ‎..Jllumina, Inc‏ للتسلسل على منصات أجهزة ‎®HiSeq‏ و ‎®HiSeqX‏ و ‎®MiSeq‏ ‎®NextSeqy 5‏ و ‎.®Genome Analyzer‏ تتضمن متواليات مادة أولية 5 و ‎WPT‏ يلي: ‎AATGATACGGCGACCACCGAGA(dU)CTACAC—5 :P5‏ متوالية ذات هوية رقم 1)
7 5:-ه*مم0 داه 000 هه مهدهى هه متولية ذات هوية رقم 2( ‎Cua‏ 6 * عبارة عن 8 أوكسوجواتين ‎.8-oxoguanine‏ ‏اختيارياء يمكن أن ‎Joi‏ واحدة أو كلا من مواد البدء 05 و 77 ذيل بولي ‎T‏ يقع ذيل بولي 7 عمومًا عند نهاية التتابع 5 ؛ ولكن في بعض الحالات يمكن أن يكون في الطرف 3'. يمكن أن يشتمل تسلسل بولي 1 على أي عدد من النيوكليوتيدات ‎(T nucleotides T‏ على سبيل المثال؛ من 2 إلى 20. يمكن تعديل المادتين البادئتين ‎(P75 PS‏ وكذلك المادة البادئة المتوالية 20؛ في نهاية 5 مع مجموعة قادرة على التفاعل مع مجموعة وظيفية من مادة الهلام 24. من أحد أمثلة مجموعة وظيفية مناسبة هي ‎sb‏ سيكلو [6. 1. 0] نون-4-إين ‎«(BCN) bicyclo[6.1.0] non-4-yne‏ 0 والتي يمكن أن تتفاعل مع أزيد من مادة الهلام 24. تشتمل الأمثلة الأخرى من مواد البدء المنتهية ‎terminated primers‏ مادة أولية منتهية تترازين ‎ctetrazine terminated primer‏ مادة أولية منتهية النوريورن ‎cnorbornene terminated primer‏ مادة أولية منتهية ألكين ‎«alkyne terminated primer‏ مادة أولية منتهية أميني ‎camino terminated primer‏ مادة أولية منتهية بالإييوكسي ‎epoxy‏ أو جليسيديل ‎«glycidyl‏ مادة أولية منتهية ‎cthiophosphate terminated primer law dost‏ مادة أولية 5 منتهية تراي أزو لين ديون ‎terminated primer‏ 006نل010201106. في بعض النماذج؛ تشتمل مواد البدء المنتهية على بادئة منتهية من ألكاين ‎.alkyne terminated primer‏ في بعض النماذج؛ تشتمل مواد البدء المنتهية على بادئة منتهية من ثيوفوسفات. سيدرك صاحب المهارة في المجال كيفية تصميم واستخدام مواد البدء المتوالية 20 المناسبة لالتقاط وتضخيم الأحماض النووية كما هو موضح هنا. 0 تشمل الأمثلة على الكيانات غير المتوالية المناسبة 22 ‎sale‏ البدء غير الوظيفية؛ وجديلة البوليمرء ‎cantly‏ و/أو مُحسّن الومضان. وكما هو مذكور أعلاه فإن 'مادة البدء غير الوظيفية" هو أي متوالية وحيدة الجديلة للحمض النووي لن تشارك في صورتها الخاصة بالتطعيم؛ في تخليق الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. تتضمن الأمثلة متوالية بولي 7 أو متوالية بولي ‎A‏ ‏5 تتضمن أمثلة جديلة البوليمر المتشعبة (على سبيل المثال ؛» بولي (أميدو أمين ‎poly(amido amine‏ أو ‎«(PAMAM‏ بولي دكستران» ميثاكوربلويلوكسي إيثيل فوسفوريل كولين ‎methacryloyloxyethyl‏
‎(PCA) phosphorylcholine‏ بوتي (إيفلين جليكول) ‎poly(ethylene glycol)‏ (60ت1ط أي بولي (ايثيلين أوكسيد) ‎poly(ethylene oxide)‏ أو ‎(PEO)‏ بولي إيثيلين إمين ‎poly(ethylene imine)‏ ‎(PEI)‏ بولي ‎L‏ - ليسين ‎¢(PLL) poly-L-lysine‏ بروبايجل ميثاكريلات ‎propargyl methacrylate‏ ‎(PMA)‏ بولي (ميثيل ميثاكريلات)؛ بولي ‎—N)‏ إيزوبروييل أكريلاميد) ‎poly(N-‏ ‎(PNIPAM) isopropylacrylamide) 5‏ بولي (إيثيلين جليكول) أكريلات ‎poly(ethylene glycol)‏ ‎«(POEGA) acrylate‏ بولي (بروبيلين إيمين) ‎PPI) poly(propylene imine)‏ وهو نواة التشعب ‎(dendrimer core‏ بولي (كحول الفينيل) ‎ds (PVA) poly(vinyl alcohol)‏ (2 - إيثيل -2- أوكسازولين) (06ا20ة«17/1-2-0©-0017)2» حمض بولي أكريليك ‎«(PAA) polyacrylic acid‏
‏ويولي (إستر ترولوكس).
‏10 قد تعمل كل مادة من مواد جديلة البوليمر ‎polymer strand materials‏ هذه بمثابة فواصل لتهيئة مساحة إضافية بين مواد البدء 20 المرفقة بالمادة الهلامية 24. بعض من مواد جديلة البوليمر أيضا لها خصائص التي يمكنها أن تضيف خاصية التآلف مع الماء إلى مادة الهلام 24 وتحد من الريط غير المحدد على مادة الهلام 24. ‎JUS‏ على هذه المادة البوليمر جديلة بولي (إيثيلين جليكول). وفي الأمثلة المذكورة هناء بولي (إيثيلين جليكول) له وزن جزيئي يتراوح من حوالي 0.5
‏5 كيلو دالتون إلى أقل من حوالي 10 كيلو دالتون. مواد جدائل البوليمر الأخرى متعددة الوظائف ‎(Lia‏ على سبيل المثال؛ قد يكون بولي (استر الترولوكس) فاصلًا وقد يكون مضادًا للأكسدة. ‎Jai‏ جديلة البوليمر إما على مجموعة وظيفية ‎(Sa‏ أن تتفاعل مع مجموعة (مجموعات) من ‎sale‏ الهلام 24 أو يتم تعديلها لتشمل ‎de sane‏ وظيفية يمكن أن تتفاعل مع مجموعة (مجموعات) مادة الهلام 24. ومن أمثلة هذه المجموعات الوظيفية ألكاين» ونوربورنيل» وجزيء خالي من
‏0 النحاس»؛ وثيول. قد تتفاعل الألكينات؛ النوريورنيلات» ورؤوس جزيئات خالية من النحاس مع أزيدات بولي (5) -17-أزبدو أسيتاميديل بنتيل) الأكريلاميد- كو - الأكريلاميد عبر تفاعلات النقر ‎click reactions‏ يمكن أن تتفاعل الثيولات 111018 مع مادة سيلان خالية من مادة الأكريلاميد. ويشمل مثال على مادة جديلة البوليمر التي تتضمن واحدة من المجموعات الوظيفية المدرجة هي بروبايجل ميثاكريلات؛ والذي يتضمن ألكاين. وتتضمن أمثلة جدائل البوليمر المعدلة ‎modified‏
‎alkyne terminated poly(ethylene ‏بولي (إيثيلين جليكول) منتهية بالألكاين‎ polymer strands 25 alkyne terminated poly(methyl ‏منتهية بالألكاين‎ (Oslin ‏(ميثيل‎ Js «glycol
‎cmethacrylate)‏ بولي (ميثيل ميثاكريلات) منتهية بالنوربورنيل ‎poly(methyl methacrylate‏ ‎norbornyl terminated‏ بولي (11- إيزوبروبيل أكربلاميد) منتهية ‎thiol terminated Jelly‏ ‎¢poly(N-isopropylacrylamide)‏ بولي (كحول الفينيل) منتهية بالألكاين ‎alkyne terminated‏ ‎«poly(vinyl alcohol)‏ بولي (كحول الفينيل) منتهية بالثيول ‎thiol terminated poly(vinyl‏ ‎alcohol) 5‏ حمض بولي أكربليك منتهية بالألكاين ‎alkyne terminated polyacrylic acid‏ حمض بولي أكريليك منتهية بالثيول ‎.thiol terminated polyacrylic acid‏ في بعض الأمثلة ‎a‏ يتم تطعيم جدائل البوليمر على النحو الموضح في مادة الهلام 24 ‎Jie‏ ‏الكيان غير المتوالي 22. في أمثلة أخرى؛ قد تكون شرائط البوليمر كما هو موصوف عبارة عن جزيء ‎linker dad)‏ ‎molecule 0‏ مع ‎ins‏ ومضان؛ مثل مخمد الحالة الثلاثي؛ أو مضاد للتأكسد؛ أو مانح نقل طاقة الرنين الفلورية؛ ‎sald‏ الهلام 24. على سبيل المثال؛ قد يتم إنهاء جديلة البوليمر بألكاين في أحد أطرافها ليرتبط بمادة الهلام 24 ومجموعة وظيفية (مثل الثيول أو الأمين أو الألد هايد ‎aldehyde‏ ‏أو حمض الكريوكسيل) على الطرف الآخر ليرتبط بمخمد ‎(ADEN Aad)‏ أو مضاد للأكسدة؛ أو مانح نقل طاقة الرنين الفلورية. 5 .من أمثلة مخمد الحالة الثلاثية تلك التي يتم اختيارها من المجموعة التي تتكون من سيكلو-أوكتيل تيتراين» ترلوكس (حمض 6-هيدروكسي 2 2 5 7 8-رباعي ميثيل كرومان -2- الكريوكسيل) ‎«Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid‏ ‎(Hoffmann-La Roche AG)‏ وكحول النتروينزيل. يتم اختيار أمثلة لمضادات الأكسدة المناسبة من المجموعة التي تتكون من أسكوريات؛ جلوتاثيون» حمض الجاليك؛ كاتشين؛ ترلوكس» وفيتامين 0 8. تم تصميم أو اختيار مانح نقل طاقة الرنين الفلورية المرفق للحصول على تداخل طيفي مثالي وكفاءة نقل طاقة الرنين الفلورية مع النيوكليوتيدات الوظيفية بالكامل (صبغة تم ‎CaS‏ عنها في المتوالية؛ أدرجت في متوالية التخليق). يتم اختيار أمثلة من المتبرع تقل طاقة الرنين الفلورية من المجموعة التي تتكون من صبغة متبرع إلى نقل طاقة الرنين الفلورية مع صبغة خضراء باعثة (مدمجة في النيوكليوتيدات في سير عمل متسلسل) وصبغة متبرع إلى نقل طاقة الرنين الفلورية مع صبغة حمراء باعثة (مدمجة في النيوكليوتيدات في سير عمل متسلسل). من الأمثلة المحددة على الأصسباغ المانحة لنقل طاقة الرنين الفلورية مع النيوكليوتيدات التي تعمل بالكامل في البيئة
¢(+ InceJackson ImmunoResearch ‏مختبرات‎ ccyanine ‏(صبغة السيانين‎ ®FFNs) Cy2)
Atto ¢«(ThermoFisher Scientific) (488 ‏سبيل المثال»‎ Ae) ®Alexa Fluor ‏أصباغ‎ الأصباغ ( على سبيل المثال» 465 488 و 490) ‎¢(Atto-Tec)‏ وأمثلة محددة من الأصباغ المائحة إلى نقل طاقة الرنين الفلورية مع النيوكليوتيدات الوظيفية بالكامل الباعثة للضءٍ تشمل ®Alexa Fluor ‏أصباغ‎ ¢(+ InceJackson ImmunoResearch ‏(صبغة السيانين» مختبرات‎ ®Cy3 5 (على سبيل المثال؛ 546 555 568 594( ‎ «(ThermoFisher Scientific)‏ أصباغ أتو (على سبيل المثال» 532( (أتو تك). قد يكون مانح نقل طاقة الرنين الفلورية مناسبًا للاستخدام في متوالية صبغ واحد أو اثنين عن طريق تكوينات تخليقية تشتمل على 542 نانومتر و 550 نانومتر و 565
Rhodamine ‏و / أو رودامين‎ (wavelength of absorption ‏الامتصاص‎ da se ‏نانومتر (طول‎ .G6 0 في هذه الأمثلة الأخرى؛ تشكل جدائل البوليمر ومحسن الومضان المرفق ‎tie‏ الكيان غير المتوالي 2. في هذه الأمثلة ‎(AY‏ يتضمن الطرف الآخر من جديلة البوليمر (على سبيل المثال؛ الطرف المقابل للنهاية المرتبط بمادة الهلام 24) إما مجموعة وظيفية يمكنها دمج أو تفاعل مع مجموعة (مجموعات) من مُحسن الومضان؛ أو تم تعديله ليشمل مجموعة وظيفية يمكن أن تدمج أو تتفاعل مع مجموعة (مجموعات) من محسن الومضان. ومن الأمثلة على هذه المجموعات الوظيفية ثيول وأمين وألدهيد وحمض كربوكسيلي. يمكن أيضًا استخدام المجموعات الوظيفية الأخرى التي يمكنها إرفاق مُحيّن الومضان بجديلة البوليمر. على سبيل ‎(JB)‏ يمكن أن يترافق فيتامين هم مع حمض بولي أكربليك» ويمكن أن يقترن الجلوتاثيون أو حمض الأسكوربيك ‎ascorbic acid‏ أو حمض الجال ‎gallic acid‏ أو الكاتشين ببولي 0 (يثيلين جليكول) أو بولي (ميثيل ميثاكريلات). كأمثلة أخرى؛ يمكن ربط مانح نقل طاقة الرنين الفلورية بأي من جدائل البوليمر التي تحتوي على مجموعة ألكاين أو بها تعديل. كما أن هناك مثال آخر على الكيان غير المتوالي وهو الببتيد. يتم عرض المادة البادئة المتوالية التي تشبه الطعمة ‎as-grafted sequencing primer‏ 20 والكيان / 5 الكيانات غير المتوالية 22 في الأشضكال 2د و3. تتراوح النسبة المولية لطعمة الكيان الذي لا يخضع لمتوالية 22 إلى طعمة المادة ‎Ball)‏ المتوالية 20 من حوالي 0.25: 1 إلى حوالي 5: 1.
في مثال آخرء تتراوح النسبة المولية لطعمة الكيان الذي لا يخضع لمتوالية 22 إلى طعمة المادة البادئة المتوالية 20 من حوالي 0.5: 1 إلى حوالي 2: 1. لن يشارك الكيان / الكيانات غير المتوالية التي تشبه الطعمة 22 في تقنيات التوالي المنفذة ‎(ay‏ ولكن بدلاً من ذلك؛ يجب الفصل بين مسافات المادة البادئة المتوالية 20 في الموقع 16 وقد يوفر وظائف إضافية للموقع 16.
يمكن استخدام المصفوفة 10 التي تم الكف عنها هنا في مجموعة متنوعة من الأساليب أو التقنيات المتسلسلة ‎Ly‏ في ذلك التقنيات التي يشار إليها ‎GL‏ باسم المتواليات التخليقية؛ المتواليات حسب الارتباط ‎csequencing-by-ligation‏ الإحداثيات الحرارية ‎pyrosequencing‏ وما إلى ذلك. مع أي من هذه التقنيات؛ نظرًا لوجود المادة الهلامية 24 والمادة لأولية التي تخضع لمتوالية 20 في المواقع 16 وليس في المناطق الخلالية 18 سيتم حصر التضخيم في المواقع المختلفة 16.
0 باختصار؛ يمكن تشغيل تفاعل التسلسل بالتخليق على نظام ‎Jie‏ أنظمة التسلسل ‎®HiSeq‏ أو ‎®HiSeqX‏ أو ‎®MiSeq‏ أو ‎®NextSeq‏ من ‎CAdllumina (San Diego‏ ). يتم تهجين مجموعة من جزيئات الحمض النووي المستهدفة المراد تهجينها مع المواد البادئة المتوالية ‎bound das ell‏ ‎sequencing primers‏ 20 (وليس مع الكيان غير المتوالي 22) ثم تضخيمها بواسطة تضخيم الجسر أو التضخيم ‎Sal)‏ يترك تغيير الطبيعة القوالب المفردة المرتكزة على مادة الهلام 24؛
5 وبتم إنشفاء عدة ملايين من المجموعات الكثيفة من الحمض النووي مزدوج الجديلة ‎double-‏ ‎stranded nucleic acid‏ (أي توليد المجموعة) . ‎ad‏ تفاعلات المتوالية ‎«sequencing reactions‏ ‎Ag‏ بعض الأمثلة؛ تكون المواد البادئة الخاضعة لمتوالية 20 والكيانات التي لا تخضع لمتوالية 22 (والنسخ المكبرة ‎Ley‏ في ذلك المواد البادئة الممتدة خلال خطوات التضخيم تشمل نسخ من الحمض النووي المستهدف) غير مرتبطة مع مادة الهلام 24 وبذلك يمكن ‎sale)‏ استخدام السطح في
0 تفاعلات المتواليات في المستقبل. وبالتالي؛ هناك خطوة واحدة أو أكثر من الخطوات لربط المادة الأولية التي تخضع لمتوالية 20 والكيانات التي لا تخضع لمتوالية 22 لمادة الهلام 24 وتهجين جزيئات الحمض النووي المستهدف للواد الأولية التي تخضع لمتوالية 20 وتضخيم الجسر وتسلسل الحمض النووي المستهدف وإزالة المواد الأولية التي تخضع لمتوالية 20 والكيانات التي لا تخفضع لمتوالية 22 والنسخ المكبرة. ويمكن تنفيذ واحدة أو أكثر من التكرارات.
5 لتوضيح الكشف الحالي؛ يتم فيما يلي عرض بعض الأمثلة. يجب أن يكون مفهوما أن هذه الأمثلة مقدمة لأغراض توضيحية ولا يجب أن تفسر على أنها تحد من نطاق الكشف الحالي.
الأمثلة المثال )1( تم تهيئة مواد البدء التي تخضع للمتوالية (على سبيل المثال» 05717 مع ذيول بولي 1) باستخدام ‎sabe‏ أولية غير متوالية (أي؛ 5'-هكسين-7717 ‎¢57-hexyne-TTT‏ يشار إليها باسم مادة البدء التي لا تخضع لمتوالية ‎non-sequencing primer‏ (1050)) في عيون خلية التدفق المتاحة من ‎Ine Illumina‏ تباينت نسبة ‎ead) sale‏ غير المتوالية إلى مادة البدء المتوالية بين العينات. تم استخدام المادة البادئة التي تخضع لمتوالية بدون المادة البادئة التي لا تخضع لمتوالية على مدار عينتين للمقارنة. خليط تم تحضيره لكل عينة. ‎Jai Gn‏ الخليط على مياه فائقة النقاء؛ ومادة منظمة؛ وفائض من 0 المحفزات ‎catalysts‏ (على سبيل ‎JU‏ كبريتات النحاس الثنائى ‎Copper(Il) sulfate‏ (20()050 ملي مولار = 200 ملي مولار)»؛ أسكوريات (20 ملي مولار - 200 ملي مولار)؛ ‎Lay‏ ميثيل داي إيثيلين تراي أمين ‎(PMDTA) pentamethyldiethylenetriamine‏ )105 ملي مولار - 1050 ملي مولار). كان تركيز المادة الأولية الخاضةة لمتوالية حوالي 1 ميكرومولار. كانت الكمية الإجمالية للعامل الحفاز هي نفسها في كل عينة. ترد في الجدول 1 النسبة المولية 5 _لمادة البدء التي لا تخضع لمتوالية إلى مادة البدء التي تخضع لمتوالية ‎(PS/PT)‏
الجدول 1
مسار تدفق ‎١‏ 1 2 3 4 5 7
‎Te‏ ا
‏عينة عينةا2 3 4 عينة 7
‏المقارنة المقارنة 5 1
‏بوليمر لا١0:‏ 1 2 :|10[1:5 :1:01 20 :50 :
‎1 1 1 1 ad
‏لمتوالية:
‎P5/P7
تم تطبيق كل خليط على مسار التدفق الخلوي ‎flow cell lane‏ وتم التحضين في حوالي 60 درجة مئوية. ثم تم غسل خلية التدفق ‎AY‏ المواد الأولية غير المرتبطة. تم تطبيق خليط رباعي الكلور - فلويسين بما في ذلك فاصل و قليل ‎aly‏ الكلور - فلورسين (على سبيل المثال؛ قليل النوكليوتيدات المصبوغة التي لها تسلسلات تكميلية ‎complementary‏ ‎sequences 5‏ لمادة البدء 110) على ممرات ‎WAS‏ التدفق ‎flow cell lanes‏ لتلوين فتحات ‎Juli‏ ‏السطح. رباعي الكلور - فلوريسين يمكن تهجينها مع المواد البادئة ‎P10‏ على السطح. كما يمكن غسل رباعي الكلور - فلوريسين الزائد ويمكن قياس تركيز الصبغة المرفق (من حيث الكثافة) عن طريق الكشف الفلوري ‎fluorescence detection‏ باستخدام أداة المسح الضوئي ‎scanning‏ ‎«instrument‏ مقل ‎Scanner (General Electric)‏ «(0م0ام”1. من بيانات الكثافة؛ يمكن تحديد 0 التتوزيع ‎SIS)‏ وكثافة مادة البدء. النتائج موضحة في الشكل 4 تشير النتائج إلى أن تطعيم المواد الأولية التي تخضع لمتوالية مع المادة الأولية التي لا تخضع لمتوالية كانت مماثلة لتطعيم المواد الأولية التي تخضع لمتوالية بدون المادة الأولية التي لا تخضع لمتوالية عند نسب مولية أقل من 10: 1. ‎Judi 5‏ (2) تم تهيئة مواد البدء التي تخضع للمتوالية (على سبيل المثال» 05717 مع ذيول بولي 1) باستخدام مادة أولية غير متوالية (أي» 5 '-هكسين-1177) في عيون خلية التدفق المتاحة من .110008 ‎nc‏ تباينت نسبة مادة البدء غير المتوالية إلى مادة البدء المتوالية بين العينات. تم استخدام المادة البادئة التي تخضع لمتوالية بدون المادة البادئة التي لا تخضع لمتوالية على مدار عينة للمقارنة. 0 خليط تم تحضيره لكل عينة. ‎Jui ds‏ الخليط على مياه فائقة النقاء؛ ومادة منظمة؛ وفائض من المحفزات (على سبيل المثال؛ كبريتات النحاس الثنائى (20 ملي مولار - 200 ملي مولار)؛ أسكوربات )20 ملي مولار - 200 ملي مولار)؛ بنتا ميثيل داي إيثيلين تراي أمين (105 ملي مولار - 1050 ملي مولار). كان تركيز المادة الأولية الخاضعة لمتوالية 77 / 05 حوالي 1 ميكرومولار. اختلفت الكمية الإجمالية للعامل الحفاز بالنسبة لبعض الخلائط. ترد في الجدول 2 النسبة المولية لمادة البدء غير المتوالية إلى مادة البدء المتوالية والتغيرات في مقدار المحفز.
— 0 4 — الجدول 2 ار | 1 2 3 4 5 7 تدفق خلوي ‎Iso Tie‏ 12 13 146 المقارنة 10 بوليمر ‎0.5١ :025|Y‏ :1:01 1 1:21 ا1:501:2 ‎os‏ 1 1 = لمتوالية: ‎P5/P7‏ ‏ا ‎X1,5| XI Xl] Xl x1 | ws‏ الل الجر الكلى ‎X*‏ = كمية أساسية من المحفزات الثلاثة. تم تطبيق كل خليط على مسار التدفق الخلوي وتم التحضين في حوالي 60 درجة مئوية. ثم تم غسل خلية التدفق لإزالة المواد الأولية غير المرتبطة.
تعرضت ‎WIA‏ التدفق إلى التهجين للتصويرء والتجميع؛ والتسلسل. تم قياس كثافات 018 ‎Read?‏ ‏والنتائج معروضة في الشكل 5 توضح هذه النتائج أن تطعيم المواد الأولية التي تخضع لمتوالية مع المواد الأولية التي لا تخضع لمتوالية دون زيادة المحفز يمكن أن يزيد من كثافة المتوالية. المثال (3) تمت تهيئة مواد البدء المتوالية ‎P7‏ / 05 مع ذيول بولي ‎T‏ بطعمة جديلة البوليمر» باعتبارها الكيان
0 غير المتوالي (المشار إليه باسم جديلة البوليمر غير المتوالية ‎non-sequencing polymer strand‏
أو 85) مع خليتي تدفق متوفرين من شركة ‎Inc‏ بقصنصن11. وكانت جديلة البوليمر هي بولي
(إيثيلين جليكول) ألكاين ‎«poly(ethylene glycol) alkyne‏ والوزن ‎ad‏ لبولي (ايثيلين جليكول)
ألكاين كان متنوعا بين العينات. وقد اختلفت أيضا النسبة المولية لمادة البدء التي لا تخمضع
لمتوالية إلى مادة البدء التي تخضع لمتوالية بين العينات. تم استخدام المادة البادئة التي تخمضع لمتوالية بدون جديلة البوليمر التي لا تخضع لمتوالية على مدار ‎ml‏ عينات للمقارنة. تم تحضير خليطين. يشتمل خليط مادة البدء التي تخضع لمتوالية على مياه فائقة النقاء؛ ومادة منظمة؛ وفائض من المحفزات (على سبيل المثال؛ كبريتات النحاس الثنائى )20 ملي مولار - 200 ملي مولار)» أسكوريات )20 ملي مولار - 200 ملي مولار)؛ بنتا ميثيل داي إيثيلين تراي أمين (105 ملي مولار - 1050 ملي مولار). كان تركيز المادة الأولية الخاضةة لمتوالية / 05 ‎PT‏ حوالي 1 ميكرومولار. تم استخدام محاليل تم تحضيرها حديثا من بولي (إيثيلين جليكول) ألكاين (على سبيل المثال تمت إذابة أوزان مولارية مختلفة من بولي (إيثيلين جليكول) ألكاين في الماء). تم تطبيق خليط المادة البادئة التي تخضع للعينة على المسار الخلوي للتدفق المعني؛ مع أو بدون 0 واحد من محاليل البوليمر التي لا تخضع لمتوالية بالنسب المولية المطلوية؛ كما هو موضح في الجدول 3. يشير أيضا الجدول 3 إلى الوزن الجزيئي ل بولي (يثيلين جليكول) ألكاين الذي تم استخدمه في كل مسار. تم تحضين خلايا التدفق عند حوالي 60 درجة مئوية؛ وغسلها لإزالة المواد غير المرتبطة. الجدول 3 مار !0 3/3/0 )4 3 ‎Sp‏ 307 عينة عينةا|16. ١ا17.‏ 18. |19. اعينةا21. 22 المقارنة المقارنة
جديلةا1:0 5 |» .]2105 :1:01 5 21 : بوليمر لا ‎be‏ |1 1:7 |1 |1 لمتوالية: ‎P5/P7‏ ‏بوليالاينطيق 0.5 ]105 ]1 الاينطبق ]2 |2 ‎TTS‏
جليكول) - ألكاين وزن جزيئى ‎molecular‏ ‎weight‏ ‎(MW)‏ ‏(كيلو ‏دالتون) ‏اسار إلا )2 )3 34 6 37 عينة عينة|ً24 |25 |26 اعينة 28 ]29 300 اا ل 23 27 جديلةا1:0 ا05ا|2/1:1 :1:0 )05 ]20:1 : ‎TE‏ ‏ب" ‏لمتوالية: ‎P5/P7‏ ‏بولي لاينطيق|5 |5 |5 الاينطبق ]10 ]0710 (إيثيلين جليكول) - ألكاين وزن جزيئى (كيلو دالتون) تعرضت خلايا التدفق إلى التهجين للتصوير» والتجميع؛ والتقسلسل. تم جمع بيانات المتوالية؛ وتظهر نتائج النسبة المئوية للمجموعات التي تمر عبر مرشضح (7 مرشح ‎passing filter yg yall‏ pad ‏في الأشكال 16 (خلية التدفق 1) و 6 ب (خلية التدفق 2) ونتائج لوحة التنقل‎ ((PF)
‎(PH) hopping‏ موضحة في الأشكال 17 (خلية التدفق 1) و 7 ب (خلية التدفق 2). نسبة مرشح
‏المرور هي المقياس المستخدم لوصف الكتل التي تتجاوز الحد وتستخدم لمزيد من المعالجة وتحليل
‏بيانات المتوالية. نسبة التنقل عبارة عن مقياس يصف مقدار المجموعات المكررة الموجودة بالقرب
‏5 من مجموعة فريدة. تؤدي زيادة نسبة مرشح المرور وانخفاض نسبة التنقل إلى زيادة عائد
‏المجموعات الفريدة المستخدمة في بيانات المتوالية. توضح هذه النتائج أن تطعيم المواد الأولية التي
‏تخضع لمتوالية ذات الوزن الجزيئي المنخفض بولي (إيثيلين جليكول) - ألكاين (على سبيل
‏المثال» كيلو دالتون > 10) كان مشابهًا لتطعيم المواد الأولية التي تخضع لمتوالية بدون أي بولي
‏(إيثيلين جليكول) - ألكاين. وعلى هذا النحو» لا يؤثر إدخال الكيان غير المتوالي لجديلة البوليمر 0 بشكل ضار على نتائج المتوالية؛ وقد يضيف ماء إلى مادة الهلام في عيون ‎WIA‏ التدفق؛ ويحد
‏من الارتباط غير المحدد؛ إلخ.
‏ملاحظات إضافية
‏يجب إدراك أن جميع المفاهيم السابقة (بشضرط ألا تكون هذه المفاهيم غير متسقة مع بعضها
‏البعض) تعتبر جزءًا من الموضوع الابتكاري الموضح هنا. وعلى ‎dag‏ الخصوص؛ تعتبر جميع الموضوعات الخاضعة لعناصر الحماية والتي تظهر في نهاية هذا الكشف جزءًا من الموضوع
‏الابتكاري الموضح هنا. ويجب أيضًا إدراك أن المصطلحات المستخدمة بشكل صريح في هذه
‏الوثيقة والتي قد تظهر أيضًا في أي كشف مضمن بالإشارة يجب أن تمنح معنى أكثر انسجامًا مع
‏المفاهيم المعينة الموضحة هنا.
‏جميع الإصدارات وبراءات الاختراع وطلبات براءات الاختراع المذكورة في هذه المواصفات مدمجة 0 لمرجعية بالكامل.
‏في هذه المواصفة تعني الإشارة إلى 'مثال واحد"؛ ‎CAT JB‏ وامثال"؛ وما إلى ذلك؛ إلى أن
‏عنصرًا معيئًا (على سبيل ‎Jal)‏ ميزة؛ بنية؛ و/أو خاصية مميزة) المذكورة فيما يتعلق بالمثال تم
‏تضمينها في مثال واحد على الأقل مذكور هناء ويمكن أن توجد أو لا توجد في أمثلة أخرى.
‏بالإضافة إلى ذلك؛ من المفهوم أن العناصر الموصوفة لأي مثال ‎(Sar‏ دمجها بأي طريقة مناسبة 5 في الأمثلة المختلفة ما لم يفرض السياق خلاف ذلك بوضوح.
يجب أن يكون مفهوما أن النطاقات المقدمة هنا تمل النطاق المذكور ‎(gly‏ قيمة أو نطاق فرعي ضمن النطاق المحدد. على سبيل ‎«JB‏ يجب تفسير النطاق من حوالي 0.5 كيلو دالتون إلى أقل من حوالي 10 كيلو دالتون ليشمل ليس فقط الحدود المكررة بوضوح التي ‎fan‏ من حوالي 0.5 كيلو دالتون إلى أقل من حوالي 10 كيلو دالتون» ولكن ‎Lad‏ لتضمين قيم فردية؛ ‎Jie‏ حوالي 0.8 كيلودالتون؛ حوالي 3.25 كيلو ‎gills‏ حوالي 5 كيلو دالتون» حوالي 7.5 كيلو دالتون...إلخ؛
ونطاقات فرعية؛ مثل من حوالي 4.25 كيلو دالتون إلى حوالي 9 كيلو دالتون» من حوالي 5.4 كيلو دالتون إلى حالي 7.75 كيلو دالتون...إلخ. علاوة على ذلك»؛ عندما يتم استخدام "حوالي" و / أو ‎IS&T‏ جوهري" لوصف قيمة ‎cle‏ فهذا يعني أن يشمل الاختلافات الطفيفة (حتى +/- 710) من القيمة المذكورة.
0 في حين تم وصف العديد من الأمثلة بالتفصيل؛ فمن المفهوم أنه قد يتم تعديل الأمثلة التي تم الكشف عنها. لذلك؛ يعتبر الوصف السابق غير مقيد. قائمة التتابع ‎due"‏ المقارنة ب" الكثافة
5 "جكثفة ‎READ2 CIA‏ ‎ile ganas‏ مرشح المرور (7) "ه"الرقم الهيدروجيني

Claims (5)

عناصر الحماية
1. مصفوفة ‎array‏ تشتمل على: دعم يشتمل على مجموعة من العيون المستقلة ‎tdiscrete wells‏ مادة هلامية ‎gel material‏ موجودة في كل من العيون المنفصلة ‎(discrete wells‏ مادة أولية متوالية ‎sequencing primer‏ مطعمة في مادة الهلام ‎material‏ 861؛ و كيان لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ مطعم في مادة الهلام ‎gel material‏ ومتصل عبر رابط خ1:01:0بمخمد ‎quencher‏ أو مضاد أكسدة ‎¢anti-oxidant‏ ‏وكل من مادة البدء التي تخضع لمتوالية ‎sequencing primer‏ والكيان الذي لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ في ‎dls‏ الطعمة؛ حيث يتم اختيار الكيان الذي لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ من المجموعة 0 التي تتكون من دندرايمر ‎cdendrimer‏ بولي ديكستران 001706000 ميثاكريلوبلوكسي ‎Jil‏ فوسفوريل كولين ‎emethacryloyloxyethyl phosphorylcholine‏ بولي (إيثيلين جليكول) ‎poly(ethylene glycol)‏ بولي (إيثيلين إمين) ‎poly(ethylene imine)‏ بولي ‎L‏ ‏ليسين ‎epoly-L-lysine‏ برويارجيل ميشاكريلات ‎cpropargyl methacrylate‏ بولي (ميثيل ميتاكريلات) ‎¢poly(methyl methacrylate)‏ بولي ‎N)‏ -أيزو بروييل أكريل أميد) ‎cpoly(N-isopropylacrylamide) 5‏ بولي (إيثيلين جليكول) أكريليت ‎poly(ethylene‏ ‎cglycol) acrylate‏ بولي (بروبيلين إيمين) ‎ds poly(propylene imine)‏ (كحول فيتيل) ‎¢poly(vinyl alcohol)‏ بولي (2-إيثيل -2 أوكسازولين) ‎poly(2-ethyl-2-‏ ‎oxazoline)‏ حمض بولي أكريليك ‎polyacrylic acid‏ بولي (إستر ترولوكس) ‎poly(trolox ester)‏ وبيبتيد ‎«peptide‏ ومادة أولية غير نشطة ‎non-functional ~~ primer‏ 0 كون أي متوالية حمض نووي وحيدة الجديلة ‎stranded‏ 00816و لن تشارك في تخليق ‎synthesis DNA‏ أو ‎.RNA‏ ‏2 المصفوفة ‎array‏ وفقا لعنصر الحماية 1 حيث الكيان الذي لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ هو المادة الأولية غير الوظيفية ‎«non-functional primer‏
— 4 6 — وحيث المادة ‎١‏ لأولية غير الوظيفية ‎non-functional primer‏ هي بولي ‎polyT‏ 1 أو بولي ‎polyA‏ ط. ‏3 المصفوفة ‎array‏ وفقا لعنصر الحماية 1 حيث الكيان الذي لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity 5‏ هو ‎ds‏ (إيثيلين جليكول) ‎poly(ethylene glycol)‏ له وزن ‏جزيثي ‎molecular weight‏ يتراوح من 0.5 كيلو دالتون إلى 10 كيلو دالتون. ‏4 المصفوفة ‎array‏ وفقاً لعنصر الحماية 1 حيث يتم عمل طعمة من الكيان الذي ‏لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ في مادة الهلام ‎gel material‏ عبر مجموعة ‎d why 0‏ طرفية ‎terminal functional ~~ group‏ من المجموعة التي تتكون من ألكاين ‎«copper free click moiety ‏وجزيء خالي من التحاس‎ cnorbornyl ‏ونوريورنيل‎ alkyne ‎«thiol ‏وثيول‎
‏5. المصفوفة بده وفقا لأي من عناصر الحماية 1 أو ‎od‏ حيث يشتمل الكيان الذي لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ على رابط ‎linker‏ ومخمد ثلاثي الحالة ‎linker ‏مرتبط بالرابط‎ anti-oxidant ‏أو مضاد للأكسدة‎ triplet state quencher ‏6م المصفوفة ‎array‏ وفقاً لعنصر الحماية 5 حيث: ‏يتم اختيار الرابط ‎linker‏ من المجموعة التي تتكون من دندرايمر ‎«dendrimer‏ بولي ‎Jia 0‏ ةراهم ميثاكريلويلوكسي إيثيل فوسفووريل كولين ‎poly(ethylene ‏بولي (إيثيلين جليكول)‎ emethacryloyloxyethyl . phosphorylcholine ‎«poly-L-lysine ‏ليسين‎ L ‏بوتي‎ poly(ethylene imine) ‏إمين)‎ adil) ‏بوتي‎ cglycol) ‏برويارجيل ميثاكريلات ‎methacrylate‏ 1م بولي (ميثيل ميثاكريلات) ‎poly(N- ‏-أيؤزو بروييل أكريلاميد)‎ N) ‏بولي‎ ¢poly(methyl methacrylate) poly(ethylene glycol) ‏بولي (إيثيلين جليكول) أكربليت‎ cisopropylacrylamide) 5 ‎acrylate‏ بولي (بروبيلين ‎polypropylene imine) (cond‏ بولي (كحول فينيل)
‎«poly(vinyl alcohol)‏ بولي (2-إيثيل -2 أوكسازولين) ‎«poly(2-ethyl-2-oxazoline)‏ ‏حمض بولي ‎polyacrylic acid ell‏ ¢ وبولي (إستر ترولوكس) ‎tpoly(trolox ester)‏ و واحد من: مخمد الحالة الثلاثية ‎triplet state quencher‏ يتم اختياره من المجموعة التي تتكون من سيكلو -أوكتيل تيتراين ‎ccyclo-octyltetraene (COT)‏ ترلوكس (حمض 6-هيدروكسي - 2 5 7 8-رباعي ميثيل كرومان -2- الكربوكسيل) ‎Trolox (6-hydroxy-2,5,7.8-‏ ‎ctetramethylchroman-2-carboxylic acid)‏ وكحول النتروينزيل ‎nitrobenzyl alcohol‏ ‎¢(NBA)‏ أو يتم اختيار مضادات الأكسدة ‎anti-oxidant‏ من المجموعة التي تتكون من أسكوريات ‎ascorbate 10‏ جلوتاثيون ‎glutathione‏ حمض الجاتيك ‎¢gallic acid‏ كاتشضين ‎«catechin‏ ‏ترولوكس (حمض 6-هيدروكسي- 2 5 76 :8-تترا ميثيل كرومان -2-كريوكسيلي) ‎(Trolox (6-hydroxy-2,5,7.8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid)‏ وفيتامين — ‎vitamin E‏ ‏15 7. المصفوفة ‎array‏ وفقا لأي من عناصر الحماية 1 أو ‎od‏ حيث يرتبط مانح نقل طاقة رنين الومضان ‎fluorescence resonance energy transfer donor (FRET)‏ بالرابط ‎linker‏
‏8. المصفوفة ‎array‏ وفقا لعنصر الحماية 7 حيث: ‏20 يتم اختيار مانح نقل طاقة الرنين الفلورية ‎fluorescence resonance energy transfer‏ 7 من المجموعة التي تتكون من صبغة ‎mile‏ نقل طاقة الرنين الفلوورية ‎fluorescence resonance energy transfer donor‏ مع صبغة خضراء باعثة وصبغة ‎mila‏ تقل طاقة الرنين الفلورية ‎fluorescence resonance energy transfer donor‏ مع صبغة حمراء اللون.
9. المصفوفة ‎array‏ وفقاً لعنصر الحماية 1 حيث تتراوح نسبة المولية للكيان الذي لا يخنضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ إلى المادة الأولية التي تخضع لمتوالية ‎(sequencing primer‏ 0.25: 1 إلى 5: 1.
10. المصفوفة ‎array‏ وفقاً لعنصر الحماية 1 حيث: مادة هلامية ‎gel material‏ تشتمل على وحدة متكررة ‎recurring unit‏ من الصيغة ([): ‎NS 0‏ ‎NH‏ 8 ‎Ni Nit‏ 2 ‎(I)‏ ’ 5 2 حيث: ‎RI‏ هو ‎H‏ أو ألكيل به استبدال ‎substituted alkyl‏ أو غير مستبدل ‎¢unsubstituted‏ ‏0 يتم اختيار همع من المجموعة التي تتكون من أزيدو ‎cazido‏ أمينو به استبدال ‎substituted amino‏ أو غير مستبدل ‎cunsubstituted‏ ألكينئيل به استبدال ‎substituted‏ ‎alkenyl‏ أو غير مستبدل ‎cunsubstituted‏ هيدرازون به استيدال ‎substituted ~~ hydrazone‏ أو غير مستبدل ‎cunsubstituted‏ أو مجموعات بها استبدال بديل من ‎Cobra‏ ‎hydrazine substituted‏ أو غير مستدل ‎cunsubstituted‏ كريبوكسيل ‎«carboxyl‏ ‏5 ميدروكسي ‎chydroxy‏ رباعي 3-53 به استبدال ‎substituted tetrazole‏ أو غير مستبدل ‎elo) cunsubstituted‏ البروم به استيدال ‎substituted tetrazine‏ بديل أو غير مستبدل ‎unsubstituted‏ أكسيد التيتريل ‎enitrile oxide‏ النيترون ‎enitrone‏ وثيول ‎¢thiol‏ ‏يتم اختيار 185 من المجموعة التي تتكون من ‎H‏ والكيل به استبدال ‎substituted alkyl‏ أو غير مستبدل ‎tunsubstituted‏ ‏20 يمكن استبدال كل -م(0©12)- أو يكون غير مستبدل ‎cunsubstituted‏ ‎p‏ عدد صحيح في المدى من 1 إلى 50؛ « عدد صحيح في حدود 1 إلى 50.000؛ و
عدد صحيح في حدود 1 إلى 100.000.
1. مصفوفة ‎array‏ تشتمل على: دعم يشتمل على مجموعة من العيون المستقلة ‎tdiscrete wells‏ مادة هلامية موجودة في كل من العيون المنفصلة ‎tdiscrete wells‏ مادة أولية لمتوالية ‎sequencing primer‏ مطعمة في مادة الهلام ‎‘gel material‏ فاصل ‎spacer‏ يتم تطعميه في مادة الهلام ‎gel material‏ ومتصل عبر رابط ‎linker‏ ‏بمخمدات ثلاقية الحالة ‎triplet state quencher‏ أو مضاد للأكسدة ‎canti-oxidant‏ أو ومانح نقل طاقة رنين الومضان ‎fluorescence resonance energy transfer donor‏ ‎FRET) 0‏ 5 ويتم اختيار الفاصل 50808 من المجموعة التي تتكون من دندرايمر ‎«dendrimer‏ بولي ديكستران 001::0680 ميثاكربلويلوكمسي ‎JA‏ فوسفوريل كولين ‎emethacryloyloxyethyl . phosphorylcholine‏ بولي (إيثيلين جليكول) ‎poly(ethylene‏ ‎cglycol)‏ بوتي ‎adil)‏ إمين) ‎poly(ethylene imine)‏ بوتي ‎L‏ ليسين ‎«poly-L-lysine‏ ‏5 برويارجيل ميثاكريلات ‎methacrylate‏ 1م بولي (ميثيل ميثاكريلات) ‎«poly(methyl methacrylate)‏ بولي ‎N)‏ -أيؤزو ‎dg‏ أكريلاميد) ‎poly(N-‏ ‎cisopropylacrylamide)‏ بولي (إيثيلين جليكول) أكربليت ‎poly(ethylene glycol)‏ ‎cacrylate‏ بوتي (بروبيلين إيمين) ‎Js poly(propylene imine)‏ (كحول فينيل) ‎«poly(vinyl alcohol)‏ بولي (2-إيثيل -2 أوكسازولين) ‎«poly(2-ethyl-2-oxazoline)‏ ‏20 حمض بولي أكريليك ‎cpolyacrylic acid‏ بولي (إستر ترونلوكس) ‎cpoly(trolox ester)‏ ومجموعات منها.
2. المصفوفة ‎Gig array‏ لعنصر الحماية 11 حيث: يتم ريط مخمد الحالة الثلاثية ‎triplet state quencher‏ مع الفاصل ‎tspacer‏ و 5 يتم اختيار مخمد الحالة الثلاثية ‎triplet state quencher‏ من المجموعة التي تتكون من سيكلو -أوكتيل تيتراين ‎ccyclo-octyltetraene‏ ترلوكس (حمض 6 هيدروكسي -2) 2
Trolox (6-hydroxy-2,5,7.8- ‏كرومان -2-الكربوكسيل)‎ Je ‏-رباعي‎ 7 <5 .nitrobenzyl alcohol ‏وكحول التترويتزيل‎ ctetramethylchroman-2-carboxylic acid)
3. المصفوفة ‎Wag array‏ لعنصر الحماية 11 حيث: يرتبط مضاد الأكسدة ‎anti-oxidant‏ مع الفاصل ‎fspacer‏ و يتم اختيار مضادات الأكسدة ‎anti-oxidant‏ من المجموعة التي تتكون من أسكوريات ‎ascorbate‏ جلوتاثيون ‎glutathione‏ حمض الجاتيك ‎¢gallic acid‏ كاتشضين ‎«catechin‏ ‏ترولوكس (حمض 6-هيدروكسي- 2 5 76 :8-تترا ميثيل كرومان -2-كريوكسيلي) ‎(Trolox (6-hydroxy-2,5,7.8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid)‏ وفيتامين — ‎witaminE 0‏
4. المصفوفة ‎Wag array‏ لعنصر الحماية 11 حيث: المتبرع نقل طاقة الرنين الفلورية ‎fluorescence resonance energy transfer donor‏ مرتبط مع الفاصل ‎tspacer‏ و ‏5 يتم اختيار متبرع نقل طاقة الرنين الفلورية ‎fluorescence resonance energy transfer‏ 7 من المجموعة التي تتكون من صبغة متبرع إلى نقل طاقة الرنين الفلورية ‎fluorescence resonance energy transfer‏ مع صبغة خضراء باعثة وصبغة متبرع إلى نقل طاقة الرنين الفلورية ‎fluorescence resonance energy transfer‏ مع صبغة حمراء اللون ‎.red-emitting dye‏ ‏20 ‏5- المصفوفة ‎array‏ وفقا لأي من عناصر الحماية 14-10( حيث تتراوح نسبة المولية للفاصل ‎spacer‏ إلى المادة الأولية التي تخضع لمتوالية ‎(sequencing primer‏ 5 1 إلى 5: 1. ‏5 16. المصفوفة ‎array‏ وفقاً لأي من عناصر الحماية 14-10( حيث يتم عمل طعمة من فاصل ‎spacer‏ في مادة الهلام ‎gel material‏ عبر مجموعة وظيفية طرفية ‎terminal‏
‎functional group‏ من المجموعة التي تتكون من ألكاين ‎calkyne‏ ونوريورنيل ‎cnorbornyl‏ وجزيء خالي من النحاس ‎ccopper free click moiety‏ وثيول ‎thiol‏
‏7. طريقة لتصنيع مصفوفة ‎array‏ تشتمل على: وضع مادة هلام ‎material‏ 801 في كل مجموعة من العيون المنفصلة للدعم ‎discrete‏ ‎‘wells of support‏ تطعيم مادة أولية متوالية ‎sequencing primer‏ في مادة الهلام ‎‘gel material‏ و تطعيم كيان لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ في مادة هلام ‎gel material‏ وتوصيل كيان لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ عبر رابط ‎linker‏ بمخمد ‎quencher 0‏ أو مضاد للأكسدة ‎anti-oxidant‏ حيث يتم اختيار الكيان الذي لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ من المجموعة التي تتكون من دندرايمر ‎«dendrimer‏ ‏بولي ديكستران ‎cpolydextran‏ ميثاكريلويلوكسي إيثيل فوسفوريل كولين ‎emethacryloyloxyethyl . phosphorylcholine‏ بولي (إيثيلين جليكول) ‎poly(ethylene‏ ‎cglycol)‏ بوتي ‎adil)‏ إمين) ‎poly(ethylene imine)‏ بوتي ‎L‏ ليسين ‎«poly-L-lysine‏ ‏5 برويارجيل ميثاكريلات ‎methacrylate‏ 1م بولي (ميثيل ميثاكريلات) ‎methacrylate)‏ الجطاعص) بجاوو بولي ‎N)‏ - أيزو بروييل أكريل أميد) ‎poly(N-‏ ‎cisopropylacrylamide)‏ بولي (إيثيلين جليكول) أكربليت ‎poly(ethylene glycol)‏ ‎cacrylate‏ بوتي (بروبيلين إيمين) ‎Js poly(propylene imine)‏ (كحول فينيل) ‎«poly(vinyl alcohol)‏ بولي (2-إيثيل -2 أوكسازولين) ‎«poly(2-ethyl-2-oxazoline)‏ ‏20 حمض بولي أكربليك ‎cpolyacrylic acid‏ بولي (إستر ترولوكس) ‎poly(trolox ester)‏ ويبتيد ©0000 ومادة أولية غير نشطة ‎non-functional primer‏ تكون أي متوالية حمض نووي وحيدة الجديلة ‎single stranded‏ تشارك في تخليق ‎synthesis DNA‏ أو ‎RNA‏ ‏5 18. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 17 حيث يتم عمل طعمة من المادة الأولية التي تخضع لمتوالية ‎sequencing primer‏ مع المادة الهلامية ‎material‏ :عع قبل أو بعد عمل
طعمة من الكيان الذي لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ في ‎sale‏ هلامية ‎gel‏ ‎material‏ ‏19 الطريقة وفقا لعنصر الحماية 17 حيث يتم عمل طعمة مشتركة من المادة الأولية التي تخضع لمتوالية ‎sequencing primer‏ مع الكيان الذي لا يخضع لمتوالية ‎non-‏ ‎sequencing entity 5‏ في مادة هلامية ‎-gel material‏
0. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 19( حيث يتم عمل التطعيم المشترك بواسطة: إيداع خليط من المادة الأولية للمتوالية ‎sequencing primer‏ والكيان غير المتوالي ‎non-‏ ‎sequencing entity‏ على الدعم مع وجود مادة هلام ‎gel material‏ عليه؛ و 0 تحضين الدعم في درجة حرارة محددة مسبقاً.
1. الطريقة وفقا لأي من عناصر الحماية 20-17 حيث: يتم اختيار الكيان الذي لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ من المجموعة التي تتكون من دندرايمر ‎«dendrimer‏ بولي ديكستران «001706*0:3» ميثاكربلويلوكسي إيثيل فوسفوريل كولين ‎phosphorylcholine‏ .. الإطاءن:011010ة001» بولي (اإيثيلين جليكول) ‎glycol)‏ عدع1رطا)راهم» بولي (إيثيلين إمين) ‎«poly(ethylene imine)‏ بولي ‎L‏ ليسين عصنونرا-1آ-017م» برويارجيل ميثاكريلات ‎methacrylate‏ 1م" بولي (ميثيل ميتاكريلات) ‎cpoly(methyl methacrylate)‏ بولي (إيثيلين جليكول) أكريليت ‎«poly(ethylene glycol) acrylate‏ بولي (بروبيلين إيمين) ‎<poly(propylene imine)‏ 0 بولي (كحول فينيل) ‎poly(vinyl alcohol)‏ بولي (2-إيثيل -2 أوكسازولين) ‎poly(2-‏ ‎cethyl-2-0xazoline)‏ حمض بولي أكريليك 40 ‎cpolyacrylic‏ بولي (إستر ترولوكس) ‎poly(trolox ester)‏ ويبتيد ‎peptide‏ ومادة أولية غير نشطة ‎¢non-functional ~~ primer‏ ويتم عمل طعمة لكيان لا يخضع لمتوالية ‎non-sequencing entity‏ في مادة الهلام ‎gel‏ ‎material‏ عبر مجموعة وظيفية طرفية ‎terminal functional group‏ من المجموعة التي 5 تتكون من ألكاين ‎calkyne‏ ونوربورنيل ‎cnorbornyl‏ وجزيء خالية من النحاس | ‎copper‏ ‎«free click moiety‏ وثيول ‎.thiol‏
2. الطريقة وفقا لأي من عناصر الحماية 20-17 حيث: مادة هلامية ‎gel material‏ تشتمل على وحدة متكررة ‎recurring unit‏ من الصيغة (): 6 اصح ‎NH‏ ‏7 ‏يتاتى ‏ ار له ‎(I)‏ ا 5 ‎i‏ ‏5 حيث: ‎RI‏ هو 117 أو اختياريا ألكيل به استدال ‎alkyl‏ 10 أو غير مستبدل ‎tunsubstituted‏ ‏يتم اختيار ‎RA‏ من المجموعة التي تتكون من أزيدو ‎cazido‏ أمينو به استبدال ‎substituted amino‏ أو غير مستبدل ‎cunsubstituted‏ ألكينئيل به استبدال ‎substituted‏ ‎alkenyl 0‏ أو غير مستبدل ‎cunsubstituted‏ هيدرازون به استيدال ‎substituted ~~ hydrazone‏ أو غير مستبدل ‎cunsubstituted‏ أو مجموعات بها استبدال بديل من ‎Cobra‏ ‎chydrazine substituted‏ كريوكسيل الإ«دناتةه»؛ هيدروكسي ‎chydroxy‏ رباعي الزثبق به استبدال ‎substituted tetrazole‏ أو غير مستبدل 0 ررررباعي البروم به استبدال ‎substituted tetrazine‏ أو غير مستبدل ‎cunsubstituted‏ أكسيد ‎nitrile Jou)‏ ‎coxide 5‏ النيترون ‎¢nitrone‏ وثيول ‎¢thiol‏ ‏يتم اختيار ‎RS‏ من المجموعة التي تتكون من ‎H‏ والكيل به استبدال ‎substituted alkyl‏ أو غير مستبدل ‎tunsubstituted‏ ‏يمكن استبدال ‎JS‏ -م(0112)- أو يكون غير مستبدل ‎tunsubstituted‏ ‎p‏ عدد صحيح في المدى من 1 إلى 50؛ 0 « عدد صحيح في حدود 1 إلى 50.000؛ و ‎em‏ صحيح في حدود 1 إلى 100.000.
ٍ "3 ym x VEL ‏رار‎ 77 A NE ‏و( مسر‎ Vil lf / - ~~ Cry 2059 pt on Qo. /\ YA 2 "8 ‏وجي 5 وق‎ fo 8 a o
Y. ١لكش‎
—_ 5 5 —_ LAT Ag yg ‏ذا‎ ‎ren A No vo ‏سيم‎ tae ILIAD a ‏شكل ؟أ‎ 1 "VL, 1A vd ‏سج سس ححا‎ NNN na Sr es RE a eH ‏ب‎ Y ‏شكل‎ ‎ ‎"11,101 MU evs Phd Fo ‏و‎ By ‏ب‎ 'Y zy ‏شكلٍ‎ ‎0 ‏ا ف‎ 4 vy 'y 3 4 Lay a MS Pee a ‏شكل "د‎
Ty Cont, fpr YS / ~ 9 . | So 2 Ey , Bet NYE ; | 7 TE “ \ 1 ‏ا‎ 2 5 - ~ x £1 "88/8 ‏د‎ 8%) ‘ Pp £9 7 ٍ ‏را‎ 1 ‏لإرزرفك - لي‎ (C8 ,' YY ; ¥ VY Y I< o>
—_ 5 7 —_ i = RK ‏اج باذ‎ ‏ب دقل‎ i ٍ ‏ا‎ one 1 . = nissan pre fT ‏ا‎ PTT eA veel ~ ‏كنا‎ fT So CR Tin La veri l] ‏سسا لاا ال‎ ‏الات لاا ...ل‎ sok WE ‏الا‎ ‎Yaa ae uw 1 5 0 ‏سب سمه‎ Voi ind 0 pore ‏ل‎ 1 : : i. tS ‏ل ا ب ب‎ eed a CE Sunn mbt ‏الا ال الا لاد‎ i ‏ب‎ 2 1 ٍ on : : 7, - 5 i : Sn bro mn + ‏ا‎ 2 ٍ ‏ساد‎ bd bd bd Tl ee ‏بسن«‎ . ad ‏ل أ أي سس أ مه من‎ 1 a A ne ‏ومسا ات اي‎ ‏إْ لف‎ 8 ¥ i 8% 3 ¥ ¥ $ o 3 ¥ ¢ ; 5 ‏ج‎
الت ا ‎i‏ ‎EN‏ أ ‎ce‏ ‎Ne od oN a Ra‏ ا نا 7 .> بدن حر 0 ‎PON lm LE oN‏ ب أ كل تسسات ‎I Ae 27 Nop‏ ‎FRETS Se RE‏ أي جا“ ور ااا ‎JE‏ علي 4 ‎ne re Sse SE en‏ ممتس7«كساا ‎YO‏ ‎EE‏ } ‎Yi 5‏ ‎TYR RARE‏
‎A.‏ ‎of‏ « ص ¥ َ ‎i‏ ‏3 3 ‎Xho 1 |‏ 1 ‎ol |‏ ‎es <7‏ لاي يي ‎Tr my‏ ‎YE‏ جر ‎AR‏ ف ,4 3 ‎A‏ ‏& ‏شكل ‎a‏
—_ 5 9 —_ V > Bn es NB AS A ‏اول‎ ‎TA ‏ااا سال‎ BR cig ‏اح جد ادن ااا : حب‎ : | 7’ Z y 7 4 1 0 7 ser ol “Yd Ye ٠ wo 5 SA 9 ‏ان‎ ‏ل‎ ‏ب‎ 1 1 £ A ry Jed Yor TA Co Ax ‏لهم ب الامج‎ 1 I YA ya 4 Ye ‏)ع‎ wie 8 LHS 2 A 3 ‏أ ٍ د‎ at 1 ‏ب د‎ ‏لاا‎ J ead x : % ‏8ب‎ Jad
— 6 0 — A >>> > >> ‏جيك > كك و ا تح > بح ع > >>> ا‎ Po ad £3 wi \ ow a 0 5 5 ‏آ 0 2-0 ’ + ب ف‎
5.8 6 A a 7 % LH i 5, Yi 3 ye Ha 9 . ry Yo.
xX. 7 #١ 4 : : ‏شكل أ‎ YA eee 2> >> ‏يوي ف‎ TY 0 rn 9 i EY) Ye 7 vy ¥ fa 1 _ # | #5 ‏و‎ ' \ bY t & 2 i ٠ ْ 7 ys win ‏ف‎ | { ry ; va YY 7 | 4 vA sgh ——————————————— » a»
الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية ‎Swed Authority for intallentual Property pW‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < ‎Ne‏ ‎ge‏ ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام ‎TEE‏ ‏ببح ةا ‎Nase eg‏ + ‎Ed - 2 -‏ 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ uo‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA519402070A 2016-12-22 2019-06-18 مصفوفة تشمل مادة أولية في متوالية وكيان غير متوالٍ SA519402070B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662438294P 2016-12-22 2016-12-22
PCT/US2017/067566 WO2018119057A2 (en) 2016-12-22 2017-12-20 Array including sequencing primer and non-sequencing entity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA519402070B1 true SA519402070B1 (ar) 2022-11-08

Family

ID=62627942

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA519402070A SA519402070B1 (ar) 2016-12-22 2019-06-18 مصفوفة تشمل مادة أولية في متوالية وكيان غير متوالٍ

Country Status (18)

Country Link
US (1) US11466321B2 (ar)
EP (1) EP3558510B1 (ar)
JP (1) JP7051869B2 (ar)
KR (1) KR102586847B1 (ar)
CN (1) CN110382104B (ar)
AU (1) AU2017379867B2 (ar)
BR (1) BR112019013079A2 (ar)
CA (1) CA3046533A1 (ar)
ES (1) ES2936079T3 (ar)
IL (1) IL267445B2 (ar)
MX (1) MX2019006616A (ar)
PH (1) PH12019501462A1 (ar)
PL (1) PL3558510T3 (ar)
PT (1) PT3558510T (ar)
RU (1) RU2765075C2 (ar)
SA (1) SA519402070B1 (ar)
WO (1) WO2018119057A2 (ar)
ZA (1) ZA201903637B (ar)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20200149095A1 (en) * 2018-11-14 2020-05-14 Element Biosciences, Inc. Low binding supports for improved solid-phase dna hybridization and amplification
CA3103807A1 (en) 2019-01-14 2020-07-23 Illumina, Inc. Flow cell including a heteropolymer
CN113795595B (zh) * 2020-04-20 2023-02-28 深圳华大智造科技股份有限公司 Dna成像缓冲液中的dna保护试剂
CA3196155A1 (en) * 2020-09-21 2022-03-24 Quantum-Si Incorporated Methods to minimize photodamage during nucleic acid and peptide sequencing
US20240301487A1 (en) * 2023-03-09 2024-09-12 Illumina, Inc. Biomolecule immobilization method

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2044616A1 (en) 1989-10-26 1991-04-27 Roger Y. Tsien Dna sequencing
US6391937B1 (en) 1998-11-25 2002-05-21 Motorola, Inc. Polyacrylamide hydrogels and hydrogel arrays made from polyacrylamide reactive prepolymers
US6372813B1 (en) 1999-06-25 2002-04-16 Motorola Methods and compositions for attachment of biomolecules to solid supports, hydrogels, and hydrogel arrays
US6664061B2 (en) 1999-06-25 2003-12-16 Amersham Biosciences Ab Use and evaluation of a [2+2] photoaddition in immobilization of oligonucleotides on a three-dimensional hydrogel matrix
CN101525660A (zh) 2000-07-07 2009-09-09 维西根生物技术公司 实时序列测定
EP1354064A2 (en) 2000-12-01 2003-10-22 Visigen Biotechnologies, Inc. Enzymatic nucleic acid synthesis: compositions and methods for altering monomer incorporation fidelity
AU785425B2 (en) * 2001-03-30 2007-05-17 Genetic Technologies Limited Methods of genomic analysis
US7057026B2 (en) 2001-12-04 2006-06-06 Solexa Limited Labelled nucleotides
US6960298B2 (en) * 2001-12-10 2005-11-01 Nanogen, Inc. Mesoporous permeation layers for use on active electronic matrix devices
DK3363809T3 (da) 2002-08-23 2020-05-04 Illumina Cambridge Ltd Modificerede nukleotider til polynukleotidsekvensering
US20110059865A1 (en) * 2004-01-07 2011-03-10 Mark Edward Brennan Smith Modified Molecular Arrays
RU2270254C2 (ru) 2004-04-30 2006-02-20 Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук Способ идентификации трансгенных последовательностей днк в растительном материале и продуктах на его основе, набор олигонуклеотидов и биочип для осуществления этого способа
EP1790202A4 (en) 2004-09-17 2013-02-20 Pacific Biosciences California APPARATUS AND METHOD FOR ANALYZING MOLECULES
GB0514936D0 (en) * 2005-07-20 2005-08-24 Solexa Ltd Preparation of templates for nucleic acid sequencing
US7405281B2 (en) 2005-09-29 2008-07-29 Pacific Biosciences Of California, Inc. Fluorescent nucleotide analogs and uses therefor
CA2648149A1 (en) 2006-03-31 2007-11-01 Solexa, Inc. Systems and devices for sequence by synthesis analysis
EP2089517A4 (en) 2006-10-23 2010-10-20 Pacific Biosciences California POLYMERASEENZYME AND REAGENTS FOR ADVANCED NUCKIC ACID SEQUENCING
WO2010003132A1 (en) 2008-07-02 2010-01-07 Illumina Cambridge Ltd. Using populations of beads for the fabrication of arrays on surfaces
EP2718465B1 (en) 2011-06-09 2022-04-13 Illumina, Inc. Method of making an analyte array
CA2856163C (en) 2011-10-28 2019-05-07 Illumina, Inc. Microarray fabrication system and method
NO2694769T3 (ar) 2012-03-06 2018-03-03
EP2839968B1 (en) 2012-03-29 2018-07-11 FUJIFILM Corporation Original plate for lithographic printing plate, and method for printing same
US9012022B2 (en) 2012-06-08 2015-04-21 Illumina, Inc. Polymer coatings
US9512422B2 (en) * 2013-02-26 2016-12-06 Illumina, Inc. Gel patterned surfaces
AU2014284584B2 (en) * 2013-07-01 2019-08-01 Illumina, Inc. Catalyst-free surface functionalization and polymer grafting
KR102536833B1 (ko) * 2013-08-28 2023-05-26 벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니 대량의 동시 단일 세포 분석
US10682829B2 (en) 2013-12-19 2020-06-16 Illumina, Inc. Substrates comprising nano-patterning surfaces and methods of preparing thereof
GB201414098D0 (en) * 2014-08-08 2014-09-24 Illumina Cambridge Ltd Modified nucleotide linkers
US10633694B2 (en) 2014-09-12 2020-04-28 Illumina, Inc. Compositions, systems, and methods for detecting the presence of polymer subunits using chemiluminescence
KR102089058B1 (ko) * 2019-05-22 2020-03-13 주식회사 엘지화학 핵산 프로브가 코팅된 다공성 고체 지지체 스트립의 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
PT3558510T (pt) 2023-01-30
KR20190094391A (ko) 2019-08-13
PH12019501462A1 (en) 2020-03-09
RU2765075C2 (ru) 2022-01-25
WO2018119057A2 (en) 2018-06-28
RU2019117494A3 (ar) 2021-03-16
CN110382104A (zh) 2019-10-25
CN110382104B (zh) 2023-01-24
AU2017379867A1 (en) 2019-06-20
ES2936079T3 (es) 2023-03-14
JP2020503022A (ja) 2020-01-30
CA3046533A1 (en) 2018-06-28
BR112019013079A2 (pt) 2020-06-16
IL267445A (en) 2019-08-29
IL267445B1 (en) 2023-06-01
US11466321B2 (en) 2022-10-11
RU2019117494A (ru) 2021-01-22
US20200190575A1 (en) 2020-06-18
KR102586847B1 (ko) 2023-10-10
EP3558510B1 (en) 2022-11-23
ZA201903637B (en) 2024-01-31
EP3558510A2 (en) 2019-10-30
IL267445B2 (en) 2023-10-01
MX2019006616A (es) 2019-10-24
PL3558510T3 (pl) 2023-03-13
AU2017379867B2 (en) 2022-10-20
JP7051869B2 (ja) 2022-04-11
EP3558510A4 (en) 2020-08-19
WO2018119057A3 (en) 2018-09-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA519402070B1 (ar) مصفوفة تشمل مادة أولية في متوالية وكيان غير متوالٍ
US11702696B2 (en) Conjugated polymeric particle and method of making same
WO2007120208A2 (en) Nanogrid rolling circle dna sequencing
US20220145379A1 (en) Kits and flow cells
KR20230108223A (ko) 플로우 셀 신호 변경
US20210230585A1 (en) Kit, system, and flow cell
US20220195519A1 (en) Immobilization in flow cells
KR102624409B1 (ko) 품질 제어 트레이서를 갖는 어레이
RU2804754C2 (ru) Иммобилизация в проточных кюветах
US20230101095A1 (en) Flow cells with dark quencher
US20220154273A1 (en) Incorporation and imaging mixes
US20230416435A1 (en) Enhancing clustering efficiency and kinetics
JP2005283350A (ja) 核酸固定化方法及びｄｎａチップ