SA519401232B1 - تركيب اقتراني من السكر المتعدد لكبسولة بكتيريا المكورات الرئوية وبروتين حامل واستخداماته - Google Patents

Abstract

تركيب اقتراني من السكر المتعدد لكبسولة بكتيريا المكورات الرئوية وبروتين حامل واستخداماته A composition of multivalent pneumococcal capsular polysaccharide-carrier protein conjugates and use thereof الملخـــص يتعلق هذا الاختراع بتركيب لقاح vaccine composition لمنع الأمراض التي تحدث بسبب بكتيريا المكورات الرئوية pneumococcal diseases وتركيب منشط للمناعة immunogenic composition موجه ضد ستربتوكوكس بنيومونيا Streptococcus pneumoniae ، والذي يحتوي على عدد 13 أو 14 نوعا من اقتران يتكون من سكر متعدد يخص الكبسولة البكتيرية- وبروتين حامل capsular polysaccharide-carrier protein conjugates.

Description

تركيب اقتراني من السكر المتعدد لكبسولة بكتيريا المكورات الرئوية وبروتين حامل واستخداماته ‎A composition of multivalent pneumococcal capsular polysaccharide-carrier‏ ‎protein conjugates and use thereof‏ الوصف الكامل خلفية الاخترا

يتعلق هذا الاختراع بتركيب لفاح ‎vaccine composition‏ لمنع أمراض بكتيريا المكورات الرئوية ‎pneumococcal disease‏ وتركيب منشط للمناعة ‎immunogenic composition‏ موجه ضد ستربتوكوكس بنيومونيا ‎Streptococcus pneumoniae‏ ¢ والذي يحتوي على 13 أو 14 ‎les‏ ‏5 من اقترانات كبسولة بكتيريا المكورات الرثوية ويروتين حامل ‎capsular polysaccharide-carrier‏

.protein conjugates encephalomeningitis ‏يعتبر ستريتوكوكس بنيومونيا هو السبب الرئيسي لالتهاب الدماغ والسحايا‎ severe ‏والأمرارض الغزوية الشديدة‎ pneumonia ‏للرضع والأطفال» كما يسبب الالتهاب الرئوي‎ ‏الأخرى. هناك أكثر من 1.6 مليون شخص يموتون سنويا من الالتهاب‎ invasive diseases ‏الخصوص» فإن الأمراض المعدية‎ dag ‏الرتوي (وفقا لمنظمة الصحة العالمية في 2008). وعلى‎ 0 ‏الغزوية التي تحدث بسبب ستريتوكوكس بنيومونيا تعتبر عالية في الأطفال الصغار التي تكون‎ ‏وذلك بسبب انخفاض‎ (eld ‏أعمارهم أقل من 5 سنوات والشيوخ الذين تتراوح أعمارهم من 65 سنة‎

المناعة فى أجسامهم. هناك أكثر من 90 نوع مصلي من ستريتوكوكس بنيومونيا وذلك على حسب الخصائص التركيبية والمناعية للسكريات المتعددة فى الكبسولة؛ وهى العامل المسبب للمرض الذي يحيط بالبكتيريا . بالإضافة لذلك؛ ‎ald‏ من ضمن تلك الأنواع المصلية؛ فإن هناك 20 أو أكثر قليلا يرتبط بنسبة 0 إلى 9690 من إحداث المرض. إن الإنسان هو العائل الوحيد لستريتوكوكس بنيومونياء حيث أن هذا النوع من البكتيريا يكون موجود في التجويف ‎١‏ لأنفي البلعومي ‎pathogenicity‏ للأشخاص الذين يتمتعون بصحة جيدة (من 20 إلى 9640 من الأطفال ومن 965 إلى 9610 من البالغين). في سنة 2005 فإن مركز منع الأمراض والسيطرة ‎Centers for Disease Control and lle‏ ‎(CDC) Prevention‏ قد ذكر أن هناك حوالي 1 مليون طفل أصغر من 5 سنوات في الدول

النامية يموتون بسبب الالتهاب الرثئوي؛ ومن ضمن هللاء ‎(JULY)‏ فإن هناك 1.2 مليون ‎Jib‏ ‏صغير قد ماتوا بسبب العدوى البكتيرية. بالإضافة لذلك؛ فقد ذكر ‎CDC‏ أيضاً أنه في الولايات المتحدة؛ فإن التهاب الدماغ والسحايا والتسمم الدموي الذي يحدث بسبب ستريتوكوكس بنيومونيا يحدث لحوالي 3000 ‎dls‏ و50000 ‎dlls‏ على الترتيب ( ‎Peters TR et al. (2007) JAMA‏ ‎Invasive pneumococcal disease 5‏ :297(1825-6). وأيضاًء فإنه تبعا لما هو مذكور في قواعد بيانات أمراض الالتهاب الرثوي ‎pneumoACTION‏ في سنة 2000 فإن حدوث عدوى الالتهاب ‎gl‏ للأطفال الصغار ‏ في كوريا الجنوبية كان 24047 ولقد ‎cle‏ 47 منهم ‎.(www.pneumoadip.org)‏ وأيضا » في ' ‎Studies on Streptococcus pneumoniae Serotype‏ ‎Analysis in Young Children and Adolescents in Korea‏ "» وهي دراسة حديثة تم نشرها من 10 قبل المركز الكوري للسيطرة على الأمراض والوقاية منهاء فقد ذكر أن ستريتوكوكس بنيومونيا هو السبب الأكثر شيوعا (9643.7) من العدوى للرضع والأطفال من سن 3 أشهر حتى 59 شهااً. بالإضافة ‎coll‏ فإن ستريتوكوكس بنيومونيا يسبب أمراض معدية حول ‎call)‏ ومع زيادة أعداد البكتيريا المقاومة للأدوية؛ والتي تقاوم ليس فقط البنسلين» ولكن أيضاً ثلاثة أدوية أو أكثرء فإن ذلك يسبب زيادة في صعوية علاج الأمراض المعدية التي تحدث بسبب ستريتوكوكس بنيومونيا. وعلى ‎edly‏ فإن هناك حاجة مستمرة للقاح ضد ستريتوكوكس بنيومونيا للأطفال الصغار ومن هم

أكبر؛ والذين هم معرضون للأمراض المعدية التي تحدث بسبب ستريتوكوكس بنيومونيا. لكي يتم منع أمراض الالتهاب الرثوي؛ فقد تم تطوير لقاحات تحتوي على سكريات متعددة ومتعددة التكافؤات ضد ستريتوكوكس بنيومونيا وأخذت موافقة منذ سنة 1977؛ ولقد ثبت أن تلك اللقاحات التي تتكون من السكريات المتعددة الخاصة بالكبسولة مفيدة في الوقاية من أمراض الالتهاب الرئوي 0 للمرضى الأكبر سنا أو الأكثر عرضة. وعلى أي حال؛ فإنه بسبب أن الجهاز المناعي يمكن أن يكون أقل ‎cla‏ فإنه عند إعطاء لقاحات السكريات المتعددة بمفردها؛ فإن الجهاز المناعي للرضع والأطفال الصغار لا يميز السكر المتعدد كمستضد غريب. ولذلك؛ ‎ald‏ من الصعب أن يتم توقع أن اللقاحات من السكر المتعدد يمكن أن تعمل كلقاحات كاملة لتغطية كل المجموعات السنية المختلفة. ولكي يتم حل مشكلة انخفاض الاستجابة المناعية للقاحات من السكر المتعدد للرضع 5 والأطفال ‎lal‏ فقد تم تطوير واستخدام لقاح اقتراني موجه ضد بكتيريا الالتهاب الرئوي سباعي التكافؤ ‎Prevenar”)‏ ,©7700)؛ فقد تم تطوير واستخدام اقتران من سكر متعدد كبسولي مع بروتين حامل لزيادة الاستجابة المناعية؛ ولقد تم إثبات تأثيرها في الوقاية من الأمراض الغزوية والتهاب

الأذن الوسطى. وعلى الرغم من أن استخدام اللقاح سباعي التكافؤ قد أدى للانخفاض في مستوى الأمراض الغزوية التي تحدث بسبب الأنواع المصلية التي تستخدم في اللقاح؛ فإن الأنواع المصلية التي لا يتم تضمينها في اللقاح تزيد نسبيا. في هذا السياق؛ فقد تم تطوير كل من ‎Synflorix®‏ ‏وهو عبارة عن لقاح اقتراني من السكر المتعدد الكابسولي وبروتين ويكون عشاري ‎BE‏ و ‎Prevenar13® 5‏ وهو عبارة عن لقاح اقتراني من السكر المتعدد الكبسولي وبروتين ويكون ثلاثي عشر التكافؤ حيث أضيفت 6 أنواع مصلية إضافية إلى التركيب الإبتدائي من ‎Prevenar®‏ وتكون متاحة تجاريا. وعلى أي ‎Ja‏ فقد تم تقرير أن هناك أنواع مصلية من تلك التي تم تضمينها يمكن ألا تكون كافية لتوضيح الكفاءة المثلى كمكون لقاح ) ‎Poolman J et al. (2011) Clin.

Vaccine.‏ ‎Immunol. (18) 327; Impact of the Conjugation Method on the Immunogenicity of‏ ‎Streptococcus pneumoniae Serotype 19F Polysaccharide in Conjugate Vaccines / 0‏ ‎(EMEA Assessment Report for Prevenar 13 (2009) EMA/798877/2009‏ بالإضافة لذلكء فإن هناك ‎dala‏ مستمرة لتطوير تركيبات لقاح جديدة ‎ally‏ يمكن أن يكون لها كفاءة أفضل بمجال

تغطية أعرض. من ناحية ‎(gal‏ فإن هناك ظاهرة ملاحظة بعد إدخال اللقاح الاقتراني لبكتيريا الالتهاب الكبدي وهو زيادة معدل حدوث الأمراض الغزوية باستبدال النوع المصلي بسبب الأنواع المصلية لبكتيريا الالتهاب ‎gill‏ غير تلك الخاصة باللقاح والتي لا تكون محتواه في اللقاح. إن تلك الأنواع المصلية غير اللقاحات تؤمن أن تكون سائدة في منطقة فوق البلعوم باستبدال الأنواع المصلية للقاحات والتي تتجمع بصورة أساسية فيها قبل إدخال اللقاحات الاقترانية؛ ‎og‏ ذلك؛ فإن الأنواع المصلية غير اللقاحات تعتبر تهديد جديد في إحداث أمراض الالتهاب الرئوي. ‎dag log‏ الخصوص؛ فإن 0 بالوضع في الاعتبار التوزيع العام لستريتوكوكس بنيومونياء فإن حدوث النوع المصلي 2 يكون أكثر انتشاراً من بعض الأنواع المصلية ‎«TF 4) GAY)‏ و3 ) محتوى في ‎Oss Prevenar]3®‏ هو النوع المصلي الحادي عشر من ناحية الوفرة في العالم ‎lag‏ لمراجع سابقة ( ‎Johnson HL et‏ ‎al.(2010) PLoS Medicine, 7:10, 1000348: Systematic Evaluation of Serotypes Causing‏ ‎Invasive Pneumococcal Disease among Children Under Five: The Pneumococcal‏ ‎(Global Serotype Project 5‏ . بالإضافة لذلك؛ كما هو مذكور في دراسة حديثة ) ‎Saha SK et al.‏ ‎PLoS One, 7:3, 32134: Streptococcus pneumoniae serotype-2 childhood‏ )2012( ‎(meningitis in Bangladesh: a newly recognized pneumococcal infection threat‏ ؛» ‎OB‏ النوع

المصلي 2 قد سبب 9620 من الالتهاب السحائي (230 حالة) في الأطفال الأصغر من 5 سنوات في بنجلادش من سنة 2001 إلى سنة 2009. وفي هذا السياق؛ حيث أن النوع المصلي 2 يسبب أمراض المكورات الرثوية الغزوية ‎(IPD) invasive pneumococcal diseases‏ فإن هذا النوع المصلي يكون ذو أهمية كبيرة على أساس الخطورة بالإضافة إلى الوفرة الجغرافية. إن المستضد متعدد السكر الكبسولي من النوع المصلي 2 لا يتم تضمينه في أي من لقاحات بكتيريا المكورات الرئوية والتي تتضمن ‎Prevenar]3®‏ وهو لقاح ذو 13 تكافؤ يخص ‎ASHE‏ فايزر؛ والذي يكون له حاليا أعلى تغطية للنوع المصلي. ليس هناك تقرير أيضاً يخص النشاط العابر بين الأنواع المصلية الأخرى في ‎.Prevenar13®‏ ‏وتبعا لذلك؛ فقد اجتهد مخترعوا هذا الاختراع لتطوير لقاح لمنع أمراض الالتهاب ‎oll‏ حيث 0 يكون لهذا اللقاح نشاط مناعي أكبر أو تغطية أعرض للنوع المصلي مقارنة مع تركيبات اللقاحات الموجودة حاليا. ونتيجة ‎(SIM‏ فقد طور مخترعوا هذا الاختراع لقاح اقتراني لبكتيريا المكورات الرئوية جديد ذو 13 ‎BSS‏ والذي يحتوي على نوع مصلي مطابق للقاح الموجود ذو 13 تكافؤؤ ولكن بنشاط مناعي أفضل؛ ولقاح موجه ضد بكتيريا المكورات الرثوية ذو 14 تكافؤ يحتوي على مستضدين إضافيين من السكر المتعدد الكبسولي لزيادة التغطية بدون فقد للنشاط المناعي؛ وبذلك 5 يتم إكمال هذا الاختراع. إن اللقاح الاقتراني الموجه ضد بكتيريا المكورات الرثوية ذو 13 تكافؤ الخاص بهذا الاختراع يحتوي على 13 ‎leg‏ من مستضدات السكر المتعدد الكبسولية؛ ويكون بنشاط مناعي أفضل مقارنة باللقاح الاقتراني الموجه ضد بكتيريا المكورات الرثوية ذو 13 تكافؤ. وبالإضافة ‎(SIN‏ فإن اللقاح الاقتراني الموجه ضد بكتيريا المكورات الرئوية ذو 14 تكافؤ الخاص بهذا الاختراع يحتوي على 14 نوعا من مستضدات السكر المتعدد الكبسولية وتدخل في عملية 0 اتتحول المثالي للتحلل المائي أثناء الاقتران» حيث يتم الحصول على تركيب لقاح بتغطية أوسع ونشاط مناعي أفضل مقارنة باللقاح الموجود ذو 13 تكافؤ. ونتيجة لذلك؛ فإن اللقاح الاقتراني لبكتيريا المكورات الرثوية ذو 14 تكافؤ الخاص بهذا الاختراع من المتوقع أن يكون بتأثيرات ممتازة على ‎ge‏ أمراض الالتهاب الرثوي. الوصف العام للاإختراع 5 المشكلة التقنية

إن الهدف من هذا الاختراع هو إعداد تركيب لقاح لمنع الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات الرئوية؛ حيث يحتوي هذا التركيب على 13 نوعا من اقترانات تتكون من السكريات المتعددة للكبسولة ‎Cus cela Gig pg‏ أنه في الأنواع الثلاثة عشر من الاقترانات» فإن كل من الأنواع ‎ADA‏ عشر من السكريات المتعددة للكبسولة يتم اشتقاقها من الأنواع المصلية من ستريتوكوكس بنيومونيا ء 3 4 5 ‎23F 5 » 19F » 19A » 18C « 14 «OV «TF 6 68 « 6A‏ حيث يتم الاقتران تساهميا مع بروتين حامل؛ ‎(ss‏ البروتين الحامل هو بروتين 811197©؛ ويكون لكل من الاقترانات تركيب والذي فيه فإن كل من السكريات المتعددة للكبسولة والبروتين الحامل ترتبط عن طريق مجموعة ‎-O-C(NH)-NH-‏ باستخدام طريقة إضافة السيانيد. هناك هدف آخر لهذا الاختراع وهو إعداد تركيب لقاح لمنع الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات 0 الرئوية؛ والذي يحتوي على 14 نوعا من اقترانات تتكون من السكريات المتعددة للكبسولة وبروتين حامل» حيث أنه في الأنواع الأربعة عشر من الاقترانات» فإن كل من الأنواع الأريعة عشر من السكريات المتعددة للكبسولة المشتقة من الأنواع المصلية من ستربتوكوكس بنيومونيا 1ء 2 3 4 ‎6A <5‏ « 68 75 لاو 14 « ‎19F « 198 « 18C‏ »و23 تقترن تساهميا مع بروتين حامل؛ ويكون البروتين الحامل هو بروتين 0814197؛ ويكون لكل من الاقترانات تركيب والذي فيه فإن 5 كل من السكريات المتعددة للكبسولة والبروتين الحامل تترابط عن طريق مجموعة ‎-O-C(NH)-NH-‏ ‏باستخدام طريقة إضافة السيانيد. لا يزال هناك هدف آخر لهذا الاختراع وهو إعداد تركيب منشط للمناعة موجه ضد بكتيريا المكورات الرئوية؛ والذي يحتوي على 13 نوعا من اقترانات تتكون من السكريات المتعددة للكبسولة وبروتين ‎Cus als‏ أنه في الأنواع الثلاثة عشر من الاقترانات؛ فإن كل من الأنواع الثلاثة عشر من 0 السكريات المتعددة للكبسولة المشتقة من الأنواع المصلية من ستريتوكوكس بنيومونيا 1 23 4 5 ؛ ‎23F 5 ¢ 19F « 19A « 18© « 14 9177 775 « 68 « 6A‏ تقترن تساهميا مع بروتين حامل؛ ويكون البروتين الحامل هو بروتين 011197؛ ويكون لكل من الاقترانات تركيب والذي فيه فإن كل من السكريات المتعددة للكبسولة والبروتين الحامل تترابط عن طريق مجموعة ‎-O-C(NH)-NH-‏ ‏باستخدام طريقة إضافة السيانيد. 5 لا يزال هناك هدف آخر لهذا الاختراع وهو إعداد تركيب منشط للمناعة موجه ضد بكتيريا المكورات الرئوية؛ والذي يحتوي على 14 نوعا من اقترانات تتكون من السكريات المتعددة للكبسولة وبروتين

‎cals‏ حيث أنه في الأنواع الأريعة عشر من الاقترانات» فإن كل من الأنواع الأريعة عشر من

‏السكريات المتعددة للكبسولة المشتقة من الأنواع المصلية من ستربتوكوكس بنيومونيا 1ء 2 3 4

‎23F 5 ¢ 19F » 198 « 18C « 14 < 9V 78 « 6B « 6A <5‏ تقترن تساهميا مع بروتين حامل؛

‏ويكون البروتين الحامل هو بروتين 0814197؛ ويكون لكل من الاقترانات تركيب والذي فيه فإن كل من السكريات المتعددة للكبسولة والبروتين الحامل تترابط عن طريق مجموعة ‎-O-C(NH)-NH-‏

‏باستخدام طريقة إضافة السيانيد.

‏لا يزال هناك هدف ‎AT‏ لهذا الاختراع وهو ‎dae]‏ طريقة لمنع مرض من الأمراض التي تحدث

‏بسبب بكتيريا المكورات الرئوية بإعطاء تركيب اللقاح أو التركيب المنشط للمناعة لشخص بحاجة

‏لهذا التركيب.

‏0 لا يزال هناك هدف ‎AT‏ لهذا الاختراع وهو إعداد طريقة لاستخدام مستحضر تركيب لقاح لمنع مرض من الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات ‎sill‏ والذي يحتوي على 13 نوعا من اقترانات تتكون من السكريات المتعددة للكبسولة ويروتين حامل؛ حيث أنه في الأنواع الثلاثة عشر من الاقترانات» فإن كل من الأنواع ‎EN‏ عشر من السكريات المتعددة للكبسولة المشتقة من الأنواع المصلية من ستريتوكوكس بنيومونيا 1 3 4 5« ‎«9V «TF 68 « 6A‏ 14 180

‏5 واء 198 ¢ 5 ‎23F‏ تقترن تساهميا مع بروتين حامل؛ ‎Oey‏ البروتين الحامل هو بروتين 7؛ ويكون لكل من الاقترانات تركيب والذي فيه فإن كل من السكريات المتعددة للكبسولة والبروتين الحامل تترابط عن طريق مجموعة ‎-O-C(NH)-NH-‏ باستخدام طريقة إضافة السيانيد. لا يزال هناك هدف آخر لهذا الاختراع وهو إعداد طريقة لاستخدام مستحضر تركيب لقاح لمنع مرض من الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات الرئوية؛ والذي يحتوي على 14 نوعا من

‏0 اتترانات تتكون من السكريات المتعددة للكبسولة ويروتين ‎ala‏ حيث أنه في الأنواع الأريعة عشر من الاقترانات» فإن كل من الأنواع ‎da)‏ عشر من السكريات المتعددة للكبسولة المشتقة من الأنواع المصلية من ستريتوكوكس بنيومونيا 0 2 3 4 5« ‎«TF 68 «6A‏ افق 14 0180 ‎19F 198‏ ¢ و2357 تقترن تساهميا_ مع بروتين حامل؛ وبكون البروتين الحامل هو بروتين 7؛ ويكون لكل من الاقترانات تركيب والذي فيه فإن كل من السكريات المتعددة للكبسولة

‏5 والبروتين الحامل تترابط عن ‎Goh‏ مجموعة -1011-(0-0011- باستخدام طريقة إضافة السيانيد. [الحل التقني]

في هذا الاختراع؛ فإنه لتطوير تركيب لقاح جديد له القدرة على منع حدوث مرض من الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات الرئوية بكفاءة أعلى؛ فإنه يتم أعداد تركيب يحتوي على 13 نوعا من اقترانات تتكون من السكريات المتعددة للكبسولة وبروتين حامل» حيث أن طريقة الاقتران لتلك الاقترانات تختلف عن اللقاح الموجود ذو الثلاثة عشر تكافؤ. وعلى ‎dag‏ الخصوص» فإن التركيب يحتوي على 13 نوعا من اقترانات تتكون من السكريات المتعددة للكبسولة ويروتين حامل؛ والتي يتم تحضيرها بالاقتران التساهمي لكل من الأنواع الثلاثة عشر من السكريات المتعددة للكبسولة والمشتقة من الأنواع المصلية التي تخص ستريتوكوكس بنيومونيا 1 03 4 5 ‎¢TF 68 «6A‏ ‎23F5 » 198 198 « 18C « 14 OV‏ مع بروتين حامل. وحيث أن الأنواع الثلاثة عشر من السكريات المتعددة للكبسولة يكون لها نشاط مناعي زائد مقارنة باللقاح ‎١‏ لاقتراني الموجود ذو الثلاثة 0 عشر ‎HIS‏ فإن تركيب هذا الاختراع من المتوقع أن يكون له تأثير ذو أهمية على منع الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات الرئوية. ‎Lady‏ فإنه على الرغم من أن هناك العديد من التقارير تخص انخفاض معدل حدوث الأمراض الغزوية والتي تحدث بواسطة الأنواع المصلية من اللقاح والمحتواة في لقاح اقتراني لبروتين بكتيريا المكورات ‎gil‏ بعد أن أصبح اللقاح متاح تجارياء فإن احتمال حدوث مرض من الأمراض التي 5 تسببها بكتيريا المكورات الرئوية تبعا للأنواع المصلية من اللقاح لا يصل إلى الصفر بسبب التوزيع الجغرافي الخاص بالنوع المصلي ) ‎Lee L.H et al. (2014) Vaccines, 2(112); Towards New‏ ‎Broader Spectrum Pneumococcal Vaccines: The Future of Pneumococcal Disease‏ ‎leg (Prevention‏ ذلك؛ فإن مجال الاستخدام يجب أن يكون أوسع وذلك بإضافة نوع مصلي جديد بينما يتم الاحتفاظ بالنوع المصلي للقاحات الاقترانية الخاصة ببكتيريا المكورات الرثوية. 0 لقد كان من المعروف أن التنشيط المناعي للقاحات الاقترانية يمكن أن يتأثر بإضافة أنواع مصلية أكثر بسبب التداخل المناعي الذي يحدث بتفاعلات بين مكوناتها مثل السكريات المتعددة أو البروتينات الحاملة ( ‎Dagan R et al. (2010) Vaccines, 28(5513); Glycoconjugate vaccines‏ ‎(and immune interference: A review‏ وعلى أي ‎(Ja‏ فقد تم التأكيد على أن اللقاح ذو 14 تكافؤ في هذا الاختراع؛ والذي يستخدم فيه طريقة إضافة السيانيد وبطريقة مثلى للتحلل المائي؛ 5 يكون له نشاط مسبب للمناعة محسن في كل الأنواع المصلية و/أو تغطية أفضل مقارنة باللقاح الموجود فعليا ذو الثلاثة عشر ‎CHK‏

يمكن تطبيق كل وصف وتجسيم مثالي في هذا ا لاختراع على أي ‎AT “ag‏ وعلى أي تجسيم مثالي آخر. حيث أن كل اتحادات العناصر المختلفة الموضحة في هذا الاختراع تقع في داخل مجال هذا الاختراع. وبالإضافة لذلك؛ فإن مجال هذا الاختراع لا يمكن أن يعتبر محدود بالوصف المعين التالى.

كمظهر للحصول على الأهداف السابقة؛ فإن هذا الاختراع يعمل على إعداد تركيب لقاح لمنع الأمراض التي تحدث بسبب بكتيريا المكورات ‎(ugh‏ حيث يحتوي هذا اللقاح على 13 نوعا من اقترانات تتكون من السكريات المتعددة للكبسولة ودروتين ‎Jala‏ . وعلى ‎any‏ الخصوص» فإن الأنواع الثلاثة عشر من الاقترانات يمكن أن تكون تلك التي فيها فإن كل نوع من الأنواع الثلاثة عشر من السكريات المتعددة للكبسولة والمشتقة من ستريتوكوكس

0 بنيومونيا الأنواع المصلية 1« 3 4 5« ‎19A 180 4 «OV «TF «6B « 6A‏ ¢ 198 و2385 تقترن تساهميا مع 7 + وهو بروتين حامل. وعلى ذلك» فإن هذا الاختراع يكون تركيب لقاح يحتوي على 13 نوعا مختلفا من الاقترانات التي تتكون من سكر متعدد وبروتين» حيث أن كل من تلك الاقترانات تحتوي على سكريات متعددة تخص الكبسولة مشتقة من ستريتوكوكس بنيومونيا من أنواع مصلية مختلفة تقترن مع بروتين

5 1 حامل 3 وحيث يتم تحضير السكريات المتعددة الخاصة بالكبسولة من ا لأنواع المصلية 1ء 3 »+ 4 ‎<9V «TF « 6B < 6A <5‏ 4 1180 ذو 198 و235 . بالإضافة لذلك» في مظهر ‎al‏ فإن هذا الاختراع يعمل على إعداد تركيب لقاح لمنع الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات الرثوية؛ حيث تحتوي على 14 نوعا من الاقترانات التي تتكون من السكر المتعدد للكبسولة-بروتين حامل .

0 وعلى وجه الخصوص» فإن الأنواع الأريعة عشر من الاقترانات يمكن أن تكون تلك التي فيها فإن كل نوع من الأنواع الأريعة عشر من السكريات المتعددة للكبسولة والمشتقة من ستربتوكوكس بنيومونيا الأنواع المصلية 1« 2 3 4ك 5« ‎7٠١68 ¢ 6A‏ كاوق 14 180 ‎19A‏ ¢ 191 « و 7 تقترن تساهميا مع ‎«CRM197‏ وهو بروتين حامل. وعلى ذلك» فإن هذا الاختراع يكون تركيب لقاح يحتوي على 14 نوعا مختلفا من الاقترانات التي

5 تتكون من سكر متعدد وبروتين» حيث أن كل من تلك الاقترانات تحتوي على سكريات متعددة

تخص الكبسولة مشتقة من ستربتوكوكس بنيومونيا من أنواع مصلية مختلفة تقترن مع بروتين حامل؛ وحيث يتم تحضير السكريات المتعددة الخاصة بالكبسولة من الأنواع المصلية 1. 2؛ 3 ؛ 4 ‎<9V « TF 68 « 6A «5‏ 4ك 80 لذو 198 و2385 . ولكي يتم إيجاد طريقة لتحسين النشاط المناعي للقاح الخاص ببكتيريا المكورات الرتوية؛ فقد قام مخترعوا هذا الاختراع بمقارنة تفاعلي اقتران مثاليين» وهما الأمينة بالاختزال وإضافة السيانيد. ‎da,‏ لذلك؛ فقد تم التأكيد على أن طريقة إضافة السيانيد تكون أفضل من طريقة الأمينة بالاختزال على أساس إنتاجية الاقتران والوقت المطلوب للتفاعل. وعلى أساس ما سبق أن ذكرء فقد تم تنفيذ الاقتران الأمثل مع كل نوع مصلي باستخدام طريقة إضافة السيانيد؛ ‎lly‏ تختلف عن ‎Prevenar13®‏ إلى نفس الأنواع المصلية الثلاثة عشر المتطابقة ‎Prevenar13® (ie‏ والتي يكون 0 لها حاليا أعلى تغطية للأنواع المصلية. ونتيجة لذلك؛ فقد تم التأكيد على أن تركيز ‎IgG‏ الخاص بكل الأنواع المصلية في التركيب ذو 13 تكافؤ أو ذو 14 تكافؤ يكون أعلى من ذلك التركيز في ‎Prevenar13®‏ وفي حالة ‎sal‏ التكافؤ في التركيب المناعي متعدد التكافؤات؛ فإنه يمكن أن يحدث تداخل حراري بسبب زيادة التفاعلات بين المكونات ( ‎Dagan R et al. (2010) Vaccines,‏ ‎leg ¢(28(5513); Glycoconjugate vaccines and immune interference: A review‏ ذلك فإن الشخص ذو الخبرة العادية في هذا المجال يمكن أن يحتاج لجهود أكبر للضبط للمستوى الأمثل ويحسن النشاط المناعي الكلي في التركيب ذو 13 تكافؤ أو ذو 14 تكافؤ الخاص بهذا الاختراع. بالإضافة لذلك؛ فقد أضاف مخترعوا هذا الاختراع سلالة النوع المصلي 2 لزيادة مجال التغطية؛ وهو المجال الذي لا يمكن تغطيته باستخدام ‎Prevenar13®‏ وحيث أن التداخل المناعي الذي ينشط بتفاعل مكوناته في تركيب مناعي متعدد التكافؤات يمكن أن يزيد أيضاً بسبب إضافة نوع 0 مصلي واحد أو أكثر من النوع ‎Aad)‏ 2 فإن التحسن في النشاط المناعي في كل الأنواع المصلية الأريعة عشر الخاصة بهذا الاختراع مقارنة مع ‎Prevenarl3®‏ يمكن أن تعتبر نتيجة مدهشة. في هذا الاختراع؛ فإنه يكون للاقترانات تركيب والذي فيه يتم ريط السكر المتعدد الكابسولي والبروتين الحامل عن طريق مجموعة ‎eg .-O-C(NH)-NH-‏ ذلك؛ فإنه على أساس الاختلافات في التركيب عن اللقاح الاقتراني الذي يخص بكتيريا المكورات الرئوية ‎(PCV)‏ والذي يتم تحضيره 5 بطرق أخرى ‎ually‏ للمستوى الأمثل لطريقة الاقتران التفصيلية؛ فإن تركيب اللقاح ذو 13 تكافؤ أو ذو 14 تكافؤ الخاص بهذا الاختراع يمكن أن يعطي تركز مناعي ممتاز في كل الأنواع الفرعية

مقارنة مع تركيب اللقاح ذو 13 تكافؤ أو ذو 14 تكافؤ والذي يتم تحضيره بطريقة الأمينة بالاختزال السابقة الذكر. كما هو مستخدم هناء فإن المصطلح "التهاب رثوي ‎pneumonia‏ " يشير لمرض التهابي حاد في النسيج الإسفنجي للرئة؛ والذي يحدث أساسا بواسطة ستربتوكوكس بنيومونيا وكليبسيلا بنيومونيا. وعلى وجه الخصوص» فإن الالتهاب الرئوي الذي يحدث بسبب بكتيريا المكورات الرئوية يشكل حوالي 9650 من كل حالات الالتهاب ‎geil)‏ وأعراضه هي الشعور بالبرودة الشديدة؛ الحمى؛ الكحة؛ وألم الصدر. بالإضافة لذلك؛ فإنه من الممكن أن يكون هناك بلغم دموي؛ وبمكن أن تحدث مضاعفات مثل ذات الرئة؛ الالتهاب السحائي؛ التهاب بطانة القلب»؛ الالتهاب ‎(sind‏ إلى ‎sal‏ ‎Stein GE et al. (2001 Mar) Diagn.

Microbiol.

Infect, Dis 39:181-185; Comparative )‏ ‎serum bactericidal activity of clarithromycin and azithromycin against macrolide- 10‏ ‎(sensitive and resistant strains of Streptococcus pneumoniae.‏ كما هو مستخدم في هذا الاختراع» فإن المصطلح "بكتيريا المكورات الرئوية ‎pneumococcus‏ " يشير إلى ستريتوكوكس ‎(lisesi‏ وهو عبارة عن كائن متكافل يتجمع ويكون مستعمرات على أسطح الأغشية المخاطية لمنطقة الأنف والبلعوم للإنسان. وعندما تتسبب عوامل خاصة بالعائل 5 في وصول الكائن إلى ‎gall‏ السفلي من القناة التنفسية؛ فإن ذلك يتسبب في استجابة التهابية شديدة؛ مما يؤدي لملء الفراغات الموجودة في الحويصلات الهوائية بإفرازات؛ مما يؤدي لتنشيط الالتهاب الرئوي. تنتج بكتيريا المكورات الرثوية 90 او أكثر من السكريات المتعددة الفريدة على الكبسولة» ويتم تصنيف النوع المصلي من بكتيريا المكورات الرئوية تبعا للخصائص التركيبية والمناعية للسكريات المتعددة للكبسولة. وعلى ذلك؛ فإنه عند تحضير تركيب لقاح باستخدام 0 السكريات المتعددة لكبسولة بكتيريا المكورات الرئوية؛ فإن الاستجابة المناعية يمكن أن تختلف على حسب نوع السكريات المتعددة على الكبسولة؛ وهو النوع المصلي من بكتيريا المكورات الرئوية والذي منه يتم اشتقاق السكريات المتعددة للكبسولة. يمكن أن يتم على ‎day‏ الخصوص تحضير تركيب اللقاح الخاص بهذا الاختراع على ‎dag‏ الخصوص باستخدام 13 ‎lest‏ من البولي ببتيدات الكابسولية المشتقة من ستريتوكوكس بنيومونيا الأنواع المصلية 1 3 4 5« ‎(TF ١68 «6A‏ ‎18C 14,97 25‏ « 198 ء ‎23F 5 » 19F‏ . وبالإضافة لذلك؛ فإن تركيب اللقاح الخاص بهذا الاختراع يمكن أن يتم تحضيره على وجه الخصوص باستخدام 14 نوعا من البولي ببتيدات الخاصة

بالكبسولة والمشتقة من ستربتوكوكس بنيومونيا الأنواع المصلية ]2 3« 4 5 ‎(TF 68 «6A‏ ‎18C « 14 9V‏ « ذو ‎19F‏ « و235 . يتم تمييز السكربات المتعددة للكبسولة على أنها مستضد عند الإعطاء للجسم بحيث يمكن إنتاج جسم مضاد موجه ضد هذا المستضد؛ وعلى ذلك؛ فإنه يمكن تحضير تركيب اللقاح للوقاية من الالتهاب الرثوي. وكما هو مستخدم في هذا الاختراع» فإن المصطلح "مستضد” يشير إلى مادة والتي يمكن أن تنشط استجابة مناعية على وجه الخصوص عندما تدخل المادة على الجسم. وفي هذا الاختراع» فإن كل نوع من الأنواع الثلاثة عشر من البولي ببتيدات الخاصة بالكبسولة والمشتقة من ستريتوكوكس بنيومونيا الأنواع المصلية 1 3 4 5« ‎OV «TF 68 « 6A‏ 14 ¢ 180 هواء 198 » ‎23F5‏ يمكن أن تعمل كمستضد. ‎Lady‏ في هذا الاختراع» فإن كل من الأنواع 0 الأريعة عشر من البولي ببتيدات الخاصة بالكبسولة والمشتقة من ستريتوكوكس بنيومونيا الأنواع المصلية 1« 2 3 ¢ 4« 5« ‎6A‏ ء 68 » ‎19A » 18C « 14 97 « TF‏ « 198 » و2385 يمكن ان يمكن تحضير السكريات المتعددة الخاصة بالكبسولة بالتقنيات القياسية المعروفة للشخص ذو الخبرة العادية في هذا المجال؛ وطرق التحضير ليست محدودة بطرق معينة على ‎dag‏ الخصوص. 5 يمكن خفض حجم السكر المتعدد للكبسولة عن طريق التحلل المائي وذلك لخفض اللزوجة ولعمل تنشيط مناعي فعال. في تجسيم مثالي لهذا الاختراع» فقد تم تحلل كل من الأنواع المصلية الأريعة عشر المختلفة من ستريتوكوكس بنيوموتيا (01 2 3 4 5« ‎¢19F » 198 180 14 «OV «TF 68 « 6A‏ و ‎(23F‏ باستخدام ديوكسي كولات الصوديوم؛ وبعد ذلك فقد تم تحرير السكريات المتعددة المرتبطة 0 بالخلايا. وبعد ذلك؛ فقد تم تنقية 12 نوع مصلي التالية 0 3 3 4 5 ‎«6B «6A‏ أو 186 198 ء 198 ¢ و2387 عن طريق استخدام سيتيل ثالث مثيل أمونيوم بروميد ‎(CTAB)‏ ‏بسبب أن الأنواع المصلية لها القدرة على الارتباط الأيوني مع ‎(CTAB‏ وبعد ذلك فإن النوعين المصليين لا يتفاعلان مع ‎«CTAB‏ 77 و14 ؛ باستخدام محلول 1عع1م. عندما يتم تحضير تركيب لقاح باستخدام السكريات المتعددة الكابسولية فقط» فإن الجهاز المناعي 5 للرضع والأطفال الصغارء والذي يكون أضعف من الجهاز المناعي للبالغين» يمكن ألا يميزها

لمستضدات؛ ونتيجة لذلك» فإنه يمكن ألا تنشأ استجابة مناعية. وتبعا ‎(SUA‏ فقد تم تحضير اللقاح في صورة اقتران والذي فيه فقد تم اتحاد بروتين ‎dala‏ وسكر متعدد كابسولي؛ وتم استخدامه. كما هو مستخدم في هذا الاختراع؛ فإن المصطلح "بروتين ‎carrier protein dels‏ " يشير لبروتين والذي يمكن أن يقترن تساهميا مع سكر متعدد خاص بالكبسولة لزيادة النشاط المناعي لمستضد سكر متعدد؛ ولقد تم استخدام 0814197 كبروتين حامل في هذا الاختراع. يمكن أن يتم اقتران البروتين الحامل مع السكر المتعدد للكبسولة عن طريق الاقتران القياسي» ويمكن أن يكون الاقتران المتكون من السكر المتعدد-البروتين الحامل المتكون منه هو ذلك الذي فيه فإن هناك واحدة أو أكثر من السكريات المتعددة الكابسولية تقترن مع البروتين الحامل. كما هو مستخدم في هذا الاختراع؛ فإن المصطلح "0814197 " يشير على مغاير غير سام ‎Ged)‏ ‎(toxoid 0‏ لسم الدفتيريا المفصول من مزرعة كوربنوبكتيريوم ‎(Corynebacterium)‏ دفتبريا السلالة ‎C7‏ (0197). يمكن تنقية 0814197 بالترشيح الفائق» الترسيب بكبريتات الأمونيوم» وكروماتوجرافية التبادل الايوني. بالإضافة لذلك؛ فإنه ‎(Say‏ تحضير 0814197 بطريقة الهندسة الوراثية تبعا لما هو مذكور في البراءة الأمريكية رقم 5,614,382؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. يمكن تضمين أي من الطرق المعروفة لتحضير الاقتران المكون من السكر المتعدد الكبسولي- 5 البروتين الحامل في داخل مجال هذا الاختراع» ويكون للاقتران تركيب والذي فيه يتم ارتباط السكر المتعدد الكبسولي والبروتين الحامل عن طريق مجموعة ‎-O-C(NH)-NH-‏ باستخدام طريقة إضافة السيانيد. يمكن أن يتم تنفيذ طريقة إضافة السيانيد بواسطة الشخص ذو الخبرة العادية في هذا المجال بالطريقة المعروفة في هذا المجال؛ على سبيل المثال» فإن طريقة إضافة السيانيد يمكن أن تنفذ باستخدام 1-سيانو-4-ثاني مثيل أمينوبيريدينيوم رابع فلوروبورات ‎(CDAP)‏ أو ‎«CNBr‏ ولكن 0 ذلك على سبيل المثال وليس الحصر. كمثال لتحضير الاقتران المكون من السكر المتعدد الكابسولي-البروتين الحامل» فإن الاقتران السكري يمكن أن يتكون بالتنشيط الكيميائي للسكريات المتعددة الكبسولية المنقاة؛ مع إتباع ذلك باقتران كل من السكريات المتعددة الكبسولية المنشطة كيميائيا مع بروتين حامل. إن التشيط بإضافة السيانيد بسبب المعالجة بالمركب 1-سيانو-4-ثاني مثيل أمينو بيربدينيوم رابع فلوروبورات ‎(CDAP) 5‏ يمكن أن يعدل مجموعة الهيدروكسيل للبولي ببتيدة الكابسولية إلى مجموعة سيانات؛ ويمكن استخدام ذلك لتكوين رابطة تساهمية مع مجموعة الأمينو التي تخص 0811197؛ ‎As‏

‎Ble‏ عن بروتين حامل. يمكن تنفيذ تفاعل إضافة السيانيد بواسطة ‎CDAP‏ بأن يضاف على ‎dag‏ ‏الخصوص محلول جليسين بثلاث مكافئات مولارية بالنسبة ل0(/87 بمكافئ مولاري ‎aly‏ ويضبط الأس الهيدروجيني إلى 9؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. بالإضافة لذلك؛ فإن الشخص ذو الخبرة العادية في هذا المجال يمكن أن يضبط بصورة ملائمة محلول التفاعل وظروف التفاعل وفقا للهدف المطلوب. يمكن تنقية الاقتران الذي تم الحصول عليه المكون من السكر المتعدد الكابسولي-البروتين الحامل بالعديد من الطرق. وتتضمن الأمثلة على تلك الطرق طريقة التركيز /الترشيح ‎Shall‏ ‏كروماتوجرافية العمود؛ والترشيح متعدد الطبقات. يمكن أن يتم تجهيز الاقترانات المكونة من السكر المتعدد المنقى-البروتين إلى تركيب لقاح يخص هذا الاختراع» ‎(Sang‏ استخدامه. يمكن أن يتم تنفيذ 0 عملية تصبيغ تركيب اللقاح الخاص بهذا الاختراع باستخدام الطرق المعروفة في هذا المجال. ‎Olid‏ فإنه يمكن تحضير التركيب بواسطة عمل صيغ من كل من الأنواع الثلاثة عشر من الاقتران المكون من السكر المتعدد الكابسولي-البروتين الحامل مع حمال مقبول فسيولوجيا. إن المثال على هذا الحمال يمكن أن يكون ‎cold)‏ محلول ملح مضبوط الأس الهيدروجيني؛ بوليول (جليسرول؛ بروبيلين جليكول؛ بولي إثيلين جليكول سائل)؛ أو محلول دكستروز؛ وذلك على سبيل المثال وليس 5 الحصر. في التجسيم المثالي الخاص بهذا الاختراع؛ فقد تم تحضير 13 نوع من الاقترانات المكونة من السكر المتعدد الكابسولي-البروتين الحامل عن طريق 1) ذوبان والتحلل المائي للأنواع الثلاثة عشر من السكريات المتعددة الكابسولية» 2) طريقة تفاعل اقتران لكل من السكريات المتعددة الكابسولية والبروتين الحامل باستخدام 1-سيانو-4-ثاني ‎die‏ أمينوبيريدينيوم رابع فلوروبورات 0 (2©0طع)؛ 3) إنهاء لتفاعل الاقتران» 4)الترشيح الفائق؛ 5) الترشيح بالتعقيم» و6)الامتزاز. في تجسيم مثالي آخر يخص هذا الاختراع؛ فقد تم تحضير 14 نوعاً من الاقتران المكون من سكر متعدد كابسولي-بروتين حامل عن ‎Lgl )1 Gob‏ والتحلل المائي للأنواع الأريعة عشر من السكريات المتعددة الكابسولية» 2) تفاعل اقتران لكل من السكريات المتعددة الكابسولية والبروتين الحامل باستخدام 1-سيانو-4-ثاني مثيل أمينوبيريدينيوم رابع فلوروبورات ‎«(CDAP)‏ 3) إنهاء ‎OLY) Jeli 5‏ 4) الترشيح الفائق؛ 5) التعقيم والترشيح» و6) الامتزاز.

— 5 1 — كما هو مستخدم في هذا الاختراع؛» فإن المصطلح 'لقاح ‎vaccine‏ " يعني ‎sale‏ بيولوجية والتي تحتوي على مستضد والذي يستخدم في تحصين جسم ‎oa‏ وبذلك فإنه يعني منشط للمناعة أو مادة مستضدة ‎lly‏ تمد الجسم ‎all‏ بالمناعة بإعطاء هذا اللقاح للحيوان أو للإنسان لمنع الأمراض المعدية.

يمكن أن يحتوي تركيب اللقاح أيضاً على واحد على الأقل من مساعد؛ ‎sale‏ حافظة؛ محلول منظم؛ مركب للحماية من البرودة؛ ملح كاتيون ثتائى التكاف منظطف غير أيونى» ومثبط تأكسد لمنع التأكسد بواسطة الشقوق الحرة. كما هو مستخدم هناء فإن المصطلح ‎adjuvant de Lod‏ ' يشير لمادة والتي تعمل على زيادة النشاط المناعي للتركيب المنشط للمناعة الخاص بهذا الاختراع. يتم الإمداد بالمساعد في كثير من

0 الأحوال لتعزيز الاستجابة المناعية؛ ويكون معروف جيدا للشخص ذو الخبرة العادية في هذا المجال. يتضمن المساعد الملائم لتحسين تأثير تركيب اللقاح الخاص بهذا الاختراع» على سبيل المثال وليس الحصر: )1( أملاح الألمونيوم (الشب) مثل هيدروكسيد الألمونيوم» فوسفات الألمونيوم؛ كبريتات الالمونيوم؛ إلى آخره؛

5 (2) تركيب مستحلب زبت في ماء (مع أو بدون عوامل التنشيط المناعي المعينة الأخرى مثل ببتيدات الموراميل (كما هو معرف فيما بعد) أو مكونات الجدار الخلوي البكتيري)؛ والتي تتضمن ‎(WO 90/14837) MF59 (1)‏ تحتوي على 965 سكوالين» 960.5 توين 80؛ %0.55 85 ‎Span‏ ‏(تحتوي اختياريا على العديد من كميات ‎MTP-PE‏ (أنظر فيما بعد؛ على الرغم من أن ذلك ليس مطلويا)؛ تجهز في صورة جسيمات بأحجام أقل من الميكرون باستخدام وحدة تميع دقيقة ‎ie‏ وحدة

0 التميع 1107 ‎¢(Microfluidics, Newton, Mass.) Model‏ (ب) ‎SAF‏ يحتوي على 7010 سكوالين» 960.4 توين 80 %5 بوليمر مغلق بالبلورونيك ‎thr-MDP 5 «L121‏ (أنظر ‎gall‏ ‏التالي)؛ إما متميع تميع دقيق إلى مستحلب بأحجام أقل من الميكرون أو تم تدويرها ‎lel‏ مستحلب بأحجام جسيمات أكبر ؛ و(ج) نظام مساعد ‎(Corixa, Hamilton, Mont.) (RAS) Ribi™‏ يحتوي على 962 سكوالين» 960.2 توين 80؛ وواحدة أو أكثر من مكونات الجدار الخلوي يتم اختيارها من

5 المجموعة التي تتكون من 0-3©-أول فوسفوريل دهن ‎A‏ مزال ‎die‏ الأسيتيل ‎(MPL™)‏ الموصوف

— 6 1 — في البراءة الأمريكية رقم 4,912,094 ‎o(Corixa)‏ تريهالوز دايميكولات ‎(TDM)‏ وهيكل الجدار

الخلوي (01775)؛ ويبفضل ‎¢(Detox™) MPL+CWS‏ )3( مساعدات صابونين ‎Quil A Jie‏ أو 058-21 ‎Antigenics, ( STIMULON™‏ ‎(Framingham, Mass.‏ (البراءة الأمريكية رقم 5,057,540) أو الجسيمات المتولدة منها ‎Jie‏

‎ISCOMs 5‏ (المركبات المعقدة المنشطة للمناعة)؛

‏)4( الليبوبولي سكريات البكتيرية؛ مناظرات الدهن ‎A‏ مثل مركبات أمينوألكيل جلوكوزامين فوسفات ‎(AGP)‏ أو مشتقات منها أو مناظرات لهاء ‎Ally‏ تكون متاحة من ‎Corixa‏ والتي توصف في البراءة الأمريكية رقم 6,113,918؛ إن واحدة من ‎AGP‏ تكون 2-[(8)-3-رابع ديكانويل أوكسي رابع ديكانويل امينو] ‎Jal‏ -2- ديوكسي -2-0-4- ديوكسي -0-4)- فوسفانو-0-3)- ‎—(R)]‏

‏0 3- رابع ديكانويل أوكسي رابع ديكانيول]-2[()-3-رابع ديكانويل أوكسي رابع ديكانويل أمينو] - ‎-D-b‏ جلوكوبيرانوسيد ¢ والمعروف أيضاً بأاسم 529 (كان معروف سابق بالاسم ‎(RC529‏ ¢ والذي يجهز في صورة مائية أو كمستحلب ثابت؛

‏)5( بولي نيوكليوتيدات مخلقة ‎Jie‏ أوليجونيوكليوتيدات تحتوي على شقات ‎CpG‏ (البراءة الأمريكية رقم 6,207,646(

‏15 )6( سيتوكاينات» مثل الإنترلوكينات (مثل الل هل تمتل معتل ضملك معتل هل 12« 11-15 ,11-18 « إلى آخره)؛ الإنترفيرونات (مثل جاما إنترفيرون)»؛ عامل تنشيط مستعمرة كرات الدم البيضاء الكبيرة الحبيبية ‎(GM-CSF)‏ عامل تنشيط مستعمرة كرات الدم البيضاء الكبيرة (577©-84)؛ عامل تنكرز الأورام ‎(TNF)‏ الجزيئات المنشطة المصاحبة ‎B7-1‏ و37-2؛ إلى آخره؛

‏0 (7) الطفرات المزال منها السموم ‎aud‏ إضافة ‎ADP‏ -رببوزيل ‎Jie‏ سم الكوليرا (07) إما في الصورة البرية أو فى صورة طفرة؛ على سبيل المثال» حيث يتم استبدال حمض الجلوتاميك في موضع الحمض الأميني 29 بحمض أميني ‎AT‏ وبخاصة الهيستيدين» تبعا للبراءة الدولية 4 70 (أنظر ‎Lead‏ البراءة الدولية | 02/098368 ‎WO‏ والبراءة الدولية ‎«(WO 02/098369‏ سم السعال الديكي ‎(PT)‏ أو سم كولاي الحساس للحرارة ‎(LT)‏ وبخاصة

‎LT-R72 LT-K63 5‏ « 5109لا ء 93/113302 10 1-19/0129ط و ‎{WO 92/19265‏ و

— 7 1 — )8( مكونات المكمل مثل ترايمر مكون المكون ‎3d‏ ‏ببتيدات ميوراميل والتي يمكن أن تتضمن على سبيل المثال وليس الحصر» 14- أسيتيل-ميوراميل- 1 -ثريونيا-10- أيزوجلوتامين ‎(the-MDP)‏ و11 - أسيتيل-تورميوراميل-.1-ألانين 2 )1 =2 = ثاني بالميتويل-سن-جليسرو-3-هيدروكسي فوسفوريل أوكسي)-إثيل أمين ‎(MTP-PE)‏

يمكن أن يكون المساعد الذي هو عبارة عن ملح المونيوم عبارة عن لقاح مترسب بالشب أو لقاح ممتز بالشب. يمكن أن تتضمن أملاح الشب ألومينا متميئة؛ هيدرات ألوميناء ثالث هيدرات الوميئا ‎(ATH)‏ هيدرات المونيوم؛ ثالث هيدرات ألمونيوم؛ الهيدروجل؛ سويرفوس؛ أمفوجيل؛ هيدروكسيد ألمونيوم» المونيوم هيدروكسي فوسفات كبريتات (مساعد ألمونيوم فوسفات ‎(((APA)‏ الومينا امورفية؛ إلى ‎al‏ وذلك على سبيل ‎JE‏ وليس الحصر. هرطخ تشير على معلق من

0 هيدروكسي فوسفات الالمونيوم. وإذا تم خلط كلوريد الالمونيوم مع فوسفات الصوديوم بنسبة 1:1؛ فإنه يحدث ترسيب للألمونيوم هيدروكسي فوسفات كبريتات. يتم ضبط أحجام الراسب إلى 2 ميكرون إلى 8 ميكرون باستخدام خلاط عالي القص وبتم الديلزة بمحلول ملح فسيولوجي؛ مع إتباع ذلك بالتعقيم. وفي أحد التجسيمات؛ ‎of‏ و(21)011 المتاح ‎Was‏ (على سبيل ‎(Jal‏ ‏الهيدروجل أو سويرفوس) يستخدم لامتزاز البروتينات. يمكن أمتزاز البروتين (من 50 جرام إلى

5 200 جرام) لكل 1 مليجرام من هيدروكسيد الالمونيوم؛ وتلك النسبة تعتمد على نقطة التعادل الكهربي ‎(pI)‏ للبروتينات ‎dads‏ الأس_ الهيدروجيني للمذييات. إن البروتينات ا ذات ‎PI deg‏ المنخفضة يتم امتزازها بقوة مقارنة مع البروتينات ذات قيمة 1م العالية. يمكن أن تعمل أملاح الألمونيوم على تكوين مخزن مستضدات والذي يطلق ببطئ المستضدات خلال أسبوعين أو ثلاث أسابيع» ‎lg‏ فإنه ينشط بصورة غير معينة الخلايا اللاقمة؛ المكملات؛ والآلية المناعية الفطرية.

0 كما هو مستخدم ‎lia‏ فإن المصطلح ‎sald’‏ حافظة ‎preservative‏ " يشير على ‎Bale‏ مضادة للفيروسات و/أو مضادة للميكرويات؛ والتي تثبط نمو الكائنات الدقيقة في تركيب لقاح. ‎liad‏ فإن المادة الحافظة يمكن أن تكون ثيميرسال» 2-فينوكسى إيثانول؛ فورمالدهيد؛ أو مخاليط منهاء وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. بالإضافة لذلك؛ فإنه يمكن استخدام كل المواد الحافظة التقليدية. بالإضافة ‎(lI‏ فإن تركيب اللقاح يمكن أن يتضمن واحد أو أكثر من المحاليل المنظمة المقبولة

5 فسيولوجيا. فمثلا؛ إذا كان تركيب اللقاح عبارة عن تركيب للإعطاء أو للحقن؛ فإن المحلول المنظم يمكن أن يكون بسعة محلول منظم عند ‎dad‏ اس هيدروجيني تتراوح من 4 إلى 10 وعلى ‎dag‏

الخصوص عند ‎dad‏ اس هيدروجيني تتراوح من 5 إلى 9؛ والأكثر اختصاصا عند قيمة اس هيدروجيني تتراوح من 6 على 8. يمكن أن يتم اختيار المحلول المنظم من المجموعة لتي تتكون من ‎(TRIS‏ خلات؛ جلوتامات» لاكتات؛ ماليات» طرطرات؛ ‎(lig (hin (lig‏ جليسينات؛ هيستيدين؛ جليسين؛ سكسينات؛ وثالث إيثانولامين.

على ‎day‏ الخصوص»؛ إذا كان تركيب اللقاح لهذا الاختراع للإعطاء عن طريق الحقن؛ فإن المحلول المنظم يمكن أن يتم اختياره من تلك المحاليل المنظمة المقبولة في دستور الأدوية الأمريكي ‎(USP) United States Pharmacopeia‏ على سبيل المثال؛ فإنه يمكن اختيار المحلول المنظم من المجموعة التي تتكون من حمض أحادي القاعدية ‎Jie‏ حمض خليك؛ حمض بنزويك؛ حمض جلوكونيك؛ حمض جلسريك؛ وحمض لاكتيك؛ وحمض ثنائي القاعدية ‎Jie‏ حمض

اكونيتيك» حمض أديبيك» حمض اسكروييك؛ حمض كريونيك» حمض جلوتاميك؛ حمض ماليك؛ حمض سكسينيك» حمض طرطريك؛ حمض متعدد القواعد ‎Jie‏ حمض ستربك وحمض فوسفوريك؛ وقاعدة مثل أمونياء ثاني إيثانول أمين؛ جليسين» ثالث إيثانول أمين» 5 ‎TRIS‏ . بالإضافة ‎lll‏ فإن تركيب اللقاح لهذا الاختراع يمكن أن يتضمن منظف غير أيوني. فمثلا؛ فإن تركيب اللقاح الخاص بهذا الاختراع يمكن أن يتضمن بولي أوكسي إثيلين سوربيتان إستر (والذي

5 يشار إليه عامة بالاسم توين)؛ وعلى ‎dag‏ الخصوص» بولي سوريات 20 وبولي سوربات 60؛ كوبوليمرات ‎(DOWFAXTM (i)‏ لإثيلين أكسيد ‎(BO)‏ بروبيلين أكسيد (20)؛ وبيوتيلين أكسيد ‎(BO)‏ أوكتوزبلينات بعدد مختلف من التكرارات لمجموعة إيثوكسي ‎d= Sl)‏ 2-إيثان داييل)؛ على ‎dng‏ الخصوص, أوكتوأوكسينول-9 (ترايتون *-100)؛ إثيل فينوكسي بولي إيثوكسي إيثانول ‎((IGEPAL CA-630/NP-40)‏ فوسفولبيدات ‎Jie‏ ليسيثين؛ نونيل فينول إيثوكسيلات

مثل السلسلة ‎(dap NP‏ سيتيل» ستياريل؛ اوليل بولي اوكسي ‎(bd‏ حمض دهني ‎Fie‏ من الكحول (منشط السطح بريج)؛ وعلى ‎dag‏ الخصوص؛ ثالث إثيلين جليكول أول لاوريل إثير ‎Brij}‏ ‏0) ومنشطات ‎Jie sland]‏ سورييتان إثير المعروفة باسم ‎ley (SPAN‏ وجه الخصوص؛ ‎Glug.‏ ثالث أوليات )85 ‎(Span‏ وسوربيتان أول لاورات؛ وذلك على سبيل ‎JE‏ وليس الحصر. يمكن أن يتم تضمين توين 80 في المستحلب؛ ويمكن أيضاً استخدام مخاليط من

5 المنظفات غير الايونية مثل 85 ‎Tween 80/Span‏ من الملائم ‎Lad‏ استخدام اتحاد من بولي أوكسي إثيلين سوربيتان إستر ‎ie‏ توين 80 وأوكتوكسينول ‎Jie‏ ترايتون *-100 تكون ملائمة أيضاً. هناك اتحاد من لاوريث 9 وتوين و/أو أوكتوكسينول تكون أيضاً ملائمة. وعلى وجه

الخصوص؛ فإن كمية بولي أوكسي إثيلين سوربيتان إستر ‎Jie)‏ توين 80) التي يتم تضمينها يمكن أن تتراوح من 960.01 إلى 9061 (وزن/حجم)؛ ‎dng og‏ الخصوص 960.1؛ وكمية أوكتيل فينوكسي بولي أوكسي إيثانول أو نونيل فينوكسي بولي اوكسي إيثانول (مثل ترايتون ‎(100-X‏ ‏التي يتم تضمينها يمكن أن تتراوح من 960.001 إلى 960.1 (وزن/حجم)؛ ‎eg‏ وجه الخصوص من 960.005 إلى 960.02؛ وكمية بولي أوكسي إثيلين إثير (مثل لاوريث 9) التي يتم تضمينها يمكن أن تتراوح من 960.1 إلى 9620 (وزن/حجم)؛ ومن الممكن أن تتراوح من 960.1 إلى 9610؛ وعلى وجه الخصوص من 960.1 إلى 961 أو حوالي 960.5. يمكن تجهيز تركيب هذا الاختراع في صورة قارورة تحتوي على جرعة واحدة» أو قارورة تحتوي على عدة جرعات؛ أو محقن سبق ملؤه؛ ‎(Sarg‏ أن يتضمن التركيب أيضاً مادة حاملة مقبولة فيزبائيا. 0 ولمادة الحاملة المقبولة صيدليا التي تستخدم في التركيب السائل تتضمن ‎cube‏ معلق؛ مستحلب؛ أو زبت مائي أو غير مائي. والأمثلة على المذيب غير المائي تتضمن بروبيلين جليكول ؛ بولي إثيلين جليكول؛ وإثيل اوليات. والمواد الحاملة المائية تتضمن الماء؛ مذيب كحولي/مائي» مستحلب؛ أو معلق؛ محلول ملح فسيولوجي؛ ومحلول منظم. والأمثلة على الزيت تتضمن زيت نباتي أو حيواني؛ ‎cu)‏ جوز الهند؛ زيت الفول الصوياء زيت الزيتون؛ ‎cu‏ دوار الشمس؛ زيت الكبد؛ زيت 5 مخلق ‎Jie‏ زيت بحري؛ والدهون التي تم الحصول عليها من الحليب أو البيض. يمكن أن يكون تركيب اللقاح الخاص بهذا الاختراع مشابه الأسموزية؛ زائد الأسموزية؛ أو منخفض الأسموزية. وعلى أي ‎(Js‏ فإنه يفضل أن التركيب الصيدلي للإعطاء أو للحقن يكون أساسا مشابه الأسموزية؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. وفي نفس الوقت؛ فإن التشابه الأسموزي أو الأسموزية الزائدة يمكن أن يكون على سبيل التفضيل لتخزين التركيب. وعندما يكون التركيب 0 الصيدلي زائد الأسموزية؛ فإن التركيب يمكن أن يخفف إلى مستوى التشابه الأسموزي قبل الإعطاء. يمكن أن يكون عامل تشابه الأسموزية للتخفيف يمكن أن يكون عامل أيوني لضبط الأسموزية ‎Jie‏ ملح أو عامل ضبط مستوى الأسموزية غير أيوني مثل كربوهيدرات. يتضمن العامل الأسموزي الايوني كلوريد صوديوم؛ كلوريد ماغنيسيوم؛ إلى آخره؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. يتضمن العامل غير الأيوني لضبط الضغط الأسموزي سوربيتول؛ جليسرول؛ إلى آخره؛ 5 وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. ‎(Sa‏ اختيار الاقتران في كل جرعة من جرعات اللقاح بكمية والتي تضمن استجابة حماية مناعية بدون أعراض جانبية شديدة؛ وتلك الكمية يمكن أن تختلف على حسب النوع المصلي لبكتيريا

المكورات الرثوية. ‎og‏ وجه الخصوص؛ في تركيب اللقاح؛ بالنسبة للسكر المتعدد الكابسولي المشتق من النوع المصلي 1؛ فإن كل نوع من أنواع السكريات المتعددة المشتقة من الأنواع المصلية 3» 4 » 5 ¢ ‎19A » 18C » 14 » 917 » 7 » 6A‏ ¢ 197 » و2377 يمكن أن يكون لها نسبة محتوى من 0.9 إلى 1.1؛ ‎Sug‏ متعدد خاص بالكبسولة مشتق من النوع المصلي ‎6B‏ ‏5 يمكن أن يكون بنسبة محتوى من 1.8 إلى 2.2؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. بالإضافة لذلك؛ في تركيب اللقاح, فإن السكر المتعدد الكبسولي المشتق من النوع المصلي 2 يمكن أن يكون بنسبة محتوى من 0.9 إلى 1.1 بالنسبة للسكر المتعدد الكبسولي المشتق من النوع المصلي 1؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. كمثال لتحضير الاقتران» فإن كل اقتران يمكن أن يحتوي على كمية من 0.1 ميكروجرام إلى 100 0 ميكروجرام؛ وعلى ‎dng‏ الخصوص من 0.1 ميكروجرام إلى 10 ميكروجرام؛ ‎og‏ الأخص من 1 ميكروجرام إلى 5 ميكروجرام من السكريات المتعددة. وعلى الأخص؛ فإنه بالإضافة إلى السكر المتعدد الخاص بالكبسولة المشتق من الأنواع المصلية 1( 3 4 ذم ‎¢9V 1 ¢ 6A‏ 14 ©18؛ ‎19F ¢ 19A‏ ¢ و2377 يمكن أن يحتوي على 2.2 ميكروجرام؛ والسكر المتعدد الكبسولي المشتق من النوع المصلي 613 يمكن أن يحتوي على 4.4 ميكروجرام؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. وفي تلك الحالة؛ فإن البروتين 0181197 في التركيب يمكن أن يحتوي على 0.1 ميكروجرام إلى 100 ميكروجرام؛ وعلى وجه الخصوص من 1 ميكروجرام إلى 50 ميكروجرام؛ ‎eg‏ الأخص من 28 ميكروجرام إلى 31 ميكروجرام» وعلى الأخص 29.3 ميكروجرام»؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. والكميات المثلى من المكونات للقاح معين يمكن أن تحدد بالدراسات القياسية ‎Ally‏ تتضمن ملاحظة الاستجابة المناعية الملائمة للأشخاص. فمثلاء فإن 0 كمية اللقاح للإنسان يمكن أن تحدد باستقراء نتائج الاختبارات على الحيوانات. بالإضافة لذلك؛ فإن الشخص ذو الخبرة العادية في هذا المجال يمكن أن يحدد بصورة تجريبية الجرعة؛ في حالة الضرورة. يمكن أن يتضمن تركيب اللقاح أيضاً كلوريد ألمونيوم وكلوريد صوديوم؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. ‎Lady‏ فإن تركيب اللقاح يمكن أن يحتوي على أو لا يحتوي على مادة حافظة 5 على حسب الهدف والاستخدام.

يمكن استخدام تركيب اللقاح تبعا لهذا الاختراع لحماية الأشخاص الذين هم عرضة للعدوى ببكتيريا المكورات الرئوية ولمنع أمراض الالتهاب ‎gill‏ بإعطاء كمية فعالة ‎Was‏ بالحقن أو على الأغشية المخاطية. وكما هو مستخدم في هذا الاختراع» فإن المصطلح ‎"ES‏ يشير لكل العمليات التي تثبط او تبطئ العدوى التي تحدث بسبب أمراض بكتيريا المكورات ‎gil‏ بإعطاء تركيب اللقاح الخاص بهذا الاختراع. إن الكمية الفعالة علاجيا المعرفة في هذا الاختراع تشير للجرعة المطلوية لتنشيط تكوين الأجسام المضادة للمستوى الذي به ‎(Sa‏ خفض فرصة العدوى بالالتهاب الرئوي أو خطورة العدوى. وكما هو مستخدم في هذا الاختراع؛ فإن المصطلح "إعطاء" يشير لإدخال المادة المحددة مسبقا إلى الشخص باي طريقة ملائمة. يمكن إعطاء تركيب اللقاح الخاص بهذا الاختراع عن طريق الفم؛ الأنف؛ المستقيم؛ عبر الجلد؛ أو بالاستنشاق باستخدام رشاشة؛ او 0 بدلا من ذلك»؛ فإن تركيب اللقاح يمكن أن يتم إعطاؤه مرة واحدة أو يمكن أن يتم الحقن ببطيء؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. يمكن أن يتضمن الإعطاء الحقن في العضل؛ في الغشاء البربتوني؛ في الجلدء أو تحت الجلد؛ أو الإعطاء في الأغشية المخاطية عن طريق الفم/القناة الهضمية؛ الجهاز التنفسيء أو القناة البولية التناسلية. وفي أحد التجسيمات؛ يتم الإعطاء في الأنف لعلاج الالتهاب ‎gill‏ أو التهاب الأذن الوسطى. وفي تلك الحالة؛ فإنه يمكن بصورة فعالة منع 5 حمل بكتيريا المكورات الرئوية؛ ويذلك يتم تخفيف العدوى في مراحلها الإبتدائية. كما هو مستخدم في هذا الاختراع» فإن المصطلح 'شخص” يشير للكائنات الحية التي يمكن أن تعدى بمسببات الأمراض؛ وبشير على ‎dag‏ الخصوص للفقاريات العلياء وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. في تجسيم آخر يخص هذا الاختراع؛ فإن تركيب هذا الاختراع يمكن أن يتم إعطاؤه مرة واحدة؛ أو 0 يمكن أن يتم إعطاؤه عدد 2 3؛ 4 مرات أو أكثر على فترات متباعدة بصورة ملائمة؛ وذلك على سبيل المثال وليس الحصر. فمثلا؛ فإن النظام الروتيني للأطفال والرضع ضد الأمراض الغزوية التي تحدث بواسطة ستريتوكوكس بنيومونيا يمكن أن تكون عند 2 ‎ed‏ 6»؛ و12 إلى 15 شهراً من السن. بالإضافة لذلك؛ فإن التركيب يمكن أن يتضمن ‎Lad‏ بروتين واحد أو أكثر يتم اشتقاقه من 5 متريتوكوكس بنيومونيا. والأمثلة على بروتينات ستريتوكوكس بنيومونيا الملائمة للإعطاء في التركيب تتضمن تلك المعرفة في طلب البراءة الدولية رقم 2002/053761 ‎(WO‏ بالإضافة لتلك

المذكورة في طلب البراءة الدولية رقم 2002/083855 170؛ وتلك البروتينات يمكن أيضاً أن يتم

تضمينها في داخل مجال هذا الاختراع.

في تجسيم مثالي لهذا الاختراع» فقد تم تحضير تركيب اللقاح ذو 13 تكافؤ (الذي يسمى

77) لمنع الأمراض ‎gill‏ في كمية كلية 0.5 مل؛ وخلط 2.2 ميكروجرام من كل مكر متعدد؛ فيما عدا 4.4 ميكروجرام من 63؛ حوالي 29.3 ميكروجرام من البروتين الحامل

7 :))؛+؛ 0.5 مليجرام من عنصر الالمونيوم )2 مليجرام من فوسفات الألمونيوم) كمساعد؛

حوالي 4.25 مليجرام من كلوريد الصوديوم (مع مادة حافظة) أو حوالي 3.5 مليجرام من كلوريد

الصوديوم (بدون مادة حافظة)؛ حوالي 295 ميكروجرام من محلول السكسينات المنظم؛ وحوالي 3

مليجرام من 2-فينوكسي إيثانول وحوالي 60 ميكروجرام من فورمالدهيد (مع مادة حافظة).

0 في تجسيم مثالي ‎AT‏ لهذا ‎pla)‏ فقد تم تحضير تركيب اللقاح ذو 14 تكافؤ (الذي يسمى 8747)) لمنع الأمراض الرئوية؛ في كمية كلية 0.5 مل؛ وخلط 2.2 ميكروجرام من كل ‎Su‏ متعدد؛ ‎Lad‏ عدا 4.4 ميكروجرام من 6[3؛ حوالي 31 ميكروجرام من البروتين الحامل 7 :))؛+؛ 0.5 مليجرام من عنصر الالمونيوم )2 مليجرام من فوسفات الألمونيوم) كمساعد؛ حوالي 4.25 مليجرام من كلوريد الصوديوم (مع مادة حافظة) أو حوالي 3.5 مليجرام من كلوريد

5 الصوديوم (بدون مادة حافظة)؛ حوالي 295 ميكروجرام من محلول السكسينات المنظم؛ وحوالي 3 مليجرام من 2-فينوكسي إيثانول وحوالي 60 ميكروجرام من فورمالدهيد (مع مادة حافظة). في تجسيم ‎Je‏ آخر يخص هذا الاختراع؛ فقد تم التأكيد على انه بالنسبة لمصل الأرنب المحصن بتركيبات اللقاح الخاصة بهذا الاختراع؛ فإن تركيز 150 الموجه ضد النوع المصلي كان أعلى من تركيزه عند إعطاء ‎Prevenarl13®‏ (جدول 1أ وجدول 1ب). بالإضافة لذلك؛ فإن تحليل الالتقام

0 الاوبسوني ‎(OPA)‏ قد أكد أيضاً على أن تركيب اللقاح الخاص بهذا الاختراع كان بمستويات أعلى من الأجسام المضادة الوظيفية مقارنة مع ‎Prevenarl3®‏ (جدول 12 وجدول 2ب). وتبعا لذلك؛ فإنه يمكن ‎gall‏ بشدة أن تركيبات اللقاح الخاصة بهذا الاختراع يكون لها تأثير كبير للوقاية من أمراض الالتهاب الرئوي. هناك مظهر آخر لهذا الاختراع يكون عبارة عن تركيب منشط مناعي موجه ضد بكتيريا المكورات

5 الرئوية؛ والتي تحتوي على 13 نوعا أو 14 نوعا من الاقترانات المكونة من السكر المتعدد الخاص بالكبسولة وبروتين حامل.

إن الأنواع الثلاثة عشر أو الأنواع الأريعة عشر من الاقترانات ويكتيريا المكورات الرئوية هي نفس

تلك السابقة الذكر . يحتوي تركيب هذا الاختراع» والذي يحتوي على 13 نوعا من ‎DUE‏ تحتوى على السكر المتعدد — البروتين الحامل ؛ تحتوي على السكر المتعدد الخاص بالكبسولة والمشتق من ستريتوكوكس ‎Wes 5‏ بعدد 13 نوعا مختلفا من الأنواع المصلية. بالإضافة لذلك؛ عند إعطاء التركيب في الجسم؛ فإنه يميز على أنه مستضد وبسبب استجابة مناعية بحيث ينتج جسم مضاد موجه ضد هذا المستضد. وتبعا ‎oll‏ فإن تركيب هذا الاختراع يمكن أن يستخدم كتركيب ‎elie‏ ضد بكتيريا

المكورات الرثوية. لا يزال هناك مظهر آخر لهذا الاختراع وهو عبارة عن طريقة لمنع الأمراض التي تحدث بسبب

0 بكتيريا المكورات الرئوية وذلك بإعطاء تركيب لقاح أو التركيب المناعي للشخص الذي بحاجة لهذا العلاج. لا يزال هناك مظهر آخر لهذا الاختراع وهو إعداد طريقة لاستخدام مستحضر تركيب لقاح لمنع الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات الرثوية؛ ‎Ally‏ تحتوي على 13 نوعا من الاقترانات المكونة من سكر متعدد كابسولي-بروتين ‎dala‏ حيث أنه في الأنواع ‎EN‏ عشر من الاقترانات» فإن كل

5 .من الأنواع ‎ADEN‏ عشر من السكريات المتعددة الكابسولية المشتقة من ستريتوكوكس بنيومونيا الأنواع المصلية 1» 3 » 4« 5 » ‎19F » 198 » 180 » 14 » 9177 » TF » 6A‏ « و2317 تقترن تساهميا من بروتين حامل؛ ويكون البروتين الحامل هو بروتين 0111197؛ وكل من الاقترانات يكون لها تركيب والذي فيه فإن كل من السكريات المتعددة الكابسولية والبروتين الحامل تترابط عن طريق المجموعة ‎-O-C(NH)-NH-‏ باستخدام طريقة إضافة السيانيد.

0 لا يزال هناك مظهر آخر لهذا الاختراع وهو إعداد طريقة لاستخدام مستحضر تركيب لقاح لمنع الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات الرثوية؛ ‎Ally‏ تحتوي على 14 نوعا من الاقترانات المكونة من سكر متعدد كابسولي-بروتين حامل؛ حيث أنه في الأنواع الأريعة عشر من الاقترانات؛ فإن كل من الأنواع الأربعة عشر من السكريات المتعددة الكبسولية المشتقة من ستربتوكوكس بنيومونيا الأنواع المصلية 1« 2 3 2 4 ¢ 5 ‎19A ¢ 18C +14 ¢9V ¢ TF ¢ 6A‏ ¢ 19+ و

237تقترن تساهميا من بروتين حامل؛ ويكون البروتين الحامل هو بروتين 0141197؛ وكل من

— 2 4 —

الاقترانات يكون لها تركيب والذي فيه فإن كل من السكريات المتعددة الكبسولية والبروتين الحامل

تترابط عن طريق المجموعة ‎-O-C(NH)-NH-‏ باستخدام طريقة إضافة السيانيد.

يكون تركيب اللقاح» تركيب المنشط المناعي؛ ومنع أمراض الالتهاب الرئوي كما سبق أن ذكر.

لا يزال هناك مظهر ‎AT‏ لهذا الاختراع وهو عبارة عن طريقة لتحضير تركيب منشط مناعي؛ يحتوي على خطوة اقتران كل من الأنواع الثلاثة عشر من ‎lull‏ المتعددة الكبسولية المفصولة

المشتقة من ستريتوكوكس بنيومونيا الأنواع المصلية ل 3 4 5« ‎<OV «TF «6A‏ 14

‎19A «18C‏ ء ‎19F‏ « و23 مع ‎«CRM197‏ وهو بروتين ‎(dela‏ باستخدام طريقة إضافة

‏السيانيد بحيث أن السكر المتعدد الكبسولي والبروتين الحامل يكونان تركيب والذي يترابط عن

‏طريق مجموعة ‎-O-C(NH)-NH-‏ .

‏0 لا ‎Jin‏ هناك مظهر ‎AT‏ لهذا الاختراع وهو عبارة عن طريقة لتحضير تركيب منشط مناعي؛ يحتوي على خطوة اقتران كل من الأنواع الأريعة عشر من السكريات المتعددة الكبسولية المفصولة المشتقة من ستربتوكوكس بنيومونيا الأنواع المصلية 01 2 3 4 5 ذف ‎1٠‏ ا 14 ‎19A «18C‏ ء ‎19F‏ « و23 مع ‎«CRM197‏ وهو بروتين ‎(dela‏ باستخدام طريقة إضافة السيانيد بحيث أن السكر المتعدد الكابسولي والبروتين الحامل يكونان تركيب والذي يترابط عن

‏5 طريق مجموعة -0-00111-1111- . يتم وصف تركيب المنشط المناعى وطريقة التحضير كما سبق أن ذكر . [التأثيرات المفضلة] تحتوي التركيبات تبعا لهذا الاختراع على سكريات متعددة كبسولية مشتقة من ستريتوكوكس بنيومونيا بعدد 13 نوع مصلي مختلف؛ او يحتوي ‎Lad‏ على سكر متعدد كابسولي مشتق من

‏0 متريتوكوكس بنيومونيا النوع المصلي 2 حيث أن كل من تلك السكريات المتعددة الكبسولية تقترن مع ‎«CCRMI197‏ وهو عبارة عن بروتين ‎(dela‏ باستخدام طريقة إضافة السيانيد؛ ويؤدي ذلك لرفع مستوى 150 الموجه ضدها ونشاط للجسم المضاد الوظيفي. وعلى ‎ld‏ فإن تركيب اللقاح والتركيب المناعي تبعا لهذا الاختراع يمكن ان يستخدم على سبيل التفضيل لمنع الأمراض التي تسببها بكتيريا المكورات الرئوية في الرضع؛ الأطفال الصغار والبالغين.

‏5 الوصف التفصيلى:

‎Lad‏ يلي فسوف يتم ‎Chay‏ هذا الاختراع بالتفصيل باستخدام التجسيمات المثالية المصاحبة الموضحة هنا وذلك بهدف التوضيح فقط ولا يجب أن تعتبر محددة لمجال هذا الاختراع. مثال 1: تحضير السكر المتعدد الخاص بكبسولة ستريتوكوكس بنيومونيا 1-1 تحضير بنك الخلايا تم فرد سلالات ستريتوكوكس بنيومونيا على وسط ‎lal‏ دموي لفصل مستعمرة واحدة. وبعد اختيار مستعمرة واحدة بمعدل نمو جيد من بين 10 أو أكثر منهاء فقد تم تحصين المستعمرة بعد ذلك وتم زرعها في وسط ‎(Bile‏ والذي لا يحتوي على أي مكونات مشتقة من حيوانات؛ ولقد تم تعيين بنك خلايا بحثية ‎(RCB)‏ بإنشاء مخزون من الجليسرول. تم أخذ قارورة واحدة من بنك الخلايا البحثية؛ والتي تم التأكد من أنها تنتج بالتعبير الجيني سكريات 0 متعددة من النوع المصلي المطلوب؛ ويعد ذلك تم تكاثر الخلايا في وسط سائل لا يحتوي على أي مكونات مشتقة من حيوانات. وبعد ذلك؛ اضيف الجليسرول المخلق لتحضير بنك الخلايا الرئيسي. بالإضافة لذلك؛ فقد تم أخذ قارورة واحدة من بنك الخلايا الرئيسي؛ وتم تكاثر الخلايا في وسط سائل لا يحتوي على أي مكونات مشتقة من الحيوانات. ‎dag‏ ذلك؛ فقد اضيف الجليسرول المخلق لتحضير بنك الخلايا العامل. ولقد تم تخزين بنك الخلايا الذي تم تحضيره تحت ظروف فائقة 5 التجمد عند درجة حرارة -70 درجة مئوية او أقل؛ تم استخدامه. 2-1 التخمر وفصل السكر المتعدد تم صهر قارورة واحدة من بنك الخلايا العامل ويعد ذلك تم وضعه في وسط سائل لا يحتوي على مكونات مشتقة من حيوانات. لقد تم تنفيذ بذر المزرعة عند 2437 درجة متئوية بدون تقليب حتى الحصول على الكثافة البصرية المطلوية (01600). وبعد التأكد من أن وسط المزرعة؛ والذي فيه 0 تتم إكمال بذر المزرعة؛ كان ملوثاء فقد تم تحصين الناتج في وحدة تخمر تحتوي على الوسط ‎JL‏ غير المحتوي على المكونات المشتقة من حيوانات. ‎cell aay‏ فقد تم تنفيذ المزرعة الرئيسية مع الحفاظ على الأس الهيدروجيني للوسط باستخدام محلول هيدروكسيد بوتاسيوم معقم عند 2237 درجة مئوية بأدنى ظروف تقليب. لقد تم قياس تركيز الخلايا في وسط المزرعة وتركيز الجلوكوز المحتوي في الوسط كل ساعتين وتم إكمال الزراعة في ‎sé 5‏ معينة عند انخفاض تركيز الجلوكوز في الوسط.

— 2 6 —

وبعد اكتمال الزراعة؛ فقد أضيفت كمية ملائمة من ديوكسي كولات الصوديوم المعقم 9612 إلى المزرعة حتى تركيز نهائي 960.12 لتنشيط التحلل المناعي؛ ‎dag‏ ذلك فقد تم إطلاق السكريات المتعددة المرتبطة بالخلايا. 3-1 تنقية السكريات المتعددة الخاصة بالكبسولة

أضيف حمض فوسفوربك إلى العينات المعالجة بديوكسي كولات الصوديوم لمدة ساعة؛ وتم الحصول على المحلول الطافي بالطرد المركزي. تم تمرير المحلول الطافي الذي تم الحصول ‎ade‏ ‏خلال مرشح ‎(Gee‏ مع ‎pla)‏ ذلك بالتركيز وتبديل المحلول المنظم بمحلول حمض الفوسفوريك المنظم ‎٠‏ ويعد تبديل المحلول المنظم ¢ 28 تم تمربر العينات خلال مرشح ‎SS‏ منشط وأزيلت الشوائب بالطريقتين التاليتين.

1( حيث أن 2 نوع مصلي وهم 21 3 4 5« ‎«6A‏ قو 9 0180 ‎19A‏ « ‎19F‏ و2317 كانت لها القدرة على ا لارتباط أيونيا مع سيتيل ثالث مثيل امونيوم بروميد ‎(CTAB)‏ فقد تم تنفيذ طريقة ‎CTAB‏ لقد تم تنفيذ المعالجة بطريقة ‎(CTAB‏ الطرد المركزي؛ كلوريد الصوديوم ‎(NaCl)‏ ويوديد الصوديوم ‎(Nal)‏ وطرق الطرد المركزي.

2) تم تفاعل نوعين مصليين» 147717 ؛ واللذين لم يتفاعلا مع ‎«CTAB‏ بإضافة محلول من جل

5 فوسفات المونيوم ‎(Algel)‏ وبعد ذلك تم استخدام المحلول الطافي الذي تم الحصول عليه من الطرد المركزي. ويعد خطوتي إزالة الشوائب السابقتي الذكرء فقد تم إدخال العينات في عملية ترشيح عميق وترشيح فائق/ترشيح مزدوج ‎(UF/DF) ultrafiltration/diafiltration‏ ويعد ذلك؛ فقد تمت ‎dalle‏ ‏العينات بالإيثانول وكلوريد الصوديوم لتكوين مسحوق من سكر متعدد كابسولي.

0 -مثال 2: تحضير الاقتران المكون من ستريتوكوكس بنيومونيا وبروتين 1-2 المقارنة بين طريقة الأمينة بالاختزال وطريقة إضافة السيانيد لقد تمت مقارنة إنتاجية الاقتران (أي الأمينة بالاختزال وإضافة السيانيد) باستخدام السكر المتعدد 7 المنقى والبروتين الحامل 018/1197. تكون عمليات الاقتران المعينة كما يلي.

(1) طريقة الأمينة بالاختزال

أضيف 11.7 مليجرام من فوق يودات إلى المحلول المركز من السكر المتعدد ‎(OV‏ وتم تنشيط السكريات المتعددة مع تقليب الخليط عند درجة حرارة تتراوح من 21 درجة مئوية إلى 25 درجة مئوية. لقد تم تركيز السكريات المتعددة المؤكسدة وتم ترشيحها باستخدام مرشح ترشيح فائق (100 كيلو دالتون) ومياه لحقن. ‎dang‏ ذلك؛ فقد تم خلط السكر المتعدد المتبقي مع ‎CRM197‏ بنسبة السكر المتعدد/181/197) = 0.5 وتم التجفيد. تم صهر المركب المعقد المجفد وتم تثبيته ‎(ah)‏ ‏عند درجة حرارة تتراوح من 21 درجة مئوية إلى 25 درجة مثوية. ولقد اذيب المركب المعقد المتزن وتم التحضين )2437 درجة ‎(Lge‏ في المحلول المنظم المحتوي على فوسفات الصوديوم (ب0طية21) بنسبة 0.1 مولاري لكل 20 ‎ala‏ من السكريات؛ وبعد ذلك أضيف سيانوبوروهيدريد )100 مليجرام/مل) لبدء تفاعل الاقتران. ويعد التحضين عند 2237 درجة مئوية لمدة حوالي 44 0 ساعة إلى 52 ساعة؛ فقد تم خفض الحرارة إلى 2+23 درجة مئوية وأضيف محلول 960.9 من كلوريد صوديوم ‎(del)‏ إلى المفاعل. أضيف محلول بوروهيدريد الصوديوم (100 مليجرام/مل) للحصول على 1.8 مكافئ مولاري إلى 2.2 مكافئ مولاري من بوروهيدريد الصوديوم لكل 1 مول من السكريات. بعد ذلك تم تحضين الخليط مع التقليب عند 2+23 درجة مئوية لتقليل أي كمية من الألدهيدات غير المتفاعلة الموجودة في السكريات. تم تخفيف الخليط باستخدام محلول 9060.9 من 5 كلوريد الصوديوم (5 مل)؛ ‎dag‏ ذلك فقد تم ترشيح الخليط المقترن المخفف باستخدام غشاء ‎MWCO‏ )100 كيلودالتون). )2( طريقة إضافة السيانيد تم تحضير محلول 2 مولاري من سكر متعدد كلوريد الصوديوم بإضافة مساحيق كلوريد الصوديوم إلى محلول مركز من السكر المتعدد 917 والذي تم تحضيره بدون تحلل مائي. ولكي يتم تنشيط 0 السكر المتعدد؛ فقد اذيب 1-سيانو-4-ثاني مثيل امينو بيريدينويم رابع فلورويورات ‎(CDAP)‏ ‏بنسبة 960.5 وزن/وزن بالنسبة للسكريات المتعددة؛ وأضيفت إلى محلول مركز من السكر المتعدد ‎OV‏ وبعد ذلك تم التقليب لمدة 15 دقيقة لتنشيط السكر المتعدد. وبعد ذلك؛ فقد أضيف محلول هيدروكسيد الصوديوم حتى وصول الأس الهيدروجيني على 0.1+9.5؛ وبعد ذلك تم التقليب لمدة 3 دقائق للتنشيط الكامل لمجموعة الهيدروكسيل للسكريات المتعددة بواسطة ‎(CDAP‏ أضيف 5 081197 إلى محلول السكر المتعدد؛ والذي فيه تم تنشيط السكر المتعدد؛ عند نسبة 961 وزن/وزن من 01401197 بالنسبة للسكريات المتعددة» وتم تنفيذ تفاعل ‎OEY)‏ في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة. في تفاعل ‎(GUE)‏ أضيف محلول 2 مولاري من الجليسين بكمية 3 مكافئات

— 8 2 — مولارية بالنسبة على 1 مكافئ مولاري من ‎«CDAP‏ وتم ضبط الأس الهيدروجيني إلى 9.0 مع إتباع ذلك بتحضين النتائج طوال ‎(Jalil‏ وبذلك تم إكمال التفاعل. وبعد إكتمال التفاعل الاقتراني؛ فقد ركز وتم ترشيحه خلال مرشح الرشيح ‎FW‏ بمحلول منظم يحتوي على %0.9 كلوريد صوديوم .

ونتيجة لذلك؛ فقد تم التأكيد على أن إنتاجية الاقترانات التى تم تحضيرها بطريقة إضافة السيانيد كانت ‎ef‏ بمقدار 4 مرات على الأقل من ‎dad‏ الاقترانات التي تم تحضيرها بطريقة الأمينة بالاختزال. وتبعا لذلك» فقد قام مخترعوا هذا الاختراع بتحضير الاقترانات بسكريات عديدة كبسولية و81/197© باستخدام طريقة إضافة السيانيد.

2-2 الاقتران وتنقية الاقتران 0 تتم تنفيذ طريقة تحضير اقتران السكريات المتعددة الكبسولية لستريتوكوكس بنيومونيا 5 ‎CRM197‏ ‏بالست خطوات التالية. الخطوة 1-1 ذويان والتحلل المائى للسكريات المتعددة الكابسولية الثلاثة عشر ‎al‏ تمت إذابة السكريات المتعددة الخاصة بالكبسولات والتى تم الحصول عليها من كل نوع مصلى في مياه للحقن بحيث يكون التركيز النهائي له كما هو موصوف ‎can Lad‏ وبعد ذلك تم الترشيح 5 خلال مرشح (0.45 ميكرون). وعلى ‎dag‏ الخصوص » فقد تم تنفيذ عملية الترشيح بإذابة مساحيق السكريات المتعددة الكبسولية فى حدود 0.8 مليجرام/مل إلى 2.0 مليجرام/مل للأنواع المصلية 1 033 ) و4 ؛ في حدود 4 مليجرام/مل إلى 8 مليجرام/مل للأنواع المصلية 5؛ ‎9V ¢ 6B‏ ؛ 180 و1917 ؛ في حدود تتراوح من 8 مليجرام/مل إلى 12 مليجرام/مل للنوعين المصليين ‎6A‏ و/19؛ وفي حدود تتراوح 0 من 2 مليجرام/مل إلى 4 مليجرام/مل؛ للأنواع المصلية ‎(TF‏ 14 و2315 . لقد تم تحضين المحلول في حدود الأس الهيدروجيني ودرجة الحرارة الموصوفة فيما بعد لكل نوع مصلي؛ وبعد ذلك تم تنفيذ التحلل المائي. ‎dag deg‏ الخصوص؛ فإنه بالنسبة للأنواع المصلية ‎23F ¢ 14 « 6B ¢ 5 ¢ 3 1‏ ولقد تم تنفيذ التحضين عند درجة حرارة تتراوح من 70 درجة مئوية إلى 50 درجة مئوية لمدة تتراوح من ساعة واحدة إلى 4 ساعات؛ وبالنسبة للنوعين المصليين 17 و18 حيث تم تنفيذ التحضين عند قيمة أس هيدروجيني 2 عند درجة حرارة 65 درجة مثوية

— 9 2 — إلى 80 درجة مئوية ‎sad‏ تتراوح من ساعة واحدة إلى 3 ساعات باستخدام محلول حمض فوسفوريك. بعد ذلك تم قطع عملية التحلل المائي بتبريد المحلول إلى درجة حرارة من 21 درجة إلى 24 درجة مئوية وإضافة هيدروكسيد الصوديوم حتى الوصول لقيمة أس هيدروجيني مستهدفة 1<6. لم يتم تنفيذ التحلل ‎Sl‏ للنوعين المصليين 4 ‎19A‏ . الخطوة 2-1 الذويان والتحلل المائى للسكريات المتعددة الأريعة عشر الخاصة بالكبسولة ‎al‏ تمت إذابة السكريات المتعددة الخاصة بالكبسولات والتى تم الحصول عليها من كل نوع مصلى في مياه للحقن بحيث يكون التركيز النهائي له كما هو موصوف ‎Lad‏ بعد؛ وبعد ذلك تم الترشيح خلال مرشح (0.45 ميكرون). وعلى ‎dag‏ الخصوص » 208 تم تنفيذ عملية الترشيح بإذابة مساحيق السكريات المتعددة الكبسولية فى 0 حدود 0.8 مليجرام/مل إلى 2.0 مليجرام/مل للأنواع المصلية 1 2 6 3 + و4 ؛ في حدود 4 مليجرام/مل إلى 8 مليجرام/مل للأنواع المصلية 5؛ ‎9V ¢ 6B‏ ؛ 180 و1917 ؛ في حدود تتراوح من 8 مليجرام/مل إلى 12 مليجرام/مل للنوعين المصليين ‎6A‏ و19/8؛ وفي حدود تتراوح من 2 مليجرام/مل على 4 مليجرام/مل؛ للأنواع المصلية ‎(TF‏ 14 ؛ و2317 ؛ وفي حدود تتراوح من 6 مليجرام/مل إلى 10 مليجرام/مل للنوع المصلي ‎TF‏ ‏5 لقد كان من المعروف أن التنشيط المناعي الذي يسببه اللقاح الاقتراني يتأثر سلبا على وجه العموم بزيادة التكافؤات بسبب التداخل المناعي الذي يحدث بالتفاعل بين المكونات ( ‎Dagan 1+ ef al.‏ ‎Vaccines, 28(5513); Glycoconjugate vaccines and immune‏ )2010( ‎(interference: A review‏ ولكي يتم تقليل فقد النشاط المناعي وتحسين النشاط المناعي ل ‎a (LBVEO14‏ استخدم مخترعوا هذا الاختراع خطوات تحلل ‎Sle‏ مختلفة تخص النوع المصلي 0 المعين إلى السكريات المتعددة في أنواع مصلية ‎dime‏ (الأنواع المصلية 3 4 « ‎(TF « 6A‏ للضبط للمستوى الأمثل للنشاط المناعي الكلى. لقد تم التحلل المائي للمحلول في حدود قيمة اس هيدروجيني ودرجة حرارة معينة؛ ولظروف لمعينة الكلية للنوع المصلي للتحلل المائي تكون كما هو موصوف فيما بعد. على وجه الخصوص» فإنه بالنسبة للأنواع المصلية 1 2 4؛ 5 ؛ 68 » 14 »و23 ؛ ولقد 5 تم تنفيذ التحضين عند درجة حرارة تتراوح من 70 درجة مثوية إلى 80 درجة مثئوية طوال الليل؛ وبالنسبة للنوع المصلي “191؛ تم تنفيذ التحضين عند درجة حرارة تتراوح من 70 درجة ‎sie‏ إلى

0 درجة مئوية لمدة من 1 إلى 4 ساعات؛ وبالنسبة للأنواع المصلية 3 ‎«OV « TF‏ و180؛ فقد تم تنفيذ التحضين عند قيمة أس هيدروجيني 2 عند درجة حرارة من 65 درجة مئوية إلى 80 درجة مئوية لمدة من ساعة واحدة إلى 3 ساعات باستخدام محلول حمض فوسفوريك. ولقد تم إيقاف التحلل المائي بتبريد المحلول إلى 21 درجة مئوية إلى 24 درجة مئوية وإضافة هيدروكسيد الصوديوم حتى الوصول على قيمة الأس الهيدروجيني المستهدفة 1+6. لم يتم تنفيذ التحلل المائي للنوع المصلي /19. الخطوة 2 تفاعل الاقتران للسكر المتعدد الكابسولي 5 ‎CRM197‏ ‏تم تحضير محلول 2 مولاري من السكر المتعدد في كلوريد الصوديوم بإضافة مسحوق كلوريد الصوديوم إلى كل الأنواع المصلية. أذيب 1-سيانو-4-ثاني مثيل أمينو بيريدينيوم رابع فلورويورات 0 الملائم ‎(CDAP)‏ لكل مصل بنسبة 1 ‎aba‏ من ‎CDAP‏ لكل 100 مل من محلول 50/50 أسيتونيتريل/مياه للحقن (حجم/حجم). ‎og‏ وجه الخصوص؛ فقد أذيب ‎CDAP‏ بنسبة 1 وزن/وزن96 بالنسبة للسكر المتعدد للنوعين المصليين 6/8 و14 ؛ ولقد اذيب ‎CDAP‏ بنسبة 962 وزن/وزن للنوعين المصليين 2 و4 ؛ ولقد اذيب ‎CDAP‏ بنسبة 963 وزن/وزن للأنواع المصلية ‎19A5 » 7F » 68 « 3 1‏ ؛ ولقد اذيب ‎CDAP‏ بنسبة 964 وزن/وزن للأنواع المصلية 5؛ ‎18C 97 5‏ ؛ 197 ؛ و 237 . ولقد اضيف كل منها بعد الإذابة لكل محلول سكر متعدد. ‎dag‏ ‏فترة من دقيقة واحدة إلى 3 دقائق؛ فقد أضيف هيدروكسيد الصوديوم إلى المحاليل لرفع الأس الهيدروجيني إلى 9.4 إلى 9.7؛ وقلب الخليط لمدة تتراوح من 3 دقائق إلى 7 دقائق بحيث تم تنشيط مجموعة الهيدروكسيل للسكر المتعدد بالقدر الكافي بواسطة 00/17. ولقد اضيف 0.55 وزن/وزن إلى 901 وزن/وزن من 01821197 بالنسبة للسكريات المتعددة؛ لكل نوع مصلي من 0 محاليل السكر المتعدد؛ وتم تنفيذ تفاعل الاقتران لمدة من ساعة واحدة إلى 4 ساعات. بالإضافة لذلك؛ فقد تم قياس معدل تحول التفاعل باستخدام ‎(HPLC-SEC‏ وأضيفت كمية إضافية من ‎CDAP‏ حسب الضرورة. الخطوة 3 إكمال تفاعل الاقتران أضيف 3 مكافئات مولارية إلى 6 مكافئات مولارية من محلول الجليسين بالنسبة إلى 1 مكافئ 5 مولاري من ‎«CDAP‏ والذي أضيف لكل الأنواع المصلية؛ وبعد ذلك تم إكمال التفاعل بضبط الأس الهيدروجيني إلى 9. لقد تم تقليب محلول الاقتران عند درجة حرارة تتراوح من 21 درجة

— 1 3 — مثوية إلى 24 درجة مئوية لمدة ساعة ويعد ذلك تم التخزين طوال الليل عند درجة حرارة منخفضة تتراوح من 2 درجة مئوية إلى 8 درجة مئوية. الخطوة 4 الترشيح الفائق لقد تم تركيز المحلول الاقتراني المخفف ورشح ترشيح مزدوج خلال مرشح ترشيح فائق بأقل حجم وهو 20 حجم من المحلول المنظم. وعلى ‎dag‏ الخصوص؛ فقد تم الاحتفاظ بالمحلول المنظم عند قيمة اس هيدروجيني تتراوح من 5.5 إلى 6.5 وتم استخدام المحلول المنظم المحتوي على 760.9 كلوريد صوديوم. لقد كان قطع الوزن الجزيئي لمرشح الترشيح الفائق 300 كيلو دالتون لكل الأنواع المصلية؛ ولقد تم التخلص من المحلول النافذ. الخطوة 5: الترشيح المعقم 0 "تم تخفيف ‎gall‏ المحتفظ به بعد الترشيح المزدوج حتى تركيز أقل من 0.4 جرام/لتر على أساس تركيز السكر المتعدد باستخدام المحلول المنظم؛ وتم الترشيح خلال مرشح )0.22 ميكرون). لقد تم تنفيذ مراقبة الجودة في ‎oli‏ العملية (محتوى السكر ‎DMAP,‏ المتبقي) على المنتج الذي تم ترشيحه. لقد تم عمل مراقبة الجودة في الطريقة على الجزءٍ المتبقي المرشح لتحديد ما إذا كانت هناك حاجة لتركيز إضافي؛ ترشيح مزدوج و/أو تخفيف. 5 الخطوة 6: الامتزاز أضيف ملح الالمونيوم (والذي يتكون أساساً من فوسفات الألمونيوم) على ناتج الترشيح المعقم بحيث أصبح التركيز النهائي لأيون الالمونيوم 1 مليجرام/مل؛ وأضيفت كميات إضافية من الملح للحفاظ على قيمة الأس الهيدروجيني من 5.5 إلى 6.5. _لقد تم تقييم المحلول المركز؛ والذي فيه تم إكمال الامتزاز؛ لتحديد ما إذا كان بجودة ملائمة وتم التبريد عند درجة حرارة تتراوح من 2 0 درجة مثوية إلى 8 درجة مئوية حتى الاستخدام. مثال 3: تركيب اللقاح مع اقتران من تركيبات بكتيريا المكورات الرثوية متعددة التكافؤات 1-3: تركيب اللقاح الاقتراني لبكتيريا المكورات الرئوية ذات الثلاثة عشر تكافؤ ‎(LBVEO13)‏ ‏لقد تم حساب الكمية المطلوية من التركيز الكتلى النهائيى على أساس حجم التشغيلة وتركيز السكر المتعدد الكتلي. بعد إضافة الكمية المطلوية من 960.85 من كلوريد الصوديوم؛ محلول السكسينات

المنظم» 2-فينوكسي إيثانول؛ وفورمالدهيد إلى وعاء التركيب الذي سبق وضع بطاقة تعريف عليه؛ فقد أضيف التركيز الكتلي. ويعد ذلك؛ فقد تم خلط النواتج جيدا ورشحت خلال مرشح (0.22 ميكرومولار). لقد تم خلط المحلول المجهز ببطء؛ وأضيف فوسفات الالمونيوم الكتلي ‎cad]‏ مع إتباع ذلك بالخلط الجيد للخليط. لقد تم فحص الأس الهيدروجيني وتم ضبطه عند الضرورة. ولقد تم تخزين المنتج الكتلي الذي تم تجهيزه عند درجة حرارة تتراوح من 2 درجة مئوية إلى 8 درجة مئوية. ولقد كان تركيب اللقاح الذي تم الحصول عليه (والذي سوف يشار إليه من الآن فصاعدا بالاسم 1.317120137) يحتوي؛ كمجموع كلي في 0.5 مل؛ على 2.2 ميكروجرام من كل سكر ‎Lad canis‏ عدا 4.4 ميكروجرام من ‎6B‏ حوالي 29.3 ميكروجرام_ من البروتين الحامل 7 :+؛ 0.5 مليجرام من عنصر الألمونيوم (2 مليجرام من فوسفات الألمونيوم) المساعد؛ 0 وحوالي 4.25 مليجرام من كلوريد الصوديوم؛ وحوالي 295 ميكروجرام من محلول السكسينات المنظم؛ وحوالي 3 مليجرام من *2-فينوكسي إيثانول وحوالي 60 ميكروجرام من *فورمالدهيد (*يتم استخدامهما عند إضافة مادة حافظة). 2-3 تركيب اللقاح الاقتراني لبكتيريا المكورات الرئوية ذات الأريعة عشر <$ ‎(LBVEO14)‏ ‏لقد تم حساب الكمية المطلوية من التركيز الكتلي النهائي على أساس حجم التشغيلة وتركيز السكر 5 المتعدد الكتلي. بعد إضافة الكمية المطلوية من 960.85 من كلوريد الصوديوم؛ محلول السكسينات المنظم» 2-فينوكسي إيثانول؛ وفورمالدهيد إلى وعاء التركيب الذي سبق وضع بطاقة تعريف عليه؛ فقد اضيف التركيز الكتلي. ويعد ذلك؛ فقد تم خلط النواتج جيدا ورشحت خلال مرشح (0.22 ميكرومولار). لقد تم خلط المحلول المجهز ببطء؛ وأضيف فوسفات الالمونيوم الكتلي ‎cad]‏ مع إتباع ذلك بالخلط الجيد للخليط. لقد تم فحص الأس الهيدروجيني وتم ضبطه عند الضرورة. ولقد 0 "تم تخزين المنتج الكتلي الذي تم تجهيزه عند درجة حرارة تتراوح من 2 درجة مئوية إلى 8 درجة مئوية. ولقد كان تركيب اللقاح الذي تم الحصول عليه (والذي سوف يشار إليه من الآن فصاعدا بالاسم 1.317120147) يحتوي؛ كمجموع كلي في 0.5 ‎«de‏ على 2.2 ميكروجرام من كل سكر ‎connie‏ فيما عدا 4.4 ميكروجرام من ‎6B‏ حوالي 31 ميكروجرام من البروتين الحامل 811197 ؛ 0.5 مليجرام من عنصر الألمونيوم (2 مليجرام من فوسفات الألمونيوم) المساعد؛ وحوالي 4.25 5 مليجرام من كلوريد الصوديوم؛ وحوالي 295 ميكروجرام من محلول السكسينات المنظم؛ وحوالي 3 مليجرام من *2-فينوكسي إيثانول وحوالي 60 ميكروجرام من *فورمالدهيد (*يتم استخدامهما عند إضافة مادة حافظة).

مثال 4: تقييم قدرة كل من ‎LBVEO14 5 LBVEOI3‏ على تنشيط الجهاز المناعي تم تنفيذ الأبحاث لتقييم ما إذا كانت تركيبات لقاحات بكتيريا المكورات الرئوية متعددة التكافؤ ‎(LBVEO14 SLBVEO13 (‏ والتي تم تحضيرها في مثال 3 لها القدرة على تنشيط الاستجابة المناعية في الأرانب. لقد تم التأكيد على تلك التأثيرات المناعية بقياس تركيز مستوى 180 في مصل الدم بواسطة ‎ELISA‏ الموجهة ضد مستضد معين ومستوى الأجسام المضادة الوظيفية بتحليل الالتقام الاويسوني ‎(OPA)‏ ‏تم تحصين أرانب نيوزيلاندا البيضاء في العضل في الأسبوع 0؛ الأسبوع 2 والأسبوع 4 بجرعة مخطط لها من أحد التركيبين 1317285013 أو 13172014 اللذان يتم إعطائهما للإنسان أو 0 المقارن» ‎Prevenarl3®‏ (2.2 ميكروجرام من كل ‎Ld amie Su‏ عدا ‎6B‏ عند 4.4 ميكروجرام). لقد تم أخذ عينات من الأمصال كل اسبوعين بعد التحصين. لقد تم قياس تركيز 186 في مصل ‎all‏ باستخدام تحليل ‎ELISA‏ ؛ ‎dug‏ توضيح النتائج في الجدولين 11 و1[آب. سوف يتم وصف تلك النتائج بالتفصيل فيما يلي. 5 1-4: تحديد تركيز ‎IgG‏ الموجه ضد اللقاح الذي تم إعطاؤه لقد تم وضع كل من السكريات المتعددة الخاصة بالكبسولة لكل من النوعين المصليين اللذان يخصان بكتيريا المكورات الرثوية في طبق ذو 96 عين بمقدار 5 ميكروجرام/عين في درجة حرارة الغرفة لمدة 16 ساعة. ولكي يتم تقليل الاستجابة غير المعينة بين المستضد والجسم المضاد لأدنى مستوى؛ فقد تم امتزاز المصل من كل أرنب بواسطة 333.3 ميكروجرام/مل من ‎C-PS‏ و333.3 0 ميكروجرام/مل من النوع المصلي 221 من السكر المتعدد الخاص بالكبسولة ‎(PnPs 22F)‏ في درجة حرارة الغرفة ‎sad‏ 30 دقيقة. ‎dag‏ ذلك؛ فقد تم تخفيف النواتج التخفيف الملائم باستخدام محلول منظم لتخفيف الجسم المضاد يحتوي على توين 20. لقد تم غسل الطبق المغلف 4 مرات بمحلول الغسيل المنظم؛ ثم أضيف 50 ميكرولتر من مصل سبق امتزازه وتم تخفيفه إلى الطبق؛ مع إتباع ذلك بالسماح بتنفيذ التفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة. لقد تم غسل الطبق الذي 5 يحوي التفاعل 4 مرات بنفس الطريقة؛ ‎aang‏ ذلك أضيفت اقترانات 150-117 الخاصة بالماعز

— 4 3 — والموجهة ضد الأرنب (1: 2000( لكل عين. ‎day‏ ذلك»؛ فقد تم تنفيذ التفاعل في درجة ‎Sha‏ ‏الغرفة لمدة 30 دقيقة. تم غسل الطبق 4 مرات بنفس الطريقة كما سبق أن ذكر. اضيف 100 ميكرولتر من محلول ‎TMB‏ المثبت في درجة حرارة الغرفة لكل عين؛ وسمح له بالتفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. أضيف 100 ميكرولتر من محلول 1 عياري من حمض الكبريتيك لإيقاف التفاعل؛ وتم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر و650 نانومتر. وكمقارن؛ فقد تم أيضاً تحليل المصل الذي تم الحصول عليه بتحصين احد الأرانب ‎Prevenar13®;‏ . نتيجة لذلك؛ فقد وجد على غير المتوقع أن نسق الاستجابة المناعية في كل نوع مصلي من أنواع 3 كان يختلف كثيرا عن ذلك الذي يخص ®3 ‎Prevenarl‏ (الجدولين ‎i‏ و1[ب)؛ مما يوضح أن ‎LBVEOI3‏ يكون تركيب مختلف مناعيا عن ‎Prevenarl3®‏ على الرغم من 0 مشاركته نفس النوع المصلي؛ وأن الأراتب المحصنة ب1.317013 يكون لها مستوى أعلى من تركيز ‎IgG‏ في كل ‎J‏ لأنواع المصلية مقارنة مع ®3 ‎.Prevenarl‏ وعلى ‎dag‏ الخصوص » فقد وجد أن الأنواع المصلية 1 ‎TF » 6B‏ » 957 » 14 » و1917 ؛ قد أنتجت تركيزات أعلى بمقدار مرتين و6 مرات من تركيزات ‎IgG‏ مقارنة ‎Prevenar13®;‏ (جدول 1أ وجدول 1[ب). في ‎ob 131711014 dl‏ الأنواع المصلية 1« 4 ¢ 5 ¢ 71 » ‎319A ¢18C ¢ 14 ¢9V‏ ‎19F 5‏ قد أنتجت تركيزات أعلى بمقدار مرتين و6 مرات من تركيزات 1850 مقارنة ب “2660213 (جدول 1أ وجدول 1[ب). [جدول 1أ] ‎gl‏ تركيز 180 | ‎gall‏ | تركيز ‎IgG‏ ‏المصلي | ‎Kia)‏ وجرام/مل) | المصلي | (ميكر وجرام/مل) ا ته |« اا

— 5 3 — ‎19F 59.5 6B‏ 17.6 [جدول ]=[ ‎LBVEO!4‏ ‏المصلي | (ميكر وجرام/مل) | المصلي | (ميكر وجرام/مل) 1203 © _ © 9 -

‎sms | a‏ | اق ‎es‏ ‏]5[ 27 ]2[ - *إن النوع المصلي 2 ليس متضمنا في ‎Prevenar13®‏ ‎:2-4OPA(‏ تحديد مستوى الجسم المضاد الوظيفي (تحليل الالتقام الاويسوني لقد تم تقييم مستويات الأجسام المضادة الوظيفية المنشطة بالمستضدات التي تخص نوع مصلي معين بتنفيذ تحليل ‎OPA‏ بواسطة المصل الذي تم الحصول عليه من الأرانب المحصنة ب

‎Prevenar13®4 LBVEO14 JLBVEO13 5‏ . على وجه الخصوص» فقد تم أخذ كميات مساوية كعينات من كل أرنب وتم تجميعها في مجموعات. لقد تم زرع ستربتوكوكس بنيومونيا في وسط ‎THY‏ (عبارة عن وسط ‎Todd-Hewitt‏ ‏مع %2 مستخلص خميرة) لكل نوع مصلي وتم التخفيف بالمحلول المنظم الخاص بالالتقام الأوسوني بحيث وصلت إلى 200 وحدة تكوين مستعمرة/10 ميكرولتر إلى 300 وحدة تكوين 0 مستعمرة/10 ميكرولتر._ تم خلط 20 ميكرولتر_ من المصل المخفف و10 ميكرولتر من ستريتوكوكس بنيومونيا مخفف وتم التحضين في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. ويعد ذلك؛ فقد اضيف 50 ‎ily Sie‏ من خليط من ‎WIS‏ 111-60 سبق تمايزها والمكمل (حيث أن نسبة الخلايا: المكمل = 4: 1) وتم التفاعل في حضانة ثاني أكسيد الكريون )37 درجة مئوية) لمدة 45 دقيقة. لقد تم خفض الحرارة لإنهاء الالتقام وتم عمل مسحة من 10 ميكرولتر من محلول التفاعل على طبق آجار سبق تجفيفه لمدة تتراوح من 30 دقيقة إلى 60 دقيقة. تم تحضين الطبق في حضانة ثاني أكسيد الكربون )37 درجة متوية) لمدة من 12 ساعة إلى 18 ساعة ‎ay‏ ذلك تم عد المستعمرات. لقد تم التعبير عن تركيز ‎OPA‏ على أنه معدل التخفيف الذي عنده تمت ملاحظة نسبة قتل 9650 (جدول 2: تركيز ‎OPA‏ الذي يساوي 2187 يوضح أن التركيز لم يكن قادرا على الوصول على مستوى 9650 حتى في المنطقة الأكثر تخفيفا مقارنة بالمقارن السلبي؛ حيث يكون

‏0 التركيز مرتفع جدا). [جدول 2[

التوع المصلي

مس ا

‎(nw || «‏ ‎cells eg‏ فقد تم التأكيد من النتائج التجريبية السابقة أن تركيز ‎OPA‏ من التركيب المنشط للمناعة ذو 13 تكافؤ الخاص بهذا الاختراع مستوى أعلى من الأجسام المضادة العاملة مقارنة بما وجد مع 2:67602139. وتبعا لذلك» فإن التركيب المنشط للمناعة الخاص بهذا الاختراع يمكن أن يكون فعال جدا لمنع المرض الذي يحدث بسبب ستريتوكوكس بنيومونيا.

‏5 ([جدول 2ب]

‏الحا‎ ‎revenarl 3 LBVEOI14

Cr [we [ee | « ‎Ce [en [we |‏ على أساس النتائج من جدول 2 فإنه من الواضح أن مستوى كل جسم مضاد وظيفي في مصل الأرنب المحصن ب1.31712014 يكون اعلى من مستوى الجسم الوظيفي في مصل الأرنب المحصن ب©2:67602:13 . وتبعا ‎«UN‏ فإن تركيب التنشيط المناعي تبعا لهذا الاختراع يمكن أن يكون فعال بصورة كبيرة لمنع الأمراض التي تحدث بسبب ستريتوكوكس بنيومونيا.

بينما تم وصف هذا الاختراع بالرجوع إلى التجسيمات الموضحة المعينة؛ فسوف يكون من المفهوم بواسطة ذوي الخبرة في مجال هذا الاختراع أن هذا الاختراع يمكن أن ينفذ في صورة معينة أخرى ‎Og‏ الحيود عن روح ومجال أو الخصائص الأساسية المميزة لهذا الاختراع. وعلى ذلك؛ فإن لتجسيمات السابقة الذكر تعتبر موضحة وليست محددة لمجال هذا الاختراع. وأيضاً؛ فإنه يتم تعريف مجال هذا الاختراع بواسطة عناصر الحماية الملحقة بدلا من الوصف الكامل؛ ويجب أن يكون من المفهوم أن كل التعديلات والتغييرات المشتقة من معاني ومجال هذا الاختراع يتم

تضمينها في مجال عناصر الحماية الملحقة.

Claims (1)

1. عناصر الحمابة

   1. تركيب لقاح لمنع الأمراض المتعلقة بالمكورات الرثوية ‎Cus pneumococcal diseases‏ يتضمن 14 نوعا من مترافقات البروتين الناقل متعدد السكاريد الكبسولي ‎capsular polysaccharide-carrier‏

   ‎.protein conjugates‏ حيث أنه؛ في الأنواع الأريعة عشر من الاقترانات» فإن كل نوع من الأنواع الأريعة عشر من عديد السكريات الكبسولي ‎capsular polysaccharides‏ مشتقة_ من الأنماط المصلية لستريتوكوكس ‎(TF «6B « 6A «5 « 4 3 2 «1 Streptococcus pneumoniae ge gah‏ اق 14 ¢ ‎18C‏ ¢ دواء ‎23F 5 » 19F‏ مترافقة بشكل تساهمي مع بروتين حامل ‎¢carrier protein‏ يكون البروتين الحامل هو بروتين 814197©؛ و يكون لكل اقتران من الاقترانات ‎conjugates‏ تركيب ‎structure‏ فيه يكون كل من متعدد السكاريد 0 الكبسولي ‎capsular polysaccharides‏ والبروتين الحامل مرتبط عن طريق مجموعة ‎-O-C(NH)-‏ ‎NH-‏ باستخدام طريقة ‎.a cyanylation‏

   2. التركيب وفقا لعنصر الحماية ‎Gus]‏ أن طريقة ‎cyanylation‏ تنفذ باستخدام 1-سيانو-4- ثاني مثيل أمينوبيريدينيوم رابع فلوروبورات ‎(CDAP)‏ أو :03. ‎1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate (CDAP) or CNBr 5‏ 3 التركيب وفقا لعنصر الحماية 1؛ والذي يتضمن واحدة على الأقل يتم اختيارها من المجموعة التي تتكون من مساعد ‎sale » adjuvant‏ حافظة ‎preservative‏ ؛ محلول منظم ‎buffer‏ ¢ واقي من البرودة ‎cryoprotectant‏ ؛ ملح؛ كاتيون ثنائي التكافؤ ‎cdivalent cation‏ منظف غير أيوني ‎non-‏ ‎jonic detergent 0‏ » ومقبط تأكسد للشقوق الحرة ‎free radical oxidation inhibitor‏ 4 التركيب ‎Gy‏ لعنصر الحماية 3 حيث يتم اختيار المساعد ‎adjuvant‏ من المجموعة التي تتكون من فوسفات ألمونيوم ‎caluminum phosphate‏ كبريتات الموتيوم ‎caluminum sulfate‏ هيدر وكسيد المونيوم ‎caluminum hydroxide‏ ومخاليط منها.

   5. التركيب وفقا لعنصر الحماية 3( حيث أن المادة الحافظة ‎preservative‏ هي 2-فينوكسي إيثانول ‎¢phenoxyethanol‏ فورمالدهيد ‎«formaldehyde‏ أو مخاليط منها. 6 التركيب ‎Wy‏ لعنصر الحماية 1 والذي يتضمن ‎Load‏ مادة ‎dela‏ مقبولة صيدليا

   .physiologically acceptable carrier 5

   7. التركيب ‎Gy‏ لعنصر الحماية 1 حيث إنه؛ بالنسبة لمتعدد السكاريد الكبسولي المشتق «serotype 1 ‏من النمط المصلي‎ capsular polysaccharide كل من عديد السكريات الكبسولي ‎capsular polysaccharides‏ يتم اشتقاقها من الأنماط المصلية 0 32 4« مف ‎TF‏ « تاق 14 ء ‎19F » 19A » 18C‏ » و2385 لها نسبة محتوى من 0.9 إلى

   1.؛و متعدد السكاريد الكبسولي ‎capsular polysaccharide‏ المشتق من النمط المصلي 68 له نسبة

   .2.2 ‏من 1.8 إلى‎ sina legs 14 ‏يتضمن‎ Streptococcus pneumoniae ‏تركيب مناعي ضد ستريتوكوكس بنيومونيا‎ .8 5 من مترافقات البروتين الناقل متعدد السكاريد الكبسوتي ‎capsular polysaccharide-carrier protein‏ ¢conjugates حيث أنه؛ في الأنواع الأريعة عشر من الاقترانات» فإن كل نوع من الأنواع الأريعة عشر من عديد السكريات الكبسولي ‎capsular polysaccharides‏ مشتقة_ من الأنماط المصلية لستريتوكوكس 0 بنيومونيا ‎Streptococcus pneumoniae‏ 1« 2 3 كف 5« ‎(TF « 6B « 6A‏ اق 14 ¢ 180 دواء ‎23F 5 » 19F‏ مترافقة بشكل تساهمي مع بروتين حامل ‎carrier protein‏ ¢ يكون البروتين الحامل هو بروتين 814197©؛ و يكون لكل اقتران من الاقترانات ‎conjugates‏ تركيب ‎structure‏ فيه يكون كل من متعدد السكاريد الكبسولي ‎capsular polysaccharides‏ والبروتين الحامل مرتبط عن طريق مجموعة ‎-O-C(NH)-‏ ‎NH- 5‏ باستخدام طريقة ‎cyanylation‏ 8.

   9. طريقة لتحضير تركيب مناعي ‎immunogenic composition‏ وفقا لعنصر الحماية 8؛ ‎Cus‏ تتضمن خطوة اقتران ‎conjugating‏ كل من الأنواع 14 من عديد السكريات الكبسولي المعزولة

   — 2 4 — ‎isolated capsular polysaccharides‏ والمشتقة من الأنماط المصلية لستريتوكوكس بنيومونيا ‎Streptococcus pneumoniae‏ 1« 4 3« 4ك 5« ‎6A‏ « قو ‎19A 180 ¢ 14 ¢9V «TF‏ ¢ ‎23F 3 ¢19F‏ مع ‎«CRMI197‏ بروتين حامل ‎carrier protein‏ ¢ باستخدام طريقة ‎cyanylation‏ ‏بحيث أن متعدد السكاريد الكبسولي ‎capsular polysaccharide‏ والبروتين الحامل ‎carrier protein‏ يكونان تركيب ‎structure‏ والذي يرتبط عن طريق مجموعة -1111-(0-0011-.

   الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية ‎Swed Authority for intallentual Property pW‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < ‎Ne‏ ‎ge‏ ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام ‎TEE‏ ‏ببح ةا ‎Nase eg‏ + ‎Ed - 2 -‏ 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ uo‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏