SA515360337B1 - مرقم حيوي للاستخدام في علاج فقر الدم - Google Patents

مرقم حيوي للاستخدام في علاج فقر الدم Download PDF

Info

Publication number
SA515360337B1
SA515360337B1 SA515360337A SA515360337A SA515360337B1 SA 515360337 B1 SA515360337 B1 SA 515360337B1 SA 515360337 A SA515360337 A SA 515360337A SA 515360337 A SA515360337 A SA 515360337A SA 515360337 B1 SA515360337 B1 SA 515360337B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
sequence
activity
level
activin
polypeptide
Prior art date
Application number
SA515360337A
Other languages
English (en)
Inventor
كروز مورا إيفان
فريكوت اوريلي
هيرمن اوليفر
تروفاتي ماسيل تياجو
تشوبرا راجيش
سونج فيكتوريا
دوسيوت ميشيل
Original Assignee
سيلجين كوربوريشن
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by سيلجين كوربوريشن filed Critical سيلجين كوربوريشن
Publication of SA515360337B1 publication Critical patent/SA515360337B1/ar

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • G01N33/721—Haemoglobin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/475—Assays involving growth factors
    • G01N2333/51—Bone morphogenetic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بطرق لعلاج الأمراض المصاحبة لفقر الدم Anemia أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال ineffective erythropoiesis باستخدام مستوى و/أو نشاط مركب ترابطي لمستقبل أكتيفين activin ، بشكل محدد، عامل تمايز النمو Growth differentiation factor 11 (GDF11)، كمؤشر لاستجابة المريض للعلاج، فاعلية العلاج، أو الجرعة المناسبة للعلاج باستخدام مثبط inhibitor لمستقبل أكتيفين من النوع 2.

Description

— \ — مرقم حيوي للاستخدام في علاج فقر الدم ‎Biomarker for use in treating anemia‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي بتوفير طرق لعلاج الأمراض المصاحبة لفقر الدم ‎Anemia‏ أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال ‎ineffective erythropoiesis‏ باستخدام مستوى و/أو نشاط مركب ترابطي لمستقبل أكتيفين ‎activin receptor‏ من النوع ؟؛ بشكل محدد؛ عامل تمايز النمو ‎Growth differentiation factor 5‏ 11 (60711)؛ كمؤشر لاستجابة المريض للعلاج؛ فاعلية العلاج؛ أو الجرعة المناسبة للعلاج باستخدام مثبط لمستقبل أكتيفين ‎activin receptor‏ ‎inhibitor‏ من النوع ‎WY‏ على سبيل ‎(JU)‏ يتم هنا توفير طرق لتحديد مستوى و/أو نشاط ‎«GDF 1 1‏ اختيار مرضصضى لديهم مستوى و/أو نشاط 1 1 ‎GDF‏ مرتفع؛ وعلاج مرضصضى لديهم مستوى و/أو نشاط ‎GDF11‏ مرتفع باستخدام مثبط لمستقبل أكتيفين من ‎Yell‏ علاوة على ذلك باستخدام ‎adie‏ لمستقبل أكتيفين من النوع 7؛ وإعطاء مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ؟ بمقدار جرعة يعتمد على مستوى و/أو نشاط 60711 في المريض. يمكن أن يكون مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ المذكور عبارة عن مثبط ل 8014/8 و/أو إرسال إشارات 8014118 (على سبيل المثال؛ بروتين اندماج متوافق مع البشر يتألف من نطاق خارج الخلية لمستقبل أكتيفين من النوع هاا ونطاق ‎Fe‏ ل ‎IgGl‏ بشري). يكون فقر الدم عبارة عن انخفاض في عدد خلايا الدم الحمراء ‎sired blood cells‏ أقل من الكمية الطبيعية من الهيموجلويين ‎Hemoglobin‏ في الدم. كما يمكن أن يحدث فقر الدم 8 بواسطة قدرة ارتباط الهيموجلويين بالأكسجين المنخفضة ‎Low oxygen‏ . يكون فقر الدم عبارة عن من أكثر اضطرابات الدم شيوعاً. يمكن أن يحدث فقر ‎ar dl‏ بواسطة تكون الكريات الحمراء غير الفعال ‎ineffective‏ ‎erythropoiesis‏ . يكون تكون الكريات الحمراء غير الفعال موجود إذا حدث تكون الكريات
ا الحمراء الفعال ولكن تفشل خلايا الدم الحمراء في تطوير معدل مناسب. تخضع الخلايا الأولية لتلاشي الخلايا قبل الوصول إلى مرحلة خلايا الدم الحمراء الناضجة ‎Mature red blood‏ ‎.cells‏ ‏تكون ‎Thalassemia die nS)‏ عبارة عن صورة من تكون الكريات الحمراء غير الفعال ‎ineffective erythropoiesis 5‏ . في الثّلاسيمِيّة؛ يتميز تكون الكريات الحمراء غير الفعال بواسطة تلاشي الخلايا لخلايا شبيهة بالكريات الحمراء منواة ناضجة. بشكل خاص يكون البيتا- ‎Lands‏ عبارة عن مرض يتم تمييزه بواسطة عيوب في الهيموجلويين (أو ‎(Hob‏ عملية تخليق تؤدي إلى اختلال نضج وإنتاج الكريات الدموية الحمراء. يعتقد أن الانخفاض يرجع بشكل أساسي إلى تمايز متعلق بسلسلة الكريات الحمراء وتلاشي الخلايا التي تزيد بصورة طبيعية عند مرحلة 0 أرومة حمراء فَعِدَة/متعددة الألوان لتمايز خلايا الدم الحمراء؛ وهو ما ينتج عنه انخفاض كلي في إنتاج خلايا الدم الحمراء الناضجة ‎mature red blood cell‏ ؛ تتميز البيتا- كَلاَسيمِبّة ‎beta‏ ‏38 وبواسطة حيز فرط خلايا النخاع ‎hypercellular bone marrow‏ حيث تتراكم الأرومات الحمراء ‎erythroblasts‏ غير الطبيعية وتخضع لتلاشي ‎(LOAN‏ ينتج عنها فقر الدم الجهازي ‎.systemic anemia‏ تتكون عاثلة عامل النمو المتحول ‎(TGF-beta) transforming growth factor beta Lin‏ والتي تشتمل على ‎(TGF-beta‏ أكتيفين» بروتينات تخليق العظم ‎bone morphogenic‏ ‎(BMPs) proteins‏ وعوامل نمو وتمايز ‎(GDFs) growth and differentiation factors‏ عبارة عن بروتينات ‎proteins‏ يتم إفرازها يعرف بأنها تنظم العديد من العمليات الخلوية أثناء كل من التطور وتوقف الدم بالأنسجة. تكون ‎(TGF-betal‏ أكتيفين ‎BMP-2 (A‏ و81/0-4 جميعها مصاحبة لتكون الكريات الحمراء في العديد من أنظمة نموذج. يعمل ‎TGF-betal‏ على تثبيط وتعزيز تمايز متعلق بسلسلة الكريات الحمراء بناءً على السياق؛ تم اكتشاف أن الأكتيفين ‎A activin‏ عبارة عن عامل معزز للتمايز متعلق بسلسلة الكريات الحمراء؛ بينما يعتبر 8010-4 متورط في تكون الكريات الحمراء الناتج عن الإجهاد والاستشفاء من فقر الدم الحاد في نماذج قارض. يعمل ‎WIA BMP-2‏ شبيهة بالكريات الحمراء المبكرة لزيادة تكون المستعمرات في عينات 5 تتم الحصول عليها من الدم المحيطي المتحرك أو خلايا نخاع عظم +0034. تكون المستويات
مه المرتفعة بصورة غير طبيعية من بعض عوامل النمو المذكورة مصاحبة للعديد من الأمراض المتعلقة بالدم. على سبيل المثال؛ ‎Bale‏ لا تكون المستويات المرتفعة من 6017-15 عبارة عن سمة لتكون الكريات الحمراء الطبيعي لكن في ظروف تكون الكريات الحمراء غير الفعال ‎ineffective erythropoiesis‏ ؛ يزيد التعبير الوراثي عن ‎.GDF-15‏ تتألف عائلة ‎TGF-beta‏ العليا من أكثر من ‎To‏ بروتين وترسل إشارات خلال عدد محدود من المستقبلات ومسارات إرسال الإشارات؛ للإشارة إلى فوضى متأصلة وتكرار في التأثيرات الخاصة بها. علاوة على ذلك؛ في أي نسيج محدد؛ يمكن العثور على العديد من المركبات الترابطية المختلفة ومن المحتمل أن يحدث إرسال الإشارات عن طريق تراكب مجموعة فرعية من مستقبلات تؤدي على تعقيد القدرة على ريط مركبات ترابطية محددة بوظيفتها. يكون 600711 عبارة عن 0 عضو لعائلة ‎GDF‏ فرعية وتشترك في حوالي ‎964٠0‏ تماثل حمض أميني ‎amino acid‏ مع ‎Loads 8‏ تعرف بميوستاتين ‎myostatin‏ . يمكن أن يعمل كلاهما على ريط مستقبلات أكتيفين من النوع ‎HA‏ و8 وتنشيط مسار إرسال إشارات 2/3 50180. يلعب 60511 دوراً كبيراً في التطوير؛ ويكون له دوراً في تكون العضلات ‎muscle‏ ؛ الغضاريف ‎cartilage‏ ؛ العظام ‎bone‏ + الكلى ‎kidney‏ ؛ والجهاز العصبي ‎system‏ 65 بينما في أنسجة البالغين» تم 5 الكشف عن 60711 في البنكرياس ‎pancreas‏ ؛ الأمعاء ‎intestine‏ ؛ الكلى؛ العضلة الهيكلية ‎skeletal muscle‏ ؛ المخ ‎brain‏ ولب الأسنان ‎dental pulp‏ . كما يمكن العثور على كميات منخفضة من 6007-11 في الدورة الدموية. إلى يومنا هذاء مع ذلك؛ لا يوجد دليل يصف دور 6107-1 في تكون الكريات الحمراء. كما تعمل مستقبلات من النوع ؟ لمركبات الأكتيفين ‎activin‏ على ربط 11 ‎.GDF‏ تم تحديد اثنين
Mathews and Vale, 1991,) ‏وطالكاعدث‎ ActRlla ‏من مستقبلات من النوع ¥ ذات الصلة؛‎ 20 «GDF11 ‏بجانب‎ (Cell 65:973-982; Attisano et al, 1992, Cell 68: 97-108 ‏بصورة كيميائية حيوية مع العديد من بروتينات عائلة‎ ACtRIIb 5 ActRIla ‏يمكن أن يتفاعل‎
Yamashita et al, ( ‏وأكتيفين‎ «GDF «Nodal (BMP7 ‏الأخرى؛ بما في ذلك‎ TGF-beta 1995, J. Cell Biol. 130:217-226; Lee and McPherron, 2001, Proc. Natl.
Acad. Sci. 98:9306-9311; Yeo and Whitman, 2001, Mol. Cell 7: 949- 25
Com ‏هو مستقبل أساسي‎ ALK4 ‏يعتبر‎ .)957: Oh et al, 2002, Genes Dev. 16:2749-54 ‏كمستقبل للأكتيفين‎ ALK=T ‏ويمكن أن يعمل‎ A ‏للأكتيفين» بشكل محدد للأكتيفين‎ ١ ‏من النوع‎ .8 ‏بشكل محدد أكتيفين‎ (LA ١١ 8 ‏بروتين اندماج متوافق مع البشر يتألف من نطاق خارج الخلية لمستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏في المرحلة الثانية من‎ (ACtRIIA-hFC) ‏البشري‎ IgGl ‏ل‎ Fe ‏تقييم‎ Ulla ‏ويتم‎ (ACtRIIA) 5 ‏التجارب السريرية لعلاج مرضى يعانون من فقر الدم واضطرابات العظام المصاحبة لمرض الكلوي‎ ‏بالإضافة إلى المرضى الذين‎ (ESRD) end-stage renal disease ‏بالمرحلة النهائية‎ ‏يؤدي‎ ACtRIIA-hFe ‏يعانون من بيتا-كَلاسيمِيّة. في النساء الأصحاء في سن اليأس؛ يبدو أن‎ (Hgb) hemoglobin ‏والهيموجلويين‎ (Het) hematocrit ‏بدرجة كبيرة إلى زيادة مِكْدَاسُ الدّم‎ ‏الترابطية التي تتم‎ 8014١١ ‏بالإضافة إلى كثافة العظام المعدنية. مع ذلك؛ تظل هوية مركبات‎ 0 ‏تنحية أيوناتها بواسطة ©057-/8011 في تيار الدم غير معروفة.‎ ‏الوصف العام للاختراع‎ ‏؛ أو اضطراب الدم المصاحب‎ Anemia ‏في أحد الجوانب؛ يتم هنا توفير طرق لعلاج فقر الدم‎ ‏؛ باستخدام‎ ineffective erythropoiesis ‏لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال‎ ‏كمؤشر لاستجابة المريض للعلاج؛ فاعلية العلاج؛ أو الجرعة المناسبة لعلاج مريض‎ 60711 5 .7 ‏يعاني من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏نسيج‎ due ‏في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لتحديد مستوى و/أو نشاط 600711 في‎ ‏مأخوذة من مريض يعاني من فقر الدم؛ أو اضطراب؛ على سبيل المثال» اضطراب الدم المصاحب‎ ‏لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال. في بعض النماذج؛ يتم هنا توفير طريقة لتحديد‎ ‏مستوى و/أو نشاط 606711 في عينة نسيج مأخوذة من مريض يعاني من فقر الدم؛ أو‎ 0 ‏المصاحب لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير‎ and) ‏اضطراب»؛ على سبيل المثال» اضطراب‎ ‏سبيل المثال؛ مستوى و/أو نشاط‎ Ae) ‏الفعال» ومقارنته بمستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي‎ ‏المتوسط في عينة مأخودة من نفس النسيج لخاضع أو خاضعين يتمتعون بالصحة). في‎ 1 ‏بعض النماذج؛ يتم هنا توفير طريقة لتحديد مستوى و/أو نشاط 6006711 في عينة نسيج (مثل‎
Tye
-؟-
مصل/بلازماء دم؛ نخاع عظم؛ ‎(lad‏ أو كبد) لمريض يعاني من فقر ‎al‏ أو اضطراب»؛ على سبيل المثال» اضطراب الدم المصاحب لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال؛ ومقارنته بمستوى و/أو نشاط 60711 في عينة مأخوذة من نسيج مختلف للخاضع ‎Jie)‏ نسيج لا يكون
فيه مستوى 610711 مرتفع في مرضى يعانون من فقر الدم). في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج فقر الدم؛ أو اضطراب الدم المصاحب لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال» حيث تشتمل الطريقة على: (أ) تقييم مستوى و/أو نشاط 1 في ‎de‏ نسيج مأخوذة من الخاضع؛ و(ب) إذا زاد مستوى و/أو نشاط 60511 عن المستوى و/أو النشاط الطبيعي ل ‎«GDF11‏ يتم إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ‎١‏ إلى الخاضع. في بعض النماذج؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج فقر الدم؛ أو اضطراب الدم المصاحب 0 لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال» حيث تشتمل الطربقة على: (أ) يتم إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ‎oF‏ و(ب) مراقبة مستوى و/أو نشاط 60111 في عينة نسيج مأخوذة من الخاضع. في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج فقر الدم؛ أو اضطراب الدم المصاحب لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال» حيث تشتمل الطريقة على: (أ) يتم إعطاء مقدار جرعة من مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ‎«YF‏ (ب) تقييم مستوى و/أو نشاط 601711 في عينة 5 نسيج مأخوذة من الخاضع؛ و(ج) ضبط مقدار الجرعة من مثبط مستقبل الأكتيفين من النوع ؟ حيث؛ إذا زاد مستوى و/أو نشاط 60711 عن المستوى و/أو النشاط الطبيعي ل ‎«GDFI1‏ يزيد مقدار الجرعة من مثبط مستقبل الأكتيفين من النوع ‎oF‏ وحيث؛ إذا انخفض مستوى و/أو نشاط 1 عن مستوى و/أو نشاط 605711 الطبيعي»؛ ينخفض مقدار الجرعة من مثبط مستقبل الأكتيفين من النوع ‎LY‏ تشتمل اضطرابات الدم المصاحبة لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير 0 الفعال والتي يتم علاجها وفقاً للطرق الموصوفة هناء على سبيل المثال وليس الحصر؛ على ‎Landi‏ (على سبيل المثال؛ الثَلاِسِيمِيَةُ بيتا ‎beta thalassemia‏ )؛ متلازمة خلل التنسج النخاعي ‎myelodysplastic syndrome‏ « فقر ‎pall‏ المزمن المميت ‎chronic pernicious‏ ‎anemia‏ فقر الدم المنجلي ‎sickle cell anemia‏ ؛ فقر الدم متلازمة ‎Diamond Blackfan‏ 38 +؛ مستويات خلايا الدم الحمراء المنخفضة ‎decreased red blood cell levels‏ « أو الأرومَات الحَمْراءٍ السَوِنَةُ التلَون المنخفضة ‎decreased orthochromatic erythroblasts‏
ل (©0-/ا0). في نموذج ‎(Junie‏ يكون الخاضع الذي يتم علاجه وفقاً للطرق الموصوفة هنا عبارة عن إنسان. في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج فقر الدم في خاضع في ‎dala‏ لعلاج؛ حيث تشتمل الطريقة على: (أ) تقييم مستوى و/أو نشاط 60711 في عينة نسيج مأخوذة من الخاضع؛ و(ب) إذا زاد مستوى و/أو نشاط 60511 عن المستوى و/أو النشاط الطبيعي ل ‎¢«GDF11‏ يتم إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ؟ إلى الخاضع. علاوة على ذلك؛ في ‎oz ail) (any‏ يتم هنا توفير طريقة لعلاج كَلَسيمِيَّة ‎thalassemia‏ (على سبيل ‎Lard Jal‏ بيتا) في خاضع في حاجة لعلاج؛ حيث تشتمل الطريقة على: (أ) تقييم مستوى و/أو نشاط 606711 في عينة نسيج مأخوذة من الخاضع؛ و(ب) إذا زاد مستوى و/أو 0 تشاط 60511 عن المستوى و/أو النشاط الطبيعي ل ‎«GDF11‏ ‏يتم إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ‎Y‏ إلى الخاضع. في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج ثَلاَسيمِيَّة (على سبيل المثال» الثَّلاسِيمِيَّةُ بيتا) في خاضع في حاجة لعلاج؛ حيث تشتمل الطريقة على: (أ) يتم إعطاء مقدار جرعة من مثبط متقبل أكتيفين من النوع 7 (ب) تقييم مستوى ‎if‏ نشاط 60711 في عينة نسيج مأخوذة من الخاضع؛ و(ج) ضبط مقدار الجرعة من مثبط 5 مستقبل الأكتيفين من النوع ¥ حيث؛ إذا زاد مستوى و/أو نشاط 60511 إلى أعلى من مستوى و/أو نشاط 605711 الطبيعي؛ يزيد مقدار الجرعة من مثبط مستقبل الأكتيفين من النوع 7؛ وحيث؛ إذا قل مستوى و/أو نشاط 60511 إلى أقل من مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي؛ ينخفض مقدار الجرعة من مثبط مستقبل الأكتيفين من النوع 7. في بعض النماذج؛ يتم هنا توفير طريقة لزيادة مستويات خلايا الدم الحمراء أو الأرومّة الحَمْراءِ ‎Lal) 0‏ القَلون (©-/50) في خاضع في ‎clad] dala‏ حيث تشتمل الطريقة على: (أ) تقييم مستوى و/أو نشاط 60511 في عينة نسيج مأخوذة من الخاضع؛ و(ب) إذا زاد مستوى و/أو نشاط 1 إلى أعلى من مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي؛ يتم إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ؟ إلى الخاضع. في نماذج أخرى؛ يتم هنا توفير طريقة لزيادة مستويات خلايا الدم الحمراء أو الأرومّة الحَمْراءٍ ‎gall‏ الَلَوْن ‎(Ery-C)‏ في خاضع في حاجة ‎cle]‏ حيث تشتمل ‎Tye‏
—A— ‏(ب) تقييم‎ oF ‏الطريقة على: )1( يتم إعطاء مقدار جرعة من مثبط مستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏مستوى و/أو نشاط 60511 في عينة نسيج مأخوذة من الخاضع؛ و(ج) ضبط مقدار الجرعة من‎ ‏مثبط مستقبل الأكتيفين من النوع ¥ حيث؛ إذا زاد مستوى و/أو نشاط 605711 إلى أعلى من‎ ‏مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي؛ يزيد مقدار الجرعة من مثبط مستقبل الأكتيفين من النوع‎ 60711 Lia ‏؟» وحيث؛ إذا قل مستوى و/أو نشاط 60711 إلى أقل من مستوى و/أو‎ 5 .7 ‏الطبيعي؛ ينخفض مقدار الجرعة من مثبط مستقبل الأكتيفين من النوع‎ ‏في نماذج محددة؛ ينتج عن إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين من النوع 7 وفقاً للطرق الموصوفة هنا‎ ‏عدد كريات منخفض الأرومات الحمراء القّعِدَة ومتعددة الألوان (8-/ا51) في مرحلة متأخرة في‎ ‏المريض. في بعض النماذج؛ ينتج عن الإعطاء المذكور مستوى منخفض من بيليروبين (على‎ ‏ينتج عن الإعطاء‎ Sal ‏في المصل) في المريض. في بعض‎ Cg lll ‏مستوى‎ (JB ‏سبيل‎ 10 ‏المذكور مستوى منخفض من لاكتات ديهيدروجيناز (على سبيل المثال؛ مستوى لاكتات‎ ‏في المريض. في بعض‎ (serum ‏في المصل‎ 1801816 dehydrogenase ‏ديهيدروجيناز‎ ‏النماذج؛ ينتج عن الإعطاء المذكور مجمل خلايا نخاع عظم و/أو طحال منخفض في المريض.‎ ‏شبكية منخفضة في المريض. في بعض‎ DA ‏في بعض النماذج؛ ينتج عن الإعطاء المذكور عدد‎ ‏النماذج؛ ينتج عن الإعطاء المذكور مستويات نقل تشبع منخفضة و/أو مستويات حديد جهازية‎ 5 ‏منخفضة في المريض. في نماذج مفضلة؛ ينتج عن إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ؟ وفقاً‎ ‏و/أو زيادة‎ add ‏للطرق الموصوفة هنا زيادة عدد خلايا الدم الحمراء؛ زيادة مستويات مِكُدَاسٌ‎ ‏في المريض. في نماذج محددة؛ ينتج عن إعطاء مثبط‎ Hemoglobin ‏مستويات الهيموجلويين‎ mean | ‏مستقبل أكتيفين من النوع ؟ وفقاً للطرق الموصوفة هنا متوسط حجم جسيمي‎ mean corpuscular ‏؛ متوسط هيموجلويين جسيمي‎ (MCV) corpuscular volume 20 ‏المريض. في نماذج محددة؛ يتم تقييم هذه‎ AMCH ‏و/أو تركيز‎ «(MCH) hemoglobin ‏النتائج في الخاضع بالإضافة إلى تقييم مستوى و/أو نشاط 60611 في الخاضع.‎ ‏في نماذج محددة؛ يكون متبط ال8014 الذي يمكن استخدامه في الطرق الواردة هنا عبارة عن بولي‎ ‏اختيارها من المجموعة‎ oi amino acid ‏يشتمل على متوالية حمض أميني‎ polypeptide ‏ببتيد‎ ‏نسبة تطابق تبلغ 96925 مع متوالية‎ Fad) ‏التي تتألف من: نسبة تطابق تبلغ 9698 مع متوالية‎ 5
Le
رقم: ؟؛ نسبة تطابق تبلغ 9094 مع متوالية رقم: ؟؛ متوالية رقم: ‎¢F‏ نسبة تطابق تبلغ 96960 مع متوالية رقم: ؟؛ نسبة تطابق تبلغ 9695 مع متوالية رقم: ؟؛ نسبة تطابق تبلغ 9094 مع متوالية
رقم: ؟؛ متوالية رقم: ؟؛ نسبة تطابق تبلغ 90968 مع متوالية رقم: 7؛ نسبة تطابق تبلغ 9695 مع متوالية رقم: 7؛ نسبة تطابق تبلغ 9094 مع متوالية رقم: ١؛‏ متوالية رقم: ١؛‏ نسبة تطابق تبلغ
9690 مع متوالية رقم: ‎¢V‏ نسبة تطابق تبلغ 96928 مع متوالية رقم: ‎¢V‏ نسبة تطابق تبلغ ‎YAN‏ ‏مع متوالية رقم: ‎€V‏ متوالية رقم: ‎¢V‏ نسبة تطابق تبلغ ‎909٠0‏ مع متوالية رقم: ‎VY‏ نسبة تطابق
تبلغ ©9692 مع متوالية رقم: ‎Y‏ 1 نسبة تطابق تبلغ 96978 مع متوالية رقم: ‎VY‏ متوالية ‎OY ad)‏
نسبة تطابق تبلغ ‎969٠‏ مع متوالية رقم: ١٠؛‏ نسبة تطابق تبلغ 9695 مع متوالية رقم: ١١٠؛‏ نسبة تطابق تبلغ 9094 مع متوالية رقم: ‎VY‏ متوالية رقم: ‎VY‏ نسبة تطابق تبلغ 6 969 مع متوالية رقم:
‎Ye 0‏ نسبة تطابق تبلغ ©9698 مع متوالية رقم: + ‎€F‏ نسبة تطابق تبلغ 9094 مع متوالية رقم: + ‎¢Y‏ ‏متوالية رقم: 0 ‎¢Y‏ نسبة تطابق تبلغ 9096 مع متوالية رقم: ١؟؛‏ نسبة تطابق تبلغ ©9692 مع متوالية رقم: ١9؛‏ نسبة تطابق تبلغ 9698 مع متوالية رقم: ١؟؛‏ ومتوالية رقم: ‎.7١‏ في بعض ‎oz Sail‏ مثبط ‎is‏ ال8014 بروتين اندماج متوافق مع البشر يتألف من نطاق خارج الخلية ل
‎A‏ العا ونطاق ‎Fe‏ ل ‎IgGl‏ بشري. في نموذج أكثر تحديداً؛ يكون مثبط ‎8081١‏ عبارة عن
‏15 بولي ببتيد يشتمل على متوالية الحمض الأميني لمتوالية رقم: ‎.١7‏ في أحد النماذج؛ يتم إعطاء متبط اله عن طريق الحقن غير المعوي. في نماذج محددة؛ يكون مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي عبارة عن مستوى و/أو نشاط 60611 متوسط في عينة نسيج لواحد أو أكثر من الخاضعين الأصحاء (على سبيل ‎(JU)‏ خاضعين يتمتعون بالصحة في نفس الفئة العمرية و/أو
‏من نفس النوع). في بعض النماذج؛ تتم مقارنة مستوى و/أو نشاط 60711 في عينة نسيج
‏20 لخاضع تمت معالجته بمستوى و/أو نشاط 60111 في عينة مأخودة من نفس النسيج لواحد أو أكثر من الخاضعين الأصحاء. في بعض النماذج؛ يكون النسيج الذي يتم فيه تقييم مستوى و/أو نشاط 60511 عبارة عن دم كامل؛ مصل الدم/يلازماء نخاع ‎adie‏ كبد؛ أو طحال. في أحد النماذج؛ يكون النسيج الذي يتم فيه تقييم مستوى و/أو نشاط 600711 عبارة عن مصل. يمكن
‏قياس مستوى و/أو نشاط 60511 بواسطة أي طريقة معروفة في المجال أو موصوفة هنا. في
‏5 أحد النماذج؛ يكون مستوى و/أو نشاط 60511 عبارة عن مستوى البروتين ل ‎.GDFI1‏ في أحد النماذج» يكون مستوى و/أو نشاط 60511 عبارة عن مستوى ‎.GDF11 JMRNA‏ في نماذج
‎Tye ym
محددة؛ يعتبر مستوى 5 ‎off‏ نشاط 60511 مرتفعاً عن مستوى 5 ‎off‏ نشاط 605711 الطبيعي
عندما يكون مرتفعاً بنسبة تبلغ ‎96٠١0‏ على الأقل» 9675 على الأقل» ‎967٠‏ على ‎(JN‏ 9640
على الأقل؛ ‎965٠‏ على الأقل؛ % على الأقل» 96175 على ‎%A (JE‏ على الأقل؛ 96960
على الأقل» ‎96٠00‏ على الأقل» 967050 على الأقل؛ ‎9670٠0‏ على الأقل؛ أو ‎9650٠‏ على الأقل
عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي. في نماذج محددة؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 1 مرتفعاً عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي عندما يكون مرتفع بنسبة ©9672 على
‎%o (JE‏ على ‎(JY)‏ 9675 على الأقل؛ ‎96٠00‏ على ‎JB‏ أو ‎9670٠0‏ على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي. في نموذج محدد؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 60511 مرتفعاً عن مستوى و/أو نشاط 606511 الطبيعي عندما يكون مرتفعاً بنسبة تبلغ ‎968٠‏ على
‏0 الأقل عن مستوى و/أو نشاط 6011 الطبيعي. في نموذج محدد؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 1 مرتفعاً عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي عندما يكون مرتفعاً بنسبة تبلغ
‏0 على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60611 الطبيعي. في نموذج محدد؛ ‎ing‏ مستوى
‏و/أو نشاط 60511 مرتفعاً عن مستوى و/أو نشاط 60111 الطبيعي عندما يكون مرتفعاً بنسبة
‏تبلغ 96700 على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي. في أحد النماذج؛ يعتبر
‏5 مستوى و/أو نشاط 606511 مرتفعاً عن مستوى و/أو نشاط 60111 الطبيعي عندما يكون مرتفعاً بنسبة تبلغ 1,0 أو ؟ مرة على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60111 الطبيعي. في بعض النماذج؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 60511 منخفضاً عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي
‏عندما يكون منخفضاً بنسبة تبلغ ‎96٠١‏ على الأقل» ‎%Y‏ على الأقل» 96725 على الأقل؛ 9676
‏على الأقل» ‎964٠‏ على ‎965٠ (JN‏ على الأقل» 96160 على ‎(J‏ 96760 على ‎(JN‏ 96175
‏0 على الأقل» 9680 على الأقل؛ أو 9696 على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي. في بعض النماذج؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 60511 منخفضاً عن مستوى و/أو نشاط ‎GDF11‏ ‏الطبيعي عندما يكون منخفض بنسبة 9675 على الأقل» ‎965٠‏ على الأقل» 9675 على الأقل؛ أو
‎0٠‏ على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 605711 الطبيعي. في أحد النماذج؛ يعتبر مستوى
‏و/أو نشاط 60511 منخفضاً عن مستوى و/أو نشاط 605711 الطبيعي عندما يكون منخفض
‏5 بنسبة 9675 على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 605711 الطبيعي. في أحد النماذج؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 606711 منخفضاً عن مستوى و/أو نشاط 601711 الطبيعي عندما يكون
‎Tye
-١١- ‏على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي. في أحد‎ 965٠ ‏منخفضاً بنسبة تبلغ‎ ‏النماذج؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 60511 منخفضاً عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي‎ ‏عندما يكون منخفضاً بنسبة تبلغ 9675 على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي. في‎ 60511 ‏النماذج؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 60711 منخفضاً عن مستوى و/أو نشاط‎ asf ‏الطبيعي عندما يكون منخفضاً بنسبة تبلغ 1.5 أو ؟ مرة على الأقل عن مستوى و/أو نشاط‎ 5 ‏الطبيعي.‎ 1 ‏شرح مختصر للرسومات‎ ‏يخفف من متغيرات الدم في‎ )010141/8-170( ١ ‏لمتوالية رقم‎ (lal ‏يوضح أن المناظر‎ ١ ‏شكل‎ ‎Skow LC et al., Cell 34: ( Hbb ‏فئران مصابة ب ]-كَلَسيمِيَّة. تمت معالجة فئران اطا/راط‎ ‏مجم/كجم من وزن الجسم مرتين في‎ ٠١( 080182-50 ‏أو‎ PBS ‏ب‎ )1043-52, 1983 0
Sage ٠ 8 ‏يوم. تم تقييم متغيرات الدم في الأيام‎ Te ‏الأسبوع) لمدة‎ ‏يكون تقييم (أ) عدد خلايا الدم الحمراء» (ب) مِكُدَاسٌ الدَّم و(ج) هيموجلوبين مصحوياً بإنخفاض‎ red blood ‏الشَبَكِيّات. كما يوضح تحليل متغيرات خلايا الدم الحمراء في الدورة الدموي‎ EK ‏(د)‎ ‏(و)‎ «(MCV) mean corpuscular volume ‏زيادة (ه) متوسط حجم جسيمي‎ (RBC) cells ‏في الفئران التي تمت‎ (MCHC) MCH ‏و(ز) تركيز‎ (MCH) ‏متوسط هيموجلويين جسيمي‎ 5 ‏أظهر‎ (&) . antioxidant ‏(ح) إجمالي حالة مضاد الأكسدة‎ -MACIRIIA-Fc ‏معالجتها ب‎ ‏وخلايا مستهدفة. (ي) كما تم‎ LSE ‏تحليل البنية الشكلية انخفاض في تفاوْتُ الكُرَيّات؛ الكريات‎ ‏؛ (ك) تصنيع الترانسفيرين‎ Systemic iron levels ‏تقييم مستويات الحديد الجهازية‎ ‏و(م) كما تم تقييم تشبع مستويات‎ transferrin ‏ترانسفيرين‎ (J) ‏؛‎ transferrin synthesis ‏الفيريتين على فثران مصابة بِالقَلاَسِيمِيَّة. (ن) كما تم تقييم عدد الخلايا الالتهابية. تم تقييم تأثيرات‎ 0 ‏على تضخم الطحال في فئران مصابة بالتَلاسيمِيّة بواسطة (س) وزن الطحال‎ mACtRIIA-Fc ‏وإجمالي عدد الخلايا. كما انخفض (ع) عدد وتمدد الأرومات الحمراء لنخاع العظم (التبقيع‎ ‏في الفئران التي تمت معالجتها ب‎ (hematoxylin staining ‏/هيماثوكُسيلين‎ eosin ‏بالأيوزين‎ ‎SOF yy ‏تم تحديد (ف) الأرومات الحمراء لنخاع عظم والطحال بواسطة تعداد الخلايا‎ .MACERIIA-Fc ‏ب 184119, م* > #.,. لا = ١-ه لكل تجرية على حدة.‎ staining ‏المتدفقة بواسطة التبقيع‎ ‏يوضح أن 2-6 (01//8015 يقل من تكون الكريات الحمراء غير الفعال في فئران مصابة‎ ١ ‏شكل‎ ‏تم تجميع نخاع العظم والطحال وتم تقييم تمايز الأرومة الحمراء بواسطة تعداد‎ (z=) ‏بالثَلاَسيمِيَّة.‎ ‏الخلايا المتدفقة بواسطة التبقيع ب 6071/185119 وتوزيع ©50/55. (د) تحليل مستويات‎ 5
Reactive oxygen ‏البيليروبين الإجمالية والمباشرة. تم تقييم (ه) توليد أنواع الأكسجين التفاعلية‎ ‏على تمايز الأرومة الحمراء الذاتية الأولية بواسطة تعداد الخلايا المتدفقة‎ (ROS) species ‏(و) تحليل ذويانية‎ . dichlorodihydrofluorescein ‏كلورو داي هيدرو فلوريسين‎ (gla ‏باستخدام‎ ‏ساعة ب‎ $A ‏الأرومات الحمراء الذاتية الأولية التي تمت معالجتها لمدة‎ Land ‏الهيموجلويين على‎ ‏م ١ح *-ه لكل‎ *%%p ‏م** > بي‎ (, vo > ‏م*‎ PBS ‏أر‎ mActRIIA-Fc 0 ‏تجرية على حدة.‎ ‏شكل © يوضح تأثير ©]-ل/ا(01/8015 على تلاشي الخلايا للأرومات الحمراء من فئران مصابة‎ ‏بالثلاسيمِيَّة. التعبير الوراثي عن 85-1 على الأرومات الحمراء لنخاع العظم (أ) والطحال (ب)‎
Tunel ‏أو 5. (ج) تمت زيادة التبقيع ب‎ MACIRIIA-Fc ‏من فئران تمت معالجتها ب‎ .011 8-16 ‏معالجة ب‎ gh ‏للأرومات الحمراء في‎ 5 ‏شكل ؛ يوضح التعبير الوراثي عن مركبات 8014 الترابطية في طحال فئران مصابة‎ 8 ‏أكتيفين‎ (A ‏أكتيفين‎ 8004١١ ‏عن‎ Mma ‏بالثَلاَسيمِيَّة. (أ) تمت زيادة مستويات التعبير الوراثي‎ ‏في حيوانات تم علاجها ب 8-76 018001. (ب) تحليل بقعة وسترن لمستويات‎ GDF11 ‏بروتين 60511؛ التي انخفضت في حيوانات تم علاجها ب ©7]-8/ا008001. أظهر (ج) تبقيع‎ ‏تمت‎ hig ‏كيميائي هيستولوجي مناعي لنخاع العظم ل 107-11 عدم وجود تغيير بين نمط بري‎ 0 .MACtRIIA-Fc ‏معالجتها ب‎ ‏الأرومات‎ ads ‏على التعبير الوراثي عن 60511 في‎ MACIRIA-FC ‏شكل © يوضح تأثير‎
GDF ‏الحمراء الذاتية الأولية. )1( تحليل كيميائي هيستولوجي مناعي لمسار إرسال إشارات أكتيفين/‎ ‏مما يظهر‎ ase Yo ‏لمدة‎ MACRIIA-FC ‏أو‎ PBS ‏على فئران مصابة بالثَلاَسيِمِيَّة تم علاجها ب‎
Tye
١ ‏و0-501802 على فئران مصابة بِالثَلاسِيمِيّة. (ب)‎ ActRIN (GDF11 ‏مستويات مرتفعة من‎ ‏أكتيفين 8 و6011 على فئران مصابة‎ A ‏تحليل كيميائي هيستولوجي مناعي لأكتيفين‎ ‏بالثَلاسيمِيَّة. مقارنة بنماذج أخرى من فقر الدم. (ج) تحليل 7805 للأرومات الحمراء الذاتية‎ ‏لمدة £4 ساعة باستخدام أجسام مضادة‎ MACIRIIA-FC ‏أو‎ PBS ‏لَلأَسيمِيَّة أولية تم علاجها ب‎ ‏منشطر. يتم‎ GDF/GDF11 ‏أكتيفين 8؛ ببتيد 60511 معزز ويبتيد‎ (A ‏نوعية مقابل أكتيفين‎ 5 ‏عرض كمية تبقيع 0711© على قضبان رسم بياني. (د) تحليل كيميائي هيستولوجي مناعي‎ ‏أو‎ PBS ‏تم علاجها ب‎ Hard ‏مصابة‎ od ‏صورة تعبير وراثي أولية عن 606511 في طحال‎ .6 - ‏م* جح .ىلا‎ mActRIIA-Fc ‏شكل 6 يوضح أن تثبيط 60511 يقلل من تكون الكريات الحمراء غير الفعال في فئران مصابة‎ ‏بالقَلاسيمِيَّة. (أ) تم تجميع نخاع العظم والطحال وتم تقييم تمايز الأرومة الحمراء الذاتية الأولية‎ 0 ‏(ب) تم‎ -FSC/SSC ‏وتوزيع‎ CDT1/TERILIY ‏المتدفقة بواسطة التبقيع ب‎ LAY ‏بواسطة تعداد‎ ‏على تمايز الأرومة الحمراء الذاتية الأولية بواسطة تعداد الخلايا المتدفقة‎ ROS ‏تقييم توليد‎ .4 - ‏باستخدام داي كلورو داي هيدرو فلورسين . م* < م لا‎ ‏يوضح اختبار بيني 115/8 للكشضف عن 60711 في المصل. (أ) عبارة عن رسم‎ V ‏شكل‎ ‎0020118-76 ‏تخطيطي للاختبار. (ب) تم تغليف الأطباق ب © ميكرو جرام/مللي لتر من‎ 5 ٠١ OA ‏الارتباط الجيني (صفر نانو جرام/ميكرو‎ sage ‏وجرعات زائدة من 60711 ناتج عن‎ ‏أو تمت إضافة‎ (LA ‏نانو جرام/ميكرو لترء 7,5 نانو جرام/ميكرو‎ v0 ‏نانو جرام/ميكرو لترء‎ ‏إلى أطباق مغلفة ب ©]-8/ 01801 تم غسل‎ )* ٠0/١ ‏إلى‎ 4/١ ‏أمصال مقارنة (تخفيف بمقدار‎ ‏يليه الكشف باستخدام‎ (GDF8/11 ‏الأطباق وتم الكشف عن بروتين مقيد بواسطة أجسام مضادة ل‎ ‏مضاد 196 لأرنب مقترن بإنزيم بروكسيداز الفجل الحار. يرتبط بروتين 60511 بالأطباق‎ 0 ‏بطريقة معتمدة على الجرعة.‎
B= ‏يوضح الكشف عن مستويات مرتفعة من 1011© في مصل مرضى مصابين‎ A ‏شكل‎ ‏وعينات مقارنة تتمتع‎ Baud ‏ثَلَسِيمِيَّة. تم الحصول على الأمصال من مرضى يعانون من‎ ‏بالصحة.‎ ‎Tye vg ‏للكشف عن أكتيفين 8/ في المصل. )1( عبارة عن رسم‎ ELISA ‏شكل 9 يوضح اختبار بيني‎
ACtRIIA-FC ‏تخطيطي للاختبار. (ب) تم تغليف الأطباق ب © ميكرو جرام/مللي لتر من‎ ‏نانو جرام/ميكرو‎ ١( ‏ناتج عن عودة الارتباط الجيني‎ A ‏وجرعات زائدة من أكتيفين‎ )١ ‏(متوالية رقم.‎ ‏نانو جرام/ميكرو لترء 1,5 نانو جرام/ميكرو لتر) أو تتم‎ vio ‏نانو جرام/ميكرو لترء‎ 0,١ ‏لترء‎ ‏تم غسل‎ ACtRIA-Fc ‏إلى أطباق‎ )2 00/١ ‏إضافة أمصال مقارنة (تخفيف بمقدار ١/؛ إلى‎ 5 ‏يليه الكشف باستخدام‎ A ‏الأطباق وتم الكشف عن بروتين مقيد بواسطة أجسام مضادة لأكتيفين‎ ‏لأرنب مقترن بإنزيم بروكسيداز الفجل الحار. أكتيفين يرتبط البروتين بالأطباق بطريقة‎ 96 alias “PB ‏في مصل مرضى مصابين ب‎ 8 pais] ‏معتمدة على الجرعة. (ج) الكشف عن مستويات‎ ‏وعينات مقارنة تتمتع‎ Band ‏تم الحصول على الأمصال من مرضى يعانون من‎ dard ‏المصل في مرضى مصابين‎ BA ‏بالصحة. لم يكن هناك تغيير في مستويات أكتيفين‎ 0 ‏بالثّلاسيمِيَّة.‎ ‏يوضح اختبار بيني 5115/8 للكشف عن أكتيفين 8 في مصل. () عبارة عن رسم‎ ٠١ ‏شكل‎ ‎ACtPJIA-FC ‏تخطيطي للاختبار. (ب) تم تغليف الأطباق ب 0 ميكرو جرام/مللي لتر من‎ ‏نانو‎ 0.١ al ‏نانو جرام/ميكرو‎ ١( ‏وجرعات زائدة من أكتيفين 8 ناتج عن عودة الارتباط الجيني‎ ‏نانو جرام/ميكرو لترء 7,5 نانو جرام/ميكرو لتر) أو تمت إضافة أمصال‎ 0,0 al ‏جرام/ميكرو‎ 5 ‏تم غسل الأطباق وتم‎ ACtRIA-Fc ‏إلى أطباق‎ )2 ٠00/١ ‏إلى‎ 6/١ ‏مقارنة (تخفيف بمقدار‎ 19G ‏الكشف عن بروتين مقيد بواسطة أجسام مضادة لأكتيفين 8؛ يليه الكشف باستخدام مضاد‎ ‏لأرنب مقترن بإنزيم بروكسيداز الفجل الحار. يرتبط بروتين أكتيفين 8 بالأطباق بطريقة معتمدة‎ ‏على الجرعة. (ج) الكشف عن مستويات أكتيفين 8 في مصل مرضى مصابين ب 0-كثَلاسِيمِيَّة. تم‎ ‏وعينات مقارنة تتمتع بالصحة. لم يكن‎ Bad ‏الحصول على الأمصال من مرضى يعانون من‎ 0 ‏هناك تغيير في مستويات الأكتيفين 8 في المصل في مرضى مصابين بالثَلاسيمِيَّة.‎ ‏إلى فئران 6/ا6578 ذات نمط بري لا يغير من‎ MACIRIIA-FC ‏يوضح أن إعطاء‎ ١١ ‏شكل‎ ‏الدّم؛ (ج)‎ Gifs ‏الدم الحمراء» (ب)‎ LDA ‏الخاصة بها. أظهر تقييم (أ) عدد‎ and) ‏متغيرات‎ ‎BE ‏كان هناك انخفاض طفيف (د) في‎ .MACRIA-FC ‏هيموجلوبين عدم وجود ارتباط مع‎ red blood cells ‏إلى تغيير متغيرات خلايا الدم الحمراء‎ MACRIA-Fc ‏لم يؤدي‎ BE 5
Tye
-١- ‏(و)‎ «(MCV) mean corpuscular hemoglobin ‏متوسط حجم جسيمي‎ (E) ‏مثل‎ (RBC) ‏أو (ز) تركيز‎ (MCH) mean corpuscular hemoglobin ‏متوسط هيموجلويين جسيمي‎ ‏لكل تجرية على حدة.‎ o-Y = Nv v0 > *p (MCHC) MCH ‏ذات نمط بري لم يكن له‎ C5TBLJ6 ‏إلى فئران‎ MACERIIA-Fe ‏يوضح أن إعطاء‎ ١١ ‏شكل‎ ‏تأثير على عدد خلايا الطحال ونخاع العظم للفئران.‎ 5 ‏يوضح أن ©]-8/ 1018015 يحفز تمايز متعلق بسلسلة الكريات الحمراء من خلال تثبيط‎ ١١ ‏شكل‎ ‎CD34+/CD36+ ‏متعلق بسلسلة الكريات الحمراء لخلايا‎ lai ‏(أ-ج) تم إجراء‎ .GDF11 ‏#ميكرو جرام/مللي لتر من‎ ٠ +/- (EPO ‏بواسطة الاستزراع في أوساط تحتوي على‎ ‏تم تحليل (أ) سلالات شبيهة بالكريات الحمراء؛ (ب) تكاثر الخلية و(ج) مواد‎ smACtRIIA-Fc ‏منتجة للكريات الحمراء. تم تحليل (د-و) تمايز متعلق بسلسلة الكريات الحمراء لخلايا‎ 0 ‏في أوساط تحتوي‎ (BM) ‏عند زراعتها بشكل مشترك مع خلايا نخاع العظم‎ CD34+/CD36+ ‏ميكرو جرام/مللي لتر من 0080141/8-16؛ (د) سلالات شبيهة بالكريات‎ ٠١ +/- (EPO ‏على‎ ‏الحمراء؛ (ه) تكاثر الخلية و(و) مواد منتجة للكريات الحمراء. (ز -ح) تم إجراء تمايز متعلق‎ +/- (EPO ‏بسلسلة الكريات الحمراء لخلايا +0036 بواسطة الاستزراع في أوساط تحتوي على‎ (MACIRIIA-FC ‏ميكرو جرام/مللي لتر من‎ ٠٠١+/- 600711 ‏"نانو جرام/مللي لتر من‎ ٠١ 5
GPA+ ‏(ز) تكاثر الخلية و(ح) تم تحليل النسبة المئوية لمواد منتجة للكريات الحمراء‎ ‏الوصف التفصيلي:‎ ‏نظرة عامة : يتعلق الاختراع الحالي بتوفير طرق لعلاج فقر الدم؛ أو أمراض أو حالات‎ ٠-٠ ‏مرضية مصاحبة لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال؛ باستخدام مستوى و/أو نشاط‎ ‏كمؤشر لاستجابة المريض للعلاج بمثبط لمستقبل أكتيفين من النوع 7؛ فاعلية العلاج‎ 60711 0 ‏أو الجرعة المناسبة للعلاج باستخدام مثبط لمستقبل أكتيفين‎ oF ‏بمثبط لمستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏تشتمل الأمراض المصاحبة لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال التي‎ .١ ‏من النوع‎ ‏(على‎ Lard ‏على سبيل المثال وليس الحصر؛ على‎ (lia ‏يمكن علاجها وفقاً للطرق الموصوفة‎ ee Lal al OR ‏متلازمة‎ (beta thalassemialiy Za DE ‏سبيل المثال؛‎
_ أ \ _ chronic pernicious anemia ‏فقر الدم المزمن المميت‎ » myelodysplasia syndrome ‏تشتمل‎ .Diamond Blackfan ‏وفقر الدم متلازمة‎ ¢ sickle cell 8060018 ‏؛ فقر الدم المنجلي‎ ‏الحالات المرضية المصاحبة لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال التى يمكن علاجها‎ ‏على سبيل المثال وليس الحصر؛ على مستويات خلايا الدم الحمراء‎ (lis ‏وفقاً للطرق الموصوفة‎ clas Vlg ‏منخفضة؛ مستوبات مِكُدَاسٌ الدّم المنخفضة ؛‎ (ug lagen ‏المنخفضة؛ مستويات‎ 5 ‏في أحد النماذج؛ يتم هنا توفير طرق لعلاج فقر الدم.‎ (Ery=C) ‏الحَمْراءٍ £50 القلوؤن المنخفضة‎ ‏الثَّلاسِيمِيَّةُ بيتا). في أحد‎ (JB ‏(على سبيل‎ Lendl ‏في أحد النماذج؛ يتم هنا توفير طرق لعلاج‎ ‏الدم الحمراء المنخفضة أو طرق لزيادة‎ LDA ‏النماذج؛ يتم هنا توفير طرق لعلاج مستويات‎ ‏الدم الحمراء. يمكن أن يكون مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ¥ مستخدم في‎ LDA ‏مستويات‎ ‏مثل أي من المثبطات‎ (ACRIIB ‏و/أو‎ ACtRIA ‏الطرق الموصوفة هنا عبارة عن مشبط ل‎ 0 ‏الموصوفة هنا أو المعروفة في المجال. في نموذج مفضل؛ يكون مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏عبارة عن بروتين اندماج متوافق مع البشر يتألف من نطاق خارج الخلية ل 8015/8 ونطاق‎ " .)١ ‏على سبيل المثال» متوالية رقم:‎ "ActRIIA-Fc,") ‏بشري‎ IgGl ‏ل‎ Fe ‏مستويات 600711 فى دم مرضى من‎ sal) ‏على اكتشاف أنه تتم‎ Liga ‏تعتمد الطرق الواردة هناء‎
ActRIIA-mFc ‏البشر مصابين ببيتا- كَلأَسِيمِيَّة وفي نموذج فأري مصاب ببيتا-كَلاسيمِيَّة؛ وأن‎ 5 ‏فى نموذج فأري‎ GDF 11 ‏لقارض) يقلل من مستويات مرتفعة من‎ IgG ‏اعم مدمج ب‎ IA) ‏مُصاب ببيتا- كَلأَسيمِيَّة (راجع الأمثلة). علاوة على ذلك؛ بدون التقيد بنظرية معينة؛ يعمل احتجاز‎
Gundy ‏على تصحيح تكون الكريات الحمراء غير الفعال‎ ACtRIA-MFC ‏مركب ترابطي بواسطة‎ ‏من فقر الدم في نموذج فأري تجريبي للكَلأَسيِمِيَّة متوسطة (فئران 211//1/11). كما هو موضح‎
ActRIIA-mFc (Hbbthl/thl) ‏يؤدي علاج فئران مصابة بالثَلأسيميَّة‎ La ‏في الأمثلة الواردة‎ 0 mean cell ‏هيموجلوبين» متوسط حجم الخلية‎ (alll Julie ‏إلى زبادة عدد خلايا الدم الحمراء؛‎ ‏ومتوسط خلية الهيموجلوبين» زيادة الأرومّات الحَمْراءٍ السَوِيَةٌ الَلَون (0-/0ع)؛‎ (MCV) volume )50/-8( ‏تقليل مجموع خلايا نخاع العظم والطحال؛ تقليل الأرومات الحمراء القٌّعِدَة/متعدد الألوان‎ ‏في مرحلة متأخرة؛ في الطحال ونخاع العظم؛ تقليل مستويات البيليرويين (مما يدل على انخفاض‎ ‏الحمراء)؛ وتقليل الخلايا الاستماتية . علاوة على ذلك؛ تعتمد الطرق الواردة‎ pall WA ‏في تدمير‎ 5
Tye
“yy ‏في المعمل يعمل على تثبيط نمو مواد منتجة‎ GDF-11 ‏هناء جزئياً» على اكتشاف أن نظام زراعة‎ ‏على إنقاذ هذا التأثير‎ ACtRIA-MFC ‏للكريات الحمراء مشتقة من نخاع عظم بشري ويعمل‎ ‏على‎ (GDF-11 ‏المثبط (راجع الأمثلة). وإجمالاً» تشير البيانات الموضحة هنا إلى أن مستويات‎ ‏و/أو المصل؛ يمكن أن تحدد أي من المن المرضى‎ pall ‏مستويات 605711 في‎ (JU ‏سبيل‎ ‏ويمكن استخدامها لمراقبة الاستجابة السريرية للعقار. كما تدل‎ ACtRIA-FC ‏يمكن أن يستجيب ل‎ 5
ActRIIA- ‏أى‎ (ActRIIA-mFc ‏سبيل المثال‎ le) ACtRIA-Fc ‏البيانات الواردة هنا على أن‎ ‏المصاحب لتكون الكريات الحمراء غير‎ pall ‏يعتبر مفيداً في علاج فقر‎ )١ ‏متوالية رقم:‎ Jie hFC ‏الفعال.‎ ‏الاكتشافات الموصوفة هناء الموضحة في الأمثلة؛ على أنه يمكن استخدام الكشف عن‎ Jas ‏كمرقم (على سبيل المثال» مصل مرقم حيوي) لمدى وجود تكون الكريات‎ )١( ‏مستويات و/أو نشاط‎ 0 ‏كمرقم لقياس استجابة المريض لمثبط لمستقبل أكتيفين من‎ (Y) ‏الحمراء غير الفعال في مربض»‎ ‏أو (©) لتقييم التأثيرات الديناميكية الدوائية لمثبط لمستقبل أكتيفين‎ ((ActRIIA-Fc ‏(مثل‎ Y ‏النوع‎ ‎cae ‏في مريض بعد العلاج؛ حيث يكون المريض عبارة عن‎ (ACRIIA-Fe ‏(مثل‎ ١ ‏من النوع‎ ‏يعاني من فقر الدم أو مرض مصاحب لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال (مثل‎ 60511 ‏بالتالي؛ في نماذج محددة؛ يمكن استخدام‎ (Bandit ‏على سبيل المثال؛‎ Landi 5 ‏في الطرق الموصوفة هنا كمؤشر لفاعلية العلاج ب 801118-16 (على سبيل المثال؛‎
ACtRIIA-FC ‏و/أو كمؤشر لغياب الاستجابة للعلاج ب‎ )١ ‏متوالية رقم:‎ Jie ActRIIA-hFC ‏بالإضافة إلى ذلك؛ على النحو‎ L(Y ‏مثل متوالية رقم:‎ ActRIA-hFC ‏(على سبيل المثال»‎ ‏الموصوف في هذه الوثيقة؛ يمكن استخدام 10611 كمرقم جزيئي موثوق فيه لتقييم فاعلية فترة‎ ‏علاوة على‎ .)١ ‏متوالية رقم:‎ Jie ACtRIA-hFC ‏العلاج لذ 8011/8-76 (على سبيل المثال»‎ 0 ‏ذلك» في نموذج محدد؛ يتم هنا توفير طريقة تشتمل على الكشف عن مستوى و/أو نشاط‎ ‏في الدم (على سبيل المثال؛ الكشف عن التعبير الوراثي غير الطبيعي في مرض‎ 1 ‏مثل‎ oF ‏مصاحب لتكون الكريات الحمراء غير الفعال)؛ وإعطاء مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع‎ .GDF11 ‏بجرعة تعتمد على مستوى و/أو نشاط‎ ActRIIA-Fc ‏*-؟ طرق تشخيصية/توقعية/علاجية‎ 5
Tye
-م١-‏ في أحد الجوانب؛ تشتمل الطرق الواردة هنا على تحديد مستوى و/أو نشاط 60511 في عينة نسيج لخاضع ‎Ao)‏ سبيل ‎(JU‏ مصل أو دم)؛ اختيار الخاضعين الذين لديهم مستوى و/أو نشاط 60511 مرتفع عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي؛ وعلاج الخاضعين الذين لديهم مستوى و/أو نشاط 605711 مرتفع بمثبط لمستقبل أكتيفين من النوع 7. يمكن أن تدل مستويات و/أو نشاط 605711 المرتفع في عينة نسيج لخاضع (على سبيل ‎JU)‏ مصل أو دم) على أن المريض يمكن أن يستجيب للعلاج بمثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟. في أحد نماذج 0الطرق الموصوفة هناء يكون مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ؟ عبارة عن ‎ACtRIIA-FC‏ مثل ‎Je) 8011/2176‏ سبيل المثال؛ متوالية رقم: ‎.)١‏ ‏كما يمكن استخدام مستوى و/أو نشاط 60511 لتقييم الجرعة المناسبة لخاضع مرشح للعلاج 0 بمثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎oF‏ لتقييم ضبط جرعة مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ‎Y‏ أثناء العلاج؛ و/أو لتقييم جرعة مداومة مناسبة لمثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع 7. إذا كان مستوى و/أو نشاط 60511 خارج المستوى و/أو النشاط؛ فإنه يمكن البدء بإعطاء جرعات من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎oF‏ زيادتهاء تقليلها» تأخيرها أو إنهائها بناءة على مستوى و/أو نشاط ‎.GDF11‏ على سبيل المثال؛ إذا تمت زيادة مستوى و/أو نشاط 605711 إلى أعلى من المستوى 5 و/أو النشاط؛ فإنه يمكن البدء بإعطاء جرعات من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع 7 أو زبادتهاء وإذا انخفض مستوى و/أو نشاط 606711 عن المستوى و/أو النشاط فإنه يمكن تقليل إعطاء جرعات من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎oF‏ تأخيره أو إنهائه. في أحد الجوانب؛ تشتمل الطرق الموصوفة هنا على إعطاء خاضع مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع 7؛ ومراقبة مستوى و/أو نشاط 60511 في الخاضع. يمكن أن يدل انخفاض في مستوى 0 وإ/أو نشاط 601711 بعد إعطاء مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ (بالنسبة للمستوى و/أو النشاط قبل إعطاء مثبط الأكتيفين من النوع ؟) على أن الخاضع يستجيب للعلاج بمثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ‎١‏ و/أو أن العلاج بمثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ¥ يعتبر فعال. يمكن أن يدل عدم وجود تغيير أو ‎BIL)‏ في مستوى و/أو نشاط 60711 بعد إعطاء متبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎١‏ (بالنسبة للمستوى و/أو النشاط قبل إعطاء مثبط الأكتيفين من النوع ‎(Y‏ على أن ‎Tye‏ yee ‏الخاضع لا يستجيب للعلاج بمثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ أو أن الخاضع يحتاج إلى جرعة‎ ‏للفاعلية.‎ Y ‏أكبر من مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع‎ ‏يمكن أن تدل درجة التغير في مستوى و/أو نشاط 60711 بعد إعطاء مثبط‎ «pal ‏في جوانب‎ ‏لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ (بالنسبة للمستوى و/أو النشاط قبل إعطاء مثبط الأكتيفين من النوع ؟‎ ‏أو بالنسبة لمستويات و/أو نشاط 60711 الطبيعية) على الجرعة المناسبة أو نظام جرعة لمثبط‎ 5 ‏على سبيل المثال» يمكن أن يدل عدم الانخفاض أو الانخفاض‎ WY ‏لمستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏سبيل المثال؛ انخفاض بنسبة أقل من 965؛ أقل‎ Ae) 60711 ‏الطفيف في مستوى و/أو نشاط‎ ‏من 0٠96؛ أقل من 9615؛ أقل من 9670؛ أو أقل من 9675؛ أو أقل من 96760) بعد إعطاء‎ ‏جرعة من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ (بالنسبة للمستوى و/أو النشاط قبل إعطاء مثبط‎ ‏على أنه تكون هناك حاجة إلى جرعة أعلى من مثبط لمستقبل الأكتيفين من‎ (Y ‏الأكتيفين من النوع‎ 0 ‏النوع 7 أو مطلوبة للفاعلية. وفقاً لذلك؛ في بعض النماذج؛ عندما يوضح تقييم مستوى و/أو نشاط‎ ‏عدم وجود انخفاض أو انخفاض طفيف غير مرغوب فيه في مستوى و/أو نشاط‎ 1 ‏انخفاض بنسبة أقل من 965 أقل من 0٠961؛ أقل من 9615؛ أقل‎ (JU) ‏(على سبيل‎ 1 ‏بعد إعطاء جرعة من مثبط لمستقبل أكتيفين‎ (<%Y ‏أو أقل من 9675؛ أو أقل من‎ ,>967٠0 ‏من‎ ‏من النوع ؟ إلى المريضءيتم إعطاء المريض جرعة أعلى من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟‎ 5 367٠ كم١‎ (Fo) re BVO ‏.دمل‎ (FY ى67١‎ <%Y (JL ‏تسبل‎ le) ‏أو 961008 جرعة أعلى).‎ 9696 6/56 961.0 96150 Poor 6 ‏سبيل المثال؛‎ Ae) 601711 ‏في نماذج أخرى؛ يمكن أن يدل الانخفاض في مستوى و/أو نشاط‎ 967٠0 ‏انخفاض طفيف أو متوسط؛ مثل انخفاض بنسبة أقل من ١٠96؛ أقل من 9618؛ أقل من‎ 96١75 ‏إلى‎ 96٠١0 ‏965؛ أو أقل من 9675 أو من‎ ٠ ‏أقل من‎ BY ‏أو أقل من 9675)»؛ أقل من‎ 0 ‏بعد إعطاء جرعة من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ (بالنسبة‎ )965 ٠6 ‏أو من 9675 إلى‎ ‏على أن العلاج بمثبط لمستقبل‎ (Y ‏للمستوى و/أو النشاط قبل إعطاء مثبط الأكتيفين من النوع‎ ‏الأكتيفين من النوع ؟ يعتبر فعال عند جرعة و/أو نظام جرعة محدد. وفقاً لذلك؛ في بعض‎ ‏النماذج؛ عندما يوضح تقييم مستوى و/أو نشاط 60511 انخفاض في مستوى و/أو نشاط‎ ‏أقل من 0١٠96؛ أقل من 9619؛‎ Jie ‏(على سبيل المثال؛ انخفاض طفيف أو متوسط‎ 607511 5
Tye
Cy. أقل من 0 ‎%Y‏ أو أقل من 9675)؛ انخفاض بنسبة أقل من 60 967؛ أقل من ‎(Po ٠‏ أو أقل من ‎Yo‏ أو انخفاض بنسبة تتراوح من ‎96٠0‏ إلى 9675؛ أو انخفاض بنسبة تتراوح من ‎WYO‏ إلى %0( بعد إعطاء جرعة من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎HY‏ المريض» يتم إعطاء المريض نفس الجرعة من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎(BY‏ نموذج محدد؛ ‎Lovie‏ يوضح تقييم مستوى و/أو نشاط 60511 انخفاض متوسط أو مرغوب فيه في مستوى و/أو نشاط 60511 (على سبيل المثال» بين ‎967٠0‏ و9678)؛ انخفاض يتراوح بين 9675 3 ‎VO‏ أو بين ‎967٠0‏ و967603) بعد إعطاء جرعة من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ إلى المريض؛ يتم إعطاء المريض نفس الجرعة من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎LY‏ يمكن أن يدل انخفاض كبير (أو كبير بدرجة غير مرغوب فيها) في مستوى و/أو نشاط 60511 ‎(Ae)‏ سبيل المثال؛ انخفاض بنسبة أكثر من 0 1650 أكثر من ‎KT‏ أكثر من ‎YE‏ أكثر من ‎OYE‏ أكثر من ‎TAY‏ أكثر من + أكثر من 9645) بعد إعطاء جرعة من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎١‏ (بالنسبة للمستوى و/أو ‎lal‏ قبل إعطاء مثبط الأكتيفين من النوع ‎)١‏ على أن جرعة منخفضة من متبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ¥ تكون مطلوية ‎(Ae)‏ سبيل المثال؛ لتجنب التأثيرات الجانبية للعلاج؛ مثل ارتفاع ضغط الدم). ‎Lady‏ لذلك؛ في بعض النماذج؛ عندما يوضح تقييم مستوى و/أو نشاط 5 60711 انخفاض كبير (أو كبير بدرجة غير مرغوب ‎(Let‏ مستوى و/أو نشاط 60711 (على سبيل المثال؛ انخفاض بنسبة ‎AST‏ من ٠965؛‏ أكثر من ‎PT‏ أكثر من ‎PY‏ أكثر من ‎Yo‏ ‏أكثر من ‎STA‏ من 96960؛ أكثر من %90( بعد إعطاء جرعة من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ إلى المربيض؛ يتم إعطاء المريض جرعة منخفضة من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع " (على سبيل ‎(JU‏ جرعة أقل بنسبة تبلغ ‎Por 9650 39666 9670 9675 967٠0‏ 0 #لام ‎YA‏ 9660 أو 9655). يمكن أن تتم مراقبة مستوى و/أو نشاط 60711 بواسطة تقييم مستوى و/أو نشاط 60511 بعد ‎١‏ يوم؛ ‎١‏ أسبوع؛ أسبوعين؛ 7 أسابيع؛ ؛ أسابيع؛ © أسابيع؛ 6 أسابيع؛ 7 أسابيع؛ ‎A‏ أسابيع» ‎٠‏ ‏شهور؛ ؛ شهور؛ © شهور؛ ‎١‏ شهور؛ أو ‎١‏ سنة من إعطاء مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎١‏ ‏إلى المريض. كما يمكن استخدام مستوى و/أو نشاط 60711 بعد إعطاء مثبط لمستقبل أكتيفين 5 من النوع ؟ إلى مريض؛ كمؤشر للتكرار الملائم أو المرغوب فيه لإعطاء مثبط لمستقبل أكتيفين
Tye yy
من النوع ؟ إلى المريض. على سبيل المثال؛ إذا تم الحفاظ على انخفاض في مستوى 5 ‎lf‏ نشاط 1 بعد إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ؟ لفترة زمنية (على سبيل المثال؛ ‎١‏ يوم» ‎١‏ ‏أسبوع؛ أسبوعين» “ أسابيع؛ ؛ أسابيع؛» © أسابيع؛ ‎١‏ أسابيع؛ ‎١7‏ أسابيع؛ ‎A‏ أسابيع؛» ‎٠١‏ أسابيع؛ ؟ شهور؛ ؛ شهور؛ © شهور؛ + شهورء أو ‎١‏ سنة)ء فإنه يمكن إعطاء مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ؟ مرة أثناء الفترة الزمنية (على سبيل المثال مرة في اليوم» مرة في الأسبوع؛ مرة كل أسبوعين» مرة كل © أسابيع» مرة كل ؛ أسابيع» مرة كل © أسابيع» مرة كل ‎١‏ أسابيع» مرة كل ‎١‏ ‏أسابيع» مرة كل ‎A‏ أسابيع» مرة كل ؟ شهور؛ مرة كل ؛ ‎sed‏ مرة كل © شهور» مرة كل 7 ‎oad‏ أو مرة في السنة). في نموذج محدد؛ إذا تم الحفاظ على الانخفاض في مستوى و/أو نشاط 01 بعد إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ؟ لمدة؛ على سبيل المثال؛ تبلغ ‎١‏ شهرء 0 شهرين أو © شهور؛ فإنه يمكن إعطاء مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ؟ مرة كل شهر؛ شهرين؛
أو ؟ ‎sel‏ على الترتيب. في نموذج محدد؛ يتم هنا توفير طرق تشتمل على ‎)١(‏ تقييم مستوى 6011 في نسيج (على سبيل المثال؛ دم مصل؛ بلازماء كبد؛ نخاع عظم؛ و/أو طحال) لخاضع (على سبيل المثال» خاضع يعاني من فقر الدم)؛ ‎(Y)‏ إعطاء مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‏ إلى الخاضع؛ و(3) 5 تقييم مستوى 60511 في نسيج ‎Ao)‏ سبيل المثال؛ دم؛ مصل؛ بلازماء كبد؛ نخاع عظم؛ و/أو طحال) لخاضع (على سبيل المثال» خاضع يعاني من فقر الدم) بعد إعطاء مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ‎Y‏ + يمكن أن يشتمل الإعطاء الوارد في الخطوة ‎(Y)‏ على إعطاء ‎ie‏ من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ (أي؛ يتم إعطاء جرعة مفردة مرة واحدة إلى الخاضع) أو عدة مرات إعطاء من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎١‏ (على سبيل ‎(JU)‏ يمكن أن يشتمل الإعطاء على 0 نظام إعطاء كامل). يمكن أن يتم إجراء التقييم الوارد في الخطوة (3) عند أي نقطة بعد خطوة الإعطاء (7). على سبيل المثال؛ يمكن أن يتم إجراء التقييم الوارد في الخطوة () بعد ‎١‏ يوم؛ يومين» ؟ ‎١ GLI © GLEE GUT‏ أيام؛ ‎١‏ أسبوع؛ أسبوعين؛ 7 أسابيع؛ ؛ ‎auld‏ 0 أسابيع» + أسابيع؛ 7 أسابيع؛ ‎A‏ أسابيع؛» ‎٠١‏ أسابيع؛ ؟ ‎sed‏ شهور؛ © شهور»؛ ‎T‏ شهور؛ أو ‎١‏ سنة من خطوة الإعطاء (7). كمثال ‎AT‏ يمكن أن يتم إجراء التقييم الوارد في الخطوة (3) بعد ١-؟‏ أيام؛ 5 ”-؟ ‎ov li‏ أيام؛ ‎v=o‏ أيام؛ ١-أسبوعين؛‏ 7-؟ أسابيع؛ 7-؛ ‎3-١ ؛نيرهش-١ cabal‏
١ شهور» ‎4-١‏ شهور؛ 5-4 شهور؛ 1-5 شهور» أو 7-٠١شهرين‏ من خطوة الإعطاء (7). يمكن ضبط النظام العلاجي على أساس ناتج التقييمات في الخطوات ‎)١(‏ و(7). على سبيل المثال؛ إذا انخفضت مستويات 60711 في نسيج الخاضع المحددة في التقييم الوارد في الخطوة ‎)١(‏ بالنسبة لمستويات 60611 في نسيج الخاضع المحددة في التقييم الوارد في الخطوة (3)؛ فإنه يمكن الحفاظ على جرعة مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع 7 يتم إعطائها إلى الخاضع أو تقليلها. على النقبض من ذلك؛ إذا زادت مستويات 60111 في نسيج الخاضع المحددة في التقييم الوارد في الخطوة ‎)١(‏ بالنسبة لمستويات 610711 في نسيج الخاضع المحددة في التقييم الوارد في الخطوة ‎(YT)‏ فإنه يمكن زيادة جرعة مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ¥ يتم إعطائها إلى الخاضع. يمكن تكرار/إتعديل خطوات الطريقة السابقة حسب الحاجة لتحديد الجرعة المناسبة/نظام العلاج الملائم 0 للشخص الخاضع للعلاج. في جانب آخرء يتم هنا توفير طرق تشتمل على (أ) إعطاء جرعة أولى من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎come AY‏ (ب) تحديد مستوى و/أو نشاط 60611 في عينة نسيج مريض (على سبيل المثال» مصل)؛ و(ج) إعطاء جرعة ثانية من مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ‎oF‏ حيث إذا زاد مستوى و/أو نشاط 60511 إلى أعلى من الطبيعي» تكون الجرعة الثانية من مثبط مستقبل 5 الأكتيفين من النوع ؟ أعلى من الجرعة الأولى(على سبيل المثال؛ أعلى بنسبة تبلغ ‎2967٠8‏ 9670 ف نمك .61 لاك انافك لحك نلك اك امك لمق اممف ‎Yar 86‏ 96/538 96960 أو 961008)» وحيث؛ إذا انخفض مستوى و/أو نشاط 1 عن الطبيعي» تكون الجرعة الثانية منمثبط مستقبل الأكتيفين من النوع ؟ أقل من الجرعة الأولى (على سبيل ‎(JU‏ أقل بنسبة تبلغ 3670 ‎ST‏ :6ك ‎Po‏ 610 .لاق 0 0680؛ أو 0 %%(. في هذه النماذج؛ تتم مقارنة مستوى و/أو نشاط 6001711 في عينة نسيج بمستوى و/أو نشاط 6011 الطبيعي (على سبيل المثال»؛ مستوى و/أو نشاط 600711 متوسط في عينة مأخودة من نفس النسيج لخاضعين يتمتعون بالصحة؛ ‎Jie‏ خاضعين في نفس الفئة العمرية والذين لا يعانون من فقر الدم). في نماذج محددة؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 60511 مرتفعاً عن مستوى و/أو نشاط 606511 الطبيعي عندما يكون مرتفعاً بنسبة تبلغ ‎96٠١‏ على ‎(JB) 5‏ 9615 على ‎967١0 (J‏ على الأقل» 9675 على الأقل» ‎967٠‏ على الأقل» 9675 على
Tye
ال
‎(J‏ 96556 على ‎(J‏ 9645 على الأقل» ‎965٠‏ على ‎(JB‏ 96505 على الأقل» 96760 على ‎(Ja)‏ 9675 على الأقل» 9676 على الأقل» 9675 على الأقل» 96860 على الأقل» 9685 على الأقل» 9696 على الأقل» 9695 على الأقل» ‎90٠05‏ على ‎dB‏ 967060 على ‎J‏ 967060 على الأقل؛ أو ‎96508٠8‏ على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 601511 الطبيعي. في نماذج محددة؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 60511 مرتفعاً عن مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي عندما يكون مرتفع بنسبة 96725 على الأقل» ‎965٠‏ على الأقل» 9675 على الأقل» ‎96٠00‏ على الأقل؛ أو 0 على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي. في بعض النماذج؛ ‎ing‏ مستوى و/أو نشاط 60511 منخفضاً عن مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي عندما يكون منخفضاً بنسبة تبلغ ‎96٠0‏ على الأقل» 9615 على الأقل؛ ‎967٠0‏ على الأقل» 9675 على الأقل؛ 9670 0 على الأقل» 9635 على ‎(JN‏ 96460 على ‎(JN‏ 9645 على ‎٠ (JW‏ 965 على ‎(JN‏ 9655 على الأقل» 96760 على الأقل» 96725 على الأقل» 96176 على ‎(Ji‏ 96725 على الأقل؛ .96/0 على الأقل» 96/85 على ‎(JN‏ 9690 على الأقل؛ أو 9695 على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 1 الطبيعي. في بعض النماذج؛ يعتبر مستوى و/أو نشاط 60511 منخفضاً عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي عندما يكون منخفض بنسبة 96728 على الأقل» ‎965٠‏ على
‏5 الأقل>؛ 9675 على الأقل؛ أو 96960 على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60111 الطبيعي. تعتمد الطرق الموصوفة هناء ‎Lia‏ على اكتشاف يتعلق ‎oh‏ 60111 يثبط نمو مواد منتجة لخلايا الدم الحمراء؛ وبالتالي يكون مستوى 60511 مرتبط بمستوى خلايا الدم الحمراء. يكون من المرغوب فيه الحفاظ على مستوى أمثل من ‎LA‏ الدم الحمراء في مريض بسبب؛ على الرغم من أن الانخفاض في مستويات خلايا الدم الحمراء» هيموجلوبين أو ‎Gis‏ الدّم تكون مرتبطة بتكون 0 الكريات الحمراء غير الفعال وفقر الدم؛ فإن الزيادات المفرطة في مستويات خلايا الدم الحمراء؛ هيموجلوبين أو مِكُدَاسٌ الدَّم تكون مرتبطة بالزيادة في ضغط الدم وتأثيرات جانبية أخرى غير مرغوب فيها (والتي يمكن أن تحدث بسبب العلاج ‎Las‏ هو ‎Aol‏ من الجرعات المُثلى من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع 7). وفقاً لذلك؛ قد يكون من المرغوب فيه إعطاء مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎Y‏ في نظام جرعة يحافظ على مستوى و/أو نشاط 605711 في مريض عند أو حوالي
١ 9660 For 9656 96756 YO 67٠ ‏ماف‎ ىف٠١‎ HO ‏ضمن‎ (JU ‏سبيل‎ lo) ‏أو 9675 من) مستوى و/أو نشاط 60111 الطبيعي.‎ ‏في نماذج محددة؛ إذا تم تحديد أنه يتم تقليل مستوى و/أو نشاط 60511 إلى أقل من مستوى‎ ‏و/أو نشاط 60511 الطبيعي؛ فإنه يتم ضبط إعطاء مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع 7 فقاً لذلك؛‎ ‏يتم تأخيره. حتى يرجع مستوى و/أو نشاط 60511 إلى الطبيعي أو يكون‎ oJ ‏على سبيل‎ 5 9676 ‏أو‎ 9660 Foor 9646 9670 9675 9670 9615 96٠0 968 ‏ضمن نسبة تبلغ‎ ‏من مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي؛ أو يتم إنهائه إما بشكل مؤقت أو بشكل دائم. في‎ ‏نماذج أخرى؛ حيث يتم تحديد أنه يتم تقليل مستوى و/أو نشاط 60111 إلى أقل من مستوى و/أو‎ ‏ولكنه يتم‎ oF ‏نشاط 60511 الطبيعي؛ فإنه لا يتم تأخير إعطاء مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏ضبط كمية الجرعة أو مرات إعطاء الجرعة من المثبط عند كمية يمكنها تقليل خطر الزيادة غير‎ 0 ‏أو على نحو بديل؛ يتم تطوير نظام‎ alll Gia ‏المقبولة في خلايا الدم الحمراء» هيموجلوبين أو‎ ‏علاجي للمريض يعمل على دمج استخدام المثبط مع عامل يقدم زيادة غير مقبولة في خلايا الدم‎ ‏الدّم (على سبيل المثال».عامل خفض ضغط الدم).‎ Gia ‏الحمراء؛ هيموجلوبين أو‎ ‏بواسطة تحديد‎ a) ‏في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج فقر الدم في فرد في حاجة‎ ‏فإنه يتم إعطاء‎ «(GDF11 ‏مستوى و/أو نشاط 60511 في الفرد؛ وإذا ارتفع مستوى و/أو نشاط‎ 5
ACtRIN ‏بشكل محدد بولي ببتيد‎ oF ‏الفرد كمية فعالة علاجياً من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏مراقبة (أو تحديد) مستوى‎ Load ‏نحو اختياري؛ تتم‎ eg o(hFe-ActRIla ‏(على سبيل المثال»‎ ‏و/أو نشاط 60511؛ وضبط جرعة من مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ؟ (حيث؛ على سبيل‎ ‏عن مستوى و/أو نشاط جرعة من مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع 7؛‎ 600711 al ‏المثال» إذا‎ ‏وذا قل مستوى و/أو نشاط 60511 إلى أقل من مستوى و/أو نشاط جرعة من مثبط لمستقبل‎ 0 .)١ ‏الأكتيفين من النوع‎ ‏في فرد في حاجة إليه بواسطة تحديد‎ Badin ‏في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج‎ ‏يتم إعطاء الفرد‎ «GDF11 ‏مستوى و/أو نشاط 60511 في الفرد؛ وإذا ارتفع مستوى و/أو نشاط‎ ‏بشكل محدد بولي ببتيد ال8017 (على‎ oY ‏كمية فعالة علاجياً من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏وعلى نحو اختياري؛ تتم أيضاً مراقبة (أو تحديد) مستوى و/أو‎ ((hFe-ActRIla ‏سببيل المثال»‎ 5
Tye yo ‏نشاط 60511 وضبط جرعة من مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ¥ (حيث؛ على سبيل المثال؛‎ ‏إذا زاد مستوى و/أو نشاط 600711 إلى أعلى من الطبيعي فإنهتتم زيادة الجرعة من مثبط لمستقبل‎ ‏الأكتيفين من النوع ؟؛ وإذا قل مستوى و/أو نشاط 600511عن الطبيعي فإنه يتم تقليل جرعة من‎ (YF ‏مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع‎
في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لزيادة مستويات خلايا الدم الحمراء؛ هيموجلويين؛ ‎Gia‏ ‏الدّم أو ‎Ery-C‏ في فرد في حاجة إليه بواسطة تحديد مستوى و/أو نشاط 60711 في الفرد؛ وإذا ارتفع مستوى و/أو نشاط 601711؛ يتم إعطاء الفرد كمية فعالة علاجياً من متبط لمستقبل أكتيفين من النوع 7؛ بشكل محدد بولي ببتيد ال801 (على سبيل المثال» ‎((hFe-ActRlla‏ وعلى نحو اختياري؛ تتم أيضاً مراقبة (أو تحديد) مستوى و/أو نشاط 60511؛ وضبط جرعة من مثبط
لمستقبل الأكتيفين من النوع ¥ (حيث؛ على سبيل المثال؛ إذا زاد مستوى و/أو نشاط 60511 إلى أعلى من الطبيعي تتم زيادة جرعة مضاد لمستقبل أكتيفين» وإذا قل مستوى و/أو نشاط 60511 عن الطبيعي فإنه يتم تقليل جرعة مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ‎.)١‏ ‏في نماذج محددة؛ يتم استخدام الطرق الواردة هنا بالاشتراك مع طريقة لعلاج أو تحسين فقر الدم؛ تكون الكريات الحمراء غير الفعال» مستويات خلايا الدم الحمراء المنخفضة أو أي اضطراب آخر 5 بالدم الموصوفة هنا. في نماذج محددة» يتم استخدام الطرق الواردة هنا بالاشتراك مع طريقة لزيادة مستويات خلايا الدم الحمراء؛ مستويات الهيموجلوبين» مستويات ‎alll Gia‏ أو مستوبات وحدات مكونة لمستعمرة في مريض يعاني من فقر الدم؛ تكون الكريات الحمراء غير الفعال؛ مستويات خلايا الدم الحمراء المنخفضة أو أي اضطراب آخر بالدم موصوفة هنا. في نماذج محددة؛ تزيد مستويات خلايا الدم الحمراء بنسبة تبلغ %0( ‎6٠0‏ ف1فى ‎HY‏ 675 9670 9670 ‎KT Koo Yor Yio Yi. 0‏ متمق ‎Ya.
Ao A Yo HY.‏ محمق ‎HIVE UV (IYO 6٠‏ .كفك ‎Yor‏ ...لات عامل ‎tor Pte‏ أو 96506 على الأقل. في نماذج محددة؛ تزيد مستويات الهيموجلوبين بنسبة تبلغ 9628 ١٠96>؛‏ داك .الى داق ‎(NY‏ عامل ‎Yo 93. Yoo (Yor Yio Ke‏ .لامو ‎YAS YA Ye‏ .94 متحماك ...فك ماامك ‎KV‏ دااامك .ك9 ‎Yor‏ ‏5 963200 96750 964600 96480 أو 965060 على الأقل. في نماذج محددة؛ تزيد مستويات ‎Tye‏
—yv-
Foto 96626 9675 96١ ‏دافك‎ FY ‏.ىك دافى‎ (Foo ‏مِكُدَاسٌ الدّم بنسبة تبلغ‎ 931٠٠١ Yo ‏نيك‎ Ao ‏انمث‎ Yo HV. We HT. Yoo Yo. ‏أو‎ Foto ter FYo. ‏لبماك اماق‎ 6٠١ YV\Yo ‏نماك‎ 96175 ‏على الأقل. في نماذج محددة؛ تزيد مستويات الوحدات المكونة لمستعمرة بنسبة تبلغ 962؛‎ ‏متمق‎ YT Yoo ‏.مق‎ Yio ‏لمعك‎ %NYo NY (Yo HY. ‏مداقت‎ NV. 5 937٠٠١ ‏داامك‎ Vow HVYYe 9٠3١ (Ke (YA ‏عامك‎ A KVo (YY. ‏96456؛ أو 96500 على الأقل. في نماذج محددة؛ يتم‎ 96500 96750 96700 6 ‏استخدام الطرق الواردة هنا بالاشتراك مع طريقة لتقليل مستويات تلاشي الخلايا لسلالات شبيهة‎ ‏بالكريات الحمراء ومواد منتجة.‎ ‏*-؟ مجموعات المرضى‎ 0 ‏يمكن أن يكون الخاضعين الذين يتم علاجهم بواسطة الطرق الموصوفة هنا عبارة عن أي كائنات‎ ‏ثديية مثل جرذان ورئيسيات؛ وفي نموذج مفضل؛ بشر. في نماذج محددة؛ يمكن استخدام الطرق‎ ‏الموصوفة هنا لعلاج فقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال؛ أو لمراقبة و/أو زيادة‎ ‏في أي من الكائنات الثديية‎ Ery=C ‏الدّم أو‎ Gulia ‏مستويات خلايا الدم الحمراء؛ هيموجلوبين؛‎ ‏مثل جرذان ورئيسيات؛ وفي نموذج مفضل؛ في مرضى من البشر.‎ 15 ‏في أحد الجوانب؛ يتم استخدام الطرق الواردة هنا بالاشتراك مع طريقة للعلاج. في بعض النماذج؛‎ ‏فقر الدم الذي يحدث بواسطة تكون‎ JU ‏(على سبيل‎ pall ‏يتم هنا توفير طريقة لعلاج فقر‎ ‏الكريات الحمراء غير الفعال). في نماذج محددة»؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج مرض مصاحب‎ (oA LEY JIA ‏لتكون الكريات الحمراء غير الفعال (على سبيل المثال؛ كَلاسيمِيَّة. متلازمات‎ ‏فقر الدم المزمن المميت؛ أو فقر الدم المنجلي). في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج‎ 0 ‏متلازمة فشل نخاع العظم المورث (مثل؛ على سبيل المثال وليس الحصر؛ قلة الصفيحات‎ ‏؛ فقر الدم -01801000ا‎ Amegakaryocytic Thrombocytopenia ‏أميجاكاربوسيتيك‎ ‏متلازمة‎ (Fanconi ‏فقر الدم‎ « Dyskeratosis Congenita Aad SHE Js (Blackfan ‏الصفيحات‎ 418 c(Shwachman—-Diamond ‏الحادء متلازمة‎ ala) EINE is «Pearson ‏في نماذج محددة»؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج متلازمة فشل نخاع العظم‎ (Absent Radi 25
—yy— ‏المورث الذي يؤثر بشكل خاص على خلايا الدم الحمراء. في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة‎ ‏لعلاج فقر الدم و/أو اضطرابات العظام المصاحبة لمرض كلوي بالمرحلة النهائية. في بعض‎
JE ‏متلازمات‎ (Lari ‏سبيل المثال»‎ Ae) ‏يتم هنا توفير طريقة لعلاج ثَلاَسيمِيَّة‎ oz Sal 018000008- ‏فقر الدم المزمن المميت؛ فقر الدم المنجلي؛ أو فقر الدم‎ cre Lad oe] ‏في أحد النماذج» يتم هنا توفير طريقة لعلاج 0-كَلسيمِيَّة. في أحد النماذج؛ يتم هنا‎ .Blackfan 5 .Diamond-Blackfan ‏توفير طريقة لعلاج فقر الدم‎ ‏في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طرق لعلاج مريض يعاني من فقر الدم (على سبيل المثال؛ تم‎ ‏تشخيص أنه يعاني من فقر الدم). في بعض النماذج, يتم هنا توفير طرق لعلاج مريض يعاني من‎ ‏سبيل المثال؛ تم تشخيص أنه يعاني من) مرض مصاحب لتكون الكريات الحمراء غير‎ Ae) ‏فقر الدم المزمن المميت؛ أو فقر الدم‎ coe alll ‏النَكَمُج‎ JIS ‏متلازمات‎ (Lard ‏الفعال» مثل‎ 0 ‏المنجلي. في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طرق لعلاج مريض يعاني من (على سبيل المثال؛ تم‎ ‏تشخيص أنه يعاني من) متلازمة فشل نخاع العظم المورث؛ مثل قلة الصفيحات أميجاكاريوسيتيك؛‎ «Pearson ‏فقر الدم 8000 متلازمة‎ (AA OH ‏خَلَلُ‎ (Diamond-Blackfan ‏فقر الدم‎
Absent ‏قلة الصفيحات‎ (Shwachman-Diamond ‏متلازمة‎ calall a%lall ‏العَدِلآتِ‎ is ‏العظم الذي يؤثر بشكل خاص على خلايا الدم الحمراء. في‎ plas ‏أو 8 متلازمة فشل‎ 8800 15 ‏سبيل المثال؛ تم تشخيص أنه‎ (Ao) ‏نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طرق لعلاج مريض يعاني من‎ ‏يعاني من) فقر الدم و/أو اضطرابات العظام المصاحبة لمرض كلوي بالمرحلة النهائية. في نماذج‎ ‏تم تشخيص أنه يعاني‎ (JU ‏محددة؛ يتم هنا توفير طرق لعلاج مريض يعاني من (على سبيل‎ ‏فقر الدم المزمن‎ cco lal EE JIL ‏متلازمات‎ (Landi ‏(على سبيل المثال»‎ Bard ‏من)‎ ‏في أحد النماذج؛ يتم هنا توفير‎ .Diamond-Blackfan ‏المميت؛ فقر الدم المنجلي؛ أو فقر الدم‎ 0 ‏طرق لعلاج مربض يعاني من (على سبيل المثال؛ تم تشخيص أنه يعاني من) م-كَلاسيمِيَّة.‎ ‏عن مصحوباً ب مجموعة متنوعة من الاضطرابات والحالات المرضية التي‎ Ble ‏يكون فقر الدم‎ « chronic renal failure ‏تشتمل؛ على سبيل المثال وليس الحصر على : فشل كلوي مزمن‎ ‏؛ التهاب المفاصل الروماتويدي‎ myelodysplastic syndrome ‏متلازمة خلل التنسج النخاعي‎ ‏الأورام‎ « bone marrow transplantation ‏زراعة نخاع عظم‎ « rheumatoid arthritis 25
—¥A-
الصلبة ‎solid tumors‏ (على سبيل المثال سرطان الثدي ‎breast cancer‏ ؛ سرطان الرئة ‎lung‏ ‎cancer‏ ؛ سرطان القولون ‎«(colon cancer‏ أورام تصيب الجهاز الليمفاوي ‎tumors of the‏ ‎lymphatic system‏ (على سبيل المتال لوكيميا الخلايا الليمفاوية الحادة ‎chronic‏ ‎lymphocyte leukemia‏ ؛ ليمفوما غير -هودجكينز وليمفوما هودجكينز ‎non-Hodgkins‏ ‎Hodgkins lymphomas 5‏ 200)؛ أورام تصيب الجهاز المكون للدم ‎Ae)‏ سبيل المثال لوكيميا ‎leukemia‏ « متلازمة خلل التنسج النخاعي ‎myelodysplastic syndrome‏ » ورم نخاعي متعدد ‎(multiple myeloma‏ العلاج الإشعاعي ‎radiation therapy‏ ؛ العلاج الكيميائي ‎chemotherapy‏ (على سبيل المثال أنظمة تحتوي البلاتين ‎platinum‏ )؛ أمراض التهابية ‎inflammatory‏ وأمراض مناعة ذاتية ‎Lay) autoimmune‏ في ذلك؛ على سبيل المثال وليس
0 الحصرء التهاب المفاصل الروماتويدي ‎rheumatoid arthritis‏ التهاباث ‎inflammatory arthritides lai‏ أخرىء ‎Fin‏ حُمَامِئَةٌ مَجْموعِبَّة ‎systemic‏ ‎«(SLE) lupus erythematosus‏ أمراض الجلد الحادة أو المزمنة ‎acute or chronic skin‏ ‎Ae)‏ سبيل المثال الصدفية ‎«(psoriasis‏ مرض التهاب الأمعاء ‎inflammatory bowel‏ (على سبيل المثال مرض كرون ‎Crohn's‏ والتهاب القولون التقرحي ‎¢((ulcerative colitis‏ مرض أو ‎Js 5‏ كلوي حاد أو مزمن ‎acute or chronic renal disease or failure‏ بما في ذلك الحالات مجهولة السبب أو الخلقية ‎idiopathic or congenital conditions‏ ؛ مرض كبدي ‎ala‏ أو مزمن ‎cacute or chronic liver‏ النزيف الحاد أو المزمن ‎acute or chronic‏ ‎bleeding‏ الحالات التي يكون فيها نقل خلايا الدم الحمراء غير ممكن بسبب أجسام مضادة مغايرة أو ذاتية و/أو لأسباب دينية؛ حالات العدوى (على سبيل المثال مالاريا ‎malaria‏ ؛ 0 التهاب العظام والنخاع ‎osteomyelitis‏ اعتلالات هيموجلوبينيه ‎hemoglobinopathies‏ ‎La)‏ في ذلك؛ على سبيل المثال» مرض الخلايا المنجلية ‎sickle cell‏ ؛ الثَلاسيمِيَّة 5)) استخدام أو سوءٍ استخدام العقاقير ‎(Ae)‏ سبيل المثال سوءٍ استخدام الكحول ‎calcohol‏ المرضى الأطفال المصابين بفقر الدم لأي سبب لتجنب نقل الدم)؛ والحالات التي يكون فيها المرضى المسنون أو المرضى الذي يعانون من مرض قلبي روي ولديهم فقر الدم لا يمكنهم تلقوا نقل الدم بسبب اهتمامات حول ‎Jayde (edd‏ دَوَرانِيئ. في نماذج محددة؛ يتم استخدام ye ‏أو مراقبة و/أو زيادة خلايا الدم الحمراء» هيموجلوبين»‎ cand) ‏الطرق الموصوفة هنا لعلاج فقر‎ ‏الدّم أو مستويات ©-/50؛ في أي مريض يعاني من واحدة أو أكثر من الاضطرابات أو‎ Ks ‏الحالات المرضية الموصوفة أعلاه.‎ ‏في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج فقر الدم حيث لا يستجيب الخاضع لإعطاء‎ ‏إربثروبويتين. في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج فقر الدم حيث لا يستجيب الخاضع‎ 5 ‏و/أو فولات. في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج فقر‎ 0) Yo ‏لإعطاء الحديد؛ فيتامين‎ ‏الدم الناتج عن سلالات شبيهة بالكريات الحمراء ومواد منتجة تكون حساسة بدرجة كبيرة للموت‎ ‏بواسطة تلاشي الخلايا.‎ ‏سبيل المثال» تم اختيارهم للعلاج) وفقاً‎ lo) ‏في نماذج محددة؛ يكون للخاضعين الذي يتم علاجهم‎ ©0511 ‏للطرق الموصوفة هنا مستويات و/أو نشاط 60711 مرتفع بالنسبة لمستويات‎ 0 ‏يكون للخاضعين الذي تم علاجهم (على سبيل المثال؛ تم اختيارهم‎ (JU) ‏الطبيعية. على سبيل‎ ‏للعلاج) وفقاً للطرق الموصوفة هنا مستويات و/أو نشاط 601511 مرتفع بالنسيج بالنسبة لمستوى‎ ‏و/أو نشاط 60711 متوسط في نفس النسيج من خاضعين يتمتعون بالصحة في نفس الفئة‎ ‏العمرية. يمكن تقييم مستوى و/أو نشاط 606711 بواسطة أي طريقة معروفة في المجال أو‎ ‏موصوفة هنا. في بعض النماذج؛ يكون الخاضعين الذي تم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا‎ 5 9670 9615 (JN) ‏على‎ 96٠0 ‏بنسبة تبلغ‎ el ‏مستوى و/أو نشاط 60511 والذي يكون‎
A ‏متمق .يلافك داامك‎ HT Yoo Yor Yio ‏نفك‎ Yo HY. ‏دأافك‎ ‎97٠٠١ Yor Yer ‏داانفك‎ Vor NHVYe 96٠.١ ‏متمق‎ Ya. Ae ‏الطبيعي‎ GDF11 ‏عن مستوى و/أو نشاط‎ (%V ove ‏أو‎ ((%0 00 »)9645 0 96400 67٠ ‏(على سبيل المثال؛ المستوى المتوسط في خاضع أو خاضعين يتمتعون بالصحة). في نماذج‎ 0 60511 ‏محددة؛ يكون للخاضعين الذي تم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا مستوى و/أو نشاط‎ ‏على الأقل؛ 967060 على الأقل؛ أو‎ 96٠٠٠0 ‏على الأقل؛ 9675 على الأقل؛‎ 965٠ ‏بنسبة‎ le ‏على الأقل 96 عن مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي. في بعض النماذج؛ يتم‎ vs ‏استخدام الطرق الموصوفة هنا لمراقبة؛ تنظيم أو زيادة مستوىي مستويات خلايا الدم الحمراء؛‎
Tye
ل هيموجلوبين؛ مِكُدَاسٌ الدّم أو ‎Ery—C‏ في خاضعين تم تحديد أن لديهم مستويات 60511 مرتفعة. في نماذج محددة؛ يكون للخاضعين الذي تم علاجهم (على سبيل المثال» تم اختيارهم للعلاج) وفقاً للطرق الموصوفة هنا ‎)١(‏ مستويات و/أو نشاط 60111 المرتفع بالنسبة لمستويات ‎GDF11‏ ‏5 الطبيعية (على سبيل المثال» في مصل؛ نخاع عظم؛ كبد؛ و/أو طحال)؛ 5 ‎(Y)‏ فقر الدم أو مرض أو حالة مرضية مصاحبة لفقر ‎andl‏ أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال ‎Ae)‏ سبيل المثال؛ خاضعين تم تشخيص أنهم يعانون من فقر الدم). في نماذج محددة؛ يكون لمريض بشري تم علاجه (على سبيل المثال؛ تم اختياره للعلاج) وفقاً للطرق الموصوفة هنا مصل مستويات و/أو نشاط 60511 مرتفعة بالنسبة لمستويات 60111 الطبيعية؛ ولديه فقر الدم (على سبيل المثال؛ 0 "تم تشخيص أنه يعاني من فقر الدم). في بعض النماذج؛ يكون للخاضعين الذي تم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا عدد خلايا دم حمراء منخفض بشكل غير مرغوب ‎dd‏ مستوى منخفض غير مرغوب فيه منال هيموجلويين» مستوىق منخفض بصورة غير مرغوب فيها من مِكْدَاسٌ ‎alll‏ و/أو مستوى منخفض بصورة غير مرغوب فيها من ©-/50. يمكن استخدام الطرق الموصوفة هنا لمراقبة؛ تنظيم و/أو زيادة مستويات خلايا الدم الحمراء؛ هيموجلوبين؛ ‎Ge‏ الدّم أو ‎Ery=C‏ في مجموعات مرضى متتقاه. في نماذج أخرى؛ يتم هنا توفير طريقة لعلاج مريض معرض لخطر تطور مستويات منخفضة غير مرغوب فيها من خلايا الدم الحمراء أو الهيموجلوبين» ‎Jie‏ هؤلاء المرضى المفرتض خضوعهم لعملية جراحية كبيرة أو إجراءات أخرى يمكن أن ينتج عنها فقد كبير في الدم. في بعض النماذج؛ يتعرض الخاضعين الذي تم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا لعملية جراحية كبيرة أو إجراء آخر ‎(Se 0‏ أن ينتج ‎aie‏ فقد كبير في الدم. عندما يتم تحديد ما إذا كان مستوى هيموجلويين يعتبر منخفض بصورة غير مرغوب ‎eld‏ يمكن أن يدل مستوى أقل من الطبيعي للسن والنوع المناسب على فقر الدم؛ علدالرغم من أنه يتم اتخاذ الاختلافات الفردية في الاعتبار. على سبيل المثال» بصفة ‎dale‏ يعتبر مستوى هيموجلوبين يبلغ ‎VY‏ جم/ديسي لتر هو الحد الأدنى للطبيعي في البشر البالغين. تشتمل الأسباب المحتملة 5 للمستويات المنخفضة من الهيموجلوبين على فقد الدم؛ القصور الغذائي؛ تفاعل العقاقير؛ المشكلات ‎Tye‏
و المختلفة مع نخاع العظم والعديد من الأمراض. يمكن أن يتم علاج المرضى بنظام جرعة الهدف منه هو ‎sale]‏ المربيض إلى مستوى هيموجلوبين مستهدف؛ يتراوح ‎Bale‏ بين حوالي ‎٠١‏ جم/ديسي لتر وحوالي ‎VY,0‏ جم/ديسي لترء ونمطياً من حوالي ‎٠١١‏ جم/ديسي لتر (راجع أيضاً ‎Jacobs‏ ‎(et al. (2000) Nephrol Dial Transplant 15, 15-9‏ إلا أن المستويات المستهدفة المنخفضة يمكن أن تتسبب في تأثيرات جانبية قلبية وعائية أقل. على نحو أمثل؛ يمكن أن يكون مستوى الهيموجلويين المستهدف محدد لكل مريض. في نماذج محددة؛ يكون لمريض يتم علاجه بالطرق الموصوفة هنا مستويات هيموجلوبين أقل من ‎١١‏ جم/ديسي لترء أقل من ‎١",*‏ جم/ديسي لترء أقل من ‎١١‏ جم/ديسي لترء أقل من 1,0 جم/ديسي لترء أقل من ‎١١‏ جم/ديسي لترء أقل من ‎٠١‏ جم/ديسي لترء أقل من ‎٠١‏ جم/ديسي لترء أقل من 9,5 جم/ديسي لترء أو أقل من ؟ 0 جماديسي لتر. عندما يتم تحديد ما إذا كان مستوى خلايا الدم الحمراء منخفض بصورة غير مرغوب ‎led‏ فإنه يمكن استخدام مستويات ‎ad Gla‏ (نسبة ‎Augie‏ من حجم عينة الدم التي تشغلها الخلايا) لتقييم ‎dlls‏ خلايا الدم الحمراء. تتراوح مستويات مِكْدَاسٌ الدّم للأفراد الأصحاء من ‎4١‏ إلى ‎965١1‏ للذكور البالغين ومن © إلى 9645 للإناث البالغين. ‎Bale‏ ما تتراوح مستويات ‎pd Glia‏ من = ‎HTT 5‏ على الرغم من أن مستويات ‎a3 GIs‏ تختلف من شخص لآخر. على نحو ‎diel‏ يمكن أن يكون ‎Gs‏ الدَّم المستهدف محدد لكل مربض. في بعض النماذج؛ يتم استخدام الطرق الموصوفة هنا لعلاج فقر الدم؛ أو مرض أو حالة مرضية مصاحبة لفقر ‎pall‏ أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال؛ في المرضى المعرضين لآثار عكسية عند إعطائهم جرعة أكبر من الجرعة المُثلى من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎oY‏ بشكل محدد 0 بولي ببتيد ال8005 (على سبيل المثال» ‎(ActRIla-hFe‏ تشتمل الآثار العكسية التي يمكن أن تكون مصاحبة لإعطاء جرعة أكبر من الجرعة المُثلى لمثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎oF‏ على سبيل المثال وليس الحصر؛ على زيادة مفرطة في مستويات ‎LIA‏ الدم الحمراء؛ مستويات مِكْدَاسُ الدّم أو مستويات الهيموجلوبين؛ زيادة مفرطة في تخزين الحديد؛ ومجموع خلايا مفرط بنخاع العظم أو الطحال. ‎(els‏ يمكن أن تتسبب الزيادات المفرطة في مستويات ‎LA‏ الدم الحمراء؛ مستويات 5 الهيموجلوبين؛ أو مستويات ‎Ge‏ الدَّم في زيادة في ضغط الدم و/أو تأثيرات جانبية أخرى غير ‎Tye‏
دو مرغوب فيها. في نماذج محددة؛ يكون المرضى الذين تم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا معرضين لارتفاع ضغط الدم (على سبيل المثال؛ زيادة في ضغط الدم الاتقباضي ‎diastolic‏ ‎blood pressure‏ ضغط الدم الانبساطي و/أو ضغط دم شرياني وسطي ‎mean arterial‏ ‎(blood pressure‏ أو ‎Alls‏ أخرى يمكن أن تكون متعلقة بزيادة مفرطة في مستويات خلايا الدم الحمراء (على سبيل المثال؛ حالات الصداع؛ متلازمة شبيهة بالإنفلونزا ‎influenza-like‏ ‎syndrome‏ « أو خثار وعائي ‎A. (Vascular thrombosis‏ نموذج محدد؛ يكون المرضى الذين يتم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا معرضين لارتفاع ضغط الدم أو حالة أخرى متعلقة بزيادة مفرطة في مستويات خلايا الدم الحمراء عندما يتم علاجهم بمثبط لمستقبل أكتيفين من النوع " (على سبيل ‎Jie ACtRIIA-hFC (Jud)‏ متوالية رقم: ‎.)١7‏ ‏0 يمكن علاج الخاضعين من أي فئة عمرية وفقاً للطرق الموصوفة هنا. في بعض النماذج؛ يكون الخاضعين الذي تم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا عمرهم أكبر من 00 سنة. في بعض النماذج؛ يكون الخاضعين الذي تم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا أقل من © أو ‎٠١‏ سنوات. في نماذج أخرى؛ يكون الخاضعين الذي تم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا أقل من ‎١8‏ سنة. في تجسيدات أخرى ‎clad‏ تتراوح أعمار الخاضعين الذي تم علاجهم وفقاً للطرق الموصوفة هنا 5 من ‎NYA‏ ** سنة. 5-؛ تقييم مستوى و/أو نشاط ‎GDF11‏ ‏يمكن تحديد مستوى ونشاط 60511 بواسطة أي طريقة معروفة في المجال أو موصوفة هنا. على سبيل المثال؛ يمكن تحديد مستوى 60711 في عينة نسيج بواسطة تقييم (على سبيل المثال» تحديد كمية) ‎RNA‏ المستنسخ ل 600711 في العينة باستخدام» على سبيل ‎(JU‏ بقعة نورثن؛ 0 تحليل ‎(PCR‏ تحليل ‎PCR‏ في الزمن الفعلي» أو أي تقنية أخرى معروفة في المجال أو موصوفة هنا. في أحد النماذج؛ يمكن تحديد مستوى 600711 في ‎due‏ نسيج بواسطة تقييم (على سبيل ‎(JU)‏ تحديد كمية) ‎mRNA‏ ل 610711 في العينة. كما يمكن تحديد مستوى 0711© في عينة نسيج بواسطة تقييم (على سبيل ‎(JU)‏ تحديد كمية) مستوى بروتين التعبير الوراثي عن 60511 في العينة باستخدام؛ على سبيل ‎JU‏ تحليل
الا _ كيميائي هيستولوجي مناعي؛ ‎dak‏ وسترن» ‎(ELISA‏ الترسيب المناعي؛ تحليل تعداد الخلايا المتدفقة؛ أو أي تقنية أخرى معروفة في المجال أو موصوفة هنا. في نماذج محددة؛ يتم تحديد مستوى 605711 بواسطة طريقة يمكنها تحديد كمية 60611 الموجودة في عينة نسيج مأخوذة من مربض (على سبيل المثال» في مصل بشري)؛ و/أو قادر على الكشف عن تصحيح مستوى 60711 بعد العلاج بمثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ‎.١‏ في أحد النماذج؛ يتم تحديد مستوى 1 في عينة نسيج بواسطة تقييم ‎(Ae)‏ سبيل ‎(JU)‏ تحديد كمية) بروتين التعبير الوراثي عن 60511 في العينة باستخدام ‎ELISA‏ على سبيل المثال؛ يمكن تحديد 601711 وتحديد كميته في المصل البشري باستخدام طريقة ‎ELISA‏ البينية الموصوفة في الأمثلة. يمكن أن تشتمل طريقة ‎ELISA‏ البينية للاستخدام في تحديد ‎(gris‏ 60511 في عينة نسيج على تغليف ‎ActRIA-Fc 0‏ (باستخدام؛ على سبيل المثال» ‎(ACtRIA-mFC‏ أو ‎Jie ACtRIIA-hFc‏ متوالية رقم: ١)لأطباق ‎(ELISA‏ تلامس الأطباق مع عينة النسيج (على سبيل ‎(JU)‏ مصل بشري)؛ والكشف عن مركب ال8014 ترابطي (مثل ‎(GDF11‏ في عينة النسيج ‎Ae)‏ سبيل ‎(Jil‏ مصل بشري) يرتبط ب ‎ACtRIA-Fe‏ بواسطة أجسام مضادة نوعية. في بعض النماذج؛ تكون الطريقة للاستخدام في تحديد مستوى و/أو نشاط 600711 على النحو الموصوف في هذه الوثيقة (على سبيل المثال؛ ‎ELISA‏ بيني) قادرة على الكشف عن ‎٠٠١‏ بيكو جرام/مللي لتر من 601711 ناتج عن عودة الارتباط الجيني» أكتيفين ‎A‏ و/أو أكتيفين 8 مقيد ب ‎ACtRIIA‏ ‏تكون الأجسام المضادة للاستخدام في اختبارات تقيس مستويات 60111 في عينة (على سبيل المثال؛ في عينة نسيج؛ على سبيل ‎(JU‏ عينة دم؛ مصل؛ ‎(Lal‏ كبد؛ ‎clade‏ و/أو نخاع عظم) معروفة في المجال أو يمكن تطويرها بسهولة باستخدام طرق معروفة لأصحاب المهارة في 0 المجال. تشتمل أمثلة الأجسام المضادة أحادية النسيلة التي يمكن استخدامها في اختبارات تقيس مستويات 10711 في عينة على الأجسام المضادة من ‎LifeSpan Biosciences Inc.,‏ ‎(Seattle, WA‏ تحمل كتالوج رقم ‎(LS-C121127‏ 6138772-قا 5-0105098ا؛ الأجسام المضادة المتوفرة من ‎«Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA‏ تحمل كتالوج رقم 80-81952 :(6-19ل)؛ والأجسام المضادة المتوفرة من ‎Sigma-— Aldrich‏ ‎«Co.
LLC 25‏ تحمل منتج رقم: ‎WHOO010220M3‏
يه
يمكن قياس نشاط 60511 بواسطة أي اختبار معروف في المجال بما في ذلك؛ على سبيل
المثال وليس الحصر؛ اختبار تكون المستعمرات؛ اختبار الجين المرشد (على سبيل المثال» يحتوي
على جزءِ ‎Lie‏ لجين مرشد مستجيب ‎((GDF1T‏ تجرية لإنزيم فوسفاتاز القلوي؛ أو أي اختبار
نشاط حيوي آخر. تم وصف الاختبارات التمثيلي التي يمكن استخدامها لقياس نشاط 60011 في ‎Souza et al., 2008, Mol.
Endocrinology 22(12):2689-2702; and Bessa et 5‏
.al, 2009, Protein Expression and Purification 63:89-94
يمكن تقييم مستوى و/أو نشاط 60511 في أي عينة نسيج تم الحصول عليها من مريض تم
علاجه وفقاً للطرق الموصوفة هنا. في نماذج محددة؛ يتم تقييم مستوى و/أو نشاط 60511 في
‎die‏ تم الحصول عليها من مصل؛ ‎(aS‏ طحال أو نخاع عظم لمريض تم علاجه وفقاً للطرق
‏0 الموصوفة هنا. في أحد النماذج؛ يتم تقييم مستوى و/أو ‎Ll‏ 0711في عينة تم الحصول عليها من مصل مريض تم علاجه وفقاً للطرق الموصوفة هنا. في نموذج ‎HAT‏ يتم تقييم مستوى و/أو نشاط 60511 في عينة تم الحصول عليها من طحال مريض تم علاجه وفقاً للطرق الموصوفة هنا. في نموذج آخر أيضاً يتم تقييم مستوى و/أو نشاط 60711 في عينة تم الحصول عليها من نخاع عظم مربض تم علاجه وفقاً للطرق الموصوفة هنا.
‏5 في بعض النماذج؛ تتم مقارنة مستوى و/أو نشاط 600711 في عينة نسيج مأخوذة من مريض بمستوى و/أو نشاط 60611 متوسط في عينات النسيج (على سبيل المثال؛ في عينات من نفس النسيج) لخاضعين يتمتعون بالصحة (على سبيل ‎(JE‏ خاضعين لا يعانون من فقر الدم)؛ مثل خاضعين في نفس الفئة العمريةو؛ على نحو ‎(LEA)‏ من نفس النوع. في بعض النماذج؛ تتم مقارنة مستوى و/أو نشاط 60611 في عينة نسيج مأخوذة من مريض بمستوى و/أو نشاط
‏0 60711 في عينة نسيج (على سبيل ‎(JU)‏ في عينة مأخودة من نفس النسيج) للخاضع عند نقطة زمنية مبكرة (على سبيل ‎(JU‏ قبل بدء المرض؛ قبل بدء العلاج؛ أو أثناء العلاج). في بعض النماذج؛ تتم مقارنة مستوى و/أو نشاط 606711 في عينة نسيج ‎(Ao)‏ سبيل المثال؛ مصل؛ طحال؛ كبد؛ أو نخاع ‎(pad)‏ لمريض بمستوى و/أو نشاط 60511 في ‎Lue‏ نسيج أخرى للمريض. في بعض النماذج؛ تتم مقارنة مستوى و/أو نشاط 60511 في عينة نسيج مأخوذة من
‎Tye
و مريض بمستوى و/أو نشاط منتج جين آخر في عينة النسيج للمريض (على سبيل المثال» 0- أكتين» أكتيفين ‎(A‏ أكتيفين 8). في بعض النماذج؛ تتم مقارنة مستوى و/أو نشاط 600711 في عينة نسيج مأخوذة من مريض بمستوى و/أو نشاط 60611 الطبيعي في عينة النسيج. يمكن أن يكون مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي في عينة نسيج عبارة عن مستوى و/أو نشاط 60611 متوسط في عينات النسيج (على سبيل ‎(JU‏ في عينات من نفس النسيج) لواحد أو أكثر من الخاضعين الأصحاء (على سبيل المثال؛ خاضعين لا يعانون من فقر الدم)؛ ‎Jie‏ خاضعين في نفس الفئة العمرية و؛ على نحو ‎(LEAT‏ من نفس النوع. في بعض النماذج؛ يكون الكشف عن مستوى و/أو نشاط 1 مرتفع مقارنة بمستوى و/أو نشاط 60611 الطبيعي متبوعاً بإعطاء مثبط مستقبل 0 أكتيفين (مثل واحد أو أكثر من مثبطات مستقبل الأكتيفين الموصوفة هنا). في بعض النماذج؛ يكون إعطاء مثبط مستقبل أكتيفين (مثل واحد أو أكثر من مثبطات مستقبل الأكتيفين الموصوفة هنا) متبوعاً بمراقبة مستوى و/أو نشاط 60511 و»؛ على نحو اختياري؛ مقارنة مستوى و/أو نشاط 60511 بمستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي. في بعض النماذج؛ يكون إعطاء جرعة أولى من مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ¥ (على سبيل المثال» 8011/80 مثل متوالية رقم: 5 ) متبوعاً بتحديد مستوى و/أو نشاط ‎«GDF11‏ وإذا زاد مستوى و/أو نشاط 601511 إلى أعلى من المستوى و/أو النشاط يتم إعطاء جرعة ثانية من مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع 7 والتي تكون أعلى (على سبيل ‎(JU‏ أعلى ب ‎a), Yo‏ در دارك تل درت تك فت لا فك أو ‎٠١‏ مرات) من الجرعة الأولى؛ وإذا انخفض مستوى و/أو نشاط 60511 عن المستوى و/أو النشاط يتم إعطاء جرعة ثانية من مثبط لمستقبل الأكتيفين من النوع ؟ والتي تكون أقل (على سبيل ‎Judi 0‏ أقل ‎Ye‏ )0 درك دارا كت دراتء 8 ‎To cf‏ لاء ‎٠١ gle OA‏ مرات) من الجرعة الأولى. على النحو المستخدم هناء في نماذج محددة؛ يكون مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي عبارة عن مستوى و/أو نشاط 60511 متوسط في عينة نسيج لواحد أو أكثر من الخاضعين الأصحاء (على سبيل ‎(Jd)‏ خاضعين يتمتعون بالصحة في نفس الفئة العمرية و/أو من نفس النوع). في 5 بعض النماذج؛ تتم مقارنة مستوى و/أو نشاط 60511 في عينة نسيج لخاضع تمت معالجته ‎Tye‏
Cy ‏بمستوى و/أو نشاط 600711 في عينة مأخودة من نفس النسيج لواحد أو أكثر من الخاضعين‎ ‏الأصحاء. في بعض النماذج؛ يكون النسيج الذي يتم فيه تقييم مستوى و/أو نشاط 60511 عبارة‎ ‏عن مصل الدم؛ نخاع عظم؛ كبد؛ أو طحال. في أحد النماذج؛ يكون النسيج الذي يتم فيه تقييم‎ ‏مستوى و/أو نشاط 60511 عبارة عن مصل.‎ ‏#-ه الاستخدامات العلاجية‎ 5 ‏لعلاج مرضى يعانون من‎ Y ‏في نماذج محددة؛ يتم استخدام مثبطات لمستقبل أكتيفين من النوع‎ ‏فقر الدم؛ أو مرض أو حالة مرضية المصاحبة لفقر الدم أو تكون الكريات الحمراء غير الفعال»‎
SY ‏يتم إعطاء مثبطات لمستقبل أكتيفين من النوع‎ or Sail) ‏في الطرق الموصوفة هنا. في بعض‎ ‏مرضية المصاحبة لفقر الدم أو تكون الكريات‎ ls ‏أو مرض أو‎ pall ‏مريض يعاني من فقر‎ ‏إلى‎ ١ ‏الحمراء غير الفعال. في بعض النماذج؛ يتم إعطاء مثبطات لمستقبل أكتيفين من النوع‎ 0 ‏مرضية المصاحبة لفقر الدم أو تكون الكريات‎ ls ‏أو مرض أو‎ pall ‏مريض يعاني من فقر‎ ‏الحمراء غير الفعال؛ ولديه مستويات و/أو نشاط 60511 المرتفع (على سبيل المثال؛ في مصل؛‎ ‏و/أو طحال المريض). يمكن استخدام مثبطات لمستقبل الأكتيفين من النوع ؟‎ aS cake ‏نخاع‎ ‏الموصوفة في هذا القسم ومعروفة في المجال في الطرق الواردة هنا. في نماذج محددة؛ يمكن‎ ‏استخدام مثبطات لمستقبل الأكتيفين من النوع 7 الموصوفة في هذا القسم في الطرق الواردة هنا.‎ 5
ActRIIB ladies ACtRIA ‏مثبطات مستقبلات 801411 المتضمنة هنا على متبطات‎ Jai ‏في نماذج‎ ACRIIA ‏نوعي ل‎ ARID ‏(راجع أدناه). في نماذج محددة؛ يكون مثبط مستقبل‎ ‏نوعي ل 8ال800. في نماذج محددة؛ يفضل أن يعمل مثبط‎ ARI ‏أخرى» يكون مثبط مستقبل‎ /8014[١ ‏في نماذج أخرى؛ يفضل أن يعمل مثبط مستقبل‎ . ActRIALu ‏مستقبل ال801/ على‎ ‏في نماذج محددة؛ يعمل مثبط مستقبل |8004 على تثبيط كل من‎ ACRIB ‏على تثبيط‎ 0
ActRIIB 5 ActRIIA ‏عبارة عن بولي ببتيدات تشتمل‎ ACRIN ‏في نماذج محددة؛ يمكن أن تكون مثبطات مستقبلات‎ ‏بدون التقيد بنظرية محددة؛ يشتمل نطاق ريط الأكتيفين‎ JACHRIN ‏على نطاقات ريط أكتيفين ل‎ ‏المذكور على أكتيفين منحي لأيونات البولي ببتيدات وبالتالي يتم منع إرسال إشارات الأكتيفين.‎
Tye
الام يمكن أن تشتمل نطاقات ريط الأكتيفين المذكورة ‎lly‏ تحتوي على بولي ببتيدات على كل نطاق خارج الخلية أو ‎a‏ منه لمستقبل ال80158 ‎sl)‏ كل أو ‎gia‏ من نطاق خارج الخلية ل ‎ACtRIIA‏ ‏أو كل أو جزءِ من نطاق خارج الخلية ل 18ل801). في نماذج محددة؛ يكون نطاق خارج الخلية لمستقبل 80111 قابل للذويان. في نماذج محددة؛ يتم ربط نطاق ربط الأكتيفين الذي يشتمل على بولي ببتيدات بجزءِ ‎FC‏ لجسم مضاد ‎gl)‏ مترافق يشتمل على نطاق ربط أكتيفين يشتمل على بولي ببتيد لمستقبل ال801 ويتم الحصول على ‎FC gia‏ لجسم مضاد). بدون التقيد بنظرية محددة؛ يوفر ‎gia‏ الجسم المضاد ثبات متزايد على المترافق. في نماذج محددة؛ يتم ربط نطاق ربط الأكتيفين بجزءِ ‎FC‏ لجسم مضاد بواسطة رابط» على سبيل المثال؛ رابط ببتيد. 0 تشتمل مثبطات مستقبلات ال8014 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على جزيئات تثبط ‎ACtRIIA‏ و/أو 8ال8014؛ بشكل مباشر أو غير مباشرء إما خارج الخلايا أو داخل الخلايا. في بعض النماذج؛ تعمل مثبطات ‎ACtRIIA‏ و/أو 8004118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على تثبيط 801518 و/أو 801118 بواسطة تفاعلات مع المستقبل (المستقبلات) نفسه. في نماذج ‎«(gyal‏ تعمل مثبطات ‎ACtRIIA‏ و/أو. 014118المستخدمة في التركيبات 5 والطرق الموصوفة هنا على تثبيط ‎ACtRIIA‏ و/أو 801118 بواسطة تفاعلات مع مركب ‎ActRIIA‏ و/أو 80018 ترابطي؛ على سبيل المثال؛ أكتيفين.
ACTRIIA ‏مثبطات‎ ١-0-٠ ‏على النحو المستخدم هناء يشير تعبير ”8/اا801" إلى عائلة من بروتينات مستقبل أكتيفين من‎ ‏المذكورة بواسطة‎ ACRIIA ‏(8/ا801) من أي نوع وصور متنوعة مشتقة من بروتينات‎ lla ‏النوع‎ 0 انتطفر أو تعديل آخر . يتم فهم الإشارة إلى 801118 في هذه الوثقية على أنها إشارة إلى أي من الصور المحددة حالياً. تكون أعضاء عائلة ‎diay ACIRIIA‏ عامة عبارة عن بروتينات عابرة للغشاء» تتالف من نطاق خارج الخلايا لريط مركب ترابطي به منطقة غنية بالسيستين» نطاق عابر للأغشية؛ ونطاق سيتويلازمي ذو نشاط سيرين ‎serine‏ /ثيرونين كيناز ‎threonine kinase‏ متوقع.
Tye
م تشتمل مثبطات 8015118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هناء على سبيل المثال ‎uly‏ الحصر؛ على بولي ببتيدات ‎ACtRIN‏ قابلة للذويان لربط أكتيفين؛ الأجسام المضادة التي ترتبط بالأكتيفين (بشكل محدد وحدات الأكتيفين ‎A‏ أو 8 الفرعية؛ ‎ally‏ يُشار إليها ‎Lad‏ ب 88 أو ‎lly (BB‏ تمزق ارتباط 8/ا8011؛ الأجسام المضادة التي ترتبط ب ‎ACtRIIA‏ وتمزق ارتباط الأكتيفين؛ بروتينات غير الجسم المضاد التي يتم اختيارها لريط الأكتيفين ‎A‏ و ‎ARIA‏ (راجع على سيبيل المثال؛ الطلبات الدولية أرقام ‎AMY YY‏ تب التلمجخمفى اا ‎FYAAS Yee‏ البراءات الأمرركية أرقام ‎COTTAT YF‏ و547/7005 077/7 وقد تم تضمين كل منها في هذه الوثيقة كمرجع في مجملها؛ وذلك كأمثلة لهذه البروتينات وطرق التصميم واختيارها)؛ ويبتيدات عشوائية يتم اختيارها لريط الأكتيفين ‎A‏ ‎(ACtRIA; 0‏ والتي تكون مترافقة مع نطاق ‎Fo‏ ‏في نماذج محددة؛ يمكن ربط اثنين أو أكثر من البروتينات المختلفة (أو شقوق أخرى) التي يكون لها نشاط ربط أكتيفين ‎A‏ و8/ا8010؛ ‎Beals‏ روابط الأكتيفين التي تعيق مواقع الربط من النوع ‎١‏ ‏(على سبيل ‎(JE‏ مستقبل أكتيفين قابل للذويان من النوع ‎)١‏ ومن النوع ¥ (على سبيل المثال؛ مستقبل أكتيفين قابل للذوبان من النوع ‎oY‏ على الترتيب؛ ببعضها البعض للحصول على جزئ 5 ربط ثنائي الوظيفة أو متعدد الوظائف يعمل على تثبيط 80105118 ويالتالي يمكن استخدامه في التركيبات والطرق الموصوفة هنا. في نماذج محددة؛ يتم استخدام مضادات محور إرسال إشارات أكتيفين ‎AGtRIIA-‏ التي تثبط ‎ACtRIIA‏ والتي تشتمل على أبتاميرات حمض نووي؛ جزيئات صغيرة وعوامل أخرى المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا. 0 مثبطات ‎ActRIIA‏ تشتمل على بولي ببتيدات ‎ActRIl Polypeptides‏ 0 يشتمل تعبير "بولي ببتيد ‎Polypeptide‏ ال8004" على بولي ببتيدات تشتمل على أي بولي ببتيد لعضو عائلة 8015118 بالإضافة إلى أي صور متنوعة منه ‎La)‏ في ذلك طفرات؛ شظاياء اندماجات وصور محاكية للببتيد) التي تحتجز نشاط مفيد. على سبيل المثال؛ بولي ببتيدات ‎ActRII‏ تحتوي على بولي ببتيدات مشتقة من متوالية أي 8010718 معروف به متوالية مطابقة بنسبة حوالي ‎%A‏ على الأقل لمتوالية بولي ببتيد ‎ACRIN‏ وعلى نحو اختياري 9685 على 5 الأقل 960 دحم ‎%9A AY‏ 9699 أو تطابق أكبر. على سبيل المثال» يمكن أن يرتبط ‎Tye‏
ل بولي ببتيد ا(80150 ببروتين ‎ACRIIA‏ و/أو أكتيفين ويثبط وظيفته. يمكن اختيار بولي ببتيد 8 لقدرته على تعزيز نمو العظام وتشبع العظام بالمعادن. تحتوي أمثلة بولي ببتيدات ا8050 على بولي ببتيد منتج ل 8/ا80051 بشري (متوالية رقم: ‎)١‏ وبولي ببتيدات ا[80174 بشرية قابلة للذويان (على سبيل ‎(JU‏ متواليات رقم: ‎(VY 5 VF oF‏ بالنسبة لبولي ببتيد منتج ل ‎ACERIA 5‏ الذي يتم توضيح متوالية الحمض الأميني الخاصة به عند متوالية رقم: ٠؛‏ يتم وضع ببتيد الإشارة للبولي ببتيد المنتج ل ‎ACRIA‏ بشري عند مواضع الحمض الأميني ‎١‏ إلى ‎Ye‏ يتم وضع نطاق خارج الخلية عند مواضع الحمض الأميني ‎7١‏ إلى ‎١705‏ ويتم وضع مواضع المعالجة بالجليكوسيل المرتبطة عند الموضع لا لبولي ببتيد منتج ل ‎ACIRIIA‏ بشري (متوالية رقم: ‎)١‏ عند مواضع الحمض الأميني ‎EF‏ و57 لمتوالية رقم: ‎.١‏ يتم الكشف عن متوالية الحمض النووي التي 0 تشفر البولي ببتيد المنتج ل 8014118 بشري لمتوالية رقم: ‎١‏ كمتوالية رقم: ؛ (نوكليوتيدات ‎“VTE‏ ‎٠‏ من رقم الوصول لبنك الجينات 01617 ‎.)٠‏ يتم الكشف عن متوالية الحمض النووي التي تشفر بولي ببتيد ال8014 بشري قابل للذويان لمتوالية رقم: ؟ كمتوالية رقم: 0 راجع جدول ‎١‏ ‏لوصف المتواليات. في نماذج محددة؛ تكون بولي ببتيدات ‎AGRI‏ المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا عبارة عن بولي ببتيدات ا[00ه قابلة للذويان. يمكن لنطاق خارج الخلايا لبروتين هال؟اد0حهأن يرتبط بأكتيفين ويكون قابل للذويان بصفة عامة؛ وبالتالي يمكن أن يطلق عليه بولي ببتيد ‎8015١‏ ‏ربط أكتيفين قابل للذويان. بالتالي؛ على النحو المستخدم ‎(lia‏ يشير تعبير ‎Jo‏ ببتيد ‎ACtRIN‏ ‏قابل للذويان" بصفة عامة إلى بولي ببتيدات تشتمل على نطاق خارج الخلايا لبروتين ‎ACRIIA‏ ‎La‏ في ذلك أي نطاق خارج الخلايا لبروتين ‎ARITA‏ ناتج طبيعياً بالإضافة إلى أي صور 0 متنوعة منه (بما في ذلك طفرات» شظايا وصور محاكية للبتيد). يمكن أن ترتبط بولي ببتيدات ‎ActRII‏ قابلة للذويان بأكتيفين؛ مع ذلك؛ لا يُظهر بروتين ‎ACRIIA‏ ذو نمط بري انتقائية كبيرة في الارتباط بالأكتيفين مقابل 6058/11. يمكن لبروتينات ‎ACtRIIA‏ أصلية أو معدلة أن تضيف نوعية للأكتيفين بواسطة إقرانها بعامل ربط أكتيفين انتقائي ثاني. تشتمل أمثلة؛ بولي ببتيدات ‎ActRII‏ لريط الأكتيفين القابلة للذوبان على البولي ببتيدات القابلة للذوبان المذوحة في متواليات 5 رقم: ‎NYY oY oF oY‏ تشتمل أمثلة أخرى؛ لبولي ببتيدات ‎AGRI‏ لريط الأكتيفين القابلة ‎Tye‏
للذويان على متوالية إشارة بالإضافة إلى نطاق خارج الخلية لبروتين ‎ACtRIIA‏ على سبيل المثال؛ متوالية ميليتين رائدة لنحل العسل (متوالية رقم: 4)؛ رائد منشط ‎ga‏ للبلازمينٍ ‎(TP A) canal‏ (متوالية رقم: 4) أو رائد ‎ACRIIA‏ الأصلي (متوالية رقم: ‎.)٠١‏ يستخدم بولي ببتيد ‎ACtRIA-‏ ‎WFC‏ الموضح في متوالية رقم: ‎١١‏ رائد ‎TP A‏ في نماذج محددة؛ تشتمل مثبطات 800118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على مترافق/بروتين اندماج يشتمل على نطاق ربط أكتيفين ل ‎ACRIIA‏ مرتبط بجزءِ ‎FC‏ لجسم مضاد. في نماذج محددة؛ يتم ربط نطاق ربط الأكتيفين بجزءِ ‎FC‏ لجسم مضاد بواسطة ‎chal)‏ على سبيل المثال» رابط ببتيد. على نحو ‎(lad)‏ يشتمل نطاق ‎Fo‏ على طفرة واحدة أو أكثر عند وحدات بنائية ‎Jie‏ 850-265؛ ليسين 777 و50-434. في حالات محددة؛ يكون لنطاق ‎Fe‏ المطفر 0 الذي يحتوي على واحدة أو أكثر من هذه الطفرات ‎Ae)‏ سبيل المثال» طفرة ‎(ASp=265‏ قدرة منخفضة على الارتباط بمستقبل ‎Fey‏ بالنسبة لنطاق ‎Fe‏ ذو نمط بري. في حالات أخرى؛ يكون لنطاق ‎Fe‏ المطفر الذي يحتوي على واحدة أو أكثر من هذه الطفرات ‎Ae)‏ سبيل المثال» طفرة ‎(Asn—434‏ قدرة متزايدة على الارتباط ب ‎MHC‏ من الفئة ‎١‏ المتعلق بمستقبل ‎(FCRN) Fc‏ بالنسبة لنطاق ‎Fe‏ ذو نمط بري. تم توضيح بروتينات اندماج تمثيلية تشتمل على نطاق خارج 5 الخلايا قابل للذويان ل 8ا800 مندمج بنطاق ‎Fe‏ في متواليات رقم: ‎AY 5 ٠7 YF‏ في نموذج محدد؛ تشتمل مثبطات 8ال800 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على نطاق خارج الخلية ل 8011/8 أو ‎(die gia‏ مرتبط ‎FC gia‏ لجسم مضاد؛ حيث يشتمل مثبط 801818 المذكور على متوالية حمض أميني مطابقة بنسبة 9675 على الأقل لمتوالية حمض أميني يتم اختيارها من متواليات رقم: ‎(BOTH OY YT‏ نموذج آخر محدد؛ تشتمل مثبطات ‎ARIA 0‏ المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على نطاق خارج الخلية ل ‎ACtRIIA‏ ‏أو ‎gia‏ منه؛ مرتبط بجزءِ ‎FC‏ لجسم مضاد؛ حيث يشتمل مثبط ‎ACtRIIA‏ المذكور على متوالية حمض أميني مطابقة بنسبة 968.0 على ‎(HAT 9695 96960 96/85 (BY)‏ 9697 964 أو 4 لمتوالية حمض أميني يتم اختيارها من متواليات رقم: 6 7 ‎AF ٠١‏ في نماذج محددة؛ تشتمل مثبطات 8001108 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على 5 صورة مشذبة من نطاق خارج الخلايا ل 8ا800. يمكن أن يكون التشذيب عند طرف الكريوكسي ‎Tye‏ ey ‏في نماذج محددة؛‎ LACHRI ‏للبولي ببتيد‎ amino terminus ‏و/أو طرف الأمينو‎ carboxy ‏ا كك مل‎ OY ‏تك فت فى للك‎ oY) ‏يمكن أن يبلغ طول التغذيب‎ ‏حمض أميني بالنسبة لنطاق خارج الخلايا‎ 1٠ ‏أو‎ 1 77 A 71 70 14 ‏ا للاء هاء‎
FY ٠ ‏لبولي ببتيد 8004118 الناضج. في نماذج محددة؛ يمكن أن يكون التشذيب عبارة عن‎
YY ‏نك كك‎ Ye VAY ‏لفكت فلك نك نك كك كف كد ماد كك‎ 5 ‏حمض أميني عند الطرف لا لنطاق خارج الخلايا لبولي ببتيد ال8010 الناضج . في‎ YO ‏أو‎ VE ‏نماذج محددة؛ يمكن أن يكون التشذيب عبارة عن تت تلك عت فخت نل ل‎ ‏حمض أميني عند‎ YO ‏أو‎ VE CYT YY YY 7١ 04 OA OY ‏دا كا‎ VEY OY ‏الناضج. على سبيل المثال؛ تشتمل صور‎ ARID ‏الطرف © لنطاق خارج الخلايا لبولي ببتيد‎ -٠١ amino acids ‏مشذبة ل 8ال8015 على بولي ببتيدات تحتوي على الأحماض الأمينية‎ 0
SY ‏باح‎ TFT ‏اج باحق بعصا بجع باج‎ 4 ‏حيث تشير مواضع الحمض‎ 1١-7٠ ‏13؛ 1-77 13؛ 31-73 1؛ 4 1-7 13؛ و‎ 1-71 17 .١ ‏الأميني إلى مواضع الحمض الأميني في متوالية رقم:‎ ‏في نماذج محددة؛ تشتمل مثبطات 80111 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على‎ ‏به واحدة أو أكثر من استبدالات الحمض الأميني. في نماذج‎ ARIA ‏نطاق خارج الخلايا ل‎ 5 ‏المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على صورة‎ ACtRIIA ‏محددة؛ تشتمل مثبطات‎ ‏على استبدال حمض أميني.‎ Lad ‏مشذبة من نطاق خارج الخلايا ل 8/ا801 الذي يحتوي‎ ‏المراد استخدامه في التركيبات والطرق الموصوفة هنا‎ ACtRIIA ‏في نموذج محدد؛ يكون مثبط‎ ‏ا6وا. في‎ IFC gia ‏بشري‎ ACRIIA ‏عبارة عن بروتين اندماج بين نطاق خارج الخلية لمستقبل‎ ‏نموذج آخر محدد؛ يكون مثبط 801118 المراد استخدامه في التركيبات والطرق الموصوفة هنا‎ 0
IFC gia ‏عبارة عن بروتين اندماج بين نطاق خارج الخلايا لمستقبل 8017118 بشري مشذب‎ ‏المراد استخدامه في التركيبات والطرق‎ ACtRIIA ‏اا . في نموذج آخر محدد؛ يكون مثبط‎ ‏بشري مشذب‎ ACRIA ‏لمستقبل‎ WAY ‏الموصوفة هنا عبارة عن بروتين اندماج بين نطاق خارج‎ ‏حيث يحتوي نطاق خارج الخلايا لمستقبل 8015118 بشري مشذب على‎ IgGl ‏ل‎ Fe ‏وجزءِ‎ ‏استبدالات حمض أميني واحدة أو أكثر.‎ 5
Tye
جه يمكن الحصول على الشظايا النشطة وظيفياً لبولي ببتيدات 8014110680 على سبيل المثال؛ بواسطة فحص بولي ببتيدات ناتجة عن عودة الارتباط الجيني من الشظية المناظرة للحمض النووي المشفر لبولي ببتيد ال800. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن تخليق الشظايا كيميائياً باستخدام تقنيات معروفة في المجال مثل كيمياء ‎Merrifield‏ تقليدية ل ‎f-Moc‏ أو 1-806 في الطور الصلب. يمكن إنتاج الشظايا (بشكل ناتج عن عودة الارتباط الجيني أو بواسطة التخليق الكيميائي) ويتم اختبارها لتحديد شظايا الببتيديل التي يمكن أن تعمل كمضادات (مثبطات) لبروتين ‎ACIRIIA‏ أو إرسال الإشارات الذي يساهم في حدوثه أكتيفين. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن الحصول على الصور المتنوعة النشطة وظيفياً لبولي ببتيدات ‎ACtRIN‏ ‏على سبيل ‎(JU‏ بواسطة فحص مجموعة من بولي ببتيدات معدلة ناتجة عن عودة الارتباط 0 الجيني من الأحماض الأمينية المطفرة المناظرة التي تشفر بولي ببتيد ال8010. يمكن إنتاج الصور المتنوعة ويتم اختبارها لتحديد تلك التي يمكن أن تعمل كمضادات (مثبطات) لبروتين ‎ACIRIIA‏ أو إرسال الإشارات الذي يساهم في حدوثه أكتيفين. في نماذج محددة؛ تشتمل صورة متنوعة وظيفية لبولي ببتيدات ال801 على متوالية حمض أميني مطابقة بنسبة 9675 على الأقل لمتوالية حمض أميني يتم اختيارها من متواليات رقم: ‎١‏ أو ؟. في حالات محددة؛ يكون للصورة المتنوعة الوظيفية 5 متوالية حمض أميني مطابقة بنسبة 96860 على ‎(JB)‏ 9685 610 د61 ‎AA %AY‏ 4 أو ‎96٠00‏ لمتوالية حمض أميني يتم اختيارها من متواليات رقم: ؟ أو 3. يمكن توليد الصور المتنوعة الوظيفية؛ على سبيل المثال؛ بواسطة تعديل بنية بولي ببتيد ‎ACtRIl‏ ‏لأغراض مثل تحسين الفاعلية العلاجية؛ أو الثبات (على سبيل ‎(JU‏ العمر التخزيني خارج الخلية الحية ومقاومة التحلل الحال للبروتين داخل الخلية الحية). يمكن أن تكون البولي ببتيدات 0 المعدلة المذكورة ا(015./ عند اختيارها لإعاقة ارتباط الأكتيفين» عبارة عن مكافئات وظيفية لبولي ببتيدات ‎800١‏ ناتجة طبيعيًا. كما يمكن إنتاج بولي ببتيدات معدلة ال801؛ على سبيل المثال؛ بواسطة استبدال» حذف أو إضافة حمض أميني . ‎Tye‏
اسه على سبيل ‎«Jal‏ يكون من المقبول توقع أن استبدال معزول لليوسين ‎leucine‏ بأيزوليوسين ‎isoleucine‏ أو فالين ‎valine‏ « أشبازتات ‎aspartate‏ بجلوتامات ‎glutamate‏ ؛ ثيرونين 6 بسيرين ‎serine‏ ؛ أو استبدال مماثل لحمض أميني بحمض أميني ذو صلة تركيبية ‎Ae)‏ سبيل المثال» طفرات محافظة ‎(conservative mutations‏ لن يكون له تأثير كبير على النشاط البيولوجي للجزئ الناتج. تكون الاستبدالات المحافظة عبارة عن تلك التي تحدث داخل عائلة من الأحماض الأمينية المرتبطة من السلاسل الجانبية الخاصة بها. إذا نتج عن التغير في متوالية حمض أميني لبولي ببتيد ‎8045١‏ فإنه يمكن تحديد نظير وظيفي بسهولة بواسطة تقييم قدرة الصورة المتنوعة من بولي ببتيد ا(8014 لإنتاج استجابة في الخلايا بطريقة مماثلة لبولي ببتيد ‎ActRII‏ ذو نمط بري.
0 في نماذج محددة؛ يمكن أن يشتمل متبط /ا[8004 المراد استخدامه في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على بولي ببتيد ‎AGRI‏ به واحدة أو أكثر من الطفرات النوعية التي يمكن أن تغير معالجة البولي ببتيد ‎polypeptide‏ بالجليكوسيل ‎glycosylation‏ يمكن لهذه الطفرات إدخال أو ‎(alas‏ من واحدة أو أكثر من مواقع المعالجة بالجليكوسيل؛ مثل مواقع المعالجة بالجليكوسيل مرتبطة عند الموضع © أو الموضع لا. تشتمل مواقع تمييز المعالجة بالجليكوسيل المرتبطة
بالأشباراجين 25 بصفة عامة على متوالية ثلاثية الببتيد ‎tripeptide sequence‏ « أشباراجين-ل-ثيرونين ‎threonine‏ (أو أُشباراجين -)ل-سيرين ‎Gua) (serine‏ تكون "ل" عبارة عن حمض أميني) والتي يتم تمييزها بشكل نوعي بواسطة إنزيمات المعالجة بالجليكوسيل خلوية مناسبة. كما يمكن إجراء التبديل بواسطة إضافة؛ أو استبدال؛ واحدة أو أكثر من وحدات سيرين أو ثيرونين بنائية لمتوالية بولي ببتيد ال08004/ ذو نمط بري (لمواقع معالجة بالجليكوسيل مرتبطة
0 بالموضع 0( ينتج عن مجموعة متنوعة من عمليات استبدال أو حذف الحمض الأميني عند واحد من مواضع الحمض الأميني الأولى أو الثالثة أو كلاهما لموقع تمييز معالجة بالجليكوسيل (و/أو حذف حمض أميني عند الموضع الثاني) عدم معالجة بالجليكوسيل عند المتوالية ثلاثية الأبعاد المعدلة. تتمثل طريقة أخرى لزيادة عدد شقوق الكريوهيدرات ‎carbohydrate moieties‏ على بولي ببتيد ال801 بواسطة الإقران الكيميائي أو الإنزيمي للجليكوسيدات بالبولي ببتيد ‎ACtRIN‏
5 بناءً على نمط الإقران المستخدم» يمكن إلحاق السكر (السكريات) ب (أ) أرجينين ‎arginine‏
وهستيدين ‎histidine‏ ؛ (ب) مجموعات كريوكسيل حرة ‎free carboxyl‏ ؛ (ج) مجموعات سَلفهيدريل حرة مثل تلك الخاصة بالسيستين ¢ ‎J)‏ ( مجموعات هيدروكسيل حرة مثل تلك الخاص بسيرين؛ ثيرونين» أو هيدروكسي برولين ‎hydroxyproline‏ ؛ (ه) وحدات بنائية عطرية ‎Jie‏ تلك الخاص بفينيل ألانين ‎phenylalanine‏ « تيروزين ‎tyrosine‏ » أو تريبتوفان ‎tryptophan‏ ؛ أو (و) مجموعة الأميد ‎amide‏ للجلوتامين ©9018010. تم وصف هذه الطرق في الطلب الدولي رقم ‎«OT AY‏ المنشور في ‎١١‏ سبتمبر ‎VAY‏ وفي ‎Aplin and Wriston (1981) CRC‏ ‎(Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306‏ التي تم تضمينها في هذه الوثيقة كمرجع. يمكن أن تتم إزالة واحد أو أكثر من شقوق الكربوهيدرات الموجودة على بولي ببتيد ال808 كيميائياً و/أو إنزيمياً. يمكن أن تتضمن عملية إزالة مجموعة الجليكوسيل الكيميائية؛ على سبيل المثال؛ تعريض 0 بولي ببتيد ال86114 لمركب حمض تراي فلورو ميثان سلفونيك ‎drifluoromethanesulfonic‏ أو مركب مكافئ. ينتج عن هذه المعالجة انشطار غالبية أو كل السكريات باستثناء السكر الرابط ‎=N)‏ ‏أمسيتيل ‎acetylglucosamine pas Sola‏ أو ل١-أسيتيل‏ جالاكتوسامين ‎¢(acetylgalactosamine‏ بينما يتم ترك متوالية الحمض الأمينى سليمة. يتم وصف عملية إزالة مجموعة الجليكوسيل الكيميائية بشكل إضافي بواسطة ‎Hakimuddin et al. (1987) Arch.‏ ‎Biochem. Biophys. 259:52 5‏ وبواسطة ‎Edge et al. (1981) Anal. Biochem.‏ 1 :118 يمكن تحقيق الانشطار الإنزيمي لشقوق الكريوهيدرات على بولي ببتيدات ‎ACtRIl‏ ‏بواسطة استخدام مجموعة متنوعة من إنيزمات جليكوسداز 911/00510838565 داخلية وخارجية على النحو الموصوف بواسطة 138:350 ‎Thotakura et al. (1987) Meth. Enzymol.‏ . يمكن ضبط متوالية بولي ببتيد ال8014؛ بشكل مناسب؛ بناءً على نوع التعبير ‎hell‏ المستخدم ‘ 0 حيث يمكن لخلايا كائن ثديي» خميرة؛ حشرة ونبات إدخال أنماط معالجة بالجليكوسيل مختلفة التي يمكن أن تتأثر بمتوالية الحمض الأميني للببتيد. بصفة عامة؛ يمكن التعبير ‎Lil‏ عن بروتينات ‎ActRIIA‏ المستخدمة فى البشر فى سلالة خلية كائن ثديى توفر معالجة ملائمة بالجليكوسيل»؛ ‎Jie‏ ‏سلالات خلية ‎HEK293‏ أو ‎«CHO‏ إلا أنه من المتوقع أن تكون أنظمة تعبير وراثي أخرى؛ مثل سلالات خلية تعبير وراثى ثديية أخرى؛ سلالات خلية خميرة بها إنزيمات معالجة بالجليكوسيل 5 معدلة ‎Lily‏ وخلايا حشرات ‎insect cells‏ ؛ مفيدة أيضاً.
Ive
ده علاوة على ذلك يتم هنا توفير طرق لتوليد طفرات؛ بشكل محدد مجموعة من طفرات توافقية لبولي ببتيد ا8014؛ بالإضافة إلى طفرات مشذبة؛ تكون مجموعات من طفرات توافقية مفيدة بشكل خاص لتحديد متواليات وظيفية متغيرة. يمكن أن يتمثل الغرض من فحص المجموعات التوافقي المذكورة في توليد؛ على سبيل المثال» صور متغيرة من بولي ببتيد ال8045 والتي يمكن أن تعمل إما كعوامل مساعدة أو مضادء؛ أو على نحو بديل؛ التي يكون لها كل الأنشطة الجديدة معاً. يتم ‎SL‏ توفير مجموعة متنوعة من تجارب الفحص؛ ويمكن استخدام هذه التجارب لتقييم الصور المتنوعة. على سبيل المثال» يمكن فحص قدرة صورة بولي ببتيد ‎AGRI‏ متغيرة على الارتباط ب مركب 8015 ترابطي؛ لمنع ارتباط مركب ا[8014 ترابطي ببولي ببتيد ال801 أو التداخل مع إرسال الإشارات الذي يحدث بواسطة مركب 800511 ترابطي. 0 يمكن توليد الصور المتغيرة المشتقة توافقياً التي يكون لها فاعلية انتقائية أو متزايدة بصفة عامة بالنسبة لبولي ببتيد ال8015 ناتج طبيعياً. على نحو مماثل؛ يمكن أن ينتج عن التطفر زيادة في الصور المتغيرة والتي يكون لها عمر نصفي داخل الخلية مختلف بدرجة كبيرة عن بولي ببتيد ال01ه ذو النمط البري المناظر. على سبيل المثال» يمكن أن يتم جعل البروتين الذي تم تغييره إما أكثر ثباتاً أو أقل ثباتاً للتحلل الحال للبروتين أو عمليات خلوية أخرى والتي ينتج عنها تدمير؛ 5 أو بخلاف ذلك إيقاف تنشيط بولي ببتيد ال8015/ أصلي. يمكن استخدام الصور المتغيرة المذكورة؛ والجينات المُشفرة ‎(lg)‏ لتغيير مستويات بولي ببتيد ال801 بواسطة تنظيم العمر النصفي لبولي ببتيدات ال8004. على سبيل المثال؛ يمكن أن ينتج ‎jee‏ نصفي قصير زيادة في تأثيرات بيولوجية عابرة بدرجة أكبر ويمكن أن يسمح بتحكم أقوى في مستويات بولي ببتيد ال800 ناتج عن عودة الارتباط الجيني في المريض. في بروتين اندماج ‎(FC‏ يمكن عمل الطفرات في الرابط (إن وجد) 0 و/أو ‎FC gia‏ لتغيير العمر النصفي للبروتين. يمكن إنتاج مجموعة توافقية بواسطة مجموعات تنكسية من جينات تُشفر مجموعة من بولي ببتيدات تتضمن كل منها جزء على الأقل من متواليات بولي ببتيد ال8015 محتملة. على سبيل المثال؛ يمكن يمكن إلحاق خليط من أوليجو نوكليوتيدات ‎oligonucleotides‏ تخليقية بصورة إنزيمية داخل متواليات جين بحيث يمكن التعبير وراثياً عن المجموعة التنكسية لمتواليات نوكليوتيد بولي
Tye
PI chy ‏المحتملة كبولي ببتيدات مستقلة؛ أو على نحو‎ ActRIl polypeptide nucleotide ‏ببتيد‎ ‏كمجموعة من بروتينات اندماج أكبر (على سبيل المثال؛ لإظهار الخلايا الملتهمة).‎ ‏يوجد عدة طرق يمكن بواسطتها توليد مجموعة من النظائر المحتملة من متوالية أوليجو نوكليوتيد‎ ‏تخليق‎ Bang ‏يمكن أن يتم التخليق الكيميائي لمتوالية جين تنكسي في‎ duns oligonucleotide ‏أوتوماتيكية؛ وبعد ذلك يمكن إلحاق الجينات التخليقية في ناقل ملائم للتعبير الوراثي. يكون‎ DNA 5
Narang, «JU ‏تخليق أوليجو نوكليوتيدات تنكسية معروف جيداً في المجال (راجع على سبيل‎ ltakura et al., (1981) Recombinant DNA, ¢S A (1983) Tetrahedron 39:3
Proc. 3rd Cleveland Sympos. Macromolecules, ed. AG Walton, ltakura et al, (1984) Annu. Rev. ¢Amsterdam: Elsevier pp 273-289 lke et al, ¢ltakura et al, (1984) Science 198: 1056 ¢Biochem. 53:323 0 ‏تم استخدام هذه التقنيات في التطوير المباشر‎ .((1983) Nucleic Acid Res. 11 :477
Scott et al, (1990) Science 249:386- ‏لبروتينات أخرى (راجع؛ على سبيل المثال»‎
Devlin et al, ¢Roberts et al, (1992) PNAS USA 89:2429-2433 ¢390
Cwirla et al, (1990) PNAS USA 87: ¢(1990) Science 249: 404-406
OVAATET OYYV ELA ‏بالإضافة إلى براءاة الاختراع الأمريكية أرقام‎ 46378-6382 15 ‏و47/15.).‎ ‏يمكن استخدام صور أخرى للتطفر لتوليد مجموعة توافقية. على سبيل المثال؛‎ diy ‏على نحو‎ ‏وعزلها من مجموعة بواسطة الفحص باستخدام؛‎ AGRI ‏يمكن توليد صور متغيرة من بولي ببتيد‎ ‏شابه‎ Ly alanine scanning mutagenesis ‏التطفر بفحص الألانين‎ (JU ‏على سبيل‎
Wang et al, (1994) J. ¢(1994) Biochemistry 33: 1565-1572 Ruf et al.,) 0 ¢Balint et al, (1993) Gene 137: 109-118 ¢Biol. Chem. 269:3095-3099
Nagashima et al, ¢Grodberg et al, (1993) Eur. J. Biochem. 218:597-601
Lowman et al, (1991) ¢(1993) J. Biol. Chem. 268:2888-2892
Cunningham et al, (1989) Science 244: 4 «Biochemistry 30: 10832-10838
Gustin et al, (1993) Virology 193:653-) ‏لا0التطفر يفحص الرابط‎ (1081-1085 5
‎McKnight et al, ¢Brown et al, (1992) Mol.
Cell Biol. 12:2644-2652 «660‏ ‎Science 232:316‏ )1982((¢ بواسطة التطفر بالتشبع ) )1986( ‎Meyers et al,‏ ‎¢(Science 232:613‏ بواسطة التطفر ‎Leung et al, (1989) Method Cell Mol) PCR‏ ‎¢(Biol 1 : 11-19‏ أو بواسطة التطفر العشوائي؛ بما في ذلك التطفر الكيميائي؛ إلخ ‎Miller et)‏ ‎al, (1992) A Short Course in Bacterial Genetics, CSHL Press, Cold Spring 5‏ ‎(Greener et al, (1994) Strategies in Mol Biol 7:32-34 5 «Harbor, N.Y.‏ يعتبر التطفر بفحص الرابط» بشكل محدد في إعداد توافقي؛ طريقة جديدة لتحديد صور مشذبة (نشطة ‎bioactive Lisa‏ ) من بولي ببتيدات ‎ActRIIA‏ . يكون نطاق واسع من التقنيات معروف في المجال لفحص منتجات الجين لمجموعات توافقية 0 محضرة بواسطة طفرات إلى نقطة معينة وعمليات تشذيب؛ و» بالنسبة لهذا الموضوع؛ لفحص مجموعات ‎CDNA‏ لمنتجات جين لها خاصية محددة. ستتم تهيئة هذه التقنيات بصفة ‎dale‏ ‏للفحص السريع لمجموعات الجين التي يتم توليدها بواسطة التطفر التوافقي لبولي ببتيدات 80111. تشتمل أكثر التقنيات المستخدمة على نطاق واسع لفحص مجموعات كبيرة من الجينات بصورة نمطية على عمل نسائل من مجموعة الجين نواقل تعبير وراثي قابل للاستنساخ؛ تحويل خلايا مناسبة باستخدام مجموعة النواقل الناتجة؛ والتعبير وراثياً عن الجينات التوافقية في ظل ظروف يؤدي ‎gd‏ الكشف عن النشاط المطلوب إلى تسهيل العزل السهل نسبياً لناقل يُشفر الجين الذي تم الكشف عن المنتج الخاص به. تشتمل التجارب المفضلة على تجارب ارتباط الأكتيفين وتجارب إرسال إشارات خلية يساهم في حدوثها الأكتيفين. في نماذج محددة؛ كما يمكن أن تشتمل بولي ببتيدات ا[801/ مستخدمة في المثبطات الخاصة 0 بالطرق والموصوفة في هذه الوثيقة على تعديلات ما بعد التحور الوراثي بالإضافة إلى بالإضافة إلى تلك التي تكون موجودة بصورة طبيعية في بولي ببتيدات ‎ACKRIN‏ يمكن أن تشتمل هذه التعديلات؛ على سبيل المثال وليس الحصر؛ على المعالجة بالأسيتيل؛ المعالجة بالكريوكسيل؛ معالجة بالجليكوسيل؛ الفسفرة» ‎phosphorylation‏ المعالجة بالدهون ‎lipidation‏ ؛ ومعالجة بالأسيل ‎acylation‏ كنتيجة لذلك؛ يمكن أن تحتوي بولي ببتيدات ‎ActRIN‏ المعدلة على عناصر 5 بخلاف الحمض الأميني؛ مثل مركبات بولي إيثيلين جليكول ‎polyethylene glycol‏ ؛ دهون ‎re‏ tA ‏؛ ومركبات الفوسفات‎ saccharide ‏-سكاريد‎ mono ‏أو مونو‎ - poly ‏؛ بولي‎ 5 ‏يمكن اختبار تأثيرات العناصر بخلاف الحمض الأميني المذكورة على وظيفية‎ . 05 ‏بواسطة أي طريقة معروفة للمتمرس في المجال. عندما يتم إنتاج بولي ببتيد‎ AGRI ‏بولي ببتيد‎ ‏في خلايا بواسطة انشطار صورة ناشئة من بولي ببتيد ال8015,؛ كما يمكن أن تكون‎ ActRI ‏الصحيح و/أو وظيفة البروتين. يكون للخلايا المختلفة‎ all dala ‏المعالجة ما بعد التحور الوراثي‎ 5
Leg ‏آلية خلوية‎ (HEK293 ‏أو‎ NIH-3T3 (W138 (293 (MDCK (Hela (CHO ‏(مثل‎ ‏وآليات مميزة لنشاطات ما بعد التحور الوراثي المذكورة وويمكن اختيارها لضمان التعديل الصحيح‎
ACRIN ‏ومعالجة بولي ببتيدات‎ 801١١ ‏في جوانب محددة؛ تشتمل الصور المتنوعة الوظيفية أو الصور المعدلة لبولي ببتيدات‎ ‏المستخدمة في المثبطات الخاصة بالطرق والتركيبات الموصوفة هنا على بروتينات اندماج بها جزء‎ 0 ‏وواحد أو أكثر من نطاقات الاندماج. تشتمل الأمثلة‎ ACtRIN ‏على الأقل من بولي ببتيدات‎ ‏لنطاقات الاندماج المذكورة؛ على سبيل المثال وليس الحصر؛ على بولي هستيدين‎ fa ‏المعروفة‎ ‎glutathione 5 transferase ‏جلوتاثيون 5 ترانسفيراز‎ «Glu—Glu » polyhistidine ‏منطقة ثابتة‎ «G protein ‏بروتين‎ <A protein ‏؛ بروتين‎ thioredoxin ‏ثيو ريدوكسين‎ (GST) ‏بروتين ربط مالتوز‎ «(Fe)immunoglobulin heavy 0080 ‏لسلسلة ثقيلة لجلويولين مناعي‎ 5 . human serum albumin ‏أو ألبومين مصل بشري‎ «(MBP) maltose binding protein ‏يمكن اختيار نطاق اندماج بحيث يتم نقل الخاصية المطلوية. على سبيل المثال؛ تكون بعض‎ ‏نطاقات الاندماج مفيدة بشكل خاص لعزل بروتينات الاندماج بواسطة كروماتوجراف الألفة‎ ‏لغرض تتقية الألفة يتم استخدام مصفوفات ذات صلة‎ affinity chromatography « amylase ‏أميليز‎ » glutathione ‏لكروماتوجراف الألفة؛ مثل راتنجات مترافقة بجلوتاثيون‎ 20
Cail’ ‏تكون العديد من هذه المصفوفات متوفرة في صورة‎ Nickel oF cobalt cli ‏ونيكل أو‎ ‏المفيد مع شريك‎ (Qiagen) QlAexpress. TM. ‏ونظام‎ Pharmacia GST ‏مثل نظام التنقية‎ ‏يمكن اختيار نطاق اندماج بحيث يتم تسهيل الكشف عن بولي‎ «GAT ‏كمثال‎ (HIS6) ‏اندماج‎ ‏نطاقات الكشف المذكورة على العديد من البروتينات المتألقة فلوربًا‎ dial ‏ببتيدات ا801. تشتمل‎ ‏ما تكون عبارة عن‎ bale ‏والتي‎ "dial ‏بالإضافة إلى "علامات قمة‎ (GFP ‏(على سبيل المثال»‎ 5
PP
‏متواليات ببتيد قصيرة يتوفر لها جسم مضاد نوعي. تشتمل علامات القمة اللاصقة المعروفة جيداً‎ ‏دَمَوِبَّة‎ dal) FLAG ‏التي يتوفر لها بسهولة الأجسام المضادة أحادية النسيلة النوعية على‎ ‏وعلامات 26/ا6-7. في بعض الحالات؛‎ (HA) virus hemagglutinin ‏لفيروس الإنفلونزا‎ ‏أو ثرومبين‎ Xa ‏مثل لعامل‎ protease ‏تحتوي نطاقات الاندماج على موقع انشطار البروتياز‎ ‏؛ والتي تسمح للبروتياز ذو الصلة باهتضام بروتينات الاندماج جزئياً وبالتالي يتم‎ thrombin 5 ‏تحرير البروتينات الناتجة عن عودة الارتباط الجيني منها. بعد ذلك يمكن عزل البروتينات المحررة‎ ‏من نطاق الاندماج بواسطة فصل كروماتوجرافي لاحق. في نماذج مفضلة محددة؛ يتم دمج بولي‎ ‏ببتيد ال80050 بنطاق يعمل على تثبيت بولي ببتيد ال800 داخل الخلية الحية ( نطاق 'مثبت").‎ ‏يعني تعبير 'تثبيت" أي شيء يعمل على زيادة العمر النصفي للمصل؛ بغض النظر عن ما إذا‎
AT ‏كان ذلك بسبب التدمير المنخفض؛ التصفية المنخفضة بواسطة الكلية؛ أو تأثير دوائي حركي‎ 0 ‏تكون عمليات الاندماج بجزءِ © لجلوبولين مناعي معروف بنقل خواص حركية دوائية مطلوية إلى‎ ‏نطاق واسع من البروتينات. على نحو مماثل؛ يمكن أن تنقل عمليات الاندماج بألبومين مصل‎ ‏بشري خواص مطلوية. تشتمل أنواع أخرى لنطاقات الاندماج التي يمكن اختيارها على نطاقات ذات‎ (tetramerizing ‏؛ تكوين ترايمر‎ dimerizing ‏وحدات متعددة (على سبيل المثال؛ الديمرة‎ ‏وظيفة بيولوجية إضافية؛ مثل التحفيز الإضافي لنمو العظام أو نمو‎ Jan All) ‏ونطاقات وظيفية‎ 5 ‏العضلات؛ على النحو المطلوب).‎ ‏يتم فهم أنه يمكن وضع العناصر المختلفة لبروتينات الاندماج بأي طريقة تتوافق مع الوظيفية‎ ‏يمكن وضع بولي ببتيد ال801 عند الطرف © لنطاق مختلف‎ «JU ‏المطلوية. على سبيل‎ ‏التكوين» أو على نحو بديل؛ يمكن وضع نطاق مختلف التكوين عند الطرف © لبولي ببتيد‎ ‏ال2004. ليس بالضرورة أن يكون نطاق بولي ببتيد ال8015 والنطاق مختلف التكوين متجاورين‎ 0 ‏في بروتين الاندماج؛ ويمكن أن يتم تضمين نطاقات إضافية أو متواليات حمض أميني عند‎ ‏الطرف © أو لا لأي نطاق أو بين النطاقات.‎ ‏في نماذج محددة؛ يمكن أن تحتوي بولي ببتيدات ال8005 المستخدمة في المثبطات الخاصة‎ ‏بالطرق والتركيبات الموصوفة هنا على تعديل واحد أو أكثر قادر على تثبيت بولي ببتيدات‎ ‏يمكن أن تؤدي هذه التعديلات إلى تحسين العمر النتصفي في المعمل‎ «JB ‏ال2004. على سبيل‎ 5
Tye
مه لبولي ببتيدات ال801/؛ تحسين العمر النصفي الدوراني لبولي ببتيدات ا[801 أو تقليل التحلل الحال للبروتين لبولي ببتيدات ‎ACHR‏ يمكن أن تتضمن تعديلات التثبيت المذكورة؛. على سبيل المثال وليس الحصرء بروتينات اندماج ‎La)‏ في ذلك؛ على سبيل المثال؛ بروتينات اندماج تشتمل على بولي ببتيد ال800 ونطاق تثبيت)؛ تعديلات موضع المعالجة بالجليكوسيل (بما في ذلك؛ على سبيل المثال؛ إضافة موضع المعالجة بالجليكوسيل إلى بولي ببتيد ‎(ACRIN‏ وتعديلات شق الكريوهيدرات ‎Lay)‏ في ذلك» على سبيل المثال» إزالة شقوق الكريوهيدرات من بولي ببتيد ‎(ACIRIN‏ ‏في حالة بروتينات ‎oz Lol‏ يتم مدج بولي ببتيد ال8015 بنطاق تثبيت ‎Jie‏ جزئ ‎19G‏ (على سبيل المثال» نطاق ‎(Fe‏ على النحو المستخدم هناء لا يشير تعبير "نطاق تثبيت" إلى نطاق اندماج (على سبيل المثال» ‎(Fe‏ كما في حالة بروتينات الاندماج فحسب؛ لكن يتضمن أيضاً تعديلات 0 غير بروتينية مثل شق كربوهيدرات؛ أو بوليمر غير بروتيني؛ مثل بولي إيثيلين جليكول. في نماذج محددة؛ يمكن استخدام الصور المعزولة و/أو المنقاة من بولي ببتيدات 8011 التي يتم عزلها من» أو بخلاف ذلك تكون خالية من» بروتينات أخرى مع الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. بولي ببتيدات ال800 يمكن بصفة ‎dale‏ إنتاج بواسطة التعبير الوراثي من أحماض نووية ناتجة عن عودة الارتباط الجيني ‎recombinant nucleic acids‏ . 5 في جوانب محددة؛ يتم توليد بولي ببتيدات ‎ACRIN‏ المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا باستخدام أحماض نووية معزولة و/أو ناتجة عن عودة الارتباط الجيني تُشفر أي من بولي ببتيدات ال8015/ ‎Ae)‏ سبيل المثال؛ بولي ببتيدات ‎ActRIN‏ قابلة للذوبان)؛ ‎Lay‏ في ذلك شظاياء ‎gual‏ المتنوعة الوظيفية وبروتينات اندماج تم الكشف عنها هنا. على سبيل المثال» تعمل متوالية رقم: ؛ على تشفير بولي ببتيد منتج ل ‎ACRIIA‏ بشري ناتج طبيعياً؛ بينما تقوم متوالية رقم: © 0 بتشفير نطاق خارج الخلايا ل ‎ACRIIA‏ المعالج. يمكن أن تكون الأحماض النووية المذكورة عبارة عن أحادية الجديلة أو مزدوجة الجديلة. يمكن أن تكون الأحماض النووية المذكورة عبارة عن جزيئات ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ يمكن استخدام الأحماض النووية المذكورة؛ على سبيل المثال؛ في طرق تحضير بولي ببتيدات |8007 أو كعوامل علاجية مباشرة (على سبيل المثال» في طريقة علاج الجين ‎(gene‏
Tye
-1ه- في جوانب محددة؛ يمكن أن تشتل أحماض نووية تشفر بولي ببتيدات ‎ACIRIN‏ على أحماض نووية عبارة عن صور متغيرة من متوالية رقم: ؛ أو ©. تشتمل متواليات النوكليوتيد المتغيرة على متواليات تختلف بواسطة أو أكثر من عمليات استبدال؛ إضافة أو حذف النوكليوتيد. مثل صور متغيرة أليلية ‎allelic variants‏ . في نماذج محددة؛ يمكن أن تكون متواليات الحمض النووي المعزولة أو الناتجة عن عودة الارتباط الجيني ‎isolated or recombinant nucleic acid sequences‏ التي تشفر بولي ببتيدات ‎ActRII‏ مطابقة بنسبة تبلغ 96/80 96/85 ‎PAA %AY 615 (FH‏ 9694 أو ‎96٠٠١‏ ‏على الأقل لمتوالية رقم: ؛ أو 5. سيدرك أحد أصحاب ‎lead)‏ العادية في المجال أنه يمكن استخدام متواليات الحمض النووي المتممة لمتوالية رقم: ؛ أو © وصور متغيرة من متوالية رقم: £ 0 أو ‎٠‏ في إنتاج بولي ببتيدات ‎ACRIN‏ مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. في نماذج أخرى» يمكن أن يتم عزل متواليات الحمض النووي المذكورة» ناتجة عن عودة الارتباط الجيني؛ و/أو ‎to a‏ 560/آمتواليى نوكليوتيد مختلف التكوين؛ أو تكون من مجموعة ‎DNA‏ ‏في نماذج أخرى؛ يمكن أن تتضمن أحماض نووية مستخدمة في إنتاج بولي ببتيدات ‎801١‏ ‏مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا متواليات النوكليوتيد التي يتم تهجينها في 5 ظل ظروف صارمة بدرجة كبيرة إلى متوالية النوكليوتيد امحددة في متوالية رقم: ؛ أو ©؛ متوالية متممة لمتوالية رقم: 4 أو 0 أو شظايا منها. سيفهم صاحب المهارة العادية في المجال أن الظروف الصارمة المناسبة التي تعزز تهجين ‎DNA‏ يمكن أن تكون مختلفة. على سبيل المثال؛ يمكن أن يقوم أحدهم بتنفيذ التهجين عند 1,0 مرة من كلوريد الصوديوم/سيترات الصوديوم ‎(SSC) sodium chloride /sodium citrate‏ عند حوالي £0 درجة مئوية؛ يليه الغسل بمعدل ‎٠, 0‏ مرة 5856 عند ‎٠‏ © درجة مئوية. على سبيل ‎(JU)‏ يمكن اختيار تركيز الملح في خطوة الغسل من ظروف أقل صرامة تبلغ حوالي 7,0 مرة 556 عند » © درجة مئوية إلى ظروف أكثر صرامة تبلغ حوالي ‎١,7‏ مرة ‎die SSC‏ © درجة مئوية. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن أن تتم زيادة درجة الحرارة في خطوة الغسل من ظروف أقل صرامة عند درجة حرارة الغرفة؛ حوالي ‎YY‏ درجة مئوية؛ إلى ظروف أكثر صرامة عند حوالي ‎To‏ درجة مئوية. يمكن أن يختلف كل من درجة 5 الحرارة والملح» أو يمكن تثبيت درجة ‎hall‏ أو تركيز الملح بينما يتم تغيير المتغير الآخر. في أحد
وه النماذج؛ يمكن استخدام الأحماض النووية التي يتم تهجينها في ظل ظروف أقل صرامة بمعدل + مرات ‎SSC‏ عند درجة حرارة الغرفة يليها الغسل بمعدل ؟ مرة ‎SSC‏ عند درجة حرارة الغرفة مع الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. كما يمكن استخدام أحماض نووية معزولة تختلف عن الأحماض النووية الواردة في متواليات رقم: 4؛ أو © بسبب التنكس في الشفرة الوراثية في إنتاج بولي ببتيدات ‎AGRI‏ مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. على سبيل ‎(JU‏ يتم تحديد عدد من الأحماض الأمينية بواسطة أكثر من ثلاثي واحد. يمكن أن ينتج عن الرامزات التي تحدد نفس الحمض الأميني؛ أو مترادفات ‎lo)‏ سبيل المثال» تكون ‎CAC 53 CAU‏ عبارة عن مترادفات للهستيدين ‎(histidine‏ ‏طفرات ‎ASL‏ لا تؤثر على متوالية الحمض الأميني للبروتين. مع ذلك» من المتوقع أن تتواجد 0 متعددات الشكل البلوري لمتوالية ‎DNA‏ التي لا تؤدي إلى تغييرات في متواليات الحمض الأميني لبروتينات الخاضع ضمن الخلايا الثديية ‎mammalian cells‏ . سيدرك صاحب المهارة في المجال أن هذه الصور المتغيرة في واحد أو أكثر من النوكليوتيدات (ما يصل إلى حوالي 1965-7 من النوكليوتيدات) للأحماض النووية التي تشفر بروتين محدد يمكن أن تتواجد في أفراد من أنواع محددة بسبب الصورة المتغيرة الأليلية الطبيعية. 5 في نماذج محددة؛ يمكن ربط الأحماض النووية الناتجة عن ‎sage‏ الارتباط الجيني بفاعلية ب واحدة أو أكثر من متواليات النوكليوتيد التنظيمية في جزءٍ منشاً للتعبير الوراثي. ستكون متواليات التوكليوتيد التنظيمية مناسبة بصفة ‎dale‏ للخلية العائلة المستخدمة للتعبير الوراثي. تكون أنواع متعددة لنواقل تعبير وراثي مناسبة ومتواليات تنظيمية مناسبة معروفة في المجال لمجموعة متنوعة من ‎LAY‏ العائلة ‎host cells‏ نمطياً؛ يمكن أن تحتوي واحدة أو أكثر من متواليات النوكليوتيد 0 التنظيمية المذكورة؛ على سبيل المثال وليس الحصر؛ على متواليات معززة؛ متوالية رائدة أو متوالية إشارة؛ مواقع ريط ريبوسومية؛ متواليات بدء وإنهاء النسخ؛ متواليات بدء وإنهاء التحور الوراثي؛ ومتواليات محسنة أو منشطة. يتم في هذه الوثيقة توضيح معززات بنيوية أو قابلة للحث مثل تلك المعروفة في المجال. يمكن أن تكون المعززات إما معززات ناتجة طبيعياً؛ أو معززات هجينة تعمل على دمج عناصر أكثر من معزز واحد. يمكن أن يكون ‎sa‏ منشاً للتعبير ‎Shell‏ موجود في خلية 5 على إيبسوم؛ مثل بلازميد؛ أو يمكن إدخال الجزءِ المنشأً للتعبير الوراثي في كروموسوم. في نموذج
Tye
اسع مفضل؛ يحتوي ناقل التعبير ‎(Shell‏ على جين مرقم قابل للاختيار للسماح باختيار ‎LA‏ عائلة محولة. تكون جينات مرقمة قابلة للاختيار معروفة جيداً في المجال ووستختلف وفقاً للخلية العائلة المستخدمة. في جوانب محددة؛ يمكن توفير الحمض النووي المستخدم في بولي ببتيدات 8004(1 مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا في ناقل تعبير وراثي يشتمل على متوالية نوكليوتيد تشفر بولي ببتيد ‎ACRIN‏ ويتم ربطه بمتوالية تنظيمية واحدة على الأقل. يتم تمييز المتواليات التنظيمية في المجال ويتم اختيارها لتوجيه التعبير الوراثي عن بولي ببتيد ال200. وفقاً لذلك؛ يشتمل تعبير متوالية تنظيمية على معززات» محسنات؛ وعناصر ‎(AT‏ للتحكم في التعبير الوراثي. تم وصف متواليات تنظيمية تمثيلية في ‎Goeddel; Gene Expression Technology:‏ ‎.Methods in Enzymology, Academic Press, San Diego, Calif. (1990) 0‏ على سبيل المثال» يمكن استخدام أي مجموعة متنوعة من متواليات التحكم في التعبير الوراثي التي تتحكم في التعبير ‎hel)‏ عن متوالية ‎DNA‏ عند ربطها بفاعلية بها في هذه الناقلات للتعبير ‎Js)‏ عن متواليات ‎DNA‏ التي تشفر بولي ببتيد ال801. تشتمل متواليات التحكم في التعبير الوراثي المذكورة؛ على سبيل المثال»على معززات في المرحلة المبكرة أو المتأخرة ل 51/40؛ معزز ‎ctet 5‏ معزز مبكر مباشر للفيروس الغدي أو الفيروس المضخم ‎(LAN‏ معززات ‎(RSV‏ نظام ‎dac‏ ‏نظام 00 نظام ‎TAC‏ أو ‎(TRC‏ معزز ‎TT‏ الذي يتم توجيه التعبير الوراثي الخاص به بواسطة ‎RNA‏ 17 بُوليميراز» المناطق المشغلة والمعززة الرئيسية للمدا الملتهمة؛ مناطق التحكم لبروتين ‎fd‏ ‏المغلف؛ المعزز ل 7-كُسُْوجليسَرات كيناز أو إنزيمات أخرى حالة ‎Sal‏ معززات فُشفاتاز ‎canal‏ على سبيل المثال» ‎(PHOS‏ معززات عوامل تزاوج ألفا للخميرة؛ معزز البولي هيدرون 0 ا لنظام الفيروسة العصوية ومتواليات أخرى معروف أنها تتحكم في التعبير الوراثي عن جينات خلايا بدائية النواة أو حقيقية النواة أو الفيروسات الخاصة بهاء وتوليفات مختلفة منها. ينبغي إدراك أن تصميم ناقل التعبير ‎hel‏ يمكن أن يعتمد على هذه العوامل كاختيار للخلية العائلة المطلوب تحويلها و/أو نوع البروتين المراد التعبير عنه وراثياً. علاوة على ذلك؛ ينبغي ‎Lad‏ أخذ رقم نسخة الناقل» القدرة على التحكم في رقم النسخة والتعبير ‎Shell‏ عن أي بروتين آخر مشفر بواسطة النناقل» مثل مرقمات مضاد حيوي؛ في الاعتبار. ‎Tye‏
وه
يمكن إنتاج حمض نووي ناتج عن عودة الارتباط الجيني مستخدم في إنتاج بولي ببتيدات ‎ActRII‏ ‏مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا بواسطة إلحاق الجين الذي تم عمل نسائل منه؛ أو جز منه؛ في ناقل مناسب للتعبير الوراثي إما في خلايا بدائية النواة؛ خلايا حقيقية ‎oll‏ ‏(خميرة؛ الطيور» حشرة أو كائن ثديي)؛ أو كلاهما. تشتمل نواقل التعبير الوراثي لإنتاج بولي ببتيد ناتج عن عودة الارتباط الجيني ا[800 على بلازميدات ونواقل أخرى. على سبيل المثال؛ تشتمل النواقل المناسبة على بلازميدات من الأنواع: بلازميدات مشتقة من ‎PBR322‏ بلازميدات مشتقة من ا61/8؛ بلازميدات مشتقة من ‎(PEX‏ بلازميدات مشتقة من ©0818 ويلازميدات مشتقة من
©لام للتعبير الوراثي في خلايا بدائية النواة. مثل إشرشيا كولاي. تحتوي بعض نواقل التعبير الوراثي لكائن ثديي على كل من المتواليات بدائية النواة لتسهيل انتشار 0 اناقل في البكتيرياء وواحدة أو أكثر من وحدات استنساخ حقيقية النواة التي يتم التعبير عنها وراثياً في خلايا حقيقية النواة. تكون النواقل المشتقة من ‎«PcDNAI/neo pcDNAIl/amp‏ ‎pTk2 pSV2-dhfr pSV2neo pSV2gpt pRc/CMV‏ معد/اكاام ‎«PMSG‏ ‎pHYQ 5 pko-neo pSVTT‏ عبارة عن أمثلة لنواقل تعبير وراشي لكائن ثديي مناسبة لنقل العدوى إلى خلايا حقيقية النواة. يتم تعديل بعض من هذه النواقل باستخدام متواليات من بلازميدات 5 بكتيرية؛ ‎(pBR322 Jie‏ لتسهيل التناسخ واختيار مقاومة العقار في كل من خلايا بدائية النواة وحقيقية النواة. على نحو بديل» يمكن استخدام مشتقات الفيروسات مثل الأورام الحليمية البقرية ‎«(BPV-1) bovine papilloma virus‏ أو فيروس إبستين - بار ‎Epstein-Barr virus‏ ‎(pHEBO)‏ مشتق من ‎PREP‏ 02055( للتعبير الوراثي العابر عن البروتينات في خلايا حقيقية النواة. يمكن العثور على أمثلة أنظمة تعبير وراثي فيروسية أخرى ‎La)‏ في ذلك الارتداد الفيروسي ‎(retroviral 0‏ أدناة في وصف أنظمة توصيل العلاج بالجينات. تكون الطرق المختلفة المستخدمة في تحضير البلازميدات وفي تحول كائنات العائل معروفة جيداً في المجال. بالنسبة لأنظمة التعبير الوراثي المناسبة الأخرى لكل من الخلايا بدائية النواة وحقيقية النواة؛ بالإضافة إلى الإجراءات العامة لناتج عودة الارتباط الجيني»؛ راجع ‎Molecular Cloning A Laboratory‏ ‎Manual, 3rd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring‏ ‎(Harbor Laboratory Press, 2001 25‏ في بعض الحالات؛ قد يكون من المرغوب فيه التعبير
—oo— ‏عن‎ hy ‏وراثياً عن بولي ببتيدات ناتجة عن عودة الارتباط الجيني بواسطة استخدام نظام تعبير‎ ‏الفيروسة العصوية. تشتل أمثلة أنظمة التعبير الوراثي عن الفيروسة العصوية المذكورة على نواقل‎ ‏(مثل‎ PACUW ‏01/1941)؛ نواقل مشتقة من‎ 5 01/1393 pVL1392 ‏(مثل‎ pVL ‏مشتقة من‎ .(pBlueBac ١١١ ‏تحتوي على‎ beta. —gal. ‏(مثل‎ pBlueBac ‏ونواقل مشتقة من‎ «(pACUWI
Pcmv- ‏مثل ناقل‎ «(CHO Wa ‏لخاضع في‎ ActRIl ‏يمكن تصميم النواقل لإنتاج بولي ببتيدات‎ 5 «Carlsbad (Invitrogen) pcDNA4 ‏نواقل‎ (Calif ‏قا‎ Jolla Stratagene) Script ‏على النحو الذي سيتم توضيحه‎ (\Wis (Madison (Promega) pCl-neo ‏ونواقل‎ (Calif ‏جين منشأة لخاضع للتسبب في التعبير الوراثي عن بولي ببتيدات ا8001‎ shal ‏يمكن استخدام‎ ‏منتشرة في مزرعة؛ على سبيل المثال؛ لإنتاج بروتينات؛ بما في ذلك بروتينات‎ WIA ‏لخاضع في‎ ‏اندماج أو بروتينات متغيرة؛ للتنقية.‎ 0 ‏يمكن استخدام خلايا عائلة تم نقل العدوى إليها بواسطة جين ناتج عن عودة الارتباط الجيني بما‎ ‏سبيل المثال؛ متوالية رقم: ؛ أو 0( لواحد أو أكثر من بولي ببتيدات‎ le) ‏في ذلك متوالية تشفير‎ ‏لخاضع في إنتاج بولي ببتيدات ال8004 مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات‎ 801١ ‏الموصوفة هنا. يمكن أن تكون الخلية العائلة عبارة عن أي خلية بدائية النواة أو حقيقية النواة. على‎ ‏يمكن التعبير عن بولي ببتيد |8007 وارد في هذه الوثيقة في خلايا بكتيرية مثل‎ «Jill ‏سبيل‎ 5 ‏عن‎ (Shy ‏باستخدام نظام تعبير‎ (JU ‏خلايا حشرات (على سبيل‎ CEL coli ‏إشرشيا كولاي‎ ‏خميرة» أو خلايا كائن ثديي. تكون خلايا عائلة‎ «(baculovirus expression ‏الفيروسة العصوية‎ ‏أخرى مناسبة معروفة لأصحاب المهارة في المجال.‎ ‏وفقاً لذلك؛ يتم هنا توفير طرق لإنتاج بولي ببتيدات ال800. على سبيل المثال» يمكن زراعة خلية‎ ‏ظل ظروف‎ AACRIN ‏عائثلة تم نقل العدوى إليها بواسطة ناقل تعبير وراثي يُشفر بولي ببتيد‎ 0
ACtRII ‏مناسبة للسماح بحدوث التعبير الوراثي عن بولي ببتيد ا(8014. يمكن إفراز بولي ببتيد‎ ‏من خليط من الخلايا ووسط يحتوي على بولي ببتيد ال8044. على نحو بديل؛ يمكن‎ adie ‏ويتم عزل‎ WAY ‏غشائي ويتم تجميع وتحلل‎ gia ‏سيتويلازمياً أو في‎ AGRI ‏احتجاز بولي ببتيد‎ ‏البروتين. تشتمل مزرعة خلية على خلايا عائلة؛ أوساط ومنتجات ثانوية أخرى. تكون الأوساط‎ ‏لخاضع من‎ ACtRIN ‏المناسبة لمزرعة الخلية معروفة جيداً في المجال. يمكن عزل بولي ببتيدات‎ 5
وسط زراعة الخلية؛ الخلايا العائلة؛ أو كلاهماء؛ باستخدام تقنيات معروفة في المجال لتنقية البروتينات؛ بما في ذلك كروماتجراف تبادل الأيونات ‎ion-exchange chromatography‏ « كروماتجراف ترشيح الجل ‎gel filtration chromatography‏ ¢ الترشيح الفائق ‎ultrafiltration‏ ‏« الاستشراد الكهريائي ‎electrophoresis‏ « تنقية الألفة المناعية باستخدام الأجسام المضادة النوعية لقمم لاصقة محددة لبولي ببتيدات ‎AGRI‏ وتنقية الألفة باستخدام عامل يرتبط بنطاق مدمج ببولي ببتيد ال80154 (على سبيل ‎(JU‏ يمكن استخدام عمود بروتين ‎A‏ لتنقية إندماج 8-6ال8014). في نموذج ‎(Junie‏ يكون بولي ببتيد |ل8014 عبارة عن بروتين اندماج يحتوي على نطاق يُسهل تنقيته. في أحد النماذج؛ يتم تحقيق التنقية بواسطة سلسلة من خطوات كروماتوجراف العمود؛ بما في ذلك؛ على سبيل ‎(JU)‏ ثلاثة أو أكثر مما يلي؛ بأي ترتيب: 0 كروماتوجراف بروتين ‎protein A chromatography A‏ ؛ كروماتوجراف سيفاروز | ‎Q‏ ‎Sepharose chromatography‏ « كروماتوجراف فينيل سيفاروز ‎phenylsepharose‏ ‎chromatography‏ ؛ كروماتوجراف الاستبعاد على أساس الحجم ‎size exclusion‏ ‎chromatography‏ « وكروماتوجراف تبادل الكاتيون ‎cation exchange‏ ‎.chromatography‏ يمكن إكمال التنقية بواسطة الترشيح الفيروسي وتبادل المحلول المنظم. على 5 النحو الموضح في هذه الوثيقة؛ تمت تنقية بروتين © 8014118-01 إلى نسبة نقاء > 9069/8 على النحو المحدد بواسطة كروماتوجراف الاستبعاد على أساس الحجم و>9645 على النحو المحدد بواسطة ‎PAGE‏ 505. لم يكن مستوى النقاء ‎GIS‏ لتحقيق تأثيرات مرغوب فيها على العظام في الفئران وسمة أمان مقبولة في ‎(oll‏ الجرذان والرئيسيات من غير البشر. في نموذج ‎OAT‏ يمكن أن يسمح تشفير جين اندماج لتنقية متوالية رائدة؛ مثل متوالية موضع 0 انشطار بولي-(1115)/كيناز معوي عند الطرف لا لجز مطلوب من بولي ببتيد ناتج عن عودة الارتباط الجيني ال800/ بتنقية بروتين اندماج معبر عنه وراثياً بواسطة كروماتوجراف الألفة باستخدام راتنج +12ل/ معدني. يمكن بعد ذلك غزالة متوالية التنقية الرائدة بواسطة العلاج باستخدام كيناز معوي لتوفيربولي ببتيد ‎AGRI‏ النقي ‎Je)‏ سبيل المثال» راجع (1987) ‎Hochuli et al,‏ ‎J.
Chromatography 411 : 177; and Janknecht et al, PNAS USA‏ 5 88:8972(.
تكون تقنيات تحضير جينات الاندماج معروفة جيداً. بشكل أساسي؛ يتم ريط تشفير ‎DNA Las‏ المختلفة لمتواليات البولي ببتيد المختلفة وفقاً لتقنيات تقليدية؛ باستخدام نهايات ممسوحة أو متعرجة للإلحاق؛ تقييد اهتضام الإنزيم لتوفير نهايات مناسبة؛ ملء أطراف التصاق بشكل مناسب؛ المعالجة بفوسفاتاز قلوي لتجنب الربط غير المرغوب ‎cad‏ والإلحاق الإنزيمي. في نموذج ‎OA‏ ‏5 يمكن تخليق جين الاندماج بواسطة تقنيات تقليدية تشتمل على وحدات تخليق ‎DNA‏ آلية. على نحو بديل؛ يمكن أن يتم تضخيم ‎PCR‏ لشظايا الجين باستخدام بادئات تثبيت التي تزيد من أجزاء متدلية متممة بين اثنين من شظايا الجين المتتالية والتي يمكن تطويعها تعاقبياً لتوليد متوالية جين خيمرية (راجع؛ على سبيل المثال» ‎Current Protocols in Molecular Biology, eds.‏ ‎.(Ausubel et al, John Wiley & Sons: 1992‏ 0 يمكن التعبير وراثياً عن بروتين اندماج ‎ActRIIA-Fc‏ في خلايا 1 ‎CHO-DUKX BI‏ تم نقل العدوى إليها بشكل ثابت من ناقل 0/104 ‎ori)‏ 51/40/محسن» معزز ‎(CMV‏ باستخدام متوالية رائدة مُوَلَدةِ للبلازمين ‎paul)‏ لمتوالية رقم: 9. يكون جزءِ ‎FC‏ عبارة عن متوالية ‎Fe‏ ل ا6وا بشري؛ كما هو موضح في متوالية رقم: ‎.١‏ في نماذج محددة؛ فور التعبير الوراثي؛ كان البروتين يحتوي على؛ بالمتوسط؛ ما يتراوح بين حوالي 50,0 ‎V,0‏ مول من حمض سياليك لكل بروتين اندماج ‎ActRIIA-Fc‏ ‏في نماذج محددة؛ يمكن أن يبلغ العمر النصفي الطويل لمصل لاندماج ‎١-١١ ActRIA-FC‏ يوم في مرضى من البشر. بالإضافة إلى ذلك؛ يكون لمادة تعبر وراثياً عن خلية ‎CHO‏ ألفة تجاه مركب أكتيفين 8 ترابطي أعلى من تلك المسجلة لبروتين اندماج ‎ACtRIA-hFC‏ المعبر عنه وراثياً في ‎Yay‏ خلية بشرية ( ‎del Re et al, J Biol Chem. 2004 Dec‏ 0 17:279(51):53126-35( بالإضافة إلى ذلك؛ بدون التقيد بنظرية محددة؛ نتج عن استخدام متوالية ‎TPA‏ رائدة إنتاج أكبر من المتواليات الرائدة الأخرى و؛ بخلاف ‎ACtRIIA-Fe‏ التي يتم التعبير عنها وراثياً بواسطة متوالية رائدة أصلية؛ يمكن أن توفر متوالية عالية النقاء عند الطرف ‎N‏ ‏يمكن أن ينتج عن استخدام المتوالية الرائدة الأصلية نوعية رئيسيين من ‎ACRITA-FC‏ يكون لكل منها متوالية مختلفة عند الطرف ‎N‏ ‎Y-0-0 5‏ مثبطات ‎ACTRIIB‏ ‎Tye‏
CoA- ‏يشير تعبير "801418" إلى عائلة من بروتينات مستقبل أكتيفين من‎ cli ‏على النحو المستخدم‎
ACtRIIB ‏من أي من الأنواع والصور المتغيرة المشتقة من بروتينات‎ (ACtRIIB) IIB ‏النوع‎ ‏المذكورة بواسطة التطفر أو تعديل آخر. يتم فهم الإشارة إلى 801118 في هذه الوثقية على أنها‎ ‏إشارة إلى أي من صور المستقبل المحددة حالياً. تكون أعضاء عائلة 8007118 بصفة عامة عبارة‎ ‏مركب ترابطي به منطقة غنية‎ Jal LIAN ‏عن بروتينات عابرة للغشاء » تتألف من نطاق خارج‎ 5 ‏بالسيستين؛ نطاق عابر للأغشية؛ ونطاق سيتويلازمي به نشاط سيرين/ثيرونين كيناز متوقع.‎ ‏تشتمل مثبطات 8014118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هناء على سبيل المثال‎ ‏وليس الحصر؛ على بولي ببتيدات 800118 قابلة للذويان لريط أكتيفين؛ الأجسام المضادة يرتبط‎ ‏وتمزيق‎ (BB ‏أو‎ BA ‏أو 8 فرعية؛ يُشار إليها أيضاً ب‎ A ‏بأكتيفين (بشكل محدد وحدات أكتيفين‎ ‏الأجسام المضادة التي ترتبط ب 801118 وتمزق ارتباط الأكتيفين؛ بروتينات‎ ¢ACtRIIB ‏ارتباط‎ 0 ‏وببتيدات عشوائية يتم اختيارها‎ (ACRIB ‏و‎ A ‏غير الجسم المضاد التي يتم اختيارها لريط أكتيفين‎
Fo ‏يمكن أن تكون مترافقة لنطاق‎ lly ACtRIB ‏و‎ A ‏أكتيفين‎ Lay) ‏في نماذج محددة؛ يمكن ربط اثنين أو أكثر من البروتينات المختلفة (أو شقوق أخرى) التي يكون‎ ‏بشكل خاص روابط الأكتيفين التي تعيق مواقع ارتباط من‎ ACtRIIB 5 A ‏لها نشاط ربط أكتيفين‎ ‏(على سبيل‎ ١ ‏والنوع‎ )١ ‏(على سبيل المثال» مستقبل أكتيفين قابل للذويان من النوع‎ ١ ‏النوع‎ 5 ‏على الترتيب؛ مع بعضها البعض للحصول‎ oY ‏المتال» مستقبل أكتيفين قابل للذوبان من النوع‎ ‏وبالتالي يمكن‎ ACtRIIB ‏على جزئ ربط ثنائي الوظيفة أو متعدد الوظائف يعمل على تثبيط‎ ‏استخدامه في التركيبات والطرق الموصوفة هنا. في نماذج محددة؛ تشتمل مضادات محور إرسال‎ ‏على أبتاميرات حمض نووي» جزيئات صغيرة‎ ACtRIIB ‏التي تثبط‎ ActRIIB ‏إشارات أكتيفين‎ ‏وعوامل أخرى مستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا.‎ 0
ActRIIB ‏مثبطات 8014118 تشتمل على بولي ببتيدات‎ (1) ‏ببتيد 8ال08015" إلى بولي ببتيدات تشتمل على أي‎ Jo ‏يشير تعبير‎ (ba ‏على النحو المستخدم‎ ‏بولي ببتيد ناتج طبيعياً من عضو عائلة 800118 بالإضافة إلى أي صور متنوعة منه (بما في‎ ‏اندماجات وصور محاكية للببتيد) التي تحتجز نشاط مفيد. على سبيل المثال؛‎ (Glas ‏ذلك طفرات»؛‎
Tye
-4ه- تشتمل بولي ببتيدات 800118 على بولي ببتيدات مشتقة من متوالية أي مستقبل ‎ACtRIIB‏ ‏معروف به متوالية مطابقة بنسبة حوالي 9680 على الأقل لمتوالية بولي ببتيد 8017118» وعلى نحو اختياري ‎BAS‏ على ‎(JY)‏ 9648 96955 9695 9697 9694 9644 أو تطابق أكبر. على سبيل المثال» يمكن أن يرتبط بولي ببتيد 18ل800 ببروتين ‎ACRIIB‏ و/أو أكتيفين ويثبط نظيفته. يشتمل أي مثال بولي ببتيد ‎ACtRIIB‏ على البولي ببتيد المنتج ل 8014118 بشري (متوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: 78). بالنسبة لبولي ببتيد منتج ل 8015118 والتي تكون متوالية حمض أميني الخاصة به عبارة عن متوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ (أي؛ البولي ببتيد المنتج ل 8 بشري)؛ يتم وضع ببتيد الإشارة لبولي ببتيد منتج ل 8014118 عند الأحماض الأمينية ‎١‏ ‏إلى ‎VA‏ يتم وضع نطاق خارج الخلية عند الأحماض الأمينية ‎١9‏ إلى 4 ‎١7‏ ويتم وضع مواقع 0 معالجة بالجليكوسيل المحتملة المرتبطة عند الموضع !لا عند مواضع الحمض الأميني 7؛ 105 يتم الكشف عن متوالية الحمض النووي التي تشفر البولي ببتيد المنتج ل ‎ACtRIIB‏ بشري لمتوالية رقم: ‎VT‏ كمتوالية رقم: ‎١9‏ (متوالية رقم: ‎١9‏ توفر ألانين ‎alanine‏ عن الكودون ‎codon‏ المناظر لموضع الحمض الأميني ‎TE‏ ولكن يمكن تعديله بسهولة بواسطة صاحب المهارة في المجال باستخدام طرق معروفة في المجال لتوفير أرجينين ‎arginine‏ عن الكودون المناظر لموضع 5 الحمض الأميني 14 بدلاً من ذلك). راجع جدول ‎١‏ لوصف المتواليات. يعتمد ترقيم الأحماض الأمينية لجميع بولي ببتيدات المتعلقة ب 8017118 الموصوفة هنا على ترقيم الحمض الأميني لمتوالية رقم: ‎١7‏ ومتوالية رقم: ‎YA‏ (والتي تختلف فقط في الحمض الأميني الذي يتم التعبير عنه وراثياً عند الموضع 14)؛ ما لم تتم الإشارة إلى خلاف ذلك صراحة. على سبيل المثال؛ إذا تم وصف أن البولي ببتيد 8017118 به استبدال/طفرة عند موضع الحمض الأميني ‎YE 20‏ بالتالي فإنه يتم فهم أن الموضع ‎VA‏ يشير إلى الحمض الأميني رقم ‎١4‏ في متوالية رقم: ‎٠6‏ ‏أو متوالية رقم: ‎(YA‏ الذي يتم منه اشتقاق بولي ببتيد 08015118. على نحو مماثل؛ إذا تم وصف أن بولي ببتيد 801118 يحتوي على ألانين أو أرجينين عند موضع الحمض الأميني ‎VE‏ بالتالي فإنه يتم فهم أن الموضع ‎TE‏ يشير إلى الحمض الأميني رقم 64 في متوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎(YA‏ الذي يتم ‎die‏ اشتقاق بولي ببتيد ‎ACtRIIB‏ ‎Tye‏ qa ‏في نماذج محددة؛ تشتمل مثبطات 8014118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على‎ ‏بولي ببتيدات تشتمل على نطاق ربط أكتيفين ل 18ل0015. في بعض النماذج؛ تشتمل نطاقات ربط‎ ‏منه. في نماذج محددة؛ يكون‎ gia ‏الأكتيفين ل 801118 على نطاق خارج الخلية ل 8015118 أو‎ ‏نطاق خارج الخلية أو جزءِ منه ل 8014118 قابل للذويان. يتم الكشف عن الصور المعدلة‎ ‏التوضيحية لبولي ببتيدات 8014118 في نشرة طلب براءة الاختراع الأمريكية أرقام‎ 5 ‏وقد تم تضمين الكشف الخاص بها في هذه الوثيقة‎ Yo Vans TAY Og 1007 ‏كمرجع في مجملها.‎ ‏في نماذج محددة؛ تكون بولي ببتيدات 08004118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا‎ ‏عبارة عن بولي ببتيدات 800118 قابلة للذويان. يشير تعبير "بولي ببتيد 8014118 قابل للذويان"‎ ‏في ذلك‎ La ACRIIB ‏بصفة عامة إلى بولي ببتيدات تشتمل على نطاق خارج الخلايا لبروتين‎ 0 ‏(بما‎ die ‏أي نطاق خارج الخلايا ناتج طبيعياً لبروتين 8017118 بالإضافة إلى أي صور متنوعة‎ ‏قابلة‎ ACtRIIB ‏في ذلك طفرات» شظايا وصور محاكية للبتيد). يمك أن ترتبط بولي ببتيدات‎ ‏ذو نمط بري انتقائية كبيرة في الارتباط‎ ACtRIIB ‏للذويان بأكتيفين؛ مع ذلك»؛ لا يظهر بروتين‎ ‏في نماذج محددة؛ يمكن استخدام الصور المعدلة ل 014118/التي‎ .GDF8/11 ‏بأكتيفين مقابل‎ ‏لها خواص ارتباط مختلفة في الطرق الواردة هنا. يتم الكشف عن تلك الصور المعدلة؛ على سبيل‎ 5 ‏المثال» في نشرة طلب براءة الاختراع الدولي أرقام 17171/7005 و14771/7010 وقد تم‎ 8014118 ‏تضمين الكشف الخاص بها في هذه الوثيقة كمرجع في مجملها. يمكن تزويد بروتينات‎ ‏الأصلية أو المعدلة بنوعية مضافة للأكتيفين بواسطة إقرانها بعامل ربط أكتيفين انتقائي ثاني. تشتلم‎ 801118 ‏بولي ببتيدات 8014118 القابلة للذوبان التمثيلية على نطاق خارج الخلية لبولي ببتيد‎
FF ‏ات تك لات تت نك نك ىت‎ OA OY ‏متواليات رقم؛‎ (JU ‏بشري (على سبيل‎ 0 ‏دك لاك كك و7؟).‎ ‏به متوالية 801/8 خارج الخلية تم الكشف عنه بواسطة‎ FC ‏تم توضيح أن بروتين اندماج‎ ‏والتي تشتمل على ألانين عند الموضع‎ Hilden et al. (Blood, 1994, 83)8(:2163-70( ‏المناظر للحمض الأميني 14 لمادة منتجة ل 801118 لمتوالية حمض أميني» أي؛ متوالية رقم:‎ ‏إليها في هذه الوثيقة ب ”864)؛ أن بها ألفة منخفضة نسبياً تجاه أكتيفين و605-11.‎ JL) ١١ 5
Tye ty بخلاف ذلك؛ يكون لبروتين اندماج ‎FO‏ به أرجينين عند الموضع ‎TE‏ لمتوالية حمض أميني لمادة منتجة ل ‎ActRIIB‏ (يُشار إليها في هذه الوثيقة ب "464 ألفة تجاه أكتيفين 5 6017-11 في نطاق نانو مولار منخفض إلى بيكو مولار مرتفع (راجع؛ على سبيل المثال؛ نشرة طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎٠١٠٠٠١١8715‏ التي تم تضمين الكشف الخاص بها في هذه الوثيقة كمرجع في مجملها). تم تقديم متوالية حمض أميني لمادة منتجة ل 80118 بها أرجينين عند الموضع ‎TE‏ في متوالية رقم: 78. على هذا النحو؛ في نماذج محددة؛ يمكن أن تشتم بولي ببتيدات 8018118 مستخدمة وفقاً للتركيبات والطرق الموصوفة هنا على إما ‎)١(‏ ألانين عند الموضع المناظر للحمض الأميني 14 لمتوالية حمض أميني لمادة منتجة ل 8014118 أي؛ متوالية رقم: 601 أو ‎)١(‏ أرجينين عند الموضع ‎TE‏ لمتوالية حمض أميني لمادة منتجة ل ‎ACtRIIB 0‏ أي؛ متوالية رقم: ‎YA‏ في نماذج أخرى؛ يمكن أن تشتمل بولي ببتيدات 801118 مستخدمة وفقاً لتركيبات والطرق الموصوفة ‎Ls‏ على حمض أميني ليس عبارة عن ألانين أو أرجينين عند الموضع المناظر للحمض الأميني ‎TE‏ لمتوالية حمض أميني لمادة منتجة ل 8ه ‎(gl‏ متوالية رقم: ‎٠١‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‏تم توضيح أن حذف عقدة برولين عند الطرف © لنطاق خارج الخلية ل 801118 يقلل من ألفة 5 المستقبل تجاه الأكتيفين (راجع؛ على سبيل المثال» ,1992 ‎Attisano et al., Cell,‏ 68)1(:97-8). يعمل بروتين اندماج ‎ACRIIB-FC‏ يحتوي على الأحماض الأمينية ‎-7١‏ ‎٠4‏ لمتوالية رقم: ‎YA‏ (أي؛ متوالية رقم: ‎(TY‏ يعمل "8018118 ‎"0-)1١9-7١(‏ على تقليل الارتباط ل 601-11 والأكتيفين بالنسبة لبروتين اندماج 801118-10 يحتوي على الأحماض الأمينية ‎١ 4-7٠١‏ لمتوالية رقم: ‎(gl) YA‏ متوالية رقم: ‎(TY‏ "018118 )+ 4-7 ١)-ه"؛‏ الذي 0 يحتوي على منطقة ‎sake‏ البرولين ونطاق الأغشية المجاورة . مع ذلك؛ يحتفظ بروتين اندماج ‎ActRIIB-Fc‏ يحتوي على الأحماض الأمينية ‎١9-7١‏ لمتوالية رقم: ‎=Y +) ActRIIB" (YA‏ ‎"Fe—() 4‏ بنشاط ‎Jiles‏ لكن منخفض بعض الشئ بالنسبة لنطاق خارج الخلايا غير مشذب ل 8 على الرغم من عدم تمزيق منطقة عقدة البرولين. بالتالي؛ من المتوقع أن تكون بولي ببتيدات ‎ActRIIB‏ تشتل على نطاقات خارج الخلايا التي تتوقف عند حمض أميني ‎AFF OVE‏ ‎٠9١ 9١ 7 5‏ و9١‏ لمتوالية رقم: ‎YA‏ (أو متوالية رقم: ‎(V1‏ نشطة؛ ولكن يمكن أن تكون
Tye vy ‏أكثر نشاطاً. على نحو مماثل؛‎ ١١7 GIVE ‏الأجزاء المنشأة التي تتوقف عند الحمض الأميني‎ ‏على تعديل ألفة‎ ١74-1749 All ‏ليس من المتوقع أن تعمل الطفرات عند أي من الوحدات‎
P1305 Pl 29 ‏ارتباط المركب الترابطي بهامش كبيرء كما هو محدد بواسطة حقيقة أن طفرات‎ ‏لمتوالية رقم: 78 لا تؤدي إلى حدٍ كبير إلى تقليل ارتباط مركب ترابطي. بالتالي» يمكن أن تنتهي‎ ‏بولي ببتيدات 8004118 المستخدمة وفقاً للطرق والتركيبات الموصوفة هنا بشكل مبكر مثل‎ 5 ‏مع ذلك؛‎ (VT ‏(أو متوالية رقم:‎ YA ‏(أي؛ السيستين النهائي) لمتوالية رقم:‎ ٠١9 ‏الحمض الأميني‎ tad) ‏(أو متوالية‎ YA ‏لمتوالية رقم:‎ ١١19و‎ ٠١4 ‏تكون نهاية عند أو بين مواضع الحمض الأميني‎ ‏من المتوقع أن يكون لها قدرة ربط مركب ترابطي منخفضة.‎ (V1 ‏السيستين الأولي في متوالية مادة‎ YA ‏ومتوالية رقم:‎ ١6 ‏لمتوالية رقم:‎ YA ‏يمثل حمض أميني‎
Ya ‏منتجة ل 18ل8014. من المتوقع أن يحتفظ بولي ببتيد 801418 يبدأ عند حمض أميني‎ 0 ‏عند الطرف لا أو قبل مواضع الحمض الأميني المذكورة؛‎ YA ‏أو متوالية رقم:‎ ١6 ‏لمتوالية رقم:‎ ‏أو‎ ١76 ‏لمتوالية رقم:‎ YE ‏بنشاط ربط مركب ترابطي. تعمل طفرة ألانين إلى أَسْباراجين عند الموضع‎ ‏بدون التأثير‎ N ‏على إدخال متوالية معالجة بالجليكوسيل مرتبطة عند الموضع‎ YA ‏متوالية رقم:‎ ‏على ربط المركب الترابطي بدرجة كبيرة. يؤكد ذلك على أن الطفرات الموجودة في المنطقة بين‎ ‏لمتوالية‎ 75-7١ ‏ببتيد انشطار إشارة ومنطقة سيستين مرتبطة تشابكياً؛ مناظرة للأحماض الأمينية‎ 5 fas ACtRIIB ‏تعتبر محتملة. بشكل محدد؛ تحتفظ بولي ببتيدات‎ YA ‏رقم: أو متوالية رقم:‎
YA ‏أو متوالية رقم:‎ VU ‏و4؟ لمتوالية رقم:‎ YY YY 7١ ؛7١ ‏عند موضع الحمض الأميني‎ ‏عند مواضع الحمض الأميني‎ fag 80018 ‏أن تحتفظ بولي ببتيدات‎ Load ‏ومن المتوقع‎ cabin, ‏بنشاط. سيكون بولي ببتيد‎ YA ‏أو متوالية رقم:‎ ١١ ‏و79 لمتوالية رقم:‎ YA (YY (YT (Yo ‏أو متوالية‎ ١6 ‏لمتوالية رقم:‎ Yo ‏أو‎ YE YF YY ‏يبدا عند موضع الحمض الأميني‎ ActRIB 0 ‏أكبر نشاط.‎ YA ‏رقم:‎ ‏وإجمالاً. ستشتمل الأجزاء النشطة (أي؛ بولي ببتيدات 8018118) لبروتين المادة المنتجة ل‎ ‏للطرق والتركيبات‎ Lady ‏المراد استخدامها‎ (YA ‏أو متوالية رقم:‎ VT ‏(أيء متوالية رقم:‎ 8
YA ‏أو متوالية رقم:‎ VT ‏لمتوالية رقم:‎ ٠١9-749 ‏الموصوفة هنا بصفة عامة على أحماض أمينية‎ ‏عند وحدة بنائية مناظرة لأي واحدة من‎ (JU ‏على سبيل‎ ACtRIIB ‏بولي ببتيدات‎ fas ‏ويمكن أن‎ 5
Tye
ا أحماض أمينية ‎79-١9‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ وتنتهي عند موضع مناظر لأي واحدة من الأحماض الأمينية ‎١94-٠٠9‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ تشتمل أمثلة محددة لبولي ببتيدات 8017118 متضمنة هنا على تلك التي تبدأ عند موضع الحمض الأميني من 19-4 9-70؟ أو ١9-7؟‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ وتنتهي عند موضع الحمض الأميني من 134-119 ‎١7-١14‏ أو 174-174 ‎٠7-١4‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: 78. تشتمل أمثلة محددة أخرى لبولي ببتيدات ‎ACtRIIB‏ متضمنة هنا على تلك التي تبدأ عند موضع الحمض الأميني من ‎5-7٠0‏ ؟ (أو ‎14-7١‏ أو 15-77) لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎TA‏ وتنتهي عند موضع الحمض الأميني من ‎١4-٠٠4‏ (أر 0 ‎((ITF=1‏ كلاح ‎١‏ ‎(WPF)‏ أو ‎١42-174‏ (أو ‎)١7-١4‏ لمتوالية رقم: ‎١١‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ يتم 0 توضيح بولي ببتيدات 8014118 متنوعة تقع ضمن هذه النطاقات؛ خاصة تلك التي يكون لها تطابق متوالية أو تماثل متوالية يبلغ 96860 على الأقل 396/5 ‎PAY 647 6431 Yd‏ ‎BIA 969597 645 615 64‏ أو 96944 بالنسبة ‎gall‏ المناظر لمتوالية رقم: ‎١١‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‏في نماذج محددة؛ تشتمل مثبطات 8014118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على 5 صورة مشذبة من نطاق خارج الخلايا ل 801118. يمكن أن يكون التشذيب عند طرف ‎Sol‏ ‎if‏ طرف الأمينو للبولي ببتيد 8ال800. في نماذج محددة؛ يمكن أن يبلغ طول التشذيب ‎١‏ 7؛ ك ‎cf‏ فك ‎ed AY‏ نف كك كك مل كاد انف ‎OA‏ كك نكت لك ‎YY‏ ‎(YE (VY‏ أو ‎YO‏ حمض أميني بالنسبة لنطاق خارج الخلايا لبولي ببتيد ‎ACRIIB‏ الناضج. في نماذج محددة؛ يمكن أن يكون التشذيب عبارة عن ‎(FY OY‏ ىت فخت نل ل ‎AY 0‏ اد كد ‎de‏ كا اال ‎VE CYT YY YY 7١ 4 OA‏ أو ‎YO‏ حمض أميني عند الطرف لا لنطاق خارج الخلايا لبولي ببتيد 8015118 الناضج. في نماذج محددة؛ يمكن أن يكون التشذيب عبارة عن ‎Od AY Teo cf FY ١‏ لا كك كل كاك مال تل ‎AY‏ ‏هاء 14 70 71 77 77 ‎(YE‏ أو ‎Yo‏ حمض أميني عند الطرف © لنطاق خارج الخلايا لبولي ببتيد 801418 الناضج. على سبيل المثال؛ تشتمل صور مشذبة ل 8014118 على بولي 5 ببتيدات تحتوي على الأحماض الأمينية ‎114-7١‏ .اخ باحق نح .-
Tye
17 لاحك ب اص ناك ني اح جع مح حت ‎“YE‏ ‏١؛‏ و31-75؛ حيث تشير مواضع الحمض الأميني إلى مواضع الحمض الأميني في متوالية
رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‏تشتمل صور مشذبة تمثيلية إضافية على ‎de )١(‏ ببتيدات ‎Tas‏ عند الأحماض الأمينية عند أي من الأحماض الأمينية ‎YAY)‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎fan) YA‏ على نحو اختياري عند ‎YO-YY‏ لمتوالية رقم: ‎١١‏ أو متوالية رقم: ‎(YA‏ وتنتهى عند أى من الأحماض الأمينية ‎-٠١9‏
يه ركم و منوالية ركم ‎EH‏ ي من =( ‎Hed)‏ ‎VV‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: 748؛ ‎)١(‏ بولي ببتيدات ‎Tas‏ عند أي من الأحماض الأمينية ‎79-٠٠‏ لمتوالية رقم: ‎١76‏ أو متوالية رقم: ‎fam) YA‏ على نحو اختياري عند 75-77 لمتوالية رقم: 7 أو متوالية رقم: ‎(YA‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١7-٠١49‏ لمتوالية رقم: ‎١3‏ أو 0 متوالية رقم: 8 )¥ ببتيدات تبدأ عند أى من الأحماض الأمينية ‎٠‏ 2-7 ؟ لمتوالية رقم: منوالية رقم ‎L L(g‏ ي من ص ‎ed)‏ يه رقم أو متوالية رقم: ‎YA‏ (تبدأ على نحو اختياري عند 70-77 لمتوالية رقم: ‎١76‏ أو متوالية رقم: ‎(YA‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١37-٠04‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‏(؟) بولي ببتيدات تبدأ عند أي من الأحماض الأمينية ‎4-7١‏ 7 لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١4-٠٠9‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‎ds )( 5‏ ببتيدات تبدأ عند أي من الأحماض الأمينية ‎4-7١‏ ؟ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١7-١١8‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‎da )7(‏ ببتيدات ‎fag‏ عند أي من الأحماض الأمينية ‎4-7١‏ 7 لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١١4-١١8‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‎(V)‏ بولي ببتيدات تبدأ عند أي من الأحماض الأمينية ‎4-7١‏ 7 لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: 78 وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١7-١748‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‎(A)‏ بولي ببتيدات تبدأ عند أي من الأحماض الأمينية ‎4-7١‏ 7 لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١7-١748‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‏(9) بولي ببتيدات ‎fag‏ عند أي من الأحماض الأمينية ‎79-7١‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١١4-١١8‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‎Ja (Ve) 5‏ ببتيدات تبدأ عند أي من الأحماض الأمينية ‎79-7١‏ لمتوالية رقم : ‎١6‏ أو متوالية رقم ‎Tye‏
اج ‎h‏ _ ‎YA:‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١7-١178‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‎Ja (VY)‏ ببتيدات ‎as‏ عند أي من الأحماض الأمينية ١9-7؟‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١١4-١748‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‎(VY)‏ بولي ببتيدات ‎Tag‏ عند أي من الأحماض الأمينية ‎79-7١‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ وتنتهي عند أي من الأحماض الأمينية ‎١7-١778‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ في نموذج محدد؛ تشتمل بولي ببتيدات ‎alls (ActRIIB‏ يبشكل أساسي ‎(Cpe‏ أو تتألف ‎(Ce‏ ‏متوالية حمض أميني ‎Tai‏ عند موضع الحمض الأميني ‎Yo‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‏وتنتهي عند موضع الحمض الأميني ‎١١١‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: 78. في نموذج آخر محددء؛ يتألف بولي ببتيد ‎ActRIIB‏ من ؛ أو يتألف بشكل أساسي من ؛ متوالية ‎aan‏ أميني لمتوالية 0 رقم؛ ‎OA OY‏ اكت تك انك ‎YA‏ نك نك كك اك حك لك ‎EY‏ أو ‎AY‏ ‏يمكن إنتاج أي من بولي ببتيدات 801118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا في صورة دايمر متجانس. يمكن تشكيل أي من بولي ببتيدات 8014118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا في صورة بروتين اندماج يتضمن جزءٍ مختلف التكوين التي تشتمل على منطقة ثابتة من منطقة ثقيلة السلسلة 96ا؛ ‎Jie‏ نطاق ‎Fe‏ أي يمكن أن يشتمل بولي ببتيدات 5 8004018 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على حمض أميني حمضي عند الموضع المناظر للموضع ‎VA‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎(YA‏ بشكل اختياري في توليفة مع في واحد أو أكثر من استبدالات الحمض الأميني الإضافية؛ الحذف والإدخال بالنسبة لمتوالية رقم: ‎V1‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ ‏في نماذج محددة؛ تشتمل مثبطات 8018118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على 0 نطاق خارج ‎WAY‏ ل 8ال801 به واحدة أو أكثر من استبدالات الحمض الأميني/ طافرات. يمكن تبادل استبدال حمض أميني/ طافرة؛ على سبيل المثال؛ من الليوسين عند موضع الحمض الأميني ‎ya‏ لمتوالية رقم : ‎١١‏ أو متوالية رقم ‎YA:‏ إلى حمض أميني حمضي » ‎Qa‏ حمض أسبارتيك أو حمض جلوتاميك. على سبيل المثال» يمكن تبديل موضع ‎LT9‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ في 8004018 نطاق خارج الخلايا بولي ببتيدات لمنح خواص ارتباط أكتيفين -ميوستاتين ‎(GDF-11) myostatin 5‏ معدلة. تعمل طافرات 179/8 و7905 على تقليل ارتباط ‎GDF-1‏ ‎Tye‏
إلى حد كبير مقارنة بارتباط الأكتيفين. تعمل طافرات ‎L79D 3 L79E‏ على احتجاز ارتباط ‎«GDF-1‏ بينما تتم الإشارة بدرجة كبيرة إلى تقليل ارتباط الأكتيفين بدرجة كبيرة. في نماذج محددة؛ تشتمل مثبطات 8004118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على صورة مشذبة من ‎ACRIIB‏ نطاق خارج الخلايا الذي يحمل أيضاً استبدال الحمض الأميني» على سبيل المثال؛ تبادل الليوسين عند موضع الحمض الأميني ‎VA‏ لمتوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ إلى حمض أميني حمضي؛ ‎Jie‏ حمض أسبارتيك أو حمض جلوتاميك. في نموذج محدد؛ تكون الصورة المشذبة من نطاق خارج الخلايا ل بولي ببتيد 8017118 الذي يحمل أيضاً استبدال الحمض الأميني المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا عبارة عن متوالية رقم: ‎YY‏ يتم ربط صور من 8ال8014 المشذبة و/أو التي تحمل استبدالات حمض أميني واحدة أو أكثر بنطاق 0 © للجسم المضاد كما تم الوصف سابقاً. يمكن الحصول على الشظايا النشطة وظيفياً لبولي ببتيدات ‎ACtRIIB‏ ؛ على سبيل المثال؛ بواسطة فحص بولي ببتيدات ناتجة عن عودة الارتباط الجيني من الشظية المناظرة للحمض النووي المشفر بولي ببتيد 18ل8004. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن تخليق الشظايا كيميائياً باستخدام تقنيات معروفة في المجال ‎Jie‏ كيمياء ‎Merrifield‏ تقليدية ل ‎f-Moc‏ أو ‎t-Boc‏ في الطور الصلب. يمكن إنتاج 5 الشظايا (بشكل ناتج عن عودة الارتباط الجيني أو بواسطة التخليق الكيميائي) وبتم اختبارها لتحديد شظايا الببتيديل التي يمكن أن تعمل كمضادات (مثبطات) لبروتين 8014118 أو انتقال الإشارة المساهم فيه بواسطة أكتيفين. بالإضافة إلى ذلك؛ الصور المتنوعة النشطة وظيفياً ‎of‏ بولي ببتيدات ‎ActRIIBcan be‏ ‎Je obtained‏ سبيل المثال؛ بواسطة فحص مجموعة من بولي ببتيدات ‎dae‏ ناتجة عن عودة 0 الارتباط الجيني من الأحماض الأمينية المطفرة المناظرة التي تشفر بولي ببتيد 801118. يمكن إنتاج الصور المتنوعة وبتم اختبارها لتحديد تلك التي يمكن أن تعمل كمضادات (مثبطات) لبروتين 8 أو انتقال الإشارة المساهم فيه بواسطة أكتيفين. في نماذج محددة؛ تشتمل الصور المتنوعة الوظيفية لبولي ببتيدات ‎ACRIIB‏ على متوالية حمض أميني مطابقة بنسبة 96175 على الأقل لمتوالية حمض أميني يتم اختيارها من متوالية رقم؛ ‎OA OY‏ ات تك ات تت ‎BL EY 5 EY (TV FT YT 7 2١ 5‏ نماذج محددة؛ يكون للصورة المتنوعة الوظيفية متوالية ‎Tye‏ vy 9644 ‏أو‎ HAN FAY 617 ‏مدحفق‎ 640 9685 (J) ‏حمض أميني 9680 على‎ 4 ‏كت تك ات‎ OA OY ‏المتطابقة مع متوالية حمض أميني يتم اختيارها من متوالية رقم؛‎
EY EY ‏د لك كك كك تك اكت‎ 8014118 ‏يمكن توليد الصور المتنوعة الوظيفية؛ على سبيل المثال؛ بواسطة تعديل بنية بولي ببتيد‎ ‏لأغراض مثل تحسين الفاعلية العلاجية؛ أو الثبات (على سبيل المثال؛ العمر التخزيني خارج‎ 5 801118 ‏الخلية الحية ومقاومة التحلل الحال للبروتين داخل الخلية الحية). تعد بولي ببتيدات‎ ‏المعدلة المذكورة عند اختيارها لاحتجاز ارتباط الأكتيفين» عبارة عن مكافئات وظيفية ناتجة طبيعيًا‎ ‏عن بولي ببتيدات 8014118. يمكن أيضاً إنتاج بولي ببتيدات معدلة 080174118 ؛ على سبيل‎ ‏المثال؛ بواسطة استبدال» حذف أو إضافة حمض أميني. على سبيل المثال؛ ويكون من المقبول‎ ‏توقع استبدال معزول لليوسين بأيزوليوسين أو فالين؛ أشبازتات بجلوتامات؛ ثيرونين بسيرين» أو‎ 0 ‏استبدال مماثل لحمض أميني بحمض أميني ذو صلة تركيبية (على سبيل المثال» طفرات محافظة)‎ ‏لن يكون له تأثير كبير على النشاط البيولوجي للجزئ الناتج. تكون الاستبدالات المحافظة عبارة‎ ‏عن تلك التي تحدث داخل عائلة من الأحماض الأمينية المرتبطة من السلاسل الجانبية الخاصة‎ ‏بها. سواء كان التغير في متوالية حمض أميني لبولي ببتيد 801718 يؤدي إلى تحديد النظير‎ ‏الوظيفي بسهولة بواسطة تقييم قدرة الصورة المتغيرة لبولي ببتيد 8014118 لإنتاج استجابة في‎ 5 ‏ذو نمط بري.‎ ACtRIIB ‏الخلايا بطريقة مماثلة لبولي ببتيد‎ ‏يمكن استخدام طافرات بولي ببتيد 18ل8614»؛ بشكل محدد مجموعة من طفرات توافقية لبولي ببتيد‎ ‏8ه بالإضافة إلى طفرات مشذية؛ تكون مجموعات من طفرات توافقية مفيدة بشكل خاص‎ ‏الغرض من‎ Jia ‏لتحديد متواليات وظيفية متغيرة في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. يمكن أن‎ ‏فحص المجموعات التوافقي المذكورة في توليد؛ على سبيل المثال؛ الصور المتنوعة بولي ببتيد‎ 0 ‏والتي يمكن أن تعمل إما كعوامل مساعدة أو مضاد؛ أو على نحو بديل؛ التي يكون لها‎ 8 ‏كل الأنشطة الجديدة معاً.‎ ‏تم توضيح أنه تم تعريف جيب ربط المركب الترابطي ل 8004118 بواسطة وحدات بنائية 731؛‎ «S62 60 HS8 ‏7خل‎ (K55 ‏وذ 053 إلى‎ (E47 41 ‏إلى‎ L38 (N35 (N33 ‏أو متوالية‎ VT ‏لمتوالية رقم:‎ F101 ‏إلى‎ E94 5 ‏92ل‎ 487 85 (N83 ‏إلى‎ 10/78 (K74 5
Tye
CA
‏عند هذه المواضع؛ من المتوقع تحمل طفرات محافظة»؛ رغم أنع يمكن تحمل طافرة‎ YA ‏رقم:‎ ‏عبارة ن‎ RAD ‏وعند الموضع 79. تكون‎ F82A (K55A 40/8 ‏مثل طافرات‎ dam KT4A ‏مما يشير إلى أن الأحماض الأمينية القاعدية المذكورة عند هذا الموضع يتم‎ Xenopus ‏في‎ > «Xenopus ActRIIB ‏بقري وما في‎ ActRIIB ‏تحملها جيداً. تكون 953 عبارة عن + في‎ ‏عند الموضع المذكور. بالتالي؛‎ Hg ‏©؛ !ا‎ KR ‏بالتالي سوف يتم تحمل الأحماض الأمينية‎ 5 ‏تكون الصيغة العامة لبولي ببتيد 80174118 للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا عبارة‎ ‏ولكن‎ YA ‏أو متوالية رقم:‎ ١6 ‏لمتوالية رقم:‎ ٠١5-749 ‏عن تلك التي تشتمل على أحماض أمينية‎ ‏؟ أو 70-77 لمتوالية رقم:‎ 4-7١ ‏على نحو اختياري عند موضع حمض أميني يتراوح من‎ lag ‏لمتوالية‎ ١9 4-١79 ‏وتنتهي عند موضع الحمض الأميني الذي يتراوح من‎ YA ‏أو متوالية رقم:‎ 1 ‏تغيرات حمض‎ Yo ‏أو‎ 0 FO) ‏والذي لا يشتمل على أكثر من‎ (YA ‏أو متوالية رقم:‎ ١١ ‏رقم:‎ 0 ‏أميني محافظة في جيب المركب الترابطي؛ و صفرء واحدء أو أكثر من التغيرات غير المحافظة‎ ‏أو متوالية رقم:‎ ١6 ‏لمتوالية رقم:‎ AY ‏و/أو‎ VA VE 00 oF (fh ‏عند مواضع الحمض الأميني‎ <% HA ‏في جيب المركب الترابطي. يمكن أن يحتجز بولي ببتيد 8ال8015 أكثر من‎ YA ‏لمتوالية‎ ٠١9-749 ‏أو 969594 من تطابق المتوالية أو تجانس المتوالية لمتوالية أحماض أمينية‎ 058 ‏تتضمن المواضع خارج جيب الريط» التي يمكن عندها تحمل التغير‎ CYA ‏أو متوالية رقم:‎ ١١ ‏رقم:‎ 5 ‏على وجه التحديد؛ النهاية الطرفية الأمينية والكريوكسيلية لنطاق خارج الخلية ل 8015118 .؛ و‎ ‏مواضع 476-47 و77-75. يؤدي تعديل أشباراجين إلى ألانين عند الموضع 15 لمتوالية رقم:‎ 864 ‏إلى تحسين ربط المركب الترابطي فعلياً في خلفية‎ )81510( YA ‏أو متوالية رقم:‎ 1
R64 ‏وبالتالي يكون من المتوقع أن لا يكون له تأثير ضار على ربط المركب الترابطي في خلفية‎ ‏من المحتمل أن يؤدي التغير إلى إزالة المعالجة بالجليكوسيل عند خلفية عند 65ل في الخلفية‎ 0 ‏بشكل‎ ROA ‏مما يشير إلى احتمالية التغير الكبير في هذه المنطقة. بينما يتم تحمل تغير‎ AGH ‏بصورة جيدة؛ وبالتالي يمكن تحمل الوحدة البنائية القاعدية الأخرى؛‎ REAK ‏ضعيف؛ يتم تحمل‎ .6 4 ‏مثل ١اعند الموضع‎ ‏محدد لبولي ببتيد 808118 الذي يتضمن طافرة في نطاق ريط المركب الترابطي؛ يمكن‎ JUS ‏لنطاق ربط المركب الترابطي‎ (DBO) ASP ‏تطفير وحدة الحمض الأمينية البينائية موجبة الشحنة‎ 5
Tye ve ‏إلى وحدة حمض أميني بنائية مختلفة بحيث ترتبط الصورة المتغيرة بولي ببتيد‎ ActRIIBA ‏بشكل مفضل ب 6078؛ ولكن ليس أكتيفين. في نموذج محدد؛ يتم تغيير الوحدة‎ 8 ‏البنائية 080 إلى وحدة حمض أميني بنائية تم اختيارها من المجموعة التي تتكون من : وحدة‎ ‏حمض أميني بنائية غير مشحونة؛ وحدة حمض أميني بنائية سالبة؛ و وحدة حمض أميني بنائية‎ ‏محدد آخرء يمكن تعديل الوحدة البنائية غير الآلفة للماء 79 إلى‎ JUS ‏غير آلفة للماء.‎ 5 ‏الأحماض الأمينية الحمضية حمض أسبارتيك أو حمض جلوتاميك وذلك لتقليل ارتباط الأكتيفين‎ ‏كما سيتضح بواسطة الماهرين في المجال؛ يمكن‎ LGDF11 ‏بدرجة كبيرة مع الحفاظ على ارتباط‎ ‏إجراء أغلب الطافرات المذكورة؛ الصور المتغيرة أو التعديلات عند مستوى الحمض النووي أو؛ في‎ ‏بعض الحالات؛ بواسطة التعديل التالي للنقل أو التخليق الكيميائي. وتكون تلك التقنيات معروفة‎ ‏جيداً في المجال.‎ 0 ‏في نماذج محددة؛ تشتمل مثبطات 801118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على‎ ‏مترافق/يروتين اندماج يتضمن نطاق خارج الخلايا (على سبيل المثتال؛ نطاق ربط أكتيفين)‎ ‏لجسم مضاد. يمكن أن تشتمل مترافق/بروتينات اندماج على‎ FC ‏لمستقبل 8014118 مرتبط بجزءِ‎ ‏أي من متواليات‎ (JUD ‏تم الكشف عنها هنا (على سبيل‎ ACtRIIB ‏أي من بولي ببتيدات‎ ‏أو 7؛)؛ يمكن توليد‎ EY ‏ات تك لات كك دك لك كك اك تك لا‎ OA Yeas, 5 ‏معروفة في المجال؛ أو أي بولي ببتيدات 801118 تم توليده‎ ACtRIIB ‏أي من بولي ببتيدات‎ ‏باستخدام طرق معروفة في المجال و/أو توفيرها في هذه الوثيقة.‎ ‏على‎ chal) ‏لجسم مضاد من خلال‎ Fe ‏في نماذج محددة؛ يكون نطاق خارج الخلية مرتبط بجزءِ‎ ‏؟"-‎ ٠6-7 ‏سبيل المثال؛ رابط ببتيد. تتضمن الروابط التوضيحية متواليات بولي ببتيد قصيرة مثل‎ ‏مثل؛‎ of ‏حمض أميني وحدات بنائية (على سبيل المثال؛ وحدات جليسين بنائية‎ FY ‏”-4؛‎ ,# 0 ‏على سبيل المثال؛ رابط لاا©-لاا6-لاا© . في نموذج محدد؛ يشتمل الرابط على متوالية حمض‎ ‏يشتمل الرابط على متوالية حمض أميني‎ cane ‏في نموذج آخر‎ .)66©( Gly-Gly-Gly ‏أميني‎ ‏طافرة واحدة أو أكثر‎ Fo ‏على نحو اختياري»؛ يتضمن نطاق‎ .)1666( Gly-Gly-Gly-Thr ‏ليسين 777 و850-434. في حالات محددة؛ يتضمن‎ (ASP-265 ‏عند وحدات بنائية مثل‎ ‏سبيل المثال» طافرة 265-م85) التي‎ Ao) ‏المطفر واحدة أو أكثر من هذه الطفرات‎ Fo ‏نطاق‎ 5
Tye
Vm ‏ذو نمط بري. في حالات‎ Fo ‏بالنسبة لنطاق‎ Fey ‏يكون لها قدرة منخفضة على الارتباط بمستقبل‎ ‏سبيل المثال» طافرة‎ Ae) ‏المطفر واحدة أو أكثر من هذه الطفرات‎ Fo ‏أخرى؛ يتضمن نطاق‎
FC ‏المرتبط بمستقبل‎ -١ ‏فئة‎ MHC, ‏والذي يكون له قدرة متزايدة على الارتباط‎ (Asn-434 ‏ذو نمط بري.‎ Fe ‏بالنسبة لنطاق‎ )051( ‏يتم توضيح بروتينات الاندماج التوضيحية التي تشتمل على نطاق خارج الخلايا قابل للذويان ل‎ 5 (FA ‏سبق في متواليات رقمض ىبت فت لك مت لكت دكت‎ Lad FC ‏مدمج مع نطاق‎ 8
EV ‏ني الى 88( لك‎ ‏في نموذج محدد؛ تشتمل مثبطات 8014118 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا على‎ ‏لجسم مضاد؛ حيث يشتمل مثبط‎ FC ‏منه؛ مرتبط بجزءِ‎ gia ‏أو‎ ¢ ACtRIIBI ‏نطاق خارج الخلية‎ ‏مذكور على متوالية حمض أميني مطابقة بنسبة 9678 على الأقل لمتوالية حمض‎ 8018118 0
EEE) ‏لكت كك ب‎ FO TE ‏أميني يتم اختيارها من متواليات رقمضتنت ات لت مت‎ ‏و . في نموذج آخر محدد؛ تشتمل مثبطات 8014118 المستخدمة في التركيبات والطرق‎ 17 ‏لجسم مضاد؛‎ FC ‏مرتبط بجزءِ‎ die gia ‏؛ أو‎ ACRIIB ‏الموصوفة هنا على نطاق خارج الخلية‎ ‏حيث يشتمل مثبط 8004118 مذكور على متوالية حمض أميني والذي يبلغ 96860 على الأقل؛‎ ‏09698؛ أو %39< المتطابقة مع متوالية حمض‎ (%AY 9692 >65 96560 96/25 5
EEE) ‏لكت كك ب‎ FO TE ‏أميني يتم اختيارها من متواليات رقمضتىنت ات لت مت‎
EY gc ‏في نموذج محدد؛ يكون مثبط 8014118 المراد استخدامه في التركيبات والطرق الموصوفة هنا‎
IgGl ‏ل‎ Fe gia ‏عبارة عن بروتين اندماج بين نطاق خارج الخلية لمستقبل 8014118 بشري و‎ ‏في نموذج آخر محدد؛ يكون مثبط 8014118 المراد استخدامه في التركيبات والطرق الموصوفة هنا‎ 0
IFC oa ‏عن بروتين اندماج بين نطاق خارج الخلايا مقطوع لمستقبل 80154118 البشري و‎ Ble ‏اا . في نموذج آخر محدد؛ يكون مثبط 800418 المراد استخدامه في التركيبات والطرق‎
ActRIIB ‏الموصوفة هنا عبارة عن بروتين اندماج بين نطاق خارج الخلايا مقطوع لمستقبل‎ ‏؛ حيث يكون النطاق المقطوع خارج الخلايا لمستقبل 80174118 البشري‎ IGGL FC ging ‏البشري‎ ‏لمتوالية رقم:‎ VA ‏استبدال الحمض الأميني عند موضع الحمض الأميني المناظر للحمض الأميني‎ 5
Tye vi ‏في أحد النماذج؛ يتناظر استبدال حمض أميني عند موضع الحمض‎ YA ‏أو متوالية رقم:‎ ‏وبكونعبارة عن استبدال‎ YA ‏أو متوالية رقم:‎ ١6 ‏الأميني للحمض الأميني 4 لمتوالية رقم:‎ .) 790 ‏الليوسين لحمض أسبارتيك (أي؛ طافرة‎ ‏في نموذج محدد؛ يكون مثبط 8014118 المراد استخدامه في التركيبات والطرق الموصوفة هنا‎ ‏الذي يمثل بروتين اندماج بين نطاق خارج الخلية لمستقبل‎ Yo ‏أو‎ YE ‏عبارة عن متوالية رقم:‎ 5 ‏حيث يشتمل نطاق خارج الخلايا 801118 المذكور على‎ (IgGl ‏ل‎ FC ‏بشري وجزءِ‎ 68 ‏.يتم تقديم متوالية الحمض النووي‎ L79D ‏بها طافرة‎ YA ‏لمتوالية رقم:‎ ١١١-72 ‏أحماض أمينية‎ . 406 ‏في متوالية رقم:‎ YE ‏لمتوالية رقم:‎ ACRIIB-FC ‏التي تشفر بروتين الاندماج‎ ‏في نموذج آخر محدد؛ يكون مثبط 8004118 المراد استخدامه في التركيبات والطرق الموصوفة هنا‎ ‏والتي تمثل بروتين اندماج بين نطاق خارج الخلية لمستقبل‎ (FO ‏عبارة عن متوالية رقم: 4 ؟ أو‎ 0 ‏المذكور على‎ ActRIIB ‏حيث يشتمل نطاق خارج الخلايا‎ «IGGL Fe ‏بشري وجزءِ‎ 68 . L79D ‏بها طافرة‎ ٠6 ‏لمتوالية رقم:‎ ١١١-70 ‏أحماض أمينية‎ ‏تشتمل مواقع تمييز المعالجة بالجليكوسيل المرتبطة بالأشباراجين بصفة عامة على متوالية ثلاثية‎ ‏عبارة عن حمض‎ "XY ‏أسُباراجين-»!-ثيرونين (أو أشباراجين-*-سيرين) (حيث تكون‎ cand ‏أميني) والتي يتم تمييزها بشكل نوعي بواسطة إنزيمات المعالجة بالجليكوسيل خلوية مناسبة. كما‎ 5 ‏يمكن إجراء التبديل بواسطة إضافة؛ أو استبدال؛ واحدة أو أكثر من وحدات سيرين أو ثيرونين‎ ‏بنائية لمتوالية بولي ببتيد 8014118 ذو نمط بري (لمواقع معالجة بالجليكوسيل مرتبطة بالموضع‎ ‏ينتج عن مجموعة متنوعة من عمليات استبدال أو حذف الحمض الأميني عند واحد من‎ .)0© ‏مواضع الحمض الأميني الأولى أو الثالثة أو كلاهما لموقع تمييز معالجة بالجليكوسيل (و/أو‎ ‏حذف حمض أميني عند الموضع الثاني) عدم معالجة بالجليكوسيل عند المتوالية ثلاثية الأبعاد‎ 0 ‏بواسطة‎ ACRIIB ‏على بولي ببتيد‎ chang Sl ‏المعدلة. تتمثل طريقة أخرى لزيادة عدد شقوق‎ ‏الإقران الكيميائي أو الإنزيمي للجليكوسيدات بالبولي ببتيد 8014118. بناءً على نمط الإقران‎ ‏المستخدم؛ يمكن إلحاق السكر (السكريات) ب )1( أرجينين وهستيدين؛ (ب) مجموعات كربوكسيل‎ ‏مثل تلك الخاصة‎ free sulfhydryl ‏؛ (ج) مجموعات سَلفهيدريل حرة‎ free carboxyl ‏حرة‎ ‏تلك الخاص‎ Jie free hydroxyl ‏(د) مجموعات هيدروكسيل حرة‎ ¢ cysteine ‏بالسيستين‎ 5
Tye
اللا بسيرين ‎serine‏ » ثيرونين ‎threonine‏ « أو هيدروكسي برولين ‎hydroxyproline‏ ؛ (ه) وحدات بنائية عطرية مثل تلك الخاص بفينيل ألانين ‎phenylalanine‏ « تيروزين ‎tyrosine‏ ؛ أو تريبتوفان ‎tryptophan‏ ؛ أو (و مجموعة الأميد 56 للجلوتامين ‎glutamine‏ تم وصف هذه الطرق في طلب البراءة الدولي رقم ‎«OFT AY‏ المنشور في ‎١‏ ١سبتمبر‏ 197 وفي ‎Aplin.‏ ‎cand Wriston (1981) CRC Crit.
Rev. 8100080., pp. 259-306 5‏ التي تم تضمينها في هذه الوثيقة كمرجع. يمكن إزالة واحدة أو أكثر من شقوق الكريوهيدرات الموجودة على بولي ببتيد 808118 كيميائياً و/أو إنزيمياً. يمكن أن تتضمن عملية إزالة مجموعة الجليكوسيل الكيميائية» على سبيل المثال» تعرض بولي ببتيد 8018118 لمركب حمض تراي فلورو ميثان سلفونيك؛ أو مركب مكافئ. ينتج عن هذه المعالجة انشطار غالبية أو كل السكريات باستثناء 0 السكر الرابط (ل١-أسيتيل‏ جِلُوكُوزامين ‎acetylglucosamine‏ أو ل١-أسيتيل‏ جالاكتوسامين 6 /30©07)؛ بينما يتم ترك متوالية الحمض الأميني سليمة. يتم وصف عملية إزالة مجموعة الجليكوسيل الكيميائية بشكل إضافي بواسطة ‎Hakimuddin et al. (1987) Arch.‏ ‎Biochem.
Biophys. 259:52‏ وبواسطة ‎Edge et al. (1981) Anal.
Biochem.‏ 131 :118 يمكن تحقيق الانشطار الإنزيمي لشقوق الكريوهيدرات على بوليب بتيدات ‎ACtRIIB‏ ‏5 بواسطة استخدام مجموعة متنوعة من إنزيمات جليكوسداز داخلية وخارجية على النحو الموصوف بواسطة 138:350 ‎et al. (1987) Meth.
Enzymol.‏ 10018/40018. يمكن ضبط متوالية بولي ببتيد ‎ACHRIIB‏ بشكل مناسب؛ بناءً على نوع التعبير الوراثي المستخدم»؛ حيث يمكن لخلايا ‎GAS‏ ثديي؛ خميرة؛ حشرة ونبات إدخال أنماط معالجة بالجليكوسيل مختلفة التي يمكن أن تتأثر بمتوالية الحمض الأميني للببتيد. بصفة عامة؛ سوف يتم التعبير الوراثي عن بروتينات ‎ACtRIIB‏ ‏20 للاستخدام في الكائنات البشرية في سلالة خلية ‎AS‏ ثديي توفر معالجة ملائمة بالجليكوسيل؛ مثل سلالات خلية ‎HEK293‏ أو ‎(CHO‏ إلا أنه من المتوقع أن تكون أنظمة تعبير وراثي أخرى؛ مثل سلالات خلية تعبير وراثي ثديية أخرى» سلالات خلية خميرة بها إنزيمات معالجة بالجليكوسيل معدلة وراثياً وخلايا حشرات؛ مفيدة أيضاً. في نماذج محددة؛ تشتمل بولي ببتيدات المطفرة 86154118 على إضافة موضع معالجة بالجليكوسيل مرتبط ب ‎N‏ أيضاً ‎(S/T-X-N)‏ والذي يعمل على زيادة فترة نصف العمر للمصل
ل لبروتين اندماج 8004118-10 بالنسبة ‎ACtRIIBI‏ (64)- يمكن استخدام صورة ‎FC‏ في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. في نموذج محدد؛ يؤدي إدخال أَسْباراجين عند الموضع ‎YE‏ لمتوالية رقم: ‎VT‏ أو متوالية رقم: ‎(NY EA) YA‏ إلى إيجاد متوالية ‎Ally NXT‏ تمنح فترة نصف عمر طويلة. يمكن أن توجد متواليات ‎(T/S)NX‏ عند 44-47 ‎(NQS)‏ و 17-65 ‎(NSS)‏ رغم عدم إمكانية معالجة الأخير بالجليكوسيل بفاعلية باستخدام ‎eR‏ الموضع ‎TE‏ (أي؛ في 864 بولي ببتيدات). بوجهٍ عام يمكن إدخال متواليات لا١-5/1-1‏ عند مواضع خارج جيب ريط المركب الترابطي 8014118؛ والذي يتم تفصيله سابقاً. تشتمل المواضع المناسبة على وجه التحديد لإدخال متواليات ‎N-X-S/T‏ غير داخلية ‎Land‏ على أحماض أمينية ١أحكى‏ .احئىت احم ‎١34-١7١ 1374-4‏ أو ‎١2-١74‏ لمتوالية رقم: ‎١١‏ أو متوالية رقم: ‎YA‏ يمكن ‎Lad‏ ‏0 إذدخال متواليات ‎N=X-S/T‏ في رابط بين متوالية ‎ACtRIIB‏ و ‎Fe‏ أو مكون الاندماج ‎AY‏ ‏يمكن إدخال الموضع المذكور بأدنى جهد بواسطة إدخال لا في الموضع الصحيح بالنسبة ل5 أو ‎T‏ أو الموجود مسبقاً بواسطة إدخال 5 أو 1 عند موضع مناظر ل ‎N‏ الموجود مسبقاً. بالتالي؛ تكون التعديلات المطلوية التي تعمل على إيجاد موضع المعالجة بالجليكوسيل مرتبط عند الموضع ‎N-‏ عبارة عن : ل8241 46411 ‎S6TN‏ (مدمج بصورة محتملة مع تعديلات ‎(N65A‏ ‎(A132N (P129N (E123N «G120N (RI 12N (E106N 5‏ 125 ل و1217 ل ( حيث يمكن أن توجد جميع مواضع الحمض الأميني المناظرة للمواضع في متوالية رقم: ‎١6‏ أو متوالية رقم: ‎(YA‏ يمكن تعديل أي 5 متوقع معالجتها بالجليكوسيل إلى ‎T‏ دون إيجاد موضع مولد للمناعة؛ وحيث أنه تم توفير الحماية بواسطة المعالجة بالجليكوسيل. على نحو مماثل؛ يمكن تعديل أي 1 والمتوقع أن يكون معالجة بالجليكوسيل إلى 5. بالتالي يتم تضمين تعديلات 5671 0 و5441 هنا. على نحو مماثل»؛ في الصورة المتغيرة 8241؛ يمكن استخدام تعديلات 5261. وفقاً لذلك؛ يمكن أن يتضمن بولي ببتيد 8018 واحدة أو أكثر من المتواليات المتطابقة المعالجة بالجليكوسيل المرتبطة عند الموضع ‎N=‏ غير الداخلية ‎Land)‏ الإضافية. يمكن استخدام مجموعة متنوعة من اختبارات الفحص لتقييم الصور المتنوعة بولي ببتيد ‎ACtRIIB‏ ‏. على سبيل ‎JU)‏ يمكن فحص الصورة المتغيرة بولي ببتيد 8005118 للقدرة على الارتباط ب ‎ACtRIB 5‏ مركب ترابطي» لمنع ربط مركب ترابطي ‎ACtRIB‏ ببولي ببتيد 8017118 أو للاستدلال ‎Tye‏
ولا
باستخدام انتقال الإشارة الناتج عن مركب ترابطي 8014118. يمكن أيضاً اختبار نشاط بولي ببتيد
8 أو الصورة المتغيرة منع في اختبار أساسه الخلية أو داخل الخلية.
يمكن توليد الصور المتغيرة المشتقة توافقياً التي يكون لها فاعلية انتقائية أو متزايدة بصفة عامة
بالنسبة لبولي ببتيد ا[801 ناتج طبيعياً 8. على نحو مماثل؛ يمكن أن ينتج عن التطفر زيادة في الصور المتغيرة ‎Ally‏ يكون لها ‎jee‏ نصفي داخل الخلية مختلف بدرجة كبيرة عن بولي ببتيد
‎ActRII‏ المناظر ذو النمط البري 8. على سبيل المثال؛ يمكن أن يتم جعل البروتين الذي تم تغييره
‏إما أكثر ثباتاً أو أقل ‎bls‏ للتحلل الحال للبروتين أو عمليات خلوية أخرى والتي ينتج عنها تدمير؛
‏أو بخلاف ذلك إيقاف تنشيط بولي ببتيد ‎ARI‏ أصلي 8. يمكن استخدام الصور المتغيرة
‏المذكورة؛ والجينات المُشفرة ‎(Lgl‏ لتعديل مستويات بولي ببتيد 801118 بواسطة تنظيم العمر
‏0 النصفي ل بولي ببتيدات 80118. على سبيل المثال؛ يمكن أن يؤدي العمر النتصفي القصير إلى زيادة التأثيرات البيولوجية العابرة بدرجة أكبر ويمكن أن يسمح بتحكم أقوى في مستويات بولي ببتيد ناتج عن عودة الارتباط الجيني 8014118 في المريض. في بروتين اندماج ‎(FC‏ يمكن عمل الطفرات في الرابط (إن ‎(ang‏ و/أو ‎FC gia‏ لتغيير العمر النصفي للبروتين. يمكن إنتاج مجموعة توافقية بواسطة مجموعات تنكسية من جينات تُشفر مجموعة من بولي ببتيدات
‏5 تتضمن كل منها ‎gia‏ على الأقل من متواليات بولي ببتيد محتملة ‎ACtRIIB‏ على سبيل المثال؛ يمكن ريط خليط من أوليجو نوكليوتيدات تخليقية إنزيمياً بمتواليات جين بحيث يمكن التعبير عن لمجموعة التنكسية لمتواليات النوكليوتيد لبولي ببتيد محتمل في صورة بولي ببتيدات مستقلة؛ أو على نحو بديل؛ كمجموعة من بروتينات اندماج أكبر (على سبيل المثال؛ لإظهار الخلايا الملتهمة).
‏0 يوجد عدة طرق يمكن بواسطتها توليد مجموعة من النظائر المحتملة من 8 متوالية أوليجو نوكليوتيد تنكسية. يمكن أن يتم التخليق الكيميائي لمتوالية جين تنكسي في وحدة تخليق ‎DNA‏ أوتوماتيكية؛ وبعد ذلك يمكن إلحاق الجينات التخليقية في ناقل ملائم للتعبير الوراثي. يكون تخليق أوليجو نوكليوتيدات تنكسية معروف جيداً في المجال (راجع على سبيل ‎Narang, 5 A (1983) «Juul‏ ‎et al., (1981) ¢Tetrahedron 39:3‏ 8 أاناتج عن عودة الارتباط الجيني ‎DNA,‏
‎Proc. 3rd Cleveland Sympos.
Macromolecules, ed.
AG Walton, 25
VI ltakura et al, (1984) Annu. Rev. ¢Amsterdam: Elsevier pp 273-289 lke et al, ¢ltakura et al, (1984) Science 198: 1056 ¢Biochem. 53:323 ‏تم استخدام هذه التقنيات في التطوير المباشر‎ .((1983) Nucleic Acid Res. 11 :477
Scott et al, (1990) Science 249:386- ‏لبروتينات أخرى (راجع؛ على سبيل المثال»‎
Devlin et al, ¢Roberts et al, (1992) PNAS USA 89:2429-2433 «390 5
Cwirla et al, (1990) PNAS USA 87: ¢(1990) Science 249: 404-406
OYAAVET 777204 ‏بالإضافة إلى براءاة الاختراع الأمريكية أرقام‎ 46378-6382 ‏و47/15.).‎ ‏على نحو بديل؛ يمكن استخدام صور أخرى للتطفر لتوليد مجموعة توافقية. على سبيل المثال؛‎ ‏يمكن توليد الصور المتنوعة بولي ببتيد 801118 وعزلها من مجموعة بواسطة الفحص باستخدام؛‎ 0
Ruf et al., (1994) Biochemistry ( ‏على سبيل المثال؛ التطفر بفحص الألانين وما شابه‎ ‘Wang et al, (1994) J. Biol. Chem. 269:3095-3099 ¢33: 1565-1572
Grodberg et al, (1993) Eur. J. ¢Balint et al, (1993) Gene 137: 109-118
Nagashima et al, (1993) J. Biol. Chem. ¢Biochem. 218:597-601 tLowman et al, (1991) Biochemistry 30: 10832-10838 ¢268:2888-2892 5 ‏بواسطة التطفير‎ ؛)٠١8-١‎ 81:7 44 Science (Y4A4) «and Cunningham et al
Brown et al, Gustin et al, (1993) Virology 193:653-660) ‏يفحص الرابط‎
McKnight et al, (1982) Science ¢(1992) Mol. Cell Biol. 12:2644-2652 ¢(Meyers et al, (1986) Science 232:613) ‏التطفر بالتشبع‎ dauls ¢(232:316 ‏أو‎ ¢(Leung et al, (1989) Method Cell Mol Biol 1 : 11-19) PCR ‏بواسطة التطفر‎ 0
Miller et al, (1992) A Short) ‏بواسطة التطفر العشوائي؛ بما في ذلك التطفر الكيميائي؛ إلخ‎ «Course in Bacterial Genetics, CSHL Press, Cold Spring Harbor, N.Y. ‏يعتبر التطفر يفحص‎ (Greener et al, (1994) Strategies in Mol Biol 7:32-34 4 ‏الرابط» بشكل محدد في إعداد توافقي» طريقة جديدة لتحديد صور مشذبة (نشطة حيوياً) من‎
ActRIIB 5
-١/- ‏بولي ببتيدات : يكون نطاق واسع من التقنيات معروف في المجال لفحص منتجات الجين‎ ‏لمجموعات توافقية محضرة بواسطة طفرات إلى نقطة معينة وعمليات تشذيب؛ وء بالنسبة لهذا‎ ‏لمنتجات جين لها خاصية محددة. ستتم تهيئة هذه التقنيات‎ CDNA ‏الموضوع؛ لفحص مجموعات‎ ‏بصفة عامة للفحص السريع لمجموعات الجين التي يتم توليدها بواسطة التطفر التوافقي لبولي‎ ‏لفحص مجموعات كبيرة من‎ aly ‏ببتيدات 18ل8015. تشتمل أكثر التقنيات المستخدمة على نطاق‎ 5 ‏الجينات بصورة نمطية على عمل نسائل من مجموعة الجين نواقل تعبير وراثي قابل للاستنساخ؛‎ ‏تحويل خلايا مناسبة باستخدام مجموعة النواقل الناتجة؛ والتعبير وراثياً عن الجينات التوافقية في‎ ‏ظل ظروف يؤدي فيها الكشف عن النشاط المطلوب إلى تسهيل العزل السهل نسبياً لناقل يُشفر‎ ‏الجين الذي تم الكشف عن المنتج الخاص به. تشتمل التجارب المفضلة على تجارب ارتباط‎ ‏الأكتيفين وتجارب إرسال إشارات خلية يساهم في حدوثها الأكتيفين.‎ 0 ‏في نماذج محددة؛ تشتمل بولي ببتيدات 800118 المستخدم في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا‎ ‏بالإضافة إلى بالإضافة إلى تلك التي تكون موجودة‎ Shell ‏أيضاً على تعديلات ما بعد التحور‎ ‏وليس‎ JU ‏بصورة طبيعية في بولي ببتيدات 18ل8014. تتضمن تلك التعديلات؛ على سبيل‎ ‏المعالجة بالكريوكسيل؛ معالجة بالجليكوسيل؛ الفسفرة؛ المعالجة‎ (Jin ul ‏الحصر؛ المعالجة‎ ‏عناصر بخلاف‎ ACRIIB ‏يتضمن بولي ببتيدات معدلة‎ (IN ‏بالدهون؛ ومعالجة بالأسيل. كنتيجة‎ 5 ‏الحمض الأميني؛ مثل مركبات بولي إيثيلين جليكول؛ دهون؛ بولي- أو مونو -سكاريد؛ ومركبات‎ ‏الفوسفات. يمكن اختبار تأثيرات العناصر بخلاف الحمض الأميني المذكورة على وظيفية بولي‎ ‏بواسطة أي طريقة معروفة للمتمرس في المجال. عندما يتم إنتاج بولي ببتيد‎ ACtRIIB ‏ببتيد‎ ‏كما يمكن أن تكون‎ ACHRIIB ‏في خلايا بواسطة انشطار صورة ناشئة من بولي ببتيد‎ 68 ‏المعالجة ما بعد التحور الوراثي هامة ل للطي الصحيح و/أو وظيفة البروتين. يكون للخلايا‎ 0 ‏آلية‎ (HEK293 ‏أو‎ NIH-3T3 (W138 «293 (MDCK (Hela «CHO ‏المختلفة (مثل‎ ‏خلوية نوعية وآليات مميزة للنشاطات التالية للترجمة وويمكن اختيارها لضمان التعديل الصحيح‎
ACtRIIB ‏ومعالجة لبولي ببتيدات‎ 801118 ‏في جوانب محددة؛ تشتمل الصور المتنوعة الوظيفية أو الصور المعدلة لبولي ببتيدات‎ ‏على بروتينات اندماج بها جزء على الأقل من بولي ببتيدات 18ل801 وواحد أو أكثر من نطاقات‎ 5
Tye
اللا
الاندماج. تشتمل الأمثلة المعروفة جيداً لنطاقات الاندماج المذكورة على؛ على سبيل المثال وليس الحصرء بولي هستيدين ‎«Glu-Glu « polyhistidine‏ جلوتاثيون 5 ترانسفيراز 5 ‎glutathione‏ ‎(GST) transferase‏ ثيو ريدوكسين 111060000 ؛ بروتين ‎A‏ بروتين ‎«G‏ منطقة ثابتة لسلسلة ثقيلة لجلويولين مناعي ‎«(Fc) immunoglobulin heavy chain constant region‏ بروتين ريط مالتوز ‎(MBP) maltose binding protein‏ أو ألبومين مصل بشري. يمكن اختيار نطاق اندماج بحيث يتم نقل الخاصية المطلوية. على سبيل ‎JU)‏ تكون بعض نطاقات الاندماج مفيدة بشكل خاص لعزل بروتينات الاندماج بواسطة كروماتوجراف الألفة. لغرض تنقية ‎(day)‏ يتم استخدام مصفوفات ذات صلة لكروماتوجراف الألفة ‎affinity chromatography‏ « مثل ‎clam‏ مترافقة بجلوتاثيون ‎glutathione‏ ¢ أميليز ‎amylase‏ ؛ ونيكل ‎nickel‏ أو كويلت 0 +ل0068. تكون العديد من هذه المصفوفات متوفرة في صورة “طقم”؛ مثل نظام التنقية ‎Pharmacia GST‏ و ‎(Qiagen) the QlAexpress™ system‏ المفيد مع شريك اندماج ‎(HISO)‏ كمثال آخرء يمكن اختيار نطاق اندماج بحيث يتم تسهيل الكشف عن بولي ببتيدات 68. تشتمل أمثلة نطاقات الكشف المذكورة على العديد من البروتينات المتألقة فلوربًا ‎Ae)various fluorescent proteins‏ سبيل المثال؛ ‎(GFP‏ بالإضافة إلى" علامات ‎dad‏ ‏5 الاصقة" والتي ‎Bile‏ ما تكون عبارة عن متواليات ببتيد قصيرة يتوفر لها جسم مضاد نوعي. تشتمل علامات القمة اللاصقة المعروفة جيداً التي يتوفر لها بسهولة الأجسام المضادة أحادية النسيلة النوعية ‎FLAG le‏ ؛ ‎Lal)‏ 15543 لفيروس الإنفلوتزا | ‎«(HA) virus hemagglutinin‏ وعلامات ‎.Cc-myC‏ في بعض الحالات؛ يكون لنطافات اندماج موقع انشطار ‎Jie lig nll‏ لعامل ‎Xa‏ أو ثرومبين؛ والتي تسمح للبروتياز ذو الصلة باهتضام بروتينات الاندماج جزئياً 0 ولالتالي يتم تحرير البروتينات الناتجة عن عودة الارتباط الجيني منها. بعد ذلك يمكن ‎dre‏ ‏البروتينات المحررة من نطاق الاندماج بواسطة فصل كروماتوجرافي لاحق. في نماذج مفضلة محددة؛ بولي ببتيد 8014118 يتم دمج بنطاق يعمل على تثبيت بولي ببتيد 18ل8014 داخل الخلية الحية ( نطاق 'مثبت"). يعني تعبير “تثبيت” أي شيء يعمل على زيادة العمر النتصفي للمصل؛ بغض النظر عن ما إذا كان ذلك بسبب التدمير المنخفض؛ التصفية المنخفضة بواسطة الكلية؛ أو 5 تأثير دوائي حركي آخر. تكون عمليات الاندماج ‎FE ohm‏ لجلوبولين مناعي معروف بنقل خواص حركية دوائية مطلوية إلى نطاق واسع من البروتينات. على نحو مماثل؛ يمكن أن تنقل عمليات
م١‏ الاندماج بألبومين مصل بشري خواص مطلوية. تشتمل أنواع أخرى لنطاقات الاندماج التي يمكن اختيارها على نطاقات ذات وحدات متعددة ‎(Ae)‏ سبيل المثال؛ الديمرة 01016112109 ؛ تكوين ترايمر ‎(tetramerizing‏ ونطاقات وظيفية (التي تنقل وظيفة بيولوجية إضافية؛ مثل التحفيز الإضافي لنمو العظام أو نمو العضلات؛ على النحو المطلوب).
يتم فهم أنه يمكن وضع العناصر المختلفة لبروتينات الاندماج بأي طريقة تتوافق مع الوظيفية المطلوية. على سبيل المثال؛ بولي ببتيد 80174118 يمكن وضع عند الطرف © لنطاق مختلف التكوين؛ أو على نحو بديل؛ يمكن وضع نطاق مختلف التكوين عند الطرف © لبولي ببتيد 68. لا يتطلب أن يكون نطاق بولي ببتيد 8014118 والنطاق مختلف التكوين متجاورين في بروتين الاندماج؛ ويمكن أن يتم تضمين نطاقات إضافية أو متواليات حمض أميني عند الطرف ©
0 أو ‎SYN‏ نطاق أو بين النطاقات. في نماذج محددة؛ يتضمن بولي ببتيدات 8004118 المستخدم في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا تعديل واحد أو أكثر قادر على تثبيت بولي ببتيدات 8ال08015. على سبيل المثال؛ تعمل تلك التعديلات على تعزيز العمر النصفي في المعمل لبولي ببتيدات ‎ACtRIIB‏ تحسين العمر النصفي الدوراني لبولي ببتيدات ‎ACRIIB‏ أو تقليل التحلل الحال للبروتين لبولي ببتيدات 01118م. 5 تتضمن تعديلات التثبيت المذكورة؛ على سبيل المثال وليس الحصرء بروتينات اندماج (بما في ذلك؛ على سبيل المثال؛ بروتينات اندماج تشتمل على بولي ببتيد 18ال800 ونطاق تثبيت)؛ تعديلات موضع المعالجة بالجليكوسيل (بما في ذلك؛ على سبيل ‎JU)‏ إضافة موضع المعالجة بالجليكوسيل إلى بولي ببتيد ‎((ACRIIB‏ وتعديلات شق الكريوهيدرات (بما في ذلك؛ على سبيل المثال» إزالة شقوق الكريوهيدرات من بولي ببتيد 80114(18). في حالة بروتينات اندماج؛ تكون 0 بولي ببتيد 8015118 مدمجة مع نطاق تثبيت ‎Jie‏ جزئ ‎Ae) 19G‏ سبيل المثال؛ نطاق ‎(Fe‏ ‏على النحو المستخدم هناء لا يشير تعبير "نطاق تثبيت" إلى نطاق اندماج (على سبيل المثال؛ ‎(Fe‏ كما في حالة بروتينات الاندماج فحسب؛ لكن يتضمن أيضاً تعديلات غير بروتينية ‎Jie‏ شق كريوهيدرات ؛ أو بوليمر غير بروتيني؛ مثل بولي إيثيلين جليكول. في نماذج محددة؛ تستخدم الطرق والتركيبات الموصوفة هنا بولي ببتيدات معزولة أو نقية 8004018 أي؛ بولي ببتيدات 8004118 التي يتم ‎Lelie‏ من؛ أو بخلاف ذلك تكون خالية ‎(Cre‏ ‎Tye‏
ولا ‎(Sa‏ استخدام بروتينات أخرى مع الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. ‎dns‏ عام يمكن انتاج بولي ببتيدات ‎ACtRIIB‏ بواسطة التعبير الوراثي الناتج عن ‎sage‏ الارتباط الجيني أحماض نووية. في جوانب محددة؛ يتم تشفير بولي ببتيدات 18ل8014 المستخدم في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا بواسطة أحماض نووية معزولة و/أو ناتجة عن عودة الارتباط الجيني؛ بما في ذلك شظاياء الصور المتنوعة الوظيفية وبروتينات اندماج تم الكشف عنها هنا. على سبيل المثال؛ تشفر متوالية رقم: ‎٠9‏ بولي ببتيد منتج 808118 بشري ناتج طبيعياً. يمكن أن تكون الأحماض النووية للاختراع أحادية الجديلة أو مزدوجة الجديلة. يمكن أن تكون الأحماض النووية المذكورة عبارة عن جزيئات ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ . يمكن استخدام الأحماض النووية المذكورة؛ على سبيل المثال» في طرق تحضير بولي ببتيدات ‎JACIRIIB‏ كعوامل علاجية مباشرة (على سبيل المثال» في طريقة علاج 0 الجين). في جوانب محددة؛ يمكن أن تتضمن الأحماض النووية التي يمكن استخدامها لإنتاج بولي ببتيدات 68 مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا ‎Load‏ أحماض نووية عبارة عن صور متغيرة من متوالية رقم: ‎١9‏ بالإضافة إلى الصور المتغيرة لمتواليات الحمض النووي المذكورة التي تشفر بولي ببتيدات 8004118 قابل للذويان (على سبيل ‎(JU‏ أحماض نووية التي تشفر 5 متواليات رقم: ‎OY‏ مدت اكت كك ‎YY‏ كك نك لك كك كك حك ‎(EY EY FY‏ تتضمن متواليات النوكليوتيد المتغيرة متواليات تختلف بواسطة أو ‎ST‏ من عمليات استبدال» إضافة أو حذف النوكليوتيد. مثل صور متغيرة أليلية. في نماذج محددة؛ تتطابق متواليات الحمض النووي المعزولة أو الناتجة عن ‎sage‏ الارتباط الجيني التي يمكن استخدامها لإنتاج بولي ببتيدات 8004118 مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات 0 الموصوفة هنا بنسبة ‎Av‏ على ‎YAS (JN‏ % د64 ‎%AY‏ 6148 9694 أو ‎96٠٠0‏ ‏المتطابقة مع متوالية رقم: ‎١9‏ أو متواليات الحمض النووي التي تشفر بولي ببتيدات 801118 قابلة للذويان(على سبيل ‎(JU)‏ أحماض نووية التي تشفر متواليات ‎OY tad)‏ ف 77 13 لات 5ك ‎(E75 7 (FY 1 17 FY ١ ١‏ سيدرك أحد أصحاب المهارة العادية في المجال أنه يمكن استخدام متواليات الحمض النووي المتممة لمتوالية رقم: ‎١9‏ أو تلك متواليات 5 الحمض النووي التي تشفر بولي ببتيدات 801118 قابلة للذويان(على سبيل المثال» أحماض نووية ‎Tye‏
“Ae
CEY FY ‏كك ىك حك‎ FY ‏تت نك‎ TY ‏ات تك‎ OA OY ‏التي تشفر متواليات رقم؛‎ ‏أو متواليات الحمض النووي التي تشفر‎ ١9 ‏ويمكن استخدام صور متغيرة من متوالية رقم:‎ (EY ‏سبيل المثال؛ أحماض نووية التي تشفر متواليات‎ Ae) ‏بولي ببتيدات 8014118 القابلة للذويان‎ ‏و7؛) مع الطرق‎ ١7 (FY (FT OFF ‏كك نك لك كك‎ YY ‏اك تك‎ OA OY ‏رقم:‎ ‏والتركيبات الموصوفة هنا. في نماذج أخرى؛ يمكن عزل متواليات الحمض النووي؛ ناتج عودة‎ 5
DNA ‏الارتباط الجيني؛ و/أو المدمجة مع متوالية نوكليوتيد مختلف التكوين؛ أو في مجموعة‎
ACtRIIB ‏التي يمكن استخدامها لإنتاج‎ diggs ‏في نماذج أخرى؛ تتضمن أحماض‎ ‏بولي ببتيدات مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا متواليات النوكليوتيد التي يتم‎ ‏أو‎ ١9 ‏تهجينها في ظل ظروف صارمة بدرجة كبيرة إلى متوالية النوكليوتيد امحددة في متوالية رقم:‎ ‏متواليات الحمض النووي المذكورة التي تشفر بولي ببتيدات 801118 قابلة للذويان(على سبيل‎ 10
FY ‏تت نك نك‎ YY ‏كت تك‎ VA OY ‏أحماض نووية التي تشفر متواليات رقم؛‎ (Jal) ‏أو متواليات الحمض النووي المذكورة‎ ١9 ‏متوالية متممة لمتوالية رقم:‎ (£1 5 7 (YY (FT FY ‏أحماض نووية التي تشفر‎ (JU ‏التي تشفر بولي ببتيدات 8004118 قابلة للذويان(على سبيل‎ (EF ‏نك لك كت كك تك للكت تك‎ YTV ‏اكت تك‎ OA OY ‏متواليات رقم:‎ ‏شظايا منها. سيفهم صاحب المهارة العادية في المجال أن الظروف الصارمة المناسبة التي تعزز‎ 5 ‏يمكن أن تكون مختلفة. على سبيل المثال؛ يمكن أن يقوم أحدهم بتنفيذ التهجين عند‎ DNA ‏تهجين‎ ‎(SSC)sodium chloride/sodium citrate ‏مرة كلوريد الصوديوم/سيترات الصوديوم‎ ٠ ‏درجة مثوية. على سبيل‎ ov aie SSC ‏مرة‎ 7,٠ ‏عند حوالي 55 درجة مئوية؛ يليه الغسل بمعدل‎ ‏مرة‎ ٠,١0 ‏يمكن اختيار تركيز الملح في خطوة الغسل من ظروف أقل صرامة تبلغ حوالي‎ JU ‏عند » #5 درجة‎ SSC ‏مرة‎ +, Y ‏درجة مئوية إلى ظروف أكثر صرامة تبلغ حوالي‎ ٠ ‏عند ؛‎ 5850 0 ‏مئوية. بالإضافة إلى ذلك» يمكن أن تتم زيادة درجة الحرارة في خطوة الغسل من ظروف أقل‎
To ‏درجة مئوية؛ إلى ظروف أكثر صرامة عند حوالي‎ YY ‏حوالي‎ dill ‏صرامة عند درجة حرارة‎ ‏أو يمكن تثبيت درجة الحرارة أو تركيز‎ ally ‏درجة مئوية. يمكن أن يختلف كل من درجة الحرارة‎ ‏الملح بينما يتم تغيير المتغير الآخر. في أحد النماذج؛ يمكن استخدام الأحماض النووية التي يتم‎
Tye
‏عند درجة حرارة الغرفة يليها الغسل‎ SSC ‏تهجينها في ظل ظروف أقل صرامة بمعدل 6 مرات‎ ‏عند درجة حرارة الغرفة مع الطرق والتركيبات الموصوفة هنا.‎ SSC ‏بمعدل ؟ مرة‎ ‏يمكن أيضاً استخدام أحماض نووية معزولة والتي تختلف عن الأحماض النووية كما تم التوضيح‎ ‏أو متواليات الحمض النووي المذكورة التي تشفر بولي ببتيدات‎ ١9 ‏سابقاً في متوالية رقم:‎
OA OY ‏أحماض نووية التي تشفر متواليات رقم:‎ (JU) ‏قابلة للذويان(على سبيل‎ ActRIIB 5 ‏بسبب التحلل في الشفرة الوراثية‎ (£75 ١ (FY FT (FF FY ك١ ‏ىك تك الك كك نك‎ ‏مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. على سبيل‎ ACtRIIB ‏لإنتاج بولي ببتيدات‎ ‏المثال؛ يتم تحديد عدد من الأحماض الأمينية بواسطة أكثر من ثلاثي واحد. يمكن أن ينتج عن‎
CAC 5 CAU ‏سبيل المثال؛ تكون‎ Ao) ‏الرامزات التي تحدد نفس الحمض الأميني؛ أو مترادفات‎ ‏عبارة عن مترادفات للهستيدين) طفرات “ساكنة” لا تؤثر على متوالية الحمض الأميني للبروتين.‎ 0 ‏التي لا تؤدي إلى تغييرات‎ DNA ‏مع ذلك؛ من المتوقع أن تتواجد متعددات الشكل البلوري لمتوالية‎ ‏في متواليات الحمض الأميني لبروتينات الخاضع ضمن الخلايا الثديية. سيدرك صاحب المهارة في‎ 1965-7 ‏المجال أن هذه الصور المتغيرة في واحد أو أكثر من النوكليوتيدات (ما يصل إلى حوالي‎ ‏من النوكليوتيدات) للأحماض النووية التي تشفر بروتين محدد يمكن أن تتواجد في أفراد من أنواع‎ ‏محددة بسبب الصورة المتغيرة الأليلية الطبيعية. يمكن استخدام أي وجميع الصور المتغيرة‎ 5 ‏لنوكليوتيد و الأشكال المتعددة للحمض الأميني الناتج مع الطرق والتركيبات الموصوفة هنا.‎ ‏الارتباط الجيني التي يمكن‎ sage ‏في نماذج محددة؛ يمكن ربط الأحماض النووية الناتجة عن‎ ‏استخدامها لإنتاج بولي ببتيدات 8014118 مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا‎ . ‏للتعبير الوراثي‎ Lane ‏من متواليات النوكليوتيد التنظيمية في جزءٍ‎ SST ‏بصورة فعلة بواحدة أو‎ ‏مستكون متواليات النوكليوتيد التنظيمية مناسبة بصفة عامة للخلية العائلة المستخدمة للتعبير الوراثي.‎ 0 ‏مناسبة ومتواليات تنظيمية مناسبة معروفة في المجال‎ (hy ‏تكون أنواع متعددة لنواقل تعبير‎ ‏لمجموعة متنوعة من الخلايا العائلة. نمطياً» يمكن أن تحتوي واحدة أو أكثر من متواليات‎ ‏النوكليوتيد التنظيمية المذكورة؛ على سبيل المثال وليس الحصر؛ على متواليات معززة؛ متوالية رائدة‎ ‏أو متوالية إشارة؛ مواقع ربط رببوسومية؛ متواليات بدء وإنهاء النسخ؛ متواليات بدء وإنهاء التحور‎ ‏الوراثي؛ ومتواليات محسنة أو منشطة. يمكن استخدام معززات بنيوية أو قابلة للحث معروفة في‎ 5
Tye
-م- المجال مع الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. يمكن أن تكون المعززات إما معززات ناتجة طبيعياً؛ أو معززات هجينة تعمل على دمج عناصر أكثر من معزز واحد. يمكن أن يكون جزءٍ ‎Laie‏ ‏للتعبير الوراثي موجود في خلية على إيبسوم؛ مثل بلازميد؛ أو يمكن إدخال الجزء المنشاً للتعبير الوراثي في كروموسوم. في نموذج مفضل؛ يحتوي ناقل التعبير الوراثي على جين مرقم قابل للاختيار للسماح باختيار خلايا عائلة محولة. تكون جينات مرقمة قابلة للاختيار معروفة جيداً في المجال ووستختلف ‎Gay‏ للخلية العائلة المستخدمة. في جوانب محددة؛ يتم توفير الأحماض النووية التي يمكن استخدامها ‎lay‏ بولي ببتيدات 058 مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا في ناقل تعبير ‎Alyy‏ يشتمل على متوالية نوكليوتيد تشفر بولي ببتيد 001418 ويتم ربطه بمتوالية تنظيمية واحدة على الأقل. 0 يتم تمييز المتواليات التنظيمية في المجال ويتم اختيارها لتوجيه التعبير الوراثي عن بولي ببتيد ‎Gay ..68‏ لذلك» يشتمل تعبير متوالية تنظيمية على معززات؛ محسنات؛ وعناصر أخرى للتحكم في التعبير الوراثي. تم وصف متواليات تنظيمية تمثيلية في ‎Goeddel; Gene‏ ‎Expression Technology: Methods in Enzymology, Academic Press, San‏ ‎Diego, Calif. (1990)‏ على سبيل المثال» يمكن استخدام أي ‎de gana‏ متنوعة من متواليات 5 التحكم في التعبير الوراثي التي تتحكم في التعبير الوراثي عن متوالية ‎DNA‏ عند ربطها بفاعلية بها في هذه الناقلات للتعبير ‎(Shell‏ عن متواليات ‎DNA‏ التي تشفر بولي ببتيد ‎AACHRIIB‏ تشتمل متواليات التحكم في التعبير الوراثي المذكورة؛ على سبيل المثال»على معززات في المرحلة المبكرة أو المتأخرة ل ‎(SVA0‏ معزز ‎det‏ معزز مبكر مباشر للفيروس الغدي أو الفيروس المضخم ‎(LDA‏ معززات ‎(RSV‏ نظام ‎dac‏ نظام ‎ctrp‏ نظام ‎TAC‏ أو ‎(TRC‏ معزز ‎TT‏ الذي يتم توجيه 0 التتعبير الوراثي الخاص به بواسطة ‎RNA‏ 17 بُوليميراز ‎polymerase‏ ؛ المناطق المشغلة والمعززة الرئيسية للمدا الملتهمة؛ مناطق التحكم لبروتين ‎fd‏ المغلف؛ المعزز ل 7-كُتْفُوجليسَرات كيناز ‎phosphoglycerate kinase‏ أو إنزيمات أخرى ‎Alls‏ للسكرء معززات مُشفاتاز الحمض ‎phosphatase‏ 860 ؛ على سبيل المثال» ‎«PHOS‏ معززات عوامل تزاوج ألفا للخميرة ‎alpha.-mating factors‏ ¢ معزز البولي هيدرون ‎polyhedron‏ لنظام الفيروسة العصوية 5 ومتواليات أخرى معروف أنها تتحكم في التعبير ‎Shell‏ عن جينات بدائي النواة أو خلايا حقيقية
اسم النواة أو الفيروسات الخاصة بهاء وتوليفات مختلفة منها. ينبغي إدراك أن تصميمناقل التعبير الوواثي يمكن أن يعتمد على هذه العوامل كاختيار للخلية العائلة المطلوب تحويلها و/أو نوع البروتين المراد التعبير عنه وراثياً. علاوة على ذلك؛ ينبغي أيضاً أخذ رقم نسخة ‎(Jal‏ القدرة على التحكم في رقم النسخة والتعبير الوراثي عن أي بروتين آخر مشفر بواسطة الناقل» مثل مرقمات مضاد حيوي؛ في الاعتبار. يمكن إنتاج حمض نووي ناتج عن عودة الارتباط الجيني بواسطة إلحاق الجين الذي تم عمل نسائل منه؛ أو جزء منه؛ في ناقل مناسب للتعبير الوراثي إما في خلايا بدائية النواة؛ خلايا حقيقية ‎oll‏ ‏(خميرة؛ الطيور» حشرة أو كائن ثديي)؛ أو كلاهما. تشتمل نواقل التعبير الوراثي لإنتاج بولي ببتيد ناتج عن عودة الارتباط الجيني 8014118 تتضمن بلازميدات ونواقل أخرى. على سبيل المثال؛ 0 تشتمل النواقل المناسبة على بلازميدات من الأنواع: بلازميدات مشتقة من ‎(PBR322‏ بلازميدات مشتقة من ‎pEMBL‏ بلازميدات مشتقة من ‎PEX‏ بلازميدات مشتقة من 08186 وبلازميدات مشتقة من ‎pUC‏ للتعبير الوراثي في خلايا بدائية النواة» ‎Jie‏ إشرشيا كولاي ‎E.coli‏ . تحتوي بعض نواقل التعبير الوراثي لكائن ثديي على كل من المتواليات بدائية النواة لتسهيل انتشار الناقل في البكتيرياء وواحدة أو أكثر من وحدات استنساخ حقيقية النواة التي يتم التعبير عنها وراثياً 5 في خلايا حقيقية النواة. تكون النواقل المشتقة من ‎«pcDNAIl/neo «(pcDNAlj/amp‏ ‎pTk2 pSV2-dhfr pSV2neo pSV2gpt pRc/CMV‏ معد/اكاام ‎«PMSG‏ ‎pHYQ 5 pko-neo pSVTT‏ عبارة عن أمثلة لنواقل تعبير وراشي لكائن ثديي مناسبة لنقل العدوى إلى خلايا حقيقية النواة. يتم تعديل بعض من هذه النواقل باستخدام متواليات من بلازميدات بكتيرية؛ ‎(pBR322 Jie‏ لتسهيل التناسخ واختيار مقاومة العقار في كل من ‎LOA‏ بدائية النواة 0 وحقيقية النواة. على نحو بديل؛ يمكن استخدام مشتقات الفيروسات مثل الأورام الحليمية البقرية ‎«(BPV-1)‏ أو فيروس إبستين - بار ‎(pHEBoO) Epstein-Barr virus‏ مشتق من ‎PREP‏ ‎(p205‏ للتعبير الوراثي العابر عن البروتينات في خلايا حقيقية النواة. يمكن العثور على أمثلة أنظمة تعبير وراثي فيروسية أخرى (بما في ذلك الارتداد الفيروسي) أدناة في ‎Chay‏ أنظمة توصيل العلاج بالجينات. تكون الطرق المختلفة المستخدمة في تحضير البلازميدات وفي تحول كائنات 5 العائل معروفة جيداً في المجال. بالنسبة لأنظمة التعبير الوراثي المناسبة الأخرى لكل من الخلايا ‎Tye‏
وم- بدائية النواة وحقيقية النواة» بالإضافة إلى الإجراءات العامة لناتج عودة الارتباط الجيني» راجع ‎Molecular Cloning A Laboratory Manual, 3rd Ed., ed. by Sambrook,‏ ‎.(Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001‏ في بعض الحالات؛ قد يكون من المرغوب فيه التعبير وراثياً عن بولي ببتيدات ناتجة عن عودة الارتباط الجيني بواسطة استخدام نظام تعبير ‎(hy‏ عن الفيروسة العصوية. تشتل أمثلة أنظمة التعبير ‎hol‏ عن الفيروسة العصوية المذكورة على نواقل مشتقة من ‎pVL‏ (مثل ‎PVLI392‏ ‎pVL1393‏ 5 01/1941)»؛ نواقل مشتقة من ‎pACUW‏ (مثل |//الا086)؛ ونواقل مشتقة من ‎pBlueBac‏ (مثل ‎beta. —gal.‏ تحتوي على ‎.(pBlueBac ١١١‏ في أحد النماذج؛ يمكن تصميم الناقل لإنتاج بولي ببتيدات 80104118 المستخدم في الطرق 0 والتركيبات الموصوفة هنا في خلايا ‎«(CHO‏ مثل ناقل 0007-5010 ‎La (Stratagene)‏ ‎(.Calif «Carlsbad «Invitrogen) pcDNA4 Jd: «(Calif «Jolla‏ ونواقل ‎pCl-neo‏ ‎(Madison (Promega)‏ 15//ا.). على النحو الذي سيتم توضيحه يمكن استخدام أجزاء جين منشأة لخاضع للتسبب في التعبير الوراثي عن الخاضع بولي ببتيدات 8004118 في خلايا منتشرة في مزرعة؛ على سبيل المثال؛ لإنتاج بروتينات؛ ‎Lay‏ في ذلك بروتينات اندماج أو بروتينات متغيرة؛ 5 لتنقية. يمكن استخدام خلايا عائلة تم نقل العدوى إليها بواسطة جين ناتج عن عودة الارتباط الجيني بما في ذلك متوالية تشفير ‎le)‏ سبيل ‎(Jal)‏ متوالية رقم: ‎١9‏ أو متواليات الحمض النووي المذكورة التي تشفر بولي ببتيدات 8004118 قابلة للذويان(على سبيل ‎(JU‏ أحماض نووية التي تشفر متواليات رقم: ‎OA OY‏ كك تك ‎YY‏ تك نك ‎oF)‏ اك كك حك لاك لك و؟)) 0 لواحدة أو أكثر من بولي ببتيدات الاختراع ‎ActRIIB‏ لإنتاج ‎80117١8‏ ‏بولي ببتيدات مناسبة للاستخدام في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. يمكن أن تكون الخلية العائلة ‎Ble‏ عن أي خلية بدائية النواة أو حقيقية النواة. على سبيل المثال؛ يمكن التعبير الوراثي عن بولي ‎ACRIIB any‏ في خلايا بكتيرية ‎Jie‏ إشرشيا كولاي؛ خلايا حشرات (على سبيل المثال؛ باستخدام نظام تعبير وراثي عن الفيروسة العصوية)؛ خميرة؛ أو خلايا كائن ثديي. تكون خلايا ‎dle‏ أخرى 5 مناسبة معروفة لأصحاب المهارة في المجال.
Ao وفقاً لذلك؛ يتم هنا توفير طرق لإنتاج بولي ببتيدات 804118 المستخدم في الطرق والتركيبات الموصوفة هنا. على سبيل المثال» يمكن زراعة خلية عائلة تم نقل العدوى إليها بواسطة ناقل تعبير وراثي يُشفر بولي ببتيد 801418 في ظل ظروف مناسبة للسماح بحدوث التعبير الوراثي عن بولي ببتيد 800518. يمكن إفراز بولي ببتيد 801518 وعزله من خليط من الخلايا ووسط يحتوي على بولي ببتيد 801518. على نحو بديل؛ بولي ببتيد 8ال8017 يمكن احتجاز سيتوبلازمياً أو في جزء غشائي ويتم تجميع وتحلل الخلايا ويتم عزل البروتين. تشتمل مزرعة خلية على خلايا عائلة؛ أوساط ومنتجات ثانوية أخرى. تكون الأوساط المناسبة لمزرعة الخلية معروفة جيداً في المجال. يمكن ‎Jie‏ الخاضع بولي ببتيدات 8015118 من وسط ‎del)‏ الخلية؛ الخلايا العائلة؛ أو كلاهماء باستخدام تقنيات معروفة في المجال لتنقية البروتينات؛ بما في ذلك عمود الكروموتوجراف بالتبادل 0 الأيوني»؛ كروماتجراف ترشيح ‎(dad)‏ الترشيح ‎(Gal‏ الاستشراد الكهربائي؛ تنقية الألفة المناعية باستخدام الأجسام المضادة النوعية لقمم لاصقة محددة لبولي ببتيدات 804118 وتنقية الألفة باستخدام عامل يرتبط بنطاق مدمج ببولي ببتيد 8ال804 (على سبيل المثال؛ يمكن استخدام عمود بروتين ‎A‏ لتنقية إندماج ‎(FC-ACHRIIB‏ 3 نموذج مفضل؛ بولي ببتيد ‎ACtRIIB‏ عبارة عن بروتين اندماج يحتوي على نطاق يُسهل تنقيته. في نموذج مفضل؛ يتم تحقيق التنقية بواسطة 5 سلسلة من خطوات كروماتوجراف العمود؛ بما في ذلك؛ على سبيل المثال؛ ثلاثة أو أكثر مما يلي؛ بأي ترتيب: كروماتوجراف بروتين ه» كروماتوجراف سيفاروز ©؛ كروماتوجراف فينيل سيفاروز؛ كروماتوجراف الاستبعاد على أساس الحجم؛ وكروماتوجراف تبادل الكاتيون. يمكن إكمال التنقية باستخدام الترشيح الفيروسي وتبادل المحلول المنظم. على النحو الموضح في هذه الوثيقة؛ تمت تنقية بروتين ‎—hFe‏ 8014118 إلى نسبة نقاء > 969/8 على النحو المحدد بواسطة كروماتوجراف 0 الاستبعاد على أساس الحجم و>9645 على النحو المحدد بواسطة ‎PAGE‏ 505. لم يكن مستوى النقاء ‎GIS‏ لتحقيق تأثيرات مرغوب فيها على العظام في الفئران وسمة أمان مقبولة في الفئران؛ الجرذان والرئيسيات من غير البشر. في نموذج ‎OAT‏ يمكن أن يسمح تشفير جين اندماج لتنقية متوالية رائدة؛ مثل متوالية موضع انشطار بولي-(1115)/كيناز معوي عند الطرف لا ‎had‏ مطلوب من بولي ببتيد ناتج عن عودة 5 الارتباط الجيني ‎ACtRIIB‏ بتنقية بروتين اندماج معبر عنه وراثياً بواسطة كروماتوجراف الألفة
Tye
_ أ ‎A‏ _ باستخدام راتنج +1012 معدني. يمكن بعد ذلك غزالة متوالية التنقية الرائدة بواسطة العلاج باستخدام كيناز معوي لتوفيريولي ببتيد ال4ا801 النقي8 (على سبيل المثال» راجع ‎Hochuli et al,‏ ‎J. Chromatography 411 : 177; and Janknecht et al, PNAS USA‏ )1987( 88:8972(. تكون تقنيات تحضير جينات ‎١‏ لاندماج معروفة جيداً ‎I< ٠.‏ أساسي ؛ يتم ربط تشفير ‎DNA Lad‏ المختلفة لمتواليات البولى ببتيد المختلفة وفقاً لتقنيات تقليدية؛ باستخدام نهايات ممسوحة أو متعرجة للإلحاق؛ تقييد اهتضام الإنزيم لتوفير نهايات مناسبة؛ ملء أطراف التصاق بشكل مناسب؛ المعالجة بفوسفاتاز قلوي لتجنب الربط غير المرغوب ‎cad‏ والإلحاق الإنزيمي. في نموذج ‎OAT‏ ‏يمكن تخليق جين الاندماج بواسطة تقنيات تقليدية تشتمل على وحدات تخليق ‎DNA‏ آلية. على 0 نحو بديل؛ يمكن أن يتم تضخيم ‎PCR‏ لشظايا الجين باستخدام بادئات تثبيت التي تزيد من أجزاء متدلية متممة بين اثنين من شظايا الجين المتتالية والتي يمكن تطويعها تعاقبياً لتوليد متوالية جين خيمرية (راجع؛ على سبيل المثال» ‎Current Protocols in Molecular Biology, eds.‏ ‎.(Ausubel et al, John Wiley & Sons: 1992‏ يمكن التعبير الوراثي عن 8014[18-بروتين اندماج ‎Fc‏ في خلايا 1 ‎CHO-DUKX BI‏ تم نقل 5 العدوى إليها بشكل ثابت من ناقل 0/104 ‎ori)‏ 51/40/محسن» معزز ‎(CMV‏ باستخدام متوالية رائدة مُوَلَدةِ للبلازمين ‎sand‏ لمتوالية رقم: 8. يمكن أن يشتمل جزءِ ‎FC‏ على متوالية ‎Fe‏ ل ‎IgGl‏ ‏بشري » كما هو موضح في متوالية رقم ‎Yo‏ في نماذج ‎Bla a‏ فور التعبير الوراثي 3 كان البروتين يحتوي على؛ بالمتوسط؛ ما يتراوح بين حوالي 50,0 ‎V,0‏ مول من حمض سياليك لكل بروتين اندماج ‎ActRIIB-Fc‏ 0 في نماذج محددة؛ يمكن أن يبلغ العمر النصفي الطويل لمصل اندماج ‎YY-YoFc -ActRIIB‏ يوم في المرضى من البشر. بالإضافة إلى ذلك؛ يكون لمادة تعبر وراثياً عن خلية ‎CHO‏ ألفة تجاه مركب أكتيفين 8 ترابطي أعلى من تلك المسجلة ل801[18 -٠ابروتين‏ اندماج ‎Fe‏ المعبر ‎aie‏ ‏وراثياً في ‎Yay‏ خلية بشرية ( ‎del Re et al, J Biol Chem. 2004 Dec‏ ‎L(17;279(51):53126-35‏ بالإضافة إلى ذلك؛ بدون التقيد بنظرية محددة؛ نتج عن استخدام 5 متوالية ‎TPA‏ رائدة إنتاج أكبر من المتواليات الرائدة الأخرى و؛ بخلاف ‎Fe-ActRIIB‏ التي يتم
Tye
طلم التعبير عنها وراثياً بواسطة متوالية رائدة أصلية؛ يمكن أن توفر متوالية عالية النقاء عند الطرف لا. يمكن أن ينتج عن استخدام المتوالية الرائدة الأصلية نوعية رئيسيين من ‎ACtRIIB‏ -06؛ يكون لكل منها متوالية مختلفة عند الطرف ‎N‏ ‎3-0-٠‏ مثبطات مستقبل |8017 الأخرى في نماذج محددة؛ تكون مثبطات مستقبلات ال80104 المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا عبارة عن مركبات حمض نووي. تتضمن أمثلة فئات مركبات الحمض النووي التي تثبط مستقبلات ال08015 أحماض نووية مضادة للحس» ‎SIRNA‏ أو أجزاء منشأة نل و أجزاء منشأة لحمض نووي حفزي. يمكن أن يكون مركب الحمض النووي أحادي أو ثنائي الجديلة. يمكن أيضاً أن يتضمن المركب ثنائي الجديلة 0 مناطق تدلي أو غير ‎(Dies‏ حيث تكون واحدة أو جدائل أخرى أحادية الجديلة. يمكن أن يتضمن المركب أحادي الجديلة مناطق ذاتية مكملة؛ مما يعني أن المركب يمكن أن يُشكل ما يُعرف ببنية ‎"duds‏ دبوس الشعر” أو " حلقية الجذع؛ مع منطقة ذات بنية بيضاوية مزدوجة. في نماذج محددة؛ يمكن أن تشتمل مركبات الحمض النووي التي تثبط مستقبلات ‎8004[١‏ على متوالية نوكليوتيد التي تكون مكملة لمنطقة تتكون مما لا يزيد عن ‎٠٠٠١‏ ما لا يزيد عن 00 ؛ 5 ما لا يزيد عن ‎5٠0‏ ما لا يزيد عن ‎٠٠١‏ أو ما لا يزيد عن ‎٠١ 77 Yo 0 Yoon‏ أو ‎YA‏ نوكليوتيدات لمستقبلات تامة الطول ا(8014 لمتوالية الحمض النووي أو أكتيفين متوالية الحمض النووي ‎(Ae)‏ سبيل المثال» متوالية الحمض النووي للوحدة الفرعية أكتيفين ‎A‏ أو أكتيفين 8» يتم الإشارة إليها أيضاً بتعبير ‎BA‏ أو 88). في نماذج محددة؛ تكون المنطقة التكميلية عبارة عن ‎A‏ نوكليوتيدات على الأقل» ‎og‏ نحو اختياري10 أو ‎te‏ نوكليوتيد على الأقل؛ وعلى نحو 0 اختياري بين ‎Yo g Ve‏ نوكليوتيدات. يمكن أن تقع المنطقة التكميلية في إنترون» متوالية تشفير أو متوالية عدم تشفير للنسخة المستهدفة؛ مثل ‎ohn‏ متوالية التشفير. بوجهٍ عام؛ يكون لمركب الحمض النووي الذي يعمل على تثبيط مستقبل ‎ARI‏ طول يبلغ حوالي / إلى حوالي ‎5٠٠0‏ نوكليوتيدات أو زوج قاعدة من حيث الطول؛ وعلى نحو اختياري سيبلغ الطول حوالي ‎(MVE‏ حوالي ‎ov‏ ‏نوكليوتيدات. يمكن أن يكون مركب الحمض النووي الذي يثبط مستقبل 0111م عبارة عن ‎DNA‏ ‎Tye‏
حمم- ( على وجه التحديد للاستخدام كمضاد لاتجاه النسخ)؛ ‎(RNA‏ أو هجين ‎\RNA:DNA‏ يمكن أن تتضمن أي جديلة خليط من ‎(RNA 5 DNA‏ بالإضافة إلى الصور المعدلة التي لا يمكن تصنيفها بالفعل كأي من ‎DNA‏ أو ‎(RNA‏ على نحو مماثل؛ يمكن أن يكون أي مركب حمض نووي ثنائي الجديلة عبارة عن ‎(DNA:RNA (DNA:DNA‏ أو ‎(RA:RNA‏ ويمكن ‎Lad‏ أن تتضمن أي جديلة خليط من ‎(RNAS DNA‏ بالإضافة إلى الصور المعدلة التي لا يمكن تصنيفها بالفعل كأي من حلااط أى ‎.RNA‏ ‏يمكن أن تتضمن مركبات الحمض النووي التي تثبط مستقبل ال0014 أي من مجموعة متنوعة من التعديلات؛ وتتضمن واحدة أو التعديلات السلسلة الرئيسية ( جزءِ سكر- فوسفورات في الحمض النووي الطبيعي؛ بما في ذلك روابط نيوكليوتيد الحمض النووي البينية) أو جزءٍ القاعدة ( البيورين 0 أو ‎gia‏ البيريميدين للحمض النووي الطبيعي). في نماذج محددة؛ سوف يكون لمركب الحمض النووي المضاد لاتجاه النسخ طول يبلغ حوالي ‎١5‏ إلى حوالي ‎٠‏ ؟ نوكليوتيدات و سوف يتضمن ‎Bale‏ تعديل واحد أو أكثر لتحسين خصائص محددة؛ ‎Jie‏ الثبات في المصل؛ الثبات في خلية؛ أو الثبات في المكان المحتمل توصيل المركب فيه؛ مثل؛ على سبيل المثال؛ المعدة في حالة مركبات يتم توصيلها عبر الفم و الرئة بالنسبة للمركب التي يمكن استنشاقها. في حالة ‎Lana) shall‏ 5 نظهلة؛ تكون ‎dag‏ عام الجديلة المكملة للنسخة المستهدفة عبارة عن ‎RNA‏ أو تعديلاتها. يمكن أن تكون الجديلة الأخرى عبارة عن ‎DNA (RNA‏ أو أي صورة متغيرة أخرى. يمكن أن يكون ‎gall‏ المزدوج للجديلة المزدوجة أو الجديلة المفردةجزء منشاً ‎RNAI‏ على شكل 'دبوس الشعرء في نماذج محددة؛ طول يبلغ ‎١8‏ إلى 80 نوكليوتيدات من حيث الطول ‎eg‏ نحو اختياري حوالي ‎VY‏ ‏إلى ‎YY‏ نوكليوتيدات من حيث الطول؛ طوال الفترة التي تعمل فيها كركيزة ‎Dicer‏ ‏0 يمكن أن تكون الأحماض النووية الحفزية أو الإنزيمية عبارة عن إنزيمات رببوزية أو إنزيمات ‎DNA‏ ويمكن أن تتضمن صور معدلة. في نماذج محددة؛ يمكن أن تثبط مركبات الحمض النووي التي تشبط مستقبلات ‎ARID‏ التعبير الوراثي عن الهدف الخاص بها بحوالي 296586 ‎ols‏ ‎HA 96/5 HAL 967/5 (HY.‏ 9695 0699؛ أو أكثر في الظروف الفسيولوجية و عند تركيز حيث يكون لعينة المقارنة الحساسة أو غير الحساسة القليل أو تأثير منعدم. تتضمن تركيزات 5 الاختبار تأثير مركبات حمض نووي ١ء‏ ©؛ ‎٠١‏ ميكرو مولارء أو أكثر. ‎Tye‏
-وم- في نماذج أخرى؛ تكون مثبطات مستقبلات ‎AGRI‏ المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا عبارة عن الأجسام المضادة. تتضمن الأجسام المضادة المذكورة الأجسام المضادة المرتبطة بأكتيفين ( على وجه التحديد الوحدات الفرعية أكتيفين 8 أو 8, يتم الإشازة إليها بتعبير 88 أو ‎(BB‏ و تمزق ارتباط مستقبل ‎ACtRIN‏ ؛ والأجسام المضادة المرتبطة بمستقبل بولي ببتيدات ‎ActRIL 5‏ (على سبيل المثال» 80018 قابل للذويان أو بولي ببتيد ‎ACtRIIB‏ قابل للذوبان) و تمزق ارتباط الأكتيفين. باستخدام مولدات المناعة المشتقة من مستقبل ال8015 بولي ببتيد أو أكتيفين بولي ببتيد؛ يمكن تحضير مضاد بروتين/ مضاد ببتيد مضاد للأمصال أو الأجسام المضادة أحادية النسيلة بواسطة البروتوكولات القياسية ‎canal)‏ على سبيل ‎Antibodies: A Laboratory Manual ed. «Jal‏ ‎(by Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press: 1988) 0‏ يمكن تحصين كائن 203( مثل فأرء هامستر أو أرنب باستخدام صورة مولدة للمناعة لمستقبل ‎ACHRII‏ بولي ببتيد؛ شظية مولدة للضد والتي تكون قادرة على توضيح استجابة الجسم المضاد؛ أو بروتين اندماج. تتضمن تقنيات منح تولد المناعة على بروتين أو ببتيد الترافق مع المواد الحاملة أو التقنيات الأخرى المعروفة جيداً في المجال. يمكن إعطاء جزء مولد للمناعة لمستقبل ال800 أو أكتيفين ‎J 5‏ ببتيد في وجود ‎Bale‏ مساعدة. يمكن مراقبة تطور التحصين بواسطة الكشف عن أعيرة الجسم المضاد في البلازما أو المصل. يمكن استخدام ‎ELISA‏ القياسية أو الاختبارات المناعية الأخرى مع مولد الضد كمولد ضد لتقييم مستويات الأجسام المضادة. بعد تحصين الحيوان بمستحضر مولد للضد لمستقبل |8014 بولي ببتيد؛ يمكن الحصول على مضاد أمصال وء إذا كان ذلك مطلوباً؛ يمكن ‎Jie‏ الأجسام المضادة متعددة النسيلة عن المصل. 0 ا لإنتاج الأجسام المضادة أحادية النسيلة؛ يمكن تجميع الجسم المضاد- المنتج للخلايا (الخلايا اللمفاوية) من الحيوان المحصن و المدمج بواسطة إجراءات دمج خلية سباتية قياسية باستخدام الخلايا الخالدة مثل خلايا الورم التخاعي للحصول على خلايا ورم هجين . تكون تلك التقنيات معروفة ‎Tas‏ في المجال؛ وتتضمن؛ على سبيل المثال؛ تقنية الورم الهجين ( المطورة في الأصل بواسطة 495-497 :256 ‎«(Kohler and Milstein, (1975) Nature,‏ تقنية الورم الهجين لخلية 8 البشرية )72 :4 ‎o(Kozbar et al., (1983) Immunology Today,‏ و تقنية الورم
Po
Cole et al, (1985) ) ‏الهجين -/581 لإنتاج الأجسام المضادة أحادية النسيلة البشرية‎
Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. pp. 77- ‏ورم هجين من حيث الكيمياء المناعية لإنتاج الأجسام المضادة المتفاعلة‎ WIA ‏يمكن فحص‎ (96 ‏على وجه التحديد مع مستقبل ال801 بولي ببتيد والأجسام المضادة أحادية النسيلة المعزول عن‎ ‏ورم هجين المذكورة.‎ WIA ‏مزرعة تشتمل على‎ 5 ‏يتضمن التعبير ' جسم مضاد" كما هو مستخدم هنا شظايا منها والتي تكون متفاعلة أيضاً على‎ ‏وجه التحديد مع بولي ببتيد مذكور. يمكن تمزيق الأجسام المضادة باستخدام تقنيات تقليدية وأ‎ . ‏الشظايا التي تم فحصها للاستخدام بنفس الطريقة كما تم الوصف سابقاً للأجسام المضادة الكلية‎ ‏بواسطة معالجة الجسم المضاد باستخدام ببسين.‎ F(ab)2 ‏يمكن توليد شظايا‎ (JU ‏على سبيل‎ ‏الناتجة لتقليل جسور الكبريتيد الثنائية لإنتاج شظايا80 . يتضمن‎ Fab)2 ‏يمكن معالجة شظية‎ 0 ‏الجسم المضاد أيضاً جزبئات بشرية تامة ومتوالية مع البشر خيمرية أحادية السلسلة ثنائية النوعية‎ ‏واحدة على الأقل‎ CDR ‏أو أكتيفين بولي ببتيد ممنوحة بواسطة منطقة‎ AGRI ‏لها ألفة لمستقبل‎ ‏للجسم المضاد. يمكن أن يشتمل الجسم المضاد أيضاً على مرقم مرتبط به ويمكن الكشف عنها‎ ‏مركب فلوري ؛ إنزيم أو إنزيم‎ catia ‏(على سبيل المثال» يمكن أن يكون المرقم عبارة عن نظير‎ ‏مشترك مع عامل).‎ 5 ‏عن جسم مضاد معاود للارتباط الجيني؛ ويتضمن‎ Ble ‏في نماذج محددة؛ يكون الجسم المضاد‎ ~CDR ‏في ذلك‎ Lay ‏ذلك التعبير أي جسم مضاد تم توليده جزئياً بواسطة تقنية حيوية جزئية؛‎ ‏مطعمة أو الأجسام المضادة الخيمرية؛ الأجسام المضادة البشرية أو الأجسام المضادة الأخرى‎ ‏المجمعة من المجموعة-التي تم اختيارها من نطاقات جسم مضاد؛ أجسام مضادة أحادية السلسلة‎
VRH ‏بشرية أو بروتينات‎ VH ‏و الأجسام المضادة أحادية النطاق (على سبيل المثال؛ بروتينات‎ 0 ‏الجملية). في نماذج محددة؛ يكون الجسم المضاد عبارة عن جسم مضاد أحادي النسيلة؛ وفي‎ ‏نماذج محددة. على سبيل المثال؛ يمكن أن تشتمل طريقة توليد جسم مضاد أحادي النسيلة التي‎ ‏بولي ببتيد أو أكتيفين بولي ببتيد على إعطاء إلى فأر‎ 801١ ‏ترتبط على وجه التحديد بمستقبل‎ ‏كمية من تركيبة مولدة للمناعة تشتمل على بولي ببتيد مولد للضد فعال في تحفيز استجابة مناعية‎ ‏خلايا يتم‎ (JU ‏الكشف عنهاء الحصول على الجسم المضاد- المنتج للخلايا (على سبيل‎ (Sar 5
Tye qn ‏الحصول عليها من الطحال) من الفأر و دمج الجسم المضاد- المنتج للخلايا مع خلايا الورم‎ ‏النخاعي للحصول على أورام هجينة تنتج جسم مضادء واختبار الأورام الهجينة التي تنتج جسم‎ ‏مضاد لتحديد ورم هجين ينتج جسم مضاد أحادي النسيلة والذي يرتبط على وجه التحديد بمولد‎ ‏الضد. بمجرد الحصول عليه؛ يمكن نشر الورم الهجين في مزرعة الخلية؛ بشكل اختياري في‎ ‏ظروف مزرعة حيث تعمل الخلايا المشتقة من الورم الهجين على إنتاج جسم مضاد أحادي النسيلة‎ 5 ‏التحديد بمولد الضد. يمكن تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من خلية‎ dag ‏والذي يرتبط على‎ ‏المزرعة.‎ ‏عام تعني الصفة " متفاعلة على وجه التحديد مع" كما هو مستخدم بالإشارة إلى الجسم‎ dag ‏عام في المجال؛ أن الجسم المضاد يكون انتقائي بصورة كافية بين مولد‎ dag ‏المضاد؛ كما يتضح‎ ‏مستقبل ال801 بولي ببتيد) و مولدات الضد الأخرى‎ (JU) ‏الضد موضع الاهتمام (على سبيل‎ 0 ‏التي لا يدور حولها الاختراع والتي تكون عبارة عن جسم مضاد نافع؛ بحد أدنى؛ الكشف عن وجود‎ ‏مولد الضد موضع الاهتمام في نوع محدد للعينة البيولوجية. في طرق محددة تستخدم الجسم‎ ‏المضاد؛ مثل الاستخدامات العلاجية؛ يمكن أن تكون الدرجة المرتفعة من نوعية الارتباط مطلوية.‎ ‏عام يكون للأجسام المضادة أحادية النسيلة ميل كبير ( مقارنةٌ بالأجسام المضادة متعددة‎ dag ‏النسيلة) لتمييز الفاعلية بين مولدات الضد المطلوبة وبولي ببتيدات متبادلة التفاعلية. تتمثل أحد‎ 5 ‏السمات التي تؤثر على نوعية تفاعل الجسم المضاد: مولد الضد في ألفة الجسم المضاد لمولد‎ ‏الوصول إلى النوعية المطلوية بنطاق من معدلات الألفة المختلف؛ يكون‎ Load ‏الضد. يمكن‎ ح٠١‎ AS ‏تكلا‎ ١ ‏أحت‎ ١ gs ‏ألفة ( ثابت فصل) يبلغ‎ dele ‏للأجسام المضادة المفضلة‎ ‏أو أقل. على أساس الارتباط المحكم في الطبيعي بين أكتيفين ومستقبل ا(801؛ من المتوقع أن‎ ‏أو‎ ٠١-٠١ 01 ‏متعادل و جسم مضاد لمستقبل ال801 ثابت فصل يبلغ‎ A ‏يكون لمضاد أكتفين‎ 0 ‏أقل.‎ ‏بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن أن تؤثر التقنيات المستخدمة لفحص الأجسام المضادة لتحديد جسم‎ ‏مضاد مطلوب على خواص الجسم المضاد التي تم الحصول عليها. على سبيل المثال؛ إذا كان‎ ‏الجسم المضاد مستخدم لربط مولد ضد في محلول؛ فيكون من المطلوب اختبار ارتباط المحلول.‎ ‏تكون مجموعة متنوعة من التقنيات المختلفة متاحة لاختبار التفاعل بين الأجسام المضادة و‎ 5
Tye
—qy— ‏مولدات الضد لتحديد الأجسام المضادة المطلوية على وجه التحديد . تتضمن تلك التقنيات‎ ‏سبيل المثال؛ /81806008.11. ختبار ريط‎ (Ae) ‏اختبار ريط رنين بلازمون السطح‎ (ELISAs the JU ‏8:80016)؛ اختبارات تداخلية (على سبيل‎ AB, Uppsala, Sweden paramagnetic bead system of IGEN International, Inc., Gaithersburg, ‏بقع ويسترن؛ اختبارات الترسيب المناعيء والكيمياء الهيستولوجية المناعية.‎ (Md. 5
في نماذج محددة؛ يتضمن مستقبل مثبطات ا(8004 للاستخدام في التركيبات والطرق الموصوفة هنا صور بديلة لأكتيفين؛ على ‎dag‏ التحديد يمكن أن ترتبط تلك التي يكون بها تعديلات في نطاق ربط مستقبل من نوع | بمستقبلات من النوع ؟ ولا تُشكل معقد ثلاثي نشط. في نماذج محددة؛
يمكن استخدام أحماض نووية؛ ‎Jie‏ جيئات مضادة لاتجاه النسخ» ‎SIR AS‏ أو إنزيمات ريبوزية
0 التي تثبط أكتيفين ‎eA‏ 8؛ © أو ‎off (BE‏ على ‎ang‏ التحديد؛ التعبير الوراثي عن مستقبل ‎ACtRIN‏ ‏في التركيبات والطرق الموصوفة هنا. في نماذج محددة؛ يمكن أن يظهر مستقبل المثبطات ‎ACHR‏ المستخدم في التركيبات والطرق الموصوفة هنا انتقائية لتثبيط انتقال الإشارة المساهم فيه بواسطة 60711 مقابل أعضاء عائلة ‎li TGF‏ على وجه التحديد بالنسبة ل ‎GDF8‏ ‏وأكتيفين .
في نماذج ‎(gal‏ تكون مثبطات مستقبلات ‎ACtRIN‏ المستخدمة في التركيبات والطرق الموصوفة هنا ‎le‏ عن بروتينات غير الجسم المضاد لها مستقبل نشاط مضاد 8011 ؛ وتتضمن إنهيبين (أي» وحدة فرعية ألفا أنهيبين ‎«(inhibin alpha subunit‏ فوليستاتين ‎follistatin‏ (على سبيل المثال؛ فوليستاتين ‎follistatin‏ -8//؟ و فوليستاتين-9١‏ ١)؛‏ سيرييرس ‎«Cerberus‏ بروتين مرتبط بفوليستاتين ‎«('FSRP") follistatin related protein‏ إندوجلين ‎endoglin‏ ؛ أكتيفين
‎—(Y) Wi «C20‏ ماكروجلوبيولين ‎Ag « macroglobulin‏ 08 141 ( تغير ميثونين إلى ألانين عند الموضع ‎)٠١١8‏ طافرة أكتيفين ‎A‏ ‏في نموذج محدد؛ يكون مستقبل مثبط ال8014 المستخدم في التركيبات والطرق الموصوفة هنا ‎Ble‏ عن فوليستاتين بولي ببتيد الذي يناهض النشاط البيولوجي لأكتيفين و/أو الارتباط بأكتيفين. يتضمن التعبير " فوليستاتين بولي ‎"ain‏ بولي ببتيدات تشتمل على أي بولي ببتيد ناتج طبيعياً من
م
فوليستاتين بالإضافة إلى أي صور متنوعة منه ‎La)‏ في ذلك طفرات ‎mutants‏ « شظايا
) peptidomimetic forms ‏وصور محاكية للببتيد‎ fusions ‏؛ اندماجات‎ fragments
التي تحتجز نشاط مفيد؛ و تتضمن أيضاً أي مونومر وظيفي أو وحدات متعددة من فوليستاتين
‎follistatin‏ يمكن تحديد الصور المتنوعة من فوليستاتين بولي ببتيدات التي تحتفظ بخواص ارتباط الأكتيفين على أساس الدراسات السابقة التي تتضمن تفاعلات فوليستاتين وأكتيفين. على
‏سبيل المثال؛ يكشف الطلب الدولي رقم 077197//70078 07 الذي تم استخدامه كمرجع في مجمله
‏في هذه الوثيقة؛ عن نطاقات فوليستاتين النوعية ‎("FSDS')‏ والتي تتضح أهميتها في ارتباط
‏الأكتيفين. يتضمن فوليستاتين بولي ببتيدات بولي ببتيدات مشتقة من متوالية من أي من فوليستاتين
‏معروف يتضمن متوالية مطابقة بنسبة حوالي 96850 على الأقل لمتوالية فوليستاتين بولي ببتيد
‎ley follistatin polypeptide 10‏ نحو اختياري8596 على ‎(JIN)‏ 9640 9615 9617 ‎HAY‏ 9698 9699 أو تطابق أكبر. تتضمن أمثلة فوليستاتين بولي ببتيدات فوليستاتين بولي ببتيد الناضج أو الصور المتماثلة القصيرة أو الصور المتنوعة الأخرى من فوليستاتين بولي ببتيد منتج بشري كما تم الوصف»؛ على سبيل المثال في الطلب الدولي رقم ‎You [Yee‏ الذي تم استخدامه كمرجع في مجمله في هذه الوثيقة.
‏5 في نموذج محدد؛ يكون مستقبل مثبط 80141 المستخدم في التركيبات والطرق الموصوفة هنا عبارة عن جين مرتبط شبيه فوليستاتين ‎(FLRG)‏ الذي يناهض النشاط البيولوجي لأكتيفين و/أو يرتبط بأكتيفين. يتضمن التعبير "7146 بولي ‎Js "ain‏ ببتيدات تشتمل على أي بولي ببتيد ناتج طبيعياً من ‎FLRG‏ بالإضافة إلى أي صور متنوعة منه ‎Ly)‏ في ذلك طفرات؛ شظايا؛ اندماجات وصور محاكية للببتيد) التي تحتجز نشاط مفيد. يمكن تحديد الصور المتنوعة من ‎FLRG‏ بولي
‏0 ببتيدات التي تحفظ خواص ارتباط الأكتيفين باستخدام طرق روتينية لاختبار تفاعلات ‎FLRG‏ ‏وأكتيفين . ‎cand)‏ على سبيل المثال» البراءة الأمريكية رقم977,271,76؛ التي تم استخدامها كمرجع في مجمله في هذه الوثيقة. تتضمن ‎FLRG‏ بولي ببتيدات بولي ببتيدات مشتقة من متوالية من أي من ‎FLRG‏ معروف يتضمن متوالية مطابقة بنسبة حوالي ‎968٠0‏ على الأقل لمتوالية ‎FLRG‏ بولي ببتيد؛ ‎leg‏ نحو اختياري 9685 على الأقلى ‎Pd‏ د61ق تحفق لاحاى ‎AA‏ 9614 أو
‏5 تطابق أكبر.
‎Tye
‎q ¢ —_‏ _ في نماذج محددة؛ تتضمن الصور المتنوعة الوظيفية أو الصور المعدلة لفوليستاتين بولي ببتيدات ‎FLRG‏ بولي ببتيدات بروتينات اندماج بها ‎ohn‏ على الأقل من فوليستاتين بولي ببتيداتأو ‎FLRG‏ بولي ببتيدات وواحد أو أكثر من نطاقات الاندماج؛ مثل؛ على سبيل ‎(JU‏ نطاقات تسهل ‎(Jie‏ الكشف»؛ تثبيت أو تكوين وحدات متعددة لبولي ببتيد. يتم توضيح نطاقات الاندماج المناسبة بمزبد من التفصيل بالرجوع إلى ‎A‏ ال801 ويولي ببتيدات ‎ACtRIIB‏ في أحد النماذج؛
‏يكون مثبط مستقبل ال8004 عبارة عن بروتين اندماج يشتمل على جزء ارتباط الأكتيفين فوليستاتون بولي ببتيد مدمج بنطاق ‎FC‏ في نموذج آخرء يكون مثبط مستقبل ال8014 عبارة عن بروتين اندماج يشتمل على جزءٍ ارتباط الأكتيفين ‎FLRG‏ بولي ببتيد مدمج بنطاق ‎Fe‏ ‏1-5 اختبارات
‏0 يمكن اختبار مجموعة من صور متغيرة من بولي ببتيد ‎ACRIN‏ أو صورة متغيرة من بولي ببتيد ‎ActRII‏ قابل للذويان؛ لمعرفة قدرتها على تثبيط ‎ActRII‏ بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن اختبار المركبات لمعرفة قدرتها على تثبيط |!8014ل. بمجرد التأكيد على نشاط مثبطات ‎ACtRIN‏ يمكن استخدام هذه الطرق باستخدام الطرق الواردة هنا. يمكن أن يكون ال8017 عبارة عن 801118 أو االكاه8. يتم وصف الاختبارات التالية ‎ActRIla‏ ولكن يمكن إجراؤها بصورة مماثلة ل
‎ActRIIb 5‏ ‎١-6-5‏ مستويات ‎WA‏ الدم الحمراء يكون عدد ‎RBC‏ عبارة عن عدد الرقم الفطي لخلايا الدم الحمراء لكل حجم من الدم ويمكن تضمينها كجزء من عدد الدم التام القياسي. بصورة طبيعية؛ يكون للذكور عدد ‎RBC‏ يتراوح بين 2 إلى ‎١١‏ مليون خلية لكل ميكرولتر و يكون للإناث عدد ‎RBC‏ يتراوح بين 5,7 إلى 5,4
‏0 مليون خلية لكل ميكرولتر. مع ذلك» يكون لمرضى ‎Landi)‏ عدد ‎RBC‏ أقل من الملحوظ بصورة طبيعية. بالتالي» يسمح تحديد عدد ‎RBC‏ في مرضى فقر الدم (على سبيل ‎(JU‏ ثَلاَسِيمِيَّة) الذين تتم معالجتهم وفقاً للطرق الواردة هنا بتحديد فاعلية هذه المعالجة.
‎Tye
-ه40- ‎Y-1-0‏ وحدات تشكيل مستعمرة الخلايا الحمراء ‎(CFU-E)‏ ‎CFU-E‏ يمكن اختباره وتحديده؛ على سبيل ‎(JE)‏ في اختبار تكون المستعمرات بواسطة العدد و شكل الخلايا وبواسطة وجود وغياب مرقمات سطح خلية محددة. يمكن قياس مستويات وحدات تشكيل مستعمرة الخلايا الحمراء؛ على سبيل المثال؛ تبقيع الجسم المضاد متبوع بتحليل تعداد الخلايا المتدفقة ‎(FACS)‏ لتقييم التعبير ‎sll‏ عن المرقمات؛ ‎Jie‏ مرقمات ‎lal) Ala‏ على سبيل المثال» تكون خلايا مستقبل ‎Kit=C « EPO‏ ( مستقبل عامل خلية جذعية)؛ مستقبل النقل ‎CD36 »)+00071(‏ و19 ‎Terl‏ ( جليكوفورين-8/ مرتبط بمولد الضد) ( -لا ]0 عبارة عن ‎Terl 19‏ ( جليكوفورين-8/ مرتبط بمولد الضد)- سالب (راجع؛ على سبيل المثال؛ ‎al, 2005‏ ]© لا4ا16:5201//5). تعبر الخلايا عند مرحلة ‎CFU-E‏ عن مستقبل إريثرويويتين ‎(EPOR) 0‏ و ويمكن حثها للتمايز النهائي في المعمل في 7-؟ أيام في وجود إريثروبويتين فقط في أوساط الزراعة. يمكن وضع ‎CFU-E WDA‏ على ميثيل سيلولوز و تبقيعها باستخدام مادة كاشفة داي أمينو بنزيدين لهيموجلوبين» وثم يمكن عد مستعمرات ع-لا05. في اليوم ‎١‏ من زمن الوضع في طبق؛ يمكن أن تؤدي كل مستعمرة ‎CFU-E‏ إلى توفير ما بين ‎A‏ و14 ‎LDA‏ معالجة بالهيموجلويين التي يكون أغلبها في المرحلة الأخيرة للتمايز المتعلق بسلسلة الكريات الحمراء . 5 تكون اختبارات وحدة تشكيل المستعمرة معروفة في المجال ‎Je)‏ سبيل المثال» ‎MesenCultTM‏ ‎medium, Stem Cell Technologies Inc., Vancouver British Columbia‏ ؛ راجع أيضاً ‎Wu et al. (Wu H, Liu X, Jaenisch R, Lodish HF (1995). "Generation‏ ‎of committed erythroid BFU-E and CFU-E progenitors does not require‏ ‎erythropoietin or the erythropoietin receptor’. Cell 83 (1): 59-67; Marley‏ ‎.SB, Lewis JL, Goldman JM, Gordon MY (1996)) 20‏ ‎Y-1-0‏ وحدات تشكيل انفجارية متعلقة بالكريات الحمراء ‎(BFU-E)‏ ‎CFU-E Jie‏ ؛ ‎BFU-E‏ يمكن اختباره وتحديده؛ على سبيل المثال؛ في اختبار تكون المستعمرات بواسطة العدد و شكل الخلايا وبواسطة وجود وغياب مرقمات سطح خلية محددة. على وجه ‎canal)‏ يمكن تحديد ‎BFU-E‏ بواسطة التعبير الوراثي عن العديد من مرقمات سطح الخلية ‎Jie‏ ‎ire‏
_ أ ‎q‏ _ ‎«DR-HLA CD34 «CD33‏ و نقص التعبير ‎hell‏ عن جليكوفورين -. على سبيل المثال؛ يمكن وصف اختبارات ‎Sas Wu et al BFU-E‏ استخدامها ‎(Wu H, Liu X,‏ ‎Jaenisch R, Lodish HF (1995). "Generation of committed erythroid BFU-E‏ ‎and CFU-E progenitors does not require erythropoietin or the‏ ‎.erythropoietin receptor’. Cell 83 (1): 59-67) 5‏ 1-5-؟ ‎HEMATOCRIT al Xs‏ يقوم مِكُدَاسٌ ‎a3)‏ بقياس نسبة خلايا الدم الحمراء في مقدار محدد من الدم الكامل ويمكن تضمينها كجزء من عدد الدم التام القياسي. وببلغ ‎a3 Gulia‏ بصورة طبيعية حوالي 9645 للذكور وحوالي ‎٠‏ للإناث. مع ذلك؛ يكون ‎Bar DEN (pal‏ بصورة نمطية مِكُدَاسٌ الدّم أقل من ذلك 0 الملحوظ بصورة طبيعية. بالتالي» يسمح تحديد مِكُدَاسٌُ الدَّم في مرضى ‎aD‏ الذين تتم معالجتهم وفقاً للطرق الواردة هنا بتحديد فاعلية هذه المعالجة. ‎—N 1-٠‏ تيلو ببتيد في البول ‎(UNTX) URINARY N-TELOPEPTIDE‏ يمكن قياس ‎—N‏ تيلو ببتيد في البول من نوع كولاجين ‎(NTX) ١ collagen‏ باستخدام» على سبيل المثال» اختبار مناعى ذاتى ‎.(Vitros ECi; Ortho Clinical, Rochester, NT, USA)‏ 1-1-0 فوسفاتاز قلوي خاص بعظم المصل ‎SERUM BONE SPECIFIC ALKALINE‏ ‎(BSAP) PHOSPHATASE‏ اختبار مناعي للإنزيم. 1-1-5 تلاشي خلايا سلالات شبيهة بالكريات الحمراء يمكن تحديد تلاشى خلايا سلالات شبيهة بالكريات الحمراء 1 على سبيل المتال؛ باستخدام تبقيع مرقم -طرف نيك ‎dUTP‏ مساهم فيه بواسطة ديوكسي نيوكليوتيديل ترانسيفيراز طرفي (اعلالا1). يمكن إجراء التبقيع با©100 باستخدام طاقم الكشف عن تلاشي الخلايا في الموضع ‎.(Takara Bio, Otsu, Japan)‏
‎q 7 _‏ _ ‎1-٠‏ نظم الزراعة المشتركة لكريات الدم الحمراء لاختبار التأثير على التمايز المتعلق بسلسلة الكريات الحمراء فى الوسط المعملى بصورة أكثر تماثلاً للوسط داخل الخلية؛ يمكن استخدام نظم زراعة مشتركة لخلايا نخاع العظم والخلايا البشرية ‎.CD36+‏ تكون الخلايا البشرية +0036؛ الغنية بالخلايا الأولية المتعلقة بكريات الدم الحمراء بصورة مرتفعة؛ مزروعة بصورة مشتركة مع مزارع نخاع العظم طويلة الأجل في أوساط مكملة بإريثروبويتين-(00) ‎Y)‏ وحدة / ملي لتر). بعد ‎١‏ أيام؛ يمكن تقييم المخرج الخلوي ‎(Ae)‏ سبيل ‎JE‏ نوع الخلية) للمزرعة؛ على سبيل المثال؛ بواسطة تحليل تعداد الخلايا المتدفقة (على سبيل المثال» ‎(FACS‏ يشير عدد الخلايا شبيهة بالكريات الحمراء عد العديد من مستويات التمايز المتعلقة بسلسلة الكريات الحمراء ‎de)‏ سبيل ‎(Jal‏ الأرومة الحمراء الأولية؛ خلايا آلفة للأصباغ 0 القاعدية؛ القّعِدَة/متعدد الألوان المتأخرء العوامل سوبة التلون/ خلايا شبكية؛ خلايا جليكويروتين ‎(+A‏ التي تشير إلى قدرة العامل المختبر على تعديل ‎la‏ متعلق بسلسلة الكريات الحمراء . 9-1-5 اختبار استجابة الاستتنساخ في نماذج محددة؛ يمكن استخدام اختبار استجابة الاستنساخ لاختبار مثبط لمستقبل أكتيفين من النوع ؟ أو نشاط 60511. عند انتقال إشارة ال801 و60511 ؛ يتم التحكم الزائد أو 5 المنخفض في استنساخ جينات محددة. يمكن قياس نظام مزرعة خلية و استجابة الاستنساخ (على سبيل المثال» بواسطة 41-561). يكون تأثير عامل على استجابة الاستنساخ عبارة عن مقياس فاعليته أو نشاطه. في نماذج محددة؛ يمكن نسخ منطقة المعزز المعروفة باستجابتها لانتقال إشارة الاهه أو 60711 قبل الجين المرشد. بهذه الطريقة؛ يمكن تبسيط الاختبار بحيث تكون هناك حاجة فقط لاختبار نشاط الجين المرشد. ‎deja V-o 0‏ مثبط مستقبل أكتيفين من النوع ‎Y‏ ‏في نماذج محددة؛ يكون مثبط ا(8017 عبارة عن مثبط ل 8014118 كما تم التوضيح مسبقاً في قسم ‎V-0—0‏ في نماذج ‎gal‏ يكون مثبط ‎ACtRIN‏ عبارة عن مثبط ل ‎ActRIIb‏ كما تم التوضيح مسبقاً في قسم ‎Y-0-0‏ في نماذج محددة؛ يكون مثبط ال801 عبارة عن توليفة من مثبط ‎ActRIIA‏ وى متبط ‎ActRIlb‏ ‎Tye‏
Cea ‏كافية لتحسين واحد من أعراض فقر‎ ARI ‏في نماذج محددة؛ تكون كمية فعالة علاجياً من مثبط‎ ‏كافية لمنع تدهور عرض واحد‎ 8017١ ‏من مثبط‎ Ladle ‏الدم. في نماذج محددة؛ تكون كمية فعالة‎ ‏لفقر الدم. في نماذج محددة؛ تعمل كمية فعالة علاجياً من مثبط ال8007,على زيادة مستوى خلايا‎ ‏في المريض.‎ Ery=C ‏الدّم؛ و/أو‎ Gia ‏الدم الحمراء؛ مستويات الهيموجلوبين؛ مستويات‎
في نماذج محددة؛ يتم إعطاء جرعة من مثبط ال800 عند فواصل وكميات كافية لتحقيق تركيزات مصل تبلغ ‎١7‏ ميكرو جرام/كجم أو أكبر من ذلك؛ وتكون مستويات مصل ‎١‏ ميكرو جرام/كجم أو " ميكرو جرام/كجم أو أكبر من ذلك مطلوية لتحقيق تأثيرات كبيرة على كثافة وقوة العظام. يمكن تصميم نظم الجرعة لتصل إلى تركيزات مصل تبلغ بين ؟, و5١‏ ميكرو جرام لكل كيلو جرام؛ ‎oy‏ نحو اختياري بين ‎١‏ و© ميكرو جرام/كجم. في الكائنات البشرية؛ يمكن تحقيق مستويات
0 مصل ‎OY‏ ميكرو جرام/كجم باستخدام جرعة مفردة من ‎١1‏ مجم/كجم أو أكبر من ذلك ويمكن تحقيق مستويات مصل ‎١‏ ميكرو جرام/كجم باستخدام جرعة مفردة تبلغ ‎١7‏ مجم/كجم أو أكبر من ذلك. تتراوح فترة نصف العمر للمصل الملحوظة للجزيء بين حوالي ‎Yo‏ و٠‏ ؟ ‎ald‏ بصورة أساسية أطول من أغلب بروتينات اندماج ‎Milly (FC‏ يمكن تحقيق مستوى مثل فعال مستمر؛ على سبيل 5 المثال؛ بواسطة إعطاء جرعة باستخدام ‎Y‏ ,6-0 + مجم/كجم اسبوعياً أو كل أسبوعين؛ أو يمكن استخدام جرعات ‎ol‏ مع وجود فواصل مرتفعة بين الجرعات. على سبيل المثال؛ يمكن استخدام جرعات ‎7-١‏ مجم/كجم شهرياً أو كل شهرين ويكون التأثير على العظام مستمر بدرجة كافية بحيث يكون إعطاء الجرعة لازماً مرة كل ‎oF‏ 4؛ ‎co‏ 661 9؛ ‎١١‏ أو أكثر من الشهور. يتم قياس مستويات مصل مثبط ال800 بواسط طرق معروفة للماهرين في المجال. على سبيل المثال؛ يتم 0 استخدام الأجسام المضادة ضد مثبط يمكن أن يكون ‎ACRIN‏ لتحديد مستويات مصل متبط ‎ActRII‏ باستخدام؛ على سبيل المثال؛ اخليل ‎ELISA‏ ‏في نماذج محددة؛ تتراوح جرعة مثبط ‎ACHR‏ من ‎١.0٠‏ إلى ‎3,١0‏ مجم/كجم في الوريد أو من ‎٠"‏ إلى ‎١.١‏ مجم/كجم تحت الجلد. في نماذج محددة؛ تبلغ جرعة مثبط ‎ARID‏ حوالي ‎٠,0٠‏ ‏مجم/كجم»؛ حوالي ‎١‏ مجم/كجم؛ حوالي ‎١.7‏ مجم/كجم» حوالي ‎١.7‏ مجم/كجم» حوالي ‎٠.5‏ ‏5 مجم/كجم؛ حوالي 110 مجم/كجم» حوالي ‎٠٠١‏ مجم/كجم؛ حوالي 1,0 مجم/كجم؛ حوالي ‎٠.١‏ ‎Tye‏
‎q q —_‏ _ مجم/كجم ‘ حوالي أ مجم/كجم؛ حوالي ‎Ye‏ مجم/كجم ‘ حوالي م مجم/كجم؛ حوالي ‎tN‏ ‏مجم/كجم حوالي 0,£ مجم/كجم أو حوالي ‎oO,‏ مجم/كجم . في نماذج ‎AREY‏ تبلغ جرعة مثبط ‎ActRII‏ حوالى ‎Yoo‏ مجم/كجم؛ حوالى ‎١6‏ مجم/كجم؛ حوالى ‎Yo,‏ مجم/كجم؛ حوالى 6 مجم/كجم ¢ أو حوالى ‎Yo‏ مجم/كجم . فى نماذ ‎z‏ محددةقء تتراوح جرعة مثبط ‎ActRII‏ بين )0 ‎oe,‏ ‏5 مجم/كجم و١١‏ مجم/كجم؛ بين ‎١١‏ مجم/كجم و7١‏ مجم/كجم؛ بين ‎١7‏ مجم/كجم و5٠‏ مجم/كجم؛ بين ‎١26‏ مجم/كجم و١٠‏ مجم/كجم؛ بين ‎٠٠١‏ مجم/كجم ‎Vor‏ مجم/كجم؛ بين ‎٠٠١‏ ‏مجم/كجم 5 ‎Vor‏ مجم/كجم؛ بين ‎Yor‏ مجم/كجم ‎Tors‏ مجم/كجم؛ بين ‎Vor‏ مجم/كجم ‎Eros‏ ‏مجم/كجم؛ بين ‎٠.١‏ مجم/كجم و١,©‏ مجم/كجم؛ بين ‎5,٠‏ مجم/كجم و١٠٠٠‏ مجم/كجم؛ بين ‎Yoon‏ مجم/كجم و ‎١٠‏ مجم/كجم »+ بين ‎Yoo‏ مجم/كجم و ‎Yo,‏ مجم/كجم » بين ‎١6‏ مجم/كجم 0 و١١٠+‏ مجم/كجم ‘ أو بين ‎٠٠.٠‏ مجم/كجم و١٠١٠‏ مجم/كجم . عند الاستخد ام بالاشتراك مع الجرعة المتوفرة هنا (على سبيل المثال» جرعة من مثبط ‎AGRI‏ أو جرعة من عامل نشط ثان)؛ تشير الكلمة "حوالي" إلى أي عدد في نطاق ١؛‏ © أو ‎96٠١0‏ من العدد المشار إليه. دم تركيبات صيدلانية في نماذج محددة؛ يتم تشكيل مضادات أكتيفين- ال801 (على سبيل المثال؛ بولي ببتيد 6ال8018) باستخدام مادة حاملة مقبولة ‎WY ana‏ للاستخدام مع الطرق الموصوفة هنا. على سبيل ‎«JU‏ بولى ببتيد يمكن إعطاء ال0158ه بمفرده أو كمكون للصيغة الصيدلانية ( تركيبة علاجية ). يمكن تشكيل مركبات الاختراع للإعطء بأي طريق مناسبة للاستخدام في الطب البشري أو البيطري. يمكن أن يكون ‎AGRI‏ عبارة عن ‎ActRIla‏ أى ‎ActRIIb‏ ‏في نماذج محددة؛ تتضمن الطرق العلاجية المتوفرة هنا 0 إعطاء التركيبة ( تشتمل على مثبط ‎(ACIRIN‏ جهازياً؛ أو موضعياً كغرسة أو جهاز. عند الإعطاء؛ يتم هنا توفير التركيبة العلاجية للاستخدامات في صورة مقبولة فسيولوجياً خالية من ‎Ase‏ ‏الحمى. يمكن أيضاً إعطاء العوامل النافعة ‎Ladle‏ غير مضادات ‎ACIRIN‏ والتى يمكن تضمينها بشكل اختياري في التركيبة كما تم الوصف سابقاً؛ بالتزامن أو على التوالي مع مركبات الاختراع ‎Tye‏
ER
‏و/أو بولي ببتيدات 8014118( انظر‎ ActRIla ‏مثل‎ (ActRIls ‏بولي ببتيد‎ JU ‏(على سبيل‎ .))7 © ‏قسم‎ ‏عن طريق الحقن غير المعوي. يمكن أن تشتمل التركيبات‎ AGRI ‏نمطياً؛ سيتم إعطاء مضادات‎ ‏بالاشتراك مع واحد أو أكثر‎ ACtRIIS ‏الصيدلانية للإعطاء حقناً على واحد أو أكثر من بولي ببتيد‎ ‏من المحاليل المائية وغير المائية متساوية التوتر المعقمة المقبولة صيدلانياً؛ المشتتات؛ المعلقات‎ 5 ‏أو المستحلبات؛ أو المساحيق المعقمة التي يمكن إعادة تشكيلها في محاليل قابلة للحقن معقمة أو‎ ‏المشتتات قبل الاستخدام مباشرة؛ والتي يمكن أن تتضمن مضادات أكسدة؛ محاليل منظمة؛ مواد‎ ‏والذي يجعل الصيغة متساوية التوتر مع دم المتلقي المستهدف أو‎ Has ‏نواتج‎ (Lal ‏كابحة‎ ‏عوامل التعليق أو التغليظ. تتضمن أمثلة المواد الحاملة المائية وغير المائية المناسبة والتي يمكن‎ ethanol ‏إيثانول‎ cele ‏استخدامها في التريكيبات الصيدلانية المستخدمة في الطرق الموصوفة هنا‎ 0 ‏؛ بروبيلين جليكول‎ glycerol ‏(مثل جليسرول‎ polyols ‏كحولات عديدة الهيدروكسيل‎ ٠ ‏؛ وما شابه)؛ و خلائط‎ polyethylene glycol ‏؛» بولي إيثيلين جليكول‎ propylene glycol ‏القابلة‎ organic esters ‏مناسبة منهاء زيوت نباتية؛ مثل زيت الزيتون و الإسترات العضوية‎ ‏يمكن الحفاظ على التميع الملائم» على سبيل المثال»‎ ethyl oleate ‏أوليات الإيثيل‎ (ie ‏للحقن؛‎ ‏؛ بواسطة الحفاظ لى حجم الجسيم المطلوب‎ lecithin ‏ليسيشين‎ Jie ‏بواسطة استخدام مواد تغليف»؛‎ 5 ‏وبواسطة استخدام مواد خافضة للتوتر السطحي‎ ¢ dispersions ‏في حالة المشتتات‎ .surfactants ‏علاوة على ذلك؛ يمكن تغليف التركيبة أو حقنها في صورة للتوصيل إلى موضع النسيج المستهدف‎ ‏العظم). في نماذج محددة؛ يمكن استخدام التركيبات المستخدمة في الطرق‎ (JU) ‏سبيل‎ le) ‏سبيل المثال؛‎ Ae) ‏الموصوفة هنا طبقة قادرة على توصيل واحد أو أكثر من المركبات العلاجية‎ 0 ‏العظم)؛ توفير بنية‎ (JU ‏بولي ببتيدات ا(8014) إلى موضع النسيج المستهدف (على سبيل‎ ‏لتطوير النسيج ويمكن امتصاصها بالشكل الأمثل في الجسم. على سبيل المثال» يمكن أن توفر‎ ‏الطريقة إطلاق بطيء لبولي ببتيدات ال8014. يمكن تشكيل تلك الطبقات المذكورة من المواد‎ ‏المستخدمة حالياً للاستخدام التطبيقات الطبيعة المغروسة.‎
-١١- ‏تعتمد اختيار مادة الطبقة على التوافق الحيوي؛ قابلة التحلل البيولوجي؛ الخواص الميكانيكية؛‎ ‏المظهر الجمالي وخواص السطح البيني. يحدد الاستخدام المحدد للتركيبة الصيغة الملائمة. يمكن‎ ‏أن تكون الطبقات المحتملة للتركيبات قابلة للتحلل البيولوجي والكيميائية بواسطة كبريتات الكالسيوم‎ ‏هيدروكسي أباتيت‎ ¢ tricalciumphosphate ‏تراي كالسيوم فوسفات‎ ¢ calcium sulfate ‏وبولي أنهيدريد‎ polylactic acid ‏؛ حمض بولي لاكتيك‎ hydroxyapatite 5 ‏تكون المواد المحتملة الأخرى قابلة للتحلل الحيوي والبيولوجي المحدد؛ مثل‎ .polyanhydrides ‏تتكون الطبقات الطبقات الأخرى من‎ .062081 collagen ‏أو كولاجين البشرة‎ bone ‏العظم‎ ‏بروتينات نقية أو مكونات طبقة خارج خلوية.‎ ‏هيدروكسي أباتيت‎ Jie Lilia ‏وتكون الطبقات المحتملة غير قابلة للتحلل البيولوجي و محددة‎ ‏ملبد؛ زجاج حيوي» ألومينات؛ أو مواد خزفية أخرى. يمكن أن تتكون الطبقات من توليفات من أي‎ 0 ‏و هيدروكسي أباتيت‎ polylactic ‏حمض بولي لاكتيك‎ Jie ‏من الأنواع المذكورة سابقاً من مادة؛‎ tricalciumphosphate ‏وتراي كالسيوم فوسفات‎ collagen ‏أو كولاجين‎ hydroxyapatite ‏ألومينات‎ - calcium ‏معالجة كالسيوم‎ Jie ‏يمكن تعديل المواد الخزفية الحيوية في تركيبة؛‎ ‏ولتغيير حجم المسام؛ حجم جسيم؛ شكل جسيم؛ وتكون‎ —phosphate ‏فوسفات‎ —aluminate ‏قابلة التحلل البيولوجي.‎ 5 ‏في نماذج محددة؛ يمكن إعطاء التركيبات المستخدمة في الطرق الموصوفة هنا ( تشتمل على‎ ‏متبط ال8004) ويمكن إعطاؤها عبر الفم؛ على سبيل المثال» في صورة كبسولات؛ براشيم» حبوب؛‎ ‏السكروز والصمغ العربي أو صمغ الكثيراء)؛‎ sale ‏أقراص؛ مستحلبات (باستخدام قواعد منكهة؛‎ ‏أو كمستحلب زيت-في-‎ (Ale ‏المساحيق؛ الحبيبات؛ أو كمحلول أو معلق في سائل مائي او لا‎ ‏.ماء أو مستحلب سائل ماء-في- زبت؛ أو في صورة إكسير أو شراب؛ أو حبوب ( باستخدام قاعدة‎ 0 ‏خاملة؛ مثل جيلاتين و جليسرين؛ أو سكروز و السنط) و/أو مثل غسولات الفم وما شابه؛ ويتضمن‎ ‏كل منها كمية محددة مسبقاً من عامل مكون نشط. يمكن إعطاء العامل في صورة بلعة؛ معجون‎ ‏أو عجينة.‎ ‏حبوب؛ ملبسات؛ المساحيق؛‎ (pall ‏في صور الجرعة الصلبة للإعطاء عبر الفم ( كبسولات؛‎ ‏الحبيبات؛ وما شابه)» يمكن مزج واحد أو أكثر من المركبات العلاجية المذكورة هنا في واحد أو‎ 5
-١ ay—
أكثر من المواد الحاملة المقبولة صيدلانياً» ‎Jie‏ سيترات الصوديوم ‎sodium citrate‏ أو داي كالسيوم فوسفات ‎dicalcium phosphate‏ « و/أو أي مما يلي: ‎)١(‏ المواد المالئة ‎fillers‏ أو عوامل الإطالة ‎extenders‏ ؛ مثل النشاء لاكتوز ‎«lactose‏ سكروز ‎sucrose‏ » جلوكوز ‎glucose‏ » مانيتول ‎mannitol‏ « و/أو حمض سيليسيك ‎silicic acid‏ ؛ ‎)١(‏ مواد ريط 000065 ¢ مثل؛ على سبيل المثال» كريوكسي ميثيل سيلولوز ‎carboxymethylcellulose‏ « ألجينات ‎alginates‏ » جيلاتين ‎gelatin‏ ¢ بولي فينيل بيروليدون ‎pyrrolidone‏ الإصالالرادم؛ سكروز ‎sucrose‏ « و/أو السنط ‎acacia‏ ؛ ‎(TV)‏ مرطبات ‎humectants‏ ؛ مثل جليسرول ‎glycerol‏ ¢ )¢( عوامل تفتيت896015 ‎disintegrating‏ ؛ مثل أجار- أجار ‎agar-agar‏ ء كريونات الكالسيوم ‎calcium carbonate‏ ¢ البطاطس أو ‎Las‏ التابيوكة ‎tapioca starch‏ « 0 حمض ألجينيك ‎alginic acid‏ ؛ سيليكات ‎silicates‏ محددة؛ و كريونات الصوديوم ‎sodium‏ ‎carbonate‏ ؛ )°( عوامل تأخير المحلول ‎solution retarding agents‏ ؛ مثل البرافين ‎paraffin‏ ¢ (1) معجلات الامتصاص ‎absorption accelerators‏ « مثل مركبات أمونيوم ‎(VY) tquaternary ammonium del,‏ عوامل ترطيب ‎wetting agents‏ ؛ ‎«Jie‏ على سبيل ‎JUN‏ سيتيل كحول وجليسرول مونوستيارات ‎cetyl alcohol and glycerol‏ ‎(A) ¢ monostearate 5‏ مواد امتصاص ‎absorbents‏ ؛ 5 ‎J‏ كاولين ‎kaolin‏ و طمي البنتونيت ‎bentonite clay‏ ¢ )4( مزلقات ‎lubricants‏ ؛ ‎Jia‏ تلك» ستيارات الكالسيوم ‎calcium‏ ‎stearate‏ ¢ ستيارات الماغنسيوم ‎magnesium stearate‏ ؛ مركبات بولي إيثيلين جليكول صلبة ‎solid polyethylene glycols‏ ؛ صوديوم لوريل كبريتات ‎sodium lauryl sulfate‏ « و خلائط منها؛ و(١٠)‏ عوامل تلوين ‎coloring agents‏ في حالة كبسولات؛ أقراص و حبوب؛ 0 يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلانية أيضاً على عوامل تنظيم المحلول. يمكن أيضاً استخدام تركيبات صلبة من نفس النوع كمواد ‎LAL‏ في كبسولات جيلاتينية رخوة أو صلبة باستخدام السواغات المذكورة مثل لاكتوز أو سكريات اللبن؛ بالإضافة إلى مركبات بولي إيثيلين جليكول
مرتفعة الوزن الجزيئي وما شابه. تتضمن صورة الجرعة السائلة للإعطاء عبر الفم مستحلبات مقبولة ‎QV aia‏ مستحلبات دقيقة؛ 5 محاليل» معلقات»؛ شراب»؛ و أكاسير. بالإضافة إلى المكونات الفعالة؛ يمكن أن تتضمن صور
ا ‎١‏ ‏الجرعة السائلة مواد مخففة خاملة مستخدمة ‎Bale‏ في المجال؛ ‎Jie‏ ماء أو مذيبات ‎coal‏ عوامل إذابة و مستحلبات» ‎Jie‏ كحول الإيثيل ‎ethyl alcohol‏ ؛ أيزو ‎(Jug yn‏ كحول ‎isopropyl‏ ‎alcohol‏ ؛ كريونات الإيثيل ‎ethyl carbonate‏ ؛ أسيتات ‎ethyl acetate (iy)‏ ؛ كحول البنزيل ‎benzyl alcohol‏ ؛ بنزوات البنزيل ‎benzyl benzoate‏ ؛ بروبيلين جليكول ‎١ propylene glycol 5‏ )¢ ؟- بيوتيلين جليكول ‎butylene glycol‏ ؛ زيوت ‎oils‏ (بشكل محدد؛ زيت بذرة القطن؛ زيت الفول السوداني؛ الذرة؛ زيت الجنين؛ زيت الزيتون؛ زيت الخروع؛ و ‎cu)‏ السمسم)» جليسرول؛ تترا هيدروفيورانيل كحول ‎tetrahydrofuryl alcohol‏ ؛ مركبات بولي إيثيلين جليكول و إسترات الحمض الدهني ‎fatty acid esters‏ للسوربيتان ‎sorbitan‏ « وخلائط منها. بالإضافة إلى مواد مخففة خاملة؛ يمكن ‎Load‏ أن تتضمن التركيبات الفموية مواد مساعدة 0 مثل عوامل ترطيب» عوامل الاستحلاب ‎emulsifying‏ والتعليق ‎suspending‏ عوامل التحلية ‎sweetening‏ ؛ عوامل إكساب النكهة ‎flavoring‏ ؛ عوامل إكساب اللون ‎coloring‏ ¢ مواد التعطير ‎perfuming‏ ¢ والمواد الحافضة ‎preservative agents‏ . يمكن أن تتضمن المعلقات؛ بالإضافة إلى المركبات النشطة»عوامل تعليق مثل كحولات أيزو ستياريل معالج بالإيثتوكسي ‎ethoxylated isostearyl alcohols‏ « بولي أوكسي إيثيلين سوربيتول ‎polyoxyethylene sorbitol‏ ¢ و إسترات سوربيتان ‎sorbitan esters‏ ؛ سيلولوز دقيق البلورات ‎microcrystalline cellulose‏ « ألومنيوم ميتاهيدروكسيد ‎aluminum‏ ‎metahydroxide‏ « بنتونيت ‎Lal ¢ bentonite‏ - أجار 8981-8983 و صمغ الكثيراء ‎tragacanth‏ ¢ و خلائط منها. يمكن أيضاً أن تتضمن التركيبات المذكورة هنا مواد مساعدة»؛ مثل مواد حافظة؛ عوامل ترطيب؛ 0 عوامل استحلاب»؛ وعوامل تشتيت. يمكن التأكيد على الوقاية من ‎Jad‏ الكائنات الدقيقة بواسطة تضمين العديد من العوامل المضادة للبكتريا ‎antibacterial‏ والمضادة للفطريات ‎«antifungal‏ ‏على سبيل المثال»؛ بارابين ‎paraben‏ ؛ كلورو بيوتانول ‎chlorobutanol‏ ؛ حمض فيتول سورييك ‎phenol sorbic acid‏ ؛ وما شابه. ويكون من المطلوب أيضاً أن تتضمن عوامل متساوية التوتر ‎isotonic agents‏ ؛ مثل السكريات ‎sugars‏ ؛ كلوريد الصوديوم ‎sodium chloride‏ « وما 5 شابه في التركيبات. بالإضافة إلى ذلك؛ يُشكل الامتصاص المطول للصورة الصيدلانية القابلة
-١ ‏للحقن إلى حوالي بواسطة تضمين عوامل مع تأخير الامتصاص؛ مثل ألومنيوم مونوستيارات‎ .gelatin ‏و جيلاتين‎ aluminum monostearate ‏يتضح أنه يمكن تحديد نظام الجرعة بواسطة الطبيب القائم بالعلاج مع الأخذ في الاعتبار عدة‎ ‏عوامل والتي تعدل فعل المركبات المذكورة هنا (على سبيل المثال؛ بولي ببتيد 8018115 مثل‎ ‏(انظر قسم ©-7)). تتضمن العوامل المتعددة؛ على سبيل‎ ACtRIIB ‏و/أو بولي ببتيدات‎ ActRIla 5 ‏المثال وليس الحصر» كمية وزن العظم المراد تشكيلهاء درجة الفقد في كثافة العظام»؛ موضع تلف‎ ‏تساهم‎ Ally ‏العظام؛ عمر المربض؛ النوع ؛ والنظام الغذائي؛ شدة أي مرض‎ Cali ‏العظام؛ حالة‎ ‏في فقد العظام» زمن الإعطاء» و العوامل الإكلينيكية الأخرى. على نحو اختياري؛ يمكن أن تختلف‎ ‏الجرعة وفقاً لنوع الطبقة المستخدمة في إعادة تشكيل وأنواع المركبات في التركيبة. يمكن أيضاً أن‎
0 تؤثر إضافة عوامل نمو أخرى إلى التركيبة النهائية على الجرعة. يمكن مراقبة التطور بواسطة التقييم الدوري للعظام و/أو الإصلاح؛ على سبيل المثال؛ الأشعة السينية ‎Lay)‏ في ذلك ‎(DEXA‏ ‏تحديدات متعلقة بالقياس النسيجي؛ والترقيم بتترا سيكلين ‎tetracycline labeling‏ في نماذج محددة؛ يتم هنا توفير علاج الجين لإنتاج بولي ببتيد 801115 داخل الخلية الحية. ويمكن أن يحقق العلاج المذكور التأثير العلاجي بواسطة إدخال متواليات بولي نوكليوتيد ‎ACtRIN‏
داخل الخلايا أو الأنسجة التي يكون لها الاضطرابات المذكورة سابقاً. يمكن توصيل متواليات بولي نوكليوتيد باستخدام ناتج عن عودة الارتباط الجيني ناقل تعبير وراثي مثل الفيروس الخيمري أو نظام التشتت الغرواني. يكون المفضل للتوصيل العلاجي لمتواليات بولي نوكليوتيد هو استخدام جسيمات دهنية مستهدفة. يمكن أن يكون بولي ببتيد 801115 عبارة عن 8ه و/أو بولي ببتيدات 8018118( انظر قسم ‎((Y=0‏
0 تتضمن العديد من العوامل الفيروسية التي يمكن استخدامها لعلاج الجين كما تم التوضيح هنا فيروس غدي؛ فيروس هربسء لقاح, أو؛ بشكل مفضل؛ فيروس ‎RNA‏ مثل فيروس انتساخ عكسي. بشكل مفضل؛ يكون ناقل الفيروس العكسي ‎Ble‏ عن فيروس انتساخ مشتق من الفئران أو الطيور. تتضمن أمثلة نواقل الفيروس العكسي التي يتم فيها إدخال الجين الغريب؛ على سبيل ‎JU‏ وليس الحصر: ‎Gago‏ مُولوني الابأيضاضِئّ ‎Moloney murine leukemia virus‏
‎-١ ١ 8-‏ ‎«(MOMULYV)‏ فيروس ساركومة فأري هارفي ‎Harvey murine sarcoma virus‏ ‎(HaMuSV)‏ فيروس ورم ثديي فأري ‎«(MUMTV) murine mammary tumor‏ و فيروس ساركومة ‎Rous Sarcoma‏ (/451). يمكن أن يتضمن عدد إضافي من نواقل الفيروس العكسي جينات متعددة. يمكن أن تعمل جميع من هذه النواقل على نقل أو تضمين جين لمرقم قابل للاختيار بحيث يمكن تحديد الخلايات المستحثة وتوليدها. يمكن أن تكون نواقل الفيروس العكسي خاصة بالعدف بواسطة ربطء على سبيل ‎(JU‏ سكرء شحم سكري؛ أو بروتين. يتم تحقيق الاستهداف المفضل باستخدام الجسم المضاد . يدرك أصحاب المهارة في المجال أنه يمكن إدخال متواليات بولي نوكليوتيد في مجموعة العوامل الوراثية للارتداد الفيروسي أو تثبيتها بالغلاف الفيروسي للسماح بالتوصيل النوعي المستهدف لناقل الفيروس العكسي الذي يتضمن بولي
‏0 نوكليوتيد ال801. في نموذج مفضل؛ يتم يستهدف الناقل العظم أو الغضاريف. على نحو بديل» يمكن نقل العدوى إلى خلايا مزرعة النسيج مباشرة باستخدام بلازميدات مشفرة للجينات البنائية للارتداد ‎c€nV 5 POI (gag wg pill‏ بواسطة نقل العدوي بواسطة فوسفات الكالسيوم التقليدية. ومن ثم يتم نقل العدوي إلى الخلايا المذكورة باستخدام بلازميد ناقل يتضمن جينات الاختراع. تعمل الخلايا الناتجة على إطلاق الناقل الفيروس العكسي في وسط المزرعة.
‏5 يتمثل نظام التوصيل المستهدف الآخر في ل بولي نوكليوتيدات ال801/ في نظام التشتت الغرواني. تتضمن نظم التشتت الغرواني في معقدات كبيرة الجزبئات؛ كبسولات متناهية الصغرء كريات صغيرة؛ خرزات؛ و نظام أساسها الشحوم تتضمن زيت-في- ماء المستحلبات؛ مذيلات؛ مذيلات مختلطة؛ وجسيمات دهنية. يكون النظام الغرواني المفضل للاستخدام في الطرق الموصوفة هنا عبارة عن جسيم شحمي. تكون الجسيمات الدهنية عبارة عن حويصلات غشائية
‏0 صناعية والتي تكون نافعة في التوصيل في المعمل والكائن الحي. يمكن تغليف الفيروسات السليمة ‎DNA (RNA‏ و في الجزء الداخلي المائي ويتم توصيلها إلى ‎LOA‏ في صورة نشطة بيولوجياً (راجع على سبيل المثال» 1981 ,6:77 ‎(Fraley, et al, Trends Biochem.
Sci.,‏ تكون طرق نقل الجين الفعالة باستخدام ناقل الجسيم معروفة في المجال؛ راجع على سبيل المثال؛ ‎.Mannino, et al, Biotechniques, 6:682, 1988‏ تكون ‎sale‏ تركيبة الجسيم الدعني ‎Ble‏
‏5 توليفة من دهون فسفورية ‎phospholipids‏ « في توليفة مع ستيرويد ‎steroids‏ ؛ على وجه
— \ ٠ h —
الخصوص كوليستيرول ‎characteristics‏ يمكن أيضاً استخدام دهون فوسفورية أخرى أو دهون
أخرى. تعتمد الخصائص الفيزيائية للجسيمات الدهنية على الرقم الهيدروجينيء القوة الأيونية ‎ionic‏
. divalent cations ‏ووجود كاتيونات ثنائية التكافؤٌ‎ ¢ Strength
تتضمن أمثلة الدهون النافعة في إنتاج الجسيم الشحمي مركبات فوسفاتاديل ‎phosphatidyl‏ «
مثل فوسفاتاديل جليسرول ‎cphosphatidylglycerol‏ فوسفاتاديل كولين ‎phosphatidylcholine‏
؛ فوسفاتاديل سيرين ‎phosphatidylserine‏ ,» فوسفاتاديل إيقانول أمين
‎phosphatidylethanolamine‏ « دهون سفينجولية ‎Sphingolipids‏ ؛ مواد سيريبروسيد
‏85 ؛ وجانجيليوسيد 1056065ا9809. تتضمن الدهون الفسفورية التوضيحية
‏فوسفاتاديل كولين البيض ‎phosphatidylcholine‏ 809 ؛ داي بالميتول فوسفاتاديل كولين ‎dipalmitoylphosphatidylcholine 0‏ ؛ و داي س_تارويل فوسفاتاديل كولين
‎.distearoylphosphatidylcholine‏ من المحتمل ‎Lead‏ أن يعتمد استهداف الجسيمات الدهنية
‏على؛ على سبيل المثال؛ نوعية العضوء؛ نوعية الخلية؛ و نوعية العضو وتكون معروفة في
‏المجال.
‏في نماذج محددة؛ يكون مثبط |8014 نقي بدرجة كبيرة في تركيبة صيدلانية . على ‎dag‏ التحديد؛ عند أكثر من ‎%Y ,© %o 9٠١ 0٠‏ )9% ,7 6 أو ‎v0‏ , « % على الأغلب من
‏المركبات الواردة في التركيبة الصيدلانية تكون عبارة عن مركبات غير مثبط 80881 و المادة
‏الحاملة المقبولة صيدلانياً.
‎EXAMPLE -1
‏تشير الأمثلة المقدمة هنا إلى زيادة مستويات بروتين 60511 في ‎Earn‏ حيث يؤدي تثبيط 0 60711 إلى معالجة فقر الدم في نموذج فأري مصاب ببيتا-ثَلاَسيمِيَّة. وفقاً لذلك»يشير المثال
‏المتوفر هنا إلى أنه يمكن استخدام 60511 كمرقم حيوي للكَلاسِيمِيَّة. بحيث يمكن تقييم طرق
‏علاج فقر الدم ‎Land Jie‏
‎Landi ‏بيتا-‎ ACTRIIA ‏معالجات تحلل‎ ٠-7
ل ‎-١‏ ‏ترتبط بيتا-كَلأسِيمِيَّة بتكوّن الكريات الحمراء غير الفعال؛ تمايز وتلاشي الخلايا المتعلق بكريات الدم الحمراء المعجل؛ مما ؤدي إلى فقر الدم و زيادة التحميل بالحديد. تكون الآلية الجزيئية الضمنية لتأثيرات تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال غير مفهومة كلياً. رغم أن أعضاء العائلة الفائقة ‎Li- TGF‏ تشترك في كل من تكاثر و تمايز الخلايا الأولية المتعلق بالكريات الحمراء؛ ويكون دور العديد من أعضاء عائلة ‎Lum TGF‏ في تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال الملحوظ في بيتا-ثَلاسيمِيّة غير معروفاً. لتقييم دور أعضاء عائلة )16- بيتا في تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال لبيتا-ثَلاَسيمِبَّة؛ يتم استخدام ناتج عن عودة الارتباط الجيني بروتين اندماج الذي يريط عدد عائلة فائقة من المركبات الترابطية ‎Lin TGF‏ في نموذج فأري لبيتا- كَلأَسِيمِيَّة. لبروتين اندماج ‎ACtRIIA-FC‏ (أي؛ 0 المناظر الفأري لمتوالية رقم: ‎)١‏ تتألف من نطاق خارج الخلية لمستقبل أكتيفين م ‎(ACtRIIA) ١١‏ المرتبط بجلوييولين مناعي بشري ‎١‏ (ا96ا) نطاق ‎Fe‏ و والبروتين الذي يعمل كمادة محتجة للمركب الترابطي لأعضاء عائلة +16- بيتا شبيه أكتيفين ‎A‏ أكتيفين 8؛ عامل تمايز النمو-١١‏ (60511) وبروتين التكون الورثي للعظم ‎Hbbthl/thl .)81/0-10( ٠١-‏ يكون عبارة عن نموذج فأري لبيتا-ثَلاسيمِيَّة بشري؛ الفأر الذي يتضمن حذف طبيعي للجين الرئيسي-بيتا ( ‎Skow‏ ‎(et al, 1983 5‏ يتضمن ‎Hbbthl/thl‏ هيموجلويين منخفض بصورة غير طبيعية(195!)؛ الخلايا البيضاء ‎(Het)‏ ومتوسط حجم الخلية ‎(MCV)‏ بالإضافة إلى نخاع عظم ‎(BM)‏ مجموع خلايا مفرط و مستويات بيليروبين مرتفعة بصورة غير طبيعية؛ منتج ثانوي من تكسير الهيموجلويين الذي يُمثل تدمير الخلايا ‎CECA‏ لخلايا الدم الحمراء . +-؟ مواد وطرق ‎٠-7-١ 0‏ جرذان : تمت ‎dup‏ 0578/6 ووضعها في مرافق خالية من مسببات المرض ل ‎INSERM U699‏ تمت الموافقة على جميع البروتوكولات بواسطة ‎the Animal Care‏ ‎Lau .Committee of INSERM‏ نموذج ‎Hbbthlfthl‏ من الحذف الذي يحدث بصورة طبيعية لجين ]-رئيسي )1983 ‎.(Skow LC et al; Cell‏ تُشكل جرذان ‎Hbbthljthl‏ نموذج ‎~B‏ ‎ards‏ متوسطة. يكون للجرذان المذكورة العديد من المتغيرات الإكلينيكية التي تنتج ‎Lard‏ ‏5 بشرية مثل نخاع عظم تكون الكريات الحمراء غير الفعال؛ تلاشي الخلايا للمادة المنتجة؛ توزيع ‎Tye‏
م ‎٠‏ \ — الحديد المتنى؛ التعبير ‎Shell‏ المنخفض عن هيباسيدين 76061017 و مستويات منخفضة من الحديد في نخاع العظم بينما يتم زيادة المستويات في الكبد ‎liver‏ والطحال ‎spleen‏ ‏7-7-7 عدد خلايا الدم الكاملة تم تجميع عينات الدم في أنابيب مغلفة ب ‎EDTA‏ وتم قياس عدد خلايا الدم الكاملة على وحدة تحليل الدم ‎a, (Melet Schloesing Laboratories) MS9-5‏ لتعليمات المُصنع. وتكون المتغيرات التي تم اختيارها عبارة عن خلايا الدم الحمراء ‎(RBC) red blood cells‏ 3%( ‎(Ht) hematocrit al‏ متوسط حجم جسيمي ‎«(MCV) mean corpuscular volume‏ هيموجلويين ‎(Hb) hemoglobin‏ يتم تحديد عدد الخلايا الشبكية باستخدام مادة كاشفة لعد الشبكات ‎.(Count™ Kit-BD Biosciences Retic)‏ ‎7-١ 10‏ - آزمنى كمى فعلى ‎RT-PCR‏ ‏تم استخلاص ‎RNA‏ من سلالات شبيهة بالكريات الحمراء باستخدام ‎RNeasy Plus Mini Kit‏ ‎(Qiagen)‏ .25 استخدام ميكرو جرام لإجمالي ‎RNA‏ للاستنساخ العكسي باستخدام 50101 ‎transcription Supermix reverse‏ (80-810) أثناء ‎٠‏ دقيقة عند ‎A‏ درجة مئوية. تم تثبيط الإنزيم عند ‎AG‏ درجة ‎Luge‏ لمدة © دقائق. بالنسبة ل ‎(PCR‏ تم تضخيم عينات ‎CDNA‏ ‏5 في ‎CFX96 PCR System‏ (260-810). تم تقسيم المنتجات ‎PCR‏ باستخدام ‎SsoFast‏ ‎EvaGreen Supermix‏ (80-810). 5-7-7 مزارع الأرومة الحمراء في المعمل تم إعادة تعليق خلايا يتم الحصول عليها من كل نسيج في “وسط تمدد عن ‎LIAN‏ الحمراء” خالي من المصل يتكون من أي من ‎StemPro34‏ بالإضافة إلى ‎sale‏ مكملة غذائية ‎Life)‏ ‎(BRL-Technologies Gibco 0‏ مكمل ب ؟ وحدة / ملي لتر ناتج ‎sage‏ الارتباط الجيني البشري ‎٠٠١ (Roche) Epo‏ نانو جرام/مللي لتر ‎1-٠١ (PeproTech) SCF‏ مولار ديكساميثانون ‎٠ (D291; Sigma)‏ 5 و بنسيلين/ ستريتوميسين ‎penicillin /streptomycin‏ ‎(Invitrogen ¢Pen/Strep)‏ بعد © أيام من الزراعة؛ تم نقل الخلايا غير الملتصقة إلى وسط تمايز ‎StemPro-34)‏ مكمل ب ‎١‏ وحدة / ملي ‎Epo il‏ و ١مجم/مل‏ حديد -ترانسفيرين ‎ferro—‏ ‎Tire‏
‎٠ q —‏ \ — ‎(Sigma) transferrin‏ أثناء يومين إلى ثلاث مكمل أو غير مكمل ب ١٠ميكرو‏ جرام/مللى لتر من ‎.MACHRIIA-FC‏ تم تحديد ‎LAN‏ الحية والميتنة يوميا بواسطة طريقة استبعاد باستخدام أزرق ‎(Gibco/BRL) Trypan Blue law ll‏ و تم ضبط تركيز الخلايا إلى ‎١ ٠١ XY‏ خلايا إجمالية /مل يومياً من خلال تغيرات الوسط الجزئي. ١+-؟-ه‏ اختبارات ميثيل سيلولوز ‎Methylcellulose‏ ‏تم مزج معلقات الخلية المفردة ل ‎BM‏ فأري بالغ أو ‎methocult M3434 Jak‏ متوسط ( ‎Stem‏ ‎(Cell Technologies‏ تم وضعه في أطباق في أطباق تبلغ ‎Vo‏ مم و زراعتها عند ‎VV‏ درجة مئوية في جو من دم" جو مرطب ‎C02~‏ . تم فرز مستعمرات ‎BFU-E‏ في اليوم أ ) في بعض التجارب تم فرز ‎BFU-E‏ فأري من يوم 7 إلى اليوم ‎٠١‏ ولا يوجد اختلاف بين عدد 0 المستعمرة عند اليوم ‎١‏ و عند اليوم١٠).‏ 1-7-7 تحليلات إحصائية تم إجراء تحليلات إحصائية باستخدام ‎version 5.0; GraphPad ( GraphPad Prism‏ ©501/6). يتم التعبير عن البيانات كمتوسط ‎SEM‏ + لتحديدات ‎N‏ ما لم تتم ملاحظة خلاف ذلك. تم استخدام اختبار ‎t‏ 50006015- أو اختبار ‎Mann‏ -لا©107//ا_لمقارنة المجموعتين» 5 بينما يتم عمل مقارنات مجموعات متعددة باستخدام اختبار ‎ANOVA‏ ثنائي الاتجاه متبوع بالتحليل السابق (اختبار ‎(Bonferroni‏ .23 الاختلافات جوهرية عند ‎dad‏ © أقل من 0.05 (*)؛ أقل من )0 )* *( أو أقل من ‎٠,661‏ )* * *( : 7-7-7 تحليل الوميض المناعى بواسطة تعداد الخلايا المتدفقة بالنسبة لنخاع ‎(BM) alae‏ ومعلقات خلايا الطحال التي تم الحصول عليها من جرذان؛ تتم إعاقة 0 مستقبلات ‎IgG‏ باستخدام ‎.FcgammaR mAb 2.462- alias‏ ثم تم تبقيع خلايا ‎XV)‏ ‏1 ) باستخدام ‎TER-119 alias‏ وجسم مضاد ‎TRI‏ فأري. تم تحليل الخلايا المبقعة بواسطة تعداد الخلايا المتدفقة ‎(FACScalibur; Becton Dickinson)‏ باستخدام ‎Flow Jo‏ ‎.(Tree Star) software‏
=« \ \ — ‎A=Y-1‏ تجميع النسيج وعلم ا لأنسجة تم تجميع عينات نخاع عظم وطحال وتثبيتها في ‎96٠١‏ فورمالين ‎formalin‏ -؛ البرافين المغمور ‎paraffin embedded‏ ؛ والمقسم عند 1-7 ميكرو متر لتبقيع هيماثوكُسيلين والأيوزين ‎.(H&E) hematoxylin and eosin‏ 4-7-1 التحديد الكمي لحديد ‎Iron‏ ؛ فيريتين ‎«ferritin‏ بيليرويين ‎bilirubin‏ وترانسفيرين ‎transferrin‏ ‏تم سحب الدم في أنابيب بها هيبارين وفرزها بالطرد المركزي )0 دقائق؛ 4 درجة مئوية؛ ‎٠١‏ ‏مجم) . يتم فرز البلازما من جديد )° دقائق؛ 4 درجة مثوية؛ ‎any (p> YY eo‏ الملوثات من خلايا الدم الحمراء. تم التحديد الكمي للمتغيرات الكيميائية الحيوية باستخدام ‎Olympus AU400‏ آلىي 0 وقفقاً لتعليمات المُصنع. >-؟ نتائج ‎MACHRIIA-Fc ١-7-7‏ يخفف من متغيرات الدم في ‎Gi‏ مصابة بالَلاسيمِيَّة. يكون بيتا-ثَلأسيمِيَّة ‎Ble‏ عن مرض يتسم بنقص في تخليق الهيموجلوبين مما يؤدي إلى اختلال نضج الكريات الدموية الحمراء والإنتاج. ويكون الانخفاض في كريات دموية حمراء ناتجاً بصورة 5 أساسية عن التمايز المعجل بصورة غير طبيعية المتعلق بسلسلة الكريات الحمراء وتلاشي الخلايا في المرحلة المتأخرة لأرومة حمراء فَعِدَة/متعددة الألوان لتمايز خلايا الدم الحمراء الذي يؤدي إلى انخفاض كلي في إنتاج خلايا الدم الحمراء الناضجة. يتسم هذا المرض بفرط حيز خلايا النخاع حيث تتراكم الأرومات الحمراء غير الطبيعية وتخضع لتلاشي الخلاياء مما يؤدي إلى فقر الدم الجهازي. 0 لفحص دور المركبات الترابطية ‎TGF-BET‏ في آلية المرض لبيتا- كَلسيمِيَّة تم علاج جرذان ‎Hbbthl th‏ تحت الجلد ب ‎mACRIIA-Fc‏ (المناظر الفأري لمتوالية رقم: ‎(V‏ أو ‎PBS‏ لصفرء م ‎٠١ ٠١‏ أو ‎Te‏ أيام ) ‎٠١‏ مجم/كجم من وزن الجسم) مرتين في ‎J‏ لأسبوع ) م*#ح ‏ ب ‎0-TN=‏ لكل تجرية على حدة). مقارنة ب الحيوانات المعالجة ب 085؛ تؤدي المعالجة باستخدام ‎Tire‏
ARR
‎MACRIIA-Fc‏ إلى الزيادة الكبيرة في عدد ‎LDA‏ الدم الحمراء ( شكل ١أ)‏ و مستويات هيموكريت ( شكل ١ب)‏ وهيموجلوبين ( شكل ١ج)‏ ؛ مع الزيادة المصاحبة في عدد الخلايا الشبكية ( شكل ١د)‏ ( من ‎٠١‏ أيام بعد المعالجة حتى اليوم ‎(Tr‏ يظهر أيضاً تحليل متغيرات خلايا الدم الحمراء في الدورة الدموية ‎(RBC) red blood cell‏ أن متوسط حجم جسيمي ‎(MCV)mean corpuscular volume 5‏ ( شكل ١ه)؛‏ متوسط هيموجلويين جسيمي ‎mean‏ ‎(MCH) corpuscular hemoglobin‏ (شكل ١و)‏ وتركيز ‎(MCHC) MCH‏ (شكل ١ز)‏ تؤدي جميعها إلى زيادة في جميع فئران تمت معالجتها ب 0801718-72 واقتراح أن ‎MACtRIIA=‏ ‏© يحسن فقر الدم في الخلايا الدقيقة للثَلأَسيمِيَّة وإعادة تخزين محتوى هيموجلوبين لكل ‎RBC‏ ‏بالإضافة إلى ذلك؛ يتم تقليل مجموع خلايا نخاع العظم والطحال والقّعِدَة/متعدد الألوان المتأخر 0 الأرومات الحمراء بدرجة كبيرة بعد العلاج باستخدام 06]-018011/8. تم تقييم تحليل البنية الشكلية لكريات دموية حمراء بواسطة تبقيع ‎(MGG) May-Grunwald‏ ويظهر انخفاض في تَفاوْتٌ ‎cif‏ الكريات ‎ALE‏ وخلايا مستهدفة (شكل ال) لتحديد تأثير ‎on‏ 6]-خانتأعمم ‎the‏ فقر الدم المرتبط ببيتا- كَلاَسيمِيَّة» مستويات الحديد الجهازية (شكل ‎١‏ ي)؛ تصنيع الترانسفيرين (شكل ‎«(IK‏ تشبع تراتسفيرين (شكل ‎(J)‏ و مستويات فيريتين (شكل ١م)‏ على فئران مصابة بالقَلسيمِيَّة. تم تقليل تشبع ترانسفيرين بواسطة حث تخليق الترانسفيرين أو مستويات حديد جهازية منخفضة (شكل ١ل).‏ تم أيضاً تقييم الصفائح الدموية؛ الخلايا الأحادية؛ الخلايا اللمفوية و الخلية ‏المتعدلة البيضاء (شكل ١ن).‏ تم تقييم تأثيرات © ]-/ا 01/0171 على تضخم الطحال في ‎oy‏ مصابة بالثَلاسيمِيَّة بواسطة وزن الطحال و قياس إجمالي عدد خلايا الطحال. تم تقليل عدد خلايا الطحال ووزن الطحال في 0 حيوانات تم علاجها ب ‎MACIRIIA-FC‏ مقارنة ب فئران معالجة ب ‎PBS‏ مصابة ‎aru‏ (شكل ‎.)٠‏ على غرار ذلك؛ يتم تقليل عدد وتمدد الأرومات الحمراء لنخاع العظم ‎le)‏ النحو المحدد بواسطة التبقيع بالأيوزين ‎eosin‏ /هيماثوكُسيلين ‎(hematoxylin‏ (شكل ١ع)‏ فئران ‎dallas‏ ب ‎.MACtRIIA-Fc‏ تم تجميع نخاع العظم والطحال وتم التحديد الكمي لأرومات الحمراء بواسطة تعداد الخلايا المتدفقة بواسطة التبقيع ب 4119ا18. تؤدي المعالجة باستخدام ‎MACRIIA-Fc‏ ‎Tye
-١١١- إلى تقليل كبير في كريات دموية حمراء 5 في فئران مصابة ‎Landi‏ (شكل ١ف)؛‏ مما يشير إلى تصحيح تكون الكريات الحمراء غير الفعال في الجرذان. ‎MACERITA-Fc 7-7-7‏ يؤدي إلى تقليل تكون الكريات الحمراء غير الفعال في ‎Ghd‏ مصابة ‎Zan‏ لتوضيح دور عائلة فائقة من ‎La TGF‏ مركبات ترابطية أيضاً في تكون الكريات الحمراء غير الفعال في بيتا-كَلاسيمِيَّة؛ تم تجميع الطحال (شكل ‎IY‏ شكل 27( ونخاع ‎adie‏ (شكل ‎oY‏ شكل "ج) وتقييم تمايز الأرومة الحمراء بواسطة تعداد الخلايا المتدفقة بواسطة التبقيع ب 071/19 والتوزيع بالانتشار الأمامي/والجانبي ‎((FSC/SSC)‏ يظهر تحليل الفترة الزمنية لنسبة الخلايا في المراحل المتقدمة في تمايز مكون الكريات الحمراء؛ الأرومة الحمراء 0 الأولية ‎(E-Pro)‏ خلايا آلفة للأصباغ القاعدية الأرومات الحمراء ‎((A-Ery)‏ 53280 المتأخرة ‎(B-Ery)‏ ومتعدد الألوان الأرومات الحمراء والأرومّات الحَشْراءٍ ‎((Ery=C) 035 gal‏ أن ‎oad‏ تمت معالجتها ب ‎MACIRIIA-Fe‏ والتي تؤدي إلى تقليل خلايا ‎TER119/CDT1‏ غير الناضجة ( الأرومات الحمراء القّعِدَة ومتعددة الألوان المتأخرء ‎(B-Ery‏ في طحال مع الزيادة المصاحبة في نسبة الأرومّات الحَمْراءٍ ‎Cpl pall‏ (0©-/50) (شكل ‎(IY‏ تكون هذه النتائج 5 متوافقة مع تقليل ‎MACIRIIA-Fe‏ لتكوّن الكريات الحمراء غير الفعال. يوجد انخفاض في الأرومات الحمراء ‎+TER-199‏ وفي عدد 8-/50 في نخاع عظم من فئران تمت معالجتها ب ‎MACtRIIA-Fc‏ (شكل "ب)؛ لا توجد زيادة في كمية الأرومات الحمراء الناضجة واقتراح أن تكون الكريات الحمراء غير الفعال لتنخاع العظم في فئران مصابة بالثَلاسيمِيَّة والتي لم يتم تصحيحها بواسطة معالجة جرذان باستخدام 6 ]ما 180617. 0 يؤدي فقر الم المزمن ‎Lard‏ إلى حث تكوّن الكريات الحمراء الناتج عن الاستجابات التعويضية للإجهاد. مع ذلك؛ تكون تلك الاستجابات غير منتجة حيث يكون تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال. يتميز تكون الكريات الحمراء غير الفعال بمتطلبات إنتاج ‎RBC‏ والتي لا يمكن تعويضها بوايطة الانتشار المعجل و التمايز غير الناضج للأرومات الحمراء بسبب الخلية أولية النضج بواسطة تلاشي الخلايا لخلايا النضج. بالتالي؛ تكون نسبة عدم النضج غير المتوازن/ الأرومات 5 الحمراء الناضجة عبارة عن سمة لتكوّن الكريات الحمراء غير الفعال لنَلاًسيمِيَّة. لدراسة أيضاً تأثير
Tye
-١؟7-‎
‎MACtRIIA-Fc‏ على تمايز متعلق بسلسلة الكريات الحمراء وتكون الكريات الحمراء غير الفعال؛ تم ترقيم معلقات خلية تم الحصول عليها من فثران ‎dallas‏ ب 6 1018014(|/2-1 وتم ترقيم عينات المقارنة المناظرة لها باستخدام الأجسام المضادة إلى ‎TRI‏ و1564119. يتم تحليل تمايز مواد منتجة للكريات الحمراء بواسطة تعداد الخلايا المتدفقة البوابة المرتفعة ‎TERT19‏ كما تم الوصف سابقاً )2006 ‎et al, Blood‏ نانا). وفقاً لذلك» تمثل فئران ‎dallas‏ ب ‎MACIRIIA-FC‏ نسبة منخفضة من الأرومات الحمراء الناضجة / غير الناضجة في طحال والتي تشير إلى تصحيح تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال الناتج عن الإجهاد. في نخاع عظم للأرومات الحمراء الناضجة / غير الناضجة لا تختلف النسبة بين ‎due‏ المقارنة وفئران معالجة ب 6]-008014(/8 واقتراح أن تكون الكريات الحمراء غير الفعال لنخاع العظم في فئران مصابة بالثَلأسيمِيَّة غير صحيحة 0 بواسطة معالجة 0180041/8-76. تقترح هذه النتائج أن مركبات ‎ACtRIN‏ الترابطية تساهم في تمايز الأرومة الحمراء ولكن تكون غير فعالة ‎Load‏ في طحال تكون الكريات الحمراء ‎PB‏ 10- يكون ‎(pug aly‏ عبارة عن منتج تحلل هيموجلويين وزيادة بلازما بيليرويين الناتج عن تحلل الدم والذي يكون سمة لتكوّن الكريات الحمراء غير الفعال في م-كَلاسيمِيَّة ‎VA‏ في التحليل الزمني؛ يتم 5 تقليل إجمالي مستويات المصل وبيليروبين المباشر في فئران مصابة ‎aru‏ تم علاجها ب ‎MACERIIA-Fc‏ من © أيام من المعالجة واقتراح تحقق تحلل الدم الناتج من تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال بواسطة إعطاء 0]-018018[/8 (شكل ؟د). فقاً لقيم ‎cpg yal‏ يتم أيضاً تقليل مستويات مصل لاكتات ديهيدروجيناز ‎(LDH) lactate dehydrogenase‏ في حيوانات تم علاجها ب ©0]-8/ا[008015 مقارنة بعينات المقارنة بعد ‎٠١‏ يوم من المعالجة (شكل ؟د)؛ ‎ding‏
‏0 أيضاً تقليل تحلل الدم في النسيج في الفئران التي تمت معالجتها ب 06]-8/ 118011 تكون المراحل المتأخرة لتكوّن الكريات الحمراء مسئولة بدرجة كبيرة عن إنتاج هيموجلوبين ناقل للأكسجين ‎(Hb) hemoglobin‏ 8 بروتين رباعي الوحدات يتألف من اثنين من- جلويين و اثنين من الوحدات الفرعية ل]- جلوبين. تكون ]-ثَلَسِيِمِبَّة موروثة عامة في اعتلال الهيموجلوبين بواسطة إنتاج جين مختلف أو غياب ]- جلوبين مع التراكم التالي للواحدات الفرعية غير 5 المتزاوجة. تترسب الكمية الزائدة من الجلوبيولين الحر غير المرتبط في إنضاج خلايا شبيهة
‎Tye
-؟١١-‏ بالكريات الحمراء ويؤدي ذلك إلى إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية60165م5 ‎reactive oxygen‏ ‎(ROS)‏ و تلف إدخاظ الأكسدة الخلوي الذي يعمل على الحث المسبق للمواد المنتجة للكريات الحمراء. يتم أيضاً فحص تأثير ‎MACIRIIA-FC‏ على توليد نواتج ترسيب الجلويين. تم تقييم توليد ‎ROS‏ على تمايز الأرومة الحمراء الأولي بواسطة تعداد الخلايا المتدفقة باستخدام داي كلورو داي هيدرو فلوريسين ‎dichlorodihydro fluorescein‏ (شكل 7ه). تحليل ذويانية الهيموجلويين على الأرومات الحمراء الذاتية ‎Laan‏ أولية المعالجة لمدة ‎$A‏ ساعة باستخدام -8//ا 00015 ‎Fc‏ أو ‎PBS‏ (شكل أو). مرة أخرى لفحص الآليات الخلوية المرتبطة بمعالجة ‎MACHRIIA-FC‏ تمت زراعة طحال- المشتق من خلايا الأرومة الأولية واستخلاصها من جرذان ‎HbbthIfthl‏ في وجود أو في غياب ‎.mMACtRIIA-Fc 0‏ تم استخدام نموذج معروف جيداً في تمايز الأرومة الحمراء الأولي (تم زراعة المواد المنتجة للطحال ‎sad‏ © أيام في وسط تمد خلية جذعية خالي من المصل مكمل ب عامل خلية ‎eda‏ فأري» ‎Epo‏ وديكساميثانون ‎(dexamethasone‏ ثم يتم تمايز المزارع الغنية بالأرومة الحمراء الأولية في وجود وحدة / ملي لتر ‎Th 58لم/٠١١٠١و Epo‏ لثلاث أيام. وفقاً للملحوظات داخل الخلية الحية؛ تؤدي المعالجة باستخدام ‎MACERIIA-Fe‏ إلى زيادة كميات 5 ميموجلوبين في ثَلَسِيِمِيَّة الأرومات الحمراء. مع ذلك؛ تمثل هذه الخلايا كميات منخفضة من الهيموجلويين المترسب المرتبط بالغشاء عند المقارنة بالخلايا المعالجة بعينة المقارنة (شكل ؟و). وفقاً لذلك» تنخفض كمية أنواع الأكسجين التفاعلية ‎(ROS)‏ التي تم الكشف عنها على هذه الخلايا في خلايا تم علاجها ب ‎MACRIIA-Fe‏ (شكل 7ه). بالتالي؛» تؤدي المعالجة باستخدام ‎MACHRIIA-Fc‏ مما يؤدي إل تقليل سمية السمية الخلوية لترسيب الجلوبين وإنتاج ‎ROS‏ ‏0 المرتبط به؛ الإسهام في تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال. عامّة؛ تقترح هذه اليبانات أن انتقال إشارة 8015118 المستهدف تعمل على تعديل تمايز الأرومة الحمراء واحتجاز مركبات ‎0181١‏ ‏الترابطية بواسطة ‎MACERIIA-Fe‏ تكون الكريات الحمراء غير الفعال المصحح مع أفضلية تكوين الأرومات الحمراء الناضجة وتقليل نواتج ترسيب غشائية مرتبطة بالهيموجلوبين. 7-3-7 يعمل ‎MACHRIIA-FC‏ على تعديل تلاشي الخلايا في ‎ol‏ مصابة ‎Aer‏ ‎Tye‏
-ه١١-‏ تم فحص تضمين أعضاء عائلة ‎—TGF‏ بيتا على عملية موت الخلية في بيتا- كَلأَسيمِيَّة- المرتبط بتكوّن الكريات الحمراء غير الفعال بواسطة تحليل التعبير الوراثي عن حالات تلاشي البروتين الأولية على كريات دموية حمراء باستخدام تعداد الخلايا المتدفقة . رغم عدم وجود تغيرات كبيرة في التعبير الوراثي عن البروتينات المتلاشية في الأرومات الحمراء لنخاع العظم (شكل ؟أ)؛ يظهر تحليل طحال الأرومات الحمراء أن ‎L-Fas‏ يزداد على مجموعة 50-8 لخلايا (شكل ؟ب). يظهر التحليل المقارن لتعداد الخلايا المتدفقة متعدد المتغيرات على طحال خلايا يتم الحصول عليها من فئران تمت معالجتها ب ‎MACRIIA=Fc 3 PBS‏ أن التعبير الوراثي عن ‎Fas-L‏ يزداد على الأرومات الحمراء القّعِدَة غير الناضج ومتعددة الألوان المتأخر ‎(B-Ery)‏ وينخفض على الأرومّات الحَسْراءٍ ‎pall‏ التلَوْن ‎(Ery—C)‏ (شكل *ب). على النقيض؛ لم يتم تعديل التعبير 0 الوراثي 88-1 على الأرومات الحمراء ‎BM‏ (شكل ‎«(IV‏ بصورة مشتركة؛ تظهر هذه النتائج أن انتقال إشارة 8014118 يُعدل مسار ‎Fas/Fas-L‏ على الأرومات الحمراء الناضجة. بصورة جماعية؛ تقترح هذه البيانات أن انتقال إشارة 8014118 يعمل على حث موت الحلايا السابق لأوانة للأرومات الحمراء الناضجة المرتبط بتكوّن الكريات الحمراء غير الفعال. على نحو غير مثير للدهشة؛ يتم تقليل التعبير الوراثي عن 85-1 على المجموعات الفرعية ‎Ery=C 5 Ery-A‏ لخلايا 5 التي توضح تأثير انتقال إشارة 80118 بصورة أكثر وضوحا على الأرومات الحمراء الناضجة (شكل *#ب). ويزداد عدد الخلايا الموجبة القمعية في حيوانات تم علاجها ب ‎MACIRIA-FC‏ ‏(شكل ؟ج). تتسم الكريات الحمراء غير الفعالة ‎andi‏ بواسطة تلاشي الخلايا الكتلي للأرومات الحمراء الناضجة. تشير دراسة تأثير معالجة ‎MACRIIA-Fe‏ على تلاشي الخلايا أن معالجة جرذان باستخدام 0180158-70 توفر عدد منخفض من الخلايا الموجبة القمعية مقارنة ب 0 عينات المقارنة المناظرة لها (شكل 77( واقتراح أن انتقال إشارة 801118 نت خلال تنشيط 1-0 ؟ يمكن أن يتحكم في تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال بواسطة تعديل تلاشي الخلايا مستويات الأرومات الحمراء الناضجة. 5-7-7 يتم زيادة التعبير ‎Shall‏ عن أكتيفين ‎[GDF‏ مركبات ترابطية بصورة مفرطة في طحال تم الحصول عليه من ‎OE‏ مصابة ‎Aad‏ ‎Tye‏
-١١1- 8 ‏أكتيفين‎ A ‏أكتيفين‎ ACtRII (MRNA) RNA ‏تم تقييم مستويات التعبير الوراثي عن‎ ‏بواسطة‎ Lard ‏و6011 في طحال من تم الحصول عليه من النمط البري وفئران مصابة‎ ‏واقتراح‎ GDF11 ‏أكتيفين 8 و‎ (A ‏أكتيفين‎ (mRNAs of ACtRII ‏يزداد جميع مستوى‎ .qPCR ‏أنه -ه/ا 08018 يكون مؤثراً من خلال واحد أو أكثر من المركبات الترابطية له في تحسين‎ ‏تحليل بقعة وسترن بروتين تم الحصول عليه من‎ (TE ‏تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال (شكل‎ 5 ‏مصابة بِالثَلأَسِيمِيَّة تم علاجها ب 0]-018011/8 يظهر انخفاض كبير في‎ hi ‏الطحال من‎ ‏وتضمين أيضاً‎ (of ‏(شكل‎ PBS ‏ب‎ dallas ‏مستويات بروتين 60511 مقارنةٌ بجرذان‎ ‏المسؤول عن تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال. يظهر‎ AGRI ‏6018المركب الترابطي‎
A ‏تحليل كيميائي هيستولوجي مناعي أيضاً أن مستويات بروتين 60111 ( وإلى حد قليل أكتيفين‎ ‏أو أكتيفين 8) تزداد بشدة على خزعة طحال من فئران مصابة بالَلاسيمِيَّة ويتم إبطالها في‎ 0 ‏بواسطة‎ Lad ‏حيوانات تم علاجها ب 06]-018015(/8 (شكل ؟أ). تم التأكيد على هذه النتائج‎ 800١١ ‏على النقيض من أجزاء الطحال؛ يظهر تحليل مركبات‎ (of ‏التبقيع المناعي (شكل‎ ‏مصابة بِالكَلاَسيمِبّة (شكل ؛كب). بالتالي؛ يمكن‎ ld ‏عدم تراكم 60511 في‎ BM ‏الترابطية على‎ ‏أن يكون التعبير الوراثي المفرط عن 605711 في جزءٍ الطحال في فئران مصابة بالثَلأسيمِيَّة‎ ‏مرتبط بتكوْن الكريات الحمراء غير الفعال.‎ 5 ©0711 ‏إلى تقليل مستويات التعبير الوراثي المتزايدة عن‎ MACRITA-Fe ‏يؤدي‎ 0-7-5 . ‏الملحوظة في الأرومات الحمراء الذاتية لثَلأَسيمِيَّة أولية‎ ‏باستخدام‎ Bhar WS Ly ‏لتحديد أي أعضاء عائلة )16- بيتا يمكن تضمينه في معالجة‎ [GDF ‏©]-8/ا 018015 يتم إجراء تحليلات كيميائية هيستولوجية مناعية بروتينة في أكتيفين‎ ٠١ ‏لمدة‎ FC-MACPJIA ‏مسار إرسال إشارات. تم علاج فئران مصابة بِالَلأَسيِمِبَّة ب 085 أو‎ 0
ActRIl (GDF11 «GDF8 8 ‏أكتيفين‎ (A ‏يوم ويتم حصاد الطحال؛ وتثبيته وتبقيعه لأكتيفين‎ ‏وم-501802 (شكل * أ). يظهر تبقيع كيميائي هيستولوجي مناعي مستويات مرتفعة من‎ ‏لاستكشاف مع إذا كانت‎ Ea WEIL ‏الكاءه وم-501802 في فئران مصابة‎ 1 ‏مسار إرسال إشارات يتم التعبير الوراثي عنها بصورة مفرطة‎ [GDF ‏البروتينات الموجوة في أكتيفين‎ 8 ‏أكتيفين‎ A ‏في نماذج فأرية أخرى مصابة بفقر الدم»؛ تتم مقارنة التعبير الوراثئي عن أكتيفين‎ 5
Tye
-١١-
‎GDF11‏ في ‎old‏ مصابة بالَلاًسيِمِيَّة بمستوى الأكسجين الطبيعي في الجسم؛ نقص الأكسيجين
‏و ‎RBC‏ جرذان (شكل #ب). يتم تحليل ‎FACS‏ ثَلاَسِمِيَّة الأرومات الحمراء الذاتية الأولية تم
‏علاجها ب ‎PBS‏ أو ‎MACHRIIA-Fc‏ لمدة ‎£A‏ ساعة ثم حضانتها مع أجسام مضادة نوعية ضد
‏أكتيفين ‎(A‏ أكتيفين 8؛ ‎the‏ ببتيد ‎GDF11‏ معزز و6 ببتيد ‎GDF8/GDF11‏ منشطر مما
‏5 يشير إلى أن المعالجة باستخدام ‎MACIRIIA-FC‏ تجعل التعبير الوراثي عن 60511 طبيعياً.
‏يشير التحديد الكمية لتبقيع 60511 أن معالجة الجرذان باستخدام ‎MACRIIA-FC‏ يؤدي إلى
‏تقليل مستويات 600511 بدرجة كبيرة ‎JSS)‏ #ج). تم التأكيد على تقليل التعبير الوراثي عن
‏1 عند معالجة فئران ‎dia DEL Alias‏ باستخدام 0180158-16 بواسطة تحليل
‏كيميائي هيستولوجي مناعي الطحال لجرذان (شكل «#د). يؤدي م *<ه.,. لا42. بالتالي؛ 0 الحقيقة أن ‎MACRIIA-Fe‏ يقلل فرط التعبير الوراثي عن 606711 في أنسجة ثَلاَسيمِيَّة يكون
‏دليل إضافية على أن ©]-8/ا[1018018 المصححة تكؤن الكريات الحمراء غير الفعال بواسطة
‎.GDF11 ‏استهداف‎
‏7-7-7 تؤدي معادلة 60511 إلى استعادة تمايز الأرومة الحمراء.
‏لتحديد ما إذا كان التعبير الوراثي الزائد عن 60511 مسئلاً عن تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال؛ تتم زراعة ثلاسيمية الأرومات الحمراء الأولية في وجود أجسام مضادة معيقة ضد أكتيفين
‎.GDF11 3B A‏ تعزز الأجسام المضادة -60711 ( وليس أكتيفين 8/ و 8الأجسام المضادة
‏) تكوّن الكريات الحمراء؛ وتؤكد أيضاً على أن 606511 يتحكم في تكوّن الكريات الحمراء بشكل
‏سالب بواسطة حث تكوّن الكريات الحمراء غير الفعال كما تم التحديد كمياً بواسطة تعداد الخلايا
‏المتدفقة بعد التبقيع ب 6071/184119 (شكل ١أ).‏ تم تقيم توليد ‎ROS‏ على تمايز الأرومة 0 الحمراء الأولي بواسطة تعداد الخلايا المتدفقة باستخدام داي كلورو داي هيدرو فلوريسين (شكل
‏تب). م*<0.,..؛ ‎.£=N‏ بالتالي؛ ويؤدي مضاد -600711 أجسام مضادة معيقة إلى استعادة
‏تمايز الخلية وتقليل نواتج تكتل الهيموجلويين في ‎Landi‏ الأرومات الحمراء .
‏1-7-7 اختبار الكشف عن مركب ‎ACtRIN‏ ترابطي
‎Tye
حم ‎-١‏ ‏تم تطوير الاختبار للكشف عن؛ وتحديد؛ والتحديد الكمي لمركبات 8004[1 الترابطية الموجودة في مصل الدم؛ على وجه التحديد؛ التعبير الوراثي عن الطبيعي عنها في الأمراض المرتبطة بتكوّن الكريات الحمراء غير الفعال (على سبيل ‎(JU)‏ ثَلأَسِيمِيَّة؛ متلازمة خلل التنسج النخاعي؛ فقر الدم المزمن المميت وفقر الدم المنجلي). يتألف الاختبار من اختبار ‎ELISA‏ مقحم على أساس تغليف ‎ACtRIIA-Fe‏ متبوع بالكشضف عن مركبات |[8014 الترابطية الموجودة في مصل. يمكن استخدام اختبار ‎ELISA‏ 801118 تجريبياً ( على سبيل المثال» حيوانات) أو إكلينيكياً (على سبيل المثال؛ مرضى من البشر) لتحديد؛ الكشف عن و/أو تحديد مركب ترابطي أو مستويات مستقبل في مصل الدم للمساعدة في أخذ قرار العلاج و/أو تحديد فاعلية المعالجة المخصصة لتعديل مركب ترابطي ‎TGF-BET‏ أو مستويات المستقبل. ‎A-¥=1 0‏ يتم زيادة مستويات 60111 في المصل لمرضى ‎Aad‏ ‏تم تطوير اختبار بيني ‎ELISA‏ المذكور سابقاً لقياس مستويات 60511 في مصل. في ‎ELISA‏ ‏تم تغليف الأطباق ب © ميكرو جرام/مل من ‎MACIRIA-FC‏ (شكل ‎(IV‏ تمت إضافة جرعات زائدة من 60511 ناتج عن ‎sage‏ الارتباط الجيني إلى الأطباق ‎١,١(‏ نانو جرام/ ميكرو لتر؛ ‎٠#‏ ‏نانو جرام/ ميكرو لترء 7,5 نانو جرام/ ميكرو لتر). تم غسل الأطباق باستخدام ‎PBS‏ 960,1 ‎Tween 5‏ والبروتينات المرتبطة التي تم الكشف عنها باستخدام أجسام مضادة ل 6058/11؛ يليه الكشف باستخدام مضاد 096| لأرنب مقترن بإنزيم بروكسيداز الفجل الحار. 60711 المرتبطة بالأطباق المغلفة ب©]-2/ال008015 بطريقة معتمدة على الجرعة مما يشير إلى الاختبار يمكن استخدامه بصورة فعالة للكشضف عن والتحديد الكمي لمستويات 60511 (شكل ‎(VY‏ تقوم ‎ELISA‏ باستخدام ‎MACHRIIA-Fc‏ الذي تم الكشف ‎die‏ بدرجة ‎ALB‏ مثل ‎٠٠١‏ بيكو جرام/مللي 0 لتر من 60711 ناتج عن ‎sage‏ الارتباط الجيني. تم اختبار مصل من مرضى يعانون من ‎andl‏ للتعبير ‎(Shall‏ عن 600711 باستخدام ‎ELISA‏ ‏المقحم باستخدام ‎.MACIRIA-FC‏ كما هو موضح في شكل ‎cA‏ تم زيادة مستويات 60511 ‎=F‏ ‏مرات في مرضى تعاني من ‎Band‏ مقارنة بمستويات عينات مقارنة تتمتع بالصحة. ‎Tye‏
-١١4- (Fraud ‏لتحديد ما إذا كان المستويات غير مركبات ا(8015 الترابطية تزداد أيضاً فى مرضى‎ ‏وأكتيفين 8 في مصل المرضى‎ A ‏يتم أيضاً قياس مستويات التعبير الوراثي عن أكتيفين‎ ‏تم تغليف‎ ELISA .8 ‏وأكتيفين‎ A ‏للكشضف عن أكتيفين‎ ELISA ‏المذكورين. تم تطوير اختبار‎ ‏ناتج‎ A ‏الأطباق ب © ميكرو جرام/مل من ©]-8/ا8015. تمت إضافة جرعات زائدة من أكتيفين‎ ‏نانو جرام/ ميكرو لتر؛ #,؛ نانو جرام/‎ »,١( ‏الارتباط الجيني وأكتيفين 8 إلى الأطباق‎ sae ‏عن‎ 5
Tween 960.1 PBS ‏نانو جرام/ ميكرو لتر). تم غسل الأطباق باستخدام‎ Y,0 al ‏ميكرو‎ ‎- ‏(شكل 89) ومضاد‎ A ‏-أكتيفين‎ alias ‏تم الكشف عنها باستخدام‎ al ‏والبروتينات المرتبطة‎ ‏يليه الكشف باستخدام مضاد‎ (R&D systems) ‏الأجسام المضادة‎ (AY ‏أكتيفين 8 (شكل‎ 8 ‏(شكل 1ب) وأكتيفين‎ A ‏لأرنب مقترن بإنزيم بروكسيداز الفجل الحار. يغلف كلا أكتيفين‎ 6 ‏الأطباق بطريقة معتمدة على الجرعة مما يشير إلى‎ ~ACtRIIA-Fc ‏(شكل ١٠ب) المرتبط ب‎ 0 ‏الاختبار يمكن استخدامه بصورة فعالة للكشف عن والتحديد الكمى لكلا البروتينات. على غرار‎ ‏بيكو‎ ٠٠١ ‏وأكتيفين 8 عند مستويات منخفضة عن‎ A ‏يتم أيضاً الكشف عن أكتيفين‎ «GDF ‏جرام/مللي لتر.‎ 8 ‏لتحديد مستويات التعبير الوراثي عن أكتيفين وأكتيفين‎ ACtRIIA-Fc ELISA ‏تم استخدام‎ ‏لم تتم زيادة أي من أكتيفين‎ (GDF11 ‏في المصل لمرضى تعاني من كَلاسيمِيَّة. على النقيض من‎ 5 ‏(شكل 1ج)؛ وأكتيفين 8 (شكل ١٠ج) بروتين في مرضى مصاين بالثَلاسيمِيّة؛ مما يشير إلى‎ A apd ‏ترابطي 60611 يشترك بصورة فردية في عملية مرض‎ ActRIN ‏أن مركب‎ ‏إلى تغيير متغيرات الدم جرذان من النمط البري.‎ MACHRIIA-Fe ‏لا يؤدي‎ 4-3-7
MACIRIIA-FC ‏يوم باستخدام‎ Vo ‏تمت معالجة جرذان 6/ا0578 من النمط البري لمدة‎ ‏يشير تقييم عدد خلايا الدم الحمراء (شكل‎ PBS ‏//ا 8 مرتين في الأسبوع) أو‎ مجك/مجم٠١(‎ 0 ‏الدّم (شكل ١١ب)؛ هيموجلوبين (شكل ١١ج) إلى عدم وجود تغيير في مستويات‎ Gua ؛)أ١‎ ‏تتم ملاحظة وجود انخفاض طيفي‎ MACIRIA-FC ‏لمعالجة الجرذان باستخدام‎ Lam ‏المتغيرات‎ ‏الدم‎ LOA ‏على تعديل متغيرات‎ Load MACIRIIA-FC ‏(شكل ١١د). ولا يعمل‎ GAN BK ‏في‎ ‎.)ز١١ ‏(شكل‎ MCHC 5 )و١١ ‏(شكل‎ MCH ء)ه١١ ‏(شكل‎ MCV ‏مثل‎ (RBC) ‏الحمراء‎ ‏لكل تجرية على حدة.‎ o-Y=N ‏م*<ه.,.؛‎ 5
Tye
ERY
‏على الطحال ونخاع عظم جرذان 6/ا0578 من النمط‎ MACtRIIA-Fc ‏تقييم تأثير‎ Load ‏تم‎ ‏على زيادة وزن الطحال في نمط بري جرذان؛ ولكن لا يوجد تأثر‎ MACERIA-Fe ‏البري. يعمل‎ (VY ‏(شكل‎ abe ‏نخاع‎ WIA ‏على عدد‎ MACIRIA-Fe ‏الطحال. لا يؤثر‎ WIA ‏كبير على عدد‎ ‏على تحفيز تمايز مكون الكريات الحمراء‎ Mm AC TRIFA-FC ‏يعمل‎ ٠١-؟-+‎ 60511 ‏تثبيط كلي ل‎ 5 ‏الدم الحمراء»؛ تم‎ WIA ‏على زيادة متغيرات‎ MACIRIIA-FC ‏لفحص الآلية الخلوية التي يعمل فيها‎
MACRIA-Fc ‏إجرا مجموعة من التجارب المعملية حيث لا يوجد دعم يساند التأثيرات المباشرة ل‎ ‏أ) وفي تمايز‎ ١9 ‏بشرية كما تم التقييم في اختبار تكوّن المستعمرات (شكل‎ 0034+ WIA ‏على‎ ‏متعلق بسلسلة الكريات الحمراء في المزرعة السائلة (الأشكال ١ب و١١ج). حيث تشير كلا‎
RBC ‏الاكتشافات الإكلينيكية والدوائية إلى الدور الواضح ل 01801511/8-70 في تحفيز متغيرات‎ 0 ‏بواسطة خلية إضافية في الوسط الدقيق‎ MACERIA-Fo ‏؛ ومن المفترض المساهمة في تأثيرات‎ ‏تكون الخلايا البشرية +0036؛ التي تم إغناؤها بصورة مرتفعة لسلالات‎ (BM) ‏لنخاع العظم‎ ‏طويلة المدى ثم يتم تقييم تمايزها‎ BM ‏شبيهة بالكريات الحمراء؛ مزروعة بصورة مشتركة مع مزارع‎ ‏(؟ وحدة / ملي‎ EPO ‏أيام من الزراعة في وسط مكمل ب‎ ١ ‏المتعلق بسلسلة الكريات الحمراء بعد‎ ‏(-القعِدَة أرومة حمراء) ولكن مع‎ EryAL ‏لتر). عند اليوم 3؛ يتسم مخرج المزارع بصورة سائدة‎ 5 ‏كبير من خلايا +0036 ناضحة في خلايا‎ ha ‏#ميكرومولار)»‎ +) MACRIIA-Fe ‏إضافة‎ ‏(متعدد الألوان/الأرومّات الحَمْراءٍ السَوِبَةُ التلؤْن)؛ واقتراح أن العوامل الناتجة عن الخلايا‎ EryB/C ‏تساهم في التأثيرات المتعلقة بالكريات الحمراء ل©8-1ال00/61 و أنها على‎ BM ‏الإضافية‎ ‏في المراحل النهائية أو نضج‎ Lala ‏دوراً‎ MACHRIIA-Fc ‏يمكن أن يلعب‎ (EPO ‏النلقيض من‎ ‏لتحديد السيتوكينات التي يمكن أن تساهم في تأثيرات‎ (GF - د١١ ‏الأرومة الحمراء (الأشكال‎ 0 ‏الترابطية.‎ ACRIN ‏تم علاج خلايا +6036 باستخدام العديد من مركبات‎ «MACtPJIA-Fc (GPA+) ‏الموجب‎ A ‏تؤدي المعالجة الزائدة ب 60111 إلى تقليل انتشار البروتين السكري‎ ‏والخلايا أثناء عمليات التمايز ويعمل©]-/ال018010 على عكس هذا التأثير بصورة فعالة؛ بينما‎ ‏توضح هذه البيانات‎ (ZV IY ‏لا يكون له أي عواقب على الخلايا غير المعالجة ( الأشكال‎
MACtPJIA-FC ‏أن تثبيط 60511 يساهم في التأثيرات التحفيزية المكونة للدم ل‎ 5
Tye
-١١١- ‏خلاصة‎ £1 ‏ع ع ع‎ ‏لحمراء و‎ f dag yd f ‏ترسل إشارات تحكم لتمايز‎ BM P/ ‏أ كتيفين‎ J f ‏لبيانات‎ f ‏بصورة مشتركة تشير‎ ‏ع ع‎ ‏من نوع |١/مستقبل أكتيفين من النوع ¥ يمكن أن يقلل تكوّن الكريات الحمراء غير‎ BMP ‏استهداف‎ ‎١١ج ‏عاج “ + أ‎ » od KN Fa - . ‏العم‎ - . ‏شتراك‎ J ‏لبيانات‎ ١ ‏لدم في بيتا تلاسيمية . يبشكل محدد توضح هذه‎ J JR ‏ويعمل على تحسين‎ Jal J “ fon. - . - i foe we - _ wa NE - . ‏تكون ذات أ همية‎ GDF 1 1 ‏مستويات‎ J f ‏لدم وتشير‎ f ‏لمرتبط يفمهر‎ f ‏في بيتا تلاسيمية‎ GDF 1 1 5 ‏وصف ا لمتواليات‎ ١7 ‏لمتوالية‎ J ‏معلومات‎ :1١ Js ‏جد‎ ‏الوصف المتوالية‎ ‏رقم‎ ‏قح تاتالا‎ LEP ANF LI STO ‏شت‎ TIGRE ‏ا قي ار توي ا‎ ‏ارح ا اا‎ RA THIN I EGS ‏ل ا ل تت اا زا‎ ‏لجووج ص را‎ EERO ‏لى ببتيد لمادة | تع تيت بم م‎
ACTIV ‏تار ات تلت الت ارت ا ضر ايزا تر رااان‎ RRR Sa
ER ER RL LE ‏اتا‎ AVR IF IIS NEY RV Y BLP GAR HEN TILEY ‏ته له لظف‎ NL IAS ‏اع لعو‎ LRA son ‏منتحة ل م | اعم | لاع‎ ١
AVEHELDI ‏قا ان ضة جاتر لل انرا لالت قا لكاروا ل قتا اتن رت‎ : ‏تل ل تا الجا لاتق‎ TMA FEV IAGR TWF OR DAV IRI IMY AMGIVIRELASE .
CERARGEVIE MIP YRCE IGGL EMORY VH EER BV LRDYNGHEAS (Gan
MAMLTET IE ETA ‏زات ناي لتاق اا لفقت تان‎ TOMORL TY LI TTERIVIVVIN 0 ‏برق عر رار لزي‎ ‏داق ا ا 0811 ا ال ا ا ار ا ا ا ا ا ل‎ TWIN ‏اجا‎ J ‏ويا‎ all ‏معالج قا بل‎
IRR ‏التي لت اي‎ TROY OR TORY KGS PEVY ‏رت ل‎ Y
BrP ‏د‎ 8 . . he ‏لخلية) ل‎ J ‏(خارج‎ ‏بشري‎ ACtRIIA ‏معالج قابل للذويان‎ ‏ل 7 لاا ا وا ااا‎ 17335 ‏وه‎ Tv OGITHLRDT ROYDRT TIVE TELS PRVY Fe CORGREMIR 5 ‏ارد‎ os Re] ‏(خا رج ا لخلية ( ل‎ 1 ‏بشري مع‎ ACtRIIA ‏حمض‎ ٠١ ‏حذف‎ ‎Tye
ع ‎٠ . .‏ = ‎TET TTT‏ ‎TI CT IA TUTE CTO TC‏ ا ‎RC TET‏ ‎hy i + + CRETE‏ 1 ب 3 ‎TT EEDETTE He‏ لمانا انما ماقت ااا ‎TN Dl TE Tr) Kl iS IE‏ تعاض الاق ‎pe 3 SUNN EE‏ روم رمم جيم د 2 مجم رقم ‎TIE TACK PCAGR‏ لم اا انج تا ات ل ‎SE . : polit iy : -‏ ا ‎FER‏ الوم لا بع ريد ‎FTTRAXC { TET‏ الات ‎ATG ET TERERARARGACASAA CORA‏ ‎ARGAR TAY‏ ا ال ‎PT‏ ا مخ و ‎RENEE‏ ‎PECTRCOTEORA‏ نيرت محر ورت ‎Api pn‏ ‎Fro Bia roa ART THT TEAC THGATARTATOR‏ ‎RESTA ASL Pana.
Rahal nl - faa)‏ دي ب ‎TO "ORAL ERLE:‏ $ ب ل ل ‎TTORASATRETS‏ تج ااا ا ااا ادا اغا لاق تاب فض ةخضم فضت ‎ACEC E ATTICA‏ ‎PEAT INGO IAEA RAR ARR CCOTERAGTE‏ ار اك ارجا لاجد ال ‎oy‏ 7 تجا لات لجس م ‎ATERUTATGRTNGEAD ELA ion‏ ‎AT TTT TRE TRC TAT RAGGA TATE TE TAA TRARBRGT TITY‏ ‎FE SEHR RN‏ ار يد د ‎GIR‏ ‏ا ‎RAT ATTRACTS‏ لجاب تر 5 0 ‎LCA BLT A : LL Sel 8‏ الإنفرم فت الات قثن يض عقت الحفقة ‏ الا ناا 201 لدان ل ساك نو ا جب ساد لد ا دي ٍ ترب سي ا ا ‎GUCACTTATGTTAN‏ الاب اف امال ماي ولد ‎AX Fis‏ تا الماك ‎TOTES‏ تت اها مها اتا ‎BOCA TAT CATT IG TOCA TIGER ACAGUCATEACRAGN 50‏ ‎GUGEGEAT TEI ATTIC TS OAT I TIGASTE TR CAGE IR TOA -‏ ٍِ ا ا ‎[EMEC RO RE RIN‏ ‎N‏ امي تالقان تمان با نات ااا تا ‎GT‏ اي ‎hk aE . .‏ تبان ا فا اا ‎SER NTE TIT RLY TTR‏ متوالية حمض مينى | ‎CTAROCUTINT STA ESN gi) CTGCRETIATTRGANGTERARACIAGE‏ يٍ ‎REAR‏ 1 ترف ري ري أنقا نالا نان لماجا لاج لال الا ‎٠ ٍ RT TTR AR ATR TI‏ ا ود لح جو اتا ل ‎GIT GTR TT GRA AGU NUR TIT TAR‏ ‎TTRETIGTE TUT CRA BAGUIO TTRUTTA TTR,‏ مقا ‎AAA TTT RET TRTETC CASA OCCA AR ATCA RIALS CL.‏ ‎TYOCRATACAEERUAAACAST CATGECAARATCAR TALS - oo.‏ 010 : ة لبروتي 83 | حجري وجيت ‎RAAT at CATES‏ ماقت ذال فضت ات الال لفت ‎TET‏ ‎TR TTR CRS TTORTY‏ ذا ان ا ل لا ‎DOT‏ 2 » 5 مشفرة لبروتين ما تانق يفف 011700007 ال ‎SLA‏ لمات مفرة لفن جرم الأققة دا انا | الامنضا الى المح ‎Bia A LALA i = - RA TOTP TODA OAD‏ "م ‎TITRA TUATCAC‏ ل نش ‎GOTCCAGRAMAUGAG ACA‏ منتجة ل ‎SEC TAR IGE ActRIIA‏ ا ‎ORIN UE TAIN RT 3 3‏ ترا تاجات ‎AGCATTTORTHAARAS‏ ‏وه لوح رم وج حي ‎ATTY LAT ats als fe‏ ‎TG‏ امامت امات تنا اماما يم ما 1 ال المت ا 01 ال ‎PERL £5 LER BIRR a‏ لمات 6 ‎TY‏ ‎TE :‏ 4 مضه ضعو ‎pti os 2 5 ER BAAR‏ ‎TT EOI UACRRA CITED 1‏ لالض ايان ا ا 1 يقار ايض ااا ‎TEGO CTAARAL WALLIN‏ لمم كما جا قاض : ااا امح حي 2 1 ‎TA‏ جا مقي 1 ‎SORTRT TIARA‏ ‎TRU TET TERRRAR LARLY 0) Jad‏ الاق تخا انث قا ‎3G‏ 3 : افق ‎TUAARBLTRARIATET‏ سن انما ‎CATATC‏ ‎at) AIK‏ ديل اااي يرل عا لي ‎TR‏ يلات ‎STH LEAR SEAN tho SVE‏ ,5 ‎TRACT EGEETTECCUTTRAAN TT TOALGITEED‏ 10 ‎RT TC A CT RI TRC 5‏ ‎Te‏ ل ‎RGEE‏ يا نا قات اتا ا ‎LEAT CGRTACCCATORRCAGATTERTALCORGAGCTACATORD‏ 3 اضر ماما ل تا ‎CATER‏ باج اماما ااا اا عا ا ل ا : الا ا ا قن ‎POPRCAE THRGASRETRCTATARA CY TOCEAAR SCE‏ ل ل در يكير ع حر ل و ‎POCACAGETAT‏ ‎TOTOGC‏ ا ا ال ا ا تا 7 107 ا ا ب ‎ia 4 a‏ لا وم لاا ا ا ‎TATA SERRE‏ اي بقنا النفن ا ااا افق عاض ما لأطضيى الخحاضا ااا انال ماق + ااا ل لديا الا لا ا ب 83 + ‎ba IR 17 "1 Ak‏ اند لب الاح اح اتح جل يح وول 5 ممم جنا - ل د توا مقو زع لخر ته فقت ا لضا قت التق مض ‎TT‏ ‎GUAGGARE 0‏ ال مع فق ات بق لا تا تال لفقا ا د ل الك لح قاب الاب ‎LARS TITER‏ اا تتفم اا ‎TAT‏ فاق العا ا تافاضا اما كل اك قة 17 انض مرق رض ال اصرق وت قت نك القت لات الا ‎BACCARAT TOR AGRE‏ ا ا ‎AL RA‏ لال ‎TGARGARA TH‏ لطا ا ل نض اجا يد ‎TL TR TAGE TERA GAR T TACT CREA TRAE‏ اها 1 ‎ac oon GOTTA TAG‏ ‎SECRET IATCARBCTERATETRET TRAE (ACLLAGA Ah‏ ‎TPE TAR RTE I TOR CAR TE‏ ال توا لاج ماني بت ‎py onc AA TAT IT‏ ‎GROTAACRARTATIRTTROCACAGN LET pina bl‏ ‎TT TOOT CAAA GARTC TAGTOTATER‏ ا ‎ATER RATETTEACTT TOOT CCA ARGAATY‏ - - ع ‎٠ ٠‏ متوالية ‎aan‏ أمينى = شفة 0 لبو ‎A‏ لد ‎Ain‏ جال دمل اج لايل ‎TIT UIT‏ اه المج 1 جد ا ا مان دان الا ال 0 رايا رجا لبي حا مسغر : ات ل ع “رج اوتا اموا ‎TOG TAGAT‏ مالل يشمي الج ارا تاجات فت لا ااانا الم الفا اس ا د ل ال لضت لضان القت مانن المت ناي قا . . . ‎PA A AL FRI T IOS Tee‏ موا اول ييا الا ا ‎CT‏ ا ل ‎I‏ ودان ) رج ‎ht LIA ATR PCRS CTO TR TS‏ ل 1 الم اانا مانت غم اماق 7 لذبي لدبي 3 ‎TARTS AN EA TR I TOA TRY‏ ‎y‏ خا ‎Sepia Ro‏ د 2 33 1 ‎a‏ ا ل ‎pa)‏ ‏دي ل ‎CAG ICTERAGT TAT‏ لفقم تقوم ا ‎SAGARA TRA TTS‏ ‎i 5 dans SOR hoe, STE ATEALRAGTT TTT TAT II TORR ERTS “ i‏ ‎SOTETRAGHECRATR TENS TRATORAR AGT CTTATTTTCOMS‏ ‎ORO T RA AGE REC Cc‏ معت ; ‎SCTE‏ ‎iad‏ ِ 4( أ نابنب مقرب لقت فر لتقا ‎TARA‏ اانا لالت نال ميقا ‎٠‏ امم لمانا لاضن مقا ‎FS‏ ‏بشري ‏ل ا 7 لم ا بروتين اندماج ب ‎vw ٠‏ لضي د و يجيت حدر ات ‎le‏ : 5 \ ق < \ رج = ‎V8H‏ قر وإزياي اناي الت ل مامتا 1757 اج زيم 7 روات ‎YOHE‏ ره ل ل ل ‎TREE PRE LL EE VFL EE ELM ISR‏ ‎EY‏ لأا اراي د اها ‎PR EE TR‏ د سا ولإرتاي ار اخو بح ل ما ممت ‎TE PR‏ رم ‎VD BVH‏ 0101117 ‎TERRE 3 2 2 5 ais Risa tet‏ ناي الخو يل لير ماد لور عر ‎ell . .‏ ل ل الا 8 حا 8 1 ‎١ :‏ قا . ودان 3 ‎i‏ ترج ‎BOK IA VENFALPYPIERTISKA KERR‏ لخليا بل للذ " جوع جيه ‎SRL‏ ا معد ‎NENG‏ ‎AS‏ اي ‎BRST, YS IL‏ وجا عق اع ‎OT‏ جوع عو اال ‎br ho fe . ctR‏ 3 ا ا ديح ل ‎BRIS‏ لح زا الات ‎op‏ + لخي وى موا كن ‎FY‏ 5 ‎A A‏ م مج ‎WOOETYFSCAVMHERLIRY {J HY TOESLELE RG‏ بنطاق ‎Fc‏ ‏بلضاق
—\YY-
FLERE OE NAR VRE BOERNE aE
EV ‏ا‎ INC BRT DOV EERO S FEV FF COCKGUMC HR ERS UF EES +, ActRIIA
EV TORT oN EY PRP TOG THICP POPAPELLGGFSVFLFPORFRDTING | ‏بسري‎ ‎SRT EE ON ‏و عم سج‎ HE AVE VHA TR BR ERO YRS TY ‏ردج‎ 7 ‏جر بصو 11717151100 الخ تاه تست ولا لالظ‎ 2 . .
REM TKN AL CLR BOD AVENE SRO PERNY ETOP Lang | FC ‏مندمج بنطاق‎ 315100735177237 ‏متوالية رائدة لميليتين‎
MEFLVNVALYFMEWTISYIYA Gall ‏نحل‎ A ‏متوالية رائدة لمنشضط‎ ‏ب د‎ i 0 q
MOAMEBOLOOVELLOSRY EYRE | OF ‏مو للباازه‎ 2 (TPA) aud
ActRIIA +4) ‏يفضتو زعت ما نمضتت‎ . Ye
ActRIIA- ‏متوالية‎ ‏ل‎ ActRIIA- ‏و‎ hFc ١١ ‏و‎ ‎N ‏عند الطرف‎ mFe
ACtRIA- ‏بروتين‎ ‎Yo al a ‏مع‎ Fc
TLR SET EC LF FAN EK OR TH TOV ERC DE DR RRO FR TN ERT 868 2 ‏ما عوج وأا‎ MOY ‏م الب‎ SKE TS PEVY ‏بير وري تجوت مك‎ ERS Y PREM . wl.
TOOETHTCR RCRA PELL OO PEV FL FFP PEITIN SETPRVICVUVDVER | — ie ‏حمص‎ ‎BEY FH DOVE CHR AY TH DR 07 RU AVL ‏لوعو ا‎ MGR ‏اله‎ ‏وو 15177217772 قوتت لتقل‎ PFRERGVYTLIPSREENTRENOVALTCL ١ ‏ف جل‎
EGE PED TAYE EERE PERN YET ‏لامع‎ S INS ‏اا تع‎ SLU TVS RNG ‏لطرف لنطاق‎ 0772075117701 ‏ماق‎ HGR ‏خارج‎ ActRIIA ‏ا‎ LLC AV EVE FA I LOR OE TOE LF FRAN WO ROR TILT
VERTED ERE FATHER S58 PEI VROECRLOD ‏غير ري ديت اف‎ ActRIIA-hFc¢
CS FEY FO CE REF SY FREE TOP TS PU TPR FP TOO ‏ا 9 عمو‎ ‏لط نيج‎ LOG PS VEL POR PEO LMI ‏لوو ل جاع ناج بات حكن حرط لحر‎ 1031201300 KORVERKAL | ‏م الج مع متوالية‎
اج ترا رات توا لاا لاج ل ل ا را ار عر بن حا ب ا 1703 ‎FONT 5‏ 0 حرج اجرج المج - ; — ‎fap.‏ بخ سج جا ‎TPA‏ رائدة مضع ‎EN ESR PRY KT TREY LDS DGS FFL Y SEL TVORG RECOGINVRS‏ ‎HEALENHYTORELALE BOR‏ توالية ش نووي منواليةه حمصض 599 شفرة ن ‎ActRIIA—-‏ ‏مسفرة 0 ‎hFc‏ غير ‎Las‏ مع ب > ب - 5" متوالية ‎TPA‏ رائدة = 7 بروج يري ‎RAITT‏ اج دج رالا رقي نئي لو ا تمق التاق ال فعاضت لاعن الاقا انا ااانا 1ن 1 از عام مارم ب اا رضت له لطا لفق ووا ‎ART‏ ااانا را لاا ااا ‎TITY‏ ااا الا الل فق ‎TRATRAARA‏ ابا لجان ‎RITA‏ ‏وجي جوم ‎CRB‏ تقفو توق انمض بيجع جوزت لا ‎A AAR TA‏ ‎TAR ARR AR BAG‏ ع و ار ‎TGA‏ ا ل ا ‎TR TC OT TG TO GR SOOT AR TR TOIT TRA TIA AR‏ تي اتن فا قم رج لبن ال ا تب قا فقت ‎AGT PTTOTTAT TT TOO GR‏ ليا اطاط ‎NTN nak CC‏ جر ‎ada RECN re A ae RN‏ از ا ‎ar A ATR‏ ار ‎ER‏ را ا براي ل كي 3 رتت لات شا اتا لل ‎RGA‏ قات الي بايا عق حا نقتت ار رقت لانت اا اا فر انأو رار لانت لان انض لم تامعن اقم ‎CAAT TCR ACT GET ALGY ١‏ ل رت ل عت ‎GTEC TRA CC‏ 7ت اتاتارات انان تت ناا ‎TAR TCU AAR‏ ماج ]امار نجام الجا اجاج تاعاق ممق ا نت فتغق تم وفيت ‎CTO CAA‏ فم وا وشت ال انق قات تا فشا لاا اي يلد اي ‎CIE‏ لاض داس ‎CHER TOR‏ ري ولاق االنزايا ا ‎CER‏ رز يج عض ارق وال ل دا لا لقال الحا في فوت ان ال معفم ‎CA TOT CCAS RG‏ الم شان [ مقا نام[ ون مضل مضه اقيض اينازال انان |[ اانا ااانا ناتف اما ‎TE‏ ااا يا ‎SOE‏ ب حو و0 نو لقث الا نات ولتت تالا ا ل لل ذا ا ‎ST EA‏ بعتم ا ‎RIN BR SE RICE TE‏ اميا ‎RG ET £ S10‏ لق مب م لو ‎NER‏ ‎lal‏ محرا ريام يلام ‎FTIR‏ رج ياي ‎Nn HR DE ER eT FINN AEN RT PNT‏ الاج ام لخي يع ااي اذا ياغ اللاي يوارج الج اج باج ا لاا ا 1ن لانم شتات ناا لدنم البق ‎TEAGRCTCTECAURAD‏ ‎tor Ta‏ فداء ار اجن ‎Fac‏ و ا إلا ميم ثم الالبتفيقة اتغقاتي ب - ‎Gd‏ ‏= ‏قايل للذوبار معا > قا ‎x‏ للذ ‎Ob‏ ‎hd - -‏ = 88 بشرى 0 يا مع ‎i .‏ - ‎MIS SET IELY‏ اقيم ‎ETRE IY NANWE LE THOS IL ER EEE OER LHC‏ ‎KR GCWL DO EN LR ECVATEEN EON TFC OCEGN FONER FTHLE BNGEDP . 8 £ ١ o‏ ‎dona‏ عند ‎١‏ ف ‎TRRED N‏ ‎EVTYEREP eX‏ ‎٠.‏ ب - ‎j 2 Las)‏ نية حذ ‎dana ou‏ عند ند ‎٠‏ ب ب الطرف © لنطاق ‎EC‏ ‏الأحماض ‎And‏ ‏ص ند
د -. ‎١١‏ لمتواليمة =
اج \ \ _ جه ‎he‏ - ض 0 ‎NTAPHVALRLLWGHELW POIORSEAETRECITY NANWELERTNQSOLER‏ لوجع بح جين برد أ و ‎RIESOTIRLVEREOWLY‏ ا الما عت ان لات ‎ida‏ [ | التاق مضع 9ط 0 الست 20 ‎Hie‏ بروسس ‎O°‏ | المم وضع روي معدي ممعي وو ودع دوع سح مم ا ممعت مرجع جوع ع2 ولق اماو تمع تج يت كو عو متا 10 ل ‎dati‏ ل ‎LEVELWLITAFEDNGS LIDYIEGMIITENELS | ActRIIB‏ التق 7ت متا لا ‎DERARNVLLMADLINY :‏ ا ا ا اللو ل ا ل ‎VISGAINFGRDATLET‏ لقانت عت بأد ‎LADFOLAVRFREGEDD‏ ‏بشرى ‎{A64}‏ تسوت لوم و7 الماع نوع طبع محم ات المع ات اتا تالفالا ِ = الا ا ا الا ادا الا ا لا ل 3 ‎PRESSE‏ ال ادق ‎IPRSVREPTITOLVGL‏ ‏توالمة لى ‎A vin‏ مدوائدٍ ‎ral a]‏
بج ال وبا 8 خارح الخلمة) ل رح — مد دعت بعص0 2270201-02 اللي نل لج الات ج552 ‎Zu ActRIIB VY‏ رى ‎١‏ 710701007077378 : = و مجع عع 2007 ع ع ص ند ب ‎١١7 2-١‏ لمتواليمة ِ قم: ‎١٠١‏ ‏رقم .
- أ 7 0 مدوائدٍ ‎hy (He‏ = - - معالج ‎Jd‏ للذويان : ‎٠‏ .* (خارج ! لخلية) ل ج 8 بشري مع بسري ‎YA‏ ذف ‎EAS . ١١‏ لفق ‎BRODER LOY‏ ناته لوت ‎TRAN EL ER‏ ¥ عن لتم 2ت ‎FIORE MERE TFTHLRE & 5‏ ار لور لاا لز ل و الات كايا ما أمينى عند الطرف ‎C‏ ‎(ie‏ عند 9
= ع ع ‎Yi}‏ ش الأمنية الأاحماض الأميند ب - ‎١١-4‏ لمتواليمة 53 قم؛: ‎١٠١‏ ‏رقم . ا يا الاي ادا اال ‎FW CV DEY EV ENA TE PR EEO‏ و لاو ا ل مرا الأ ‎SRT EE‏ ‎TITAN ATER‏ عومجم ‎ACA AOR‏ ا و مع و ا اي لج 037330000573070 تت موق حيري موي اح مج و حال وما مم وجوه مضق عاق عات ‎TRAR TRAC TTOAALT‏ مواقت ومع مم7 لا الوح للم لاا اعد ‎CN CR‏ لايجا كا زلا ل ا د ع لجاع جوع عه جع ووه وات برقت مص معدت وو 7707070777 يمع ممع عر لمعه معي ‎OI TAOS‏ 037-3077 5 ‎ow‏ . وو ومو ع ‎BTR IR‏ لع نرت باع احرج صا لوعي ووو لات 7ن 2 مجعم ‎PTR rp WI he yo < 5, TTT‏ جحي ‎RI RT‏ حر ‎Cm PPE‏ متوالية حمض نووى | دوعس 000-070 70010-00017197 اتا ‎SRSA hd‏ + رييخ نكي رود يخي كي يادي > ينم اا لد يعي ‎HES A‏ يلا دام لجال ‎Fo a‏ ‎CRE CRD TRAC‏ مجع ‎CC A A TA RA RA BOC‏ ‎ETON ACCT SAAC CA CTE CAG TROTRAAGATCARGEUTCIGIRECET Cu,‏ ‎IY LIA IY >‏ و ‎SAN‏ لاجد يا جاع ‎Sl‏ اج جد مع ‎Ta‏ د واحد لا ‎ER oT‏ لم لد جل اد اجاج ‎DE‏ ‏مُشغرة لبروتين ‎Bala‏ | ضاي ‎CONC CASO TO ATAR TRACT II PAGO‏ م100 ب ‎I‏ "م ّ< 1 ج00 تو وت بتع قم تت مما 7 مم ورم اوت رع ولح دق حرم ‎CAC‏ مت بح ات نرت ل ل يسام يني دعي رهن 5 ‎Srey‏ نم ‎rE FEAR TL‏ 3 منتجة (64م) — | +؟مممومججمعى وجو جو ممم تمس دعن ممه اومان قات يا لم ‎CREO‏ دضع مك ‎CO PER AEC FCA GEA PACT‏ ‎TE TCR ARGC CTO TUATAD‏ سم ست ملسم ‎ABARAT TS TA TO TRO‏ ‎AGU ETT AT xn ActRIIB‏ عم الموج مقس عومجم وات ‎Opi PEPE Fein LOR ٠‏ ايا ‎SHEN - EN‏ = مرج رمه مضه حي + ‎TAL AL TR TAT‏ م فم ‎BEATTIE‏ من ع ممه ممه وح ‎I PEG I GETS TR URN TPR‏ عا الي ‎ROOT‏ ‎ACE TE CARATS‏ قوت كز لل خا ل خضت ‎AGA‏ ضع نت ضعو ‎CA‏ ‏بمعو-0070 7 عم فاه بعص ‎RET ST ARG ARCA TCAR CT‏ موصو وص وحن وج ‎A PR‏ ووو ‎a‏ فال ‎A‏ ‏مقع مم ‎ROCCO‏ مم ‎AR CROTON EGA CGR COC TIGA TEAS TA‏ دعوو ‎NO TO AGAR TAG‏ اعت مرو وو ومع ‎CE A‏ وجو ومع بع مم معد ‎AA TE A AT TARA A TAC TRE‏ ‎TER TRUER‏ يرمع برعو ‎GA CE AC A RS RATE‏ ‎TET CCC TOAT TONGANGT‏ 707170702702000 ووه عم روه ع روه وما اموه ‎CT ANC‏ نعو ‎COCA‏ ‏معرب مطل مقا ممعم مجع دماج الفمقتاتتة ‎J‏ . ا ‎Og‏ اندما ‎z‏ يفشتمل ‎SOROELETR ECT YY HANERLER THOS AL ER CRO ENDER ICY AS WARS ER‏ ‎x 8‏ اق خار- ‎FOC RO CNSR STH PE‏ نياو تورك ‎ECAP‏ تاي ‎RL EN‏ نات تل & | رطعو تا ممعم ‎AGERE EPP TAR TEGO TR TOF‏ ‎EVRA N TR PR EEQVNE TYR YY A‏ اراي ‎ART EE TC DY AH ED PE VK EH VD‏ ‎“a 8 ٠‏ .> الخلية ‎ale‏ للذويان ‎J‏ ‏ب ‎JN ow‏ » ب ‎Ca I.‏ ا رقا لد نجام ا حي حرا ما جل اماع تحص باج " ‎cya‏ ‎PR ERGY TL :‏ واو ضايع ‎RKTT‏ لط يا ارم ايه مومع ا ‎SULA HOUSE‏ مسمس ‎SREEMTRNV SLT CL VEGF FE I I AVENE ANG PER KT TRF‏ ‎R BGR A664 } ActRIIB‏ لضت ‎OME REA LHR TOS‏ مه ‎FE‏ نوو ول ‎PRLYSRLI DES‏ . م : متوالية رفم : ‎١‏ {
SARA A j j ° | i B ‏بروتين اندماج يشتمل‎ ‏الخلية قابل للذويان ل‎ ‏وى لتخا نضا لم ا ات ا ملأتت 1 تت لخ تا‎ 1 ‏دالا ا لدم ا مالالا‎ YOR QEIVATRERFOVY ‏ب اير ل لمم شاط جام اناا‎ 237 ‏صم 1 مار‎ BRET ‏دس‎ STR Tovevivan | ‏مع حذف‎ 68 ‏كاري الثم لايم تج ا 1 ال ل‎ YY ‏الا ارط اضرا ضفتنت ااا‎ I SEAKGU FRE FWY TLR FORE ENTERS LTOL . Lf .
VERY PED TAVERN ES NEO FRENY ETT PVLOSUGERFLY SEL TVR RERKD ‏حمصضل أمينى عند‎ ١ ‏باط ا دن مياد لا لزي تحط لكاي ميات اا الال‎ . ‏مندمج‎ { YA: ‏رقم‎ ‎Fc ‏بنطاق‎ ‏للذويان‎ Jd ‏معالج‎ ‏(خارج الخلية) ل‎ ‏بشرى مع‎ ActRIIB £ ٠ ‏ع‎ ‎ETREC ‏الا اي ارا اا ادا ةا ال ترا تا تر جات لازا لما نضا اد ل‎ IRLY ‏توت ان لزت مت اا اا‎ IVA TEER POV ‏ني ا‎ ESN FONER ‏مور‎ o ‏وحذف‎ EC ‏لنطاق‎ YY
EWTYRRF
‏ع ع‎ ‏احماض أمينية عند‎
EC ‏الطرف © لنطاق‎ ‏ع ع‎ ‏(الأحماض الأمينية‎ ‏لمتوالية‎ ١1-8 ‏ومع طفرة‎ ( YA: ‏رقم‎ ‎L79D ‎ERR TV ANE ER TE SLE CROONER L HO YAS WRENS SET IRL . vy ‏اناما‎ OD ‏أن ارا‎ DRO ‏را لا‎ TEEN ‏ا كاز‎ FOO EEN PONER FTHL PERE . . -
BUTYERPET 7 ‏معالج قابل للذويان‎ ‏(خارج الخلية) ل‎ ve
م١ ‎-١‏ ‎ActRIIB‏ بشري مع أمينية عند الطرف ‎N‏ ‏لنطاق ‎EC‏ وحذف ؟ أحماض أمينية عند الطرف ‎C‏ لنطاق ‎EC‏ ‏(الأحماض الأمينية ‎١-٠2‏ لمتوالية رقم ‎(Y Ae‏ ومع طفرة ‎L79D‏ ‏بروتين اندماج ‎ActRIIB-Fc‏ غير معالج مع حذف + أحماض أمينية عند الطرف ‎N‏ لنطاق ‎EC‏ ‏ا اا اا مدي عسي 101111070001700 ‎YE‏ ١أمينية‏ عند الطرف © | مج ‎RETR Cres ear‏ توج فافجو ا ‎AVENE NGOS‏ امس ‎EMT RAVE LTC LV KORY‏ لوم مدت لوص م ‎RARE‏ ‎RYE TTR PLoS FFL YS KL TVD ES BROCE AC VIERA LHNEYT‏ ‎RG EC sL— Li‏ وات (الأحماض الأمينية ‎١-٠2‏ لمتوالية رقم ‎(Y Ae‏ ومع طفرة ‎L79D‏ مع متوالية ‎TPA‏ رائدة
-١؟-‎ ‏بروتين اندماج‎ ‏معالج‎ ActRIIB-Fc £ we £
BYRECT YY RANWELER ‏لسع دمع يد همض صو مومع اله وا‎ | Vala ‏و‎ EC ‏لنطاق‎ ‎1011007003 ‏ال‎ ‎TE PGE TR TCE PO PAPEL LOS PE RLF EDR ‏لص مسج ميم‎ c p ‏لاي‎ EH EL RE VK 1 VOY EV EAR TERR EEO Y NE TY RV VE VL TV LAD \ de a ‏د‎ of a as J Y oO
WINGER VECRVEN EAL PAP TERT IS ‏بوم رطعو ارقا‎ TLE PIR SENTENG - ‏لاق‎ VEY EEA SRG PE ETT PU LDS DES FIL YN LTV
DR ARNON SUV EAE EY TORE LE LE PER EC ‏اق‎ Li © ‏الط دف‎ ‏ع ع‎ ‏(الأحماض الأمينية‎ ‏لمتوالية‎ ١١-8 ‏ومع طفرة‎ ( YA: ‏رقم‎ ‎L79D ‏للذويان‎ Jd ‏معالج‎ ‏(خارج الخلية) ل‎ 7711700202003 220 ‏سي ص ومو عض لص رامع ريات مان حدر‎ THLE ١ ‏بذ رى‎ ActRIIB ‏اه‎ ‎22071 = : ‏ع ع‎ ‏[الأحماض الأمينية‎ ‏لمتواليمة‎ ١ 4-٠٠ { ٠١ ‏رقم‎ ‏متوا وصف متوالية‎ ‏لية‎ ‏ركم‎
١+. 7100007 ARWARE ST ١1 ‏ا تت ل ا ل ل ات‎ :
TIRLYRERCNLLD THCY DRQECVATRENPUVY FCICRGRFONSRFTHLFR ‏بشرى | م‎ ACIRIIB | YY : = ‏قابل للذونان‎ ‏وبا‎ ? ‏خارجٍ الخلية‎ =e ‏توالية ببتيد‎
HR ‏بوني‎ Ele $ - ‏هي‎ ‏أ‎ ١ 7 J 2 0 (ete ‏حمصض‎ ‎L ‏عند النهايمة‎ 2
C ‏الطرفيسة‎ ‎3 ‎£ £, el ‏ص‎ ‎- - ‏لمتوالية‎ ١-٠ 3 0 ( \ 1 ٠ ‏رقم‎ ‎FTE ‏تسو تمق الات ل كنات ام‎ ‏ل‎ TTL BT SNe IE TY IY BY Sen Ty EAR EEE 3 ‏ب ع ادح ب‎ pt ‏ب‎ ‏ل ا ل ا ل‎ THEN Bale ‏متوالية بروتين‎ | YA
FY PLOCTESNPONRER STELFBAGCREVIVED PFTARTLLTVLAYELL
FIGGLILIVILARRAY ‏متومتع تع اع ع عرق اموه رع اط‎ ; as ‏ل ف ا ا اا‎ LUNDIVAVETTPLOME QSWOUHRETFITIOME ActRIIB ‏منتجة‎ ‏ا ل ا ا‎ LULYLEGNI ITENDLO ‏لمعته م7501 7023072573 تلاتلا تت تا الا‎ ‏ال ل ا ل ا كيار الحا ما راد لاسر اناري اد ماكر ا الس ا ا‎ ‏ا ا ا ال ل ا ل ل ا‎ ‏ا ل ال لا ال ل ا الي ا ا ا ل اي‎ ‏ا ل ل لا ا ل ل ا‎ ‏ف اال‎ Y AE RR ES 73
TIHLVERGUSLDDRYOTIROROVATRENRGY E PUCURONFCRERFIRLER | ‏بشرى‎ ACIRIIB | 4
AQUERVEYRPRRTAPTY = ١ ‏للذونان‎ la ‏وبا‎ ? ‏خارجٍ الخلية‎ =e ‏توالية لى ببتيد‎
HR ‏بوني‎ Ele $
I ‏هي‎ ‎> ‎£ ‎AAI Sh I ‏أمينية‎ ‏يددٍ‎ ‏لمتوالية قم:‎ (YA ‏ية رقم:‎
-١- ‏زان سا التق واي‎ YY ‏عمد ناد تق‎ THOS CG LERCEQEQDX LHC YAS WRNSESS bd
TI ‏الا لات‎ LOE NOTDRGECVRTEETEQVYPOOORORFONERFTHLEFE & ‏بسري‎ ActR B 1 ' ‏قابل للذويان‎
LA ‏خارجٍ‎ ‎5 ‏رح‎ ‏حمض أمينى‎ Vo ‏عند النهاية‎ © ‏الطرقية-‎ ‎- ‏ع ع‎ ‏لمتوالية‎ 114-14 ( YA: ‏رقم‎ ‎GHGERETREL IVT RANHRELER TRIS CLER ‏كنظ لا لكام اج ل اليا حانا‎ A {RI B v \
FTIELY ERO LDF ROY ‏لاقت لايرف‎ REINA FOCIRERFLUSRFTHLPR 7 ‏س0‎ ‏امعد عومد‎ Er ‏قابل للذويان‎ ‘ ‏(خارج الخلية)‎ ‏ع‎ ‏ع‎ ‎٠١ 7٠ ‏أمينية‎ ‎(YA ‏لمتوالية رقم:‎
HERA ‏ناا ار‎ IY ‏ا ار نكري سان را تق يراتا بالل شتت‎ .
TI Tr a & ‏بشرى‎ ActR I I B 7 Y ‏قابل للذويان‎ ‏(خارج الخلية)‎
-١؟-‏ ع . ‎Yo‏ حمض أميني عند النهاية الطرقيمة- © ع ع - ‎١-٠‏ لمتوالية رقم ‎(Y A:‏ ‎A = B 0‏ : ل ا ل ا ا ا 0 ل ‎BEARER‏ ار الا اتا ا ا بسري © اد دالا ارح قابل للذويان متوالية ‎Age‏ ببتيد معالجة ع ع - احماض أمينية عند النهائية الطرفية - ‎N‏ لنطاق ‎EC‏ ‏ب ع وحدف 7 احماض ع أمينية عند النهاية الطرفية ‎C-‏ لنطاق ع ع الأمينية ‎١١-١7٠0‏ ‏ع ‏لمتوالية أرقام ‎Ye:‏ ( بطافرة نا 077170 ف تتا اا 1020 ؛؟ ‎١‏ بروتين ‎Leaf‏ ج | ‎ESEOUFRLHCYASHANSSOT IELVREGUHDDOFRIVERQECVATEENIY‏ - مم تدع معدي جوع مع حم ‎EC EO ES TH LT ER Sa‏ ‎POV PLE PEE PRD TL LE RE FE PC VIVO ERD DEV ET ER VINEE VHA.‏ ‎ES PL Ty LOW LN GREY RO EV ENA L PAPI RYT S - ActRIIB‏ الا ‎KTR‏ ‎ERY TLE PS RE EN THO A LT CLV OF Y PSD IA VEN ES RIOR J 9‏ جوزتا ‎LUNE‏ ميق معت مع امون م ‎DES‏ ارا لوت ‎DE‏ الع ا معالج مع حذف ‎١‏ ‏ع ع - احماض أمينية عند
-؟؟- النهائية الطرفية — ‎GKELALERGR*‏ ‏. 5 ل) لنطاق ‎EC‏ ‏.> .3 وحدف 7 احماض ع أمينية عند النهاية الطرفية ‎C—‏ لنطاق ع ع الأمينية ‎١١-١7٠0‏ ‏ع ‏لمتوالية ‎ARSE‏ ‏بطافرة ‎LvaD‏ ‏ومتوالئية ‎ll‏ ‎TPA‏ ‏ا ما ‎SCL ERI EGR RL ECAC RAGE BGT THLVE‏ مره ‎RIERA EL‏ ‎o‏ تب" ائد ار وو عع ‎FTHL‏ ريض موز ا جوج ام ا و لات ارلا برو ‎oe: i's d‏ 5 ا ‎LG vee ¥ LPR‏ ل مجرج و جروجو و حر + تقار لخر لقت ادا ‎FHS TT‏ بت ا 12 يتل وني الا اتا اتات ا لت ااا ‎ActRIIB‏ معالج ‎REEMTERO‏ وم اضوع المعو ونا ‎WL RGR ROK SAL PAD TERT TS‏ ‎EL CLES PED I AV BR A RE FERNY RP TR SR LARS PL YS RLY :‏ مومع ‎RE IHR TORS LA LE‏ 2150037 ع ع - ‎ales)‏ أمينية عند النهائية الطرفية - ‎N‏ لنطاق ‎EC‏ ‏ب ع وحذدف 7 ‎ales)‏ ‏ع ‏أمينية عند النهاية الطرفية ‎C—‏ لنطاق ع © (الأحماض ع ا لأمينية ‎١١7١-٠‏ ‏ع ‏لمتوالية أرقام:176) بطافرة ‎LvaD‏
-4؛1- ‎i‏ لسع ا ا ا لاا اتا ‎GRGEARETERCI‏ ‎ActRIIB | v1‏ بشرى ‎TT RLVEER DDD FRC DEQRCVA TERN FOVY FOC RIIPOS ER FTEL ER‏ و ‎AGGPRVTYEFPFTART‏ ‏قابل للذويان (خارج الخلية)؛ متوالية بولي ببتيد ع ع أمينية ‎١3-7١‏ ‏لمتوالية رقم: ‎(YA‏ ‏بطافرة ‎١740‏ ‎TE SURV CNC EDR URC AE WARE SE -‏ ل ‎ActRIIB ١ YV‏ يشرى ‎TELE RSC RD IRC DROE CVE TREN POV Y PLCC REN POSER PTR‏ ‎EOGFEVTYEPSPTART SN‏ قابل للذويان (خارج الخلية)؛ متوالية بولي ببتيد ع ع أمينية ‎١3-7١‏ ‏لمتوالية رقم: ‎(V7‏ ‏بطافرة ‎١740‏ ‎FPOLVEGFY RS DIAVENEINERR 1‏ تالكا اال اليا ‎ActRIIB | YA‏ بشرىي 07 237177030053700 ‎LEDGER =‏ ممصي قابل للذويان ا لت ا را ارت اللا نقتت عمد ل انان ‎FRC DRGECVR TEEN HVT‏ لاا الأب ا (خارج الخلية)؛ 22717772703170 توح سه صب جب 281711170137177 ل ‎LER‏ و ا ل د اد ا وا الات ل ا متوالية بولي ببتيد
١0ه‎ f) ‏لجة‎ ‏معالجة (أحماض‎ ‏ع‎ ‎١١ 4-7٠١8 ‏أمينية‎ ‎(YA ‏لمتوالية رقم:‎
LYaD ‏بطافرة‎ ‏مدمجة مع نطاق‎ ‏باستخدام رايط‎ FC 0 §LERL BOEQDRA LAL FAORANS 56 ١ 2111300007 ‏بسع‎ POV ‏بشرى عستتو 1112 را را‎ ActRIIB | ١ 4 ‏شك انا اند أ اذ ا <اعداز ع ارب دو لاود الحا لا ا اا ل ل ب‎ 3 2 . ‏ات ا ا يا بكي بر انا الات الا ار 7 ل‎ .
FTE EE REYNE TY REL TU LEN LNG EV KOR VE NRAL DAFT ENT IR obgdll ‏قابل‎ ‎FAKE RV Y TL PFI RE EN TRI A LTO LVRS FY PED I AVENE NGS :
ERNE REVISE DESK PLY REL TVOR EE WIGRV FICE VE SA LHENREYT
QUEELELIFGHY
‏(خارج الخلية)؛‎ ‏متوالية بولي ببتيد‎ ‏ع‎ ‏ع‎ ‎١١ 4-7٠١8 ‏أمينية‎ ‎(V7 ‏لمتوالية رقم:‎
LYaD ‏بطافرة‎ ‏مدمجة مع نطاق‎ ‏اا ا‎ Tr ET Te ENS FIR AA RAEN i Nate }
LERCECRODIRLECVRENRESS ‏بشرى‎ ActRIIB | ٠
TIELVERRCRDLOF NC IR RCV ATES PV YF OCCRGRFCRERFTHL FE =
AOGFEVTY END PTE STHORTHT PROP FELLER
PPLE ‏حا طعا‎ SRT RR TOY DY SHED ‏بورع‎ TRIE HI SLA! ‏قابل‎ ‏اك ا ا‎ TY RELY LHODW URGES FURY SNR LUA BY RRL 8 : :
FAKGOVREFQVY ELV PORERN TENGE LICL RAV Y PRR BVRWRE HAY
ENYETTERVEL DS RAS FPL YE KL TUN S RARE FE CVMHEAT REY T
QEELS LAPIS 7 : ‘ ‏(خارج الخلية)‎ ‏متوالية بولي ببتيد‎ ‏ع‎ ‏ع‎ ‎١١ 4-7٠١8 ‏أمينية‎ ‎Tye
١ 1-
YA ‏توالية رقم:‎ ‏زر"‎ 2
LYaD ‏بطافرة‎ ‏مدمجة مع نطاق‎ ‏ومتوالية دليلية‎ ©
TPA
PARLE CY LLL CGAY FYE PEAS CREAT TREC ¥ TIA NR ELEN TTTRRG
LERCRERCORELHCVAS WANES ‏يشرى‎ ActRIIB | ¢)
FLERE ERE SIT URGROVATREN FOVY FOOT RGR PURER FTRLER ‏اد‎ ‏ديا اح اك 76 قر راجا و ال ا‎ RPC 5 3 251717371070170 ‏ديا"‎ 0 1750755 ‏قابل للذويان‎ ‏7ر5 الات ارو لاز الا ناز اط ترا لاا اا ا‎ PE RIAVINEERGOY ‏ارت اا ا ا‎ FRI SVMHEATHNRYT 1553# ‏ا‎ : 7 "> ‘ ‏(خارج الخلية)‎ ‏متوالية بولي ببتيد‎ £, £ ٠١ 2-٠ ‏أمينية‎ ‎(V7 ‏لمتوالية رقم:‎
LYaD ‏بطافرة‎ ‏مدمجة مع نطاق‎ ‏ومتوالية دليلية‎ ©
TPA
RRR TREC FAT EL THR OL BR RGN HE § 8 GW ara 3 REE LD FRY DR ECVE TEEN POV E FOC RAR ONRR ETHYL FEA ‏يشرى‎ ActRIIB | ¢Y
SUT ECORAS TTI PEA FEATARE DUES SALVLOLRSPARE = ‏قابل للذويان‎ 3 ‏(خارج الخلية)‎ ‏متوالية بولي ببتيد‎ ‏معالجة بها صورة‎
© ‏متغيرة لمتوالية‎ ‏(تم الكشف عنها‎ ‏فى الطلب الدولى‎ ‏رقم‎ ‎NARA JAl AY
BEOGEARTRECIY FRAME LER TROERLERCEGE DER LECT ALWERNS BGT
1 ELV KER ON DENCY DRE CVA TEER ‏تدوع‎ FOOTE PUN ER FTHL PRS 6 ActRIIB | s¢Y
SEPREPRLS TT LFS GRP RA TARLEDORESALNLOL REPRE ‏ري‎ ‏قابل للذوبان‎ 6 ‏(خارج الخلية)‎ ‏متوالية بولي ببتيد‎ ‏معالجة بها صورة‎ © ‏متغيرة لمتوالية‎ ‏(تم الكشف عنها‎ ‏فى الطلب الدولى‎ ‏رقم‎ ‎NARA JAl AY
LYAD ‏بها طافرة‎ (
CRAERETRECI TYNE LEN TRGSCLER CRG EDR LHC YA NS aT )
YELYRHGONDRUERONORGECTR TR RU POV EPUCRANFONRRPERLPER ‏بشرىي‎ ActRIIB | ¢¢
GOPEGRRASTT ‏ب‎ CALM LOLSOVAKE =
THORTHIEP RS PRLLGG . 28 PRED TL TER TREY TOV INT RENDERED EVR ‏قابل للذويان‎ 10101078 :
AKG RE ROY VTL PRS EEN TROVE LCL NRF PED TAVENRS NAD
ENHYRTTRVLLS DEE FF LE KLTVUESREQUEEIVRS CE VAS MA LINEYT
‏(خارج الذ لخلية) ‘ سمدم ث0‎ ‏متوالية بولي ببتيد‎ ‏معالجة بها صورة‎ © ‏متغيرة لمتوالية‎
“ . (تم ‎i]‏ < 0 . 1 ‎a‏ الطلب فى ا ِ الدولى = = ‎a‏ ‎NARA JAl AY‏ طافرة نا بها ‎Lva 5d‏ - . م ‎FC‏ برابط تحجر اوبكر ‎COSMET TR LEAS‏ ممم تحرص ‎Ta‏ ‎i . TRI $0‏ مح الأو ص0 ص ودين لمجي لمق غت فم أن ‎CATO‏ الايد لل لقنن لاسر ‎NTR‏ يي جو يح ج وحم حارج ‎pve re‏ متوالية حمض مق 000 ‎CALGABGACC‏ مم مع 2000007 تلت وج ب ليت نجام الماح ل مع لاج لجا ا ل 6 5 , بم سسا ‎GCC‏ مع حدقا مقو دي مجم وعد ‎GTTORACTEY‏ ‏1 مكروص ا جردم حم ‎RENO‏ حمر ‎La,‏ 2 - : : نووى ضف ‎ABCASGFTANE‏ تامف صقا ‎RAGACAAKEC GEUEEEAGNES‏ ‎ETAT‏ ا ‎١ iy REL‏ اتويت وح = اغا تاياي ‎STENEEINAG QOTCCTCROC GECCTEIADDY‏ 29% رد ‎GARR‏ 3 سعد را وا ‎[CAREER A LA Na‏ لتقا اغا ‎GAATEECAAR GAGTACARET GUAAGETOTL‏ "م ‎Fie hy ٍ 5 NRE BREINER‏ 1 ارد اماي ال ‎SEE‏ ‏أ رقم . $ 7 ‎ASAQEUTRARG‏ اياحض الاقم ‎DUATORAGAR‏ مايال افا 1 لمتو - لجل دنج د لت لس ‎EE TG FF‏ راي ل واو وجي جه يا الجر مويه بجاح يج حي ب[ لخ مايا 1 نش تالكا كاد نا ‎AGARRCOATAS‏ تنا اتا اذا بق ادم وجي وا ‎CIN‏ ا ججح اح ص ل = 1 اد سي اي لمعن ضقاة لالامااة قفتت لفاك اتا الجا ااا ‎a A, are‏ 7 الال ‎ur‏ با اند تار لكي ‎ERC Bln Ae‏ عات قبا عبناي ‎CTREITOAARE GUITTCTATOC CANGRCRTT‏ وكيم وم اج اام سام بحت 8 ‎iN < ot et‏ > 1ل ‎e he‏ كير الي ري ا ماي إل ان بلقا لمافقاة محم قوق تجا توا ‎SUEAGAGTRD‏ ‏لجر ‎PRES‏ جورم ‎PORCINE PTE‏ لمحي يتم و يوم حجيي ‏ يح يوا حور ات ‎SOCTOOCETS CTERATNTGNS BUGECHIITT FDOT ia ‘‏ ‎BR‏ جد حي ليق اح كبو اح الو الحو ع ب ليوات ٍ ا الا ا بح 1 دق ناما تماص لاقت لتاقت انان نان افيض ع اللو يحم ‎NINE‏ : مجع م وح يدح 1 ب بجا الي سام ب مايالا اماما اما ‎ACETOTTOIC ATQUTTCETE ATGRUATERGS‏ التي : ‎ERR‏ ماح مك الم ‎SL‏ اميا د ققد جوموجحدوح مجو جصدومو ‎ATRGOD‏ 0 اا لواحا انا ل تانوات فغياقة لاض نضا ‎a A‏ حيو ‎SEER RAN‏ ا لام يج ات اورت ان ‎TEARGAGREE‏ ممه انق انث ا ا ‎VNTR SA, a a ar‏ ‘ 7 إل يحي جا 8 ‎COGUTGARKD‏ اام نت 0577 الاق ‎TEFIGTEGREC‏ ‎ARE‏ تاماما نا : اا الالح ‎at,‏ لماجا ‎COGOSAATET ATTTATTACR ATSCTRATTE SGERACTIRAR‏ وف مي ‎A BYES 3 SE RSS A ١ h em an‏ لاو ‎Ac‏ وا ‎ran‏ ديزا قدت لواف ارثا افق الاج اراق ‎CENADGAACT‏ ‎TL NTE‏ لياط الي ‎at NERS CNT‏ ورا و جرت قم تدا ‎TATHOETOET‏ وان ام صرت ‎ACUATARAQCG‏ ‏ا ا ليت اس يري ل يت ال ا ا تيا ‎CITOOEEEANE ATTERACTES TCRRRARGE STECT GEERT‏ ‎HIRSH NY,‏ ال بم اج الى ااا با ‎EY‏ ) الس ‎ot‏ ~ ‎TETRTORCES‏ فيكت نانانال عقوا لضا اراي خا ااام ‎hil : Sn i‏ 5 - بد وال يرال لا ‎bh‏ ةلاكد تيعو اناري ‎TATTTCIRTYT‏ اتات اننا لضت ‎TASCA‏ ‎A eke Y N ba 3 ele‏ 3 مغل مادا ‎O0OCERAGCD‏ “وج تمعد ‎GARATTTOTET ARTEARCACT‏ اجان تج اج رو ليد ‎SIE‏ الاج ل ا ‎es , htt So‏ > 3 ججال اديكناة ‎FHINEEEO00E AGETRACCTR THRALCOUGE‏ لداع اجاج اول ‎a‏ اد ادال يح اد تاك كد لقال تهات ريح يصو زرا ريحي اس الا لزن فقن عق تقاض انماضت تقااقتت مانت انمتا ‎ara POT TPOOTETTONS COORARALDD‏ حي الجر و جر ا ااا حاط اا لماجا ‎CUTS FTO‏ ال باستنا لاا : ‎i CTRL‏ ‎A TR Er Tete]‏ ا $1 تف" ‎Le)‏ شت وان اتات أ ل ‎SORGRANTRECT VI ANNRELERT as‏ برونبر ‎TI ELVIS CR LDL FI VD ROEIVATEENPQVY FOICENF CRERFTH LEE z‏ ‎SFE TYRE PR TAY THEO THT PRO PAPEL LGGEPIVILF PRN FRDT IMT‏ ب يي 0 3 ‎AUT RET UA al bo ETE‏ سس ‎RK TRF RRB ETRY‏ ترا ‎EX TOV A ERED PAV AICTE‏ 8 ادا 1 = 4 ‎FAIR‏ جلمد جره ‎LY‏ اك يخال ‎FAN‏ مات ‎oy x HDR THEE RT ON ANE ALR I EET SFREGQERERG ETL RE 3 | c | x‏ بم + اجن تحت لازا لاز ال زر ال م از رد ‎TEE RRR‏ الإ قي خا ا ‎EE he EINER‏ ل ¥3 يي لازي ‎EGFY PEL AV‏ كرتت الام 111 لتو ا ‎MILT, 221111137107577‏ جم ماع ‎pre rte EN‏ 8 | | مم : ‎EA LANNY TORS LE LE POR R‏ تتش صن ارا ‎FLY‏ ‏) ‏م اج ‎٠‏ ‏متوالية رقم ‎Ya:‏ ( . - مدمج بنطا ‎Fc tT}‏
-١4-
SORSGEARTR EY YVYHANWELERTNRQLERIEGEQURR LECT ‏ما جور وجي‎ | ¢ 7
TIE LY KNW LID FRC Y ‏تر" أند > تا برا أت تنا لجرت ات لصوت ور نار كيان اوجرا‎ bir PODRENT hs ELF EPR REL PLM ‏يي ا ابت الى‎ c at
RV KPI GV ‏را ار‎ TE PRE EO TRETYRVEVL ‏ال‎ LIRRYER
FRESH E LVR TRE I RS KO FRE FV TTL PRS R BUM TERR LCL 3 ‏نشت 1 على‎ ‏الا وار‎ PED ‏تار خط جا الأ زايد ون لازت الا رتم‎ FFLY ‏وتنا ل راز‎ . ‏ا ا ا ا ا ل ا‎ (R1£)ACtRIIB ‏مع حذف‎ ‏حمض أميني‎ Vo ‏لطرفية‎ f ‏لنهاية‎ ١ ‏عند‎ ‏(متوالية‎ C- ‏مدمج مع‎ (Tried)
Fc suas
MVLAAPLLLGFLLLALELRPROEAARGPAASAAAAAAA GDE)Y uj ‘A
AAAAGVGOERSSEFAPSVAPEPDGOPVUVWROHEREL ‏بروسس‎ ‏ل 157و فت ا 1ك لفاك .ا نوق رط لعز‎ EPR APPLOOIL LL
GLEDFOGDALQPFEDFLEEDEYHATTETVISMAQETRRA ‏غير معا لج‎ Gane
VOTDGAPLOCHEHFSPRVMETKVLEAGLWVYYLRPVIR i
PATVYLOH RLRPLTGEGTAGGGGGGRENIRIRSLKIEL S$ J « J skal ‏تا 2 ا‎ 115501151101013 7100501
TOLAVTSLGPGAEGLHPFMELRVLENTRERSRRNLGLDO ‏ولى‎ i Cg
OEHSSESRCORYPLTVDFEAFOWDWHAPKRYRANYCS 0
GOOEY ‏تحضيرى 7117نت بنخة لنت لسنغووب انط نات تبثن اا‎ ‏ا تا مانا كلت 11 انيار أ لا تجا‎ 05 Ea
GDF
_ \ ¢ «=
‎UCU TEU TOU TOGO THOU GU 8‏ اتات انا انتتناانانانت ‎١ 4‏ متوالية حمض قم و مم مس وو ومو م ‎TOGO‏ ممع وتات 00400 000000000000000 0ت أ نووي مشفرة 00 ق00100000000 50000004000000 غاما ات لطم مات وى الوق عت فا نانات اونا لمتوالية رقم: ‎COGOTGOCCCOTETOUGTTTGOGUGGCAGCATAGLCG EA‏ التعتممقمى مل للمع"ى الموامفممفتت مم تال افا تافعاتت خم معو موف فق لعا 0 اللذدخغى وامة عمو مهاد مو3ا مت نينو مفضا و توافتت اا معماحت خم نت فاصعل مم مالع الفمواحنقات 50000104 غامد 11701 فو بلأ7ئ ط ان ا ات لتاقي ا وات ‎GGACGAGTACCACGCCACCALCGAGACCOTCATTAG‏ ‎CATGGCOCAGUAGACGOACUCAGCAGTACATGATAGA.‏ ‎TGOCAGOOCTCTOTGUTGCCATTTTCACT TC AGO‏ ‎AAGGTGATOTTCAC AAAGOTACTGAAGGUCCAGCTG‏ ‎TOHITOTACCTACGGUOTGTACTCCGUCCAGUU ACA‏ ‎OTCTACCTOCAGATOTTGCOACTAAAACCCOTAACTG‏ ‎GOGAAGGGACTGCAGGGOCAGGOOGCGOAGGUCGG‏ ‎COTCACATCOUTATOCGCTCACTOAAGATTGAGC TGC‏ ‎AUTCACGCTCAGOUCATTOOCAGAGCATCGACTTCA‏ ‎AGCAAGTGCTACACAGCTGGTTOCGCCAGCC AC AGA,‏ ‎GEAACTGOGOCATCOAGATCAACTOCTITGATOCTA‏ ‎GTGGCACABADCTOOCTOTCACCTCCOTOGUGIOGG‏ ‎GAGCCGAGGGGCTGCATCCATTCATGUAGUTTCGAG‏ ‎TOCTAGAGAATCACAAAACOGTTCCCOGUGGAACCTON‏ ‎GTCTGOACTGCGACGAGUACTCAAGUGAGTCCCGOT‏ ‎GCTGOCGATATCCCCTCACAGTOOACTTTGAGGCTTY‏ ‎CGGOTGGOACTGGATCATCGCACOTAALOCGITACAA‏ ‎GGCCAACTACTGCTOCGGUTCAGTOUGAGTACATOTTC‏ ‎ATGCAAAAATATCCGCATACCCATTTGGTGCAGUAG‏ ‎GUCAATCCAAGAGGUTOTOCTOGGOCC TG ETO TALC‏ ‎CCACCAAGATGTCCCCAATCAACATGCTCTACTTCAA‏ ‎TGACAAGCAGCAGATTATOTACOOCAAGATOCCTGG‏ ‎CATGGTOOTGGATCGOTGTAGCTOCTOT‏ ‎ABGPAAAAAAAAAAAAAGVGGERSSRPAPSVAPERDG 2‏ ببديد ولي ‎CPVOVWROQHSRELRLESIKSQILSKLRLKEAPNISREVY‏ ‎KOLLPKAPPLODILDLHDFQODALQPEDFLEEDEYHAT‏ ‎600١‏ لبروتين ‎TETVISMAQETRPAVOTDGSPLOCHFHFSPK MET VL‏ ‎KAQLWVYLRPVPRPATVYLQILRLKPLTGREGTAGGGS‏ ‎607١١‏ بشرى ‎GUORRHIRIRSLKIELHSRSGHWQSIDFKQVLHSWERQM)‏ ‏ّ 8ن 51.0040 1 خخ تت وو طلخل الت الزن
‎ive
0000000 0000 00 ‏00ت‎ 8 03000000000 0760001 00000154000 ‏متوالية حمض‎ | ©) ‏خا‎ 000004 0000001000100002--04-+00
ACGGCTGCOCCGTOTOCGTTTGGCGGCAGTACAGCC | ‏نووي مشفر لمتوالية‎
OCGAGUTGOGUCTAGAGAGUATCAAGTCGUAGATOTY ١
TOAGCAAACTOCGGUTCAAGGALLUGCUCAATATCA Ou: ‏رقم‎ ‏نالاالاففشانكانا انان الانعضانافضن نان [ا اناا انان‎
COCCOUTGCAGUAGATCOTGOACCTATACGALTICC
AGOGOUGACGOGCTOCAGCCOGAGHACTTCCTOG AGE
AGOACGAGTACCACGUCACCACCGAGACCGTCATTA
GCATOGUCCAGOAGACGOACCCAGCAGTACAGACAG
ATHGUAGCOCTCTCTGOTGCCATTTITCACTTCAGCT
CAAGUTGATOTTCACAAAGOTACTGAAGLGUCCAGCT
‏تنما وام اوعدا وا “مانم انيم لو وات‎
AGTCTACCTGCAGATCTTGCGACTAAAACCCUTAACT
GOUGGAAGGOGACTGCAGHOGOAGOGGACGLAGGUECG
GCGTCACATCCGTATCCGCTOACTGAAGATTGAGCTG
CACTCACGOTCAGGCCATTOGLCAGAGUATCGALTIC
AAGCAAGTOCTACACAGUTGOGTTIOCGUCAGCCALCAG
AGUAACTGGGGOATCGAGATCAACGUCTTTGATCCC
AGTGGCACAGATCTGGOTOTCACCTCUCTGOUGUCT
GOAGCCCAGGGGUTOCATCCATTCATOGAGCTTOGA
OTCCTAGAGAACACAAAALOTTCOCGGCGO
NLGLDCDEHSSESRCCRYPLTVDFEAFGWDWIHATPKRY
KANYCSOOQUEYMPMOKYPHTHLYOQRQAMNPRUGSAGPCC GDF YY ‏بروتين‎ | OF 1171151111 71171 OOTY GRIFOMVVDROGCS ‏إ:‎ ‏بشري ناضج‎ ‏ا ممت مح خا0فة 10001-00310205 اه‎
TCCOGUTGUTGCCOATATCCCUTCACAGTGOACTT TG ‏متوالية حمض‎ | oF
AGGCTTTCGGCTGGGACTGGATCATOGCACCTAAGS | 0
GOTACAAGGCCAACTACTGCTCCOOCCAGTOCGAGT | ‏نووي مشفر لمتوالية‎
ACATOTICATGCAAAAATATCOGCATACCCATITGOT
‏ل‎ ov: ‏رقم‎ ‎TTGTACCOCCACCAAGATOTOCCCAATCAACATOOTE ‎TACTTCAATGACAAGCAGCAGATTATOTACGOUAAD ‎ATCCCTGOCATOOTOOTGOATCGOTETGGUTLUTCT ‏نظير فاري لمتوالية رقم:7‎ | (gold ‏نطاق خارج‎ | of ‏فأري‎ AtRIIB J m") ‏فأري‎ Fc ('Fc-ActRIIB ive
AEA
‏مكافئات‎ —A ‏سيتضح أن التغيرات التي تكون‎ (die ‏رغم وصف الاختراع بالتفصيل بالرجوع إلى النماذج المحددة‎ ‏مكافئة وظيفياً تقع في مجال الاختراع. في واقع الأمرء تتضح العديد من التعديلات على هذا‎ ‏الاختراع بالإضافة إلى تلك الموضحة والمذكورة هنا للماهرين في المجال من الوصف السابق‎ ‏والرسومات المرفقة. تقع تلك التعديلات في مجال عناصر الحماية المرفقة. يدرك الماهرون في‎ 5 ‏ما لا يزيد عن التجارب الروتينية؛ ويتم ذكر العديد من النماذج‎ ast ‏المجال ويكونون قادرين على‎ ‏المحددة لها هنا. يتم الاشتمال على تلك المكافئات بواسطة عناصر الحماية التالية.‎ ‏تم استخدام جميع النشرات؛ البراءات وطلبات البراءة المذكورة في هذه المواصفة كمرجع في‎ ‏التحديد‎ dag ‏المواصفة كما لو تم استخدام كل نشرة» أو براءة أو طلب براءة بصورة فردية على‎ ‏والإشارة إليه بصورة فردية كمرجع في مجملها.‎ 0
Tye

Claims (1)

  1. EAL ‏عناصر الحماية‎ ‏من النوع ؟ للاستخدام في تصنيع دواء‎ activin receptor inhibitor ‏مستقبل أكتيفين‎ adic -١ ‏لزيادة مستويات خلايا الدم‎ beta thalassemia ‏بيتا‎ aru « Anemia ‏لعلاج فقر الدم‎ Oya ‏أو الأرومّات الْحَمَراءٍِ السَوِنَةُ‎ increasing red blood cell levels ‏الحمراء‎ ‏في خاضع بحاجة لهم؛ حيث يكون متبط‎ (Ery-C) orthochromatic erythroblasts ‏يتم‎ 0 acid ‏يشتمل على متوالية حمض أميني‎ polypeptide ‏عبارة عن بولي ببتيد‎ ActRIl 5 ‏اختيارها من المجموعة التي تتألف من:‎ ‏أ) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: ؟؛‎ ‏ب) نسبة تطابق تبلغ 7925 مع متوالية بهوية رقم: ؟؛‎ ‏ج) نسبة تطابق تبلغ 7978 مع متوالية بهوية رقم: ؟؛‎ ‏د) متوالية بهوية رقم: ؟؛‎ 0 ‏ه) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: ؟؛‎ ‏و) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية رقم: 3؛‎ ‏ز) نسبة تطابق تبلغ 797 مع متوالية بهوية رقم: 3؛‎ ‏ح) متوالية بهوية رقم: ؟؛‎ ‏ط) نسبة تطابق تبلغ 7960 مع متوالية بهوية رقم: 6؛‎ 5 ‏ي) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية رقم: 6؛‎ ‏مع متوالية بهوية رقم: 76؛‎ LAA ‏ك) نسبة تطابق تبلغ‎ ‏متوالية بهوية رقم: 6؛‎ (J Vo) ‏مع متوالية بهوية‎ 79٠ ‏م) نسبة تطابق تبلغ‎ ‏ن) نسبة تطابق تبلغ 7906 مع متوالية بهوية رقم: ؛‎ 0 V ‏س) نسبة تطابق تبلغ 797 مع متوالية بهوية رقم:‎ ؛١7 ‏ع) متوالية بهوية رقم:‎ VY ‏مع متوالية بهوية رقم:‎ 79٠0 ‏ف) نسبة تطابق تبلغ‎ OY ‏ص) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية رقم:‎ VY ‏مع متوالية بهوية رقم:‎ ZA ‏تطابق تبلغ‎ Loi ‏ق)‎ 5 Ive
    ر) متوالية بهوية رقم: ‎OY‏ ‏ش) نسبة تطابق تبلغ 790 مع متوالية بهوية رقم: ‎VY‏ ‏ت) نسبة تطابق تبلغ £90 مع متوالية بهوية رقم: ‎VV‏ ‏ث) نسبة تطابق تبلغ ‎ZA‏ مع متوالية بهوية رقم: ‎OY‏ ‏5 خ) متوالية بهوية رقم: ‎CVV‏ ‏ذ) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: 0 ‎EY‏ ‏ض) نسبة تطابق تبلغ 790 مع متوالية بهوية رقم: ‎EY‏ ‏غ) نسبة تطابق تبلغ 7948 مع متوالية بهوية رقم: 0١؛‏ ظ) متوالية بهوية رقم: 0 0 ج ج) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: ١؟؛‏ دد) نسبة تطابق تبلغ 7925 مع متوالية بهوية رقم: ‎(YY‏ ‏ه ه) نسبة تطابق تبلغ 794 مع متوالية بهوية رقم: ‎(YY‏ ‏وو) متوالية بهوية رقم: ١7؟؛‏ زز) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم:7؟؛ ح ح) ‎ds‏ تطابق تبلغ 790 مع متوالية بهوية رقم:77؛ ط ط) نسبة تطابق تبلغ 797 مع متوالية بهوية رقم: ‎YY‏ ‏ي ي) متوالية بهوية ‎FTV)‏ ‏ك ك) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم:؟1؛ ل ل) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية رقم: ‎YY‏ ‎(pp 0‏ نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: ‎YY‏ ‏ن ن) متوالية بهوية رقم: ‎YY‏ ‏س س) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: 4 ؟؛ ع ع) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية رقم: ‎VE‏ ‏ف ف) نسبة تطابق تبلغ ‎AA‏ مع متوالية بهوية رقم: 4 ‎$Y‏ ‏5 ص ص) متوالية بهوية رقم: ‏ ؟؛ ق ق) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم:05؟؛ ‎Tye‏
    -مع١-‏ ر ر) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية رقم: ‎£Y0‏ ‏ش ش) نسبة تطابق تبلغ 797 مع متوالية بهوية رقم: ‎Yo‏ ‏ت ت) متوالية بهوية رقم: © ؟؛ أو حيث يكون مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ‎Y‏ عبارة عن بولي ببتيد يشتمل على نطاق خلوي خارجي من مستقبل الأكتيفين ‎activin‏ من النوع ‎HA‏ المرتبط بالجزءِ ‎FC‏ بجسم مضاد؛ أو حيث يكون مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ‎Ble Y‏ عن بولي ببتيد يشتمل على نطاق خلوي خارجي من مستقبل الأكتيفين ‎activin‏ من النوع ‎IB‏ المرتبط 0 بالجزء ‎Fe‏ من جسم مضاد ‎.antibody‏ ‏"- مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ‎Y‏ للاستخدام في تصنيع دواء لعلاج فقر الدم ‎Anemia‏ ؛ ‎beta thalassemia iy Land)‏ أو لزيادة مستويات خلايا الدم الحمراء أو الأرومّات الْحَمْراءٍ ‎(Ery-C) orthochromatic erythroblasts yal gd‏ 5 في خاضع بحاجة لهم؛ حيث يكون مثبط مستقبل الأكتيفين من النوع ‎Ble‏ عن بولي ببتيد يشتمل على متوالية حمض أميني ‎acid‏ 800100 يتم اختيارها من المجموعة التي تتألف من: أ) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: ؟؛ ب) نسبة تطابق تبلغ 7925 مع متوالية بهوية رقم: ؟؛ 0 ج) ‎dus‏ تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: ؟؛ د) متوالية بهوية رقم: ؟؛ ه) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: ؟؛ و) نسبة تطابق تبلغ 745 مع متوالية بهوية رقم: 3؟؛ ز) نسبة تطابق تبلغ 747 مع متوالية بهوية رقم: 3؟؛ 5 ح) متوالية بهوية رقم: ؟؛ ط) نسبة تطابق تبلغ 7498 مع متوالية بهوية رقم: 6؛ ‎Ive‏
    -؟١-‏ ي) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية رقم: 6؛ ك) نسبة تطابق تبلغ 794 مع متوالية بهوية رقم: £1 ‎(J‏ متوالية بهوية رقم: 6؛ م) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية ‎(Vad)‏ ‏5 ن) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية ‎(Vad)‏ ‏س) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية ‎(Vad)‏ ‏ع) متوالية بهوية رقم: 7١؛‏ ف) نسبة تطابق تبلغ ‎79٠0‏ مع متوالية بهوية رقم: ‎VY‏ ‏ص) نسبة تطابق تبلغ £90 مع متوالية بهوية رقم: ‎OY‏ ‏0 ق) ‎Lowi‏ تطابق تبلغ 797 مع متوالية بهوية رقم: ‎VY‏ ‏ر) متوالية بهوية رقم: ‎OY‏ ‏ش) نسبة تطابق تبلغ 790 مع متوالية بهوية رقم: ‎VY‏ ‏ت) نسبة تطابق تبلغ £90 مع متوالية بهوية رقم: ‎VY‏ ‏ث) نسبة تطابق تبلغ ‎ZA‏ مع متوالية بهوية رقم: ‎OY‏ ‏15 خ) متوالية بهوية رقم: ‎CVV‏ ‏ذ) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: 0 ‎EY‏ ‏ض) نسبة تطابق تبلغ 790 مع متوالية بهوية رقم: ‎EY‏ ‏خ) نسبة تطابق تبلغ 7978 مع متوالية بهوية رقم: ‎EY‏ ‏ظ) متوالية بهوية رقم: 0 0 ج ج) نبة تطابق تبلغ 7490 مع متوالية بهوية رقم: ‎YY‏ ‏دد) نسبة تطابق تبلغ 7925 مع متوالية بهوية رقم: ‎(YY‏ ‏ه ه) نسبة تطابق تبلغ 794 مع متوالية بهوية رقم: ‎(YY‏ ‏وو) متوالية بهوية رقم: ١7؟؛‏ زز) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم:7؟؛ ح ح) ‎das‏ تطابق تبلغ 792 مع متوالية بهوية رقم:7؟؛ ط ط) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: 77؛ ‎Tire‏
    -/ا١-‏ ي ي) متوالية بهوية ‎FTV)‏ ‏ك ك) نسبة تطابق تبلغ ‎79٠‏ مع متوالية بهوية رقم:؟1؟؛ ل ل) نسبة تطابق تبلغ 790 مع متوالية بهوية رقم: ‎YY‏ ‏م م) نسبة تطابق تبلغ 794 مع متوالية بهوية رقم: ‎YY‏ ‏5 ان ن) متوالية بهوية رقم: ‎YY‏ ‏س س) نسبة تطابق تبلغ 798 مع متوالية بهوية رقم: 4 ؟؛ ع ع) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية رقم: ‎VE‏ ‏ف ف) نسبة تطابق تبلغ ‎AA‏ مع متوالية بهوية رقم: 4 ‎$Y‏ ‏ص ص) متوالية بهوية رقم: ‏ ؟؛ 0 ق ق) نسبة تطابق تبلغ 7498 مع متوالية بهوية رقم:05؟؛ ر ر) نسبة تطابق تبلغ 795 مع متوالية بهوية رقم: ‎£Y0‏ ‏ش ش) نسبة تطابق تبلغ 794 مع متوالية بهوية رقم: ‎(YO‏ ‏ت ت) متوالية بهوية رقم: © ؟؛ أو حيث يكون مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ‎Ble Y‏ عن بولي ببتيد يشتمل على نطاق خلوي خارجي من مستقبل الأكتيفين ‎activin‏ من النوع ‎HA‏ المرتبط بالجزء ‎FC‏ بجسم مضاد ‎antibody‏ ؛ أو حيث يكون مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ‎Ble Y‏ عن بولي ببتيد يشتمل على نطاق خلوي خارجي من مستقبل الأكتيفين ‎activin‏ من النوع ‎IB‏ المرتبط 0 بالجزء ‎Fe‏ من جسم مضاد ‎.antibody‏ ‏"- مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ؟ وفقاً لأي من عناصر الحماية ‎(Y=)‏ حيث ينتج عن استخدام متبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ؟ تعداد خلية منخفض من الأرومات ‎5B sae oy al)‏ وقاعدية التلون ‎erythroblasts 5‏ في المريض. ‎SOF‏
    -١ ‏م‎
    ؛؟- متبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ؟ وفقاً لأي من عناصر الحماية ‎7-١‏ حيث يكون مستوى و/أو نشاط 60711 عبارة عن مستوى البروتين ‎protein‏ ل ‎GDF11‏ أو حيث يكون مستوى و/أو نشاط 60711 عبارة عن مستوى ‎.GDF11 ImRNA‏
    #- مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ؟ وفقاً لأي من عناصر الحماية ‎١‏ 15-7 حيث يكون مستوى و/أو نشاط ‎GDF11‏ مرتفع عن مستوى و/أو نشاط 1 الطبيعي عندما يكون مرتفع بنسبة 7725 على ‎Ton (JB)‏ على ‎(JW‏ 715 على الأقل» ‎7٠٠0‏ على الأقل أو ‎7270٠0‏ على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 60611 الطبيعي.
    +- متبط مستقبل الأكتيفين ‎(a activin receptor inhibitor‏ النوع ¥ ‎Lag‏ لأي من عناصر الحماية ‎١‏ -؛ ¢ حيث يكون مستوىي و/أو نشاط ‎GDF11‏ مرتفع عن مستوى و/أو ‎Ll‏ ‎١ GDF 11‏ لطبيعي عندما يكون مرتفع عن مستوى و/أو ‎١ GDF 11 BAIA‏ لطبيعي بمرتين على الأقل.
    5 *- مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ؟ وفقاً لأي من عناصر الحماية احى حيث يكون مستوى و/أو نشاط ‎GDF11‏ منخفض عن مستوى و/أو نشاط 1 الطبيعى ‎Laie‏ يكون منخفض بنسبة 7725 على الأقل» ‎٠‏ 75 على الأقل» ‎Ave‏ على الأقل؛ أو 7496 على الأقل عن مستوى و/أو نشاط 601711 الطبيعي.
    ‎=A 20‏ متبط مستقبل الأكتيفين ‎(a activin receptor inhibitor‏ النوع ‎Lag v‏ لأي من عناصر الحماية )8( حيث يكون مستوى و/أو ‎GDF11 Lluis‏ منخفض عن مستوى و/أو نشاط 1 الطبيعي عندما يكون منخفض عن مستوى و/أو نشاط 60711 الطبيعي بمرتين على الأقل.
    ‏5 4— متبط مستقبل الأكتيفين ‎(a activin receptor inhibitor‏ النوع ¥ ‎Lag‏ لأي من عناصر الحماية ‎١‏ -8 ؛ حيث يكون مستوى و/أو نشاط 60511 الطبيعي عبارة عن مستوى و/أو نشاط
    ‎Tire
    -١ع4-‎
    1 متوسط في عينة مأخودة من نفس النسيج لواحد أو أكثر من الخاضعين الأصحاء في نفس الفئة العمرية. ‎-٠‏ مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ؟ ‎Wy‏ لأي من عناصر
    الحماية ‎5-١‏ ؛ حيث يكون النسيج عبارة عن مصل 56117 ؛ نخاع ‎bone marrowabe‏ « ‎liveras‏ ¢ أو طحال ‎spleen‏ ‎-١١‏ مثبط مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ؟ ‎Wy‏ لأي من عناصر الحماية ‎Gua ٠١-١‏ يكون الخاضع عبارة عن إنسان.
    ‎Jade =) Y‏ مستقبل الأكتيفين ‎activin receptor inhibitor‏ من النوع ؟ وفقاً لأي من عناصر الحماية ‎VY)‏ حيث يكون جزءِ ‎FC‏ من جسم مضاد ‎antibody‏ عبارة عن ‎FC gia‏ من جسم ‎lgG1 antibody alias‏ ‎Ire‏
    AN CI | - A ot 1 ‏ل‎ di > 0 - 0 nh AS | | ‏ض‎ 0 0 0 0 8
    {all} ‏الزمن‎
    -ه١-‏ 1 مج شكل 0 بي . .سم | | © ا " اذى ‎IEF.
    I‏ ‎TEEN‏ ‏1 1 1 5 ‎Ni ١! 8‏ ‎ET‏ ضفر - الزمن (أيام) :1 مج شل : الح 1 — ‎wil‏ 0 ال * ‎Tw‏ ‎Ya | Ea ~~ a‏ ب 8 11117 0010 لاا لاا ‎Ao‏ ‏بوه ® #8 م # سش ‎{als} a‏
    ‎o \ —‏ \ — شكل ١د‏ ‎Ye = .‏ ام ا |8 ‎“I I‏ اها ل 08" ام اه ‎٠.‏ ‎Th‏ ب ‎ia‏ & صف ‎Dal‏ (أيام) ‎hf‏ ‏8 بع لا عع ‎B‏ - § لا الل م ا ام 8 ا ‎Wi‏ ا مش ام امه الها ‎b x 1 + os‏ = / شر : ‎Oa‏ (ايام) ب الوا شكل % = م ام الم ,8 ال
    ‎v. | ME Ea = B |‏ ‎Aa ¢ } * 17 " x‏ الزمن (ايام)
    — \ o Ad —
    3%. HSC Ny 3 Vi EE SE TI 1 ١ T 5 wy EE 0 - ‏ا ا ام 8 ال‎ Al HE 083 08 08 083 ‏صف‎ = $x ‏ا‎ + RE ‏(آيام)‎ onl = © 3 YB +
    ‘ . 08 0 ‏لق‎ 0 HL BL WL ‏م ام‎ head = Yoo E 3 * 1 {skal} ‏الزمن‎ ‎ol % ‏شكل‎ JE ١ ‏مع‎ : 1 Teel ~ AN BR BB ‏م ا‎ Lo Bb
    > I. ¥, (a) ‏الزمن‎
    ا ل 3 ل ا ا ‎aa‏ حا كور كاله ااا ا ا ل ‎SL APR SL BE a a ey‏ و ‎Eten‏ ‎EEE Ee Re ES Da ELE EE aa a‏ ل ا م ا ل ل جمس ‎Sm i‏ ‎mn‏ اللو لح ا ل ا ‎BE‏ ‏ا ‎Baa TT‏ 0 ا ا ا ل ال ا 0 ا ل ل ل ل ل ا اج ا ل ‎TOSS me a‏ ا ل ل ‎RR ne rR‏ ا ا ااا ا ل 0 ا ال ل ا ل ا ل م ل اا ا ال ا ا ل ل ‎BE SEL Ua as eR R Use‏ ا ا ا ل ان جيب لدت مسج ل ‎BE Se A Rs RR EU ase ey‏ 0 ل ب لي ل ا ‎he eo‏ ا ا م م ‎REE ee‏ م ‎Sri ee‏ ا تال ل ا ل ا ‎LAR Se aA io Gooner NN TL Tanai‏ ل ا ا ‎EA A A A CAR SEERA LS a Ea ER EU Bs sR‏ ا ‎ARR RU es‏ ل ل ا ‎i‏ ‏ل ‎EE‏ ‏2 0 ا ا ‎I‏ ا ال ل ل ل ل ا ‎EEE i‏ ا ‎BE KE RRR‏ ا ‎BS ROR‏ ‎EEN Bea RN RR A Ln ER‏ ‎RIBS RS Ke‏ ا ‎Ses Eas ass I ae BR RRR Se SAE.
    No‏ ا ا ل تت تت ‎Basses assay‏ ال ‎SERINE ER‏ 0 اتا ندا اننا سس للانناا 6617 ااا اانا
    ل ا ا ا ل ا ا ا ا اا د ا
    ل ا
    م ل ال ل
    ال ا ل م ل
    ا ل
    1 ا ل ا
    ل اتش ا ا ل ا ا ا ‎SEE‏
    ‎ESE Saas Toma‏ ا
    ‎gs ‏ا‎ I ‏ل ا‎ eR ERR ROR]
    ‏ا 0 ل ا ا
    ‏ل ‎aa hE‏ ا ا
    ‎RAR TR I RR ‏ل‎ TT
    ‎a Slee as ie
    ‏م لت ال ل لت ل ‎ER‏
    ‎a ey‏ ل ‎TR‏ ا
    ‎a ae al RR Le Ben EEE EE
    ‎BR ‏ل ل‎ RA Baas ae TA
    ‏ل ل ل اا ال م ال ل ا ال ل ‎SERS‏
    ‎ee‏ ل ا ل ل ا ا ا
    ‏ا 0
    ‏ل ع لش 0 8# ‎pe‏
    ‏ا ‎RR nh‏ ال
    ‎ARE 1 ER ey 0
    ‎SESE SR ES
    ‎2
    ‏ل
    ‏ل
    ‎ors‏ وجي ري جد تيت دي لوج جا وو
    ‏ا
    ‎1 a
    ‏ا
    ‏ا
    ‎Ry‏ ل
    ‎A ‏ا‎
    ‎LR RAS Ri‏ 0 ل ل ل
    ‎EE
    ‎i
    ‎BE ‏ل ل ل‎ Ree Ss DLs
    ‎fs a ae
    ‎EEE Re
    ‎ry
    ‎Tooele
    ‎RT ‏ال‎
    ‎TT a Tr
    ‎Heme ER
    ‎ESL Sh
    ‎IRR‏ ل ل
    ‏ا ل
    ‏ل ا ل
    ‏ا
    ‏ا
    ‏اا 0 شك خط
    — 00 \ — باع شكل ‎EY‏ ‎wa | = LC J 0‏ 18“ ام ‎HB BR‏ ا .” ا ام ام ا ا ام ام ام | ا ‎PL o Ye Ts Te‏ الزمن (أيام) ؛ شكل ١ك‏ ‎SM IBIRIBIBI‏ ام لم ام ا 8 ' ام ام ام ا ‎١‏ ‎i$ BR i‏ ب : ‎oat‏ ‏ف ‎$e fo‏ صقر ال ‎ow‏ ال ا 0 ‎{ob} Da‏ ,ا ‎BANE‏ ‏* ا ,* ‎i‏ - با ‎Tox bo‏ ب 4 ‎Cea‏ ‏الزمن ‎{a}‏ ‎ire‏
    — \ o ‏أ‎ — Y& 50 Verret ‏بن‎ © all ul ‏ل‎ ‏اصفر‎ #8 ME ny ‏ب«‎ ‎(sk) ‏الزمن‎ ‏شكا كم‎ 3 fo
    _ \ o 7 _ mR FES Tawa 5 ‏تت‎ RAP-011 ¥ ‏#دا*‎ + ٍ = : 8 - ‏ف‎ 0 0 85 5 = ih T T 0 cB clas al ‏ا انوي‎ al (BIBI ‏م ام | اذا ا ا‎ ‏م 8م م | لم ما .ف 80 80 #82 #8 #2اصفر‎ ‏ضفر‎ * PE CE TI : 1 , ‏ا‎ Sha LT +». fall} ‏المرمن‎ Gos xR {7} ‏الزمن (ايام) تزمن‎ Faq . A ; RE BEET 0 i 11١! ‏اق ا وذ‎ ERLE LLL ‏صف حم تسر‎ '1ٍِ 0 1 , v . #4 : 8 pr TE a 2 0 i ¥ . 0 0 8 (pl) ‏الزمن‎ (ple) ‏الزمن‎ ‏شكل 1 ان‎ ire
    _ \ o A— ‏اد‎ ‏وا عا ا لي‎ * wo 8 Ve : ‏ين ِ ب‎ ‏با ا‎ : ْ ® | ‏م‎ ‎NEE SPE ,/ 2 1 3 ‏وح ا مالا‎ ‏م وال‎ Ad (ply oes ‏المتجمال‎ ‏ا لب‎ g * oy Fe 0: . ‏ا سني‎
    +. ‏7ت ا ل 1 لد‎ TH wy we ْ So pe AN RUE hE 4 ]ٍ ْ ‏ب‎ 8 » 5 ® >> + ‏الزمن وأيام»‎ س١ ‏شكل‎ ‏المي اليو‎ ive rene ‏و‎ CEE ou tw ‏جا‎ ane aay = BH a a] Poi Lo me ‏بوي , أ‎ 8 ‏ود‎ Co eo 8 1 a = one pal 2 - ‏اط‎ ‎غ١ ‏شكل‎ ‏اانا الع‎ ive
    “Y= Balt sass slid ! ‏تمر‎ ‎0" ‏ا ا ا‎ Bm WY a pe deus
    للح ل ان ‎ENE‏ ا الا ا 0 ‎RM‏ ل ‎I | Eo Foy Ce‏
    فال تعضوو ‎HBR‏ ا '! | 0 3 a 0 ‏سسب‎ ٍ :
    or H 1 : i :
    88 E RN 5 NR 3 :
    = I RN ٍْ '
    ‎BN |‏ اال
    ‏ٍْ ; ' ا اج ان
    ‎8 Be
    ‎] ‏أب ا ل‎ inci ‏ب"‎ SEA. ss aes Joma ES C57 BLE WT PES ‏العا الج ل“‎ pings 8 ْ ‏ب‎ Led pat acai Fa fs | EE pe $e x 4 ' ‏ادا ال‎ : : 12 00 ‏اس ا‎ Fh SE : ; 1 ‏ا = الى‎ ف١ ‏شكل‎ ‎Tre
    -١١1- 4 , 0 , | {Lk 1 | —
    ¥ . ‏ل‎ ‎| { [H ‏ض‎ ‏با | م : ا( ل‎ ‏ب‎ H ES ally 3 3 + 3 3 0 I [1 1 ‏ض‎ J | 0 ‏فى 2 له ال‎ 8# he 3 ‏ا ال ام‎ 1 2 ' ١ 1 ‏تل يسا - لم‎ 1 | ‏للا ا ض‎ 9 3 ; | io a, — 100 ‏لم‎ : ‏ل"‎ il - ‏ب‎ ‏طلا‎ 8 0 {| 00 + = = 8 pa . ‏د‎ 3 - ‏ب‎ ie > - s Foul . ‏شه‎ a iy ges
    ] ا ‎T‏ 8 : ب ا 0 ححححححححححححجج ‎cr A‏ 1 ا > ‎i eee‏ اا مش = .ع 0 ‎oe‏ . 1 ب ‎٠٠ ve J Ned‏ الل . ‎xo fo Sc EDN 0 SRE 4 {‏ ‎i‏ ال از ‎EEE SE Cra RR NE RE 8 FE‏ | 0" ‎i‏ اجات اللا ‎Yao booing i Tel Id Hy II‏ ‎SA 0‏ ا ل الج ‎HE ١‏ ا 8 ‎fa RE‏ 0 ‎SER Ne 1 #4 Nido GEE ERAS 0‏ ا ‎Na 0‏ ا ‎AN RR ENE Si IN‏ ¥ ‎i Wha ae iF 1‏ 3 ا اد : ‎SN UTE £3 he AY ar‏ ا + ل 1 د 0 د« ‎i NTR EE‏ ‎RRR RRR 7 Hind Sern i‏ 8 ‎١‏ ب اي د ‎BON NER TER RRR ox‏ ‎Lod La Hii is‏ ‎Y or ARR ER RE rpm‏ ‎SARE ٠ an Nae TF SO‏ ‎hein‏ ل« ‎go Ll NRE‏ ‎hai Na TH es Ly sine td‏ ‎SHIRES‏ ا اا 0 ‎RRA‏ ‏ا ‎has NY Ee‏ : ‎SRR CEE H } EEN EE‏ حت ‎RARE EER ¥ fo 4 SINE Hae SE H‏ الدج ‎EE‏ ‏ملسا صخر اكد اجات ل م ‎١‏ + . . ‎RoR =‏ & 3 ا ‎ge‏ 0 الب ألا ‎AE LY‏ ال ل ل ل ‎1s‏ ‎Sone‏ ‏1 = ‎green‏ لل ل ‎Cp emmy a 3‏ 1 الم 777 ل ‎Ce CoRR i‏ § ‎od‏ 4 ا ‎RETR‏ ا 1 ‎HS‏ ‎a Nd aA PRIN ENE LE TR N H‏ ‎Vo‏ ل 3 ‘ ‎Ye. i Ne are NSH‏ ‎RRS 3 EI RR Xe 3 TERS 3 RR NaS H‏ ‎Sanaa NN oe & Hoi a {od‏ : 4 ال ‎IEE SNR WES EY‏ ل 1 ‎AAR ae NR 2 J‏ 0 0 الا ا ل 1 ‎RR RR Ln SR § Pt BR RE‏ *¥ ‎١1‏ تب ‎RE RRR NR has 3 EEN Ea‏ + ‎Shans vo‏ ل ‎FRNA aaa ast CH‏ ‎N H‏ ا ا ل ا ‎ATR SRE REE EAR ١‏ ‎IN THER NR RE Net EERE Ny SRE Vd‏ ‎N DER ER SNE : yo Bh eR a vod‏ : ‎LL RD NIE SS j 3 Films V0 san] i‏ ¥ 0 م ‎WE‏ ل 581305640 ‎ANN RRR‏ ‎Bem i‏ 3“ ل لا اد ان ‎RRR A NEARY AEA H‏ ا > ‎ANE NRE EN y Haan i‏ % ‎SE Ne cep x HN 8 i‏ ‎Ree REE H‏ ل ]4 ‎i “3 SRE oN Nea Ree‏ ‎ERR AE ERR iH Ne aa H‏ 3 ‎IN 0 1 H‏ ا ‎NR SRE RRR EERE EE‏ 3 ‎SANTA i ;‏ نا ‎La.‏ ‏: | 5 أ ا 7 ‎H‏ ل ‎ERR‏ لا 0 - توي 0 ب 1 ‎SITE A Pahl © ٍ‏ ‎i‏ : 0 اي 8 ‎Nx ET § oy‏ أل مد عض سح 0 ‎k ove‏ ان ا : زان لات ّ ‎CF tg Ee‏ ‎[fear‏ ;
    ب[ 00 ‎a‏ للا 3 ب[] ل ‎feb] 5 bed >‏ = } ض ‎TTT A‏ 1-0 00 ;1 ل" ‎EE |‏ ل | ‎Ho‏ ض ض لل ل اا لم ‎H Th‏ ا ‎T+‏ ا لل د للم = الم ‎x‏ ل = 7 00 0 ل[ سا ‎SRI 8 )_ +‏ شكل 7 ب
    ‎ey EEE‏ سس سسا مي ‎Ra 3 1 ! 3 Youd EE ae] 3‏ 3 ا 3 2 ‎EE scum SRN‏ 3 1 # الل ا ا ‎Ed‏ 2 ل الل 3 اا ‎se‏ 4# 0 ب ‎A ١ I DNR, Bd‏ ب 3 ع الت ‎WEE ie.
    ENR LCE a‏ ا اي ‎LIE‏ ‎FEEL Ie TE ERY 1 ١ 3 EE N 3‏ . 3 8 امت ‎k ES ER‏ تا ع ‎RR‏ مان كه ‎ER‏ الات ‎ye LN‏ 3 لاا ‎Li 3 FREE‏ ل ا ل ا ا ا 3 لت اما ‎UT‏ ا ‎a‏ ‎Gf BA SR Na EN 107 1% 4 fo herd H‏ 3 ال ا 02000 ا ‎A RRNES nt REE ER‏ 3 ‎k - 3 ROR a‏ 8 ب" 70 ‎AN > ERR 5 a RRNA‏ ‎RBI NR Rs RN Cy k & EI Gan} 3‏ 8 ‎N Yk wan } 8‏ : ا ‎NE‏ دشيو رج ا £3 ‎N 88 ON TREN SS TRA $ k Be - ot FRNA 5‏ 1 0 ا ‎CE E § 1 a R‏ ا ا ‎ey‏ ا ا ا ‎El RN 3‏ د ‎SC‏ = ا ال با ا ‎RI‏ ‎Ey 3‏ : 3 : ¥ الل ‎FeSO‏ ‏3 § اماج 1 ب ‎So 0 " ¥ I‏ م ‎SON‏ ‎i‏ ا ل اال ا ال ا 3 3 0 اج ةا ا ‎EE‏ ‎a J 3 ; RES i‏ ذه ام م ممع ام حا ا ل مي ‎Ta‏ حت ‎TALES‏ جات تف جد امسو جد ل د اا حا ‎Bey 0 EE i oC i:‏ ال ا 5 ‎E‏ ب ل ده يلت اد لاا هالغ + ‎Yo,‏ ,¥ ‎Ara Yu Yoo Thos‏ ص ‎a‏ . ‎eve [= 3 : IIR‏ نج ‎Fey 3 H 1 RR BE 3‏ 4 ‎IEE TT aa + 3 SNCs i‏ 3 ب ‎IG IRIAN Yaad = IY NES 3‏ 2 1 تا لاا ل تر ‎REE SCR‏ الت ا ار ها 3 ل ‎EE‏ ا ااا ‎N i [NY Ese een 0‏ ل 3 ‎i‏ ا حت ل ل 8 5 ‎Ba nae gr i oe‏ 3 ¥ ‎REPRE a ERR ; "ed vo i‏ ‎i‏ ]دل ة** ‎TANNERY aa‏ ‎EEE NE re: ] NE 1‏ ‎Sh 3 3‏ 1 ا ‎SRA 3 RR‏ ان ا ‎AS hn Fala i IY Sm )‏ ‎CRY Heed 0‏ : اا ل ا ا أ ‎EE‏ ‎aa Ee i wo XY HLA i‏ 3 ‎NER Poe QT ed} 3‏ ا ا ‎SAE CF NRE bE ; ERY i‏ ‎SN : 3‏ : ال مر ار ‎NEA‏ يت مج ‎BS‏ ‎ee Se 0 Sosa i 5 : i‏ الت ‎Ina i 5 3 3‏ ا ‎a‏ ‎EE SI 1 7 3 0‏ 8 م 0 ‎on‏ : 8 1 # : : 5 اا ذي لمعه اتيت المت معت ال ا ا ل ا ل ل 1 8 سس ا أ ان تح ل ‎ay 1 4 1‏ § اج سي تح يت :الا 0 ‎i LE‏ 3 § 4 ¥ 3 ‎REECE] H ER 3 ay EE:‏ { : : ‎AS:‏ ا 4 & ‎Lod‏ لج م ل : ‎In‏ 0 ‎Ro am SIREN‏ ال 0 0 ا م: 0 ‎ERI‏ ب 4 ‎SEER ae Tad Eo a‏ اال التاق ‎PESTLE‏ لمج له ا ل ا ‎ER‏ ال ‎EE‏ ‎oN ERE J} ETE gee :‏ اح لاا ا ٍ تلظ ‎Fiala Tas SH Be a‏ سس ‎CAC‏ 1 ل ‎Ne UN Na R i ! :) 3 yd 0:‏ 0 1 ‎at : 8 sy FE‏ ا سا لا اال لاا ‎YN Nd + 5 SR esecaner eessaads‏ المح ‎RCRA‏ 3 اد ‎any +E 8 : I‏ 0 3 ‎EEN‏ > + 5 اموا ا جاه اا 5 ‎C3 DRE‏ ‎ANRC 1 FN‏ ‎I RY : 5 13d Lm‏ اج ‎I‏ ‎ERR SHE EEA 1: 15 NI:‏ ‎x RRR]‏ : ال لاا اذ ‎A Sag‏ 3 - ‎et‏ ال ‎Ry‏ + ا ا اخ 8 ‎CR RE‏ ‎CRIN EAN EO 8‏ قلي 2 : الا الا ا ل ‎ARNE LT Re i ;‏ ‎k‏ 1 ب 0 ‎Toor‏ 7 م ا ‎AERA‏ ‏:5 0 :7 ب الا ل ا الا ‎Ee 8 : : :‏ د عد ليا ‎RICE ERC ERE‏ ا اي التي ‎a apa‏ ايم ات ةين ‎Br‏ ‎CER RR Oe K‏ و اا ‎AAI‏ ‏ِ ٍ : بن : ل : ‎i‏ ¥ ‎i ” 8 *‏ . 4 +« 3 فجن ‎i x‏ 1 ‎PVP SRE‏ ‎OT we‏
    -0؟١-‏ ‎HI‏ | > ‎ANN‏ ‎Le | Hl‏ لم > — ]2 ‎ANN‏ ض 2 0 — ]5 0 ال ض # ليلل لذ لت ‎x ¥‏ 0 + مورشر ابرق تحرج ل ‎a‏ ‏نا ‏- 0 3 — ‎Ts —‏ ‎EE‏ لج ب ل ‎ve‏ 2 . موشىي ‎EryB/EryC‏ ‏شكل \ =
    ¥ N ‏تب م هم‎ Lo ~ ve Fd 8 ‏م‎ 8 0 ‏مب لكايس‎ 1 ay Fi. 3 ¥ i i 3 ag § a 8 ‏حي دج‎ Ba Ba NT = 7 3 § J : § ‏ا‎ ‎1 ًُ 8 ‏حك‎
    ‎+. 1 i ‏م‎ ‏م‎ 1 ‏ل‎ H an § N Fol : ‏سخ‎ > 0 : : i a hd > ‏م ب‎ » > 3 ‏ا اماي جتنن ا . ا“‎ > Rear a Lam a. a ane ~~ - ‏ا لالسلا‎ i i ow ‏يه‎ » : ee i 3 Tg : 7 > ‏ل‎ ‏ا‎ Te foot TR SE 8 ‏ام‎ ‎i 4 SE + ‏بر‎ ‎4 i. ‏الم‎ ‏اا للا ااا لق ات اا ااا‎ SLE ‏رب‎ PX wx Ihe “ ‏بهع‎ + po ‏ا‎ 1 ‏5س‎ : T x Pd 4 SE wd - Ty 13 mn py Ea 3 : Hy BE 0 TH 7 ‏ا‎ a . LS ‏ممح‎ ‏ص‎ ‎Rad ‎iar ‎| ‏ا لمم تا ا ل‎ ‏اج‎ = Le <3 ‏ا لين ال‎ a Se
    -١7/- ‏ا هله «*ا‎ “5% EA i ‏ا‎ +
    LW. ِ £3 : 3 Yvan wd som 1 ’ 9 Ex EE 4 LL 0 A A 3 Py 5 1 ‏ا‎ 13 i NF 83 mm I A ced ‏بها‎ SEES TER ; 1 J | 4 ‏حرام طني لتر‎ 18a ٠١ ARIAT 0 ‏نح ل‎ 6 Id 31 ‏ب‎ 8 AU A FER NL * ‏دجاه‎ nde” ‏ددم‎ SOTO ‏بيذ‎ ْ N 1 va ¥ 0 8 ‏و‎ 5 1 DEF ‏ومين‎ ‎TE ‎aY 18.5 ‏ب‎ ‎ive
    -١ ‏6م‎ ‏ع أ‎ 2 . ‏امس لس ا أ‎ { H vel pee 1 H ‏ا‎ ‏نْ م # ابا‎ ul 0 8 ‏ب‎ ‎3 8 ‏و‎ 5 =X 8 ¥ ¥ Lon i ¥ Aa IRAN AAAS ‏ملم‎ ‏حك‎ 1 : . ; i J J i i $v, Ye 8 1 = 0 3 ‏ا‎ ‎58 ber 83 = Sat a 8 31 ‏مسجل‎ ‎ve
    -١١4- 3 ey 4] rE SITET 6 ‏أ الب‎ hE lI I ‏««ه_ط ةع ةع‎ BET 1 i = Be 3 LE i Ee ٍ 88 pad = = = N C= 1 |: ‏ب‎ 4 an : ¥ & ‏كد ا ات شي آي آي‎ ‏ايا اصع‎ ‏حكن‎ ‎٠٠١١ mE You = = Ae 0 0 ‏جع الثم ا‎ 0 ‏الأ ل ا‎ ١ 0 8 0 ‏وي‎ RIA 0 ‏ويو م 8 8 م ]م م‎ ‏ا 8 . اتش‎ = = " Rs ‏تسر‎ . 35 ig " Rs = . & ‏يض مي ا ل" ف بي‎ + ‏شكل‎ ‎Tye
    _ \ 7 «= RR ER A RR RE EA EO A RN RE 8888 Rn Nh RR a ay NR nak RR RN NR + 5 RR SEES ّ ‏ااا‎ \ ome Ce 3 aaa ‏ا اا‎ NN La NEE a. «3 ae Sa MEE aa dR a Mal EEE Be Maio ‏ا ا ااا ااا 0 اا‎ LA AEE AE ‏ا‎ ‎= a ‏لش ل اجا ران ال ا‎ NK ERE NERS Na 2 HK NG EE Naa a Ld Ne NR hte 8 an aE A IE EE ‏اد ا‎ a Marisa Ni aE Na Nha Re BEN Nall NER TR Ns ens NN RN naa REI a LL TNE NR Na nt Nh a 3 TR RAED NNT Ht A ea : TER a Sa aa) Na a N TE ‏الا‎ ‎Nah aah NN Ha A) Ean Naa aE aan AE TNH, Na ‏ا‎ ‎Lae . Le Walaa ‏ا‎ ‎LLL LL SRE ‏ا‎ ‎Er ‏الا ال‎ N Sa wane ‏اقل‎ Lee ‏ا‎ Eons a ae SEE aaa aa as aa nN ene ‏ا‎ EE Lm ‏ل‎ RRR RR R Q dN a LEE aa SY XB aaa NaN Ne LE aa 0 ‏م ا‎ ‏ا ا ل ل‎ aa ‏ا ااا لأ ال اال‎ ‏اذ اد ا ا د ا‎ dhe ‏ا‎ 5 a La SCARE NN NN EE aE SRE: DEE RT ER a RNR RN REA RE EN RNG Oe SR SR ER SENN Le NN RRR IY RR aan TR NRE Eas ‏ا‎ Lo Sa NE ‏ا‎ aaa B LA Naar ‏نا‎ ada ae Lama LL : a 0 ‏ا ا‎ ‏ا ا ا ال ا ا ا د ا ال‎ TOE ‏ل ا‎ eo aa ‏ا ا‎ AR ‏ل ل ل ا‎ ‏ا ا لأا اا‎ LL Rea Ls aa ‏ا ل‎ Le ‏ا‎ aaa Foon EE ee Re ENA a ER EE ET
    Na. ‏بج ا الي تشع‎ dni EEE Ses
    =%. Ha
    RAR # a i 7 Ta
    5. I a. . IE DT 2 ‏أ‎ ‏ا‎ " ; "EER ‏ان‎ pm oo ee HC, ER ‏تقد دمي‎ ky ‏ببستت 1 ُْ 8 ليم‎ ‏ل‎ un 2M ‏ا .ب‎ 1 EE 4 1 ٍ ‏ل‎ a 0 o a gs a 5 © - ‏لاسلسلا رةه‎ PELs
    -؟١١-‏ = ‎LL as‏ ا لأا ا الا اذا ال ا tg ‏شك ؛ ب‎
    ا اج تي ع ا ا ‎Da‏ الا لا لاا ‎Naa‏ __..... ا ا ا ا اا ا ا ااا ‎Na . Sa LL‏ ا ل ا اا ا
    هه ا ااا م ‎i RR RR RR CR ERY SE‏ ااا ‎pa mn VON Sa Ne‏ ‎EN aaa Banana ne The ae Se‏ ‎SRE NN‏ ا 8 ‎Naa‏ ‎aes ne Sa a Nima nN Saas‏ ا ‎Na RE‏ ل ا ‎a‏ ا ‎Baa Saw We Maa Na‏ ل ‎Shia REEREEEO NE Nae‏ ا ا ا ا ‎Sa‏ ‎N LL‏ ا ا 1 ا ا م ا 8 ‎Fl aaah a SERRE FI e—‏ ‎EE Nii‏ و حوراي ‎aE NE Nee RA sea‏ ‎KN 8 Sa Xa SEER‏ اا 5 ‎SE es‏ ا ‎SERRE ane Soa‏ ا ال ‎Sa‏ ا ‎ER Naa NEE 1 SEE 8‏ 8 ا ‎SO THREE‏ ال ‎Sn Saas‏ 8 ا د ام ا ‎EEE Caan 8 § Na RE NN aaa 8‏ ا ا ا 5 ‎ae Chana UN RN nN CONS‏ ‎Ta Sha‏ ل ل 3 ‎mma Sa Le‏ ‎Sa LL NA a‏
    Caen = ¥ Le A
    “yyy eb ‏سكا‎ ‎fa ‎a ‏ااال ا‎ ‏ا ا‎ ‏اهل‎ bas Hp Eo LL ‏ا ا ا ل ل‎ ‏ا ا ا اد ا ل 0 ا ا‎ ‏سح سا ااه‎ ia ‏شكل‎ ‎ive
    -١١76- ‏ا ا ال ال‎ ‏ال‎ ‎LL a LL Lo TR NX ‏ا ا‎ NN Saas NN A N Ra NY Lo NN LL ‏ا 1 ا‎ La a TR CER SRR RRA X Naa Nae RN ‏ل‎ ‏ا‎ ‏ل ال‎ ER TT ee Ms Le a a We LL ll IR Tia A RE Ra.
    Lhe NN a a ‏ا ا‎ oo Lae.
    BA : Le NN Ll a ‏سس سس‎ wd ‏شكل‎ ‎Tye
    _ \ 7 ‏اج‎ ‎BEE ‎Po EE 0“ SAL 0 ّ ‏ا ان اي‎ ‏م ا‎ She EE ST TE I ‏)ل0 0 0ص‎ FE ee ‏اا‎ IE ‏ا 070 21 للدم‎
    ‎J 3‏ 0 3 8 0 : اد ا ا 0 ‎Ph‏ : مالي ا ‎ar te‏ ‎EN Sa A‏ ا التستتنتتنتتتتا ونب ‎i 8 : : 1 8 i‏ : : سا ‎١‏ : ; ; : : : ٍ ما ‎EE‏ :ْ : ; : : ٍْ ٍْ إ ‎EE SE‏ يي ‎SE‏ : ٍ اي ا م0007 0 0 ‎SE‏ ‎Co 00 0“ '_٠ JEN‏ بها ‎EE‏ لم07 0 ‎A‏ ‏ل 0 0س ف إ ل ا أ اا اا و" ال الس الس الس الح لاس اي الع ‎ai‏ : 3 وااي ‎SE: CE‏ اناك ‎UR CO‏ ال ال ابلا ] ‎See RNA hal] TE > 1 i‏ حل شك كك إ ‎i |] ES 3 > : H i : 8‏ 1 ‎ee: hh >‏ اح حأ ححا ىفف ف ‎I‏ ‎EW‏ ال/08 0 0س 0 00000 0 ‎IEEE go‏ ‎i : : : i : : : he‏ ‎de‏ : ٍِْ : ; | :ْ :ْ ٍ ‎١ |‏ 0 ا ] مه 1 : : : ‎i : : : i‏ ا :ْ ‎Co I EE‏ : ‎bY‏ لت اح ا اتات ا ال انسحت كس مطحتت ‎x NOUN NY TR‏ ا ان ‎i I‏ ‎a‏ —————— أت .3 *— ا ‎Se a‏ : ا ‎ma‏ ‎Yow a . =‏ الل سسا ا 0 ا كا 7 سا الا ب لل صقر ‎oN Sh‏ . 8 ل & ب ب & & &« ‎Re we & 2‏ ا ‎a id‏ 2 2 ‎oF‏ & & ‎ot Ca‏ ‎ey ©‏ ب ‎al on‏ ‎i & ak‏ &
    i i
    —\VYvV- ‏بل‎ ‎A] 7 0: ‏ا‎ 4 ¥ Pa ‏لدت مال 1 | اا‎ : 0 ‏الس ات ل رم‎ phn 4 FLEE | oe mn pend pm 7 a da pam ‏وى‎ hE aa Ba hae ‏م الات الا الل الوا ل‎ Taq Rn ‏ا‎ mm] mins ‏ري‎ . db | ‏اللاي كد اا ات‎ Sl bd be - PEIRCE BOBO I DPC REM ¥ DO ra I eri] SE RRO oR EEE ‏لحا‎ bad ‏ليا‎ CT | ‏فلا‎ ae ‏جنا‎ ‎You ‏ال‎ = ; Les + : x - : Ev : : Tn 7 ‏م م ب‎ so ae & F&F ‏من‎ F&F © & EEE ‏من ا نا سن الى ا 8 4 ا 8 ب‎ ‏حون الاين الخ كحي للق 8 نب مي الى‎ ‏ل ان دا ا ل خا ال اا‎ WN ‏ص 1 & ل" ب م‎ N oH Pa oF 8 ‏اين خب ا ع اخ ان أ‎ SH ‏ر‎ ‏لع‎ & su : a = . & 2 > a wad or oF wa & oF > FE ECE # SA ‏ا‎ SH > & & ‏ب‎ ‎oF oF bd
    ‏.كل وا لكلا‎ oon ‏الل‎ ‎8 5 1 ‏جد ا‎ EA A, § = ‏إل اه‎ 8 8 3 § & a. ‏شين 0 م‎ Sh . 1 : ‘i Sw Yow oon t 3g 1. ‏عا‎ 83 ha 0 Slew a ‏ين‎ . 1: .ٍ cos — Ph - 8. . - i dd Fa ‏ال آل & حي هي‎ & & & ‏#ي‎ &F & §& ‏أي م لي ا ان‎ & oF ‏ا‎ SN AA Fw oF et ‏#ي‎ ‎FE EE Fob ‏ليد آي‎ ‏ين الى الى الى ا‎ F&F ‏اد‎ ‏ب أ نا آل ل" أن أ قي‎ ‏ا‎ Sa ‏ب > أن اا سل انوي‎ FSS & F&F # & 1S
    —\VA- i N ES eh 834 dla ‏الكشف عن‎ Ladi ‏ماخود من‎ igh HRP ‏مضاد‎ ‎0 8> : % FYE > aR ‏ا‎ Age © ‏ب‎ dl ‏ناتج عودة الارتباط‎ 1 ‏و‎ 1 $a IE + + ‏خضي‎ 3 GRE ‏ال‎ FIACHRIAFC ‏تغتيف‎ ‎N = : ‏مبكر ونتر‎ i ‏تان حرام‎ = Haas i plat ‏د ٍ ثائو‎ ‏ب‎ 88 Ses] ‏تالو جرام‎ ١ ‏جرام / ميكرونتر‎ gli 00 ‏ثائق كدوام 1 متشرو لتر‎ Waite] ‏جرام‎ BUTS ‏ب‎ © SE} ex HERA 3 4 & 1 ‏ند ل‎ en ‏ناث كراج‎ 5 3 : * = : 1 ty x | | ‏ال‎ al 8 ‏ا«‎ £ % ] PARRA] ‏ب‎ ١ 3 8 2 ‏ا ل‎ 3 = SAN a ‏كت ل‎ o ov pm ah a | ee fb SPORE | ‏ا‎ NET ‏مي‎ ‎3 ‏ما‎ SEL RO.
    OL. 2 | ‏ا ااا‎ 4 ‏طرخ صق‎ 4. BEES . [ ; A, GOFAJY ٠“ Be
    -١١6- ‏ا‎ ‏خلا‎ A od # EE TE SY 4 ‏لاي‎ . ١ ١ ‏الس إٍْ و‎ ‏لل“‎ ; Co ht a A RL 1 Ey * 23 ~ oa k sess ® dont ‏ال‎ TIES E ‏8ج“‎ ‎pa ‏فر‎ & HE 3 ES
    ‏.م‎ 1 aR X 8 ‏ميان لاوا‎ ٌ 7 8 ‏اا‎ ‏ب‎ Jad
    — \ A «= BE Sef alos B00 0 BY Safe] ala ole ‏و لتر ها‎ ses [ ‏م ؟ ثاني قرام‎ ‏تق ل نج‎ : = E OF 1s, 0 = I ‏ل‎ ‎Ee Eo Rh a Te LY £ ELIE ‏لل‎ CN SE : 3 ‏ا‎ i” Se 5 7 ‏وج نانع مت‎ Sd 2 AALS 1 “a, Si, Hin ً 3 Ee PO # $333 ‏ب‎ ‏امن‎ i fe a IR Ets £3 0 2 ar 313 3 ‏نا‎ 18 4 1 4 4 — a ‏اللا‎ . ot —- ‏حم‎ RE = : = . en MEE 3134 ‏وى‎ Fag 5 + Sd ps ‏كثاقة‎ ‏اس ا‎ = “4 3 3 a 08 8 7 ‏ا + المج لوا«‎ a © gd an ‏ب“ | كثافة‎ 1 : ‏لا اليك‎ 4 0 ‏ا + يخ‎ =o ic ‏ا 1 1 جا‎ : Ba o aE 5 ! a, ‏ا‎ 3 111 ‏ص‎ ‏ا ا الا‎ ‏ب 4 1 2 : 8 مج‎ ® 4 3 0 R i »* I = § qq * 5 - - or 238, 4 LIAN TdF oT ‏كثافة ضونية <# > نانومتر‎ 2 ‏الات‎ F = 3 1: a or = ‏بي الا ا اال‎ ‏ذ‎ [SE a } ‏ادا‎ a * ‏شكل‎
    -١6١- BE ‏بكرو لتر‎ felon ‏نائق‎ ه١‎ A Ase] ‏جراد‎ 802 ‏جراء / ميكر رتت أ‎ HER 8 ‏اج‎ ‎08 LL 3 Fo ‏ا‎ ‎= ١ EY
    0 1. 6 - ‏ذا % لجس“‎ SHEL ‏د‎ = = = > a Read << Aad gd ‏كثاقة‎ Y, 3 dy ‏وا‎ ّ Sg, Ee] Jaan EV # A HRS, 1 "a, 2 ‏ل‎ Ey 4 i — : 2 ‏م‎ ‏لالع & ا‎ : ai 3 " 4 7 1 ]3 ‏م]‎ 0 Pa 25 EERIE haa E 1 | 8 8 GE 1 ‏اال‎ ‎| 0 ‏ب 1 ب‎ 13 Bo: Br Ea [1 a Wd ‏سا‎ SR ‏انها‎ AE Fg LY ES Seal << Aad pled ‏شافة‎ - ‏اند‎ ‏ا الى‎ A [ed jo] i ES 3 453 © ‏مل‎ ‎Crh og Te 4% fy TAR A 5% 4 Yep. ‏لدان ااا ا ا‎ > 4 3 ‏د‎ 4 Be 1: 8 3 a 3 3 ‏ا‎ i : ‏ف ل اله اث‎ & TE 3 ١ 5] i. . : EER tg 30 * ‏ثثاقة ضونية £8 لومت اد‎ Tox * 2 $a LE 2 3 1 0 ‏حا نبب ل‎ TT ‏سي .ص لصوي‎ 1٠١ ‏شكل‎ ‎ive
    , | mActRlla-Fc 0 ١ mActRlla-Fc ‏نا‎ mAcHRILS-Fe D30 1° + Ble ee = mActRlla-FeD + NY mActRlla-FeDt .
    -م١-‏ م ب والعتعقم ا ‎PESD ٠‏ ‎J 3‏ اخ الو ايه فيس
    ‎Y.‏ 5510 4 ا ‎EO‏ ‏م ما ‎FBS 0 ¥ ¥‏ : ‎Toe Soon 8‏ سن ‎TL‏ ‏شكل ‎IR‏ ‎Ive‏
    —VAE- ‏سا ري‎ : ‏عينة مقارنة ل[‎ 4 : ‏و‎ FEO 3 KR: . Ted 0
    5. 0 ‘al A 0 i 0 BFU-E CFLLE *h of) 1 ‏امدقت له‎ 3 : £ rs x Py 7 2 ¥ Pe . 1" 7 ¥ - +7 7 8 : 4 ١١ ‏ب نع‎ . ‏كر‎ ْ ¥ tr 3 2 § & ‏ان‎ 0 ‏يود‎ ‎0 ee BE RAPOI A : ‏نَ‎ 1 5 “> ‏ا ا‎ BFE BIE TT Pe Ergh End Eni SECT Lan. TTA
    اج ‎A‏ \ _ ‎af i‏ عشة ‎Tow — 4 le‏ ‎BE cia‏
    لا . .1 جد ل 3 0 0 ~ ‎٠ 0‏ لاا ‎a Yo‏ الم ‎i‏ : 2 _ : | 1 شر ‎CEU-E‏ غعال8 شكل 1د ‎Ta‏ ‏اعينة مقارنة .يا ‎mActRI&Fc :‏ اه لال ٍ 1 : ¥ 4 = ‎i : io‏ 3 اي ا لي 1 ‎i‏ ,9 ٍ ب ا 1 } 9 4 7 ال 1 ‎i ?‏ = ‎Fa‏ ‏& + 1 د 4 8 1 3 8 عبدة مقارنة م 8 معنف اط حضون ‎BE‏ يي ‎Fa‏ : ‎v :‏ 1 { 1 ‎hi : :‏ ‎ST 0‏ 0 = 8 أو ‎Ye en‏ ‎Enc‏ الع ‎SETI Eva‏ ‎jas oa‏ 3 و
    -١م81-‎ ‏لست ا‎ GORY 4 0 ٍ 4 Fp ‏اله‎ Conbral ‏طفع‎ we GDF-Y V+ mActRIAFC 3 ‏مستبي ذ؛‎ + : fe 3 | / 5 wt 4 ْ 4 en Soa ‏إ‎ SF ‏وا‎ a 2 0 ‏م & إ‎ & Fo 0 ‏إ‎ Fa 2 ‏صفر‎ of : 7 LINE DE ‏#*_ة "؟‎ SE ‏مم‎ ‏يرم‎ ‏شكل ا‎ Shas WE ‏جمع‎ ‎® ‎T= | *# ‏دا‎ 1 3 ‏م‎ a 2 fox ] 0 5 A SO ْ: 1 in J * 0 ‏أ" ل‎ : puddin Wall {3 ‏ا امقس‎ +mActRIAFc A Jd st GOF-y 4 7 ‏شكل‎
    مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏
SA515360337A 2012-10-24 2015-04-23 مرقم حيوي للاستخدام في علاج فقر الدم SA515360337B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261718126P 2012-10-24 2012-10-24
PCT/US2013/066350 WO2014066486A2 (en) 2012-10-24 2013-10-23 Biomarker for use in treating anemia

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA515360337B1 true SA515360337B1 (ar) 2019-09-12

Family

ID=50545462

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA515360337A SA515360337B1 (ar) 2012-10-24 2015-04-23 مرقم حيوي للاستخدام في علاج فقر الدم

Country Status (11)

Country Link
US (2) US20150276766A1 (ar)
EP (2) EP3608419A1 (ar)
JP (3) JP6401171B2 (ar)
CN (2) CN104968801B (ar)
AU (3) AU2013334659B2 (ar)
CA (1) CA2889209C (ar)
ES (1) ES2753811T3 (ar)
HK (1) HK1213948A1 (ar)
IL (3) IL267663B (ar)
SA (1) SA515360337B1 (ar)
WO (1) WO2014066486A2 (ar)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8128933B2 (en) 2005-11-23 2012-03-06 Acceleron Pharma, Inc. Method of promoting bone growth by an anti-activin B antibody
AU2006318449B2 (en) 2005-11-23 2012-07-05 Acceleron Pharma Inc. Activin-actRIIa antagonists and uses for promoting bone growth
US8895016B2 (en) 2006-12-18 2014-11-25 Acceleron Pharma, Inc. Antagonists of activin-actriia and uses for increasing red blood cell levels
CA2677007A1 (en) 2007-02-01 2008-08-07 Acceleron Pharma Inc. Activin-actriia antagonists and uses for treating or preventing breast cancer
TWI782836B (zh) 2007-02-02 2022-11-01 美商艾瑟勒朗法瑪公司 衍生自ActRIIB的變體與其用途
TWI667038B (zh) 2007-02-09 2019-08-01 美商艾瑟勒朗法瑪公司 包含ＡｃｔＲＩＩａ-Ｆｃ融合蛋白的醫藥組合物；ＡｃｔＲＩＩａ-Ｆｃ融合蛋白於治療或預防與癌症相關的骨質流失之用途；ＡｃｔＲＩＩａ-Ｆｃ融合蛋白於治療或預防多發性骨髓瘤之用途
US7960343B2 (en) 2007-09-18 2011-06-14 Acceleron Pharma Inc. Activin-ActRIIa antagonists and uses for decreasing or inhibiting FSH secretion
SI3750552T1 (sl) 2008-08-14 2023-10-30 Acceleron Pharma Inc. GDF pasti
US8216997B2 (en) 2008-08-14 2012-07-10 Acceleron Pharma, Inc. Methods for increasing red blood cell levels and treating anemia using a combination of GDF traps and erythropoietin receptor activators
CN107267520A (zh) 2009-06-12 2017-10-20 阿塞勒隆制药公司 截短的actriib‑fc融合蛋白
US8710016B2 (en) 2009-11-17 2014-04-29 Acceleron Pharma, Inc. ActRIIB proteins and variants and uses therefore relating to utrophin induction for muscular dystrophy therapy
CN103298832A (zh) 2010-11-08 2013-09-11 阿塞勒隆制药公司 Actriia结合剂及其用途
CA2890217C (en) 2012-11-02 2021-07-20 Yifu FANG Activin-actrii antagonists and uses for treating bone and other disorders
EP3131931B1 (en) * 2014-04-18 2020-10-21 Acceleron Pharma Inc. Methods for increasing red blood cell levels and treating sickle-cell disease
WO2015192111A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Acceleron Pharma, Inc. Methods and compositions for treating ulcers
MA41052A (fr) * 2014-10-09 2017-08-15 Celgene Corp Traitement d'une maladie cardiovasculaire à l'aide de pièges de ligands d'actrii
TWI695068B (zh) 2014-11-24 2020-06-01 美商身體邏輯股份有限公司 用於結合生長分化因子１１的核酸化合物
BR112017011722A2 (pt) * 2014-12-03 2018-02-27 Acceleron Pharma Inc antagonistas de activina-actrii e usos para o tratamento de anemia
PL3286206T3 (pl) 2015-04-22 2021-09-13 Biogen Ma Inc. Nowe hybrydowe białka pułapki na ligand actriib do leczenia chorób powodujących zanik mięśni
EP3294320A4 (en) * 2015-05-13 2018-12-26 Celgene Corporation Treatment of beta-thalassemia using actrii ligand traps
JP2018522579A (ja) * 2015-05-20 2018-08-16 セルジーン コーポレイション アクチビンＩＩ型受容体リガンドトラップを使用するβ−サラセミアのインビトロ細胞培養法
EP3370754A4 (en) 2015-11-04 2019-10-23 Acceleron Pharma Inc. METHODS FOR INCREASING ERYTHROCYTE RATES AND TREATING INEFFECTIVE ERYTHROPOISIS
CN105738614B (zh) * 2016-02-23 2017-12-05 山东大学 一种应用流式细胞仪分析评价小鼠骨髓红细胞生成功能的方法

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63502716A (ja) 1986-03-07 1988-10-13 マサチューセッツ・インステチュート・オブ・テクノロジー 糖タンパク安定性の強化方法
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5096815A (en) 1989-01-06 1992-03-17 Protein Engineering Corporation Generation and selection of novel dna-binding proteins and polypeptides
US5198346A (en) 1989-01-06 1993-03-30 Protein Engineering Corp. Generation and selection of novel DNA-binding proteins and polypeptides
WO1996001845A1 (en) * 1994-07-08 1996-01-25 The Johns Hopkins University School Of Medicine Growth differentiation factor-11
US6891082B2 (en) * 1997-08-01 2005-05-10 The Johns Hopkins University School Of Medicine Transgenic non-human animals expressing a truncated activintype II receptor
JP2001513982A (ja) 1997-08-29 2001-09-11 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド フォリスタチン−３
CA2418835A1 (en) 2000-10-16 2002-04-25 Phylos, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
TWI329129B (en) * 2001-02-08 2010-08-21 Wyeth Corp Modified and stabilized gdf propeptides and uses thereof
AU2002256371B2 (en) 2001-04-26 2008-01-10 Amgen Mountain View Inc. Combinatorial libraries of monomer domains
BR0307871A (pt) * 2002-02-21 2005-04-12 Wyeth Corp Proteìnas contendo domìnio de folistatina
WO2005025601A1 (en) 2003-09-15 2005-03-24 Monash University Follistatin isoforms and uses thereof
ES2426005T3 (es) 2004-07-23 2013-10-18 Acceleron Pharma Inc. Polipéptidos del receptor ACTRII, procedimientos y composiciones
US20060234299A1 (en) 2004-11-16 2006-10-19 Avidia Research Institute Protein scaffolds and uses thereof
US8067562B2 (en) * 2005-11-01 2011-11-29 Amgen Inc. Isolated nucleic acid molecule comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:1
WO2008030367A2 (en) 2006-09-01 2008-03-13 The General Hospital Corporation Selective myostatin inhibitors
CN104524548A (zh) * 2006-12-18 2015-04-22 阿塞勒隆制药公司 活化素-actrii拮抗剂及在提高红细胞水平中的用途
TWI782836B (zh) 2007-02-02 2022-11-01 美商艾瑟勒朗法瑪公司 衍生自ActRIIB的變體與其用途
KR20220002710A (ko) * 2008-06-26 2022-01-06 악셀레론 파마 인코포레이티드 액티빈-ａｃｔｒｉｉａ 길항물질을 투약하는 방법 및 치료된 환자의 모니터링
US8216997B2 (en) * 2008-08-14 2012-07-10 Acceleron Pharma, Inc. Methods for increasing red blood cell levels and treating anemia using a combination of GDF traps and erythropoietin receptor activators
SI3750552T1 (sl) * 2008-08-14 2023-10-30 Acceleron Pharma Inc. GDF pasti
EA027071B1 (ru) * 2009-04-27 2017-06-30 Новартис Аг АНТИТЕЛО К ActRIIB И СОДЕРЖАЩАЯ ЕГО КОМПОЗИЦИЯ
CN102655872B (zh) * 2009-08-13 2016-01-20 阿塞勒隆制药公司 Gdf捕获物和促红细胞生成素受体激活剂联合应用以增加红细胞水平
CN103298832A (zh) * 2010-11-08 2013-09-11 阿塞勒隆制药公司 Actriia结合剂及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
IL238414A0 (en) 2015-06-30
US20190049469A1 (en) 2019-02-14
CA2889209C (en) 2023-08-22
IL267663A (en) 2019-08-29
AU2013334659A1 (en) 2015-05-14
CN104968801A (zh) 2015-10-07
AU2021236465A1 (en) 2021-10-21
EP3608419A1 (en) 2020-02-12
IL290653A (en) 2022-04-01
HK1213948A1 (zh) 2016-07-15
EP2912462A4 (en) 2016-06-15
CA2889209A1 (en) 2014-05-01
JP7146850B2 (ja) 2022-10-04
AU2013334659B2 (en) 2019-07-11
JP6401171B2 (ja) 2018-10-03
EP2912462A2 (en) 2015-09-02
JP2018184428A (ja) 2018-11-22
EP2912462B1 (en) 2019-08-07
JP2020183389A (ja) 2020-11-12
ES2753811T3 (es) 2020-04-14
US20150276766A1 (en) 2015-10-01
CN113604550A (zh) 2021-11-05
JP2016500698A (ja) 2016-01-14
IL238414B (en) 2019-07-31
CN104968801B (zh) 2021-06-15
WO2014066486A2 (en) 2014-05-01
WO2014066486A3 (en) 2015-07-16
IL267663B (en) 2022-09-01
AU2019204098A1 (en) 2019-07-04
AU2019204098B2 (en) 2021-07-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA515360337B1 (ar) مرقم حيوي للاستخدام في علاج فقر الدم
US20210355191A1 (en) Activin-actrii antagonists and uses for increasing red blood cell levels
AU2016203098B2 (en) Antagonists of activin-ActRIIa and uses for increasing red blood cell levels
EP3227675B1 (en) Activin-actrii antagonists and uses for treating myelodysplastic syndrome
AU2018282452A1 (en) Activin-ActRII antagonists and uses for increasing red blood cell levels
US20230142386A1 (en) Activin-actrii antagonists and uses for treating anemia
AU2013221910A1 (en) Activin-ActRII antagonists and uses for increasing red blood cell levels
NZ743635A (en) Biomarker for use in treating anemia
NZ743635B2 (en) Biomarker for use in treating anemia