RU99109022A - Термостабильная днк полимераза из anaerocellum thermophilum - Google Patents
Термостабильная днк полимераза из anaerocellum thermophilumInfo
- Publication number
- RU99109022A RU99109022A RU99109022/13A RU99109022A RU99109022A RU 99109022 A RU99109022 A RU 99109022A RU 99109022/13 A RU99109022/13 A RU 99109022/13A RU 99109022 A RU99109022 A RU 99109022A RU 99109022 A RU99109022 A RU 99109022A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- polymerase
- dna
- paragraphs
- dna polymerase
- activity
- Prior art date
Links
- 101700011961 DPOM Proteins 0.000 title claims 14
- 101710029649 MDV043 Proteins 0.000 title claims 14
- 101700061424 POLB Proteins 0.000 title claims 14
- 101700054624 RF1 Proteins 0.000 title claims 14
- 241001429558 Caldicellulosiruptor bescii Species 0.000 title claims 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 10
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims 6
- 108010092799 EC 2.7.7.49 Proteins 0.000 claims 4
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 claims 4
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 claims 4
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 claims 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims 3
- 108020004999 Messenger RNA Proteins 0.000 claims 3
- 229920000272 Oligonucleotide Polymers 0.000 claims 3
- 230000001419 dependent Effects 0.000 claims 3
- 229920002106 messenger RNA Polymers 0.000 claims 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 3
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 claims 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims 2
- 239000011572 manganese Substances 0.000 claims 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims 2
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 claims 1
- 241001455623 Anaerocellum Species 0.000 claims 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 claims 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 claims 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims 1
- 108060009497 WRNexo Proteins 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 claims 1
- 230000000087 stabilizing Effects 0.000 claims 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 claims 1
Claims (23)
1. Очищенная термостабильная ДНК-полимераза, получаемая из Anaerocellum thermophilum, которая катализирует матрично-направленную полимеризацию ДНК, обладает 5'-3'-полимеразной активностью, не обладает 3'-5'-экзонуклеазной активностью и обратно-транскриптазной активностью в присутствии ионов магния и в отсутствие ионов марганца.
2. Полимераза по п. 1, отличающаяся тем, что указанная полимераза проявляет Мg2+-зависимую обратно-транскриптазную активность более чем 30% по сравнению с ДНК-полимеразной активностью, которую принимают за 100%.
3. Полимераза по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанная полимераза проявляет обратно-транскриптазную активность, которая является Мn2+ зависимой.
4. Полимераза по пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанная полимераза проявляет Мn2+-зависимую обратно-транскриптазную активность более чем 60% по сравнению с ДНК-полимеразной активностью, которую принимают за 100%.
5. Полимераза по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что указанная полимераза сохраняет, по крайней мере, 90% своей активности после инкубирования в течение 30 мин при 80oС в отсутствие стабилизирующих детергентов.
6. Полимераза по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что кажущаяся мол. м. указанной полимеразы составляет около 96000-100000 Дальтон.
7. Полимераза по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что указанную полимеразу получают из E. coli LE392pUBS520pAR10 (DSM 11177).
8. Выделенная последовательность ДНК, кодирующая полимеразу, охарактеризованную в любом из пп. 1-7, получаемая из Anaerocellum thermophilum.
9. Рекомбинантная последовательность ДНК, способная кодировать полимеразную активность микроорганизма Anaerocellum thermophilum.
10. Выделенная последовательность ДНК по п. 8, представленная формулой, приведенной в последовательности ИД 7.
11. Вектор, содержащий выделенную последовательность ДНК, охарактеризованную в любом из пп. 8-10.
12. Вектор по п. 11, отличающийся тем, что такой вектор является плазмидой pASK75, содержащей ген ДНК-полимеразы Anaerocellum thermophllum.
13. Вектор по пп. 11 и 12, отличающийся тем, что обладает некоторыми или всеми из следующих признаков:
(1) промоторы или сайты инициализации транскрипции
(2) операторы, которые можно использовать для "включения или выключения" экспрессии гена
(3) сайты связывания рибосом для улучшения трансляции
(4) сайты окончания транскрипции или трансляции.
(1) промоторы или сайты инициализации транскрипции
(2) операторы, которые можно использовать для "включения или выключения" экспрессии гена
(3) сайты связывания рибосом для улучшения трансляции
(4) сайты окончания транскрипции или трансляции.
14. Микроорганизм-хозяин, трансформированный вектором, охарактеризованным в пп. 11-13.
15. Микроорганизм-хозяин по п. 14, отличающийся тем, что указанный трансформант является E. coli LE392pUBS520pAR10 (DSM 11177).
16. Способ получения ДНК-полимеразы, охарактеризованной в любом из пп. 1-7, включающий:
(а) культивирование природного штамма Anaerocellum thermophilum;
(b) суспендирование клеток из природного штамма в буфере;
(c) разрушение клеток
(d) очистку ДНК-полимеразы по методу хроматографии, включающую использование одной или более из колонок с Сефарозой.
(а) культивирование природного штамма Anaerocellum thermophilum;
(b) суспендирование клеток из природного штамма в буфере;
(c) разрушение клеток
(d) очистку ДНК-полимеразы по методу хроматографии, включающую использование одной или более из колонок с Сефарозой.
17. Способ получения ДНК-полимеразы, охарактеризованной в любом из пп. 1-7, включающий выращивание рекомбинантного штамма E. coli, трансформированного вектором, охарактеризованным в пп. 11-13, и очистку и выделение ДНК-полимеразы.
18. Способ амплификации ДНК, отличающийся тем, что термостабильную ДНК-полимеразу, охарактеризованную в любом из пп. 1-7, добавляют к подлежащей амплификации матричной ДНК в присутствии двух специфичных к последовательности олигонуклеотидов.
19. Способ клонирования второй кДНК и секвенирования РНК, отличающийся тем, что термостабильную ДНК-полимеразу, охарактеризованную в любом из пп. 1-7, добавляют к подлежащей транскрипции матричной РНК и секвенируют в присутствии, по крайней мере, одного праймера, дезоксинуклеотидов и дидезоксинуклеотидов, в то время как праймер или дезоксинуклеотиды или дидезоксинуклеотиды являются мечеными.
20. Способ мечения ДНК в способе по п. 18, 19, 21, 22 или 23, отличающийся тем, что дезоксинуклеотиды или дидезоксинуклеотиды являются мечеными.
21. Способ обратной транскрипции, отличающийся тем, что термостабильную ДНК-полимеразу, охарактеризованную в любом из пп. 1-7, добавляют к подлежащей транскрипции в ДНК матричной РНК и секвенируют в присутствии одного праймера.
22. Способ секвенирования ДНК, отличающийся тем, что термостабильную ДНК-полимеразу, охарактеризованную в любом из пп. 1-7, добавляют к подлежащей секвенированию матричной ДНК в присутствии дезоксинуклеотидов и дидезоксинуклеотидов и, по крайней мере, одного специфичного к последовательности олигонуклеотидов, в то время как дНТФ или ддНТФ или специфичный к последовательности олигонуклеотид является мечеными.
23. Способ синтеза кДНК, отличающийся тем, что термостабильную ДНК-полимеразу, охарактеризованную в любом из пп. 1-7, добавляют к подлежащей транскрипции в ДНК матричной РНК в присутствии одного праймера и дНТФ.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP96115877.1 | 1996-10-03 | ||
| EP96115877A EP0835935A1 (en) | 1996-10-03 | 1996-10-03 | Thermostable DNA Polymerase from Anaerocellum thermophilum |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002114591/13A Division RU2297454C2 (ru) | 1996-10-03 | 1997-10-01 | СПОСОБ АМПЛИФИКАЦИИ ДНК, СПОСОБ КЛОНИРОВАНИЯ ВТОРОЙ кДНК И СПОСОБ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ ДНК |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU99109022A true RU99109022A (ru) | 2002-07-10 |
| RU2198222C2 RU2198222C2 (ru) | 2003-02-10 |
Family
ID=8223264
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99109022/13A RU2198222C2 (ru) | 1996-10-03 | 1997-10-01 | СПОСОБ СИНТЕЗА кДНК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТЕРМОСТАБИЛЬНОЙ ДНК-ПОЛИМЕРАЗЫ |
| RU2002114591/13A RU2297454C2 (ru) | 1996-10-03 | 1997-10-01 | СПОСОБ АМПЛИФИКАЦИИ ДНК, СПОСОБ КЛОНИРОВАНИЯ ВТОРОЙ кДНК И СПОСОБ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ ДНК |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002114591/13A RU2297454C2 (ru) | 1996-10-03 | 1997-10-01 | СПОСОБ АМПЛИФИКАЦИИ ДНК, СПОСОБ КЛОНИРОВАНИЯ ВТОРОЙ кДНК И СПОСОБ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ ДНК |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6692932B1 (ru) |
| EP (2) | EP0835935A1 (ru) |
| JP (1) | JP4285615B2 (ru) |
| AU (1) | AU718256B2 (ru) |
| CA (1) | CA2267217C (ru) |
| IL (1) | IL129165A0 (ru) |
| NO (1) | NO991567L (ru) |
| NZ (1) | NZ334654A (ru) |
| RU (2) | RU2198222C2 (ru) |
| WO (1) | WO1998014588A1 (ru) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040009486A1 (en) | 1999-10-29 | 2004-01-15 | Sorge Joseph A. | Compositions and methods utilizing DNA polymerases |
| US6436677B1 (en) | 2000-03-02 | 2002-08-20 | Promega Corporation | Method of reverse transcription |
| US6632645B1 (en) | 2000-03-02 | 2003-10-14 | Promega Corporation | Thermophilic DNA polymerases from Thermoactinomyces vulgaris |
| EP1419258A2 (en) * | 2001-08-13 | 2004-05-19 | DTU, Technical University of Denmark | Plasmids from an extremely thermophilic microorganism and derived expression vectors |
| DK2374900T3 (en) * | 2003-03-07 | 2016-10-17 | Rubicon Genomics Inc | Polynucleotides for amplification and analysis of the total genomic and total transcription libraries generated by a DNA polymerization |
| US8206913B1 (en) | 2003-03-07 | 2012-06-26 | Rubicon Genomics, Inc. | Amplification and analysis of whole genome and whole transcriptome libraries generated by a DNA polymerization process |
| WO2007117857A2 (en) * | 2006-03-31 | 2007-10-18 | Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. | Novel dna polymerase from caldicellulosiruptor kristjanssonii |
| WO2012173905A1 (en) * | 2011-06-16 | 2012-12-20 | The Regents Of The Unversity Of California | Salt-tolerant dna polymerases |
| JP2021533751A (ja) * | 2018-08-08 | 2021-12-09 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ カリフォルニアThe Regents of the University of California | 不連続な複数の鋳型から相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を順序だてて連続的に合成するための組成物およびその方法 |
| CN111621484A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-09-04 | 济南国益生物科技有限公司 | 一种改性热启动酶及其制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| US5374553A (en) * | 1986-08-22 | 1994-12-20 | Hoffmann-La Roche Inc. | DNA encoding a thermostable nucleic acid polymerase enzyme from thermotoga maritima |
| US5912155A (en) * | 1994-09-30 | 1999-06-15 | Life Technologies, Inc. | Cloned DNA polymerases from Thermotoga neapolitana |
-
1996
- 1996-10-03 EP EP96115877A patent/EP0835935A1/en not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-10-01 US US09/269,858 patent/US6692932B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-10-01 JP JP51624198A patent/JP4285615B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-01 AU AU49425/97A patent/AU718256B2/en not_active Ceased
- 1997-10-01 IL IL12916597A patent/IL129165A0/xx unknown
- 1997-10-01 WO PCT/EP1997/005390 patent/WO1998014588A1/en active Application Filing
- 1997-10-01 RU RU99109022/13A patent/RU2198222C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-10-01 CA CA2267217A patent/CA2267217C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-01 NZ NZ334654A patent/NZ334654A/xx unknown
- 1997-10-01 RU RU2002114591/13A patent/RU2297454C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-10-01 EP EP97912089A patent/EP0954583A1/en not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-03-30 NO NO991567A patent/NO991567L/no not_active Application Discontinuation
-
2004
- 2004-02-02 US US10/770,989 patent/US20050019789A1/en not_active Abandoned
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5912155A (en) | Cloned DNA polymerases from Thermotoga neapolitana | |
| RU99109121A (ru) | Термостабильная днк-полимераза из carboxydothermus hydrogenoformans | |
| Gualberto et al. | Editing of the wheat cox III transcript: evidence for twelve C to U and one U to C conversions and for sequence similarities around editing sites | |
| ES2201216T3 (es) | Alcohol-deshidrogenasas y su utilizacion para la preparacion por via enzimatica de compuestos hidroxilicos quirales. | |
| Fillat et al. | Isolation and overexpression in Escherichia coli of the flavodoxin gene from Anabaena PCC 7119 | |
| CA2118071A1 (en) | Dna encoding limonene synthase from mentha spicata | |
| TR200401186T4 (tr) | Rekombinant bir RNA-virüs oluşumunu yönlendirebilen nükleik asit sekansları içerikli suni kromozom yapıları. | |
| BR0003943A (pt) | Sequências de nucleotìdeo que codificam para o gene thre e processo para a produção enzimática de l-treonina usando bactérias corineforma | |
| RU99109022A (ru) | Термостабильная днк полимераза из anaerocellum thermophilum | |
| EP1233061A3 (en) | A method for cloning of a gene for pol I type DNA polymerase | |
| ATE386108T1 (de) | Nadh-oxidase aus lactobacillus | |
| BRPI0006915B8 (pt) | processo para preparação de l-aminoácidos | |
| AU2001279674A1 (en) | New nucleotide sequences which code for the mdha gene | |
| Christina Thomson et al. | RNA editing of mat-r transcripts in maize and soybean increases similarity of the encoded protein to fungal and bryophyte group II intron maturases: evidence that mat-r encodes a functional protein | |
| CA2267217A1 (en) | Thermostable dna polymerase from anaerocellum thermophilum | |
| ZA200102385B (en) | Nucleotide sequences coding for the dapC gene and process for the production of L-lysine. | |
| US6063595A (en) | Method of forming a macromolecular microgene polymer | |
| Field et al. | Cloning, sequencing, and demonstration of polymorphism in trypanothione reductase from Crithidia fasciculata | |
| KR960023056A (ko) | 푸자리움 옥시스포룸으로부터의 페니실린 v 아미도하이드롤라아제 유전자 | |
| EP1728859A4 (en) | SEQUENCE CAPABLE OF ACCELERATING GENE EXPRESSION AT A MODERATELY LOW TEMPERATURE | |
| EP0897006B1 (en) | Rhodosporidium d-amino acid oxidase | |
| RU99109110A (ru) | Термостабильная полимераза из thermococcus gorgonarius | |
| RU2221867C2 (ru) | Очищенная термостабильная днк-полимераза из thermococcus gorgonarius, ее получение и применение | |
| Ackerman et al. | Selective in vitro transcription of the 5S RNA genes of a DNA template | |
| CN116064506B (zh) | 一种绵羊DQB基因的1号外显子的扩增引物对、sg序列和应用 |