RU98119525A - Иммуномагнитное разделение клеток, используемое для идентификации генов, ассоциированных с сайт-предпочтительным образованием метастазов рака - Google Patents

Claims (11)

1. Способ идентификации генов с сайт-специфической или сайт-предпочтительной экспрессией в конкретных клетках-мишенях, присутствующих в клеточном окружении, имеющем отличие от их природного окружения или не являющемся их природным окружением, отличающийся тем, что указанные клетки-мишени вначале обнаруживают и выделяют с помощью неоднократных процедур, проводимых иммуномагнитным методом, в результате чего получают до 100% специфических клеток-мишеней, после чего указанные клетки-мишени подвергают известной процедуре клонирования генов, где проводят сравнение неизвестных генов, имеющих различия в уровнях экспрессии мРНК в клетках-мишенях, выделенных из различных тканей.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в нем используемыми клетками-мишенями являются злокачественные клетки, полученные от твердых первичных или рецидивирующих опухолей и/или от метастазов таких опухолей в лимфоузлы; и/или кровь; и/или костный мозг; и/или костную ткань; и/или печень; и/или легкие; и/или центральную нервную систему; и/или злокачественный плевральный выпот и асцит; мочу; и/или спинномозговую жидкость; и/или в другие участки организма.

3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что в нем злокачественные клетки выделяют из моноклеточных суспензий, полученных из диагностированных твердых опухолей; и/или из фракций мононуклеарных клеток, полученных из образцов костного мозга или крови; и/или из клеток, присутствующих в других физиологических жидкостях организма.

4. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что в нем используемыми злокачественными клетками являются in vitro-культивированные опухолевые клетки человека; и/или опухолевые клетки человека, растущие в специфических тканях у животных с иммунодефицитом; и/или экспериментальные метастазы опухолей человека выращенные у этих животных.

5. Способ по пп.1-4, отличающийся тем, что в нем из выделенных клеток экстрагируют РНК и/или ДНК.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что в нем экстрагированные нуклеиновые кислоты используют в целях клонирования генов.

7. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что в нем указанным методом клонирования генов является метод дифференциального отображения и метод субтрактивной гибридизации, либо любой другой метод, который может быть использован для идентификации генов с дифференцированной экспрессией.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что в нем амплифицированные кДНК, полученные из злокачественных клеток, отобранных из различных участков, исследуют и сравнивают на секвенирующем геле, а те из них, которые представляют интерес с точки зрения сайт-специфического или сайт-предпочтительного характера экспрессии, секвенируют и идентифицируют.

9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что в нем характер экспрессии идентифицированных генных последовательностей исследуют с использованием материала, полученного из всех участков релевантных опухолевых клеток, описанных в пп.1-4.

10. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что в нем ранее неизвестные гены, идентифицированные как описано в предыдущем пункте, используют для генной терапии, и/или в качестве мишеней для проведения процедур, направленных на изменение или инактивацию генов или их продуктов.

11. Использование способа по п.1 для получения специфических генных последовательностей и продуктов их экспрессии в клетках-мишенях, присутствующих в клеточном окружении, отличающемся от их природного окружения или не являющемся их природным окружением.