RU2815536C1 - Вакцина против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма "А/Танзания/2013" культуральная инактивированная сорбированная - Google Patents
Вакцина против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма "А/Танзания/2013" культуральная инактивированная сорбированная Download PDFInfo
- Publication number
- RU2815536C1 RU2815536C1 RU2023107358A RU2023107358A RU2815536C1 RU 2815536 C1 RU2815536 C1 RU 2815536C1 RU 2023107358 A RU2023107358 A RU 2023107358A RU 2023107358 A RU2023107358 A RU 2023107358A RU 2815536 C1 RU2815536 C1 RU 2815536C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- foot
- mouth disease
- strain
- tanzania
- genotype
- Prior art date
Links
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 title claims abstract description 192
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 88
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 66
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 46
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 25
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 14
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 13
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims abstract description 12
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 claims abstract description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 18
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 7
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 claims description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 29
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 29
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 29
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 47
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 30
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 10
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 8
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 5
- 241001250090 Capra ibex Species 0.000 description 4
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- LSDGFGPIFBOTJI-UHFFFAOYSA-N 2-(aziridin-1-yl)ethanamine Chemical compound NCCN1CC1 LSDGFGPIFBOTJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- -1 polyhexamethylene guanidine hydrochloride Polymers 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N O.O.O.[Al] Chemical compound O.O.O.[Al] MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 101710140501 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100030100 Sulfate anion transporter 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710144481 Sulfate anion transporter 1 Proteins 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 2
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 241000710189 Aphthovirus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100031974 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101000703754 Homo sapiens CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 238000010629 Molecular evolutionary genetics analysis Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 1
- 101710173681 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 2 Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000009351 contact transmission Effects 0.000 description 1
- 238000011217 control strategy Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L disodium;2-hydroxy-3-[4-[4-[(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)amino]-3-methylphenyl]-2-methylanilino]propane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)=CC=2)=C1 BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011886 postmortem examination Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000010464 virion assembly Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к разработке вакцины против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральной инактивированной сорбированной. Вакцина содержит авирулентный и очищенный концентрированный антиген штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I, полученный в суспензионной перевиваемой клеточной линии из почки новорожденного сирийского хомячка (BHK-21/SUSP/ARRIAH), представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура, адъювант гидроксид алюминия и сапонин в эффективных соотношениях. Вакцина обладает высокой иммуногенностью и способна обеспечить эффективную защиту от гомологичного возбудителя инфекции, циркулирующего в странах Африки. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 8 табл., 14 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к разработке вакцины против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма «А/Танзания/2013» культуральной инактивированной сорбированной.
Ящур - особо опасное, карантинное, высококонтагиозное заболевание животных, которое в соответствии с классификацией МЭБ (OIE) относится к списку «Болезней, общих для животных разных видов», вызывает серьезные экономические потери, которые связаны с затратами на ликвидацию болезни и/или проведение экстренной вакцинопрофилактики. Существует семь следующих серотипов вируса ящура: О, А, С, SAT-1, SAT-2, SAT-3 и Азия-1, при этом вирус серотипа А является разнообразным, что определяет актуальность изготовления вакцин против ящура данного серотипа и генотипа [2].
Каждый серотип генетически разделен на различные топотипы, а иногда на отдельные генетические линии и даже сублинии. Различия между ними определяют при анализе нуклеотидной последовательности высоковариабельного гена 1D, который кодирует аминокислотную последовательность белка VP1 [1]. Учитывая, что возбудитель ящура является РНК-содержащим вирусом, для него характерно образование большого количества мутаций во время репликации вирусного генома (преимущество в 5'-участке) и явление рекомбинации (преимущественно в 3'-участке). Именно по этой причине в пределах семи серотипов выделяют множество генетических линий и сублиний, на сегодняшний день их описано более 60.
Важность знания генетического разнообразия вируса ящура заключается в возможности тщательного анализа эпизоотической ситуации в конкретном регионе и детальном подборе подходящей вакцины, которая должна быть адаптирована именно к интересующему генотипу. Восстановление животных после переболевания каким-либо одним серотипом не обеспечивает иммунную защиту против другого серотипа и тем более некоторых других генетических линий [3]. Однако, вирусы ящура могут демонстрировать частичную перекрестную защиту в пределах одного серотипа. Данная защита встречается редко, и такие животные могут переболевать ящуром в скрытой форме, тем самым являясь вирусоносителями.
Установление генетических связей между различными изолятами и штаммами проводят с помощью нуклеотидного секвенирования, что дает возможность в условиях вспышки заболевания определить происхождение вируса. Антигенные характеристики вируса, связанные с появлением новых штаммов, важны для характеристики вспышек и поиска оптимальных вакцинных препаратов [4, 6].
Для изолятов ВЯ серотипа А характерно генетическое разнообразие. Серотип А включает в себя 3 охарактеризованных топотипа ASIA, AFRICA, EURO-SA и одну пока еще малоизученную группу изолятов.
Такое генетическое и антигенное разнообразие приводит к проблемам в специфической профилактики ящура при применении культуральных инактивированных противоящурных вакцин. В результате возникает необходимость создания новых средств специфической профилактики в отношении ящура серотипа А.
По причине легкого и быстрого распространения возбудителя ящура данное заболевание может приобретать размах эпизоотий [12]. С целью недопущения возникновения болезни в хозяйствах Российской Федерации применяется система мероприятий по борьбе и профилактике ящура, которая направлена на предупреждение заноса вируса в страну, систематическую иммунизацию крупного и мелкого рогатого скота в буферной зоне, а также проведение мониторинга иммунного статуса привитых животных.
Для иммунизации животных должна применяться вакцина, изготовленная из вируса, гомологичного полевым изолятам [6, 7, 8, 9, 10, 11].
Возникающие в мире вспышки ящура демонстрируют, что данная инфекция продолжает оставаться значимой экономической проблемой во всем мире. Наиболее эффективный способ реагирования на вспышки ящура в странах, свободных от болезней, по-прежнему остается - использование вакцин [5, 8, 9, 12, 13]. Для этого нужно наличие эффективной, безопасной вакцины, содержащей антиген вируса, соответствующий эпизоотическому распространяющемуся изоляту не только определенного серотипа, но и определенного генотипа. Создание подобных вакцин является актуальной задачей. Достижение данной цели позволит эффективно и экстренно применять вакцину в неблагополучном пункте и угрожаемой зоне для формирования иммунитета против конкретного генотипа вируса ящура [15].
Существуют критерии, определяющие успешное проведение экстренной иммунизации, которые отличаются следующими характеристиками: 1) содержит штамм вируса ящура с достаточным антигенным родством по отношению к изолятам, циркулирующим в очаге; 2) относится к требуемому виду среди разработанных вакцин; 3) характеризуется приемлемой безвредностью и эффективностью; 4) имеет соответствующий доступ, в том числе объем партий и своевременность их поставок.
Планирование на случай непредвиденных обстоятельств должно включать обеспечение вакцинации и учитывать возможность сложных решений не только в отношении того, когда, где и как применять вакцину, но и экономическую целесообразность ее использования [14].
На территории Восточной Африки, в частности, в Кении, Танзании, Эфиопии вспышки ящура генотипа A/AFRICA/G-I имеют яркий спорадический характер. Следует отметить, что в последние годы усилились торгово-экономические связи со странами Африканского континента, в частности, с Восточной Африкой. Имеются риски заноса изолятов данного генотипа вируса ящура на территорию Российской Федерации.
Анализируя вспышки, которые регистрировались на территории Африки, обнаружено, что в Кении, Танзании в период с 2003 по 2013 гг.были выявлены изоляты вируса ящура, которые принадлежат к генотипу A/AFRICA/G-I. Со вспышками удалось справиться, применяя серьезные меры по борьбе, однако, в последние годы в Эфиопии, Танзании, Кении вновь стали регистрировать вспышки ящура, вызванные вирусом того же генотипа. Данное явление представляется опасным и требует исследования штаммов данного генотипа для создания средств диагностики и специфической профилактики ящура генотипа A/AFRICA/G-I.
Известны производственные штаммы вируса ящура серотипа А, которые применяются для производства средств специфической профилактики ящура:
- штамм «А22/Ирак/64» (генотип A/ASIA/Iraq-64),
- штамм «А/Турция/06» (генотип A/ASIA/Iran-05),
- штамм «А/Краснодарский/2013» (генотип A/ASIA/Iran-05SIS-10),
- штамм «А/Забайкальский/2013» (генотип A/ASIA/Sea-97),
- штамм «А/ВНИИЗЖ/2015» (генотип A/ASIA/G-VII),
- штамм «A/KEN/42/66» (генотип A/AFRICA/G-I).
Изолят «A/TAN/5/2013» вируса ящура был выделен от крупного рогатого скота на территории Объединенной Республики Танзания в 2013 году и поступил в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из Всемирной справочной лаборатории института Пирбрайта (the World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease, the Pirbright institute, Великобритания) для проведения научных исследований. В результате данной работы путем адаптации к культурам клеток получен штамм «А/Танзания/2013».
По результатам сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей выделенный изолят принадлежит к серотипу А, топотипу AFRICA, генетической линии G-I вируса ящура, который значительно отличается от производственных штаммов вируса ящура серотипа А (фиг. 1) [16].
Учитывая увеличение торгово-экономических взаимоотношений между Россией и странами Африканского континента возникает опасность возникновения ящура данного генотипа в Российской Федерации и особое значение приобретает проблема возможной экстренной профилактики данного заболевания для формирования иммунитета у восприимчивых животных. Таким образом, возникла необходимость разработать новую вакцину против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма «А/Танзания/2013» культуральную инактивированную сорбированную для обеспечения биологической безопасности территории Российской Федерации и сопредельных государств.
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная сорбированная против ящура серотипа А (штамм «A/KEN/42/66»), содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного культурального антигенного материала из гомологичного возбудителю ящура штамма «A/KEN/42/66», полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде гидроксида алюминия и сапонина (адъювант): концентрация антигена (инактивированные 146S+75S компоненты вируса ящура) не менее 3,0 мкг/см3, содержание 10% раствора гидроокиси алюминия - 40% по объему, добавка в виде поддерживающей среды - до 1,0 см3 (прототип).
В качестве чувствительной биологической системы для репродукции вируса ящура используют перевиваемую суспензионную клеточную линию почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21, в качестве поддерживающей среды применяют среду Игла MEM без внесения сыворотки, с добавлением ферментативного гидролизата мышц сухого, гидролизата белков крови сухого при рН среды 7,40-7,60.
Для инактивации вируса используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). При изготовлении сорбированной вакцины в качестве адъюванта служит гидрооксид алюминия (Al(ОН)3). Очистку вируссодержащей суспензии от балластных примесей осуществляют с применением полигексаметиленгуанидин гидрохлорида (ПГМГ).
Авирулентный и очищенный инактивированный антигенный материал из штамма вируса ящура серотипа А представляет собой суспензию, состоящую из 146S+75S компонентов вируса ящура, то есть не только полных иммуногенных частиц, но и «пустых» капсидов.
Существенный недостаток вакцины-прототипа заключается в составе антигена, а именно, применении кроме 146S частиц еще и 75S компонента. По данным некоторых исследователей, в частности, Verlinden Y. (2005), «пустые» капсиды являются результатом неуспешной сборки вириона, либо временным вместилищем пентамеров и не является основным иммуногенным компонентом вакцинных препаратов.
Существенный недостаток вакцины-прототипа состоит в его очень низкой иммуногенной активности относительно штаммов/полевых изолятов вируса ящура генотипа A/AFRICA/G-I, циркулирующих в странах Африки по причине его появления более 50 лет назад. За этот период произошло множество мутаций в геноме изолятов вируса ящура, что привело к появлению новых изменений в генетических и антигенных свойствах возбудителя ящура данного генотипа.
Для решения этой проблемы было создано настоящее изобретение, в которое входила разработка вакцины против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма «А/Танзания/2013» культуральной инактивированной сорбированной. Данная вакцина предполагает высокое содержание преимущественно 146S иммуногенного компонента в препарате.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала инактивированных культуральных сорбированных вакцин для защиты животных против изолятов и штаммов вируса ящура серотипа А и, в частности, генотипа A/AFRICA/G-I.
Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма «А/Танзания/2013» культуральной инактивированной сорбированной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков, отраженных ниже.
Разработанная вакцина в 1,0 см3 препарата содержит следующие основные компоненты: 1) активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма «А/Танзания/2013» (генотип A/AFRICA/G-I) вируса ящура, репродуцированного предпочтительно в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH, в количестве не менее 4,0 мкг; 2) гидроксид алюминия 10%-ный коллоидный раствор с содержанием 45% по объему (4,5% в пересчете на сухое вещество), 3) сапонин в количестве не менее 1,5 мг, 4) поддерживающая среда - до 1,0 см3.
Штамм «А/Танзания/2013», который получен путем адаптации изолята «A/TAN/5/2013», депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вирусов ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №410 - деп / 22-44 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».
Штамм адаптирован к первично-трипсинизированным монослойным клеткам линии свиной почки (СП) и перевиваемым клеточным линиям из почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21/SUSP/ARRIAH), почки свиньи (IB-RS-2) и почки сибирского горного козерога (ПСГК-30).
Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы предпочтительно используют перевиваемую суспензионную культуру клеток BHK-21/SUSP/ARRIAH, а в качестве поддерживающей среды применяют среду Игла DMEM без внесения сыворотки, но с добавлением гидролизата белков крови в количестве 5% от общего объема при рН среды 7,45-7,65. Инактивацию вируса проводят с использованием аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) с концентрацией 0,030% от объема вируссодержащей суспензии. Инактивированный вирус очищают от балластных примесей с помощью полигексаметиленгуанидина (ПГМГ), который вносят в суспензию до концентрации 0,013% от общего объема.
Авирулентный и очищенный антиген штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура представляет собой суспензию, содержащую преимущественно инактивированный 146S иммуногенный компонент вируса ящура. Концентрацию компонента в продукте оценивают с помощью количественного варианта реакции связывания комплемента (РСК) [18]. Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1,0 см3 не менее 4,0 мкг инактивированных иммуногенных 146S частиц вируса ящура. Необходимую концентрацию иммуногенного компонента в вакцинном препарате обеспечивают благодаря концентрированию антигена с помощью сорбирования на поверхности коллоидных частиц гидроксида алюминия (Al(ОН)3).
Вакцину против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральную инактивированную сорбированную получают путем смешивания очищенного антигена и 10%-ной суспензии гидроксида алюминия в соотношении 55% на 45% по объему, соответственно. Для усиления иммунного ответа используют сапонин в концентрации не менее 1,5 мг/см3. Полученная вакцина представляет собой суспензию, содержащую частицы не растворимого в воде гидроксида алюминия, несущие на своей поверхности инактивированные вирионы вируса ящура, которые обеспечивают формирование иммунитета.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые спрашивается правовая охрана:
1. Вакцина против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма «А/Танзания/2013» культуральная инактивированная сорбированная.
2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю заболевания штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура в эффективном количестве.
3. Целевые добавки.
Существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный очищенный антиген штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура в эффективном количестве.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:
1. Авирулентный и очищенный антиген штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура в эффективном количестве.
2. Авирулентный и очищенный антиген штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток BHK-21/SUSP/ARRIAH и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура в количестве не менее 4,0 мкг в 1,0 см3 готового вакцинного препарата.
3. Из целевых добавок вакцина содержит адъювант.
4. Из целевых добавок вакцина содержит адъювант - гидроксид алюминия в комплексе с сапонином.
5. Вакцина содержит адъювант - гидроокись алюминия 4,5% в пересчете на сухой остаток в комплексе с сапонином в концентрации 1,5 мг в 1,0 см3 готового препарата.
6. Авирулентный и очищенный антиген штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура, полученного предпочтительно в перевиваемой суспензионной клеточной линии BHK-21/SUSP/ARRIAH, адъювант - гидроксид алюминия и сапонин, добавка в готовом препарате в виде поддерживающей среды в следующих количествах:
Предлагаемая вакцина против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральная инактивированная сорбированная обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против изолятов вируса ящура генотипа A/AFRICA/G-I, циркулирующего в странах Восточной Африки и соседних государствах.
Достижение технического результата от использования изобретения обеспечивается тем, что в состав предлагаемой противоящурной вакцины в качестве активного вещества введен антиген штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура, обладающий высокой иммуногенной активностью, создающий эффективную защиту восприимчивых животных против изолятов вируса ящура представленного генотипа, которые в последние годы вызывают вспышки заболевания в странах Африки.
Сущность изобретения отражена на графическом изображении:
Фиг. 1. - Дендрограмма, отражающая филогенетическое взаимоотношение штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура с эпизоотическими штаммами серологического типа А. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1.
Сущность изобретения пояснена следующими перечнями последовательностей:
SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура генотипа A/AFRICA/G-I;
SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура генотипа A/AFRICA/G-I.
Штамм «А/Танзания/2013» вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические признаки
Штамм «А/Танзания/2013» вируса ящура серотипа А относится к семейству Picornaviridae, роду Aphthovirus, виду Foot-and-Mouth Disease Virus и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона иксаэдрическая, размер 25 нм. Вирион состоит из молекулы одноцепочечной молекулы PHK с позитивным смыслом, заключенной в белковую оболочку. Она состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.
Антигенные свойства
По антигенным свойствам штамм «А/Танзания/2013» вируса ящура относится к серотипу А. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности. У переболевших животных в сыворотке крови образуются типоспецифические антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе и реакции микронейтрализации (РМН).
Антигенное родство (r1) штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура изучено в перекрестном исследовании штамма со специфическими сыворотками, полученными на следующие производственные штаммы вируса ящура:
- штамм «А22/Ирак/64» (генотип A/ASIA/Iraq-64),
- штамм «А/Турция/06» (генотип A/ASIA/Iran-05),
- штамм «А/Краснодарский/2013» (генотип A/ASIA/Iran-05SIS-10),
- штамм «А/Забайкальский/2013» (генотип A/ASIA/Sea-97),
- штамм «А/ВНИИЗЖ/2015» (генотип A/ASIA/G-VII),
- штамм «A/KEN/42/66» (генотип A/AFRICA/G-I) в РМН.
Титр референтных сывороток крови КРС, полученных путем иммунизации животных моновалентными вакцинами из производственных штаммов вируса ящура серотипа А, против 102 ТЦД50 гомологичного и гетерологичного вируса определяли в РМН при перекрестном титровании, рассчитывая значения с использованием уравнения линейной регрессии, и выражали в lg. Значение r1 определяли, как антилогарифм разности lg титров сыворотки против гетерологичного и гомологичного вируса [17, 18, 19].
Значение r1 в РМН интерпретировали следующим образом:
при ≥ 0,3 - исследуемый и производственный штаммы вируса ящура являются близкородственными;
при < 0,3 - исследуемый образец штамма вируса ящура отличается от производственного штамма.
Показатели антигенного родства при изучении штамма «А/Танзания/2013» составили r1 от 0,03 до 0,20, что свидетельствует об отсутствии антигенного родства с производственными штаммами вируса ящура серотипа А (табл. 1).
Гено- и хемотаксономическая характеристики
Штамм «А/Танзания/2013» вируса ящура является РНК (+) - содержащим вирусом с молекулярной массой 7,01×106 Д. Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,83×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую только из четырех белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Выделяют следующие основные неструктурные функциональные белки вируса ящура: 2А, 2В, 2С, 3А, 3B1, 3В2, 3В3, 3С, 3D (РНК-зависимая РНК-полимераза).
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5%) белка. Вирусная РНК (+) является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках.
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура 1D-гена белка VP1 штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм «А/Танзания/2013» вируса ящура принадлежит к генотипу A/AFRICA/G-I (Фиг. 1).
Физические свойства.
Масса вириона составляет 8,43×10-18 г. Плавучая плотность 1,43 г/см3.
Устойчивость к внешним факторам
Штамм «А/Танзания/2013» вируса ящура устойчив к эфиру, хлороформу, и ацетону. Наиболее стабилен при рН 7,45-7,65. Сдвиги рН в кислую и сильно щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам (выше 37,8°С).
Дополнительные признаки и свойства
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемых культурах.
Биотехнологические характеристики
Штамм «А/Танзания/2013» вируса ящура репродуцируется в перевиваемых культурах клеток: почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IB-RS-2), почки сирийского хомячка (ВНК-21).
При испытании было проведено 5 последовательных пассажей штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в перевиваемых культурах клеток ПСГК-30, ВНК-21, IB-RS-2. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой клеточной линии IB-RS-2 и на естественно восприимчивых животных - крупном рогатом скоте (КРС) и свиньях.
Для снижения эпизоотической опасности возникновения ящура, вызванного генотипом A/AFRICA/G-I, и предотвращения возникновения новых очагов болезни важна своевременная вакцинопрофилактика, что требует разработки высокоиммуногенной и эффективной вакцины.
Получена высокоиммуногенная и эффективная вакцина против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма «А/Танзания/2013» культуральная инактивированная сорбированная.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.
Пример 1. Генетическая характеристика штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура по данным ПЦР и нуклеотидного секвенирования.
Проведенные исследования заключались в изучении первичной структуры гена 1D (белок VP1) (639 н.о.) штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура методом нуклеотидного секвенирования методом Сенгера и определении положения данного штамма на филогенетическом древе вируса ящура серотипа А. Метод основан на определении первичной структуры гена 1D (белок VP1) испытуемого изолята/штамма с последующим анализом филогенетического родства с другими изолятами вируса ящура серотипа А.
Провели сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей гена 1D, кодирующего белок VP1 вируса ящура вакцинного штамма «А/Танзания/2013» с другими изолятами и штаммами. Последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура представлена на SEQ ID NO: 1. Последовательность аминокислот ID-гена, кодирующего белок VP1 штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура отражена на SEQ ID NO: 2.
Проведен филогенетический анализ штамма «А/Танзания/2013». Филогенетическое дерево выведено с использованием программы MEGA6 и алгоритма Neighbor-Joining [20]. Процент повторяющихся ветвей, в которых связанные таксоны сгруппированы вместе в тесте начальной загрузки (500 повторов), показан рядом с ветвями [21, 22]. Эволюционные расстояния были рассчитаны с использованием метода Maximum Composite Likelihood [23] и выражены в единицах количества замен оснований на сайт. Этот анализ включал 14 нуклеотидных последовательностей, в том числе последовательность 1D-гена штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура. Все позиции, содержащие пробелы и отсутствующие данные, были удалены (вариант полного удаления). В окончательном наборе данных было всего 663 позиций. Эволюционный анализ проводился в MEGA 6 [24].
В результате проведенной работы по сравнению полных нуклеотидных последовательностей гена 1D (белок VP1) штамма «А/Танзания/2013» и других изолятов/штаммов вируса ящура серотипа A/AFRICA/G-I определено положение исследуемого штамма на филогенетическом древе (фиг. 1).
По результатам всего анализа делаем вывод, что исследуемый штамм «А/Танзания/2013» относится к генотипу A/AFRICA/G-I, что подтверждают данные нуклеотидного и аминокислотного анализа.
Пример 2. Адаптация штамма «А/Танзания/2013» к перевиваемой монослойной культуре клеток почки сибирского горного козерога ПСГК-30.
Для заражения перевиваемой монослойной культуры клеток почки сибирского горного козерога ПСГК-30 использовали 10%-ную афтозную суспензию вируса ящура, полученную из афт КРС (2 пассаж). Посевная концентрация клеток составляла 0,3-0,4 млн кл./см3, доза заражения вирусом - 0,001 ТЦД50/кл. По результатам исследования репродукция вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» проходила при специфическом разрушении монослоя на 90-100% за 18-20 ч. В течение 6 последовательных пассажей отмечали рост значений титра инфекционной активности вируса от 6,25±0,10 до 7,80±0,10 lg ТЦД50/см3.
Максимальное значение титра инфекционной активности вируса было достигнуто на этапе 6 пассажа (7,80±0,10 lg ТЦД50/см3). Концентрация 146S частиц с 1 по 6 пассажи изменялась с 0,44±0,03 до 1,14±0,03 мкг/см3. При этом наибольшее количество 146S компонента отмечали на этапе 6 пассажа (1,14±0,03 мкг/см3). Степень достоверности (R2) результатов исследования в количественном варианте ОТ-ПЦР-РВ колебалась от 96,98 до 99,75%. Таким образом, на протяжении 6-ти последовательных пассажей была успешно проведена адаптация штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура к перевиваемой монослойной клеточной линии ПСГК-30.
Пример 3. Изучение условий монослойного культивирования вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» в промышленных масштабах.
В процессе промышленного культивирования штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в перевиваемой монослойной культуре клеток ПСГК-30 осуществляли подбор оптимальных условий культивирования вируса, анализируя разный состав поддерживающей среды, температурный фактор и дозу заражения клеток.
На первом этапе исследования оценивали влияние состава поддерживающей среды на репродукцию штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в монослойной культуре клеток ПСГК-30 в масштабах производства (на этапе с 5-го на 6-ой пассажи). Для сравнения применяли три среды с добавлением 2% фетальной сыворотки крови телят: 1) среда Игла DMEM; 2) среда RPMI-1640; 3) раствор Хэнкса с 3,0% гидролизата белков крови. Посевная концентрация клеток составляла 0,3-0,4 млн кл./см3, доза заражения вирусом - 0,1000-0,0001 ТЦД50/кл. Культивирование вируса осуществляли при температурах 35±0,2 - 38±0,2°С до разрушения клеточного монослоя на 95-100% в течение 12-27 ч. Результаты репродукции штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура с поддерживающими средами разного состава отражены в таблице 2.
Из данных таблицы 2 видно, что при репродукции штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в монослойной культуре клеток ПСГК-30 с применением поддерживающих сред разного состава, оптимальной является среда Игла DMEM, позволяющая за 12-13 ч достичь специфического разрушения клеточного монослоя на 95-100%) с накоплением в полученной суспензии 146S компонента в количестве 1,29±0,03 мкг/см3 и титром инфекционной активности 7,50±0,10 lg ТЦД50/см3. При использовании среды RPMI-1640 и раствора Хэнкса показатели репродукции вируса были ниже.
На следующем этапе изучения условий монослойного культивирования штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в культуре клеток ПСГК-30 в условиях производства оценивали влияние на процесс репродукции вируса температурного фактора. Для этого культивирование вируса проводили в среде Игла DMEM с 2% сыворотки КРС при следующих температурах: 35,0±0,2; 36,0±0,2; 37,0±0,2; 38,0±0,2°С. Доза заражения культуры клеток вирусом ящура составляла 0,010-0,001 ТЦД50/кл. Культивирование вируса осуществляли до разрушения клеточного монослоя на 80-100% в течение 12-27 ч (таблица 2). По итогам исследования выявили, что для полной репродукции штамма «SAT-1/Нигерия/2015» вируса ящура в монослойной культуре клеток ПСГК-30 оптимальной является температура среды 37,0±0,02°С, при которой за 12-13 ч развитие ЦПД достигало 95-100%) с накоплением 146S частиц, равным 1,29±0,03 мкг/см3 и титром инфекционной активности вируса 7,50±0,10 lg ТЦД50/см3.
Оценивали влияние дозы заражения монослоя клеток линии ПСГК-30 штаммом «А/Танзания/2013» при культивировании в масштабах производства. Для этого использовали разные дозы вируса: 0,10-0,01; 0,010-0,001; 0,0010-0,0001 ТЦД50/кл. В качестве поддерживающей среды применяли среду Игла MEM с 2% сыворотки крови КРС. Репродукцию вируса проводили при температуре 37,0±0,2°С в течение 12-20 ч до специфического разрушения клеток на 90-100%. По итогам культивирования определяли концентрацию 146S компонента и титр инфекционной активности вируса ящура. Как следует из данных таблицы 2, наибольшее накопление «полных» частиц вируса достигалось при дозе заражения 0,01-0,001 ТЦД50/кл. и составило 1,29±0,03 мкг/см3 с титром инфекционной активности вируса 7,50±0,10 lg ТЦД50/см3.
Таким образом, проведено изучение условий монослойного культивирования штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в культуре клеток ПСГК-30 в промышленных масштабах. В результате исследования определены следующие оптимальные параметры репродукции штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в монослойной клеточной линии ПСГК-30: 1) поддерживающая среда - среда Игла DMEM; 2) температурный режим культивирования - 37,0±0,02°С; 3) доза заражения вирусом - 0,01-0,001 ТЦД50/кл.
Пример 4. Изучение условий суспензионного культивирования штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в промышленных масштабах.
При промышленном культивирования штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в перевиваемой суспензионной культуре клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH проводили поиск оптимальных параметров для успешной репродукции возбудителя ящура, используя разные концентрации клеток, температуру и дозу заражения.
На первом этапе работы определяли влияние посевной концентрации клеток линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH в суспензии на репродукцию штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в промышленных масштабах. Для анализа подготовили суспензии со следующими концентрации клеток: 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 млн кл./см3. Водородный показатель рН поддерживали в диапазоне 7,47-7,67. Температура культивирования вируса составляла 37,0±0,02°С, доза заражения вирусом - 0,10-0,01 ТЦД50/кл. Репродукцию вируса проводили до специфической гибели клеток на 95-100%, которая осуществлялась в течение 9-11 ч.
Результаты суспензионного культивирования штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в суспензии с разными концентрациями клеток представлены в таблице 3, из которой следует, что при культивировании вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» в суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH с разными концентрациями клеток, определили, что накопление 146S компонента в суспензии с концентрацией клеток 2,5 млн кл./см3 составило 0,47±0,03 мкг/см3, с концентрацией 3,0 млн кл./см3 - 0,80±0,03 мкг/см3, с концентрацией 3,5 млн кл./см3 - 1,10±0,03 мкг/см3, и с концентрацией 4,0 млн кл./см3 - 1,29±0,03 мкг/см3. Как следует из полученных данных для репродукции штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура оптимальной является концентрация клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH в суспензии, равная 4,0 млн кл./см3. Значение титра инфекционной активности вируса при этом составило 8,50±0,10 lg ТЦД50/см3. Большая концентрация клеток позволяла получить такой же выход продукта с небольшим увеличением. С экономической точки зрения, таким образом, для репродукции штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура оптимально использовать суспензию клеток линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH с концентрацией 4,0 млн кл./см3.
На следующем этапе работы исследовали влияние фактора температуры на суспензионное культивирование штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в культуре клеток линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH в промышленных масштабах. Для этого репродукцию вируса проводили при следующих температурных условиях: 35,0±0,2; 36,0±0,2; 37,0±0,2; 38,0±0,2°С. Доза заражения культуры клеток вирусом составляла 0,10-0,01 ТЦД50/кл. Водородный показатель рН вирусной суспензии поддерживали в диапазоне 7,47-7,67. Культивирование вируса проводили до ЦПД, равного 90-100%, в течение 9-23 ч. По результатам анализа определили, что для полной репродукции штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в суспензионной культуре клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH оптимальной является температура среды 37,0±0,02°С, при которой в течение 9-11 ч наблюдается специфическая гибель клеток на 95-100% с высоким накоплением 146S компонента 1,29±0,03 мкг/см3 и титром инфекционной активности вируса 8,50±0,10 lg ТЦД50/см3.
В ходе работы по изучению условий суспензионного культивирования штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в промышленных масштабах с применением культуры клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH оценивали влияние дозы заражения клеток. Для этого клеточные суспензии заражали вирусом в разных дозах: 0,10-0,01; 0,01-0,001; 0,001-0,0001 ТЦД50/кл. Репродукцию вируса осуществляли при температуре 37,0±0,2°С в течение 9-23 ч до цитопатического действия, равного 90-95%). По итогам культивирования определяли концентрацию 146S частиц и титр инфекционной активности вируса ящура. Как видно из данных таблицы 3, наибольшее накопление 146S компонента отмечали при дозе заражения 0,10-0,01 ТЦД50/кл. (1,29±0,03 мкг/см3) с титром инфекционной активности вируса, равным 8,50±0,10 lg ТЦД50/см3.
Таким образом, проведено изучение параметров суспензионного культивирования штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH в промышленных масштабах. Выявлены оптимальные условия репродукции штамма «А/Танзания/2013» в суспензионной культуре клеток ВНК-21: 1) концентрация клеток перед заражением - 4,0 млн кл./см3; 2) температурный режим культивирования - 37,0±0,02°С; 3) доза заражения вирусом - 0,10-0,01 ТЦД50/кл.
Пример 5. Инактивация суспензии вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I.
По окончании цикла репродукции вируса ящура, не прекращая процесс термостатирования (37,0±0,02°С), в вируссодержащую суспензию добавляли подкисленный раствор аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) с рН, равным 8,2-8,3. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,030%. Инактивацию инфекционной активности вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I проводили в течение 12 часов при температуре 37,0±0,1°С и рН 7,47-7,67 с перемешиванием.
Для определения времени полной инактивации после добавления 1,2-АЭЭИ каждый час производили отбор проб. Полученные образцы проверяли на наличие инфекционной активности вируса ящура в первичной культуре клеток почки свиньи СП. Результаты представлены в таблице 4, из данных которой видно, что полная инактивация вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I, репродуцированного в культиваторах, произошла через 6 часов после внесения 1,2-АЭЭИ.
Готовые вирусные инактивированные суспензии исследовали в РСК для оценки содержания в них компонентов вируса. Концентрация 146S компонента составила 1,24±0,03 мкг/см3 (73,8% от концентрации общего вирусного белка), а 146S+75S компонента - 1,62±0,03 мкг/см3 (96,4% от концентрации общего вирусного белка).
Пример 6. Подбор условий очистки суспензии вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I.
Суспензию вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I, полученную при репродукции в суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH, подвергали инактивации и очистке. Для получения очищенного антигена вируса ящура использовали полигексаметиленгуанидин (ПГМГ) с концентрациями 0,011, 0,013 и 0,015%. До и после процесса очистки антигена вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I в количественном варианте РСК определяли концентрацию общего вирусного белка и иммуногенных компонентов. Результаты анализа отражены в таблице 5, из которой следует, что в результате очистки антигена вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I с помощью ПГМГ в концентрации 0,011% отмечали снижение концентрации балластного белка на 5%, иммуногенных компонентов - на 0,5%. При использовании ПГМГ в концентрации 0,013% наблюдали снижение количества балластного белка на 38%, 146S компонента - на 1,5%. Применяя ПГМГ в концентрации 0,015% содержание балластного белка уменьшалось на 49%, а иммуногенных компонентов - на 10,9%. Таким образом, исследуя условия очистки антигена штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I, пришли к выводу о том, что для получения очищенного продукта оптимально использовать ПГМГ с концентрацией 0,013%.
Пример 7. Подбор условий концентрирования суспензии антигена штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура.
Культуральную инактивированную суспензию штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I, полученную с применением суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH, подвергали концентрированию в 7 раз по объему. Для увеличения концентрации иммуногенных компонентов антигена вируса ящура использовали следующие приемы: 1) добавление полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000) с концентрацией 50% к антигену в соотношении 1:4, с экспозицией 4 ч; 2) добавление полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000) с концентрацией 50% к антигену в соотношении 1:4, с экспозицией 12 ч; 3) концентрирование с помощью гидроокиси алюминия (10% коллоидный раствор в количестве 45%, антиген вируса - 55% от общего объема).
До и после процесса концентрирования суспензии антигена вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I определяли концентрацию общего вирусного белка и иммуногенных компонентов в количественном варианте РСК. Результаты исследований представлены в таблице 6, из которой видно, что при концентрировании антигена штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура с помощью ПЭГ-6000 в течение 4 ч отмечали увеличение содержания компонентов по сравнению с исходными значениями (до концентрирования) в 5,4 раз. Используя тот же полимер, но повышая время воздействия до 12 ч, увеличили концентрацию компонентов вируса в 5,9 раз. Применяя метод сорбирования с помощью гидроксида алюминия, удалось увеличить количество иммуногенных компонентов антигена штамма «А/Танзания/2013» вируса ящура в суспензии в 6,9 раз. Таким образом, исследуя условия концентрирования антигена штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I, пришли к выводу о том, что оптимальным способом увеличения концентрации компонентов вируса ящура является метод сорбирования с применением коллоидного раствора гидроксида алюминия.
Пример 8. Подбор адъюванта и соотношения антиген-адъювант.
Для изготовления противоящурной моновалентной сорбированной вакцины из антигена штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I в качестве адъюванта был выбран гидроксид алюминия в комплексе с сапонином. При изготовлении моновалентной сорбированной вакцины против вируса ящура использовали 4,5% гидроокиси алюминия в пересчете на сухое вещество и сапонин в количестве 1,5 мг/см3. Соотношение антигена из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I и адъюванта гидроксида алюминия в комплексе с сапонином - 55% к 45%, соответственно.
Пример 9. Компоновка вакцины против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральной инактивированной сорбированной.
Из полученного концентрата антигена вируса ящура штамма «А/Танзания/2013» изготовили вакцину против ящура генотипа A/AFRICA/G-I культуральную инактивированную сорбированную с применением в качестве адъювантов гидроокиси алюминия и сапонина. Количество 146S иммуногенного компонента в 1,0 см3 готового антигена составило 8,49±0,07 мкг/см3 (таблица 6).
Пример 10. Иммунизация животных вакциной против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральной инактивированной сорбированной.
Из полученной вакцины против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральной инактивированной сорбированной был приготовлен ряд разведений для КРС с 4-х кратным шагом. 15 голов КРС разделили на 3 группы по 5 голов в каждой и 2 головы оставили без вакцинации для контроля вируса. Иммунизирующая доза составляла 2,0 см3. Первую группу КРС (№№1-5) иммунизировали вакциной без разведения, вторую группу КРС (№№6-10) привили вакциной, разведенной 1/4, третья группа КРС (№№11-15) - вакциной, разведенной 1/16. Препарат вводили внутримышечно в среднюю треть шеи.
Пример 11. Исследование сывороток крови вакцинированных животных на наличие антител к неструктурным белкам вируса ящура.
Сыворотки крови от КРС, полученные до иммунизации животных, через 14 суток после иммунизации, исследовали на наличие антител к неструктурным белкам вируса ящура с помощью блокирующего варианта иммуноферментного анализа (ИФА) в соответствии с рекомендациями OIE (МЭБ) [3]. Тестирование полученных сывороток проводили с использованием тест-системы для ИФА «Prio CHECK®FMDV NSP ELISA for in vitro detection of antibodies against Foot and Mouth Disease Virus in serum of cattle, sheep and pigs» (Prionics Lelystad B.V., Нидерланды). Полученные результаты исследований отражены в таблице 7, из которой видно, что сыворотки крови животных не содержали антител к неструктурным белкам вируса ящура (значения PI для сывороток крови КРС<50%).
Пример 12. Оценка авирулентности и безвредности вакцины против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральной инактивированной сорбированной.
Для определения авирулентности вакцины на КРС отобранную пробу вакцинного препарата вводили внутрикожно по 0,1 см3. В исследовании использовали КРС массой 270-300 кг. В течение 10 суток наблюдения животные остались клинически здоровыми, и при патологоанатомическом исследовании не было обнаружено изменений, характерных для ящура. Это свидетельствовало об отсутствии вирулентных свойств разработанной вакцины.
Контроль безвредности продукта на КРС проводили путем внутримышечного введения вакцины в дозе 6,0 см3 (тройная доза по 2,0 см3). Срок наблюдения также составлял 10 суток. Следует отметить, что после иммунизации температура тела животного может повышаться до 41,6°С и удерживаться на этом уровне в течение 1-2 суток, что не выходит за рамки нормы после введения вакцинного препарата.
По результатам исследований вакцина против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральная инактивированная сорбированная была признана безвредной, все животные в период наблюдения оставались клинически здоровыми, при патологоанатомическом анализе некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.
Пример 13. Изучение иммуногенных свойств вакцины против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральной инактивированной сорбированной по способности индуцирования вируснейтрализующих антител у естественно восприимчивых животных.
На 21 сутки после введения вакцины против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральной инактивированной сорбированной у КРС отбирали кровь и проводили исследование полученных сывороток крови в реакции микронейтрализации (РМН) [3]. Выявлено, что у КРС, иммунизированных вакциной в цельной дозе (5 голов), средние значения титра антител составили 7,56±0,11 log2 SN50, с разведением 1/4 (5 голов) - 4,44±0,18 log2 SN50, с разведением 1/16 (5 голов) - 3,06±0,33 log2 SN50. (таблица 8). Полученные данные реакции микронейтрализации свидетельствуют о том, что после введения вакцины в цельном виде обеспечивается формирование гуморального иммунитета с защитными титрами штаммоспецифических антител (5,5 и более log2 SN50), что соответствует требованиям международных стандартов [3].
Пример 14. Контрольное заражение естественно восприимчивых животных. Изучение защитной способности вакцины против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральной инактивированной сорбированной на естественно восприимчивых видах животных.
Крупный рогатый скот, иммунизированный в количестве 15 голов, вакциной в цельном виде и в разведениях, заражали контрольным штаммом «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура, адаптированного к этим животным в слизистую оболочку языка в дозе 104,0 ИД50/0,20 см3 (в две точки по 0,10±0,05 см3). Спустя 7 суток после заражения всех животных подвергли эвтаназии и провели патологоанатомический осмотр. Защищенными от ящура считали животных, у которых на конечностях отсутствовали поражения. Первичные афты не учитывали.
Результаты контрольного заражения представлены в таблице 8, из которой следует, что вакцина против ящура из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I культуральная инактивированная сорбированная в цельном виде и в разведении 1/4, введенная в однократной дозе (2,0 см3) защищает КРС от заражения гомологичным штаммом всех животных (5 из 5 голов).
Препарат, инокулированный в разведении 1/16, защитил 4 из 5 животных. По результатам контрольного заражения было установлено, что в прививном объеме данной вакцины содержится 24,25 ПД50 и 0,08 ИМД50 для КРС.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о том, что вакцина против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма «А/Танзания/2013» культуральная инактивированная сорбированная, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена как экспериментальная резервная для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии; подтверждена возможность осуществления представленного; вакцина, изготовленная из штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического штамма вируса ящура серотипа А, генотипа A/AFRICA/G-I, циркулирующего в странах Африки.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Вакцина против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма «А/Танзания/2013» культуральная инактивированная сорбированная»:
1. Ящур. Меры профилактики. URL: http://89.rospotrebnadzor.ru /directions/epid_nadzor/146902 (Дата обращения: 14.10.2022).
2. Опасность болезни ящура. URL: https://vet.astrobl.ru/press-release/opasnost-bolezni-yashchura (Дата обращения: 18.10.2022).
3. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. - Paris, 2015 - Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.
4. Бурдов A.H., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур. - М.: Агропромиздат, 1990. - 320 с.
5. Пономарев А.П., Узюмов В.Л., Груздев К.Н. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. - Владимир: Фолиант, 2006. - 250 с.
6. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.
7. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strateies: Proc. Jnt. Symp. 2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - p. 13-21.
8. Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response / T.G. William, J.M. Pachecoa, T. Doel [et.al.] // Vaccine. - December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782.
9. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.
10. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.
11. Официальный сайт The FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease - URL: http://www.wrlfmd.org/ref labs/find ref lab reports.htm (Дата обращения 13.10.2022).
12. Salt I.S. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - April 1998. - V. 16. - P. 746-754.
13. Рахманов A.M. Современная эпизоотическая ситуация в мире по ящуру и меры ее контроля //Ветеринарная медицина мiжвiд. тем. наук. Харюв, 2013.-С.37-38.
14. Longjam N., Тауо Т. Antigenic variation of Foot and Mouth Disease Virus // Vet. World. - 2011. - Vol. 4(10). - P. 475-479.
15. Мельник P.H., Хаустова H.B., Мельник H.B., Самуйленко А.Я., Гринь С.А., Святенко М.С., Литенкова И.Ю. Антигенная вариабельность вируса ящура серотипа А и обоснование необходимости получения новых актуальных производственных штаммов/ Ветеринария и кормление. - 2019. - №3. - С. 29-31.
16. Paton D.J., Sumption K.J., Charleston В. Options for control of foot-and-mouth disease: knowledge, capability and policy/ Phil. Trans. R. Soc. В (2009) 364. - P. 2657-2667.
17. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.
18. Методические рекомендации по определению концентрации 146S, 75S, 12S компонентов вакцинных штаммов культурального вируса ящура в реакции связывания комплемента (РСК) / ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Утв. 21.09.17.
19. Методические указания по определению антигенного соответствия между эпизоотическими изолятами и производственными штаммами вируса ящура в перекрестной реакции микронейтрализации: утв. Россельхознадзором 13.09.2017 / ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир: 2017. - 24 с.
20. Saitou N. and Nei М. (1987). The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution 4:406-42.
21. Felsenstein J. (1985). Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap. Evolution 39:783-791.
22. Tamura K., Nei M., and Kumar S. (2004). Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method. Proceedings of the National Academy of Sciences (USA) 101:11030-11035.
23. Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C., and Tamura K. (2018). MEGA 6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across computing platforms. Molecular Biology and Evolution 35:1547-1549.
24. Barnett P. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - 2002. - V. 25. - P. 345-364.
--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="Vaccine FMDV
genotype A AFRICA G-I xml.xml" softwareName="WIPO Sequence"
softwareVersion="2.1.2" productionDate="2022-12-14">
<ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2022-12-14</FilingDate>
</ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference>479</ApplicantFileReference>
<EarliestPriorityApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2022-12-14</FilingDate>
</EarliestPriorityApplicationIdentification>
<ApplicantName languageCode="ru">ФГБУ "Федеральный центр охраны
здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ")</ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>FGBI "ARRIAH"</ApplicantNameLatin>
<InventorName languageCode="ru">Доронин Максим
Игоревич</InventorName>
<InventorNameLatin>Doronin Maksim Igorevich </InventorNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">«Вакцина против ящура генотипа
A/AFRICA/G-I из штамма «А/Танзания/2013» культуральная
инактивированная сорбированная»</InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>639</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..639</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q1">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>accaccgcgacgggagagtcagcggaccctgtcaccaccactgttgaga
actacggcggtgaaacacaggtccaaagacggcaccacacaagtgtcgagttcatcatggacagatttgt
gaaattaggagtttccagccccacacatgtcattgacctcatgcaaactcaccaacacggcctggtcggc
gcattgttgcgcgcggccacttactacttctctgacctggaggtagtggtacggcacgagggcaacctga
cctgggtgcccaatggcgcccctgaggccgcccttgcaaacacgagcaaccccacagcatatcacaagga
acccttcacgaggcttgcactcccttacaccgcgccgcaccgcgtgctggcaacggtgtataacgggacg
agcaggtattccgcaaccacctcagggaggcgtggagatctagggcccctggcggcaagggtcgccgcac
aacttcctgcatcttttaactacggtgcacttagggccacgaccatccacgagcttctcgtgcgcatgaa
gcgggccgagctttactgtcccagaccactactggcaacagaagtgagtgtgggggacaggcacaagcag
aagatcatagcacctgccaaacaattacta</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="2">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>213</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..213</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q2">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>TTATGESADPVTTTVENYGGETQVQRRHHTSVEFIMDRFVKLGVSSPTH
VIDLMQTHQHGLVGALLRAATYYFSDLEVVVRHEGNLTWVPNGAPEAALANTSNPTAYHKEPFTRLALPY
TAPHRVLATVYNGTSRYSATTSGRRGDLGPLAARVAAQLPASFNYGALRATTIHELLVRMKRAELYCPRP
LLATEVSVGDRHKQKIIAPAKQLL</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
</ST26SequenceListing>
<---
Claims (2)
1. Вакцина против ящура культуральная инактивированная сорбированная, содержащая активное вещество и адъювант, отличающаяся тем, что она содержит в качестве активного вещества авирулентный и очищенный антигенный материал гомологичного возбудителю инфекции штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура, депонированного во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вирусов ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №410 - деп / 22-44 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ», репродуцированного в перевиваемой суспензионной клеточной линии почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/SUSP/ARRIAH, в количестве не менее 4,0 мкг; в качестве адъюванта гидроксид алюминия 10%-ный коллоидный раствор с содержанием 45% по объему 4,5% в пересчете на сухое вещество в комплексе с сапонином в количестве 1,5 мг и поддерживающую среду до 1,0 см3 готового препарата.
2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал штамма «А/Танзания/2013» генотипа A/AFRICA/G-I вируса ящура, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура генотипа A/AFRICA/G-I.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2815536C1 true RU2815536C1 (ru) | 2024-03-18 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2563345C1 (ru) * | 2014-04-16 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а |
| RU2741639C1 (ru) * | 2020-06-05 | 2021-01-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина для ранней защиты против ящура типа Азия-1 инактивированная эмульсионная |
| RU2772713C1 (ru) * | 2021-05-12 | 2022-05-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина для ранней защиты против ящура из штамма А 2205/G IV культуральная инактивированная эмульсионная |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2563345C1 (ru) * | 2014-04-16 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а |
| RU2741639C1 (ru) * | 2020-06-05 | 2021-01-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина для ранней защиты против ящура типа Азия-1 инактивированная эмульсионная |
| RU2772713C1 (ru) * | 2021-05-12 | 2022-05-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина для ранней защиты против ящура из штамма А 2205/G IV культуральная инактивированная эмульсионная |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Mana Mahapatraet al., Foot and mouth disease vaccine strain selection: current approaches and future perspectives, Expert Review of Vaccines, Volume 17, 2018 - Issue 7, p.577-591. ЕЛЬКИНА Юлия Сергеевна, ПРОТИВОЯЩУРНЫЕ ВАКЦИНЫ ТИПОВ О, АЗИЯ-1, А ДЛЯ ФОРМИРОВАНИЯ РАННЕГО ИММУНИТЕТА У ЖИВОТНЫХ, диссертация, Владимир, 2021, с. 77-80. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK2331682T3 (en) | INFECTIOUS BRONKITIS VACCINES DERIVED FROM IB-QX SIMILAR TREASURES | |
| RU2603003C1 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типов а, о, азия-1 | |
| US20210220465A1 (en) | Multi-cbv vaccine for preventing or treating type i diabetes | |
| CN111491663A (zh) | 猪甲型流感病毒疫苗 | |
| RU2699671C1 (ru) | Вакцина для ранней защиты против ящура типа О инактивированная эмульсионная | |
| RU2815536C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа A/AFRICA/G-I из штамма "А/Танзания/2013" культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2810132C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа SAT-1/X из штамма "SAT-1/Нигерия/2015" культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2810131C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа O/ME-SA/PanAsia2ANT-10 из штамма "О N2356/Пакистан/2018" культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2665849C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
| RU2817381C1 (ru) | Вакцина против ящура из штамма "A/Египет/EURO-SA/2022" культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2802192C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа O/EA-2 из штамма "O/Кения/2017" культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2816264C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа О/ЕА-3 из штамма "О N2241/Эфиопия/2011" культуральная инактивированная эмульсионная | |
| RU2815534C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа SAT-1/I из штамма "SAT-1/Танзания/2012" культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2815537C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа O/ME-SA/Ind-2001e из штамма "О N2620/Оренбургский/2021" культуральная инактивированная эмульсионная | |
| RU2804803C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа O/SEA/Mya-98 из штамма "О N2383/Приморский/2019" культуральная инактивированная эмульсионная | |
| RU2815541C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа SAT-2/IV культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2804875C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа SAT-2/VII из штамма "SAT-2/Eritrea/1998" культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2799605C1 (ru) | Вакцина против ящура из штамма А/Иран/2018 нового генотипа A/ASIA/Iran-05SIS-13 культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2340672C2 (ru) | Мутант вируса инфекционной бурсальной болезни (ibdv), экспрессирующий вирус-нейтрализующие эпитопы, специфичные для классического и вариантного штаммов ibdv | |
| RU2809219C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа SAT-1/NWZ культуральная инактивированная сорбированная | |
| RU2816944C1 (ru) | Вакцина против ящура серотипа О из штамма «O/ARRIAH/Mya-98» культуральная инактивированная эмульсионная | |
| RU2798293C1 (ru) | Вакцина против ящура из штамма А/Афганистан/2017 нового генотипа A/ASIA/Iran-05 FAR-11 культуральная инактивированная сорбированная | |
| CN117897170A (zh) | 具有稳定化突变的fmdv病毒样颗粒 | |
| RU2772713C1 (ru) | Вакцина для ранней защиты против ящура из штамма А 2205/G IV культуральная инактивированная эмульсионная | |
| RU2806602C1 (ru) | Штамм "SAT-2/Кения/19/2017" вируса ящура Aphtae epizooticae для изготовления средств диагностики и профилактики ящура генотипа SAT-2/IV |