RU2812638C1 - Пептид, ингибирующий образование комплекса snare, и его применение - Google Patents
Пептид, ингибирующий образование комплекса snare, и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2812638C1 RU2812638C1 RU2022120869A RU2022120869A RU2812638C1 RU 2812638 C1 RU2812638 C1 RU 2812638C1 RU 2022120869 A RU2022120869 A RU 2022120869A RU 2022120869 A RU2022120869 A RU 2022120869A RU 2812638 C1 RU2812638 C1 RU 2812638C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- cells
- amino acid
- composition
- cell
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 128
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title abstract description 14
- 102000003786 Vesicle-associated membrane protein 2 Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108090000169 Vesicle-associated membrane protein 2 Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 77
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 28
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 18
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 16
- 239000007854 depigmenting agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 102000000583 SNARE Proteins Human genes 0.000 abstract description 16
- 108010041948 SNARE Proteins Proteins 0.000 abstract description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 23
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 12
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 10
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 10
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 10
- 108010010469 Qa-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 102000050389 Syntaxin Human genes 0.000 description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 9
- 230000037331 wrinkle reduction Effects 0.000 description 9
- 108010057722 Synaptosomal-Associated Protein 25 Proteins 0.000 description 8
- 102000004183 Synaptosomal-Associated Protein 25 Human genes 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 7
- JTKLCCFLSLCCST-SZMVWBNQSA-N Arg-Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 JTKLCCFLSLCCST-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 230000001148 spastic effect Effects 0.000 description 6
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 6
- 210000002504 synaptic vesicle Anatomy 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 101800001751 Melanocyte-stimulating hormone alpha Proteins 0.000 description 5
- 102100027467 Pro-opiomelanocortin Human genes 0.000 description 5
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N α-msh Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N 0.000 description 5
- GMRGSBAMMMVDGG-GUBZILKMSA-N Asn-Arg-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)CN=C(N)N GMRGSBAMMMVDGG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 102000005917 R-SNARE Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010005730 R-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001943 adrenal medulla Anatomy 0.000 description 4
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 210000003737 chromaffin cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- YIGLXQRFQVWFEY-NRPADANISA-N Ala-Gln-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O YIGLXQRFQVWFEY-NRPADANISA-N 0.000 description 3
- HJAICMSAKODKRF-GUBZILKMSA-N Arg-Cys-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O HJAICMSAKODKRF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- GMFAGHNRXPSSJS-SRVKXCTJSA-N Arg-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GMFAGHNRXPSSJS-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- HUZGPXBILPMCHM-IHRRRGAJSA-N Asn-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HUZGPXBILPMCHM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N Asp-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O YDJVIBMKAMQPPP-LAEOZQHASA-N 0.000 description 3
- 208000014094 Dystonic disease Diseases 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YRHZWVKUFWCEPW-GLLZPBPUSA-N Gln-Thr-Gln Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O YRHZWVKUFWCEPW-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 3
- 101000652315 Homo sapiens Synaptosomal-associated protein 25 Proteins 0.000 description 3
- KAFOIVJDVSZUMD-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Gln Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O KAFOIVJDVSZUMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010040880 Skin irritation Diseases 0.000 description 3
- 208000004350 Strabismus Diseases 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 3
- 206010005159 blepharospasm Diseases 0.000 description 3
- 230000000744 blepharospasm Effects 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- -1 chlorofluorocarbons Substances 0.000 description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 208000010118 dystonia Diseases 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 description 3
- 101150087532 mitF gene Proteins 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 206010039722 scoliosis Diseases 0.000 description 3
- 230000036556 skin irritation Effects 0.000 description 3
- 231100000475 skin irritation Toxicity 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N Ala-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SVBXIUDNTRTKHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 2
- CRCCTGPNZUCAHE-DCAQKATOSA-N Arg-His-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CN=CN1 CRCCTGPNZUCAHE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- ASCGFDYEKSRNPL-CIUDSAMLSA-N Asn-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O ASCGFDYEKSRNPL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- ZCOJVESMNGBGLF-GRLWGSQLSA-N Glu-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O ZCOJVESMNGBGLF-GRLWGSQLSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNDMHTTXXPUQJH-RWRJDSDZSA-N Ile-Glu-Thr Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)O PNDMHTTXXPUQJH-RWRJDSDZSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KVMULWOHPPMHHE-DCAQKATOSA-N Leu-Glu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O KVMULWOHPPMHHE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N Leu-Ser-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 102000013760 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010050345 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100030552 Synaptosomal-associated protein 25 Human genes 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- XLDYBRXERHITNH-QSFUFRPTSA-N Val-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C XLDYBRXERHITNH-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 2
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 2
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 2
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 2
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 2
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 2
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 150000003943 catecholamines Chemical class 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 2
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 2
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 2
- RJZNPROJTJSYLC-LLINQDLYSA-N (4s)-4-acetamido-5-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-5-amino-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-car Chemical compound OC(=O)CC[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O RJZNPROJTJSYLC-LLINQDLYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- WNWHHMBRJJOGFJ-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecan-1-ol Chemical class CC(C)CCCCCCCCCCCCCCCO WNWHHMBRJJOGFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ZVFVBBGVOILKPO-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZVFVBBGVOILKPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- BEMGNWZECGIJOI-WDSKDSINSA-N Ala-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BEMGNWZECGIJOI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SUMYEVXWCAYLLJ-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O SUMYEVXWCAYLLJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OLVCTPPSXNRGKV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MCYJBCKCAPERSE-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N MCYJBCKCAPERSE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- NNQHEEQNPQYPGL-FXQIFTODSA-N Gln-Ala-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O NNQHEEQNPQYPGL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KWUSGAIFNHQCBY-DCAQKATOSA-N Gln-Arg-Arg Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O KWUSGAIFNHQCBY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NPTGGVQJYRSMCM-GLLZPBPUSA-N Gln-Gln-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NPTGGVQJYRSMCM-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N Glu-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N Glu-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Pro zwitterion Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BUEFQXUHTUZXHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- UFRXVQGGPNSJRY-CYDGBPFRSA-N Ile-Met-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N UFRXVQGGPNSJRY-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- JLWZLIQRYCTYBD-IHRRRGAJSA-N Leu-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JLWZLIQRYCTYBD-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- VVQJGYPTIYOFBR-IHRRRGAJSA-N Leu-Lys-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N VVQJGYPTIYOFBR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N Lys-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- USPJSTBDIGJPFK-PMVMPFDFSA-N Lys-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O USPJSTBDIGJPFK-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- CIDICGYKRUTYLE-FXQIFTODSA-N Met-Ser-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CIDICGYKRUTYLE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N Pro-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- GFHOSBYCLACKEK-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GFHOSBYCLACKEK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- GWMXFEMMBHOKDX-AVGNSLFASA-N Ser-Gln-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 GWMXFEMMBHOKDX-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N Thr-Ala-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 1
- YPBYQWFZAAQMGW-XIRDDKMYSA-N Trp-Lys-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N YPBYQWFZAAQMGW-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- NVZVJIUDICCMHZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NVZVJIUDICCMHZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- VLOYGOZDPGYWFO-LAEOZQHASA-N Val-Asp-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VLOYGOZDPGYWFO-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N Val-Ser-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N Val-Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 108010006338 acetyl-glutamyl-glutamyl-methionyl-glutaminyl-arginyl-argininamide Proteins 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002903 benzyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 239000001273 butane Substances 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 102000053886 human SNAP25 Human genes 0.000 description 1
- AKPUJVVHYUHGKY-UHFFFAOYSA-N hydron;propan-2-ol;chloride Chemical compound Cl.CC(C)O AKPUJVVHYUHGKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- CQDGTJPVBWZJAZ-UHFFFAOYSA-N monoethyl carbonate Chemical compound CCOC(O)=O CQDGTJPVBWZJAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N n-butane Chemical compound CCCC IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N n-pentane Natural products CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000018448 secretion by cell Effects 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 108010045269 tryptophyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- WHNFPRLDDSXQCL-UHFFFAOYSA-N α-melanotropin Chemical compound C=1N=CNC=1CC(C(=O)NC(CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)NC(CCCCN)C(=O)N1C(CCC1)C(=O)NC(C(C)C)C(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(CCSC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(C)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WHNFPRLDDSXQCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к пептиду, ингибирующему образование комплекса SNARE, и его применению. Предложен пептид, в котором проникающий через клеточную мембрану пептид слит с фрагментом белка VAMP2 (ассоциированный с везикулами мембранный белок 2). Пептид может быть использован в качестве отбеливающего кожу агента или уменьшающего
морщины агента. 7 н. и 1 з.п. ф-лы, 7 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к пептиду, ингибирующему образование комплекса SNARE, и к его применению.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Комплексы SNARE (Soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor - рецептор растворимого белка присоединения фактора, чувствительного к N-этилмалеимиду) представляют собой комплексы, включающие в себя SNAP-25, синтаксин и VAMP2, участвующие в высвобождении нейромедиаторов. Высвобождение нейромедиаторов в синапсах требует различных белков, участвующих и функционирующих вместе при слиянии нейрональной плазматической мембраны синаптических везикул для образования синаптических комплексов слияния. Эти белки в совокупности называются белками SNARE, включающими SNAP-25, синтаксин и синаптобревин. Синаптобревин также называют VAMP2 (vesicle-associated membrane protein 2 - ассоциированным с везикулами мембранным белком 2). VAMP2 расположен в мембране синаптических везикул, тогда как SNAP-25 и синтаксин связаны с плазматической мембраной. Экскреция кальция вызывает образование комплексов и подтягивает синаптические везикулы близко к плазматической мембране, вызывая слияние плазматических мембран. При слиянии нейромедиаторы, содержащиеся в везикулах, высвобождаются в синапс. Нейромедиаторы могут включать в себя ацетилхолин или норадреналин. В качестве пептида, полученного из VAMP2, по-прежнему востребован пептид, способный эффективно ингибировать образование комплекса SNARE, но SNARE белок имеет недостаток, заключающийся в том, что он не может эффективно воздействовать на кожу из-за защитной функции кожи.
Однако при доставке лекарственного средства или белка для лечения в клетки предпринимается попытка доставить лекарственное средство в клетки с применением пептида, который действует как переносчик, способный транспортировать целевой белок в клетки. Однако не все белки образуют слитый белок с транспортным доменом белка и проникают в клетки. Например, существуют опубликованные в статьях результаты исследований, согласно которым белок, связанный с сайтом трансдукции Tat, вводится в клетку, но не демонстрирует активности (Sengoku, Т. et al. Experimental Neurology 188(2004) 161-170, Falnes P.O. et al. Biochemistry 2001 Apr 10;40(14):4349-4358, and Daniele Peroni et al., Neuroscience letters 421(2007) 110-114). To есть из слияния домена белкового транспорта с белком, который нелегко вводить в клетки, не может быть сделано заключение, что слитый белок проявляет достоверную активность после введения в клетку.
ОПИСАНИЕ ВОПЛОЩЕНИЙ
ТЕХНИЧЕСКАЯ ЗАДАЧА
Согласно аспекту осуществления данного изобретения предложен пептид, в котором проникающий через клеточную мембрану пептид слит с белком VAMP2 или его фрагментом.
Согласно другому аспекту осуществления данного изобретения предложены полинуклеотид, кодирующий данный пептид, а также вектор и клетка-хозяин, содержащие этот полинуклеотид.
Согласно другому аспекту осуществления данного изобретения предложены композиция или набор для отбеливания кожи или уменьшения морщин.
В соответствии с другим аспектом осуществления данного изобретения предложен способ отбеливания кожи или уменьшения морщин у субъекта путем введения данного пептида субъекту.
В соответствии с другим аспектом осуществления данного изобретения предложен способ получения композиции для отбеливания кожи или уменьшения морщин с использованием этого пептида.
Согласно другому аспекту осуществления данного изобретения предложено применение данного пептида в изготовлении отбеливающего кожу агента или уменьшающего морщины агента.
Согласно другому аспекту осуществления данного изобретения предложен пептид для применения в качестве отбеливающего кожу агента или уменьшающего морщины агента.
РЕШЕНИЕ ЗАДАЧИ
Согласно аспекту осуществления данного изобретения предложен пептид, в котором проникающий через клеточную мембрану пептид слит с белком VAMP2 или его фрагментом.
Белок VAMP2 может состоять из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 13. Фрагмент может быть N-концевым фрагментом белка VAMP2. Фрагмент может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 (последовательность с 30го по 43ий аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 13). Фрагмент может состоять по существу из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7. Фрагмент может состоять из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7. Фрагмент может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 (последовательность с 30го по 46ой аминокислотный остаток в SEQ ID NO: 13). Фрагмент может состоять по существу из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4. Фрагмент может состоять из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4. Аминокислота может быть D- или L-аминокислотой.
Термин " содержащий" в настоящем изобретении используется как синоним терминов "включающий в себя " или "отличающегося тем, что" и не исключает дополнительных составляющих элементов или стадий способа, не упомянутых в композиции или способе. Термин "состоит из" относится к исключению дополнительных элементов, этапов или компонентов, если не упомянуто иное. Термин "состоит по существу из" предназначен для охвата составных элементов или этапов и т.д., которые, в дополнение к описанным составным элементам или этапам, не влияют существенно на их основные свойства.
N-концевая или С-концевая аминокислота пептида может быть с обратимой химической модификацией. Модификация может включать этерификацию карбоксильных групп глутаминовой кислоты и аспарагиновой кислоты. Посредством модификации отрицательный заряд аминокислоты может быть убран, и гидрофобность аминокислоты может быть усилена. Модифицированные таким образом пептиды могут обладать повышенной биодоступностью, включая стабильность и жирорастворимость, и могут обеспечивать легкое прохождение через гематоэнцефалический барьер и эпителиальные ткани. Также данная модификация может включать амидирование карбоксильной группы аминокислоты. Аминокислота на N-конце пептида может быть ацетилирована. Аминокислота на С-конце пептида может быть амидирована. Модификация может быть гидролизована в организме внутриклеточной эстеразой.
Пептид может ингибировать образование комплексов SNARE, включающих в себя SNAP-25, синтаксин и VAMP2, для ингибирования высвобождения нейромедиаторов. Высвобождение нейромедиаторов в синапсах требует различных белков, участвующих и функционирующих вместе при слиянии нейрональной плазматической мембраны синаптических везикул с образованием синаптических комплексов слияния. Эти белки в совокупности называются белками SNARE, включающими SNAP-25, синтаксин и синаптобревин. Синаптобревин также известен как VAMP2. VAMP2 расположен в мембране синаптических везикул, тогда как SNAP-25 и синтаксин связаны с плазматической мембраной. Экскреция кальция вызывает образование комплексов и подтягивает синаптические везикулы близко к плазматической мембране, вызывая слияние плазматических мембран. При слиянии нейромедиаторы, содержащиеся в везикулах, высвобождаются в синапс. Нейромедиаторы могут включать в себя ацетилхолин или норэпинефрин. Пептид может ингибировать образование комплекса SNARE, имитируя VAMP2, тем самым ингибируя высвобождение нейромедиаторов в синапс. Соответственно, пептид может ослаблять или устранять различные симптомы, вызванные высвобождением нейромедиатора в синапс. Пептид может улучшать отбеливание кожи или уменьшать морщины. Кроме того, пептид может быть использован для облегчения или лечения симптомов, опосредованных нейрональным экзоцитозом. Симптомы могут быть спастическими состояниями. Спастическими состояниями могут быть дистония, страбизм, тики, блефароспазм или лицевой сколиоз.
Пептид может быть получен с использованием традиционного способа твердофазного химического синтеза пептидов. Кроме того, пептид может быть получен с использованием способа, основанного на технологии рекомбинантной ДНК. Например, способ может включать введение полинуклеотида, кодирующего пептид, в соответствующую плазмиду или вектор, введение плазмиды или вектора в клетку-хозяина, культивирование полученной клетки таким образом, чтобы пептид образовывался в культуре, и, возможно, очистку пептида.
Пептид может быть слит с проникающим через клеточную мембрану пептидом. Проникающий через клеточную мембрану пептид может усиливать проникновение слитого пептида через плазматическую мембрану. Слитый пептид может представлять собой пептид, в котором С-конец проникающего через клеточную мембрану пептида слит с N-концом белка VAMP2 или его фрагмента. Проникающий через клеточную мембрану пептид может быть выбран из группы, состоящей из TD1, IMT-P8, Transkin, VP2-2, RBD-1, SN25-2, STX-1 и TDb-1. IMT-P8 может состоять по существу из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8. IMT-P8 может состоять из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8.
В контексте данного документа подразумевают, что пептид включает в себя пептид, а также его соль. Соль может быть фармацевтически или косметически приемлемой солью пептида.
Согласно другому аспекту осуществления данного изобретения, предложена композиция для отбеливания кожи или уменьшения морщин, содержащая пептид в качестве активного ингредиента.
Композиция может дополнительно содержать фармацевтически или косметически приемлемый носитель. Носитель может представлять собой разбавитель или эксципиент. Носитель может представлять собой антиоксидант, стабилизатор, солюбилизатор, витамин, пигмент или ароматизатор. Разбавитель может представлять собой воду, буфер или солевой раствор.
Кроме того, композиция может дополнительно включать в себя фармацевтически или косметически приемлемый адъювант.
Композиция может быть косметической, фармацевтической или пищевой композицией.
Композиция может быть в форме любого препарата, например, любого состава, выбранного из водного раствора, суспензии, эмульсии, пасты, геля, крема, лосьона, порошка, мыла, очищающего средства, содержащего поверхностно-активное вещество, масла, порошковой основы, эмульсионной основы, восковой основы и спрея.
Когда состав представляет собой пасту, крем или гель, в качестве компонента носителя могут быть включены одно или несколько из животных масел, растительного масла, воска, парафина, крахмала, трагаканта, производного целлюлозы, полиэтиленгликоля, силикона, бентонита, диоксида кремния, талька и оксида цинка.
Когда состав представляет собой порошок или спрей, носителем может быть один или несколько из лактозы, талька, диоксида кремния, гидроксида алюминия, силиката кальция и порошка полиамида. Когда состав представляет собой аэрозоль, композиция может дополнительно включать в себя пропелленты, такие как хлорфторуглеводороды, пропан/бутан и диметиловый эфир.
Когда состав представляет собой раствор или эмульсию, носитель может включать в себя один или несколько выбранных из растворителя, солюбилизатора и эмульгатора. Носителем может быть, например, по меньшей мере один, выбранный из этанола, изопропанола, этил карбоната, этилацетата, бензилового спирта, бензилбензоата, пропиленгликоля, 1,3-бутилгликолевого масла, алифатического эфира глицерина, полиэтиленгликоля и сложного эфира сорбитана и жирных кислот.
Когда состав представляет собой суспензию, носителем может быть по меньшей мере один, выбранный из жидкого разбавителя, такого как вода, этанол и пропиленгликоль; суспендирующего агента, такого как этоксилированный изостеариловый спирт, сложный эфир полиоксиэтилена и сорбита и сложный эфир полиоксиэтилена и сорбитана; микрокристаллической целлюлозы; метагидроксида алюминия; бентонита; агара и трагаканта.
Количество пептида может быть количеством, эффективным для улучшения отбеливания кожи или уменьшения морщин. Количество может составлять, например, от примерно 0,001% до примерно 95%, от примерно 0,001% до примерно 70%, от примерно 0,001% до примерно 50% или от примерно 0,01% до примерно 50%, в пересчете на массу композиции.
Согласно другому аспекту осуществления данного изобретения, предложен набор для отбеливания кожи или уменьшения морщин, который содержит указанный пептид.
Набор может дополнительно содержать по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из носителя и адъюванта. Кроме того, набор может дополнительно включать в себя инструкцию, которая описывает процедуру использования пептида для отбеливания кожи или уменьшении морщин.
В соответствии с другим аспектом осуществления данного изобретения предложен способ улучшения отбеливания кожи и уменьшения морщин у субъекта, включающий введение этому субъекту эффективного количества пептида для улучшения отбеливания кожи и уменьшения морщин.
Пептид может быть в виде самого себя или композиции, описанной выше.
Введение пептида может быть проведено путем введения любым путем. Введение может быть пероральным или парентеральным. Введение может быть выполнено путем нанесения пептида в носовую полость, на слизистую оболочку или кожу. Субъектом может быть человек или животное, не являющееся человеком, например, млекопитающее. Способ может быть косметическим способом.
В соответствии с другим аспектом осуществления данного изобретения предложен полинуклеотид, кодирующий указанный пептид.
В соответствии с другим аспектом осуществления изобретения предложен вектор, содержащий этот полинуклеотид. Вектор может включать в себя любой вектор, используемый для доставки полинуклеотид а. Вектор может включать в себя нуклеиново-кислотную конструкцию, плазмиду или вектор, полученный из вируса. Вектор может быть экспрессионным вектором, например, экспрессионным вектором, который может экспрессироваться в млекопитающем.
Согласно другому аспекту осуществления данного изобретения предложена рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая этот полинуклеотид. Клетка-хозяин может быть бактериальной или животной клеткой. Животная клетка может быть известной животной клеткой, такой как СНО (Chinese hamster ovary cell - клетка яичника китайского хомяка).
В соответствии с другим аспектом осуществления данного изобретения предложена композиция для ингибирования образования комплексов SNARE, включающих в себя SNAP-25, синтаксин и VAMP2, которая содержит этот пептид в качестве активного ингредиента. Композиция может дополнительно содержать носитель или адъювант. Композиция может быть косметической, фармацевтической или пищевой композицией.
Композиция может быть использована для облегчения или лечения симптомов, опосредованных экзоцитозом нейронов. Симптомы могут быть спастическими состояниями. Спастическими состояниями могут быть дистония, страбизм, тики, блефароспазм или лицевой сколиоз.
Количество пептида и носителя или адъюванта такое же, как описано выше.
Согласно другому аспекту осуществления изобретения предложен набор для ингибирования образования комплексов SNARE, включающих в себя SNAP-25, синтаксин и VAMP2, содержащий этот пептид в качестве активного ингредиента. Набор может дополнительно содержать по меньшей мере одно, выбранное из носителя и адъюванта.
Согласно другому аспекту осуществления изобретения предложен способ ингибирования образования комплексов SNARE у субъекта, включающий введение этого пептида этому субъекту.
Способ может быть использован для облегчения или лечения симптомов, опосредованных экзоцитозом нейронов. Симптомы могут быть спастическими состояниями. Спастическими состояниями могут быть дистония, страбизм, тики, блефароспазм или лицевой сколиоз.
Пептид может быть в форме пептида или композиции, содержащей этот пептид. Количество вводимого пептида может быть количеством, эффективным для ингибирования образования комплексов SNARE у субъекта.
Согласно другому аспекту осуществления изобретения предложен способ получения композиции для отбеливания кожи или уменьшения морщин, включающий смешивание пептида по меньшей мере с одним, выбранным из группы, состоящей из разбавителя, эксципиента, носителя и адъюванта.
Согласно другому аспекту осуществления данного изобретения предложено применение пептида в изготовлении отбеливающего кожу агента для или уменьшающего морщины агента.
Согласно другому аспекту осуществления данного изобретения предложен пептид для применения в качестве отбеливающего кожу агента или уменьшающего морщины агента.
ПОЛЕЗНЫЕ ЭФФЕКТЫ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пептид согласно варианту осуществления изобретения может быть использован для отбеливания кожи и уменьшения морщин.
Согласно варианту осуществления изобретения для получения пептида могут быть использованы полинуклеотид, кодирующий этот пептид, а также вектор и клетка-хозяин, содержащая такой полинуклеотид.
Композиция или набор, включающие в себя пептид в соответствии с вариантом осуществления изобретения, могут быть использованы для отбеливания кожи или уменьшения морщин, или облегчения или лечения симптомов, опосредованных нейрональным экзоцитозом.
Когда применяют способ согласно варианту осуществления изобретения, у субъекта может произойти отбеливание кожи или уменьшение морщин, или могут быть облегчены или эффективно лечиться симптомы, опосредованные нейрональным экзоцитозом.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Фиг. 1 представляет собой график, иллюстрирующий влияние 7 слитых пептидов на секрецию норэпинефрина в клетках PC12.
Фиг. 2 представляет собой график, иллюстрирующий влияние слитых пептидов С2-Р4 и Р4 на секрецию норэпинефрина в клетках PC12.
Фиг. 3 представляет собой график, демонстрирующий результаты теста на цитотоксичность С2-Р4.
Фиг. 4 представляет собой график, демонстрирующий результаты измерения влияния С2-Р4 на раздражение кожи.
Фиг. 5 представляет собой график, демонстрирующий результаты измерения влияния С2-Р4 на уровень меланина в клетках.
Фиг. 6 представляет собой график, демонстрирующий результаты измерения влияния С2-Р4 на уровень меланина в среде.
Фиг. 7 представляет собой график, демонстрирующий уровень экспрессии мРНК гена MITF в присутствии С2-Р4 и α-MSH.
ЛУЧШИЙ ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Здесь и далее данное изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие примеры. Однако нижеследующие примеры предлагаются только в иллюстративных целях и объем данного изобретения никоим образом не должен ограничиваться ими.
Примеры и сравнительные примеры: Выбор кандидатного пептида, обладающего ингибиторной способностью в отношении секреции нейромедиатора.
Семь пептидных фрагментов были отобраны из SNAP25, Sytaxinla и VAMP2, которые являются белками, образующими SNARE-комплекс. В Таблице 1 приведены семь кандидатных пептидов и пептидов для сравнения. Р1 является аминокислотной последовательностью аргирелина.
Как показано в Таблице 1, все пептиды от Р1 до Р7 являлись пептидами, состоящими из 6-17 аминокислот, полученными из аминокислотных последовательностей человеческого SNAP25 (ассоциированный с синаптосомами белок 25), синтаксина 1а и VAMP2. Цифры в круглых скобках отображают расположение первой и последней аминокислот пептида в аминокислотной последовательности каждого из белков. Также были получены слитые пептиды, обладающие С-концом проникающего в клетки пептида, соединенным с N-концом пептидов с P1 по Р7. В частности, проникающий через клеточную мембрану пептид представлял собой пептид IMT-P8, образованный из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8. Эти слитые пептиды были названы С2-Р1, С2-Р2, С2-Р3, С2-Р4, С2-Р5, С2-Р6 и С2-Р7. Пептиды с P1 по Р7 были химически синтезированы в Lugen Sci (Южная Корея). Кроме того, слитые пептиды С2-Р1, С2-Р2, С2-Р3, С2-Р4, С2-Р5, С2-Р6 и С2-Р7 были получены посредстовом способа химического синтеза в Lugen Sci (Южная Корея) (С2-Р4: SEQ ID NO: 14 и С2-Р7: SEQ ID NO: 15).
Экспериментальный пример 1: Измерение ингибиторной способности нейромедиаторов
7 слитых пептидов были ингибированы против образования комплекса SNARE, с целью подтверждения, ингибируют ли они секрецию нейромедиаторов. В качестве нейромедиатора был выбран норэпинефрин.
(1) Влияние 7 слитых пептидов на секрецию норэпинефрина в нейронах Клетки PC12 (Корейский банк клеточных линий) культивировали в среде RPMI 1640, содержащей 10% лошадиной сыворотки и 25 мкг/мл антибиотика-антимикотика (Gibco, пенициллин 10000 ед./мл, стрептомицин 10000 мкг/мл, Fungizone® (амфотерицин В)) в матрасах Т-75, покрытых матригелем, при температуре 37°С в течение 72 часов. Клетки PC12 представляют собой клеточную линию, полученную из феохромоцитомы, возникшей в мозговом веществе надпочечников крыс. Поскольку хромаффинные клетки, которые выполняют роль секреции катехоламинов в мозговом веществе надпочечников, уже дифференцированы и не делятся, культивируемые клетки PC12 часто используются для изучения хромаффинных клеток.
После культивирования клетки PC-12 отделяли от матраса с использованием трипсин- EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота), а затем центрифугировали при 1500 об./мин в течение 3 минут для сбора клеток. Собранные клетки инокулировали в 1 мл среды RPMI 1640, содержащей 10% лошадиной сыворотки и антибиотик, в концентрации 1×105 клеток/лунку и инкубировали при 37°С в течение 24 часов в 48-луночном планшете, покрытом матригелем. После этого пептид каждой экспериментальной группы, т.е. каждый из 7 слитых пептидов, добавляли в концентрации 20 мкМ в среду RPMI 1640, в которую ничего не было добавлено, и культивировали в течение 2 часов. Каждую экспериментальную группу дважды промывали буфером Кребса (118 мМ NaCl, 1,2 мМ MgSO4, 2,5 мМ CaCl2, 5 мМ KCl, 24 мм NaHCO2, 2 мМ KH 2РО4, 11 мМ декстроза, рН 7,4) и инкубировали в буфере Кребса с высоким содержанием ионов калия (56 мМ NaCl, 1,2 мМ MgSO4, 2,5 мМ CaCl2, 68 мМ KCl, 24 мМ NaHCO3, 2 мМ KH2 РО4, 11 мМ декстроза, рН 7,4) при 37°С в течение 30 минут для индукции деполяризации. Количество секретированного норэпинефрина измеряли путем постановки ELISA (иммуноферментный анализ) на индуцированном деполяризацией образце с использованием ELISA набора на норэпинефрин (Abnova Cat# KA1891). В частности, после промывки индуцированного деполяризацией образца среду удаляли из лунок планшета, оставляя только клетки. Чтобы деполяризовать клетки, в планшет для искусственного высвобождения нейромедиаторов добавляли буферный раствор Кребса, содержащий ионы калия, а нейромедиаторы, высвобожденные из клеток в буфер Кребса, измеряли с помощью ELISA.
Результаты показаны на Фиг. 1. Фиг. 1 представляет собой график, иллюстрирующий влияние 7 слитых пептидов на секрецию норэпинефрина в клетках PC12. Как показано на Фиг. 1, было подтверждено, что скорости секреции нейромедиаторов группы, обработанной пептидом С2-Р4 и пептидом С2-Р7, по сравнению с необработанной группой были заингибированы до 35% и 56%, соответственно. Пептид С2-Р4 среди 7 слитых пептидов ингибировал секрецию нейромедиаторов в наибольшей степени.
(2) Сравнение способности ингибироватъ внутриклеточную секрецию нейромедиаторов между С2-Р4 и Р4.
Клетки PC 12 (Корейский банк клеточных линий) культивировали в среде RPMI 1640, содержащей 10% лошадиной сыворотки и 25 мкг/мл антибиотика-антимикотика (Gibco, пенициллин 10000 ед./мл, стрептомицин 10000 мкг/мл, Fungizone® (амфотерицин В)) в матрасах Т-75, покрытых матригелем, при температуре 37°С в течение 72 часов. Клетки PC12 представляют собой клеточную линию, полученную из феохромоцитомы, возникшей в мозговом веществе надпочечников крыс. Поскольку хромаффинные клетки, которые выполняют роль секреции катехоламинов в мозговом веществе надпочечников, уже дифференцированы и не делятся, культивируемые клетки PC12 часто используются для изучения хромаффинных клеток.
После культивирования клетки PC-12 отделяли от матраса с использованием трипсин- EDTA, а затем центрифугировали при 1500 об./мин в течение 3 минут для сбора клеток. Собранные клетки инокулировали в 1 мл среды RPMI 1640, содержащей 10% лошадиной сыворотки и антибиотик, в концентрации 1×105 клеток/лунку и инкубировали при 37°С в течение 24 часов в 48-луночном планшете, покрытом матригелем. После этого каждый из слитых пептидов Р4 и С2-Р4 добавляли в концентрации 20 мкМ в среду RPMI 1640, в которую ничего не было добавлено, и культивировали в течение 2 часов. Каждую экспериментальную группу дважды промывали буфером Кребса (118 мМ NaCl, 1,2 мМ MgSO4, 2,5 мМ CaCl2, 5 мМ KCl, 24 мм NaHCO2, 2 мМ KH 2РО4, 11 мМ декстроза, рН 7,4) и инкубировали в буфере Кребса с высоким содержанием ионов калия (56 мМ NaCl, 1,2 мМ MgSO4, 2,5 мМ CaCl2, 68 мМ KCl, 24 мМ NaHCO3, 2 мМ KH2 РО4, 11 мМ декстроза, рН 7,4) при 37°С в течение 30 минут для индукции деполяризации. Количество секретированного норэпинефрина измеряли путем постановки ELISA на индуцированном деполяризацией образце с использованием ELISA набора на норэпинефрин (Abnova Cat# КА1891). В частности, после промывки индуцированного деполяризацией образца среду удаляли из лунок планшета, оставляя только клетки. Чтобы деполяризовать клетки, в планшет для искусственного высвобождения нейромедиаторов добавляли буферный раствор Кребса, содержащий ионы калия, а нейромедиаторы, высвобожденные из клеток в буфер Кребса, измеряли с помощью ELISA.
Результаты показаны на Фиг. 2. Фиг. 2 представляет собой график, иллюстрирующий влияние слитых пептидов С2-Р4 и Р4 на секрецию норэпинефрина в клетках PC12. Как показано на Фиг. 2, скорости секреции нейромедиатора пептидов Р4 и С2-Р4 по сравнению с необработанной группой составили 75% и 41%, соответственно. То есть скорость секреции нейромедиатора для С2-Р4, с котором был слит проникающий через клеточную мембрану пептид, была на 34% ниже, чем у Р4, с которым проникающий через клеточную мембрану пептид не был слит.
Экспериментальный пример 2: Подтверждение токсичности отобранного пептида
(1) Тест сырого материала на токсичность: МТТ анализ
Клетки B16-F10, приобретенные в Корейском банке клеточных линий, инокулировали 100 мкл среды DMEM, содержащей 10% FBS, в концентрации 1×104 клеток/лунку в 96-луночный планшет и культивировали в течение 48 часов. Клетки В16-F10 представляют собой клеточную линию меланомы мыши, полученную от мышей. Данные клетки являются адгезивными и обладают эпителиальной морфологией. После этого пептид С2-Р4 разводили в культуральной среде DMEM в концентрациях 12,5 мкМ, 25 мкМ и 50 мкМ для замены среды и клетки культивировали в течение 48 часов. После центрифугирования планшета при 1000 об./мин в течение 10 минут раствор культуральной среды удаляли. Каждую лунку дважды промывали в PBS и добавляли к ней 0,5 мг/мл раствор МТТ (бромид 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия), разведенный в среде DMEM. Клетки культивировали в инкубаторе при 37°С и 5% СО2 в течение 2 часов. После центрифугирования планшета при 1000 об./мин в течение 10 минут раствор МТТ удаляли. Каждую лунку дважды промывали в PBS и добавляли 150 мкл DMSO (диметилсульфоксид) для растворения полученного формазана. Планшет помещали в спектрометр (Spectra MAX i3) и измеряли абсорбцию образца в каждой лунке при 590 нм.
Результаты представлены на Фиг. 3. Фиг. 3 представляет собой график, показывающий результаты теста на цитотоксичность С2-Р4. Как показано на Фиг. 3, в МТТ тесте С2-Р4 показывал аналогичную жизнеспособность клеток по сравнению с негативным контролем, представлявшим собой рандомизированный пептид, и цитотоксичности не было.
(2) Тест на раздражение кожи
1xPBS (забуференный фосфатом физиологический раствор) и 5%-ный SDS (додецилсульфат натрия) равномерно наносили на искусственную кожу (Neoderm-ED), приобретенную в Tegoscience (Южная Корея), для получения негативного и позитивного контроля соответственно. Экспериментальную группу равномерно покрывали 20 мкл 100 мкг/мл пептида С2-Р4. После того, как образцам позволили прореагировать при комнатной температуре в течение 15 минут, полученные продукты переносили в лунки 12-луночного культурального планшета и культивировали в инкубаторе при 37°С и 5% СО2 в течение 15 минут. После завершения реакции искусственную кожу дважды промывали в PBS и переносили в лунки нового 12-луночного культурального планшета и культивировали в течение 42 часов. После завершения культивирования добавляли 2 мл раствора МТТ 0,3 мг/мл и культивировали клетки в течение 3 часов. Образец в каждой лунке планшета обесцвечивали путем добавления 0,04 н. HCl-изопропанол и помещали в Spectra MAX i3, причем абсорбцию образца в каждой лунке измеряли при 580 нм.
Результаты представлены на Фиг. 4. Фиг. 4 представляет собой график, показывающий результаты измерения влияния С2-Р4 на раздражение кожи. Как показано на Фиг. 4, пептид С2-Р4 демонстрировал жизнеспособность клеток около 85% и, таким образом, не вызывал раздражения. Здесь, когда жизнеспособность клеток образца составляла 50% или более, было определено, что образец не имеет раздражения.
Экспериментальный пример 3: Подтверждение эффекта отбеливания кожи у выбранного пептида
(1) Измерение количества меланина в клетках после обработки С2-Р4
Клетки B16-F10, приобретенные в Корейском банке клеточных линий, инокулировали в 1 мл среды DMEM, содержащей 10% FBS, в концентрации 1×104 клеток/лунку в 24-луночном планшете и культивировали в инкубаторе при 37°С и 5% СО2 в течение 48 часов для образования клеточного монослоя. После этого среду заменяли на DMEM (без фенолового красного) с 10% FBS, к которой добавляли 5 мкМ или 10 мкМ пептида С2-Р4, и клетки культивировали в инкубаторе при 37°С и 5% СО2 в течение 48 часов. После завершения культивирования экспериментальную группу дважды промывали PBS и клетки снимали с помощью трипсин-EDTA. Клеточный монослой в каждой лунке помещали в 1 н. раствор NaOH с добавлением к нему 10% DMSO и инкубировали при 95°С в течение 20 минут для растворения меланина и клеток, а затем помещали в Spectra MAX i3, и измеряли абсорбцию образца в каждой лунке при 490 нм.
Результаты представлены на Фиг. 5. Фиг. 5 представляет собой график, показывающий результаты измерения влияния С2-Р4 на уровень меланина в клетках. Как показано на Фиг. 5, когда пептид С2-Р4 присутствовал в концентрациях 5 мкМ и 10 мкМ, абсорбция составляла около 180% и 250% по сравнению с негативным контролем, соответственно, и, таким образом, присутствие пептида С2-Р4 значительно увеличивало уровень меланина в клетках.
(2) Измерение количества меланина в среде после обработки С2-Р4
Кроме того, культуральную среду, из которой клетки были удалены через 48 часов культивирования (1) помещали в 1 н. раствор NaOH, к которому добавляли 10% DMSO, и меланин и клетки растворяли при 95°С в течение 20 минут, а затем измеряли абсорбцию образца при 490 нм.
Результаты представлены на Фиг. 6. На Фиг. 6 представлен график, показывающий результаты измерения влияния С2-Р4 на уровень меланина в среде. Как показано на Фиг. 6, когда пептид С2-Р4 присутствовал в концентрациях 5 мкМ и 10 мкМ, абсорбция составляла около 107% и 105% по сравнению с негативным контролем, соответственно, и, таким образом, уровень меланина в среде не увеличивался.
Согласно Фиг. 5 и 6, в присутствии пептида С2-Р4 уровень меланина в клетках повышался, в то время как уровень меланина в среде не увеличивался, и, таким образом, это указывает на то, что секреция меланина наружу из клеток подавляется пептидом С2-Р4.
(3) Измерение активности zenaMITF после обработки С2-Р4
Клетки B16-F10, приобретенные в Корейском банке клеточных линий, инокулировали в 3 мл среды DMEM, содержащей 10% FBS, в концентрации 1×105 клеток/лунку в 6-луночный планшет и культивировали в инкубаторе при 37°С и 5% СО2 в течение 24 часов для образования клеточного монослоя. Среду в негативном контроле заменяли средой DMEM, а среду в экспериментальных группах, обработанных пептидами, и экспериментальных группах, содержащих α-MSH (α-меланоцитстимулирующий гормон), заменяли средой, содержащей 10 мкМ каждого из пептидов и 50 нМ α-MSH соответственно, а затем клетки культивировали в течение 48 часов. Каждую экспериментальную группу дважды промывали PBS, клетки снимали с помощью трипсин-EDTA и центрифугировали при 1500 об./мин в течение 5 минут для выделения клеток. РНК экстрагировали из выделенных клеток с использованием тризола, и каждые 1000 нг кДНК синтезировали с помощью обратной транскриптазы. Уровни экспрессии GAPDH (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа) и a-MSH были подтверждены с помощью ПЦР в реальном времени с использованием 100 нг каждой из синтезированных кДНК. Праймерами, использованными для ПЦР в реальном времени, были последовательности SEQ ID NO: 9 и 10. В качестве альтернативы применяли наборы полинуклеотидов последовательностей SEQ ID NO: 11 и 12.
Результаты приведены на Фиг. 7 и в Таблице 2. Фиг. 7 представляет собой график, демонстрирующий уровень экспрессии мРНК гена MITF в присутствии С2-Р4 и α-MSH.
Как показано на Фиг. 7 и в Таблице 2, было подтверждено, что выработка меланина пептидом С2-Р4 в клетках B16-F10 значительно не изменялась, тогда как секреция меланина клетками ингибировалась пептидом С2-Р4. Известно, что связанный с микрофтальмией фактор транскрипции (MITF, Microphthalmia-associated transcription factor) регулирует экспрессию различных генов, важных для нормального синтеза меланина в меланоцитах человека. Как показано на Фиг. 7 и в Таблице 2, пептид С2-Р4 не оказывал существенного влияния на экспрессию гена MITF, который оказывает значительное влияние на образование меланина. Это указывает на то, что пептид С2-Р4 вызывает накопление меланина внутри клетки путем ингибирования секреции меланина из клетки, а не увеличения выработки меланина.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Medytox Inc.
<120> ПЕПТИД, ИНГИБИРУЮЩИЙ ОБРАЗОВАНИЕ КОМПЛЕКСА SNARE,
И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
<130> 32-ZZ-PCT-1
<150> KR 10-2020-0011344
<151> 2020-01-30
<160> 15
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P1
<400> 1
Glu Glu Met Gln Arg Arg
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P2
<400> 2
Asp Ala Arg Glu Asn Glu Met Asp Glu Asn Leu Glu Gln Val Ser Gly
1 5 10 15
Ile
<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P3
<400> 3
Leu Ser Glu Ile Glu Thr Arg His Ser Glu Ile Ile Lys Leu Glu Asn
1 5 10 15
Ser
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P4
<400> 4
Arg Arg Leu Gln Gln Thr Gln Ala Gln Val Asp Glu Val Val Asp Ile
1 5 10 15
Met
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P5
<400> 5
Asp Ala Arg Glu Asn Glu Met Asp Glu Asn Leu Glu Gln Val
1 5 10
<210> 6
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P6
<400> 6
Leu Ser Glu Ile Glu Thr Arg His Ser Glu Ile Ile Lys Leu
1 5 10
<210> 7
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P7
<400> 7
Arg Arg Leu Gln Gln Thr Gln Ala Gln Val Asp Glu Val Val
1 5 10
<210> 8
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IMT-P8
<400> 8
Arg Arg Trp Arg Arg Trp Asn Arg Phe Asn Arg Arg Arg Cys Arg
1 5 10 15
<210> 9
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Праймер
<400> 9
catggacttt cccttatcc 19
<210> 10
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Праймер
<400> 10
gtgagatcca gagttgtc 18
<210> 11
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Праймер
<400> 11
agcaatgcct cctgcaccac caac 24
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Праймер
<400> 12
ccggaggggc catccacagt ct 22
<210> 13
<211> 116
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 13
Met Ser Ala Thr Ala Ala Thr Ala Pro Pro Ala Ala Pro Ala Gly Glu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Pro Ala Pro Pro Pro Asn Leu Thr Ser Asn Arg Arg Leu
20 25 30
Gln Gln Thr Gln Ala Gln Val Asp Glu Val Val Asp Ile Met Arg Val
35 40 45
Asn Val Asp Lys Val Leu Glu Arg Asp Gln Lys Leu Ser Glu Leu Asp
50 55 60
Asp Arg Ala Asp Ala Leu Gln Ala Gly Ala Ser Gln Phe Glu Thr Ser
65 70 75 80
Ala Ala Lys Leu Lys Arg Lys Tyr Trp Trp Lys Asn Leu Lys Met Met
85 90 95
Ile Ile Leu Gly Val Ile Cys Ala Ile Ile Leu Ile Ile Ile Ile Val
100 105 110
Tyr Phe Ser Thr
115
<210> 14
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> C2-P4
<400> 14
Arg Arg Trp Arg Arg Trp Asn Arg Phe Asn Arg Arg Arg Cys Arg Arg
1 5 10 15
Arg Leu Gln Gln Thr Gln Ala Gln Val Asp Glu Val Val Asp Ile Met
20 25 30
<210> 15
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> C2-P7
<400> 15
Arg Arg Trp Arg Arg Trp Asn Arg Phe Asn Arg Arg Arg Cys Arg Arg
1 5 10 15
Arg Leu Gln Gln Thr Gln Ala Gln Val Asp Glu Val Val
20 25
<---
Claims (20)
1. Пептид, в котором проникающий через клеточную мембрану пептид слит
с фрагментом белка VAMP2 (ассоциированный с везикулами мембранный белок 2), где
указанный фрагмент состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4 или
7, а проникающий через клеточную мембрану пептид состоит из аминокислотной
последовательности SEQ ID NO: 8, где C-конец проникающего через клеточную
мембрану пептида слит с N-концом указанного фрагмента, и где N-конец пептида может
быть ацетилированным, С-конец пептида может быть амидированным.
2. Пептид по п. 1, который состоит из аминокислотной последовательности
SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 15.
3. Композиция для отбеливания кожи, содержащая пептид по п. 1 или 2 в
качестве активного ингредиента.
4. Применение пептида по п. 1 или 2 в изготовлении отбеливающего кожу
агента.
5. Применение пептида по п. 1 или 2 в качестве отбеливающего кожу агента.
6. Композиция для уменьшения морщин, содержащая пептид по п. 1 или 2 в
качестве активного ингредиента.
7. Применение пептида по п. 1 или 2 в изготовлении уменьшающего
морщины агента.
8. Применение пептида по п. 1 или 2 в качестве уменьшающего морщины
агента.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2020-0011344 | 2020-01-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2812638C1 true RU2812638C1 (ru) | 2024-01-30 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008026852A1 (en) * | 2006-08-31 | 2008-03-06 | Forhumantech Co., Ltd. | Fusion polypeptide for inhibiting neurotransmitter secretion and method for delivering it |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008026852A1 (en) * | 2006-08-31 | 2008-03-06 | Forhumantech Co., Ltd. | Fusion polypeptide for inhibiting neurotransmitter secretion and method for delivering it |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ankur Gautam et al "Topical Delivery of Protein and Peptide Using Novel Cell Penetrating Peptide IMT-P8", Scientific Reports, 2016 May 18; 6:26278. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102607079B1 (ko) | 신경세포 투과성이 향상된 신경전달물질 조절 펩타이드 | |
| CN102470160B (zh) | 抑制肌肉收缩的化合物 | |
| EP2836193B1 (en) | Compounds which inhibit neuronal exocytosis (ii) | |
| CN112040969B (zh) | 用于化妆品和医药的肽和组合物 | |
| KR102513577B1 (ko) | Snare 복합체의 형성을 저해하는 펩티드, 및 그의 용도 | |
| KR101841742B1 (ko) | 피부 미백 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 | |
| EP3808762A1 (en) | Fusion protein bound to cell-permeable peptide, and composition comprising fusion protein or cell-permeable peptide and epithelial cell growth factor as active ingredients | |
| EP2836191B1 (en) | Compounds which inhibit neuronal exocytosis | |
| KR101636851B1 (ko) | 피부 세포 증식 효과가 증가한 열 안정성 인간 상피세포성장인자-거미독 융합단백질 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 탄력 유지용 화장료 조성물 | |
| KR20240004161A (ko) | 신경세포 투과 촉진 활성의 펩타이드 | |
| KR102042758B1 (ko) | 경피투과도가 향상된 신경전달물질 조절 펩타이드 화장료 조성물 | |
| KR20140089295A (ko) | 피부 노화 개선용 조성물 | |
| RU2812638C1 (ru) | Пептид, ингибирующий образование комплекса snare, и его применение | |
| US11166898B2 (en) | Human growth hormone fusion protein with enhanced thermal stability and cosmetic composition for anti-wrinkle and maintaining skin elasticity comprising the same as effective component | |
| KR102246906B1 (ko) | 피부 또는 세포 투과능이 우수한 피부주름 방지 또는 개선용 화장료 조성물 | |
| KR102079050B1 (ko) | 인슐린유사 성장인자-1의 융합 단백질을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물 | |
| AU2018353934B2 (en) | Peptide for inhibiting skin inflammation and composition for preventing or treating skin inflammation containing the same | |
| KR102550756B1 (ko) | 세포로부터 신경전달물질 분비를 저해하는 펩티드, 및 그의 용도 | |
| KR102459219B1 (ko) | 신규한 피부투과성 펩타이드, 이를 포함하는 피부 및 점막 조성물과 이의 용도 | |
| KR20190126041A (ko) | 경피투과도가 향상된 신경전달물질 조절 펩타이드 화장료 조성물 |