RU2811772C2 - Способ селективного разрушения макрофагов в клеточной суспензии и целостном организме с помощью препаратов коллоидного серебра - протаргола и колларгола - Google Patents
Способ селективного разрушения макрофагов в клеточной суспензии и целостном организме с помощью препаратов коллоидного серебра - протаргола и колларгола Download PDFInfo
- Publication number
- RU2811772C2 RU2811772C2 RU2022121994A RU2022121994A RU2811772C2 RU 2811772 C2 RU2811772 C2 RU 2811772C2 RU 2022121994 A RU2022121994 A RU 2022121994A RU 2022121994 A RU2022121994 A RU 2022121994A RU 2811772 C2 RU2811772 C2 RU 2811772C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- macrophages
- mouse
- protargol
- collargol
- drug
- Prior art date
Links
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 17
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 title claims abstract description 16
- 108700024661 strong silver Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 title abstract 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract 2
- 229940083025 silver preparation Drugs 0.000 claims abstract 2
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 claims abstract 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 claims abstract 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 11
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 11
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 9
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 8
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 5
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 5
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 5
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 5
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 5
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 5
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 4
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- QKWBNXFZYUDWOS-UHFFFAOYSA-M 2-(3,5-diphenyltetrazol-1-ium-1-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NN(C=2C=CC=CC=2)N=C1C1=CC=CC=C1 QKWBNXFZYUDWOS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000011749 CBA mouse Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000001872 metatarsal bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и экспериментальной медицине, и может быть использовано для селективного разрушения макрофагов в клеточной суспензии или в организме. Способ включает добавление препарата либо непосредственно в питательную среду для культивирования живых клеток, либо введение внутривенно в организм мыши. В качестве селективного токсического агента для макрофагов используют препарат коллоидного серебра – либо протаргол, либо колларгол. При проведении экспериментов в условиях искусственного культивирования выделенных из организма мыши макрофагов диапазоне концентраций составляет от 10 до 20 мкг/мл, экспозиция 4 часа с каждым агентом по отдельности. В экспериментах, где препарат вводится непосредственно в организм мыши внутривенным способом, используют дозу из расчета 1мг/кг веса животного и времени экспозиции в 24 часа с каждым агентом по отдельности. Использование изобретения позволяет достичь селективного разрушения мышиных макрофагов при снижении токсичности, минимизировании используемых доз, хорошей растворимости и удобстве в применении. 7 табл.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области медицины и биотехнологии. Метод может быть использован в исследованиях, где изучается функциональное значение макрофагов.
Уровень техники
Прототипами изобретения являются методы удаления (разрушения) макрофагов с использованием каррагинана или диоксид кремния (1. Allison AC, Harington JS, Birbeck M An examination of the cytotoxic effects of silica on macrophages. J Exp Med. 1966 Aug 1;124(2):141-54; 2) Jerry A. Bash, Andrew M. Singer and Byron H. Waksman The Suppressive Effect of Immunization on the Proliferative Responses of Rat T Cells in Vitro II. Abrogation of Antigen-Induced Suppression by Selective Cytotoxic Agents . J Immunol May 1, 1976, 116 (5) 1350-1353; 3) G. Pawelic & G. Brons. Modification of lymphocyte responsiveness in vitro by а carrageenan compared with colloidal silica and depletion of surface adherent cells). Clin. exp. Immunol. (1978) 31,426-435).
Сходными признаками с настоящим изобретением является то , что упомянутые агенты приводят к разрушению исключительно макрофагов, не влияя на жизнеспособность Т- и В-лимфоцитов, а также, от их воздействия не страдает функциональная активность последних. Кроме того, общим является и то, что оба препарата проявляют свою активность только в условиях IN VITRO (когда жизнедеятельность клеток поддерживается в искусственной питательной среде).
Недостатками прототипов являются:
а)дороговизна препаратов, а протаргол и колларгол можно купить в любой аптеке;
б) плохая доступность, поскольку в России калиброванные и высокоочищенные их субстанции не производятся;
в) в отличии от препаратов серебра ни диоксид кремния, ни каррагинан в медицине не нашли применения;
г) в условиях IN VIVO (когда испытания проводятся непосредственно в живом организме ) диоксид кремния проявляет фибротические свойства и связанные с этим нежелательные реакции со стороны лимфоцитов, в свою очередь, каррагинан вызывает выраженные нарушения в системе свертывания крови, все вышесказанное не может не сказаться на характере получаемых результатов;
д) к весомым недостаткам карргинана и диоксида кремния можно отнести их высокие используемые дозировки необходимые для достижения эффективного результата – это порядка 100мкг/мл, против 10-20 мкг/мл для колларгола и протаргола, в случае если эксперименты проводятся в условиях IN VITRO, и 1мг каррагинана на мышь против 25 мкг на мышь для протаргола и колларгола (диоксид кремния вообще нежелательно вводить внутривенно!) для экспериментов, где препараты вводятся непосредственно в живой организм, то есть в условиях IN VIVO.
е) оба прототипа имеют плохую растворимость в воде и связанную с этим нестабильность их используемых растворов, что создает некоторые неудобства в процессе их применения.
Раскрытие изобретения
Задачей изобретения является снижение токсичности, минимизирование используемых доз, снижение затратности, увеличение доступности препарата, наличие биоцидных свойств, хорошей растворимости и удобством в применении, а также отсутствие выраженных побочных эффектов при введении препаратов непосредственно в вену.
Осуществление изобретения.
Эксперименты проводились на мышах (CBA x C57BL)F1. В серии опытов проводившихся в условиях IN VITRO, использовалась суспензия спленоцитов и отмытые из брюшной полости мыши перитонеальные макрофаги, вызванные туда введением суспензии 4% крахмала ( за 4 дня до выделения макрофагов в брюшную полость мышке был введен 1 мл 4% суспензии крахмала). Культивирование спленоцитов проводили общепринятым способом - в полной культуральной среде на основе среды RPMI 1640 с добавлением L-глютамина , меркаптоэтанола , 10% эмбриональной телячьей сыворотки с добавлением гентамицина. Время экспозиции с препаратами серебра составляло 4 часа в условиях культивирования в СО2- инкубаторе при 37С. Жизнеспособность клеток определялась с помощью МТТ теста ( [4,5-диметилтиазол-2-ил]-3,5-дифенилтетразолиум бромид, который закапывали в каждую лунку 96-луночного планшета по 20мкл в концентрации 5мг/мл. Затем планшеты вновь помещали в СО2 – инкубатор для 3х часовой экспозиции по истечении указанного срока с каждой лунки быстро удалялась питательная среда и к осадку клеток смешанному с образовавшимися в процессе жизнедеятельности клеток микрочастицами формазана, добавляли 100мкл подкисленного соляной кислотой раствора изопропанола для растворения частиц формазана и не позднее 15 минут этот планшет сканировали в 8-ми канальном спектрофотометре при длине волны 570нм.
Результаты выявили , что жизнеспособность лимфоцитов от воздействия вышеперечисленных доз не страдает (Таблица -1), , а вот перитонеальные
| Таблица -1. Влияние различных концентраций препаратов серебра на жизнеспособность спленоцитов мыши. | ||
| Концентрация препарата, мкг/мл |
Количество жизнеспособных клеток, усл.ед | |
| Опыт I | Опыт 2 | |
| Колларгол: ------------ |
657 ± 21 | 460 ± 28 |
| 0,016 | 644 ± 8 | 542 ± 25 |
| 0,08 | 649 - 30 | 511 ± 9 |
| 0,4 | 677 ± 18 | 523 ± 18 |
| 2 | 706 ± 24 | 445 ± 25 |
| 10 | 680 ± 11 | 430 ± 18 |
| 20 Протаргол: |
615 ± 25 | 426 ± 40 |
| 0,016 | 693 ±29 | 448 ± 11 |
| 0,08 | 656 ± 20 | 494 ± 17 |
| 0,4 . | 654 ± 10 . | 484 ± 15 |
| 2 10 20 |
716 ± 54 | 528 ± 12 |
| 703 ± 30 703 ± 12 |
587 ± 30 527 ± 11 |
|
макрофаги оказались уязвимыми от воздействия указанных препаратов, поскольку проявили токсичность в диапазоне от 2 до 20 мкг/мл в, случае обработки колларголом, и 10-20 мкг/мл с использованием протаргола (Таблица-2):
Таблица 2.
Влияние различных концентраций препаратов серебра на жизнеспособность перитонеальных макрофагов мыши.
| Концентрация препарата, мкг/мл |
Количество жизнеспособных клеток, уел. ед. | Средние данные двух опытов, % от контроля |
|
| Опыт I | Опыт 2 | ||
| - | 412 ± 16 | 297 ± 27 | 100 ± 4 |
| Колларгол | |||
| 0,016 | 364 ± 37 | 251 ± 4 | 86 ± 4 |
| 0,08 | 385 ± 35 | 252 ± 6 | 89 ± 4 |
| 0,4 | 389 ± 23 | 286 ± 32 | 95 ± 6 |
| 2 | 302 ± 24 | 146 ± 8 | 61 ± 5 ** |
| 10 | 204 ± 34 | 83 ± 13 | 39 ± 6 ** |
| 20 | 108 ± 5 | 76 ± 9 | 26 ± 1 ** |
| Протаргол | 95 ± 5 | ||
| 0,016 | 351 ± 14 | 311 ± 14 | |
| 0,08 | 373 ± 9 | 345 ± 34 | 103 ± 7 |
| 0,4 | 341 ± 12 | 301 ± 21 | 92 ± 4 |
| 2 | 372 ± 29 | 269 ± 16 | 91 ± 4 |
| 10 | 356 ± 30 | 193 ± 10 | 76 ± 5 ** |
| 20 | 195 ± 26 | 113 ± 10 | 43 ± 4 ** |
**- достоверное отличие от контроля (Р<0,01)
Чтобы исключить какое-либо влияние указанного диапазона доз препаратов серебра на функциональную активность лимфоцитов, с последними был проведен пролиферативный тест со стимуляцией их липополисахаридом (10мкг/мл E.coli. serotype 055:В5). Интактные или обработанные в течении 4 часов различными концентрациями препаратов коллоидного серебра спленоциты мышей СВА помещали по 3 х 10⁵ в лунки 96-луночного круглодонного планшета в 0,2 мл полной культуральной среды, содержащей 10мкг/мл липополисахарида. В контрольные лунки липополисахарид не добавляли. Клетки инкубировали в течение 96 часов в описанных выше условиях. За 18 часов до окончания культивирования в лунки вносили по 0, 5 мкКи ³Н-тимидина. Включение ³Н-тимидина в клетки учитывали с помощью стандартного метода. Величину пролиферативного индекса вычисляли по формуле:
И= 0/К,
Где 0 – включение ³Н-тимидина (имп/мин) в пробе с липополисахаридом; К – включение ³Н- тимидина в соответствующей контрольной пробе без митогена.
Тестирование показало, что все исследуемые дозировки не оказывают никакого влияния на функционирование лимфоцитов, что указывает на то, что поверхностные мембранные структуры лимфоцитов под воздействием препаратов серебра не повреждаются (Таблица-3).
Таблица-3.Влияние различных концентраций препаратов серебра на пролиферативный ответ спленоцитов мыши при стимуляции их липопoлисахаридом.
| Концентрация препарата, мкг/мл |
Величина пролиферативного индекса | ||
| Опыт I | Опыт 2 | Средняя двух опытов | |
| - | 22,2 ± 1,7 | 35,5 ± 0,9 | 28,8 ± 2,7 |
| Колларгол 0,5 |
27,9 ± 1,4 | 28,3 ± 0,2 | 28,1 ± 0,7 |
| 5 | 22,4 ± 1,8 | 35,7 ± 2,9 | 29,0 ± 3,0 |
| 50 | - | 26,2 ± 1,1 | 26,2 ± I,I |
| Протаргол 0,5 |
29,4 ± 4,7 | 31,3 ± 3,2 | 30,3 ± 2,5 |
| 5 | 37,8 ± 5,6 | 37,4 ± 0,9 | 37,6 ± 2,6 |
| 50 | 28,0 ± 3,4 | 31,3 ± 2,4 | 29,7 ± 2,0 |
Для убедительности была проведена еще одна серия опытов по выявлению влияния исследуемых препаратов на пролиферацию смешанной культуры лимфоцитов. Интактные или обработанные в течение 4 часов аналогичными концентрациями препаратов серебра спленоциты мышей СВА (Н-2ᵏ) в количестве 3 х 10⁵ (клетки- респондеры ) смешивали с облученными дозой 2000 рад клетками селезенки мышей С57BL|6 (Н-2ᵇ) в количестве 3 х 10⁵ или 6 х 10⁵ ( клетки –стимуляторы) в лунках 96-луночного круглодонного планшета . В контрольных лунках клетки–респондеры смешивали с соответствующими количествами сингенных клеток–стимуляторов . Лимфоциты культивировали в полной среде в обьеме 0.2 мл в течение 120 часов. За 18 часов до окончания культивирования в лунки вносили по 0, 5 мкКи ³Н-тимидина. Включение ³Н-тимидина в клетки учитывали с помощью стандартного метода . Полученные в результате опытов данные также не выявили каких –либо различий в опытных и контрольных группах (Таблица-4,5):
Таблица-4.
Влияние препаратов на пролиферацию спленоцитов мыши в смешанной культуре лимфоцитов (количество клеток- стимуляторов - 3•10⁵)
| Концентрация | Уровень пролиферации, имп/мин | |||
| препарата , мкг/мл | Опыт 1 | Опыт | 2 | |
| Сингенная культура |
Смешаная культура |
Сингенная культура |
Смешаная культура |
|
| Колларгол | 1683 ± 304 | 7240 ± 863 | 385 ± 87 | 2871 ± 194 |
| 0,06 | 993 ± 318 | 7900 ± 2567 | - | - |
| 0,5 | 1522 ± 282 | 6090 ± 3533 | 1074 ± 90 | 10747 ± 682 |
| 5 | 1074 ± 185 | 7612 ± 1148 | 898 ± 135 | 9437 ± 1584 |
| 50 | 1049 ± 61 | 7211 ± 891 | - | - |
| Протаргол | ||||
| 0,5 | 2583 ±1347 | 12377 ± 620 | 1756 ± 133 | 12435 ± 609 |
| 5 | 1253 ± 372 | 6911 ± 1106 | 2004 ± 567 | 18073 ± 935 |
| 50 | 1382 ± 899 | 3864 ± 727 | 2147 ± 50 | 16636 ± 780 |
| 500 | Т | Т | Т | Т |
Т - токсический эффект
Таблица -5.
Влияние препаратов серебра на пролиферацию спленоцитов мыши в смешанной культуре лимфоцитов (средние пролиферативные индексы)
| Концентрация препарата, мкг/мл |
Пролиферативный индекс |
|
| 3•10⁵ клеток-стимуляторов |
6•10⁵ клеток-стимулятор |
|
| Колларгол | 5,9 ± 0,8 | 7,8 ± 2,0 |
| 0,05 | 8,0 ± 2,6 | 9,4 ± 1,1 |
| 0,5 | 9,1 ± 1,0 * | 11,9 ± 1,4 |
| 5 | 8,8 ± 1,2 | 12,5 ± 2,7 |
| 50 Протаргол |
6,9 ± 0,8 | 5,6 ±0,7 |
| 0,5 | 8,7 ± 0,8 * | 10,1 ± 1,7 |
| 5 | 7,3 ± 1,3 | 8,2 ± 0,9 |
| 50 | 5,3 ± 1,1 | 6,9 ± 1,2 |
⁎ - Достоверное отличие от контроля (Р < 0.05)
Оценка величины гуморального иммунного ответа на тимус зависимый антиген (этот тест характеризует функциональный статус клеток лимфоцитарного ряда в условиях IN VIVO).
Мышам-гибридам (СВА х С57BL6)F1 вводили внутривенно тестируемые препараты в дозе 1мг/кг веса тела (эта доза рассчитана на концентрацию в крови животного эквивалентную токсическому диапазону доз для макрофагов в условиях IN VITRO) в 0.5 мл среды 199 (контрольным животным вводили 0.5 мл среды) и через сутки после введения исследуемых препаратов, мышей иммунизировали их внутривенно иммунизировали эритроцитами барана (тимус-зависимый антиген) в дозе 2 х 10⁸ эритроцитов барана. На 4-е сутки после иммунизации мышей забивали и готовили супензию клеток селезенки в 5мл среды 199, подсчитывая количество клеток. Суспензию спленоцитов разводили в 10 раз и смешивали 10% взвесью эритроцитов барана и комплементом в соотношении 1:1:1. Полученной смесью заполняли стеклянные камеры известного обьема и инкубировали при 37 °Св течение 1 часа . После инкубации под бинокулярной лупой подсчитывали количество антителообразующих клеток (зон локального гемолиза ) в каждой камере. Результаты выражали в виде числа антителообразующих клеток на селезенку и числа антителообразующих на 10⁵ ядросодержащих клеток селезенки. Полученные данные свидетельствуют, что как протаргол, так и колларгол в используемой дозировке не оказали влияния на величину гуморального иммунного ответа на тимус –зависимый антиген (эритроциты барана) и, следовательно, они не имеют какого–либо существенного влияния на функционирование лимфоцитов в этой иммунной реакции (Таблица-6):
| Таблица-6. Влияние препаратов серебра (при их внутривенном введении мышам) на величину гуморального иммунного ответа на эритроциты барана. |
|||
| Контроль | Колларгол, 1мг/кг | Протаргол, мг/кг | |
| Опыт I | |||
| АОК ⃰ /селезенку | 19748 ± 2348 | 20990 ± 3910 | 22010 ± 3931 |
| АОК/10⁶ клеток | 132 ± 17 | 146 ± 30 | 158 ± 26 |
| Опыт 2 | |||
| АОК/селезенку | 32798 ± 7973 | 22696 ± 6399 | 33979 ± 6274 |
| АОК/10⁶ клеток | 240 ± 47 | 194 ± 51 | 265 ± 51 |
| ⃰ ⃰ - АОК - антителообразующие клетки | |||
Оценка реакции гиперчувствительности замедленного типа (этот тест определяется функциональным состоянием клеток моноцитарно-макрофагального происхождения).
Аналогично, как и в предыдущем тесте, мышей обрабатывали препаратами коллоидного серебра и через сутки после этого иммунизировали их внутрибрюшинно эритроцитами барана в дозе 10⁷ клеток. На 4-е сутки после иммунизации под подошвенный апоневроз задней лапки мыши вводили разрешающую дозу антигена (10⁸ эритроцитов барана в 50мкл среды 199), одновременно в другую заднюю лапку мыши вводили такой же обьем среды. Через 24 часа мышей забивали и штанген-циркулем замеряли толщину лапок на уровне плюсневых костей. За величину реакции ГЗТ принимали разницу между толщиной лапки, в которую была введена разрешающая доза эритроцитов барана, и толщиной контрольной лапки.
В результате полученных данных было выяснено, что колларгол и, в меньшей степени, протаргол, при введении их мышам до сенсибилизации, значительно подавляют реакцию гиперчувствительности замедленного типа.
Основываясь на результатах ранее описанных экспериментов, можно предположить, что это действие препаратов коллоидного серебра обусловлено не их влиянием на Т- клеточные эффекторы реакции гиперчувствительности замедленного типа , а подавлением функции макрофагов, которые также являются клетками - эффекторами при развитии указанной иммунологической реакции (Таблица-7):
| Таблица-7. Влияние препаратов серебра (при их внутривенном введении мышам) на величину реакции гиперчувствительности замедленного типа. |
||
| Препарат | Разность толщины лапок, мм | |
| Опыт I | Опыт 2 | |
| ------------- Колларгол, 1мг/кг Протаргол, 1мг/кг |
0,86 ± 0,07 0,46 ± 0,06 ** 0,61 ± 0,07 * |
0,82 ± 0,04 0,42 ± 0,05 ** 0,53 ± 0,06 ** |
⃰ - Достоверное отличие от контроля (Р < 0,05)
⃰⃰ ⃰ - Достоверное отличие от контроля (Р < 0,01)
Claims (1)
- Способ селективного разрушения мышиных макрофагов, включающий добавление препарата либо непосредственно в питательную среду для культивирования живых клеток, либо вводя его внутривенно прямо в организм мыши, отличающийся тем, что в качестве селективного токсического агента для макрофагов используют препарат коллоидного серебра – либо протаргол, либо колларгол, в диапазоне концентраций от 10 до 20 мкг/ мл и 4-х часовой экспозиции с каждым агентом по отдельности в случае проведения экспериментов в условиях искусственного культивирования выделенных из организма мыши макрофагов, а в экспериментах, где препарат вводится непосредственно в организм мыши внутривенным способом, используют дозу из расчета 1мг/кг веса животного и времени экспозиции в 24 часа с каждым агентом по отдельности.
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2022121994A RU2022121994A (ru) | 2022-10-31 |
| RU2811772C2 true RU2811772C2 (ru) | 2024-01-17 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1599881A1 (ru) * | 1988-06-28 | 1990-10-15 | Научно-исследовательский институт фармакологии Томского научного центра АМН СССР | Способ моделировани угнетени функционального состо ни системы мононуклеарных фагоцитов |
| RU2019832C1 (ru) * | 1991-02-11 | 1994-09-15 | Медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий | Способ определения цитотоксичности малорастворимых пылей |
| RU2480241C2 (ru) * | 2001-05-02 | 2013-04-27 | Пердью Рисерч Фаундейшн | Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1599881A1 (ru) * | 1988-06-28 | 1990-10-15 | Научно-исследовательский институт фармакологии Томского научного центра АМН СССР | Способ моделировани угнетени функционального состо ни системы мононуклеарных фагоцитов |
| RU2019832C1 (ru) * | 1991-02-11 | 1994-09-15 | Медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий | Способ определения цитотоксичности малорастворимых пылей |
| RU2480241C2 (ru) * | 2001-05-02 | 2013-04-27 | Пердью Рисерч Фаундейшн | Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ШЕЙБАК В. М. и др. Иммунотоксические и иммунорегуляторные эффекты воздействия свинца на организм млекопитающих// Проблемы здоровья и экологии. - 2012, N1 (31), С. 120-125. ALLISON A.C. et al. An examination of the cytotoxic effects of silica on macrophages. J Exp Med. 1966 Aug 1;124(2):141-54. doi: 10.1084/jem.124.2.141. PMID: 4288309; PMCID: PMC2180474, реферат. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Savary et al. | Suppression of natural killer cell cytotoxicity by splenocytes from Corynebacterium parvum-injected, bone marrow-tolerant, and infant mice | |
| EP0196415B1 (en) | Trichostatins a and c as antitumour drugs | |
| Denham et al. | The occurrence of two types of cytotoxic lymphoid cells in mice immunised with allogeneic tumour cells | |
| US20100292153A1 (en) | Use of muramyl dipeptide (mdp) for treating inflammation | |
| CN108451964A (zh) | 白头翁皂苷b5在制备抗炎症性肠病药物中的应用 | |
| Saito et al. | Suppressive effect of hyperbaric oxygenation on immune responses of normal and autoimmune mice | |
| EP0821963B1 (en) | Anticancer substance suppressing cancerous metastasis | |
| Song et al. | A hydroxyethyl derivative of chrysin exhibits anti-inflammatory activity in dendritic cells and protective effects against dextran sodium salt-induced colitis in mice | |
| US20040248801A1 (en) | Methods and reagents for regulation of cellular responses in biological systems | |
| Harris et al. | Effects of hyperthermia on the production and activity of primary and secondary cytolytic T-lymphocytes in vitro | |
| JPS6136221A (ja) | 免疫抑制剤としてのリコリンの使用 | |
| US20160317566A1 (en) | Exopolysaccharide for inflammatory disease | |
| RU2811772C2 (ru) | Способ селективного разрушения макрофагов в клеточной суспензии и целостном организме с помощью препаратов коллоидного серебра - протаргола и колларгола | |
| CN113876946A (zh) | 一种pd-1抗体和绿脓杆菌的联合制药用途及药物组合物 | |
| BRPI0923832B1 (pt) | Uso de um peptídeo tipo apl para o tratamento de doenças inflamatórias intestinais e diabetes tipo 1. | |
| JP3150967B2 (ja) | 二本鎖ｒｎａによる損傷に続くショックからの保護 | |
| Kimber et al. | Regulation of lymphocyte proliferation in contact sensitivity: homeostatic mechanisms and a possible explanation of antigenic competition. | |
| CZ295765B6 (cs) | Léčebný přípravek s virucidním účinkem | |
| Huang et al. | Melatonin inhibits the formation of chemically induced experimental encapsulating peritoneal sclerosis through modulation of T cell differentiation by suppressing of NF-κB activation in dendritic cells | |
| Hart | Increased sensitivity of Corynebacterium parvum-treated mice to toxic effects of indomethacin and lipopolysaccharide | |
| Au et al. | An injectable subcutaneous colon-specific immune niche for the treatment of ulcerative colitis | |
| RU2812805C1 (ru) | Способ ингибирования сигнального пути PD-1/PD-L1 в раковых клетках мочевого пузыря | |
| WÅLINDER | The accumulation of alpha aminoisobutyric acid by rabbit ciliary body-iris preparations | |
| Orlans et al. | Antibody formation by transferred cells in inbred fowls | |
| US20140072598A1 (en) | Medicinal preparation "renessans" having an antibacterial, anti-ulcerous and immuno-modulating action |