RU2807577C1 - Способ детекции однонуклеотидного полиморфизма локуса prl-rsai с помощью специфических праймеров в полимеразной цепной реакции в реальном времени - Google Patents
Способ детекции однонуклеотидного полиморфизма локуса prl-rsai с помощью специфических праймеров в полимеразной цепной реакции в реальном времени Download PDFInfo
- Publication number
- RU2807577C1 RU2807577C1 RU2022128296A RU2022128296A RU2807577C1 RU 2807577 C1 RU2807577 C1 RU 2807577C1 RU 2022128296 A RU2022128296 A RU 2022128296A RU 2022128296 A RU2022128296 A RU 2022128296A RU 2807577 C1 RU2807577 C1 RU 2807577C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- prl
- rsai
- locus
- single nucleotide
- test system
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims abstract description 8
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 title description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims abstract description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 claims abstract 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims abstract 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 claims abstract 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 claims abstract 2
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 claims abstract 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 9
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 9
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 7
- 102100024819 Prolactin Human genes 0.000 description 7
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 7
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;boric acid Chemical compound OB(O)O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 101150008197 PRL gene Proteins 0.000 description 2
- 239000008051 TBE buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 2-bromophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1Br VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000006877 Pituitary Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010047386 Pituitary Hormones Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 230000023247 mammary gland development Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и молекулярной генетики. Предложен способ детекции однонуклеотидного полиморфизма локуса PRL-RsaI с помощью тест-системы. Тест-система включает смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов, буфер для постановки реакции, термостабильный фермент - Taq-полимеразу, два синтетических олигонуклеотидных праймера, специфичных к данному участку ДНК: PRL-f CCTTATGAGCTTGATTCTTGGGTTGCTG; PRL-r ATATCATCTCCATGCCTTCCAGAAGTCG, два вида аллель-специфичных флюоресцирующих зондов: PRLa - CGAGGTACGGGGTATG – FAM; PRLg - CGAGGTGCGGGGTATG – VIC, общий для обоих аллелей гасящий зонд: PRLbhq - (BHQ1) AAAGGAGCCCCAGATGCTAT - Р, минеральное масло, защищающее реакционную смесь от испарения при ПЦР. Способ демонстрирует стабильную воспроизводимость результатов при анализе количества копий ДНК, превышающего порог чувствительности тест-системы. 1 ил.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и молекулярной генетики.
Пролактин (prolactin, PRL) - это полипептидный гормон, который синтезируется и секретируется специализированными клетками передней доли гипофиза. Он является одним из самых плейотропных гормонов гипофиза с точки зрения биологического действия. Гормон пролактин играет важную роль в росте и развитии молочной железы (маммогенез), поддержании секреции молока (галактопоэз), синтезе молока (лактогенез). Кроме этого, гормон также отвечает за синтез лактозы, липидов и других важных компонентов молока. Поэтому ген, продуктом экспрессии которого является гормон пролактин, считается одним из ключевых звеньев в генной сети, составляющей наследственный компонент молочной продуктивности крупного рогатого скота. Эти характеристики делают ген PRL перспективным геном-кандидатом для оценки молочных признаков коров.
Известен способ определения генетического потенциала крупного рогатого скота (патент RU 2317704 С1 опубл. 27.02.2008 г.) путем ДНК-тестирования животных по RsaI-маркеру гена пролактина и AluI-маркеру гена гормона роста с помощью ПЦР-ПДРФ метода. Недостатком данного способа является специфика проведения полимеразных цепных реакций типа ПДРФ - необходимость выполнения дополнительных процедур после процесса амплификации ДНК (рестрикция и электрофорез), при этом анализ и интерпретация результатов не является автоматизированным, требует определенной квалификации от сотрудников, занимает значительное количество времени и плохо поддается формализации и переводу в цифровой формат.
В предлагаемом способе используются аллель-специфичные FAM- и VIC - зонды и один общий для обоих аллелей зонд, несущий BHQ-гаситель. Гибридизация зондов происходит после завершения амплификации, что делает возможным определять точечные мутации, расположенные внутри областей связывания ДНК-матрицы и зонда. Установление температуры плавления аллель-специфичных зондов, характерной для каждого из аллелей, позволяет проводить генотипирование образца в одной пробирке. Также при анализе генотипа учитывается форма кривой плавления, что позволяет автоматизировать и формализовать процедуру интерпретации полученных данных, снизив вероятность ошибки оператора.
Цель изобретения - разработка тест-системы для детекции однонуклеотидного полиморфизма локуса PRL-RsaI с помощью специфических праймеров в полимеразной цепной реакции в реальном времени с целью выявления генетически детерминированных факторов развития молочной железы крупного рогатого скота.
Принцип действия: метод основан на определении температуры плавления олигонуклеотидых зондов, которая напрямую зависит от наличия / отсутствия нуклеотидных замен в матрице ДНК в области гибридизации зондов. Определение генотипа основано на проведении полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с праймерами, общими для «дикого» и «мутантного» вариантов нуклеотидной последовательности.
Для установления температуры плавления, кроме флуоресцентно-меченого типирующего зонда, в реакционную смесь добавляется тугоплавкий олигонуклеотидный зонд с гасителем флуоресценции, который гибридизуется на матрице ДНК в непосредственной близости к типирующему зонду. При низкой температуре происходит гибридизация зондов с амплифицированной в ходе ПЦР ДНК, в результате чего флуоресцентный краситель оказывается рядом с гасителем флуоресценции. По увеличению флуоресцентного сигнала при повышении температуры можно определить температуру плавления типирующего зонда и, следовательно, определить наличие однонуклеотидной замены. Для повышения надежности типирования предложен метод одновременной гибридизации с двумя альтернативными типирующими зондами, меченными различными флуорофорами (FAM-предковый аллель, VIC - мутантный аллель). С помощью метода генотипирования (метод кривых плавления) можно на основании пиков плавления (денатурации) определить гетерозиготный и гомозиготный образец. Для гомозиготных образцов пики плавления будут отличаться, а для гетерозиготных температуры плавления будут примерно одинаковы (фиг. 1).
Амплификационная смесь содержит: ПЦР-буфер 1-кратный, смесь дезоксирибонуклеотидов - 25 мМ каждого, зонд FAM - 0,1 пм/мкл, зонд VIC - 0,1 пм/мкл, зонд BHQ - 0,3 пм/мкл, праймер 1 - 0,1 пм/мкл, праймер 2 - 0,6 пм/мкл. В реакции используется термостабильный фермент Taq-полимераза в количестве 2,5 единицы активности на реакцию. Для предотвращения испарения амплификационной смеси поверх нее наслаивается 20 мкл минерального масла.
При апробации разработанного способа использовали образцы биоматериала (периферическая кровь), отобранные у крупного рогатого скота костромской породы (n=50) из хвостовой вены в промаркированные стерильные вакуумные пробирки «Vacumed» с антикоагулянтом ЭДТА К2 («Greiner Bio-One», Австрия). Выделение ДНК из крови осуществляли на сорбирующих колонках набора «DNeasy Blood & Tissue Kit» для выделения ДНК из образцов крови и тканей животных, а также из клеток, дрожжей, бактерий и вирусов («Qiagen», Германия) в соответствии с инструкцией производителя.
Полимеразную цепную реакцию проводили на амплификаторе «ДТ-48» (ООО «НПО ДНК-технология», Россия) в соответствии с протоколом, рекомендованным производителем, по следующей программе: 94°С - 1 мин 30 с, 67°С - 15 с 5 циклов, 67°С - 15 с 45 циклов, 25°С - 45 с 50 циклов. Для амплификации фрагмента 3 экзона гена PRL использовали праймеры:
PRL-f CCTTATGAGCTTGATTCTTGGGTTGCTG
PRL-r ATATCATCTCCATGCCTTCCAGAAGTCG.
Разработанные олигонуклеотиды позволяют детектировать фрагмент гена в пределах локуса PRL-RsaI длиной 164 нуклеотида.
Для контроля качества ДНК и оценки эффективности работы праймеров продукты ПЦР анализировали методом агарозного гель-электрофореза. Для приготовления 1 л 10 кратного ТВЕ-буфера добавляли в мерную колбу 108 г TRIS (основного), 55 г. борной кислоты, 40 мл 0,5М ЭДТА (рН 8,0) и довести объем mQ до 1 л. Для приготовления геля для электрофореза в мерном стакане на 50 мл смешивали 25 мл 1% ТВЕ-буфера, 0,25 г агарозы и 1 мкл бромистого этидия. Разогревали смесь в микроволновой печи до полного растворения агарозы. Заливали смесь в камеру для приготовления гелей. Образцы наносили в лунки в составе 5х загрузочного буфера (бромфенол/глицерин). Условия проведения электрофореза выставляли в соответствии с инструкцией производителя камеры «Mupid-exU» (Япония).
Последовательности генотипирующих зондов:
PRLa CGAGGTACGGGGTATG-FAM
PRLg CGAGGTGCGGGGTATG-VIC
PRLbq BHQ1 - AAAGGAGCCCC AGATGCTAT-P
С помощью разработанной тест-системы определены аллели и генотипы образцов ДНК крупного рогатого скота костромской породы (n=48) по полиморфизму локуса PRL-RsaI. Частота встречаемости генотипов АА, AG и GG составила 60,4, 37,5 и 2,1% соответственно. Аллели PRL (А) и PRL (G) демонстрировали частоту 0,79 и 0,21 соответственно.
Источники информации:
1. Сулимова Г.Е., Лазебная И.В., Лазебный О.Е. Способ определения генетического потенциала крупного рогатого скота по качеству молока // Патент на изобретение RU 2317704 С1, 27.02.2008. Заявка №2006119781/13 от 06.06.2006.
Claims (9)
- Способ детекции однонуклеотидного полиморфизма локуса PRL-RsaI с помощью тест-системы, включающей смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов, буфер для постановки реакции, термостабильный фермент - Taq-полимеразу, два синтетических олигонуклеотидных праймера, специфичных к данному участку ДНК:
- PRL-f CCTTATGAGCTTGATTCTTGGGTTGCTG
- PRL-r ATATCATCTCCATGCCTTCCAGAAGTCG,
- два вида аллель-специфичных флюоресцирующих зондов:
- PRLa - CGAGGTACGGGGTATG - FAM
- PRLg - CGAGGTGCGGGGTATG - VIC
- общий для обоих аллелей гасящий зонд:
- PRLbhq - (BHQ1) AAAGGAGCCCCAGATGCTAT - Р,
- минеральное масло, защищающее реакционную смесь от испарения при ПЦР.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2807577C1 true RU2807577C1 (ru) | 2023-11-16 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2317704C1 (ru) * | 2006-06-06 | 2008-02-27 | Общество с ограниченной ответственностью "СКС-ТЕСТ" | Способ определения генетического потенциала крупного рогатого скота по качеству молока |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2317704C1 (ru) * | 2006-06-06 | 2008-02-27 | Общество с ограниченной ответственностью "СКС-ТЕСТ" | Способ определения генетического потенциала крупного рогатого скота по качеству молока |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| СЕЛИОНОВА М.И и др., Оценка полиморфизма гена пролактина у коров молочных пород, Животноводство и кормопроизводство 2018 Том 101, N 1, с. 27-33. AIJUN LU, et al., Single nucleotide polymorphisms in bovine PRL gene and their associations with milk production traits in Chinese Holsteins, Mol Biol Rep (2010) 37:547-551, table 1. EDY ALFONSO1, et al., Polymorphism of the prolactin gene (PRL) and its relationship with milk production in American Swiss cattle, African Journal of Biotechnology Vol. 11(29), pp. 7338-7343, 10 April, 2012. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10993418B2 (en) | Method for measuring tumor burden in patient derived xenograft (PDX) mice | |
| CN110964814B (zh) | 用于核酸序列变异检测的引物、组合物及方法 | |
| CN111020031A (zh) | 序列特异性阻断剂结合特定pcr程序检测肿瘤基因突变的方法 | |
| CN110317880B (zh) | 与猪饲料转化率相关的分子标记、鉴定及其应用 | |
| JPWO2008117782A1 (ja) | 遺伝子増幅用プライマーセット、それを含む遺伝子増幅用試薬およびその用途 | |
| CN111485027B (zh) | 一种筛选奶牛酮病抗性分子标记的方法及其应用 | |
| CN110923333B (zh) | 山羊zbp1基因第一内含子内与产羔数关联的单倍型标记及其应用 | |
| Luthra et al. | TaqMan RT-PCR assay coupled with capillary electrophoresis for quantification and identification of bcr-abl transcript type | |
| KR102124652B1 (ko) | 개의 불안장애 조기 예측 또는 진단용 조성물 | |
| CN110846408A (zh) | 用于检测ttn基因突变的引物组合及其应用 | |
| CN110846409A (zh) | 用于检测tnni3k基因突变的引物组合及其应用 | |
| KR100786534B1 (ko) | 한우의 일당 증체량 관련 디엔에이 분자표지 개발 | |
| KR100935293B1 (ko) | 티엔에프알파 유전자를 이용한 한우 육량형질 연관단일염기다형마커 개발 | |
| RU2807577C1 (ru) | Способ детекции однонуклеотидного полиморфизма локуса prl-rsai с помощью специфических праймеров в полимеразной цепной реакции в реальном времени | |
| EP2464754B1 (en) | Amelogenin snp on chromosome x | |
| CN111909990B (zh) | 单管同时检测基因的缺失突变和点突变的荧光pcr检测方法 | |
| CN115109856A (zh) | 与绵羊阶段体重相关的分子标记、其检测方法及应用 | |
| KR102269653B1 (ko) | 고양이의 골연골이형성증을 예측 또는 진단하기 위한 단일염기 다형성 마커 조성물 및 이를 이용한 예측 또는 진단 방법 | |
| KR102124770B1 (ko) | 개의 고관절탈구 조기 예측 또는 진단용 조성물 | |
| JP5281775B2 (ja) | ウシ脂肪交雑形成に関わる一塩基多型およびその利用 | |
| EP3458603B1 (en) | Penta e polymorphisms for human identification | |
| KR100816993B1 (ko) | 지방산 생합성 조절효소 유전자를 이용한 한우 생체중 및도체중 연관 분자마커 개발 | |
| KR101728023B1 (ko) | Ｐｃｒ―ｌｄｒ을 이용한 ａｔｐ７ｂ 유전자의 돌연변이 검출 | |
| KR101997453B1 (ko) | 한우 f11 결핍증의 진단용 조성물 및 이의 용도 | |
| Calabrese et al. | Methods for the identification of mitochondrial DNA variants |