RU2798268C1 - Способ получения ветеринарного препарата на основе неспецифических иммуноглобулинов и коллоидных частиц селена для коррекции иммунной системы - Google Patents
Способ получения ветеринарного препарата на основе неспецифических иммуноглобулинов и коллоидных частиц селена для коррекции иммунной системы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2798268C1 RU2798268C1 RU2022110790A RU2022110790A RU2798268C1 RU 2798268 C1 RU2798268 C1 RU 2798268C1 RU 2022110790 A RU2022110790 A RU 2022110790A RU 2022110790 A RU2022110790 A RU 2022110790A RU 2798268 C1 RU2798268 C1 RU 2798268C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- selenium
- immunoglobulins
- immune system
- drug based
- colloidal particles
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к способу получения ветеринарного препарата на основе неспецифических иммуноглобулинов и коллоидных частиц селена для коррекции иммунной системы. Способ получения ветеринарного препарата на основе неспецифических иммуноглобулинов и коллоидных частиц селена для коррекции иммунной системы, характеризующийся наличием наночастиц селена, заключается в том, что в дистиллированной воде производят конъюгацию неспецифического иммуноглобулина и наночастиц селена, полученных при восстановлении из селенита натрия солянокислым гидразином 25 мМоль, с последующим диализом против фосфатносолевого буфера и дальнейшей лиофильной сушкой полученной инъекционной лекарственной формы, при следующем сочетании компонентов, мас.%: коллоидные частицы селена 0,01-0,10; неспецифические иммуноглобулины 0,10-0,20; дистиллированная вода остальное. Вышеописанное изобретение позволяет получить препарат на основе неспецифического иммуноглобулина и коллоидных частиц селена для коррекции иммунной системы животных с пониженной токсичностью. 1 ил., 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области фармацевтики и может быть использовано при нарушении обмена веществ и снижении иммунитета организма животного.
Основной проблемой в животноводстве является сохранность молодняка сельскохозяйственных животных. Нарушенный обмен веществ и низкий уровень иммунитета - основная причина развития заболеваний инфекционной природы и гибели молодняка сельскохозяйственных животных.
Для повышения сохранности молодняка сельскохозяйственных животных в настоящее время используются препараты, относящиеся к группе иммуномодуляторов, которые в определенной степени стимулируют рост и развитие животных. Препараты вводят внутримышечно или перорально. Существенными недостатками большинства этих препаратов являются их дороговизна и трудоемкость массовой обработки животных в случае выпаивания перорально.
Расширение круга патологических состояний сопровождается нарушением иммунных функций, что побуждает поиск новых методов иммунопрофилактики и иммунотерапии. В данном направлении важно не только создание новых фармакологических иммуностимулирующих средств, но и оптимизация лечебно-профилактических схем их использования, в частности, путей введения в организм, обеспечивающих максимальную биодоступность препаратов. Одним из иммуномодулирующих веществ являются неспецифические иммуноглобулины.
Основные компоненты предлагаемого препарата -иммуноглобулины и коллоидные частицы селена - обладают целым рядом биоактивных свойств, обнаруженных in vitro. Так, они являются фактором усиления завершенности фагоцитоза, обладают антимикробной, антивирусной, противогрибковой и противогельминтной активностью, тормозят адгезию бактерий на клетках макроорганизма.
Наночастицы в препарате необходимы для снижения токсичности, повышения биоактивности, биодоступности, а также сама наночастица должна обладать биологической активностью. Селен является важным микроэлементом, который включается в селенопротеины такие, как селеноцистеин, представляющий наиболее важную часть активного центра ферментативной активности. Селен имеет очень узкое терапевтическое применение, и низкие пределы токсичности, а наночастицы селена обладают еще меньшей токсичностью.
Наночастицы селена являются хорошей платформой-носителем для доставки различных лекарственных веществ к месту их действия.
Большим преимуществом наночастиц является их различная терапевтическая активность, они проявляют противоопухолевое, антиоксидантное, и противовоспалительное действие.
Селен является основным действующим веществом некоторых продуктов на современном рынке, таких как: Е-селен, Селемаг, Габивит-Se.
Препарат Е-селен, представляет собой комплекс витамина Е и селена в форме инъекций для лечения и профилактики заболеваний, вызванных дефицитом данных компонентов. Препарат представляет собой бесцветную или слабо-желтого цвета жидкость. Применяют для профилактики и лечения заболеваний, вызванных недостатком витамина Е и селена (беломышечной болезни, травматического миозита и кардиопатии, токсической дистрофии печени).
Селемаг является идентичным препаратом, лекарству Е-селен и относится к фармакотерапевтической группе: витамин с микроэлементами. Селемаг применяют для профилактики и лечения заболеваний у сельскохозяйственных животных, развивающихся на фоне недостаточности витаминов; беломышечной болезни, развития плода, лечения - мышечной дистрофии у молодняка, миопатии телят, лечения токсической дистрофии печени у животных; при задержке роста и недостаточных привесах.
Габивит - Se лекарственное средство в форме раствора для инъекций, который в своем составе содержит витамины, а также селенит натрия, гидрализат белка и консервант нипагин. Препарат является профилактикой гиповитаминозов, а также назначается при нарушении минерального обмена в организме.
Однако данные лекарственные препараты не обладают иммуностимулирующим, иммуномодулирующим свойствами, селен находится в форме селенита натрия, а не в форме наночастиц, что повышает его токсичность.
Иммуноглобулины имеют в своем составе центры специфического нековалентного связывания антигена, основанного на принципе комплиментарности. Существует несколько форм иммуноглобулинов: жидкие и мембранные. Иммуноглобулины содержаться в крови и некоторых секреторных жидкостях, и вырабатываются, как ответ на контакт с антигенами. Дефицит или избыток антител может быть признаком патологии.
Препарат оказывает иммуностимулирующее и иммуномодулирующее действие. В его составе содержится много нейтрализующих антител. Их наличие обеспечивает эффективное противостояние бактериям, вирусам и ряду других возбудителей.
Под воздействием этого средства восполняется количество недостающих IgG антител. Как следствие, снижается риск развития инфекции при диагностировании первичного и вторичного иммунодефицита. Иммуноглобулин восполняет и замещает природные антитела в сыворотке крови.
Известен иммуномодулятор Форвет (https://www.eapteka.ru/goods/zootovary/vetapteka/immunostimulyatory/forvet/) который ускоряет синтез интерферонов - особых белков, которые защищают клетку от вирусной агрессии. В результате повышается уровень лейкоцитов и иммунных «клеток-киллеров», а возбуждающие болезнь вирусы угнетаются и разрушаются на всех этапах своего развития. Механизм саморегуляции начинает работать направлено и эффективно, быстрее происходит выздоровление и восстановление. Назначают телятам и поросятам в целях профилактики и в комплексной терапии желудочно-кишечных заболеваний вирусной и бактериальной этиологии, собакам и кошкам при вирусных инфекциях, включая чуму плотоядных, инфекционный гепатит, парвовирусный энтерит, аденовирусные инфекции, а также при воспалительных заболеваниях кожи и в хирургической практике. Недостатками данного препарата является его дороговизна, и то что данный препарат нужно использовать быстро и держать в открытом состоянии не более двух недель.
Известен препарат Фоспренил (https://www.eapteka.ru/goods/id322072/), обладающий противовирусным действием по отношению к вирусу чумы плотоядных, парвовирусам, аденовирусам, коронавирусам и ряду других вирусов животных. Препарат модулирует в физиологических пределах функционирование системы естественной резистентности, обладает противовоспалительной активностью, является гепатопротектором и детоксикантом. Основным недостатком Фоспренила является наличие в его составе этанола, который при попадании в организм в большом количестве может вызвать отравление животного, а так же падение артериального давления и температуру, дыхательную недостаточность
Известен препарат Ронколейкин (Патент RU №2354401 С1, опубликован 10.05.2007), который является иммуностимулятором и обладает противогрибковой, противоопухолевой, противовирусной и противобактериальной активностью.
Недостатками данного препарата является высокая стоимость и токсичность, а так же сложность выпаивания в случае массовой обработки.
Технической задачей являлась разработка препарата на основе неспецифического иммуноглобулина и коллоидных частиц селена для коррекции, иммунной системы животных с пониженной токсичностью, а так же невысокой стоимостью.
Техническая задача решается тем, что для получения 100 мл композиции производится коньюгация неспецифического иммуноглобулина и наночастиц селена, полученных при восстановлении из селенита натрия солянокислым гидразином 25 мМоль, с последующим диализом против фосфатносолевого буфера для очищения от посторонних примесей, и дальнейшей лиофильной сушкой полученной инъекционной лекарственной формы при следующем сочетании компонентов, мас. %:
нано селен | 0,01-0,10 |
иммуноглобулины | 0,10-0,20 |
дистиллированная вода | остальное |
В качестве сырья для приготовления препарата применяются иммуноглобулины, селенит натрия, вода (дистиллированная), а также диализная мембрана и фосфатно солевой буфер для очищения препарата от посторонних примесей. Точность дозирования сырья при выработке продукции: +0,5%.
Иммуноглобулины выделялись из сыворотки крови методом высаливания с использованием сульфата аммония до 45% насыщения. Иммуноглобулины очищали хроматографией среднего давления, их чистота определялась электрофорезом в полиакриламидном геле. В дальнейшем сыворотка крови использовалась для последующего синтеза наночастиц селена и иммуноглобулинов.
Предполагаемое изобретение иллюстрируется фигурой, на которой изображен диаметр синтезированных конъюгатов SeNPs, определенный методами ТЕМ и DLS, размер наночастиц составляет - 20 нм до 60 нм (Фиг. 1 ТЕМ).
Наиболее перспективным является применение SeNPs (размер 20-70 нм), основное преимущество которых, по сравнению с другими формами, заключается в низкой токсичности, что позволяет применять их в дозах, значительно превышающих суточную потребность, что подтверждается результатом ТЭМ.
Определение белка без предварительного осаждения проводили в соответствии с методикой, указанной в ОФС «Определение белка» по методу Лоури. (Величко Н.А., Пищевая химия: учеб. Пособие/ Н.А. Величко, Е.В. Шанина; Краснояр. гос. аграр. ун-т. - Красноярск, 2010. - 204 с. Стр. 19-20). В качестве контрольного раствора использовали раствор выделенного иммуноглобулина с известной концентрациейдо 45% насыщения сульфата аммония.
Диаметр синтезированных наночастиц был определен методами трансмиссионной электронной микроскопии (ТЕМ) и динамического светорассеяния (DLS) на трансмиссионном электронном микроскопе Libra 120 (CarlZeiss, Germany), а также анализаторе размера частиц и дзета-потенциала Zetasizer Nano-ZS (Malvern, UK).
Концентрация иммуноглобулинов определялась методом Лоури, на программируемом фотометре Genesys 10S UV-Vis.
Концентрация селена в препарате определялась флуориметрическим методом на спектрофлюориметре ФЛЮОРАТ.
В Таблице 1 содержаться физико-химические показатели препарата.
Концентрация иммуноглобулина составила 16 мг/мл, элементарного селена - 4 мг/мл, что соответствует вносимым в препарат субстанциям.
Проводилась оценка острой токсичности препарата на белых линейных мышах согласно ГОСТ 32644-2014.
Нормы расхода определялись, исходя из номинальной производительности технологического оборудования и усредненных объемов продукции, и не превысили:
- селенита Na (Na2SeO3) | 55%; |
- солянокислый гидразин (N2H4(HCl)2) | 2,5%; |
- иммуноглобулины | 1,5%; |
- вода дистиллированная | 55% |
Как видно из примеров (Таблицы 1-3) введение в фармакокомпозицию наночастиц селена в концентрации ниже, чем 0,5 масс. %, приводит к тому, что в результате нехватки компонента в реакционной смеси происходит образование избытка незащищенных частиц селена и селен выпадает в осадок в виде аморфного селена. Введение в фармкомпозицию наночастиц селена выше, чем 5% приводит к тому, что данная концентрация наночастиц близка к насыщенному раствору, начальный раствор не стабилен и наночастицы выпадают в осадок.
Синтез препарата осуществлялся следующим образом.
Селен восстанавливался из селенита натрия солянокислым гидразином. Полученные наночастицы селена стабилизировались раствором иммуноглобулинов. Для избавления от низкомолекулярных соединений проводился диализ против фосфатносолевого буфера. Конечный препарат, в котором содержится Nano - Se и иммуноглобулин, подвергался лиофильной сушке.
Оценка острой токсичности препарата проводилась согласно ГОСТ 32644-2014 года.
Было взято 3 лабораторные мыши весом 23 грамма, им было введено 2000 мг/кг препарата (согласно ГОСТ 32644-2014 года), внутрибрюшинно. При введении болевой реакции не наблюдалось, первые признаки интоксикации появились спустя час, мыши сбились в угол, появилось учащенное дыхание. Спустя 24 часа 2 мыши чувствуют себя в пределах нормы, одна мышь в состоянии угнетения, погибла через 8 часов. Далее состояние мышей не менялось, реакции на звук и на прикосновение у мышей не изменилась, болезненности не наблюдается.
Для второго введения было взято 3 лабораторные мыши весом 20 грамм, и им было введено 2000 мг/кг препарата (согласно ГОСТ 32644-2014 года), внутрибрюшинно. При введении болевой реакции не наблюдалось, первые признаки интоксикации появились спустя час: у подопытных наблюдалось учащенное и глубокое дыхание. Спустя еще 35 минут признаки интоксикации остались неизменны. Через 50 минут мыши стали дышать реже, 2 мыши лежат в углу, одна питается. Спустя 24 часа мыши пришли в норму, никаких изменений в поведении и состоянии не наблюдалось.
Было проведено конструирование препарата на основе неспецифического иммуноглобулина и наночастиц селена для коррекции иммунной системы у животных.
Препарат, согласно ГОСТ 32644-2014 года, относится к 5 классу опасности, и имеет относительно низкую опасность острой токсичности.
Claims (2)
- Способ получения ветеринарного препарата на основе неспецифических иммуноглобулинов и коллоидных частиц селена для коррекции иммунной системы, характеризующийся наличием наночастиц селена, заключающийся в том, что в дистиллированной воде производят конъюгацию неспецифического иммуноглобулина и наночастиц селена, полученных при восстановлении из селенита натрия солянокислым гидразином 25 мМоль, с последующим диализом против фосфатносолевого буфера и дальнейшей лиофильной сушкой полученной инъекционной лекарственной формы, при следующем сочетании компонентов, мас.%:
-
коллоидные частицы селена 0,01-0,10 неспецифические иммуноглобулины 0,10-0,20 дистиллированная вода остальное
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2798268C1 true RU2798268C1 (ru) | 2023-06-20 |
Family
ID=
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2137480C1 (ru) * | 1998-06-11 | 1999-09-20 | Чувашский государственный университет им.И.Н.Ульянова | Способ получения препарата для повышения неспецифической активности иммунной системы организма |
RU2485964C1 (ru) * | 2012-01-10 | 2013-06-27 | Сергей Александрович Староверов | Иммуностимулирующая композиция для животных |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2137480C1 (ru) * | 1998-06-11 | 1999-09-20 | Чувашский государственный университет им.И.Н.Ульянова | Способ получения препарата для повышения неспецифической активности иммунной системы организма |
RU2485964C1 (ru) * | 2012-01-10 | 2013-06-27 | Сергей Александрович Староверов | Иммуностимулирующая композиция для животных |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
СТАРОВЕРОВ С.А. и др., Разработка прототипов лекарственных препаратов на основе коллоидных наночастиц селена и высокомолекулярных биологически активных веществ. III Биотехнология. Взгляд в будущее. Том II. Март, 2014, стр. 112-116. BO HUANG et al. Free radical scavenging efficiency of nano-Se in vitro / Free Radical Biology & Medicine. 2003. V. 35, N. 7. p. 805-813. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6294171B2 (en) | Methods for treating disease states comprising administration of low levels of antibodies | |
EP3957312A1 (en) | Manganese combination for immunological enhancement | |
JP2008542405A (ja) | ポリイノシン酸‐ポリシチジル酸に基づくアジュバント | |
CN112933104B (zh) | 核苷酸的新用途 | |
US20190270792A1 (en) | Biological Therapeutics for Infection-Relating Disorders or Conditions | |
EP2643344B1 (en) | Human lactoferrin derived peptide for use as an antigen masking agent | |
JPH09502706A (ja) | 胆汁由来免疫調節組成物 | |
RU2798268C1 (ru) | Способ получения ветеринарного препарата на основе неспецифических иммуноглобулинов и коллоидных частиц селена для коррекции иммунной системы | |
RU2447886C1 (ru) | Препарат для коррекции обменных процессов и повышения естественной резистентности организма животных | |
JPH10511974A (ja) | リソチーム二量体の新しい応用 | |
WO2022252848A1 (en) | Applications of analogs or derivatives of sialic acids | |
CA2538408C (en) | Diet product, oral drug and method for treating allergies using tgf-.beta.1 | |
CN112741899A (zh) | 一种组合物、食品补充剂及在抑制动物疱疹病毒中的应用 | |
RU2514004C1 (ru) | Способ получения комплексного препарата с иммунометаболической и антгельминтной активностью | |
JPH06340549A (ja) | ネコの呼吸器疾患治療剤とその治療剤を用いる治療方法 | |
JP4629964B2 (ja) | ウシの消化器疾患治療剤 | |
RU2404770C1 (ru) | Способ получения комплексного иммунотропного препарата для животных | |
JPH1135468A (ja) | 核酸とその成分を用いたi型アレルギー 抑制食品及び抑制剤 | |
CN112843093B (zh) | 一种猫免疫因子口服液及其应用 | |
Slobodyanik et al. | Correction of the immunological status of the newborn calves with Interferon | |
RU2794852C1 (ru) | Способ повышения естественной резистентности молодняка крупного рогатого скота | |
RU2813129C1 (ru) | Средство, повышающее интенсивность пренатального иммуногенеза у экспериментальных животных | |
CN112791104B (zh) | 一种犬免疫因子口服液及其应用 | |
JP7337389B2 (ja) | ヒアルロン酸を有効成分として含むアレルゲン作用増強剤 | |
RU1793928C (ru) | Способ лечени и профилактики бруцеллеза животных |