RU2787267C1 - Способ идентификации биовара бактерий acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens - Google Patents
Способ идентификации биовара бактерий acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens Download PDFInfo
- Publication number
- RU2787267C1 RU2787267C1 RU2022109368A RU2022109368A RU2787267C1 RU 2787267 C1 RU2787267 C1 RU 2787267C1 RU 2022109368 A RU2022109368 A RU 2022109368A RU 2022109368 A RU2022109368 A RU 2022109368A RU 2787267 C1 RU2787267 C1 RU 2787267C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- baumannii
- bacteria
- tryptophandestruens
- nutrient medium
- biovar
- Prior art date
Links
- 241000588626 Acinetobacter baumannii Species 0.000 title claims abstract description 52
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 53
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 39
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N Benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 35
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M Sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 23
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 21
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 21
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 claims abstract description 21
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M Potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 20
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 claims abstract description 19
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 18
- 235000010235 potassium benzoate Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 239000004300 potassium benzoate Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229940103091 Potassium Benzoate Drugs 0.000 claims abstract description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 14
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 8
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 claims abstract description 8
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- NUHCTOLBWMJMLX-UHFFFAOYSA-N Bromothymol blue Chemical compound BrC1=C(O)C(C(C)C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C(=C(Br)C(O)=C(C(C)C)C=2)C)=C1C NUHCTOLBWMJMLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 11
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K Iron(III) chloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 65
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 30
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 21
- 229960004799 Tryptophan Drugs 0.000 description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N Anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N Hippuric acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 4
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N Putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical Effects 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 2
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-Aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 241001165345 Acinetobacter baylyi Species 0.000 description 1
- 241000588624 Acinetobacter calcoaceticus Species 0.000 description 1
- 241000229113 Acinetobacter pittii Species 0.000 description 1
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241001453380 Burkholderia Species 0.000 description 1
- WPDYPOJHZBBFGR-UHFFFAOYSA-N C1=C(C)C=CC(C(C)C)=C1O.[Br] Chemical compound C1=C(C)C=CC(C(C)C)=C1O.[Br] WPDYPOJHZBBFGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 241000588731 Hafnia Species 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000588752 Kluyvera Species 0.000 description 1
- 229960003104 Ornithine Drugs 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 206010039447 Salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000863430 Shewanella Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 206010040550 Shigella infection Diseases 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000122971 Stenotrophomonas Species 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-M anthranilate Chemical compound NC1=CC=CC=C1C([O-])=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000007382 columbia agar Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000019249 food preservative Nutrition 0.000 description 1
- 239000005452 food preservative Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- CJNBYAVZURUTKZ-UHFFFAOYSA-N hafnium(IV) oxide Inorganic materials O=[Hf]=O CJNBYAVZURUTKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N precursor Substances N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Раскрыт способ идентификации биовара бактерий Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens, включающий посев исследуемой суточной агаровой культуры A. baumannii на поверхность питательной среды, содержащей пептон ферментативный, NaCl, субстрат для хромогенной реакции, бромтимоловый синий, FeCl3 6H2O, агар микробиологический, NaOH для корректировки рН, дистиллированную воду; инкубацию посева в аэробных условиях при 37°С в течение 18-24 ч; определение принадлежности бактерий к биовару tryptophandestruens A. baumannii по появлению темно-коричневой окраски питательной среды вокруг газонов исследуемых бактерий. При этом в качестве субстрата для специфической хромогенной реакции в питательной среде используют бензоат натрия, или бензоат калия, или бензойную кислоту, которые вносят после растворения при нагревании всех остальных ингредиентов; корректируют рН среды; стерилизуют среду при 121°С в течение 20 мин; рН 7,2±0,2. Изобретение обеспечивает повышение диагностической чувствительности способа идентификации биовара бактерий A. baumannii bv. Tryptophandestruens. 2 табл., 6 пр.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии. Может быть использовано при бактериологических исследованиях по идентификации биовара A.baumannii bv. tryptophandestruens, а также в производстве питательных сред для этих исследований.
Известен способ идентификации биовара бактерий A. baumannii bv. tryptophandestruens (Сиволодский Е.П., Краева Л.А., Старкова Д.А., Михайлов Н.В., Горелова Г.В. Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens bv. nov., выделенный из клинического материала. Инфекция и иммунитет 2021, Т. 11, №5, с. 965-972..doi.org/10.15789/2220-7619-ABB-1676). Авторы представили первое описание основных генетических и фенотипических характеристик биовара tryptophandestruens A. baumannii. Бактерии этого биовара имели специфическую совокупность признаков, отличающих их от штаммов А. baumannii и других видов бактерий группы A. baumannii: наличие хромо-генной биотрансформации L-триптофана (антранилатным путем) и антрани-ловой кислоты при однозначном отсутствии этих признаков у других бактерий; отсутствие утилизации гиппурата натрия и L-арабинозы при однозначном наличии утилизации у других бактерий; отсутствие утилизации L-триптофана, путресцина, L-орнитина при наличии утилизации у большинства штаммов других видов. Авторы предлагали осуществлять идентификацию бактерий биовара A.baumannii bv. tryptophandestruens в лабораториях любого уровня тестами на хромогенную биотрасформацию L-триптофана и утилизацию гиппурата натрия. Тест на хромогенную биотрансформацию антраниловой кислоты не предлагали использовать, ввиду ограничения доступа лабораторий к этому веществу как прекурсору наркотических средств. В соответствии с способом для биотрансформации L-триптофана и других ароматических аминокислот применяли жидкие и плотные питательные среды. Состав жидкой среды: пептон ферментативный 1 г; NaCI 0,5 г; L-триптофан 0,5 г; вола дистиллированная 100 мл; рН 7,0; стерилизация при 121°С 20 мин. Другие аминокислоты использовали в среде по 0,5%; антраниловую кислоту 0,3% Плотную питательную среду готовили следующим образом: в колбу с 200 мл расплавленного стерильного колумбийского агара вносили 0,2 г L-триптофана,, кипятили до его растворения, добавляли 1 мл 10% водного раствора FCI3 и 1N раствор NaOH до рН 7,0, разливали в стерильные чашки Петри. Другие аминокислоты вносили в среды по 0,1%. Методика биотрансформации ароматических аминокислот на плопной питательной среде: предварительно суточные агаровые культуры исследуемых бактерий суспендировали по полной петле в 0,2 мл 0,85% раствора хлорида натрия в лунках стерильных полимерных планшетов, засевали по полной петле взвеси из лунки радиальным штрихом на сектор сред с субстратом (L-триптофан, другие ароматические аминокислоты) и без субстрата (контроль), инкубировали аэробно при 37°С в течение 24-48 ч; положительным результатом хромогенной биотрансформации субстрата считали появление четко выраженного изменения окраски газона бактерий и/или окружающей его питательной среды (темно-коричневая окраска) при отсутствии изменения окраски контрольной среды. Утилизацию субстратов в качестве единственного источника углерода осуществляли на минимальном солевом агаре (г/л): NH4CI-5; NH4NO3-I; Na2SO4-2; K2HPO4-3; KH2PO4-1; MgSO4-0,1; агар - 15; 1,6%-ный водный раствор бромтимолового синего - 4 мл; дистиллированная вода - 1 л; рН 7,2; стерилизация при 121°С - 20 мин. Каждый субстрат вносили по 0,1 г в отдельную колбу с 50 мл стерильной горячей среды, устанавливали рН 7,2; в одну колбу субстрат не вносили (контроль среды), разливали в стерильные чашки Петри. Использовали субстраты: гиппурат натрия, L-арабиноза, L-триптофан, L-орнитин гидрохлорид (Merck, Германия).Методика утилизации субстратов в качестве единственного источника углерода. Суточные агаровые культуры бактерий по полной петле (диаметром 2 мм) суспендировали в 0,2 мл 0,85% раствора хлорида натрия в лунках полимерного планшета. Чашки сред с субстратом (состав сред указан выше) и контрольную среду без субстрата разделяли на 8 секторов и маркировали по номерам штаммов. Засевали исследуемые культуры по полной петле взвеси из лунок радиальным штрихом на сектора сред. Посевы выращивали аэробно при 37°С в течение 3 суток, просматривая ежедневно. Положительным результатом утилизации субстрата считали наличие четко выраженного газона бактерий по следу посева при отсутствии роста бактерий на контрольной среде без субстрата. Дальнейшие наши исследования после опубликования указанной статьи показали значительное распространение биовара A.baumannii bv. tryptophandestruens среди клинических штаммов, однако, обнаружили единичные атипичные штаммы этого биовара отрицательные по хромогенной биотрансформации L-триптофана, что снижало диагностическую чувствительность идентификации биовара по способу этого аналога. Другие аналоги способа не известны.
Прототипом заявляемого способа нами избран способ фенотипической идентификации биовара бактерий A.baumannii bv. tryptophandestruens по статье (Сиволодский Е.П., Краева Л.А., Старкова Д.А., Михайлов Н.В., Горелова С.В. Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens, выделенный из клинического материала. Инфекция и иммунитет.2021, Т.11, №5, с. 965-972.doi.org/10.15789/2220-7619-ABB-1676), так как он наиболее близок заявляемому способу по совокупности существенных признаков.
Недостатком прототипного способа является снижение диагностической чувствительности идентификации бактерий биовара A.baumannii bv. tryptophandestruens, ввиду неточной идентификации атипичных штаммов биовара с отсутствием хромогенной биотрансформации L-триптофана.
Целью изобретения является повышение диагностической чувствительности способа идентификации биовара бактерий A.baumannii bv. tryptophandestruens.
В соответствии с изобретением поставленная цель достигается тем, что исследуемую суточную агаровую культуру бактерий A. baumannii засевают в виде бляшки диаметром 5 мм на поверхность плотной питательной среды, содержащей пептон ферментативный, NaCI, субстрат для хромогенной реакции бензоат натрия (или бензоат калия, или бензойную кислоту), FeCl36H2O, бромтимоловый синий, NaOH для корректировки рН, агар микробиологический, дистиллированную воду при следующем содержании ингредиентов: пептон ферментативный 5,0 г; NaCI 5,0 г; бензоат натрия (или бензоат калия, или бензойная кислота) 1,0-2,0 г; FeCI3 6H2O (10% водный раствор) 0,1-1 мл; бромтимоловый синий (1,6% водный раствор) 3 мл; агар микробиологический 15,0 г; NaOH (4% раствор) 2,6-3 мл или 15,5-30 мл; вода дистиллированная 1 л; при этом бензоат натрия (или бензоат калия, или бензойную кислоту) вносят после растворения при нагревании всех остальных компонентов; устанавливают рН среды 7,2±0,2; стерилизуют среду при 121°С в течение 20 мин; инкубируют посевы аэробно при 37°С в течение 18-24 ч; определяют принадлежность бактерий к биовару tryptophandestruens А. baumannii по прявлению темно-коричневой окраски питательной среды вокруг газонов исследуемых бактерий. Примечание: бактериологический контроль качества питательной среды заявляемого способа проводят при изготовлении среды; суточные агаровые культуры контрольных штаммов (клинические штаммы A. baumannii и A. baumannii bv. tryptophandestruens) засевают по одной петле в виде бляшки диаметром 5 мм на поверхность испытуемой среды в чашках Петри, инкубируют аэробно при 37°С в течение 18-24 ч, учитывают результат - питательная среда пригодна к использованию, если вокруг газона штамма A. baumannii bv. tryptophandestruens имеется четко выраженная зона темно-коричневой окраски питательной среды (положительный контроль) при отсутствии зоны окраски питательной среды вокруг газона штамма A. baumannii (отрицательный контроль). Готовая питательная среда в чашках Петри пригодна к использованию в течение 30 суток при хранении от 4°С до 8°С.
Отличительный существенный признак способа - применение в составе питательной среды заявляемого способа бензоата натрия или бензоата калия, или бензойной кислоты в качестве субстрата для специфической цветной реакции бактерий биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens. Этот признак не применялся в прототипе. Бензоат натрия (CAS 532-32-1), бензоат калия (CAS 582-25-2), бензойная кислота (CAS 65-85-0) известные вещества, которые широко используют в биотехнологии в качестве консервантов пищевых продуктов (пищевые добавки Е 211, Е 212, Е 210, соответственно). Из уровня техники не известна цветная биотрансформация этих веществ бактериями, в том числе A. baumannii. Нами впервые неожиданно в эксперименте выявлено неизвестное ранее свойство бензойной кислоты и ее солей бензоата натрия и бензоата калия осуществлять цветную биотрансформацию при взаимодействии с бактериями биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens. Отличительный существенный признак не следует очевидным образом из уровня техники. Хромогенная биотрансформация бактериями этого биовара обнаружена нами только у некоторых химических соединений на основе бензойной кислоты: бензойная кислота, бензоат натрия, бензоат калия, орто-амино-бензойная кислота (антраниловая кислота); не обнаружена - у орто-гидро-бензойной кислоты, пара-амино-бензойной кислоты; была вариабельной у гиппурата натрия (N- бензоил глицин натрия). При изучении нами 88 штаммов A. baumannii, выделенных в 2021 году в Санкт-Петербурге, было установлено, что все типичные и атипичные штаммы A. baumannii bv. tryptophandestruens (n-28) осуществляли хромогенную биотрансформацию бензоата натрия, бензоата калия, бензойной кислоты, а также впервые выявлена хромогенная биотрансформация антраниловой кислоты атипичными штаммами этого биовара (табл.1). Не обнаружена нами хромогенная биотрансформация бензоата натрия и бензойной кислоты на питательной среде заявляемого способа бактериями других видов рода Acinetobacter - A. nosocomial (n-8), A. pittii (n-8), A.calcoaceticus (1), A.baylyi (n-6), а также 34 видов других 22 родов (Pseudomonas, Burkholderia, Stenotrophomonas, Alcaligenes, Shewanella, Klebsiella, Proteus, Morganella, Providencia, Echerichia, Shigella, Salmonella, Kluyvera, Serratia, Hafnia, Enterobacter, Citrobacter, Yersinia, Vibrio,
Staphylococcus, Enterococcus, Bacillus), что указывает на специфичность этой хромогенной биотрансформации как маркера бактерий биовара A.baumannii bv. tryptophandestruens. Сравнительное изучение диагностической чувствительности идентификации бактерий биовара tryptophandestruens прототипным и заявляемым способами 88 первичных штаммов A. baumannii, выделенных в 2021 г. в Санкт-Петербурге, показало, что прототипным способом (по наличию хромогенной биотрансформации L-триптофана и отсутствию утилизации гиппурата натрия) были идентифицированы 20 (22,7±4,46%) типичных штаммов биовара, заявляемым спсобом (по наличию хромогенной биотрансформации бензоата натрия) - 28 (31,2±4,93%) типичных и атипичных штаммов этого биовара, то-есть больше на 8,5%) штаммов (табл.2). Следовательно, отличительный существенный признак непосредственно определяет решение поставленной технической задачи повышения диагностической чувствительности способа идентификации бактерий биовара А. baumannii bv. tryptophandestruens. Механизм достижения технического результата представлен только в материалах данной заявки. Химическая сущность хромогенной биотрансформации бензойной кислоты и ее солей (бензоата натрия, бензоата калия) еще неизвестна и подлежит специальному химическому исследованию.
Существенными признаками способа являются: использование свежей (суточной) агаровой культуры исследуемых штаммов A. baumannii; посев ее на поверхность плотной питательной среды (радиальным штрихом или в виде бляшки) и аэробная инкубация при 37°С в течение 18-24 ч, так как этот режим культивирования оптимален для аэробных микроорганизмов; состав питательной среды, включающий пептон ферментативный (источник питательных веществ), натрий хлорид; FeCI3 6H2O, повышающий интенсивность специфической цветной окраски питательной среды (однако, специфическая цветная реакция происходит и визуально выявляется и без этого вещества); 1,6% водный раствор бромтимолового синего, позволяющий постоянно контролировать необходимый рН среды; NaOH для коррекции рН среды; режим стерилизации питательной среды при 121°С; визуальный учет биотрансформации бензоата натрия (или бензоата калия, или бензойной кислоты) по появлению специфической темно-коричневой окраски питательной среды вокруг газона исследуемых бактерий.
Примеры, подтверждающие возможность осуществления способа.
Пример 1. Исследуемый материал - суточные агаровые культуры бактерий A. baumannii трех штаммов №1, №2, №3 засевают петлей в виде бляшки диаметром 5 мм на поверхность питательной среды заявляемого способа в отдельных секторах чашки Петри (1/4 часть чашки). Посевы инкубируют аэробно при 37°С в течение 18 ч, затем учитывают результат. На секторах с штаммами №1 и №2 видна вокруг газонов бактерий интенсивная темно-коричневая окраска питательной среды, что указывает на принадлежность штаммов A. baumannii №1 и №2 к биовару tryptophandestruens. Контрольная проверка шаммов №1 и №2 по такой же методике на питательной среде заявляемого способа, в которой бензоат натрия был заменен L-триптофаном в таком же количестве, показала наличие темно-коричневой окраски питательной среды вокруг газона бактерий только штамма №1, следовательно, заявляемый способ позволяет идентифицировать типичные штаммы (штамм №1) и атипичные по биотрансформации L-триптофана штаммы (штамм №2) биовара A. baumannii bv. tryptophandestruens.
Примечание к примеру 1. Методика приготовления питательной среды заявляемого способа. В 1 л дистиллированной воды вносят: пептон ферментативный 5,0 г; NaCI 5,0 г; FeCI36H2O (10% водный раствор) 0,1 мл; бром-тимоловый синий (1,6% водный раствор) 3 мл; агар микробиологический 15,0 г; NaOH (4% раствор) 2,6 мл; растворяют при нагревании все компоненты, затем добавляют бензоат натрия (CAS 532-32-1) 1,0 г; коррелируют рН 7,2±0,2; стерилизуют при 121°С в течение 20 мин; разливают в стерильные чашки Петри. Питательная среда имеет зеленую окраску, прозрачная, пригодна к использованию в течение 30 суток при хранении от 4°С до 8°С. Контроль питательной среды при изготовлении: суточные культуры контрольных штаммов (клинические штаммы A. baumannii и A. baumannii bv. tryptophandestruens) засевают по одной петле в виде бляшки диаметром 5 мм на поверхность испытуемой среды в чашке Петри, инкубируют аэробно при 37°С в течение 18 ч, учитывают результат - питательная среда пригодна к использованию, если вокруг газона бактерий штамма A. baumannii bv. tryptophandestruens имеется четко выраженная зона темно-коричневой окраски питательной среды (положительный контроль) при отсутствии зоны окраски питательной среды вокруг газона бактерий штамма A. baumannii (отрицательный контроль).
Пример 2. Исследуемый материал - суточные агаровые культуры бактерий A. baumannii трех штаммов №1, №2, №3 засевают в виде бляшки диаметром 5 мм на отдельных секторах (1/4 чашки Петри) питательной среды заявляемого способа, содержащей на 1 л дистиллированной воды 2,0 г бензоата натрия (CAS 532-32-1); 1 мл 10% водного раствора FeCI3 6H2O; 3 мл 4% раствора NaOH и остальные ингредиенты по примечанию к примеру 1; инкубируют посев аэробно при 37°С в течение 24 ч, затем учитывают результат. На секторах с штаммами №1 и №2 вокруг газонов бактерий видна интенсивная темно-коричневая окраска питательной среды, вокруг газона штамма №3 отсутствует зона окраски питательной среды, что указывает на принадлежность штаммов A. baumannii №1 и №2 к биовару tryptophandestruens. Контрольная проверка штаммов №1 и №2 по такой же методике и таком же варианте питательной среды заявляемого способа, в которой только бензоат натрия был заменен L-триптофаном в таком же количестве, показала наличие темно-коричневой окраски питательной среды вокруг газона бактерий только штамма №1, следовательно, заявляемый способ позволяет идентифицировать типичные штаммы (штамм №1) и атипичные по биотрансформации L-триптофана штаммы (штамм №2) биовара A baumannii bv. tryptophandestruens.
Пример 3. Исследуемый материал - суточные агаровые культуры бактерий A.baumannii трех штаммов №1, №2, №3 засевают петлей в виде бляшки диаметром 5 мм на отдельных секторах (1/4 чашки Петри) питательной среды заявляемого способа, содержащей на 1 л дистиллированной воды 1,0 г бензоата калия (CAS 582-25-2); 2,6 мл 4% раствора NaOH и остальные ингредиенты по примечанию к примеру 1; инкубируют посев аэробно при 37°С в течение 18 ч, затем учитывают результат. На секторах с штаммами №1 и №2 видны вокруг газонов бактерий зоны интенсивной темно-коричневой окраски питательной среды; вокруг газона штамма №3 отсутствует зона окраски питательной среды, что указывает на принадлежность штаммов №1 и №2 к биовару A. baumannii bv. tryptophandestruens.
Пример 4. Исследуемый материал - суточные агаровые культуры бактерий A. baumannii трех штаммов №1. №2. №3 засевают в виде бляшки диаметром 5 мм на отдельных секторах (1/4 чашки Петри) питательной среды заявляемого способа, содержащей на 1 л дистиллированной воды 2,0 г бензоата калия (CAS 582-25-2), 1 мл 10% водного раствора FeCl3 6H2O, 3 мл 4% раствора NaOH и остальные ингредиенты по приложению к примеру 1; инкубируют посев при 37°С в течение 24 ч, затем учитывают результат. На секторах с штаммами №1 и №2 видны вокруг газонов бактерий зоны интенсивной темно-коричневой окраски питательной среды; вокруг газона штамма №3 отсутствует зона окраски питательной среды, что указывает на принадлежность штаммов A. baumannii №1 и №2 к биовару tryptophandestruens.
Пример 5. Исследуемый материал - суточные агаровые культуры бактерий A. baumannii трех штаммов №1, №2, №3 засевают петлей в виде бляшки диаметром 5 мм на отдельных секторах (% чашки Петри) питательной среды заявляемого способа, содержащей на 1 л дистиллированной воды 1,0 г бензойной кислоты (CAS 65-85-0), 15,5 мл 4% раствора NaOH и остальные ингредиенты по примечанию к примеру 1; инкубируют посев аэробно при 37°С в течение 18 ч, затем учитывают результат. На секторах с штаммами №1 и №2 видны вокруг газонов бактерий зоны интенсивной темно-коричневой окраски питательной среды; вокруг газона штамма №3 отсутствует зона окраски питательной среды, что указывает на принадлежность штаммов A. baumannii №1 и №2 к биовару tryptophandestruens.
Пример 6. Исследуемый материал - суточные агаровые культуры бактерий A. baumannii трех штаммов №1, №2, №3 засевают петлей в виде бляшки диаметром 5 мм на отдельных секторах (1/4 чашки Петри) питательной среды заявляемого способа, содержащей на 1 л дистиллированной воды 2,0 г бензойной кислоты (CAS 65-85-0), 1 мл 10% водного раствора FeCI3 6Н2О, 30 мл 4% раствора NaOH и остальные ингредиенты по приложению к примеру 1; инкубируют посев аэробно при 37°С в течение 24 ч, затем учитывают результат. На секторах с штаммами №1 и №2 видны вокруг газонов бактерий зоны интенсивной темно-коричневой окраски питательной среды; вокруг газона штамма №3 отсутствует зона окраски питательной среды, что указывает на принадлежность бактерий штаммов №1 и №2 к биовару tryptophandestruens.
Таким образом, при всех предельных концентрациях основных ингредиентов питательной среды заявляемого способа получены четкие результаты идентификации бактерий биовара A, baumannii bv. tryptophandestruens, в том числе атипичных по биотрансформации L-триптофана штаммов, что подтверждает достижение поставленной цели повышения диагностической чувствительности способа идентификации бактерий этого биовара A. baumannii.
Claims (3)
- Способ идентификации биовара бактерий Acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens, включающий посев исследуемой суточной агаровой культуры A. baumannii на поверхность питательной среды, содержащей пептон ферментативный, NaCl, субстрат для хромогенной реакции, бромтимоловый синий, FeCl3 6H2O, агар микробиологический, NaOH для корректировки рН, дистиллированную воду; инкубацию посева в аэробных условиях при 37°С в течение 18-24 ч; определение принадлежности бактерий к биовару tryptophandestruens A. baumannii по появлению темно-коричневой окраски питательной среды вокруг газонов исследуемых бактерий, отличающийся тем, что в качестве субстрата для специфической хромогенной реакции в питательной среде используют бензоат натрия, или бензоат калия, или бензойную кислоту при следующем содержании ингредиентов:
-
пептон ферментативный 5,0 г NaCl 5,0 г бензоат натрия, или бензоат калия, или бензойная кислота 1,0-2,0 г FeCl3 6H2O 10% водный раствор 0,1-1 мл бромтимоловый синий 1,6% водный раствор 3 мл агар микробиологический 15,0 г NaOH 4% раствор 2,6-3 мл или 15,5-30 мл вода дистиллированная 1 л, - при этом бензоат натрия, или бензоат калия, или бензойную кислоту вносят после растворения при нагревании всех остальных ингредиентов; корректируют рН среды; стерилизуют среду при 121°С в течение 20 мин; рН 7,2±0,2.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2787267C1 true RU2787267C1 (ru) | 2023-01-09 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2660567C1 (ru) * | 2017-08-29 | 2018-07-06 | Евгений Петрович Сиволодский | Способ выделения и идентификации бактерий комплекса acinetobacter calcoaceticus - acinetobacter baumannii |
| US20180291419A1 (en) * | 2015-03-30 | 2018-10-11 | Accelerate Diagnostics, Inc. | Instrument and system for rapid microorganism identification and antimicrobial agent susceptibility testing |
| RU2712895C1 (ru) * | 2019-09-23 | 2020-01-31 | Евгений Петрович Сиволодский | Способ идентификации бактерий acinetobacter nosocomialis |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20180291419A1 (en) * | 2015-03-30 | 2018-10-11 | Accelerate Diagnostics, Inc. | Instrument and system for rapid microorganism identification and antimicrobial agent susceptibility testing |
| RU2660567C1 (ru) * | 2017-08-29 | 2018-07-06 | Евгений Петрович Сиволодский | Способ выделения и идентификации бактерий комплекса acinetobacter calcoaceticus - acinetobacter baumannii |
| RU2712895C1 (ru) * | 2019-09-23 | 2020-01-31 | Евгений Петрович Сиволодский | Способ идентификации бактерий acinetobacter nosocomialis |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| СИВОЛОДСКИЙ Е.П. и др. Acinetobacter baumannii bv tryptophandestruens bv nov., выделенный из клинического материала // Инфекция и иммунитет, 2021, Т.11, N.5, стр.965-972. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Udaka | Screening method for microorganisms accumulating metabolites and its use in the isolation of Micrococcus glutamicus | |
| Willis et al. | Asparagine utilization in Escherichia coli | |
| AU2012236786B2 (en) | Detection of bacteria having a resistance to carbapenems | |
| LeFevre et al. | A preliminary report upon some halophilic bacteria | |
| RU2787267C1 (ru) | Способ идентификации биовара бактерий acinetobacter baumannii bv. tryptophandestruens | |
| CN103443288A (zh) | 具有对碳青霉烯类的酶促抗性的细菌的检测 | |
| RU2658435C1 (ru) | Способ выделения и идентификации бактерий pseudomonas aeruginosa | |
| CN104508140B (zh) | 检测产生oxa-048碳青霉烯酶的细菌的方法 | |
| RU2660567C1 (ru) | Способ выделения и идентификации бактерий комплекса acinetobacter calcoaceticus - acinetobacter baumannii | |
| RU2373287C1 (ru) | Способ идентификации бактерий рода pseudomonas | |
| RU2435845C1 (ru) | СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА Shewanella | |
| RU2795907C1 (ru) | Селективная питательная среда для выделения аэромонад из водных объектов | |
| RU2693892C1 (ru) | Способ выделения и идентификации бактерий групп pseudomonas putida и pseudomonas fluorescens | |
| RU2366714C2 (ru) | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИНТЕЗА ФЛУОРЕСЦЕИНА БАКТЕРИЯМИ РОДА Pseudomonas | |
| RU2769434C1 (ru) | Способ выделения бактерий вида acinetobacter baylyi из речной воды | |
| RU2648160C2 (ru) | Питательная среда для выделения бактерий yersinia enterocolitica | |
| RU2792438C1 (ru) | Селективная питательная среда с маннитом, желчью и полимиксином для выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia сухая | |
| SU1752759A1 (ru) | Способ получени белковой основы дл питательных сред | |
| Barker | Utilization of d-tartaric acid by Salmonella Paratyphi B and Salmonella Java: comparison of anaerobic plate test, lead acetate test and turbidity test | |
| US5587313A (en) | Method for fermentation of marine bacteria | |
| RU2233885C2 (ru) | Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл | |
| RU2484141C1 (ru) | Элективно-дифференциальная питательная среда для выделения холерных вибрионов (варианты) | |
| RU2819794C1 (ru) | Способ получения фракции виолацеина при поверхностном твердофазном культивировании штамма Janthinobacterium lividum B-3705D | |
| CN102482707B (zh) | 硝基还原酶的新型酶底物 | |
| RU2148638C1 (ru) | Синтетическая питательная среда для выращивания бруцелл |