RU2785401C2 - Направленная регенерация переломанной кости посредством стимуляции рецептора паратиреоидного гормона - Google Patents

Направленная регенерация переломанной кости посредством стимуляции рецептора паратиреоидного гормона Download PDF

Info

Publication number
RU2785401C2
RU2785401C2 RU2019119701A RU2019119701A RU2785401C2 RU 2785401 C2 RU2785401 C2 RU 2785401C2 RU 2019119701 A RU2019119701 A RU 2019119701A RU 2019119701 A RU2019119701 A RU 2019119701A RU 2785401 C2 RU2785401 C2 RU 2785401C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
lys
asp
ser
seq
conjugated
Prior art date
Application number
RU2019119701A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2019119701A3 (ru
RU2019119701A (ru
Inventor
Филип С. Лоу
Стюарт А. ЛОУ
Джеффри Джей Ховард НИЛЬСЕН
Original Assignee
Пердью Рисерч Фаундейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пердью Рисерч Фаундейшн filed Critical Пердью Рисерч Фаундейшн
Priority claimed from PCT/US2017/064081 external-priority patent/WO2018102616A1/en
Publication of RU2019119701A publication Critical patent/RU2019119701A/ru
Publication of RU2019119701A3 publication Critical patent/RU2019119701A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2785401C2 publication Critical patent/RU2785401C2/ru

Links

Images

Abstract

Изобретение относится к соединению, имеющему структуру: X-Y-Z; где: X представляет собой полипептид, имеющий по меньшей мере на 80% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 3; Z представляет собой молекулу, осуществляющую доставку в кости, содержащую 4 или более кислых аминокислотных остатка, полифосфат, аминоадипиновую кислоту, алендронат и/или бисфосфонат; и Y представляет собой линкер, содержащий полипептид, имеющий по меньшей мере на 80% идентичность последовательности с аминокислотными остатками 35-46 полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида; или его фармацевтически приемлемой соли, а также к способу лечения перелома кости. Технический результат: разработана система доставки лекарственного средства, которая корректирует некоторые побочные эффекты, вызываемые свободным анаболическим лекарственным средством, такие как высокая концентрация кальция в крови. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 27 ил., 1 табл., 4 пр.

Description

перекрестные ссылки на родственные заявки
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки США No. 62/428492, поданной 30 ноября 2016, и предварительной заявки США No. 62/553313, поданной 1 сентября 2017, полное содержание обеих включено в настоящее изобретение в явном виде с помощью ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] Различные аспекты и варианты осуществления, описанные в настоящем изобретении, относятся, в общем, к созданию модели, лечению, снижению устойчивости к лечению, предотвращению и диагнозу заболеваний/симптомов, вызванных заболеваниями, связанными с костями. Варианты осуществления включают способы лечения заболевания, связанного с костями, включающие стадии: обеспечения субъекта, по меньшей мере, одной терапевтически эффективной дозой соединения, описанного в настоящем изобретении.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Данный параграф вводит аспекты, которые могут помочь облегчить понимание настоящего описания. Настоящие утверждения следует читать в этом свете и не следует понимать как допущения о том, что является или что не является предшествующим уровнем техники.
[0004] Здоровая кость представляет собой 50-70% минеральных веществ, 20-40% органического вещества, 5-10% воды и 1-5% липидов и постоянно перерабатывается в новую кость, чтобы помочь здоровой кости поддерживать ее жесткость и гибкость. В начале данного способа рециркуляции, моноциты получают несколько сигналов, стимулирующих их к дифференцированию до остеокластов. Затем, остеобласты экспрессируют лиганд рецептора-активатора ядерного фактора k-B (RANKL) к поверхностному рецептору-активатору ядерного фактора k-B (RANK) в моноцитах, запуская TRAF6 каскад, вовлекающий моноциты в остеокластогенез. Затем, зрелые остеокласты запускают здоровую катаболическую резорбцию кости. Анаболические процессы начинаются по мере того, как стимулируются мезенхимальные стволовые клетки (MSC), становясь остеобластами, BMP-2/Runx2 и Wnt/β-катетиновыми путями. Затем, созревшие остеобласты откладывают остеоид, компонент костного матрикса, в основном состоящего из коллагена I типа, который минерализуется и становится новой костью.
[0005] Ежегодная частота перелома костей составляет приблизительно 6,3 миллионов в Соединенных Штатах. Только это представляет собой основную нагрузку на нашу систему здравоохранения. Данная проблема усугубляется созреванием поколения бэби-бумеров и общим старением населения в большинстве развитых стран. Поскольку бэби-бумеры увеличивают частоту остеопороза, частота осложненных и опасных для жизни переломов будет резко возрастать. Предполагается, что только перелом шейки бедра достигнет 160% до 500000/год к 2040. Даже сейчас в 21ом веке, приблизительно четверть людей возрасте 65 и старше с переломом шейки бедра будут умирать из-за осложнений, связанных с неподвижностью в пределах года после повреждения. Это вызывает основную озабоченность общественного здравоохранения.
[0006] Своевременное клиническое лечение переломов обычно не включает применение сайт-специфических анаболических лекарственных средств. Действительно, единственными лекарственными средствами, одобренными для клинического применения при данных переломах, являются BMP-2 (одобренный только для применения при травме большеберцовой кости) и BMP-7 (снят с производства), которые наносят местно и применяют в лечении открытых переломов трубчатой кости и спондилодезе. Необходимость более широкого применения анаболических препаратов для лечения заболеваний костей, таких как остеопоротические переломы, очевидна, если учесть, что 85% использования анаболиков осуществляется с нарушением инструкции по применению. (Ong, K.L. et al., Spine 35 (2010) 1794-1800). Тем не менее, FDA с осторожностью продолжает ограничивать одобренное применение вводимых местно лекарственных средств при переломах, которые являются уже открытыми и находятся под угрозой заражения.
[0007] Это ограничение требует клинически релевантного подхода к лечению данных типов переломов. Следовательно, было бы желательно иметь лекарство для лечения переломов, которое вводится системно, но направлено на место перелома.
СУЩНОСТЬ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0008] Первый вариант осуществления включает, по меньшей мере, одно соединение формулы X-Y-Z, или его фармацевтически приемлемую соль или его метаболит, где X представляет собой, по меньшей мере, один агент, который модулирует активность, по меньшей мере, одного из рецепторов паратиреоидного гормона; Z представляет собой, по меньшей мере, одну молекулу, осуществляющую направленную доставку к кости; и Y представляет собой линкер, который соединяет и/или сочленяет X и Z. В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой, по меньшей мере, один агент, который увеличивает активность, по меньшей мере, одного из рецепторов паратиреоидного гормона. Как предусмотрено данными вариантами осуществления, Z представляет собой, по меньшей мере, один отрицательно заряженный олигопептид или его эквивалент, который связывается с гидроксиапатитом и/или голой костью.
[0009] Второй вариант осуществления включает соединение согласно первому варианту осуществления, где X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность по последовательности полноразмерному родственному паратиреоидному гормону пептиду (SEQ ID NO: 12), по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность по последовательности полноразмерному паратиреоидному гормону (SEQ ID NO: 13) и/или, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность полноразмерному абалопаратиду или его аналогам;
[0010] Y представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность по последовательности аминокислотным остаткам 35-40, 35-41, 35-42, 35-43, 35-44, 35-45, 35-46, 35-47, 35-48, 35-49, 35-50, 35-51, 35-52, 35-55, 35-84, 41-44, 41-45, 41-46, 41-47, 41-48, 41-49, 41-50 и/или 41-84 полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида или паратиреоидного гормона и/или, по меньшей мере, одного полипептида, чувствительного к катепсину K; и
[0011] Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий приблизительно 4 или более, от приблизительно 4 до приблизительно 100, от приблизительно 4 до приблизительно 50, от 4 до приблизительно 20, от приблизительно 4 до приблизительно 15, от приблизительно 4 до приблизительно 10 кислых аминокислотных остатков, полифосфата, 2-аминогександионовой (аминоадипиновой) кислоты или ее производных и/или алендроната или его производных. В некоторых вариантах осуществления, Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий приблизительно 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и/или 30 кислых аминокислотных остатков, полифосфата, 2-аминогександионовой кислоты или ее производных и/или алендроната или его производных. В других вариантах осуществления, Z представляет собой, по меньшей мере, один отрицательно заряженный олигопептид или его эквивалент, который связывается с гидроксиапатитом и/или голой костью.
[0012] В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, который включает полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность по последовательности полноразмерному родственному паратиреоидному гормону пептиду (SEQ ID NO: 12), по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность по последовательности полноразмерному паратиреоидному гормону (SEQ ID NO: 13) и/или, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность полноразмерному абалопаратиду или его аналогам; Y представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, который включает полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность по последовательности аминокислотным остаткам 35-40, 35-41, 35-42, 35-43, 35-44, 35-45, 35-46, 35-47, 35-48, 35-49, 35-50, 35-51, 35-52, 35-55, 35-84, 41-44, 41-45, 41-46, 41-47, 41-48, 41-49, 41-50 и/или 41-84 полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида или паратиреоидного гормона, и/или, по меньшей мере, одного полипептида, чувствительного к катепсину K; и Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, который включает полипептид, содержащий приблизительно 4 или более, от приблизительно 4 до приблизительно 100, от приблизительно 4 до приблизительно 50, от 4 до приблизительно 20, от приблизительно 4 до приблизительно 15, от приблизительно 4 до приблизительно 10 кислых аминокислотных остатков, полифосфата, аминогександионовой кислоты или ее производных и/или алендроната или его производных. В некоторых вариантах осуществления, Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, который включает полипептид, содержащий приблизительно 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и/или 30 кислых аминокислотных остатков, полифосфата, аминогександионовой кислоты или ее производных и/или алендроната или его производных.
[0013] Третий вариант осуществления включает соединение по любому из предшествующих вариантов осуществления, X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и/или 9; Y представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность по последовательности аминокислотным остаткам 35-46 и/или 41-46 полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида; и Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий приблизительно 4 или более кислых аминокислотных остатков, полифосфата и/или алендроната или его производных. В некоторых вариантах осуществления, Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий от приблизительно 4 до приблизительно 100, от приблизительно 4 до приблизительно 50, от 4 до приблизительно 20, от приблизительно 4 до приблизительно 15, от приблизительно 4 до приблизительно 10 кислых аминокислотных остатков, полифосфата, аминогександионовой кислоты или ее производных и/или алендроната или его производных. В других вариантах осуществления, Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий приблизительно 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и/или 30 кислых аминокислотных остатков, полифосфата, аминогександионовой кислоты или ее производных и/или алендроната или его производных.
[0014] Четвертый вариант осуществления включает соединение по любому из первого-третьего вариантов осуществления, где X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность полноразмерному абалопаратиду или его аналогам; Y представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% идентичность по последовательности аминокислотным остаткам 35-46 полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида; и Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий приблизительно 4 или более, от приблизительно 4 до приблизительно 100, от приблизительно 4 до приблизительно 50, от 4 до приблизительно 20, от приблизительно 4 до приблизительно 15, от приблизительно 4 до приблизительно 10 кислых аминокислотных остатков, полифосфата, 2-аминогександионовой кислоты или ее производных и/или алендроната или его производных. В некоторых вариантах осуществления, Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий приблизительно 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и/или 30 кислых аминокислотных остатков, полифосфата, 2-аминогександионовой кислоты или ее производных и/или алендроната или его производных.
[0015] Пятый вариант осуществления включает соединение по любому из первого-четвертого вариантов осуществления, где Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий приблизительно 6, 7, 8, 9 и/или 10 кислых аминокислотных остатков.
[0016] Шестой вариант осуществления включает соединение по любому из первого-пятого вариантов осуществления, где кислые аминокислотные остатки включают L- или D-аспарагиновую кислоту, L- или D-глютаминовую кислоту или их комбинацию.
[0017] Седьмой вариант осуществления включает соединение по любому из первого-шестого вариантов осуществления, где кислые аминокислотные остатки дополнительно включают разветвленную аминокислоту и/или разветвленные цепи аминокислот.
[0018] Восьмой вариант осуществления включает соединение по любому из первого-седьмого вариантов осуществления, где Y представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, включающий формулу Gly-Gly-Pro-Nle, где Nle включает норлейцин, лейцин, изолейцин и/или их эквивалент.
[0019] Девятый вариант осуществления включает соединение по любому из первого-восьмого вариантов осуществления, где соединение формулы X-Y-Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и/или 99% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 10 и/или SEQ ID NO:11. В некоторых вариантах осуществления, соединение формулы X-Y-Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, который включает полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и/или 99% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 10 и/или SEQ ID NO:11.
[0020] Десятый вариант осуществления включает соединение по любому из первого-девятого вариантов осуществления, где соединение формулы X-Y-Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий SEQ ID NO: 10 и/или SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления, соединение формулы X-Y-Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, который включает полипептид, имеющий SEQ ID NO: 10 и/или SEQ ID NO: 11.
[0021] Одиннадцатый вариант осуществления включает соединение по любому из первого-десятого вариантов осуществления, где X представляет собой, по меньшей мере, один агонист рецептора паратиреоидного гормона 1.
[0022] Двенадцатый вариант осуществления включает соединение по любому из первого-одиннадцатого вариантов осуществления, где X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% гомологию по последовательности первым 13 аминокислотным остаткам полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида (SEQ ID NO: 12), по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% гомологию по последовательности первым 13 аминокислотным остаткам полноразмерного паратиреоидного гормона (SEQ ID NO: 13) и/или, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% гомологию первым 13 аминокислотным остаткам SEQ ID NO:3.
[0023] В некоторых вариантах осуществления, X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% гомологию по последовательности аминокислотным остаткам 2, 3, 4, 6, 7, 9, 12 и/или 13 полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида (SEQ ID NO: 12), по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% гомологию по последовательности аминокислотным остаткам 2, 3, 4, 6, 7, 9, 12 и/или 13 полноразмерного паратиреоидного гормона (SEQ ID NO: 13), и/или, по меньшей мере, приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и/или 100% гомологию аминокислотным остаткам 2, 3, 4, 6, 7, 9, 12 и/или 13 SEQ ID NO:3.
[0024] Тринадцатый вариант осуществления включает способ лечения заболевания, связанного с костями, причем способ включает стадии: обеспечения субъекта, по меньшей мере, одной терапевтически эффективной дозой соединения любого из первого-двенадцатого вариантов осуществления, или его фармацевтически приемлемой соли или метаболита.
[0025] Четырнадцатый вариант осуществления включает способ согласно тринадцатому варианту осуществления, где субъект включает человека, животного, клетку и/или ткань.
[0026] Пятнадцатый вариант осуществления включает способ по тринадцатому и/или четырнадцатому вариантам осуществления, где заболевание, связанное с костями, включает остеопению, остеопороз, ревматоидный артрит, гематологическое заболевание костей, аутоиммунную реакцию, отторжение трансплантата, остеомиелит и/или перелом кости.
[0027] Шестнадцатый вариант осуществления включает способ по тринадцатому-пятнадцатому вариантам осуществления, эффективная доза соединения по любому из первого-двенадцатого вариантов осуществления включает от приблизительно 0,0001 нмоль/кг/день до приблизительно 1000 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,001 нмоль/кг/день до приблизительно 1000 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,01 нмоль/кг/день до приблизительно 1000 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,1 нмоль/кг/день до приблизительно 1000 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,0001 нмоль/кг/день до приблизительно 500 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,001 нмоль/кг/день до приблизительно 500 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,01 нмоль/кг/день до приблизительно 500 нмоль/кг/день, от приблизительно 1 нмоль/кг/день до приблизительно 500 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,0001 нмоль/кг/день до приблизительно 250 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,001 нмоль/кг/день до приблизительно 250 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,01 нмоль/кг/день до приблизительно 250 нмоль/кг/день, от приблизительно 1 нмоль/кг/день to 250 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,0001 нмоль/кг/день до приблизительно 100 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,001 нмоль/кг/день до приблизительно 100 нмоль/кг/день, от приблизительно 0,01 нмоль/кг/день до приблизительно 100 нмоль/кг/день, от приблизительно 1 нмоль/кг/день до приблизительно 75 нмоль/кг/день, от приблизительно 1 нмоль/кг/день до приблизительно 100 нмоль/кг/день, от приблизительно 1 нмоль/кг/день до приблизительно 250 нмоль/кг/день, от приблизительно 1 нмоль/кг/день до приблизительно 500 нмоль/кг/день, от приблизительно 10 нмоль/кг/день до приблизительно 75 нмоль/кг/день, от приблизительно 10 нмоль/кг/день до приблизительно 100 нмоль/кг/день, от приблизительно 10 нмоль/кг/день до приблизительно 250 нмоль/кг/день, от приблизительно 10 нмоль/кг/день до приблизительно 500 нмоль/кг/день, от приблизительно 20 нмоль/кг/день до приблизительно 50 нмоль/кг/день, от приблизительно 20 нмоль/кг/день до приблизительно 75 нмоль/кг/день, от приблизительно 20 нмоль/кг/день до приблизительно 100 нмоль/кг/день, от приблизительно 20 нмоль/кг/день до приблизительно 250 нмоль/кг/день, от приблизительно 20 нмоль/кг/день до приблизительно 500 нмоль/кг/день и/или приблизительно 0,074 нмоль/кг/день.
[0028] В некоторых вариантах осуществления, эффективная доза соединения по любому из первого-двенадцатого вариантов осуществления включает приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 и/или 200 нмоль/кг/день. В других вариантах осуществления, эффективная доза соединения по любому из первого-двенадцатого вариантов осуществления включает приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 и/или 200 пмоль/кг/день.
[0029] Семнадцатый вариант осуществления включает способ по тринадцатому-пятнадцатому вариантам осуществления, где соединение любого из первого-двенадцатого вариантов осуществления вводят перорально, парентерально, ректально, трансдермально, сублингвально и/или интраназально.
[0030] Шестнадцатый вариант осуществления включает соединение, включающее: соединение формулы X-Z; где: X представляет собой, по меньшей мере, один пептид; и Z представляет собой, по меньшей мере, одну молекулу, осуществляющую направленную доставку в кости; или его фармацевтически приемлемую соль или его метаболит.
[0031] Девятнадцатый вариант осуществления включает соединение по шестнадцатому варианту осуществления, где Z представляет собой, по меньшей мере, одну молекулу, которая предпочтительно и/или селективно осуществляет направленную доставку к переломанной кости.
[0032] Двадцатый вариант осуществления включает соединение по любому из восемнадцатого и девятнадцатого вариантов осуществления, где X представляет собой, по меньшей мере, один пептид, содержащий меньше чем 70, 69, 68, 67, 66, 65, 64, 63, 62, 61, 60, 59, 58, 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 и/или 10 аминокислотных остатков.
[0033] Двадцать первый вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцатого вариантов осуществления, где X представляет собой, по меньшей мере, один пептид, содержащий более чем 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и/или 10 аминокислотных остатков.
[0034] Двадцать второй вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцать первого вариантов осуществления, где X представляет собой, по меньшей мере, один пептид, включая гидрофильный пептид, гидрофобный пептид, нейтральный пептид, катионный пептид и/или анионный пептид и/или любую их комбинацию.
[0035] Двадцать третий вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцать второго вариантов осуществления, где: X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, включающий последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% и/или 90% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, или их аналогами или метаболитами; и Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий 4 или более кислых аминокислотных остатков, полифосфатов, аминогександионовой кислоты или ее производных, алендроната или его производных и/или бисфосфоната или его производных.
[0036] Двадцать четвертый вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцать третьего вариантов осуществления, где: X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, включающий последовательность, имеющую, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и/или 99% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, или их аналогам или метаболитам; и Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий 4 или более кислых аминокислотных остатков, полифосфата и/или бисфосфата или их производных.
[0037] Двадцать пятый вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцать четвертому вариантов осуществления, где X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, включающий последовательность, имеющую, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98% и/или 99% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 и/или SEQ ID NO: 19.
[0038] Двадцать шестой вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцать пятому вариантам осуществления, где X представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, включающий последовательность, имеющую, по меньшей мере, 100% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 и/или SEQ ID NO: 19.
[0039] Двадцать седьмой вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцать шестого вариантов осуществления, где Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий отрицательно заряженные аминокислотные остатки.
[0040] Двадцать восьмой вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцать седьмого вариантов осуществления, где Z представляет собой, по меньшей мере, один полипептид, содержащий 2, 3, 4, 5,, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 и/или 100 отрицательно заряженных аминокислотных остатков.
[0041] Двадцать девятый вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцать восьмого вариантов осуществления, где Z представляет собой, по меньшей мере, один моно-, би-, три-, тетра-, пента-, гексабисфосфонат и/или множественный бисфосфонат.
[0042] Тридцатый вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-двадцать девятого вариантов осуществления, где Z представляет собой, по меньшей мере, один из кислый аминокислотных остатков, включающих L- или D-аспарагиновую кислоту, L- или D-глютаминовую кислоту или их комбинацию.
[0043] Тридцать первый вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-тридцатого вариантов осуществления, где Z представляет собой, по меньшей мере, один из кислых аминокислотных остатков, включающих разветвленную аминокислоту и/или разветвленные цепи аминокислот или их комбинацию.
[0044] Тридцать второй вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-тридцать первого вариантов осуществления, где Z представляет собой, по меньшей мере, один из кислых аминокислотных остатков, включающих разветвленную аминокислоту и/или разветвленные цепи аминокислот, или их комбинацию.
[0045] Тридцать третий вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-тридцать второго вариантов осуществления, где соединение формулы X-Z содержит последовательность, имеющую, по меньшей мере, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89% и/или 90% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 23-81 или их аналогов или метаболитов.
[0046] Тридцать четвертый вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-тридцать третьего вариантов осуществления, где соединение формулы X-Z содержит последовательность, имеющую 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% и/или 99% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 23-81 или их аналогов или метаболитов.
[0047] Тридцать пятый вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-тридцать четвертого вариантов осуществления, где соединение формулы X-Z содержит последовательность, имеющую 100% идентичность по последовательности любой из SEQ ID NO: 23-81 или их аналогов или метаболитов.
[0048] Тридцать шестой вариант осуществления включает соединение по любому из шестнадцатого-тридцать пятого вариантов осуществления, дополнительно содержащий линкерный фрагмент Y, где Y представляет собой линкер, который соединяет и/или сочленяет и X и Z.
[0049] Настоящее описание включает соединение для направленного лечения переломов костей, причем соединение включает формулу X-Y-Z, где X представляет собой активный анаболический пептид или его активный фрагмент, который представляет собой агонист рецептора паратиреоидного гормона 1 (PTHR1); Y представляет собой линкер; и Z представляет собой отрицательно заряженный олигопептид или его эквивалент, который связывается с гидроксиапатитом и/или голой костью. По-видимому, многие варианты PTH и PTHrP могут обладать агонистической активностью PTHR1 и применяться вместо PTH или PTHrP при условии, что их сродство к PTHR1 находится в пределах терапевтической величины.
[0050] Настоящее описание также относится к пептиду SEQ ID NO: 3 с 2-метилаланилом по остатку 29 и аминированному по остатку 34 для лечения перелома кости.
[0051] В одном варианте осуществления, приведенный выше активный анаболический пептид или его активный фрагмент выбран из группы, состоящей из родственного паратиреоидному гормону пептида (PTHrP), паратиреоидного гормона (PTH), абалопаратида и их агонистов.
[0052] В другом варианте осуществления, активный анаболический пептид или его активный фрагмент имеет SEQ ID NOS: 1-9, причем SEQ ID NO: 3 содержит 2-метилаланил по остатку 29 и аминирована по остатку 34.
[0053] В одном варианте осуществления, приведенное выше соединение имеет последовательность SEQ ID NO: 10.
[0054] В другом варианте осуществления, активный анаболический пептид или его активный фрагмент представляет собой вариант SEQ ID NOS: 1-3, где, по меньшей мере, остатки 2, 3, 4, 6, 7, 9, 12, 13 SEQ ID NOS: 1-3 являются консервативными.
[0055] В другом варианте осуществления, активный анаболический пептид или его активный фрагмент представляет собой вариант SEQ ID NOS: 1-3, где 1, 5, 10, 11 или 14-34 могут быть замещены консервативной аминокислотой.
[0056] В другом варианте осуществления, приведенный выше активный анаболический пептид или его активный фрагмент, который представляет собой агонист PTHR1, имеет диапазон терапевтического сродства к PTHR1 между приблизительно IC50 0,46 нМ и приблизительно IC50 135 нМ.
[0057] В другом варианте осуществления, приведенный выше линкер Y представляет собой, по меньшей мере, некоторое удлинение любого активного анаболического пептида или его активного фрагмента. Например, линкер Y может представлять собой, по меньшей мере, один невысвобождаемый фрагмент, выбранный из различных длин остатков 35-173 нативного PTHrP или их комбинации.
[0058] Альтернативно, линкер Y может представлять собой, по меньшей мере, один невысвобождаемый фрагмент, выбранный из различных длин остатков 35-84 нативного PTH или их комбинации.
[0059] В другом варианте осуществления, приведенный выше линкер Y выбран из группы, состоящей из различных длин остатков 35-173 нативного PTHrP, или их комбинации, и различных длин остатков 35-84 нативного PTH или их комбинации.
[0060] В другом варианте осуществления, приведенный выше линкер Y представляет собой гидролизуемый субстрат, чувствительный, по меньшей мере, к одной распространенной молекуле, продуцируемой в остеобласте в процессе ремоделирования костной ткани. Например, распространенная молекула может представлять собой катепсин K.
[0061] В другом варианте осуществления, приведенный выше линкер Y представляет собой гидролизуемый субстрат, содержащий последовательность Gly-Gly-Pro-Nle, где Nle представляет собой норлейцин, лейцин, изолейцин или любую их эквивалентную гидрофобную модификацию.
[0062] В другом варианте осуществления, приведенный выше гидролизуемый субстрат содержит дисульфидные связи, которые являются чувствительными к глютатиону.
[0063] В другом варианте осуществления, приведенный выше линкер Y представляет собой расщепляемый эфир.
[0064] В другом варианте осуществления, приведенное выше соединение дополнительно содержит, по меньшей мере, один спейсер, содержащий полиэтиленгликоль (PEG).
[0065] В другом варианте осуществления, приведенный выше отрицательно заряженный олигопептид содержит, по меньшей мере, 4 кислых аминокислотных остатка и не более чем 20 кислых аминокислотных остатков.
[0066] В другом варианте осуществления, приведенный выше отрицательно заряженный олигопептид содержит кислые аминокислотные остатки, выбранные из группы, состоящей из аспарагиновой кислоты, глютаминовой кислоты, D-аспарагиновой, D-глютаминовой кислоты и их комбинации.
[0067] В другом варианте осуществления, отрицательно заряженный олигопептид представляет собой линейную цепочку кислых аминокислот.
[0068] В другом варианте осуществления, отрицательно заряженный олигопептид содержит, по меньшей мере, разветвленную цепочку из двух кислых аминокислот, где разветвленная цепочка кислых аминокислот соединена, по меньшей мере, одним лизином.
[0069] В одном варианте осуществления Z представляет собой, по меньшей мере, один бисфосфонат. В другом варианте осуществления, Z представляет собой полифосфат.
[0070] [0069] В одном варианте осуществления Z представляет собой пептид, являющийся миметиком коллагена, который встраивается в дефектные фибриллы коллагена в месте перелома кости. Например, пептид, являющийся миметиком коллагена, может иметь структуру [Gly-Pro-Hyp]9-OH.
[0071] [0069] В одном варианте осуществления Z представляет собой аминогександионовую кислоту (альфа-аминоадипиновую кислоту) или ее производные с более чем одним углеродом между остовом и кислотой. Например, Z может представлять собой 2-аминомалоновую кислоту.
[0072] Данное описание дополнительно относится к способу лечения перелома кости введением терапевтического количества любого приведенного выше соединения пациенту, страдающему от перелома кости.
[0073] Данные и другие признаки, аспекты и преимущества настоящего изобретения станут более понятными со ссылкой на следующие фигуры, сопутствующее описание и формулу изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0074] ФИГУРА 1. График, показывающий данные о плотности кости, полученные в результате микроКТ. Анализировали выборку 100 КТ снимков (срезов) для каждого каллюса. Стопку снимков выбирали в районе перелома, где каллюс был наибольшим.
[0075] ФИГУРА 2. График, показывающий данные о трабекулярном пространстве, полученные в результате микроКТ. Более узкое пространство связано с костью с большей плотностью и может быть показателем прогрессирующего заживления. Анализировали выборку 100 КТ снимков (срезы) для каждого каллюса.
[0076] ФИГУРА 3. График, показывающий данные о плотности кости, полученные в результате микроКТ. Анализировали выборку 100 КТ снимков (срезы) для каждого каллюса. Стопку снимков выбирали в районе перелома, где каллюс был наибольшим.
[0077] ФИГУРА 4. График, показывающий степень экспрессии щелочной фосфатазы (ALP) и для таргетного и нетаргетного PTHrP в MC3T3E1 клетках. Рассчитывали соотношение ALP (ALP экспрессия после обработки/ALP экспрессия контроля растворителя). Экспрессию нормировали к GAPDH.
[0078] ФИГУРА 5. График, показывающий степень экспрессии остеопонтина (OPN) и для таргетного и нетаргетного PTHrP в MC3T3E1 клетках. Рассчитывали соотношение OPN (OPN экспрессия после обработки /OPN экспрессия контроля растворителя).
[0079] ФИГУРА 6. График, показывающий степень экспрессии генов нескольких ключевых костных маркеров и для таргетного и нетаргетного PTHrP в MC3T3E1 клетках. Маркеры активности включают щелочную фосфатазу (ALP), коллаген I-альфа (Col1-альфа), остеокальцин (OC), остеопротегерин (OPG), остеопонтин (OPN и Остерикс (OSX). Рассчитывали степень экспрессии генов (экспрессия генов после обработка/экспрессия генов контроля растворителя).
[0080] ФИГУРА 7. График, показывающий эффекты PTHrPD10 (таргетный) или PTHrP (свободный) на объем кости после лечения.
[0081] ФИГУРА 8. График, показывающий эффекты абалопаратида D10 (таргетный), абалопаратида (нетаргетный) и соляного раствора на объем кости после лечения.
[0082] ФИГУРА 9. График, показывающий эффекты PTHrP, который обеспечивает направленную доставку за счет полифосфата, или соляного раствора на объем кости после лечения.
[0083] ФИГУРА 10. График, показывающий эффекты PTHrP, который обеспечивает направленную доставку за счет одного алендроната, алендроната с тремя разветвлениями, или свободного PTHrP на объем кости после лечения.
[0084] ФИГУРА 11. Химическая формула, показывающая линейные полимеры кислых аминокислот различной длины углеродной цепи.
[0085] ФИГУРА 12. Химическая формула, показывающая разветвленные полимеры кислых аминокислот различной длины углеродной цепи.
[0086] ФИГУРА 13. Химическая формула, показывающая осуществляющие направленную доставку к кости лиганды не на основе аминокислот. Верх представляет собой бисфосфонаты. Низ представляет собой полифосфатный лиганд, осуществляющий направленную доставку.
[0087] ФИГУРА 14A. Гистограмма, показывающая кратное различие относительных импульсов между переломанной бедренной костью и неповрежденной бедренной костью, применяя различные специфические лиганды, радиомеченные 125I.
[0088] ФИГУРА 14B. Гистограмма, показывающая количество импульсов в минуту для переломанной бедренной кости по сравнению с неповрежденной бедренной костью, применяя различные специфические лиганды, радиомеченные 125I.
[0089] ФИГУРА 15. Изображение в ближней ИК области спектра, показывающее направленную доставку LS288, конъюгированного с линейным полимером 10 L-аспарагиновых кислот через 10 дней после остеотомии на правой бедренной кости. Нетаргетный сигнал является видимым вдоль спины из-за месте инъекции.
[0090] ФИГУРА 16. Изображение в ближней ИК области спектра, показывающее направленную доставку LS288, конъюгированного с линейным полимером 10 L-аспарагиновых кислот через 3 (нижний ряд), 6 (средний ряд) и 10 дней (верхний ряд) после остеотомии на правой бедренной кости. В каждой паре бедренных костей, бедренная кость слева представляет собой переломанную бедренную кость, тогда как бедренная кость справа представляет собой неповрежденную бедренную кость.
[0091] ФИГУРА 17A. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченного конъюгированного пептида, прептинD10, в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[0092] ФИГУРА 17B. Гистограмма, показывающая кратное различие относительного количества импульсов между переломанной бедренной костью и неповрежденной бедренной костью, применяя радиомеченный 125I ПрептинD10.
[0093] ФИГУРА 18A. Гистограмма, показывающая кратное различие относительного количества импульсов между переломанной бедренной костью и неповрежденной (непереломанной) бедренной костью, применяя различные радиомеченные 125I пептиды, конъюгированные с L-Asp10, D-Asp10, L-Glu10 или D-Glu10.
[0094] ФИГУРА 18B. Гистограмма, показывающая кратное различие относительного количества импульсов между переломанной бедренной костью и неповрежденной (непереломанной) бедренной костью, применяя различные радиомеченные 125I пептиды, конъюгированные с L-Asp20, L-Glu20 или D-Glu20.
[0095] ФИГУРА 18C. Гистограмма, показывающая кратное различие относительного количества импульсов между переломанной бедренной костью и неповрежденной (непереломанной) бедренной костью, применяя различные радиомеченные 125I пептиды, конъюгированные с разветвленным L-Asp10, разветвленным D-Asp10, разветвленным L-Asp4, или разветвленным L-Asp8.
[0096] ФИГУРА 19A. Гистограмма, показывающая кратное различие относительного количества импульсов между переломанной бедренной костью и неповрежденной (непереломанной) бедренной костью, применяя различные конъюгированные пептиды, радиомеченные 125I.
[0097] ФИГУРА 19B. Гистограмма, показывающая кратное различие относительного количества импульсов между переломанной бедренной костью и неповрежденной (непереломанной) бедренной костью, применяя различные конъюгированные пептиды, радиомеченные 125I.
[0098] ФИГУРА 20A. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, Ck2.3C и PACAPC), конъюгированных с L-Asp10 (т.е. линейным полимером из 10 L-аспарагиновых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов.
[0099] ФИГУРА 20B. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, и PACAPC), конъюгированных с D-Asp10 (т.е. линейным полимером из 10 D-аспарагиновых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов.
[00100] ФИГУРА 20C. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, CTCC и F109C), конъюгированных с L-Asp20 (т.е. линейным полимером из 10 L-аспарагиновых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00101] ФИГУРА 21A. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, P4C, Ck2.3C и CTCC), конъюгированных с L-Glu10 (т.е. линейным полимером из 10 L-глютаминовых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00102] ФИГУРА 21B. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, CTCC и F109C), конъюгированных с D-Glu10 (т.е. линейным полимером из 10 D-глютаминовых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00103] ФИГУРА 22A. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, P4C, Ck2.3C, F109C и PACAPC), конъюгированных с L-Glu20 (т.е, линейным полимером из 20 L-глютаминовых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00104] ФИГУРА 22B. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C и F109C), конъюгированных с D-Glu20 (т.е. линейным полимером из 20 D-глютаминовых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00105] ФИГУРА 23A. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, CTCC, F109C и PACAPC), конъюгированных с разветвленным L-Asp10 (т.е, разветвленным полимером из 10 L-аспарагиновых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00106] ФИГУРА 23B. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C и CTCC), конъюгированных с разветвленным D-Asp10 (т.е. разветвленным полимером из 10 D-аспарагиновых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00107] ФИГУРА 24A. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, P4C, Ck2.3C, F109C и PACAPC), конъюгированных с L-AAD10 (т.е. линейным полимером из 10 L-аминоадипиновых кислот) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00108] ФИГУРА 24B. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, CTCC, F109C и PACAPC), конъюгированных с L-SDSDD (т.е. линейным полимером, имеющим L-Ser-Asp-Ser-Asp-Asp; SEQ ID NO: 21) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00109] ФИГУРА 24C. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, CTCC, F109C и PACAPC), конъюгированных с (DSS)6 (т.е. DSSDSSDSSDSSDSSDSS; SEQ ID NO: 22) в виде процента суммарного количества импульсов, которое обнаружено в каждом из отдельных органов. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00110] ФИГУРА 25A. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченного 125I PTHrP1-39C, конъюгированного с монобисфосфонатом, трибисфосфонатом или полифосфатом, радиомеченного 125I PTH1-34, конъюгированного с E10, и радиомеченного 125I PTHrP1-39, конъюгированного с E20. PTHrP1-39C представляет собой PTHrP1-39 с цистеином (C) в 40 положении, с которым конъюгируют различные специфические лиганды. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00111] ФИГУРА 25B. Гистограмма, показывающая относительное распределение радиомеченного 125I тирозина, конъюгированного с монобисфосфонатом, разветвленным L-Asp4 (т.е. YPegK[DDDD]2; смотри также SEQ ID NO:68) или разветвленным L-Asp8 (т.е. YPegK[DDDDDDDD]2; смотри также SEQ ID NO:69). "Монобисфосфонат YC" представляет собой пептид, содержащий тирозин и цистеин, который конъюгирован с монобисфосфонатом. Количество импульсов нормализовали на грамм веса ткани.
[00112] ФИГУРА 26. График, показывающий эффекты PTH1-34E10 и соляного раствора на объем кости после лечения.
[00113] ФИГУРА 27. График, показывающий эффект PTHrPD10 на объем кости после лечения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СПИСКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[00114] SEQ ID NO: 1. PTHrP 1-34 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTA)
[00115] SEQ ID NO: 2. PTH 1-34 (SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF)
[00116] SEQ ID NO: 3. Абалопаратид 1-34 с 2-метилаланилом по остатку 29 и аминированный по остатку 34 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLAKLHTA)
[00117] SEQ ID NO: 4. PTHrP 1-35 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAG)
[00118] SEQ ID NO: 5. PTHrP 1-36 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAGI)
[00119] SEQ ID NO: 6. PTHrP 1-37 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAGIR)
[00120] SEQ ID NO: 7. PTHrP 1-38 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAGIRA)
[00121] SEQ ID NO: 8. PTHrP 1-39 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAGIRAT)
[00122] SEQ ID NO: 9. PTHrP 1-40 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAGIRATS)
[00123] SEQ ID NO: 10. PTHrP1-46D10 (VSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAGIRATSEVSPNSDDDD DDDDDD)
[00124] SEQ ID NO: 11. PTH 1-46D10 (SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAP LAPRDADDDDDDDDDD)
[00125] SEQ ID NO: 12. PTHrP (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAEIRATSEVSPNSKPSPNTKNHPVRFGS DDEGRYLTQETNKVETYKEQPLKTPGKKKKGKPGKRKEQEKKKRRTRSAWLDSGVTG SGLEGDHLSDTSTTSLELDSRRH)
[00126] SEQ ID NO: 13. PTH (SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDN VLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQ)
[00127] SEQ ID NO: 14. Гепарин-связывающий домен FGF2 ("F109C") (YKRSRYTC)
[00128] SEQ ID NO: 15. Гипофизарный активирующий аденилатциклазу полипептид ("PACAPC") (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKC)
[00129] SEQ ID NO: 16. Хемотаксический криптический пептид, полученный из CTX области коллагена типа III ("CTCC") (YIAGVGGEKSGGFYC)
[00130] SEQ ID NO: 17. ка ("Ck2.3C") (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQC)
[00131] SEQ ID NO: 18. Пептид, полученный из остеопонтина ("ODPC") (DVDVPDGRGDSLAYGC)
[00132] SEQ ID NO: 19. P4-BMP2 ("P4C") (KIPKASSVPTELSAISTLYLC)
[00133] SEQ ID NO: 20. ПрептинD10 (DVSTSQAVLPDDFPRYDDDDDDDDDD)
[00134] SEQ ID NO: 21. SDSDD
[00135] SEQ ID NO: 22. DSSDSSDSSDSSDSSDSS
[00136] SEQ ID NO: 23. PTH1-34E10 (SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFEEEEEEEEEE)
[00137] SEQ ID NO: 24. PTHrP1-36E10 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAGIEEEEEEEEEE)
[00138] SEQ ID NO: 25. PTHrP1-39E20 (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAGIRATCMalEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE), где Mal представляет собой малеимид во всех последовательностях, представленных в настоящем изобретении.
[00139] SEQ ID NO: 26. F109C, конъюгированный с D10 (YKRSRYTCMalDDDDDDDDDD)
[00140] SEQ ID NO: 27. F109C, конъюгированный с D20 (YKRSRYTCMalDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD)
[00141] SEQ ID NO: 28. F109C, конъюгированный с E10 (YKRSRYTCMalEEEEEEEEEE)
[00142] SEQ ID NO: 29. F109C, конъюгированный с E20 (YKRSRYTCMalEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE)
[00143] SEQ ID NO: 30. F109C, конъюгированный с AAD10 (YKRSRYTCMalXXXXXXXXXX, где X представляет собой адипиновую кислоту)
[00144] SEQ ID NO: 31. F109C, конъюгированный с SDSDD (YKRSRYTCMalSDSDD).
[00145] SEQ ID NO: 32. F109C, конъюгированный с (DSS)6 (YKRSRYTCMalDSSDSSDSSDSSDSSDSS)
[00146] SEQ ID NO: 33. PACAPC, конъюгированный с D10 (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalDDDDDDDDDD)
[00147] SEQ ID NO: 34. PACAPC, конъюгированный с D20 (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD)
[00148] SEQ ID NO: 35. PACAPC, конъюгированный с E10 (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalEEEEEEEEEE)
[00149] SEQ ID NO: 36. PACAPC, конъюгированный с E20 (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE)
[00150] SEQ ID NO: 37. PACAPC, конъюгированный с AAD10 (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalXXXXXXXXXX, где X представляет собой адипиновую кислоту).
[00151] SEQ ID NO: 38. PACAPC, конъюгированный с SDSDD (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalSDSDD).
[00152] SEQ ID NO: 39. PACAPC, конъюгированный с (DSS)6 (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalDSSDSSDSSDSSDSSDSS)
[00153] SEQ ID NO: 40. CTCC, конъюгированный с D10 (YIAGVGGEKSGGFYCMalDDDDDDDDDD)
[00154] SEQ ID NO: 41. CTCC, конъюгированный с D20 (YIAGVGGEKSGGFYCMalDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD)
[00155] SEQ ID NO: 42. CTCC, конъюгированный с E10 (YIAGVGGEKSGGFYCMalEEEEEEEEEE)
[00156] SEQ ID NO: 43. CTCC, конъюгированный с E20 (YIAGVGGEKSGGFYCMalEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE)
[00157] SEQ ID NO: 44. CTCC, конъюгированный с AAD10 (YIAGVGGEKSGGFYCMalXXXXXXXXXX, где X представляет собой адипиновую кислоту)
[00158] SEQ ID NO: 45. CTCC, конъюгированный с SDSDD (YIAGVGGEKSGGFYCMalSDSDD).
[00159] SEQ ID NO: 46. CTCC, конъюгированный с (DSS)6 (YIAGVGGEKSGGFYCMalDSSDSSDSSDSSDSSDSS)
[00160] SEQ ID NO: 47. Ck2.3C, конъюгированный с D10 (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalDDDDDDDDDD)
[00161] SEQ ID NO: 48. Ck2.3C, конъюгированный с D20 (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD)
[00162] SEQ ID NO: 49. Ck2.3C, конъюгированный с E10 (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalEEEEEEEEEE)
[00163] SEQ ID NO: 50. Ck2.3C, конъюгированный с E20 (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE)
[00164] SEQ ID NO: 51. Ck2.3C, конъюгированный с AAD10 (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalXXXXXXXXXX, где X представляет собой адипиновую кислоту).
[00165] SEQ ID NO: 52. Ck2.3C, конъюгированный с SDSDD (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalSDSDD)
[00166] SEQ ID NO: 53. Ck2.3C, конъюгированный с (DSS)6 (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalDSSDSSDSSDSSDSSDSS)
[00167] SEQ ID NO: 54. ODPC, конъюгированный с D10 (DVDVPDGRGDSLAYGCMalDDDDDDDDDD)
[00168] SEQ ID NO: 55. ODPC, конъюгированный с D20 (DVDVPDGRGDSLAYGCMalDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD)
[00169] SEQ ID NO: 56. ODPC, конъюгированный с E10 (DVDVPDGRGDSLAYGCMalEEEEEEEEEE)
[00170] SEQ ID NO: 57. ODPC, конъюгированный с E20 (DVDVPDGRGDSLAYGCMalEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE)
[00171] SEQ ID NO: 58. ODPC, конъюгированный с AAD10 (DVDVPDGRGDSLAYGCMalXXXXXXXXXX, где X представляет собой адипиновую кислоту)
[00172] SEQ ID NO: 59. ODPC, конъюгированный с SDSDD (DVDVPDGRGDSLAYGCMalSDSDD).
[00173] SEQ ID NO: 60. ODPC, конъюгированный с (DSS)6 (DVDVPDGRGDSLAYGCMalDSSDSSDSSDSSDSSDSS)
[00174] SEQ ID NO: 61. P4C, конъюгированный с D10 (KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalDDDDDDDDDD)
[00175] SEQ ID NO: 62. P4C, конъюгированный с D20 (KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD)
[00176] SEQ ID NO: 63. P4C, конъюгированный с E10 (KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalEEEEEEEEEE)
[00177] SEQ ID NO: 64. P4C, конъюгированный с E20 (KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE)
[00178] SEQ ID NO: 65. P4C, конъюгированный с AAD10 (KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalXXXXXXXXXX, где X представляет собой адипиновую кислоту)
[00179] SEQ ID NO: 66. P4C, конъюгированный с SDSDD (KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalSDSDD).
[00180] SEQ ID NO: 67. P4C, конъюгированный с (DSS)6 (KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalDSSDSSDSSDSSDSSDSS)
[00181] SEQ ID NO: 68. Разветвленный D4 Y (YPegKDDDDDDDD, где Peg представляет собой полиэтиленгликоль)
[00182] SEQ ID NO: 69. Разветвленный D8 Y (YPegKDDDDDDDDDDDDDDDD, где Peg представляет собой полиэтиленгликоль)
[00183] SEQ ID NO: 70. F109C, конъюгированный с разветвленным D10 (YKRSRYTCMalK(DDDDDDDDDD)2.
[00184] SEQ ID NO: 71. PACAPC, конъюгированный с разветвленным D10 (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalK(DDDDDDDDDD)2
[00185] SEQ ID NO: 72. CTCC, конъюгированный с разветвленным D10 (YIAGVGGEKSGGFYCMalK(DDDDDDDDDD)2
[00186] SEQ ID NO: 73. Ck2.3C, конъюгированный с разветвленным D10 (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalK(DDDDDDDDDD)2
[00187] SEQ ID NO: 74. ODPC, конъюгированный с разветвленным D10 (DVDVPDGRGDSLAYGCMalK(DDDDDDDDDD)2
[00188] SEQ ID NO: 75. P4C, конъюгированный с разветвленным D10 (KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalK(DDDDDDDDDD)2
[00189] SEQ ID NO: 76. F109C, конъюгированный с разветвленным E10 (YKRSRYTCMalK(EEEEEEEEEE)2
[00190] SEQ ID NO: 77. PACAPC, конъюгированный с разветвленным E10 (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalK(EEEEEEEEEE)2
[00191] SEQ ID NO: 78. CTCC, конъюгированный с разветвленным E10 (YIAGVGGEKSGGFYCMalK(EEEEEEEEEE)2
[00192] SEQ ID NO: 79. Ck2.3C, конъюгированный с разветвленным E10 (RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalK(EEEEEEEEEE)2
[00193] SEQ ID NO: 80. ODPC, конъюгированный с разветвленным E10 (DVDVPDGRGDSLAYGCMalK(EEEEEEEEEE)2
[00194] SEQ ID NO: 81. P4C, конъюгированный с разветвленным E10 (KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalK(EEEEEEEEEE)2
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[00195] Тогда как идеи настоящего изобретения проиллюстрированы и описаны подробно на фигурах и в описании, результаты на фигурах и их описание следует считать примерным и неограничивающим по характеру; ясно, что показаны и описаны только иллюстративные варианты осуществления и что все изменения и модификации, которые попадают в пределы сущности настоящего описания, должны быть защищены.
[00196] Если не определено иначе, научная и технологическая номенклатуры имеет те же значения, как обычно ясно специалисту в области техники, к которой относится настоящее описание.
[00197] Как применяют в настоящем изобретении, если явно не указано иное или явно подразумевается иное, термин 'приблизительно' относится к диапазону величин плюс или минус 10 процентов, например, приблизительно 1,0 включает величины от 0,9 до 1,1.
[00198] Термин, "лечение", как применяют в настоящем изобретении, если не указано или подразумевается иное, включает введение человеческому или животному пациенту, по меньшей мере, одной дозы соединения, лечение включает предотвращение или уменьшение вероятности и/или тяжести, по меньшей мере, одного заболевания, а также ограничение продолжительности заболевания или тяжести заболевания, лечение может приводить или не приводить в результате к излечению заболевания.
[00199] Как применяют в настоящем изобретении, если явно не указано иное или явно подразумевается иное, термины "терапевтически эффективные дозы", "терапевтически эффективные количества" и подобные относятся к части соединения, которая обладает общим положительным эффектом на здоровье и самочувствие человека или другого животного. Терапевтические эффекты могут включать увеличение продолжительности жизни, улучшение качества жизни и подобные. Данные эффекты могут также включать сниженную подверженность к развитию заболевания или ухудшению здоровья или самочувствия. Эффекты могут возникать немедленно после одной дозы и/или лечения, или они могут кумулятивно проявляться после серии доз и/или лечений. "Терапевтически эффективное количество", в общем, обозначает количество, которое, при введении субъекту или животному для лечения заболевания, является достаточным для достижения требуемой степени лечения заболевания.
[00200] Как применяют в настоящем изобретении, каждый из "ингибирования" или "ингибирующей активности" включает полное или частичное снижение активности или эффекта фермента или всего и/или части пути, который включает фермент, на который ингибитор воздействует непосредственно или опосредованно, или пути, на который воздействует непосредственно или опосредованно активность фермента, на который ингибитор воздействует непосредственно или опосредованно.
[00201] Как применяют в настоящем изобретении, термин "фармацевтически приемлемая соль" определяют как соль, в которой сохраняется требуемая биологическая активность ингибитора и которая проявляет минимум нежелательных токсикологических эффектов. Неограничивающие примеры данной соли представляют собой (a) соли присоединения кислоты, образованные неорганическими кислотами (например, хлористоводородной кислотой, бромистоводородной кислотой, серной кислотой, фосфорной кислотой, азотной кислотой и подобными), и соли, образованные органическими кислотами (такими как, например, уксусная кислота, щавелевая кислота, винная кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, аскорбиновая кислота, бензойная кислота, дубильная кислота, пальмитиновая кислота, полиглютаминовая кислота, нафталинсульфоновая кислота, нафталиндисульфоновая кислота, полигалактуроновая кислота и подобные); (b) соли присоединения основания, образованные с ионами металлов, такими как цинк, кальций, висмут, барий, магний, алюминий, медь, кобальт, никель, кадмий, натрий, калий и подобные, или с катионами, образованными из аммиака, N,N-дибензилэтилендиамина, D-глюкозамина, тетраэтиламмония или этилендиамина; или (c) комбинации (a) и (b); например, танната цинка или подобных.
[00202] Фармацевтически приемлемые соли включают соли соединений настоящего изобретения, которые являются безопасными и эффективными для применения на млекопитающих и которые обладают требуемой терапевтической активностью. Фармацевтически приемлемые соли включают соли кислых или основных групп, присутствующих в соединениях настоящего изобретения. Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты включают, но не ограничиваются, гидрохлоридную, гидробромидую, гидройодидую, нитратную, сульфатную, бисульфатную, фосфатную, кислую фосфатную, изоникотинатную, ацетатную, лактатную, салицилатную, цитратную, тартратную, пантотенатную, битартратную, аскорбатную, сукцинатную, малеатную, гентизинатную, фумаратную, глюконатную, глюкаронатную, сахаратную, формиатную, бензоатную, глутаматную, метансульфонатную, этансульфонатную, бензолсульфонатную, п-толуолсульфонатную и памоатную (т.е. 1,1'-метиленбис(2-гидрокси-3-нафтоатную)) соли. Определенные соединения настоящего изобретения могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с различными аминокислотами. Подходящие основные соли включают, но не ограничиваются, соли алюминия, кальция, лития, магния, цинка, диэтаноламина. Что касается дополнительной информации о некоторых фармацевтически приемлемых солях, которые можно применять на практике настоящего изобретения, смотрите, пожалуйста, обзоры, такие как Berge, et al., 66 J. PHARM. SCI. 1-19 (1977), Haynes, et al, J. Pharma. Sci., Vol. 94, No. 10, Oct. 2005, pgs. 2111-2120 и смотрите, например, P. Stahl, et al., Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, et al., ʺPharmaceutical Salts,ʺ Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January 1977.
[00203] Фармацевтический состав: соединения настоящего изобретения и их соли можно формулировать в виде фармацевтических композиций для введения. Данные фармацевтические композиции и способы их получения являются известными в данной области техники и для людей и для млекопитающих, отличных от человека. Смотри, например, remington: The Science and practice of pharmacy, (A. Gennaro, et al., eds., 19th ed., Mack Publishing Co., 1995). Составы можно водить различными способами, включая пероральное введение, парентеральное введение, такое как инъекция (внутримышечная, подкожная, внутривенная, внутрибрюшинная); трансдермальное введение, такое как окунание, распыление, купание, стирка, обливание, нанесение пятен, присыпание, или подобные Дополнительные активные ингредиенты можно включать в состав, содержащий соединение настоящего изобретения или его соль.
[00204] Фармацевтические составы настоящего изобретения включают фармацевтические составы, пригодные для перорального, парентерального (включая подкожное, внутрикожное, внутримышечное и внутривенное) и ректального введения. Составы можно предоставлять в виде стандартной лекарственной формы и можно получать любым из способов, хорошо известных в области фармацевтики. Все способы включают стадию смешения активного ингредиента, т.е. соединения или соли настоящего изобретения, с носителем. В общем, составы получают однородным и тщательным смешением активного ингредиента с жидким носителем или мелкодисперсным твердым носителем или обоими, и затем, при необходимости, получая ассоциированную смесь в виде требуемого состава.
[00205] Фармацевтические составы настоящего изобретения, пригодные для перорального введения, можно предоставлять в виде дискретных единиц, таких как капсулы, саше, таблетки или постилки, причем каждая содержит заранее определенное количество активного ингредиента; в виде порошка или гранул; в виде раствора или суспензии в водной жидкости или неводной жидкости, такой как сироп, эликсир или доза жидкого лекарства, или в виде эмульсии масло в воде или эмульсии вода в масле. Состав может также представлять собой болюс, электуарий или пасту.
[00206] Фармацевтические составы настоящего изобретения, пригодные для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъецируемые растворы, и могут также содержать антиоксидант, буфер, бактериостат и раствор, который делает состав изотоничным крови реципиента, и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать, например, суспендирующий агент и загуститель. Составы можно предоставлять в виде контейнеров с одной или несколькими дозами, и можно хранить в лиофилизированном состоянии, требующем добавления стерильного жидкого носителя перед применением.
[00207] Фармацевтически приемлемый носитель: фармацевтически приемлемый носитель, если не указано или подразумевается иное, применяют в настоящем изобретении для описания любого ингредиента, отличного от активного компонента (компонентов), который можно включать в состав. Выбор носителя в большой степени будет зависеть от факторов, таких как конкретный путь введения, эффект носителя на растворимость и стабильность, и свойства лекарственной формы.
[00208] Таблетку можно получить прессованием или формованием активного ингредиента с фармацевтически приемлемым носителем. Прессованные таблетки можно получить прессованием в подходящей машине активного ингредиента в свободнотекущей форме, такой как порошок или гранулы, в смеси, например, со связующим, инертным разбавителем, смазывающим агентом, разрыхлителем и/или поверхностно-активным агентом. Формованные таблетки можно получить формованием в подходящей машине смеси порошкообразного активного ингредиента, смоченного инертным жидким разбавителем. Таблетки необязательно можно покрывать или наносить на них риски и можно формулировать таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение активный ингредиент
[00209] Как применяют в настоящем изобретении, "заболевания, связанные с костями" включает, но не ограничиваются, остеопению, остеопороз, ревматоидный артрит, гематологическое заболевание костей, аутоиммунную реакцию, отторжение трансплантата, рак кости и/или перелом кости.
[00210] Как описано в настоящем изобретении, "показатель терапевтического сродства" представляет собой диапазон сродства терапевтического лиганда, обычно выражаемый как IC50 терапевтического лиганда или его агонистов, вызывающий опосредованный рецептором сигнальный каскад (событие), достигая требуемого терапевтического эффекта. Например, если лиганд имеет IC50 4 нМ-15 нМ для запуска реакции, опосредованной рецептором, сопряженным с G-белком, который достигает терапевтический эффект лиганда, то лиганд имеет показатель терапевтического сродства IC50 от приблизительно 4 нМ до приблизительно 15 нМ. Показатель терапевтического сродства может усложняться, когда терапевтический лиганд имеет несколько режимов действия для достижения его различных терапевтических эффектов. Например, если рецептор для терапевтического лиганда имеет две различные конформации, каждая конформация может иметь отличный показатель терапевтического сродства.
[00211] Как применяют в настоящем изобретении, если явно не указано иное или явно подразумевается иное, термины "PTHrP1-46D10", "PTHrP D10" и "таргетный PTHrP" можно применять взаимозаменяемо для определения одного и того же соединения.
[00212] Как применяют в настоящем изобретении, если явно не указано иное или явно подразумевается иное, термины "PTHrP1-34", "PTHrP", "свободный PTHrP" и "нетаргетный PTHrP" можно применять взаимозаменяемо для определения одного и того же соединения.
[00213] Остеопороз определяют как низкая костная минеральная плотность и/или плохая микроархитектоника костей, связанная с повышенным риском переломов. Данное хроническое заболевание в основном поражает женщин после менопаузы, но также может поражать пожилых мужчин. Данное заболевание все чаще рассматривают как возрастное заболевание. Скелетные изменения, наблюдаемые у пациентов с остеопорозом, являются следствием относительного дефицита остеогенеза относительно резорбции кости. Терапия остеопороза в основном основывается на антирезорбтивных лекарственных средствах. Один современный альтернативный терапевтический подход для лечения остеопороза основан на дробном введении паратиреоидного гормона (PTH). PTH секретируется в основном клетками паращитовидной железы в виде полипептида, являющегося прогормоном, который содержит 84 аминокислоты. Эффективное гормон-рецепторное взаимодействие требует только 34-N-концевые аминокислоты. PTH действует, увеличивая концентрацию ионов кальция (Ca2+) в крови. PTH по существу действует, увеличивая концентрацию кальция в крови действием на рецептор 1 паратиреоидного гормона, который присутствует в большом количестве в костях и почках. Белок hPTH-(1-34) кристаллизуется в виде слегка изогнутого длинного спирального димера. Анализ показал, что вытянутая спиральная конформация hPTH-(1-34), вероятно, представляет собой биоактивную конформацию. N-концевой фрагмент (1-34 паратиреоидного гормона (PTH) кристаллизуется, и структура определена с 0,9
Figure 00000001
разрешением.
[00214] Анаболизм костей, вызываемый PTH терапией, в основном происходит из-за способности PTH усиливать остеобластогенез и выживаемость остеобластов. PTH и PTH-родственный белок (PTHrP)-распространенный локальный фактор в кости-взаимодействуют с обычным рецептором PTH 1 типа со схожим сродством в остеобластах. Исследования в основном в моделях остеопороза на грызунах и ограниченные данные по женщинам после менопаузы предполагают, что N-концевые PTHrP пептиды можно рассматривать в качестве перспективной костной анаболической терапии.
[00215] Рецептор паратиреоидного гормона/родственного паратиреоидному гормону пептида, также известный как рецептор паратиреоидного гормона 1 (PTHR1), представляет собой белок, который у людей кодируется PTHR1 геном. PTHR1 функционирует как рецептор для паратиреоидного гормона (PTH) и для родственного паратиреоидному гормону белка (PTHrP).
[00216] PTHR1 относится к семейству B рецепторов, сопряженных с G-белком (GPCR), который экспрессируется в основном в костях, почках и хрящах, но также в других тканях, включая васкулатуру и некоторые развивающиеся органы.
[00217] Обычно считают, что N-концевые фрагменты, состоящие из первых 34 остатков PTH и PTHrP, содержат ключевые функциональные детерминанты рецептоного взаимодействия, присутствующие в соответствующих полноразмерных зрелых полипептидных цепях, которые также содержат 84 и 141 аминокислотных остатка, соответственно. PTH и PTHrP отличаются от других пептидных лигандов семейства B тем, что они содержат удлиненные C-концевые сегменты. Биологические роли данных сегментов остаются неясными, хотя были идентифицированы некоторые функциональные ответы, такие как способность фрагментов, соответствующих C-концевой части PTH, индуцировать проапоптотические эффекты в остеоцитах 17, и фрагментов, охватывающих среднюю область PTHrP
[00218] Анализы на связывание с применением мембранных фракций, разработанные для оценки сродства лигандов к PTHR1 в конформациях, образованных при конденсации с гетеродимерным G белком (RG конформация) или когда PTHR1 не конденсирован с G белком (R0 конформация), обеспечили предварительную наводящую информацию о том, что структурно различные PTH и PTHrP аналоги могут связываться с измененным сродством с различными конформационными состояниями рецептора. Прямые сравнительные исследования PTH(1-34) и PTHrP(1-36) показали, что хотя данные два пептида сохраняют аналогичное сродство к RG состоянию, они не имеют одинакового сродства к R0 состоянию, причем PTH(1-34) проявляет гораздо большее сродство к R0, чем PTHrP(1-36).
[00219] Абалопаратид, PTHrP и PTH обладают высокой гомологией по первым 13 аминокислотом каждого белка. Поскольку каждое активное анаболическое лекарственное средство содержит пептид, который запускает передачу сигнала паратиреоидным гормоном и включает или содержит минимальную гомологию по остаткам 2, 3, 4, 6, 7, 9, 12 и 13, варианты анаболических пептидов можно комбинировать с различными линкерами, необязательно спейсерами и лигандами, осуществляющими направленную доставку, описанными в данном описании, осуществляя направленную доставку агента для лечения перелома кости.
[00220] Функциональные последствия данной измененной селективности обычно проявлялись в цАМФ анализах. PTH(1-34) и PTHrP(1-36) обладали одинаковой эффективностью в общепринятых цАМФ анализах зависимости эффекта от дозы (согласно их аналогичному сродству к RG состоянию и GαS-опосредованному механизму внутриклеточного синтеза цАМФ) Однако продолжительность реакций, вызванных данными двумя лигандами (оцененная, применяя анализ зависимости вымывания от времени) была различной, причем PTH(1-34) показал более длительный ответ, чем PTHrP(1-36). В общем, продолжительность цАМФ реакций, наблюдаемая в исследованиях на клетках, коррелирует с различным сродством, которое PTH(1-34) и PTHrP(1-36) проявляют к R0 состоянию, а не с их сродством к RG состоянию, как оценено в анализах с применением мембранных фракций. Поскольку R0 состояние не сопряжено с G белком и, следовательно, является неактивным относительно цАМФ передачи сигнала, имеется вероятность того, что хотя R0 комплексы являются достаточно стабильными по времени, они могут изомеризоваться до функционального сопряженного с G-белком состояния.
[00221] Одну ключевую структурную детерминанту R0 по сравнению с RG сродством, которая различает PTH и PTHrP лиганды, можно свести к идентичности остатка в положении 5; таким образом, замена His5 в PTHrP(1-36) соответствующим изолейцином PTH значительно увеличивает сродство к R0 и увеличивает продолжительность цАМФ сигнального ответа, вызванного в целевых клетках.
[00222] В настоящее время, PTH, PTHrP или их агонисты испытывают на их местное или системное введение для получения анаболического агента для лечения любого перелома кости. Однако данные испытания показали, что есть побочные эффекты применения данных белков. Например, местное нанесение PTH или PTHrP требует обнажения кости и приводило в результате к увеличенному времени заживления, боли и дискомфорту, и даже возможности заражения. Альтернативно, системное применение PTH и PTHrP склонно проявлять нецелевые эффекты, включая повышение уровня кальция в крови. Следовательно, разработка системы доставки анаболического агента к кости, которая может уменьшать вышеупомянутые побочные эффекты, является желательной.
[00223] Система доставки лекарственного средства, содержащая лекарственное средство, линкер и лиганд для направленной доставки, описана в настоящем изобретении. Некоторые аспекты настоящего описания обеспечивают соединения для направленного воздействия и лечения переломов костей. Данные соединения могут содержать, по меньшей мере, три различных структурных/функциональных области: эффективный анаболический пептид или любой агонист, который задействует рецептор паратиреоидного гормона 1 (PTHR1) и последующий сигнальный каскад, который приводит к выздоровлению; линкер с или без спейсера, обеспечивающий гибкий фрагмент для анаболического пептида для достижения места перелома кости; и лиганд для направленной доставки, который обычно содержит отрицательно заряженный олигопептид или его эквивалент, направляющий соединение к месту перелома и специфически связывающийся с гидроксиапатитом и/или голой костью. В одном конкретном аспекте, лекарственное средство может представлять собой первые 34 аминокислоты в родственном паратиреоидному гормону пептиде (PTHrP). Линкер может включать аминокислоты 35-46 PTHrP, которые отделяют лекарственное средство от лиганда для направленной доставки и также обеспечивают свободу по выбору длины лекарственного средства, поскольку некоторые полагают, что аминокислоты 35-40 могут увеличивать сродство к лиганду. Наконец, лиганд для направленной доставки может содержать декапептид аспарагиновой кислоты, хотя другие полимеры, функционализированные карбоксильными группами, вероятно, связываются аналогичным образом (например, D или L глютаминовая кислота, D или L аспарагиновая кислота и аминогександионовая кислота в различных комбинациях и порядке).
[00224] Пептид, содержащий SEQ ID NO:3 (абалопаратид 1-34) с остатком 29 метил Ala и аминированным 34 остатком может служить в качестве мощного активного анаболического агента без дополнительного линкера или лиганда для направленной доставки для лечения перелома кости.
[00225] Можно предположить, что PTH и PTHrP могут иметь варианты, обладающие агонистической активностью PTHR1, и их можно применять вместо PTH или PTHrP для получения и достижения терапевтического эффекта заживления перелома кости. Поскольку каждое активное анаболическое лекарственное средство содержит пептид, который запускает передачу сигнала паратиреоидным гормоном и включает или содержит минимальную гомологию по остаткам 2, 3, 4, 6, 7, 9, 12 и 13, предложенные варианты анаболического пептида можно комбинировать с различными линкерами, необязательно спейсерами и лигандами, осуществляющими направленную достаку, описанными в настоящем изобретении, осуществляя направленную доставку агента для заживления перелома кости. Например, консервативные замещения или модификации по остаткам 1, 5, 10, 11 или 14-34 для PTH или PTHrP вместе с любыми комбинациями линкерной последовательности и лиганда для направленной доставки, описанных в настоящем изобретении, предполагаются для защиты в данном изобретении.
[00226] В одном аспекте настоящего изобретения, лиганд для направленной доставки включает кислый олигопептид, содержащий множество остатков аспарагиновой кислоты. Количество остатков D или L аспарагиновой кислоты может составлять от приблизительно 4 до приблизительно 10, или от приблизительно 10 до приблизительно 20 остатки. Олигопептид может быть линейным, или он может быть разветвленным. В одном иллюстративном варианте осуществления, остаток лизина применяют в качестве точки разветвления. В другом аспекте настоящего изобретения, аспарагиновая кислота может быть l-аспарагиновой кислотой или d-аспарагиновой кислотой, или смесью обоих энантиомеров. Преимущество включения d-аспарагиновой кислоты в олигопептид заключается в том, что он является менее подверженным протеолитическому расщеплению по сравнению с олигопептидом, содержащим только природную L-аспарагиновую кислоту.
[00227] В другом аспекте настоящего изобретения, кислый олигопептид может содержать не более 20 остатков L или D-глютаминовой кислоты. В еще другом аспекте настоящего изобретения, кислый олигопептид может быть комбинацией не более чем 20 остатков L или D-аспарагиновой кислоты, или L или D-глютаминовой кислоты.
[00228] В одном аспекте настоящего изобретения, лиганд для направленной доставки может представлять собой полифосфат или, по меньшей мере, один бисфосфат. В еще другом аспекте настоящего изобретения, лиганд для направленной доставки может представлять собой пептид, являющийся миметиком коллагена. Данный пептид, являющийся миметиком коллагена, встраивается в дефектные фибриллы коллагена в месте перелома кости. В одном аспекте настоящего изобретения, пептид, являющийся миметиком коллагена, может иметь структуру [Gly-Pro-Hyp]9-OH.
[00229] В одном аспекте настоящего изобретения, лиганд для направленной доставки может представлять собой аминогександионовую кислоту (альфа-аминоадипиновую кислоту) или ее производные с более чем одним углеродом между остовом и кислотой. Например, лиганд для направленной доставки может представлять собой 2-аминомалоновую кислоту.
[00230] В одном аспекте настоящего изобретения, соединение для направленной доставки дополнительно содержит, по меньшей мере, один спейсер, содержащий PEG (полиэтиленгликоль).
[00231] Между активным анаболическим соединением, таким как PTH или PTHrP или их соответствующими агонистами и лигандом для направленной доставки, может быть гибкий фрагмент линкерной последовательности. В одном аспекте настоящего изобретения, линкер может представлять собой любую часть достройки PTH или активного фрагмента PTHrP, а именно из остатков 35-84 PTH или 35-173 PTHrP. Данная достройка активного фрагмента является обычно невысвобождаемой, и линкерная последовательность может представлять собой любую часть достройки или комбинацию различных частей достройки.
[00232] В другом аспекте настоящего изобретения, линкер может представлять собой гидролизуемый субстрат, чувствительный, по меньшей мере, к одной распространенной молекуле, продуцируемой в остеокластах при ремоделировании костной ткани. Например, катепсин K представляет собой молекулу, которая синтезируется в остеокластах при ремоделировании костной ткани. Линкерная последовательность, содержащая Gly-Gly-Pro-Nle (где Nle представляет собой норлейцин, лейцин, изолейцин или любой другой экивалент гидрофобной модификации) может служить в качестве субстрата катепсина K. После того как таргетное соединение доставлено в место остекластов, катепсин K может гидролизовать линкер и высвобождать активное анаболическое соединение для работы по заживлению кости.
[00233] Еще другой гидролизуемый линкер может содержать дисульфидные связи, и он может высвобождаться глютатионом в остеокласте.
[00234] Еще другой гидролиуемый линкер может представлять собой расщепляемый эфир.
[00235] Данные признаки настоящего описания дополнительно продемонстрированы следующими примерами.
МАТЕРИАЛЫ И СПОСОБЫ
Синтез
[00236] Пептиды получали или твердофазным синтезом пептидом или рекомбинантой экспрессией.
[00237] Твердофазный синтез пептидов
[00238] Вкратце, в пробирку для твердофазного синтеза пептидов, через которую можно барботировать азот, загружали 2-хлотритильную смолу (1,11 ммоль/г) при 0,4 ммоль/г с первой аминокислотой на ночь в DCM и DIPEA. Затем, смолу кэппировали четырьмя 5 мл промывками DCM/MeOH/DIPEA (17:2:1), с последующими тремя промывками DCM и DMF, соответственно. После каждой реакции конденсации аминокислоты, Fmoc-группы удалял тремя 10 мин инкубированиями с 20% (об/об) пиперидина в DMF. Затем смолу промывали 3× DMF перед присоединением следующей аминокислоты. Каждую аминокислоту добавляли в 5-кратном избытке с HBTU/DIPEA. После завершения синтеза, пептид отщепляли, применяя 95:2,5:2,5 трифторуксусная кислота:вода:триизопропилсилан. Пептиды, содержащие цистеин, отщепляли, применяя 95:2,5:2,5 и 10 кратный избыток TCEP трифторуксусной кислоты:триизопропилсилана:воды:TCEP (трис(2-карбоксиэтил)фосфина).
[00239] Экспрессия рекомбинантного белка
[00240] Получали устойчивые к ампициллину плазмиды, содержащие T7 промотер, последовательность, кодирующую тиоредоксин, HisTag последовательность, остаток триптофана и последовательность, кодирующую пептид. Компетентные клетки трансформировали плазмидами и наносили в чашки с агаром, содержащие ампициллин. Единичные колонии отбирали и размножали в течение ночи в LB среде с ампициллином (100 мкл/мл) при 37C. Затем, компетентные клетки размножали дополнительно в 1 л LB среды с ампициллином (100 мкл/мл) в течение 15 часов. Через 15 часов добавляли IPTG, получая конечную концентрацию 1 мМ, и среду встряхивали при 180 об/мин при 37C в течение 5 часов. Затем, клетки осаждали гранулированием и лизировали обработкой ультразвуком в 20 мМ Tris-HCL при pH8, содержащем 6M гуанидин HCl. Затем, слитый белок выделяли элюированием с HisTag, применяя имидазол. Фракции, содержащие слитый белок, подвергали диализу и лиофилизировали. Протеолитическое расщепление проводили, применяя способ с применением йодизобензойной кислоты. Конечный пептид очищали, применяя анионообменную колонку, подвергали диализу и лиофилизировали для последующего применения.
[00241] Характеризация
[00242] Молекулярные веса пептидов подтверждали, применяя HPLC/MS.
[00243] Создание перелома у мышей
[00244] Все исследования на животных осуществляли согласно протоколу комитета по содержанию и применению лабораторных животных университета Пердью и осуществляли, как описано в литературе. CD4 швейцарские мыши (30-35 г), полученные из Harlan laboratories, применяли для данных экспериментов. Стабилизированный перелом бедренной кости создавали в асептических условиях при анестезии изофлураном. Кожу вокруг колена сбривали и очищали вначале салфеткой, смоченной спиртом, затем раствором бетадина. Разрез кожи выполняли медиально парапетеллярно. Затем, надколенник смещали, и надрез делали под надколенником. Иглу 25 калибра по Гейджу применяли для расширения интрамедуллярного канала. Затем, вводили блокирующий штифт 22 калибра по Гейджу (где оба конца сплющены для придания ротационной стабильности). Рану зашивали, и затем кость переламывали, применяя трехточечное изгибающее устройство, которое имеет встроенный упор для предотвращения избыточной травмы. Подкожный бупренорфин (0,05-0,1 мг/кг) вводили во время хирургической операции, с последующей дозой каждые 12 часов в течение 3-7 дней после операции.
[00245] Дозирование:
[00246] Мышам вводили подкожно ежедневно дозу 31 нмоль/кг пептида или соляного раствора в качестве контроля. Первую дозу вводили через 6 часов после перелома и продолжали введение в течение всего исследования, причем последнюю дозу вводили за день до эвтаназии.
[00247] Анализ плотности кости
[00248] Scanco μCT 40 применяли для получения КТ изображений и данных для костей. Кости сканировали при погружении в ПБС для предотвращения обезвоживания. Программное обеспечение ImageJ применяли для анализа изображений на плотность костей, суммарный объем (TV), относительный объем кости (BV/TV), трабекулярную толщину (Tb.Th) и трабекулярное пространство (Tb.Sp). Искомые объемы включали каллюс, и кортикальную и трабекулярную кость между точками на кортикальной кости в месте перелома.
[00249] Статистический анализ проводили, применяя программное обеспечение Prism GraphPad. Данные представлены в результатах в виде среднего ± среднее квадратичное отклонение среднего (SEM). Непарный критерий Стьюдента применяли для определения статистической значимости, причем P-величину меньше чем 0,05 считали статистической значимой.
ПРИМЕР 1. PTHrP система доставки для направленного заживления перелома кости
[00250] В данном примере получали направленное на перелом фармацевтическое средство, содержащее лекарственное средство, линкер и лиганд для направленной доставки.
[00251] Последовательность фармацевтического средства приведена в SEQ ID NO:10, которая содержит аминокислотные остатки 1-46 PTHrP, с последующими 10 аспарагиновыми кислотами. Как описано выше, остатки 1-34 представляют собой активную часть PTHrP, остатки 35-46 представляют собой линкерную часть предложенного фармацевтического средства для заживления перелома кости, и 10-аспарагиновых кислот представляют собой лиганд для направленной доставки.
[00252] Закрытые переломы бедра получали в трех группах мышей. Мышам дозировали ежедневно в течение 4 недель или таргетный PTHrP (31 нмоль/кг/день), PTHrP 1-34 (31 нмоль/кг/день) или соляной раствор. В конце исследования, мышей подвергали эвтаназии CO2, бедренные кости собирали, и плотности костей определяли МикроКТ.
[00253] Как показано на фигуре 1, таргетная версия PTHrP увеличивала плотности костей в районе перелома значительно больше, чем свободный PTHrP и соляной раствор. Это указывает на то, что стратегия с применением эффективного анаболического агента, соединенного с последовательностью лиганда для направленной доставки, может работать для заживления перелома кости.
[00254] Другой способ показать процесс заживления кости заключается в измерении данных по трабекулярному пространству, полученных в результате микроКТ. Как показано на фигуре 2, анализировали выборку 100 КТ снимков (срезы) для каждого каллюса. Стопку снимков выбирали в районе перелома, где каллюс был наибольшим. Слева направо таргетный PTHrP (PTHrP 1-46, с последующими 10 аспарагиновыми кислотами) и соляной раствор в качестве контроля. Таргетный PTHrP имеет статистически меньший зазор, чем соляной раствор в качестве контроля.
[00255] По сравнению с традиционным введением отдельного анаболического агента, который обычно приводит к высоким концентрациям кальция в крови, применение настоящего изобретения обеспечивает альтернативу и является лучшим при необходимости наносить местно агент для заживления перелома кости. Это снижает риск высокой концентрации кальция в крови или необходимость обнажать кость, связанную с заражением, и т.д.
[00256] Предполагается, что различные консервативные замещения первых 34 аминокислот будут давать аналогичную или большую плотность кости у мышей с переломом.
[00257] Также предполагается, что применение других частей последовательностей достройки PTHrP вне 1-34 могут давать аналогичное или лучшее соединение с лигандом для направленной доставки из 10 аспарагиновых кислот.
[00258] Кроме того, предполагается применение любого линкера и лиганда для направленной доставки, описанных в настоящем изобретении. Например, линкер может представлять собой варианты нативного пептида PTH последовательности, или любой чувствительный к катепсину K линкер, такой как Gly-Gly-Pro-Nle, где Nle представляет собой норлейцин или другую гидрофобную аминокислоту, такую как лейцин или изолейцин. Линкер может представлять собой дисульфидный линкер, который расщепляется в восстановительных условиях. Глутатион обычно выделяется при определенных типах повреждений и может восстанавливать дисульфидные связи. Предполагается, что дисульфидный линкер может увеличивать эффективность анаболического агента. Линкер может также представлять собой эфир, который гидролизуется и высвобождается, увеличивая эффективность заживления. Специфические лиганды обычно представляют собой кислые олигопептидные цепи, содержащие 4 или более кислых аминокислотных остатков, и они могут связываться с гидроксиапатитом и/или голой костью. Данные кислые аминокислотные остатки могут быть любыми из аспарагиновой или глютаминовой кислот или их комбинации. В некоторых случаях, кислый олигопептид может быть разветвленным, по меньшей мере, по одному лизину, увеличивая накопление лекарственного средства в месте перелома. Разветвленные цепи могут быть множественными разветвлениями, такими как 2, 3, или 4 и т.д.
[00259] Другой вариант лиганда для направленной доставки представляет собой один или более бисфосфатов, т.е. полибисфосфат. Пептид, являющийся миметиком коллагена, с последовательностью [Gly-Pro-Hyp]9-OH.
[00260] Еще другой вариант лиганда для направленной доставки представляет собой аминогександионовую кислоту (альфа-аминоадипиновую кислоту) или ее производные с более чем одним углеродом между остовом и кислотой. Например, 2-миномалоновую кислоту можно применять в качестве лиганда для направленной доставки для PTHrP или его вариантов.
[00261] Спейсер, такой как PEG (полиэтиленгликоль), можно присоединять к получаемой таргетной системе доставки лекарственного срдества, снижая вероятность нежелательного воздействия лиганда для направленной доставки на анаболическую активность.
[00262] Для выбора различных комбинаций PTHrP вариант-линкер-лиганд для направленной доставки, исследование восстановления плотности кости можно осуществлять аналогично тому, как описано в данном примере. Конкретно, полученные лекарственное средство-линкер-лиганд для направленной доставки сравнивают с самим PTHrP вариантом и соляным раствором на их влияние на плотность костей в районе перелома. Предполагается, что таргетный вариант PTHrP вариантов будет увеличивать плотность костей в районе перелома значительно больше, чем это делает свободный PTHrP вариант и соляной раствор.
ПРИМЕР 2. Различные другие комбинации анаболического лекарственного средства с вариантами линкера и лигандами, осуществляющими направленную доставку, для обеспечения направленной доставки лекарственного средства к перелому кости для заживления
[00263] В данном примере, первые 34 аминокислоты PTH получают с подходящим линкером, описанным в настоящем изобретении, и подходящим лигандом для направленной доставки. Подобно примеру 1, линкер может представлять собой любой сегмент достройки активного PTH, включая остатки 35-84, или другие линкеры, описанные в примере 1. Лиганд для направленной доставки может быть любым из линкеров, описанных в примере 1. Как показано на фигуре 3, линкер представляет собой аминокислотные остатки 36-46, и лиганд для направленной доставки представляет собой 10 аспарагиновых кислот. Полученные лекарственное средство-линкер-лиганд для направленной доставки (PTH 1-46D10, SEQ ID NO:11) можно сравнить с самим вариантом PTH и соляным раствором на их эффекты на плотность костей в районе перелома. Предполагается, что таргетная версия PTH будет увеличивать плотность костей в районе перелома значительно больше, чем свободный вариант PTH и соляной раствор. Фигура 3 показывает, что таргетный PTH 1-46D10 статистически делает кость более плотной, чем соляной раствор в качестве контроля.
[00264] Не исключена вероятность того, что некоторые другие эффективные анаболические лекарственные средства можно применять для замены PTH (1-34) в данном примере и достижения заживления перелома кости.
ПРИМЕР 3. Абалопаратид 1-34 в качестве отдельно стоящего агента для заживления перелома кости
[00265] В данном примере, испытывали абалопаратид 1-34 с модифицированными остатками по 29 в виде метил Ala и по 34 в виде аминированнного Ala (SEQ ID NO:3). Абалопаратид испытывали при лечении остеопороза для предотвращения возникновения переломов кости. Испытывается его способность заживлять реальные переломы, что представляет собой отличный процесс. Конечно, соединение абалопаратида 1-34 с линкерами и лигандами, осуществляющими направленную доставку, описанными ранее в примерах, будет вероятно увеличивать плотность костей в месте перелома в результате направленной доставки.
[00266] Ссылаясь сейчас на фигуру 1, анализировали выборку 100 КТ снимков (срезы) для каждого каллюса. КТ снимки получали на 4 неделе. Стопку снимков выбирали в районе перелома, где каллюс был наибольшим. Слева направо таргетный PTHrP (PTHrP 1-46 с последующими 10 аспарагиновыми кислотами), свободный неконъюгированный PTHrP (PTHrP1-34) и соляной раствор в качестве контроля. Таргетная версия PTHrP увеличивала плотность костей в районе перелома значительно больше, чем свободный PTHrP и соляной раствор.
[00267] Ссылаясь сейчас на фигуру 2, более узкое пространство связано с костью с большей плотностью и может быть показателем прогрессирующего заживления. КТ снимки получали на 4 неделе. Анализировали выборку 100 КТ снимков (срезов) для каждого каллюса. Стопку снимков выбирали в районе перелома, где каллюс был наибольшим. Слева направо таргетный PTHrP (PTHrP 1-46 с последующими 10 аспарагиновыми кислотами) и соляной раствор в качестве контроля. Таргетный PTHrP имеет статистически более узкое пространство, чем соляной раствор в качестве контроля.
[00268] Ссылаясь сейчас на фигуру 3, анализировали выборку 100 КТ снимков (срезы) для каждого каллюса. КТ снимки получали через 2 недели. Стопку снимков выбирали в районе перелома, где каллюс был наибольшим. Слева направо таргетный PTH (PTH 1-46 с последующими 10 аспарагиновыми кислотами) и соляной раствор в качестве контроля. Таргетный PTH давал статистически большую плотность кости, чем соляной раствор в качестве контроля.
[00269] Ссылаясь сейчас на фигуру 4, степень экспрессии щелочной фосфатазы (ALP) и для таргетного и нетаргетного PTHrP анализировали в MC3T3E1 клетках. Соотношение ALP рассчитывали (экспрессия ALP после обработки/ALP экспрессия контроля растворителя). Большие степени экспрессии связаны с большей активностью остеобластов и представляет собой ключевой белок, участвующий в минерализации кости. Присоединение лиганда для направленной доставки не снижает эффективность лекарственного средства.
[00270] Ссылаясь сейчас на фигуру 5, степень экспрессии остеопонтина (OPN) и для таргетного и нетаргетного PTHrP анализировали в MC3T3E1 клетках. Рассчитывали соотношение OPN (OPN экспрессия после обработки/ OPN экспрессия контроля растворителя). Большие уровни экспрессии связаны с большей активностью остеобластов и представляет собой представляет собой ключевой белок, участвующий в минерализации кости. Присоединение лиганда для направленной доставки не снижает эффективность лекарственного средства.
[00271] Ссылаясь сейчас на фигуру 6, анализировали степень экспрессии генов нескольких ключевых костных маркеров и для таргетного и нетаргетного PTHrP в MC3T3E1 клетках. Маркеры активности включают щелочную фосфатазу (ALP), коллаген I-альфа (Col1-альфа), остеокальцин (OC), остеопротегерин (OPG), остеопонтин (OPN) и остерикс (OSX). Рассчитывали степень экспрессии генов (экспрессия гена после обработки/экспрессия гена контроля растворителя). Таргетный PTHrP имел активность всего лишь 1 пМ.
Таблица 1. Эффекты испытуемых соединение на различные органы мышей
ИН мыши Печень Почки
Таргетное лекарственное средство Отсутствие значительных повреждений Отсутствие значительных повреждений
Таргетное лекарственное средство Редкие, микроскопические мононуклеарные агрегаты (случайные)
Таргетное лекарственное средство Отсутствие значительных повреждений Отсутствие значительных повреждений
Таргетное лекарственное средство Легкое-умеренное мультифокальное лимфоплазмоцитарное центрилобулярное воспаление Отсутствие значительных повреждений
Таргетное лекарственное средство Отсутствие значительных повреждений Легкий лимфоплазмоцитарный пиелит
Контроль Отсутствие значительных повреждений Отсутствие значительных повреждений
Контроль Отсутствие значительных повреждений Отсутствие значительных повреждений
Контроль Отсутствие значительных повреждений Легкий лимфоплазмоцитарный пиелит
Контроль Отсутствие значительных повреждений Легкий нейтрофильный пиелит
Контроль Редкие, микроскопические мононуклеарные агрегаты (случайные) Отсутствие значительных повреждений
[00272] Ссылаясь сейчас на таблицу 1, мышей обрабатывали 31 нмоль/кг/день подкожными инъекциями PTHrPD10 ("таргетное лекарственное средство") или соляным раствором. Швейцарских ND4 мышей обрабатывали в течение 28 дней. Мышей умерщвляли в конце исследования, и удаляли печень и почки. Органы фиксировали в формалине, и для каждого делали парафиновые срезы. Ветеринарный патолог проводил рандомизированный слепой анализ на органах. Детектируемую токсичность не наблюдали. Отмеченные повреждения являются минимальными по значимости и не связаны с явным повреждением тканей (некрозом). Представляется маловероятным, что данный тип повреждения мог бы вызывать клинические симптомы или заболевание. Они, скорее всего, находятся в пределах нормы для данных животных.
[00273] Ссылаясь сейчас на фигуру 7, мышей обрабатывали 31 нмоль/кг/день подкожными инъекциями PTHrPD10 (таргетный) или PTHrP (свободный). Швейцарских ND4 мышей обрабатывали в течение 14, 28, или 56 дней. Мышей умерщвляли в конце периода дозирования для каждого исследования, и удаляли бедренные кости. Плотности каллюсов измеряли, применяя scanco микроКТ. Область из 100 срезов при самом большом диаметре каждого каллюса выбирали для измерения. "Таргетные 2" представляет собой мышей, которым вводили таргетный PTHrP в течение 2 недель (14 дней). "Свободные 2" представляет собой мышей, которым вводили немодифцированный PTHrP в течение 2 недель (14 дней). "Таргетный 4" представляет собой мышей, которым вводили таргетный PTHrP в течение 4 недель (28 дней). "Свободный 4" представляет собой мышей, которым вводили немодифицированный PTHrP в течение 4 недель (28 дней). "Таргетный 8" представляет собой мышей, которым вводили таргетный PTHrP в течение 8 недель (56 дней). "Свободный 8" представляет собой мышей, которым вводили немодифицированный PTHrP в течение 8 недель (56 дней). Большие плотности можно наблюдать в таргетных PTHrP по сравнению со свободными PTHrp в каждый момент времени. Наибольшее различие между таргетным и свободным PTHrP наблюдается на 2 недели. Данные результаты указывают на то, что таргетное лекарственное средство не только улучшает заживление перелома, но также ускоряет заживление перелома.
[00274] Ссылаясь сейчас на фигуру 8, мышей обрабатывали 31 нмоль/кг/день подкожными инъекциями абалопаратида D10 (таргетного), абалопаратида (нетаргетного) и соляного раствора. Швейцарских ND4 мышей обрабатывали в течение 28 дней. Мышей умерщвляли в конце исследования, и удаляли бедренные кости. Плотности каллюсов измеряли, применяя scanco микроКТ. Область из 100 срезов при самом большом диаметре каждого каллюса выбирали для измерения. Абалопаратид применяли ранее для лечения остеопороза. Данные результаты указывают на то, что абалопаратид можно также применять для лечения переломов костей. Данные результаты указывают на то, что таргетный абалопаратид показывает лучшие свойства, чем свободный абалопаратид.
[00275] Ссылаясь сейчас на фигуру 9, мышей обрабатывали 31 нмоль/кг/день подкожными инъекциями PTHrP, осуществляющего таргетную доставку с помощью полифосфата, или соляного раствора. Швейцарских ND4 мышей обрабатывали в течение 28 дней. Мышей умерщвляли в конце исследования, и удаляли бедренные кости. Плотности каллюсов измеряли, применяя scanco микроКТ. Область из 100 срезов при самом большом диаметре каждого каллюса выбирали для измерения. PTHrP, осуществляющий таргетную доставку с помощью полифосфата, улучшал заживление перелома по сравнению с соляным раствором.
[00276] Ссылаясь сейчас на фигуру 10, мышей обрабатывали 31 нмоль/кг/день подкожными инъекциями PTHrP, осуществляющего таргентую доставку с помощью отдельного алендроната, алендроната с тремя разветвлениями, или свободного PTHrP. Швейцарских ND4 мышей обрабатывали в течение 28 дней. Мышей умерщвляли в конце исследования и удаляли бедренные кости. Плотности каллюсов измеряли, применяя scanco микроКТ. Область из 100 срезов при самом большом диаметре каждого каллюса выбирали для измерения. PTHrP, осуществляющий таргентую доставку с помощью отдельного алендроната или алендроната с тремя разветвлениями, улучшает заживление переломов по сравнению со свободным PTHrP.
Пример 4
[00277] Специфические лиганды могут включать, но не ограничиваются, олиго кислые аминокислоты. Примеры олиго кислых аминокислот включают, но не ограничиваются, линейный полимер из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и/или 30 аспарагиновых кислот, содержащий L и/или D аминокислоты, линейный полимер из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 и/или 30 глютаминовых кислот, содержащий L и/или D аминокислоты, линейный полимер из 10 кислых аминокислот, содержащий L и/или D кислые аминокислоты, разветвленный полимер из аспарагиновых кислот с 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и/или 20 остатками в каждой цепи, содержащий L и/или D аминокислоты, разветвленный полимер из глютаминовых кислот с 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и/или 20 остатками в каждой цепи, содержащей L и/или D аминокислоты, и/или разветвленный полимер из кислых аминокислот с 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и/или 20 остатками в каждой цепи, содержащий L и/или D кислые аминокислоты. Ссылаясь сейчас на фигуры 11-12, показаны примеры линейных и разветвленных полимеров кислых аминокислот. ФИГУРА 13 показывает примерные специфические лиганды, которые не являются производными аминокислот.
[00278] Специфические лиганды конденсируют с малеимид-содержащим линкером. Специфические лиганды, содержащие малеимид-содержащий линкер, дополнительно конъюгируют с различными пептидами, обладающими различными химическим свойствами способом конденсации цистеина с малеимидом. Данные пептиды могут включать, но не ограничиваются, последовательность, представляющую собой гепарин-связывающий домен FGF2 (SEQ ID NO: 14), последовательность, представляющую собой гипофизарный активирующий аденилатциклазу полипептид (SEQ ID NO: 15), последовательность, представляющую собой хемотаксический криптический пептид, полученный из CTX области коллагена типа III (SEQ ID NO: 16), последовательность, представляющую собой бета цепь казеинкиназы 2 (SEQ ID NO: 17), последовательность, представляющую собой пептид, полученный из остеопонтина (SEQ ID NO: 18), и/или последовательность, представляющую собой P4-BMP2 (SEQ ID NO: 19). Конъюгированные пептиды йодируют реагентом для йодирования фирмы Pierce, где 125I ковалентно соединен с остатком гистидина, тирозина и/или триптофана конъюгированных пептидов.
[00279] F109C, конъюгированный с разветвленной D10, имеет формулу YKRSRYTCMalK[DDDDDDDDDD]2 (смотри также SEQ ID NO: 70).
[00280] PACAPC, конъюгированный с разветвленной D10, имеет формулу HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalK[DDDDDDDDDD]2 (смотри также SEQ ID NO: 71).
[00281] CTCC, конъюгированный с разветвленной D10, имеет формулу YIAGVGGEKSGGFYCMalK[DDDDDDDDDD]2 (смотри также SEQ ID NO: 72).
[00282] Ck2.3C, конъюгированный с разветвленной D10, имеет формулу RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalK[DDDDDDDDDD]2 (смотри также SEQ ID NO: 3).
[00283] ODPC, конъюгированный с разветвленной D10, имеет формулу DVDVPDGRGDSLAYGCMalK[DDDDDDDDDD]2 (смотри также SEQ ID NO: 74).
[00284] P4C, конъюгированный с разветвленной D10, имеет формулу KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalK[DDDDDDDDDD]2 (смотри также SEQ ID NO: 75).
[00285] F109C, конъюгированный с разветвленной E10, имеет формулу YKRSRYTCMalK[EEEEEEEEEE]2 (смотри также SEQ ID NO: 76).
[00286] PACAPC, конъюгированный с разветвленной E10, имеет формулу HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNKCMalK[EEEEEEEEEE]2 (смотри также SEQ ID NO: 77).
[00287] CTCC, конъюгированный с разветвленной E10, имеет формулу YIAGVGGEKSGGFYCMalK[EEEEEEEEEE]2 (смотри также SEQ ID NO: 78).
[00288] Ck2.3C, конъюгированный с разветвленной E10, имеет формулу RQIKIWFQNRRMKWKKIPVGESLKDLIDQCMalK[EEEEEEEEEE]2 (смотри также SEQ ID NO: 79).
[00289] ODPC, конъюгированный с разветвленной E10, имеет формулу DVDVPDGRGDSLAYGCMalK[EEEEEEEEEE]2 (смотри также SEQ ID NO: 80).
[00290] P4C, конъюгированный с разветвленной E10, имеет формулу KIPKASSVPTELSAISTLYLCMalK[EEEEEEEEEE]2 (смотри также SEQ ID NO: 81).
[00291] Ссылаясь сейчас на фигуру 14A и 14B, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер вводили 1 мКю 125I меченных конъюгатов через 10 дней после остеотомии. Цистеинтирозиновый дипептид конденсировали с малеимидным линкером. Цистеинтирозиновый дипептид, содержащий малеимидный линкер, конъюгировали с каждым из указанных специфических лигандов. PTHrP_ASP10 представляет собой конъюгированный пептид, содержащий 1-46 PTHrP с линейным полимером из 10 аспарагиновых кислот. Прептин_Asp10 представляет собой конъюгированный пептид, содержащий 1-16 прептина с линейным полимером из 10 аспарагиновых кислот. Проводили некропсию через 24 часа после инъекций, и вырезали ткани. Затем, ткани считали счетчиком гамма лучей. Относительное число импульсов переломанной бедренной кости по сравнению с неповрежденной бедренной костью показано в настоящем описании в виде отношения.
[00292] Ссылаясь сейчас на фигуру 15, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер вводили подкожно LS288, конъюгированный с линейным полимером из 10 L-аспарагиновых кислот, через 10 дней после остеотомии на правой бедренной кости. Изображение мыши получали 1 секундным 780 нм возбуждающим пучком. Эмиссионную флуоресценцию регистрировали при 810 нм в течение 1 секунды. Место инъекции находилось вблизи спины мыши и, следовательно, мышь показывала интенсивную флуоресценцию в спине.
[00293] Ссылаясь сейчас на фигуру 16, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер вводили подкожно LS288, конъюгированный с линейным полимером из 10 L-аспарагиновых кислот, через 3, 6, и 10 дней после остеотомии на правой бедренной кости. Изображение мыши получали 1 секундным 780 нм возбуждающим пучком. Эмиссионную флуоресценцию регистрировали при 810 нм в течение 1 секунды. Верхний ряд представляет собой 10 дней после перелома, средний ряд представляет собой 6 дней после перелома, и нижний ряд представляет собой 3 дня после перелома. Бедренная кость слева в каждой группе представляет собой переломанную бедренную кость по сравнению с неповрежденной бедренной костью справа. Это показывает, что направленная доставка к месту перелома улучшается в процессе заживления.
[00294] Ссылаясь сейчас на фигуру 17, взрослым швейцарским мышам Вебстер вводили 0,25 мКю радиомеченного 125I прептинD10 конъюгата через 10 дней после остеотомии и умерщвляли в различные моменты времени. Каждую ткань собирали, и затем количественно оценивали счетчиком гамма лучей (ФИГУРА 17A). Кратное различие относительных импульсов между переломанной бедренной костью и неповрежденной бедренной костью, применяя радиомеченный 125I ПрептинD10, рассчитывали в различные моменты времени (ФИГУРА 17B).
[00295] Ссылаясь сейчас на фигуру 18 и 19, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер (возраст 12 недель) вводили 0,22 мКю радиомеченных 125I конъюгированных пептидов через 10 дней после остеотомии. Через 14 часов после инъекции каждую мышь умерщвляли, и каждый из перечисленных органов собирали и оценивали количественно. Количество импульсов нормализовали к весу образцов. Рассчитывали кратное различие относительных импульсов между переломанной бедренной костью и неповрежденной (непереломанной) бедренной костью для каждого из конъюгированных пептидов.
[00296] Ссылаясь сейчас на фигуру 20, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер (возраст 12 недель) вводили 0,22 мКю радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, CTCC, F109C и PACAPC), конъюгированных с L-Asp10 (ФИГУРА 20A), D-Asp10 (ФИГУРА 20B) или L-Asp20 (ФИГУРА 20C), через 10 дней после остеотомии. Через 14 часов после инъекции каждую мышь умерщвляли, и каждый из перечисленных органов собирали и оценивали количественно. Количество импульсов нормализовали к весу образцов. Все из испытуемых конъюгированных пептидов показали предпочтительную и/или селективную направленную доставку к переломанной кости по сравнению с другими органами.
[00297] Ссылаясь сейчас на фигуру 21, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер (возраст 12 недель) вводили 0,22 мКю радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, CTCC, и F109C), конъюгированных с L-Glu10 (ФИГУРА 21A) или D-Glu10 (ФИГУРА 21B), через 10 дней после остеотомии. Через 14 часов после инъекции каждую мышь умерщвляли, и каждый из перечисленных органов собирали и оценивали количественно. Количество импульсов нормализовали к весу образцов. Все из испытуемых конъюгированных пептидов показали предпочтительную и/или селективную направленную доставку к переломанной кости по сравнению с другими органами. Больший сигнал, наблюдаемый в почке, может быть результатом большей распространенности глутаматных транспортеров на почках. Данные транспортеры отвечают за реабсорбцию глютаминовых кислот назад из кровотока, а не за реальное поглощение клеткой. Это значит, что сигнал будет вероятно снижаться с течением времени в противоположность поглощению, наблюдаемому в переломанной бедренной кости, где отрицательно заряженные молекулы будут сильно прикрепляться к кости (смотри, например, фигуру 17). Смотри подробности, касающиеся поглощения глютаминовых кислот, Hediger, M. A. Glutamate transporters in kidney and brain. Am. J. Physiol. - Ren. Physiol. 277, F487-F492 (1999); Kanai, Y. & Hediger, M. A. Primary structure and functional characterization of a high-affinity glutamate transporter. Nature 360, 467-471 (1992); и Kanai, Y. & Hediger, M. A. The glutamate and neutral amino acid transporter family: physiological and pharmacological implications. Eur. J. Pharmacol. 479, 237-247 (2003).
[00298] Ссылаясь сейчас на фигуру 22, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер (возраст 12 недель) вводили 0,22 мКю радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, CTCC, F109C и PACAPC), конъюгированных с L-Glu20 (ФИГУРА 22A) или D-Glu20 (ФИГУРА 22B), через 10 дней после остеотомии. Через 14 часов после инъекции каждую мышь умерщвляли, и каждый из перечисленных органов собирали и оценивали количественно. Количество импульсов нормализовали к весу образцов. Большинство из испытуемых конъюгированных пептидов показали предпочтительную и/или селективную доставку к переломанной кости или почкам по сравнению с другими органами. Удлинение глютаминовых полимеров до 20, по-видимому, слегка увеличивает селективность к переломанной кости, но поглощение почками все еще сохраняется.
[00299] Ссылаясь сейчас на фигуру 23, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер (возраст 12 недель) вводили 0,22 мКю радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, CTCC, F109C и PACAPC), конъюгированных с разветвленным L-Asp10 (ФИГУРА 23A) или разветвленным D-Asp10 (ФИГУРА 23B), через 10 дней после остеотомии. Через 14 часов после инъекции каждую мышь умерщвляли, и каждый из перечисленных органов собирали и оценивали количественно. Количество импульсов нормализовали к весу образцов. Все из испытуемых конъюгированных пептидов показали предпочтительную и/или селективную направленную доставку к переломанной кости по сравнению с другими органами. Некоторые, по-видимому, обладают большим поглощением в почках.
[00300] Ссылаясь сейчас на фигуру 24, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер (возраст 12 недель) вводили 0,22 мКю радиомеченных 125I пептидов (например, ODPC, P4C, Ck2.3C, CTCC, F109C и PACAPC), конъюгированных с L-AAD10 (ФИГУРА 24A), L-SDSDD (ФИГУРА 24B) или (DSS)6 (ФИГУРА 24C), через 10 дней после остеотомии. Через 14 часов после инъекции каждую мышь умерщвляли, и каждый из перечисленных органов собирали и оценивали количественно. Количество импульсов нормализовали к весу образцов. Пептиды, конъюгированные с L-AAD10, по-видимому, имеют некоторую способность осуществлять направленную доставку к переломанной кости. Пептиды, конъюгированные с L-SDSDD, показывали умеренную способность осуществлять направленную доставку к переломанной кости, и также наблюдали повышенное поглощение в почках. Пептиды, конъюгированные с (DSS)6, по-видимому, не обладали любой способностью осуществлять направленную доставку к переломанной кости.
[00301] Ссылаясь сейчас на фигуру 25A, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер (возраст 12 недель) вводили 0,22 мКю радиомеченных 125I пептидов (например, PTHrP1-36, и PTH1-34 и PTHrP1-39), конъюгированных с монобисфосфонатом, трибисфосфонатом, полифосфатом, E10 или E20, через 10 дней после остеотомии. Ссылаясь сейчас на фигуру 25B, взрослым женским особям швейцарских мышей Вебстер (возраст 12 недель) вводили 0,22 мКю радиомеченного 125I тирозина, конъюгированного с монобисфосфонатом ("монобисфосфонат YC"), разветвленным L-Asp4 ("разветвленный (L)D4 Y") или разветвленным L-Asp8 ("разветвленный (L)D8 Y"), через 10 дней после остеотомии.
[00302] Ссылаясь сейчас на фигуру 26, эффекты PTH1-34E10 и соляного раствора на объем кости после лечения. Мышей обрабатывали ежедневно PTH1-34E10 в течение 2 недель. На второй неделе мышей умерщвляли, и удаляли бедренные кости для микроКТ анализа.
[00303] Ссылаясь сейчас на фигуру 27, эффекты PTHrPD10 и соляного раствора на нормализованный объем кости после обработки, применяя указанные дозы. Мышей обрабатывали ежедневно PTHrPD10 в течение 4 недель. На четвертой неделе мышей умерщвляли, и удаляли бедренные кости для микроКТ анализа.
[00304] Специфические лиганды, содержащие глютаминовую кислоту, обладают большим поглощением в почках, чем другие испытуемые специфические лиганды, причем поглощение находится в диапазоне 20-50% измеренной дозы на граммм. Данное поглощение, вероятно, осуществляется за счет рецепторов обратного захвата глютаминовой кислоты, которые экспрессируются в почках. Они являются более селективными для переломанной кости по сравнению с другими костями, чем другие специфические лиганды, как показано соотношением доставки к переломанной и непереломанным костям в диапазоне 7-12 для специфических лигандов на основе глютаминовой кислоты. Удлинение глютаминовых полимеров до 20 дает умеренное улучшение доставки от 20-50% измеренной величины на грамм для 10мера вплоть до 40-70% измеренной дозы на грамм для 20мера. Это улучшения было вероятно результатом повышенного сродства дополнительных глютаминовых кислот, обусловленного экспонированным гидроксиапатитом в месте перелома. Удлиненные 20мерные специфические лиганды на основе глютаминовой кислоты все еще страдали от аналогичных проблем с поглощением почками, как более короткие 10меры. Замена L на D энантиомеры, по-видимому, не оказывает четкого эффекта на специфические лиганды на основе глютаминовой кислоты.
[00305] Специфические лиганды на основе аспарагиновой кислоты, по-видимому, обеспечивают наилучшую доставку специфических лигандов с накоплением в результате доставки в диапазоне 40-70% измеренной дозы на грамм. Однако специфические лиганды на основе аспарагиновой кислоты, по-видимому, являются немного менее селективными по отношению к переломанной по сравнению с непереломанной костью с соотношениями накопления в переломанной кости к непереломанной кости в районе 4-6 для направленной доставки на основе L аспарагиновой кислоты и 6-9 для специфических лигандов на основе D аспарагиновой кислоты. Однако они не страдают от такого большого накопления в почках, как специфические лиганды на основе глютаминовой кислоты, причем накопление измеренной дозы на грамм обычно находится в диапазоне меньше 15%. Разветвленные, по видимому, не обладают лучшими свойствами, чем линейные версии по их способности доставлять большее количество соединения к месту перелома.
[00306] Увеличение длины с 10 до 20 улучшает стабильность лиганда для направленной доставки среди различных типов пептидов, конъюгированных с L-Glu20 (меченный, ʺ(L)D20ʺ), все из пептидов доставлялись в количестве 50-70% измеренной величины на грамм. Замене L на D энантиомеры, по-видимому, улучшает стабильность специфических лигандов на основе аспарагиновой кислоты и улучшает направленную доставку, как очевидно большими степенями доставки и лучшими соотношениями селективности.
[00307] Пептиды, конъюгированные с AAD10, по-видимому, обладают только умеренной способностью осуществлять направленную доставку. Они все еще сохраняют системное распределение. Но они все еще способны сохранять улучшение их способности доставлять в 2-5 раз больше меченого соединения к переломанной кости по сравнению с непереломанной костью. Пептиды, конъюгированные с SDSDD, по-видимому, обладают только умеренной способностью осуществлять направленную доставку, причем доставка находится в диапазоне 20-40%. Они все еще сохраняют системное распределение. Но они все еще способны сохранять улучшение их способности доставлять в 3-5 раз больше меченого соединения к переломанной кости по сравнению с непереломанной костью. Пептиды, конъюгированные с (DSS)6, по-видимому, обладают только умеренной способностью осуществлять направленную доставку к переломанной кости. Они все еще сохраняют системное распределение. Но они все еще способны сохранять улучшение их способности доставлять в 2-3 раз больше меченого соединения к переломанной кости по сравнению с непереломанной костью.
[00308] Тогда как новая технология проиллюстрирована и описана подробно на фигурах и в предшествующем описании, то же самое следует считать иллюстративным и неограничавающим по характеру, ясно, что показаны и описаны только предпочтительные варианты осуществления, и что все изменения и модификации, которые попадают в пределы сущности новой технологии, требуется защищать. Равным образом, тогда как новая технология проиллюстрирована, применяя конкретные примеры, теоретические доводы, оценки и иллюстрации, данные иллюстрации и сопровождающее их обсуждение не следует никоим образом интерпретировать как ограничивающие данную технологию. Все патенты, патентные заявки и ссылки на тексты, научные исследования, публикации и подобные, на которые ссылаются в настоящем изобретении, включены в настоящее изобретение с помощью ссылки во всей своей полноте в степени, в которой они не противоречат сформулированным идеям настоящего изобретения.
--->
Список последовательностей
<110> Purdue Research Foundation
<120> НАПРАВЛЕННАЯ РЕГЕНЕРАЦИЯ ПЕРЕЛОМАННОЙ КОСТИ ПОСРЕДСТВОМ
СТИМУЛЯЦИИ РЕЦЕПТОРА ПАРАТИРЕОИДНОГО ГОРМОН
<130> 67711-03
<140> PCT/US2017/064081
<141> 2017-11-30
<150> 62/428,492
<151> 2016-11-30
<150> 62/553,313
<151> 2017-09-01
<160> 81
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 34
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 1
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala
<210> 2
<211> 34
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 2
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
1 5 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
20 25 30
Asn Phe
<210> 3
<211> 34
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Абалопаратид 1-34 с 2-метиаланил по остатку 29 и аминированный
по остатку 34
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> 2-метиаланил
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> амидирование по C-концу
<400> 3
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Ala Lys Leu His
20 25 30
Thr Ala
<210> 4
<211> 35
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 4
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Gly
35
<210> 5
<211> 36
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 5
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Gly Ile
35
<210> 6
<211> 37
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 6
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Gly Ile Arg
35
<210> 7
<211> 38
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 7
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Gly Ile Arg Ala
35
<210> 8
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 8
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Gly Ile Arg Ala Thr
35
<210> 9
<211> 40
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 9
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Gly Ile Arg Ala Thr Ser
35 40
<210> 10
<211> 56
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PTHrP1-46D10
<400> 10
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Gly Ile Arg Ala Thr Ser Glu Val Ser Pro Asn Ser Asp Asp
35 40 45
Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp
50 55
<210> 11
<211> 56
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PTH1-46D10
<400> 11
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
1 5 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
20 25 30
Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Asp Asp
35 40 45
Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp
50 55
<210> 12
<211> 141
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 12
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Glu Ile Arg Ala Thr Ser Glu Val Ser Pro Asn Ser Lys Pro
35 40 45
Ser Pro Asn Thr Lys Asn His Pro Val Arg Phe Gly Ser Asp Asp Glu
50 55 60
Gly Arg Tyr Leu Thr Gln Glu Thr Asn Lys Val Glu Thr Tyr Lys Glu
65 70 75 80
Gln Pro Leu Lys Thr Pro Gly Lys Lys Lys Lys Gly Lys Pro Gly Lys
85 90 95
Arg Lys Glu Gln Glu Lys Lys Lys Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp Leu
100 105 110
Asp Ser Gly Val Thr Gly Ser Gly Leu Glu Gly Asp His Leu Ser Asp
115 120 125
Thr Ser Thr Thr Ser Leu Glu Leu Asp Ser Arg Arg His
130 135 140
<210> 13
<211> 84
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 13
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
1 5 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
20 25 30
Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser
35 40 45
Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu
50 55 60
Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys
65 70 75 80
Ala Lys Ser Gln
<210> 14
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Гепарин-связывающий домен FGF2 ("F109C")
<400> 14
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 15
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> homo sapiens
<400> 15
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 16
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 16
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 17
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 17
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 18
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 18
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 19
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C (модифицированный BMP-2 фрагмент)
<400> 19
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu
20
<210> 20
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ПрептинD10
<400> 20
Asp Val Ser Thr Ser Gln Ala Val Leu Pro Asp Asp Phe Pro Arg Tyr
1 5 10 15
Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp
20 25
<210> 21
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> SDSDD
<400> 21
Ser Asp Ser Asp Asp
1 5
<210> 22
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> (DSS)6
<400> 22
Asp Ser Ser Asp Ser Ser Asp Ser Ser Asp Ser Ser Asp Ser Ser Asp
1 5 10 15
Ser Ser
<210> 23
<211> 44
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PTH1-34E10
<400> 23
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
1 5 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
20 25 30
Asn Phe Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu
35 40
<210> 24
<211> 46
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PTHrP1-36E10
<400> 24
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Gly Ile Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu
35 40 45
<210> 25
<211> 40
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PTHrP1-39C-MalE20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (40)..(40)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)20
<400> 25
Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln
1 5 10 15
Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His
20 25 30
Thr Ala Gly Ile Arg Ala Thr Cys
35 40
<210> 26
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> F109C, конъюгированный с D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)10
<400> 26
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 27
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> F109C, конъюгированный с D20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)20
<400> 27
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 28
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> F109C, конъюгированный с E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)10
<400> 28
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 29
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> F109C, конъюгированный с E20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)20
<400> 29
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 30
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> F109C, конъюгированный с AAD10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(2-аминоадипиновая кислота)10
<400> 30
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 31
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> F109C, конъюгированный с SDSDD
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Ser-Asp-Ser-Asp-Asp
<400> 31
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 32
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> F109C, конъюгированный с (DSS)6
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp-Ser-Ser)6
<400> 32
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 33
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PACAPC, конъюгированный с D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)10
<400> 33
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 34
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PACAPC, конъюгированный с D20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)20
<400> 34
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 35
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PACAPC, конъюгированный с E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)10
<400> 35
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 36
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PACAPC, конъюгированный с E20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)20
<400> 36
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 37
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PACAPC, конъюгированный с AAD10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(2-аминоадипиновая кислота)10
<400> 37
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 38
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PACAPC, конъюгированный с SDSDD
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Ser-Asp-Ser-Asp-Asp
<400> 38
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 39
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PACAPC, конъюгированный с (DSS)6
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp-Ser-Ser)6
<400> 39
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 40
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> CTCC, конъюгированный с D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)10
<400> 40
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 41
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> CTCC, конъюгированный с D20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)20
<400> 41
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 42
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> CTCC, конъюгированный с E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)10
<400> 42
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 43
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> CTCC, конъюгированный с E20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)20
<400> 43
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 44
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> CTCC, конъюгированный с AAD10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(2-аминоадипиновая кислота)10
<400> 44
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 45
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> CTCC, конъюгированный с SDSDD
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Ser-Asp-Ser-Asp-Asp)
<400> 45
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 46
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> CTCC, конъюгированный с (DSS)6
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp-Ser-Ser)6
<400> 46
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 47
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Ck2.3C, конъюгированный с D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)10
<400> 47
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 48
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Ck2.3C, конъюгированный с D20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)20
<400> 48
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 49
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Ck2.3C, конъюгированный с E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)10
<400> 49
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 50
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Ck2.3C, конъюгированный с E20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)20
<400> 50
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 51
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Ck2.3C, конъюгированный с AAD10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Cys, модифицированный малеимидом--(2-аминоадипиновая кислота)10
<400> 51
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 52
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Ck2.3C, конъюгированный с SDSDD
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Ser-Asp-Ser-Asp-Asp)
<400> 52
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 53
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Ck2.3C, конъюгированный с (DSS)6
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp-Ser-Ser)6
<400> 53
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 54
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ODPC, конъюгированный с D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)10
<400> 54
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 55
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ODPC, конъюгированный с D20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)20
<400> 55
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 56
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ODPC, конъюгированный с E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)10
<400> 56
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 57
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ODPC, конъюгированный с E20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)20
<400> 57
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 58
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ODPC, конъюгированный с AAD10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(2-аминоадипиновая кислота)10
<400> 58
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 59
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ODPC, конъюгированный с SDSDD
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Ser-Asp-Ser-Asp-Asp)
<400> 59
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 60
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ODPC, конъюгированный с (DSS)6
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp-Ser-Ser)6
<400> 60
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 61
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C, конъюгированный с D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)10
<400> 61
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu Cys
20
<210> 62
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C, конъюгированный с D20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp)20
<400> 62
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu Cys
20
<210> 63
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C, конъюгированный с E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)10
<400> 63
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu Cys
20
<210> 64
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C, конъюгированный с E20
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Glu)20
<400> 64
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu Cys
20
<210> 65
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C, конъюгированный с AAD10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(2-аминоадипиновая кислота)10
<400> 65
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu Cys
20
<210> 66
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C, конъюгированный с SDSDD
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Ser-Asp-Ser-Asp-Asp)
<400> 66
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu Cys
20
<210> 67
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C, конъюгированный с (DSS)6
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-(Asp-Ser-Ser)6
<400> 67
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu Cys
20
<210> 68
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Разветвленный D4 Y
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> PEG (полиэтиленгликоль) модифицированный тирозин
<400> 68
Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp
1 5 10
<210> 69
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Разветвленный D8 Y
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> PEG (полиэтиленгликоль) модифицированный тирозин
<400> 69
Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp
1 5 10 15
Asp Asp
<210> 70
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> F109C, конъюгированный с разветвленный D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Asp)10)2
<400> 70
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 71
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PACAPC, конъюгированный с разветвленный D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Asp)10)2
<400> 71
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 72
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> CTCC, конъюгированный с разветвленный D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Asp)10)2
<400> 72
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 73
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Ck2.3C, конъюгированный с разветвленный D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Asp)10)2
<400> 73
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 74
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ODPC, конъюгированный с разветвленный D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Asp)10)2
<400> 74
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 75
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C, конъюгированный с разветвленный D10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Asp)10)2
<400> 75
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu Cys
20
<210> 76
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> F109C, конъюгированный с разветвленный E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys, модифицированный малеимидом
<400> 76
Tyr Lys Arg Ser Arg Tyr Thr Cys
1 5
<210> 77
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> PACAPC, конъюгированный с разветвленный E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (39)..(39)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Glu)10)2
<400> 77
His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln
1 5 10 15
Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu Gly Lys Arg Tyr Lys
20 25 30
Gln Arg Val Lys Asn Lys Cys
35
<210> 78
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> CTCC, конъюгированный с разветвленный E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Glu)10)2
<400> 78
Tyr Ile Ala Gly Val Gly Gly Glu Lys Ser Gly Gly Phe Tyr Cys
1 5 10 15
<210> 79
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> Ck2.3C, конъюгированный с разветвленный E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Glu)10)2
<400> 79
Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys
1 5 10 15
Ile Pro Val Gly Glu Ser Leu Lys Asp Leu Ile Asp Gln Cys
20 25 30
<210> 80
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> ODPC, конъюгированный с разветвленный E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Glu)10)2
<400> 80
Asp Val Asp Val Pro Asp Gly Arg Gly Asp Ser Leu Ala Tyr Gly Cys
1 5 10 15
<210> 81
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> искусственная
<220>
<223> P4C, конъюгированный с разветвленный E10
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys, модифицированный малеимидом-Lys((Glu)10)2
<400> 81
Lys Ile Pro Lys Ala Ser Ser Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser
1 5 10 15
Thr Leu Tyr Leu Cys
20
<---

Claims (33)

1. Соединение имеющее структуру:
X—Y—Z;
где:
X представляет собой полипептид, имеющий по меньшей мере на 80% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 3;
Z представляет собой молекулу, осуществляющую доставку в кости, содержащую 4 или более кислых аминокислотных остатка, полифосфат, аминоадипиновую кислоту, алендронат и/или бисфосфонат; и
Y представляет собой линкер, содержащий полипептид, имеющий по меньшей мере на 80% идентичность последовательности с аминокислотными остатками 35-46 полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида;
или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п.1, где Y представляет собой невысвобождаемый линкер.
3. Соединение по п.1 или 2, где Z содержит не более 70 аминокислот.
4. Соединение по п.3, где Z содержит не более 40 аминокислот.
5. Соединение по п.3, где Z содержит не менее 6 и не более 35 аминокислот.
6. Соединение по п.1, где Z является заряженным.
7. Соединение по п.1, где по меньшей мере одна аминокислота представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту.
8. Соединение по п.7, где Z содержит не менее 6 и не более 35 остатков глутаминовой кислоты.
9. Соединение по п.7, где Z содержит не менее 6 и не более 35 остатков аспарагиновой кислоты.
10. Соединение, имеющее структуру:
X—Y—Z
где:
X представляет собой полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3;
Y представляет собой линкер содержащий полипептид, имеющий по меньшей мере на 80% идентичность последовательности с аминокислотными остатками 35-46 полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида; и
Z представляет собой молекулу, осуществляющую доставку в кости, содержащую 10 остатков аспарагиновой кислоты или 10 остатков глутаминовой кислоты;
или его фармацевтически приемлемая соль.
11. Способ лечения перелома кости, причем способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения, имеющего структуру:
X—Y—Z
где:
X представляет собой полипептид, имеющий, по меньшей мере, на 80% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 3;
Y представляет собой линкер, содержащий полипептид, имеющий по меньшей мере на 80% идентичность последовательности с аминокислотными остатками 35-46 полноразмерного родственного паратиреоидному гормону пептида; и
Z представляет собой молекулу, осуществляющую доставку в кости, содержащую 4 или более кислых аминокислотных остатка, полифосфат, аминоадипиновую кислоту, алендронат и/или бисфосфонат;
или его фармацевтически приемлемой соли.
12. Способ по п.11, где соединение или его фармацевтически приемлемую соль вводят пациенту, нуждающемуся в этом, перорально, парентерально, ректально и/или трансдермально.
13. Способ по п.11, где соединение или его фармацевтически приемлемую соль вводят подкожно пациенту, нуждающемуся в этом.
14. Способ по п.11, где терапевтически эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли обеспечивает терапевтически эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли в отношении перелома кости пациента, нуждающегося в этом.
15. Способ по п.11, где терапевтически эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли составляет от приблизительно 0,01 нмоль/кг/день до приблизительно 100 нмоль/кг/день.
RU2019119701A 2016-11-30 2017-11-30 Направленная регенерация переломанной кости посредством стимуляции рецептора паратиреоидного гормона RU2785401C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662428492P 2016-11-30 2016-11-30
US62/428,492 2016-11-30
US201762553313P 2017-09-01 2017-09-01
US62/553,313 2017-09-01
PCT/US2017/064081 WO2018102616A1 (en) 2016-11-30 2017-11-30 Fracture targeted bone regeneration through parathyroid hormone receptor stimulation

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019119701A RU2019119701A (ru) 2021-01-14
RU2019119701A3 RU2019119701A3 (ru) 2021-02-16
RU2785401C2 true RU2785401C2 (ru) 2022-12-07

Family

ID=

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2422172C2 (ru) * 2005-01-06 2011-06-27 Бакстер Интернэшнл Инк. Дополненные матриксы для лечения переломов костей

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2422172C2 (ru) * 2005-01-06 2011-06-27 Бакстер Интернэшнл Инк. Дополненные матриксы для лечения переломов костей

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ARRIGHI I. ET AL., "Bone healing induced by local delivery of an engineered parathyroid hormone prodrug", BIOMATERIALS, vol. 30, no. 9, cтр. 1763 - 1771, 2009. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10960054B2 (en) Fracture targeted bone regeneration through parathyroid hormone receptor stimulation
JP5764613B2 (ja) 副甲状腺ホルモンを低減する治療剤
JP4026854B2 (ja) 腸栄養性ｇｌｐ―２ペプチドのアンタゴニスト
JP4541899B2 (ja) ラクタム架橋を有する、コンホメーションが制限された副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）アナログ
JPH10504316A (ja) Ｎｍｄａレセプターのアロステリックモジュレーター
CN101855240A (zh) 改进的胰岛淀粉样多肽衍生物
JP4837888B2 (ja) コンホメーションが拘束された副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）類似体
JP4334480B2 (ja) α−ヘリックス安定化剤を用いる高次構造的に制約された副甲状腺ホルモン
JP4871128B2 (ja) 高次構造的に制約された副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）アナログ
CN112672747A (zh) 用于激活骨祖细胞中细胞信号传导的肽
JP2024506435A (ja) 化合物、組成物、および骨折を処置するための使用方法
RU2785401C2 (ru) Направленная регенерация переломанной кости посредством стимуляции рецептора паратиреоидного гормона
TW201734035A (zh) 胜肽類似物
JP5529014B2 (ja) 部位特異的なペグ化をされた直鎖状のサケカルシトニン類似体
CN116801900A (zh) 用于治疗骨折的化合物、组合物和使用方法
US20230390363A1 (en) Compounds, Compositions and Methods of Use to Treat Spinal Fusions
WO2024149820A1 (en) Nmu receptor 2 agonists
WO2004050701A1 (en) Bone growth factor