RU2784086C1 - Нуклеиновая кислота, кодирующая термочувствительный канал TRPV1 человека с измененной ионной селективностью для управления мембранным потенциалом клеток - Google Patents
Нуклеиновая кислота, кодирующая термочувствительный канал TRPV1 человека с измененной ионной селективностью для управления мембранным потенциалом клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2784086C1 RU2784086C1 RU2021138310A RU2021138310A RU2784086C1 RU 2784086 C1 RU2784086 C1 RU 2784086C1 RU 2021138310 A RU2021138310 A RU 2021138310A RU 2021138310 A RU2021138310 A RU 2021138310A RU 2784086 C1 RU2784086 C1 RU 2784086C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- leu
- channel
- ser
- ala
- thr
- Prior art date
Links
- 210000000170 Cell Membrane Anatomy 0.000 title claims abstract description 22
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 title claims abstract description 22
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 title description 5
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims abstract description 25
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 25
- -1 calcium cations Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 230000002999 depolarising Effects 0.000 claims abstract description 12
- 108060008565 TRPV1 Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000003566 TRPV1 Human genes 0.000 claims abstract 3
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 abstract description 54
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 10
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 230000034994 death Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000032895 transmembrane transport Effects 0.000 abstract description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 abstract description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 16
- YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N Capsaicin Chemical compound COC1=CC(CNC(=O)CCCC\C=C\C(C)C)=CC=C1O YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 12
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108091005504 Cation channels Proteins 0.000 description 11
- 229960002504 capsaicin Drugs 0.000 description 11
- 229930003833 capsaicin Natural products 0.000 description 11
- 235000017663 capsaicin Nutrition 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 description 7
- JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N Leucyl-Glutamine Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 210000002569 neurons Anatomy 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000038112 transient receptor (TC 1.A.4) family Human genes 0.000 description 6
- 108091007157 transient receptor (TC 1.A.4) family Proteins 0.000 description 6
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 5
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 5
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 5
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 5
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 4
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 4
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N val-gly Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N (2S)-1-[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 2-[[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Aspartyl-L-proline Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 description 3
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- 102200026818 IL1RAPL1 I643V Human genes 0.000 description 3
- 229960000310 ISOLEUCINE Drugs 0.000 description 3
- CNPNWGHRMBQHBZ-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O CNPNWGHRMBQHBZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 3
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N Lysyl-Asparagine Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 3
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 3
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N Phenylalanyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 3
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 3
- QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Aspartate Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N Val-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 3
- GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Threonine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 3
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 3
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 3
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- KTGFOCFYOZQVRJ-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-3-methylpentanoyl)amino]pentanedioic acid Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(O)=O KTGFOCFYOZQVRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BUXAPSQPMALTOY-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-3-sulfanylpropanoyl)amino]pentanedioic acid Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(O)=O BUXAPSQPMALTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 description 2
- PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N Arg-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- BNODVYXZAAXSHW-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Histidine Chemical compound NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 BNODVYXZAAXSHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N Asn-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 210000003050 Axons Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- ZSRSLWKGWFFVCM-WDSKDSINSA-N Cys-Pro Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZSRSLWKGWFFVCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 108091006011 G proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000030007 GTP-Binding Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091000058 GTP-Binding Proteins Proteins 0.000 description 2
- JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N Glu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N Glu-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 2
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N Lys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N Met-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229920000320 RNA (poly(A)) Polymers 0.000 description 2
- 108020004412 RNA 3' Polyadenylation Signals Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfizole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N Thr-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Asparagine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Cysteine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YBRHKUNWEYBZGT-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Threonine Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(=O)NC(C(O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 YBRHKUNWEYBZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 2
- ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Serine Chemical compound OCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 2
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 229920002533 WHP Posttrascriptional Response Element Polymers 0.000 description 2
- 230000003213 activating Effects 0.000 description 2
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 2
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 2
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N gly ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 2
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000000663 muscle cells Anatomy 0.000 description 2
- 230000001537 neural Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 2
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 2
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 230000001323 posttranslational Effects 0.000 description 2
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 2
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007725 thermal activation Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000001052 transient Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N (2S)-1-[(2S)-1-[(2S)-pyrrolidin-1-ium-2-carbonyl]pyrrolidine-2-carbonyl]pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H]2NCCC2)CCC1 SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YSMPVONNIWLJML-FXQIFTODSA-N (2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YSMPVONNIWLJML-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CZPAHAKGPDUIPJ-CIUDSAMLSA-N (2S)-1-[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CZPAHAKGPDUIPJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JSGWNFKWZNPDAV-YDHLFZDLSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]butanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JSGWNFKWZNPDAV-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- NJEMRSFGDNECGF-GCJQMDKQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]propanoyl]amino]butanedioic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O NJEMRSFGDNECGF-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-(carboxymethylamino)-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-[[(1S)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- GJSURZIOUXUGAL-UHFFFAOYSA-N 2-((2,6-Dichlorophenyl)imino)imidazolidine Chemical compound ClC1=CC=CC(Cl)=C1NC1=NCCN1 GJSURZIOUXUGAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-4-carboxybutanoyl)amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFCVXVPWSPOMFJ-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-azaniumyl-3-phenylpropanoyl)amino]-4-methylpentanoate Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 RFCVXVPWSPOMFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 2-[[2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- WYRDWWAASBTJLM-UHFFFAOYSA-N 3-chloro-6-(4-methyl-4-oxidopiperazin-4-ium-1-yl)-5H-benzo[b][1,4]benzodiazepine Chemical compound C1C[N+](C)([O-])CCN1C1=C(C=CC=C2)C2=NC2=CC=C(Cl)C=C2N1 WYRDWWAASBTJLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PABVKUJVLNMOJP-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[(1-carboxy-2-sulfanylethyl)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O PABVKUJVLNMOJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TUTIHHSZKFBMHM-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[(3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O TUTIHHSZKFBMHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100011550 ACTB Human genes 0.000 description 1
- 101700033661 ACTB Proteins 0.000 description 1
- 101710032514 ACTI Proteins 0.000 description 1
- 102100004996 ATP12A Human genes 0.000 description 1
- XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ALZVPLKYDKJKQU-XVKPBYJWSA-N Ala-Tyr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 ALZVPLKYDKJKQU-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- JQDFGZKKXBEANU-UHFFFAOYSA-N Alanyl-Cysteine Chemical compound CC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O JQDFGZKKXBEANU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N Arg-Gln Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- QADCERNTBWTXFV-JSGCOSHPSA-N Arg-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 QADCERNTBWTXFV-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N Asp-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N Asp-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQTUDDBANZYMAR-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O IQTUDDBANZYMAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FKBFDTRILNZGAI-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Cysteine Chemical compound OC(=O)CC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O FKBFDTRILNZGAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVRPESWOSNFUCJ-LKTVYLICSA-N BNC210 Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 BVRPESWOSNFUCJ-LKTVYLICSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 210000001218 Blood-Brain Barrier Anatomy 0.000 description 1
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N Bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 description 1
- 230000001964 Ca2+ overload Effects 0.000 description 1
- 102000007590 Calpain Human genes 0.000 description 1
- 108010032088 Calpain Proteins 0.000 description 1
- 210000003169 Central Nervous System Anatomy 0.000 description 1
- 108010035848 Channelrhodopsins Proteins 0.000 description 1
- RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Arginine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Glutamine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBIIZCXWOZDIHS-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS VBIIZCXWOZDIHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NXTYATMDWQYLGJ-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS NXTYATMDWQYLGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOULJWDSSVOMHX-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS OOULJWDSSVOMHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Phenylalanine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 241000006271 Discosoma sp. Species 0.000 description 1
- 102000008422 EC 2.7.1.78 Human genes 0.000 description 1
- 108010021757 EC 2.7.1.78 Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 210000003594 Ganglia, Spinal Anatomy 0.000 description 1
- UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N Glu-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- SSHIXEILTLPAQT-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Aspartate Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CC(O)=O)C(O)=O SSHIXEILTLPAQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHLZDSUANXBJHW-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Phenylalanine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VHLZDSUANXBJHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N Gly-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 210000001320 Hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N His-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CN=CN1 LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N His-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N His-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- IDXZDKMBEXLFMB-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 IDXZDKMBEXLFMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 101700049319 INS Proteins 0.000 description 1
- UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- JWBXCSQZLLIOCI-GUBZILKMSA-N Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C JWBXCSQZLLIOCI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 229940100602 Interleukin-5 Drugs 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Threonine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002510 Keratinocytes Anatomy 0.000 description 1
- VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N L-alanyl-L-glutamic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N L-tyrosyl-L-tyrosine Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 108010062166 Lys-Asn-Asp Proteins 0.000 description 1
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-ZFWWWQNUSA-N Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- 206010025650 Malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229960003987 Melatonin Drugs 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N Met-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N Met-Thr Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C([O-])=O KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- BJFJQOMZCSHBMY-YUMQZZPRSA-N Met-Val Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BJFJQOMZCSHBMY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 102000014415 Muscarinic acetylcholine receptor family Human genes 0.000 description 1
- 108050003473 Muscarinic acetylcholine receptor family Proteins 0.000 description 1
- 210000004165 Myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000004413 Myocytes, Cardiac Anatomy 0.000 description 1
- 108009000578 Oxidative Stress Proteins 0.000 description 1
- MIDZLCFIAINOQN-WPRPVWTQSA-N Phe-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 MIDZLCFIAINOQN-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N Phe-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N Phe-Phe Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N Phe-Pro Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- KLAONOISLHWJEE-UHFFFAOYSA-N Phenylalanyl-Glutamine Chemical compound NC(=O)CCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 KLAONOISLHWJEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N Pro-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N Pro-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- GVUVRRPYYDHHGK-UHFFFAOYSA-N Prolyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C1CCCN1 GVUVRRPYYDHHGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010083204 Proton Pumps Proteins 0.000 description 1
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N Ser-His Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO PBUXMVYWOSKHMF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Arginine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940014598 TAC Drugs 0.000 description 1
- 102100001147 TRPA1 Human genes 0.000 description 1
- 102000012253 TRPA1 Cation Channel Human genes 0.000 description 1
- 108010036769 TRPA1 Cation Channel Proteins 0.000 description 1
- 102000003615 TRPM2 Human genes 0.000 description 1
- 108060008546 TRPM2 Proteins 0.000 description 1
- 102100009263 TRPV1 Human genes 0.000 description 1
- 108060008568 TRPV4 Proteins 0.000 description 1
- 102000003567 TRPV4 Human genes 0.000 description 1
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHGNSVACHBZKSS-KWQFWETISA-N Trp-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C)C([O-])=O)=CNC2=C1 OHGNSVACHBZKSS-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- PEEAINPHPNDNGE-JQWIXIFHSA-N Trp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 PEEAINPHPNDNGE-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- GRQCSEWEPIHLBI-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Asparagine Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 GRQCSEWEPIHLBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NZCPCJCJZHKFGZ-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Glutamine Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 NZCPCJCJZHKFGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N Tyr-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N Tyr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102400000757 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108009000009 Unfolded protein response Proteins 0.000 description 1
- XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- YSGSDAIMSCVPHG-YUMQZZPRSA-N Val-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C YSGSDAIMSCVPHG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GJNDXQBALKCYSZ-RYUDHWBXSA-N Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 GJNDXQBALKCYSZ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241001492404 Woodchuck hepatitis virus Species 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 1
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010070783 alanyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010029539 arginyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010018691 arginyl-threonyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010094001 arginyl-tryptophyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000003376 axonal Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 1
- 229960001467 bortezomib Drugs 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000004094 calcium homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 description 1
- 230000028956 calcium-mediated signaling Effects 0.000 description 1
- 210000002317 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 230000005465 channeling Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000747 designer drug Substances 0.000 description 1
- 108010054813 diprotin B Proteins 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 238000002001 electrophysiology Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structures Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000003260 fluorescence intensity Methods 0.000 description 1
- 108091006031 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034387 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002496 gastric Effects 0.000 description 1
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108010080575 glutamyl-aspartyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010013768 glutamyl-aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010073628 glutamyl-valyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N gly-val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 108010072405 glycyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010084760 glycyl-tyrosyl-glycyl-aspartate Proteins 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 230000002102 hyperpolarization Effects 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000745 ion overload Effects 0.000 description 1
- 125000000012 isoleucine group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 150000002520 isoleucines Chemical class 0.000 description 1
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010090333 leucyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010030617 leucyl-phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010044655 lysylproline Proteins 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N melatonin Chemical compound COC1=CC=C2NC=C(CCNC(C)=O)C2=C1 DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000004065 mitochondrial dysfunctions Effects 0.000 description 1
- 230000021125 mitochondrion degradation Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 1
- 201000009251 multiple myeloma Diseases 0.000 description 1
- 230000003551 muscarinic Effects 0.000 description 1
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 210000003867 nerve cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N p-acetaminophenol Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 108010064486 phenylalanyl-leucyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010065135 phenylalanyl-phenylalanyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 231100000760 phototoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001402 polyadenylating Effects 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral Effects 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 1
- 230000003685 thermal hair damage Effects 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000004906 unfolded protein response Effects 0.000 description 1
- 108091005946 yellow fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- OPINTGHFESTVAX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Arginine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N OPINTGHFESTVAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DXJZITDUDUPINW-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O DXJZITDUDUPINW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SIGGQAHUPUBWNF-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O SIGGQAHUPUBWNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Serine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к биомедицинским технологиям, а конкретно к группе методов, направленных на изменение проводимости клеточных мембран для управления активностью клеток. Предложена нуклеиновая кислота, кодирующая термочувствительный канал TRPV1 человека с измененной ионной селективностью (TRPV1ΔCa2+), обеспечивающий деполяризацию клеточной мембраны и лишенный проводимости двухвалентных катионов кальция, имеющий последовательность SEQ ID NO: 01. Технический результат, достигаемый при осуществлении изобретения, заключается в исключении повреждения и гибели возбудимых клеток за счет перегруза их ионами кальция во время термогенетического управления трансмембранным транспортом катионов с использованием канала TRPV1 человека. 5 ил., 1 пр.
Description
Изобретение относится к биомедицинским технологиям, а конкретно к группе методов, направленных на изменение проводимости клеточных мембран для управления активностью клеток. Оно может быть использовано для фундаментальных исследований в областях нейробиологии и физиологии, а также создания медицинских технологий, направленных на компенсацию функционального дефицита клеток, тканей и органов человека, скрининга лекарственных препаратов.
Нативные и генно-инженерные белки, обладающие уникальными свойствами, находят широкое практическое применение в биомедицине, благодаря возможности контролировать использование их уникальных свойств в пространстве и времени. Среди них особое место занимают белки, которые, реагируя тем или иным образом на специфические физические и химические стимулы, запускают трансмембранный транспорт различных ионов, вызывая де- или гиперполяризацию клеточной мембраны. Таким образом, воздействуя на эти белки, можно управлять мембранным потенциалом и, следовательно, активностью возбудимых клеток таких, как, например, нервные клетки, мышечные клетки и кардиомиоциты. Экспрессия этих белков в целевых клетках путем трансгенеза широко применяется в фундаментальных научных исследованиях в областях нейробиологии и физиологии, а также служит основой для разработки новых медицинских технологий для компенсации функционального дефицита клеток, тканей и органов человека.
На момент подачи заявки из открытых источников было известно о следующих способах управления трансмембранным транспортом ионов.
Наиболее распространенным методом управления мембранным потенциалом клеток является оптогенетика. В основе метода лежит гетерологичная экспрессия в возбудимых клетках, например, в нейронах светочувствительных ионных каналов водорослей Channelrhodopsin-1 (ChR1), Channelrhodopsin-2 (ChR2) и других [Klapoetke N.C., Murata Y., Kim S.S., Pulver S.R., Birdsey-Benson A., Cho Y.K., Morimoto Т.К., Chuong A.S., Carpenter E.J., Tian Z., Wang J., Xie Y., Yan Z., Zhang Y., Chow B.Y., Surek В., Melkonian M., Jayaraman V., Constantine-Paton M., Wong G.K., Boyden E.S. Independent optical excitation of distinct neural populations. // Nature Methods. 2014. Т. 11. №3. C. 338-46] или их искусственных вариантов, полученных путем мутагенеза (US 2016096036 A1, WO 2021193731 A1, US 2019218256 A1). Эти ионные каналы при облучении их светом с соответствующей длиной волны открываются и пропускают внутрь клетки одновалентные ионы натрия. Это вызывает деполяризацию клеточной мембраны и, как следствие, генерацию потенциала действия.
Помимо активации нервных клеток, оптогенетика успешно используется для управления сокращением мышц [Vogt М., Schulz В., Wagdi A., Lebert J., van Belle G.J., Christoph J., Bruegmann Т., Patejdl R. Direct optogenetic stimulation of smooth muscle cells to control gastric contractility. // Theranostics. 2021. T. 11. №11. C. 5569-84] и сердечным ритмом [Arrenberg A.B., Stainier D.Y.R., Baier H., Huisken J. // Science. 2010. T. 330. №6006. C. 971-74; Bruegmann Т., Malan D., Hesse M., Beiert Т., Fuegemann C.J., Fleischmann B.K., Sasse P. Optogenetic control of heart muscle in vitro and in vivo. // Nature Methods. 2010. T. 7. №11. C. 897-900], а также для восстановления зрительной функции при некоторых видах слепоты у человека [Sahel J.-A., Boulanger-Scemama Е., Pagot С, Arleo A., Galluppi F., Martel J.N., Esposti S.D., Delaux A., de Saint Aubert J.-B., de Montleau C, Gutman E., Audo I., Duebel J., Picaud S., Dalkara D., Blouin L., Taiel M., Roska B. Partial recovery of visual function in a blind patient after optogenetic therapy. // Nature Medicine. 2021. T. 27. №7. C. 1223-29].
Главным недостатком оптогенетики является низкая проводимость светочувствительных каналов, из-за которой необходимо использовать свет высокой интенсивности, чтобы вызвать токи ионов, достаточные для изменения мембранного потенциала. В результате использования света высокой интенсивности происходит фототоксическое повреждение биологических тканей, что влияет на результаты научных исследований и ограничивает практическое применение оптогенентики.
Кроме того, практическое применение оптогенетики ограничено тем, что используемые светочувствительные каналы происходят из водорослей, архей и бактерий. Поэтому при их синтезе в организме человека и даже в центральной нервной системе, отделенной гематоэнцефалическим барьером, сохраняется риск конфликта с иммунитетом, который может привести к повреждению биологических тканей.
Еще одним подходом для управления активностью нервных клеток является применение генно-инженерных белков на основе G-белок зависимых рецепторов, которые мутированы таким образом, чтобы реагировать на какой-либо инертный для организма лиганд. Такой подход называют хемогенетикой. Наиболее широкое распространение получила технология DREADD (от англ. яз. designer receptor exclusively activated by designer drugs) (US 2019083652 A1, US 2021077635 A1). Она включает генно-инженерные белки на основе активирующего мускаринового ацетилхолинового рецептора М3 (hM3Dq) и ингибиторного мускаринового ацетилхоинового рецептора М4 (hM4Di). Связывание синтетического инертного лиганда клозапин-N-оксида с hM3Dq или hM4Di ведет либо к активации, либо к торможению нервных клеток соответственно. Главный недостаток хемогенетики заключается в том, что с помощью этого метода трудно контролировать активность генно-инженерных G-белок зависимых рецепторов, поскольку она зависит от локальной концентрации и кинетики распространения синтетического лиганда. Это ограничивает применение хемогенетики для управления быстрыми процессами.
Наиболее перспективной альтернативой опто- и хемогенетике является термогенетика. Эта технология эксплуатирует термочувствительные каналы надсемейства TRP (transient receptor potential channels, каналы временного рецепторного потенциала) преимущественно TRPV1 и TRPA1 [Ermakova Y.G., Lanin А.А., Fedotov I.V., Roshchin M., Kelmanson I.V., Kulik D., Bogdanova Y.A., Shokhina A.G., Bilan D.S., Staroverov D.B., Balaban P.M., Fedotov A.B., Sidorov-Biryukov D.A., Nikitin E.S., Zheltikov A.M., Belousov V. v. Thermogenetic neurostimulation with single-cell resolution. // Nature Communications. 2017. T. 8. №1. C. 15362; Roshchin M., Ermakova Y.G., Lanin A.A., Chebotarev A.S., Kelmanson I. v., Balaban P.M., Zheltikov A.M., Belousov V.V., Nikitin E.S. Thermogenetic stimulation of single neocortical pyramidal neurons transfected with TRPV1-L channels. //Neuroscience Letters. 2018. T. 687. C. 153-57., Yang Y., Pacia C.P., Ye D., Zhu L., Baek H., Yue Y., Yuan J., Miller M.J., Cui J., Culver J.P., Bruchas M.R., Chen H. Sonothermogenetics for noninvasive and cell-type specific deep brain neuromodulation. // Brain Stimulation. 2021. T. 14. №4. C. 790-800]. TRP каналы плазматической мембраны клеток относятся к семейству неселективных катионных каналов и являются сенсорами для широкого спектра физических и химических стимулов, таких как тепло, холод, механическое воздействие, рН, осмолярность и целый ряд химических соединений эндогенного и экзогенного происхождения. Активация этих каналов соответствующими стимулами вызывает изменение мембранного потенциала, запускает трансмембранный транспорт различных ионов, преимущественно кальция и натрия.
Управление работой TRP каналов при их гетерологичной экспрессии в клетках осуществляется путем незначительного нагрева, который не приводит к термическому повреждению клеточных компонентов и гибели клеток. Нагрев клеток может быть осуществлен путем их облучения инфракрасным лазером с длиной волны в диапазоне примерно 1300-1400 нм или с помощью сфокусированного ультразвука высокой интенсивности [Ermakova Y.G., Lanin А.А., Fedotov I. v., Roshchin M., Kelmanson I. v., Kulik D., Bogdanova Y.A., Shokhina A.G., Bilan D.S., Staroverov D.B., Balaban P.M., Fedotov A.B., Sidorov-Biryukov D.A., Nikitin E.S., Zheltikov A.M., Belousov V. v. Thermogenetic neurostimulation with single-cell resolution. // Nature Communications. 2017. T. 8. №1. C. 15362, Roshchin M., Ermakova Y.G., Lanin A.A., Chebotarev A.S., Kelmanson I. v., Balaban P.M., Zheltikov A.M., Belousov V. v., Nikitin E.S. Thermogenetic stimulation of single neocortical pyramidal neurons transfected with TRPV1-L channels. //Neuroscience Letters. 2018. T. 687. C. 153-57, Yang Y., Pacia C.P., Ye D., Zhu L., Baek H., Yue Y., Yuan J., Miller M.J., Cui J., Culver J.P., Bruchas M.R., Chen H. Sonothermogenetics for noninvasive and cell-type specific deep brain neuromodulation. // Brain Stimulation. 2021. T. 14. №4. C. 790-800].
Таким образом, с помощью термогенетики можно управлять активностью нервных клеток [Ermakova Y.G., Lanin А.А., Fedotov I. v., Roshchin M., Kelmanson I. v., Kulik D., Bogdanova Y.A., Shokhina A.G., Bilan D.S., Staroverov D.B., Balaban P.M., Fedotov A.B., Sidorov-Biryukov D.A., Nikitin E.S., Zheltikov A.M., Belousov V. v. Thermogenetic neurostimulation with single-cell resolution. // Nature Communications. 2017. T. 8. №1. C. 15362, Roshchin M., Ermakova Y.G., Lanin A.A., Chebotarev A.S., Kelmanson I. v., Balaban P.M., Zheltikov A.M., Belousov V. v., Nikitin E.S. Thermogenetic stimulation of single neocortical pyramidal neurons transfected with TRPV1-L channels. //Neuroscience Letters. 2018. T. 687. C. 153-57].
Одним из преимуществ термочувствительных TRP каналов, используемых в термогенетике, по сравнению со светочувствительными каналродопсинами, применяемыми в оптогенетике, является более чем на три порядка более высокая проводимость. Так, проводимость канала TRPV1 крысы для ионов натрия оценивается в 80 pS [Tominaga М., Caterina M.J., Malmberg А.В., Rosen T.A., Gilbert H., Skinner K., Raumann B.E., Basbaum A.I., Julius D. The Cloned Capsaicin Receptor Integrates Multiple Pain-Producing Stimuli. // Neuron. 1998. Т. 21. №3. С. 531-43], в то время как проводимость каналродопсина ChR2 составляет порядка 40 fS [Feldbauer K., Zimmermann D., Pintschovius V., Spitz J., Bamann C., Bamberg E. Channelrhodopsin-2 is a leaky proton pump.// Proceedings of the National Academy of Sciences. 2009. T. 106. №30. C. 12317-12322], что в 2000 раз меньше. В отличие от плохо контролируемой химической активации, которая используется в хемогенетике, быстрая активация TRP каналов облучением инфракрасным лазером или с помощью сфокусированного ультразвука высокой интенсивности не только позволяет управлять динамическими процессами, но еще и дозировать воздействие.
Известно, что для управления мембранным потенциалом с помощью термогенетики использовались только нативные TRPV1 и TRPA1 каналы различных организмов. Один из недостатков термогенетики на основе нативных TRP каналов, и в частности на основе канала TRPV1 заключается в том, что поступление ионов кальция в клетки через эти каналы может приводить перегрузу клеток кальцием, который при высоких концентрациях может оказывать цитотоксический эффект [Beider K., Rosenberg Е., Dimenshtein-Voevoda V., Sirovsky Y., Vladimirsky J., Magen H., Ostrovsky O., Shimoni A., Bromberg Z., Weiss L., Peled A., Nagler A. Blocking of Transient Receptor Potential Vanilloid 1 (TRPV1) promotes terminal mitophagy in multiple myeloma, disturbing calcium homeostasis and targeting ubiquitin pathway and bortezomib-induced unfolded protein response.// Journal of Hematology & Oncology. 2020. T. 13. №1. C. 158; Kahya M.C., Naziroglu M., Modulation of Diabetes-Induced Oxidative Stress, Apoptosis, and Ca2+ Entry Through TRPM2 and TRPV1 Channels in Dorsal Root Ganglion and Hippocampus of Diabetic Rats by Melatonin and Selenium. // Molecular Neurobiology. 2017. T. 54. №3. C. 2345-2360; Olivan-Viguera A., Garcia-Otin A.L., Lozano-Gerona J., Abarca-Lachen E., Garcia-Malinis A.J., Hamilton K.L., Gilaberte Y., Pueyo E., R. Pharmacological activation of TRPV4 produces immediate cell damage and induction of apoptosis in human melanoma cells and HaCaT keratinocytes. // PLOS ONE. 2018. Т. 13. №1. С.e0190307; Stueber Т., Eberhardt M.J., Caspi Y., Lev S., Binshtok A., Leffler A. Differential cytotoxicity and intracellular calcium-signalling following activation of the calcium-permeable ion channels TRPV1 and TRPA1. // Cell Calcium. 2017. T. 68. C. 34-44; Sun Z., Han J., Zhao W., Zhang Y., Wang S., Ye L., Liu Т., Zheng L. TRPV1 Activation Exacerbates Hypoxia/Reoxygenation-Induced Apoptosis in H9C2 Cells via Calcium Overload and Mitochondrial Dysfunction. // International Journal of Molecular Sciences. 2014. T. 15. №10. C. 18362-18380; Wang S., Wang S., Asgar J., Joseph J., Ro J.Y., Wei F., Campbell J.N., Chung M.-K. Ca2+ and calpain mediate capsaicin-induced ablation of axonal terminals expressing transient receptor potential vanilloid 1. // Journal of Biological Chemistry. 2017. T. 292. №20. C. 8291-8303]. Риск перегруза клеток ионами кальция при использовании термочувствительных TRP каналов в качестве инструментов термогенетики является ограничивающим фактором для данной биомедицинской технологии.
Нами поставлена задача - исключить риск повреждения и гибели возбудимых клеток в результате перегруза их ионами кальция при использовании канала TRPV1 человека в качестве термогенетического инструмента для управления трансмембранным транспортом катионов.
Технический результат, достигаемый при осуществлении изобретения, заключается в исключении повреждения и гибели возбудимых клеток за счет перегруза их ионами кальция во время термогенетического управления трансмембранным транспортом катионов с использованием канала TRPV1 человека.
Сущность изобретения заключается в следующем.
Предложена нуклеиновая кислота, кодирующая термочувствительный канал TRPV1 человека с измененной ионной селективностью, обеспечивающий деполяризацию клеточной мембраны и лишенный проводимости двухвалентных катионов кальция (TRPV1ΔCa2+), имеющий последовательность SEQ ID NO: 1.
При транскрипции и трансляции в клетках организмов предлагаемой нуклеиновой кислоты, созданной в рамках настоящего изобретении с помощью рекомбинантных технологий, образуется катионный канал TRPV1ΔCa2+ с измененной ионной селективностью, который деполяризует мембрану клеток при нагреве или действии агониста капсаицина, но при этом остается непроницаемым для двухвалентных ионов кальция.
Таким образом, при использовании TRPV1ΔCa2+ в качестве термогенетического инструмента для управления мембранным потенциалом клеток исключается возможность перегруза их ионами кальция, что в конечном счете предотвращает повреждение и гибель клеток в результате цитотоксического эффекта высоких концентраций внутриклеточного кальция.
Для решения проблемы мы предложили внести аминокислотные замены в поровую петлю канала TRPV1 человека, которая определяет ионную селективность поры канала [Liao М., Cao Е., Julius D., Cheng Y. Structure of the TRPV1 ion channel determined by electron cryo-microscopy. // Nature. 2013. T. 504. №7478. C. 107-112].
Замена с помощью рекомбинантных технологий изолейцина на валин и метионина на тирозин в канале TRPV1 человека в позициях 643 и 645, соответственно, привела к созданию варианта канала TRPV1 человека с измененной селективностью. Созданный таким образом вариант канала TRPV1 человека, названный нами TRPV1ACa2+ и определяемый аминокислотной последовательностью SEQ ID: 1, сохранил способность деполяризовать клетки при нагреве или действии агониста, но в отличие от нативного канала он стал непроницаем для двухвалентных катионов кальция.
Таким образом, настоящее изобретение представляет собой нуклеиновую кислоту, при транскрипции и трансляции которой в клетках образуется термочувствительный катионный канал TRPV1ΔCa2+ с аминокислотной последовательностью, определяемой SEQ ID NO: 1.
Также, как и нативный канал TRPV1 человека с аминокислотной последовательностью, определяемой идентификационным номером САВ66735.1 в базе данных NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov), TRPV1ΔСа2+ при его синтезе в клетках вызывает деполяризацию клеточной мембраны и поэтому может быть использован наравне с нативным TRPV1 человека для термогенетического управления мембранным потенциалом.
Однако, в отличие от нативного канала TRPV1 человека TRPV1ΔCa2+ не проводит двухвалентные катионы кальция в результате внесения с помощью рекомбинантных технологий изменений в кодирующую его нуклеотидную последовательность, которые привели к аминокислотным заменам в поровой петле, определяющей ионную селективность канала. Изолейцин в позиции 643 был заменен на валин, и метионин в позиции 645 был заменен на тирозин.
Настоящее изобретение представляет собой нуклеиновую кислоту, которая кодируют полипептидную цепь с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 1. Данная полипептидная цепь является одной субъединицей катионного канала TRPV1ΔCa2+ с измененной ионной селективностью. Она была получена путем внесения точечных аминокислотных замен в последовательность нативного термочувствительного канала TRPV1 человека, определяемую идентификационным номером САВ66735.1 в базе данных NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov). Для практической реализации изобретения в нуклеотидную последовательность открытой рамки считывания, кодирующей нативный канал TRPV1 человека, с использованием методов молекулярного клонирования [Green M.R and Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. 2012. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.] вносили замены таким образом, чтобы кодон в позиции 643 кодировал валин (Val), а кодон в позиции 645 кодировал тирозин (Tyr) вместо изолейцина (Ile) и метионина (Met) соответственно (Фиг. 1). На Фиг. 1 представлены выравненные аминокислотные последовательности нативного канала TRPV1 человека и генно-инженерного катионного канала TRPV1ΔСа2+ с измененной ионной селективностью, а критические замены Ile643Val и Met645Tyr выделены темным фоном. Эти замены производятся в так называемой поровой петле, которая выполняет роль фильтра ионной селективности [Liao М., Сао Е., Julius D., Cheng Y. Structure of the TRPV1 ion channel determined by electron cryo-microscopy. //Nature. 2013. T. 504. №7478. C. 107-112].
Для внесения в последовательность канала аминокислотных замен Ile643Val и Met645Tyr фрагмент открытой рамки считывания, кодирующий первые 803 аминокислоты нативного канала TRPV1 человека, был клонирован в плазмидный вектор pAL2-T.
С использованием данной конструкции в качестве матрицы была проведена полимеразная цепная реакция (ПЦР) с праймерами F1 и R1, нематричная часть 5'-конца которых вносила соответствующие нуклеотидные замены. При этом были использованы: прямой праймер F1, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2 и обратный праймер R1, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 3 для внесения нуклеотидных замен в кДНК, кодирующую канал TRPV1 человека для получения канала TRPV1 человека с измененной ионной селективностью, обеспечивающего деполяризацию клеточной мембраны и лишенного проводимости двухвалентных катионов кальция (TRPV1ΔCa2+). Для аминокислотной замены Ile643Val кодон АТС был заменен на кодон GTG, для аминокислотной замены Met645Tyr кодон ATG был заменен на ТАС. Далее ПЦР-продукт был кинирован с помощью Т4 полинуклеотидкиназы. После лигирования в течение ночи при температуре 14°С лигазную смесь использовали для трансформации компетентных клеток XL 1-Blue. Успешность внесения замен была подтверждена секвенированием. По присутствующим в последовательности канала сайтам рестрикции Drain и Smal содержащий замены фрагмент был переклонирован в вектор pCAGGS. Полученный конечный вектор содержит открытую рамку считывания, имеющую нуклеотидную последовательность, кодирующую катионный канал TRPV1ΔСа2+ с измененной ионной селективностью.
Полученная нуклеиновая кислота может быть использована в дальнейшем для получения организмов трансформантов, в клетках которых продуцируется катионный канал TRPV1ΔCa2+ с измененной ионной селективностью. Встраивание нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению в про- и эукариотические организмы может осуществляться всеми известными способами получения трансгенных организмов (все виды трансформации, трансфекции, трансдукции и рекомбинации) [Green M.R and Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. 2012. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Pinkert C. Transgenic animal technology: a laboratory handbook. 2002. Academic Press, Amsterdam; Boston; Joyner A.L. Gene targeting: a practical approach, Practical Approach Series. 2000. Oxford University Press, Oxford, New York],
При этом экспрессионная кассета, включающая регион инициации транскрипции, открытую рамку считывания, кодирующую катионный канал TRPV1ΔCa2+ с измененной ионной селективностью, и регион терминации транскрипции, может присутствовать в клетке-хозяине как в виде нехромосомного элемента, так и в виде элемента, встроенного в клеточный геном, исключая клетки зародышевой линии человека. В результате транскрипции и трансляции открытой рамки считывания в клетках, содержащих трансген, продуцируются полипептидные цепи одной субъединицы катионного канала TRPV1ΔCa2+ с измененной ионной селективностью. Продуцируемые субъединицы посредством межмолекулярных взаимодействий объединяются в гомотетрамерную структуру, образуя таким образом функциональный канал, способный деполяризовать клеточную мембрану в отсутствие при этом проводимости катионов кальция.
Следующий пример предлагается в качестве иллюстративного, но не ограничивающего иные применения генно-инженерного канала TRPV1ΔСа2+.
Пример.
Деполяризация клеточной мембраны без участия катионов кальция путем активации TRPV1ΔCa2+.
Для проверки того, что в результате транскрипции и трансляции созданной в настоящем изобретении нуклеиновой кислоты в клетках образуется катионный канал TRPV1ΔCa2+ с измененной ионной селективностью, методами молекулярного клонирования [Green M.R and Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. 2012. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.] была создана конструкция на базе экспрессионного вектора pCAGGS, содержащая промоторный регион (синтетический промотор CAG [Jun-ichi М., Satoshi Т., Kimi A., Fumi Т., Akira Т., Kiyoshi Т., Ken-ichi Y. Expression vector system based on the chicken β-actin promoter directs efficient production of interleukin-5. // Gene. 1989. T. 79. №2. C. 269-277], открытую рамку считывания, кодирующую TRPV1ΔCa2+ и репортерный белок tdTomato [Shaner N.C., Campbell R.E., Steinbach P.A., Giepmans B.N.G., Palmer A.E., Tsien R.Y. Improved monomelic red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp.red fluorescent protein. // Nature Biotechnology. 2004. T. 22. №12. C. 1567-1572], слитые через саморасщепляющийся пептид р2А [Liu Z., Chen О., Wall J.B J., Zheng M., Zhou Y., Wang L., Ruth Vaseghi H., Qian L., Liu J. Systematic comparison of 2A peptides for cloning multi-genes in a polycistronic vector. // Scientific Reports. 2017. T. 7. №1. C. 2193], посттрансляционный элемент WPRE [Zufferey R., Donello J.E., Trono D., Hope T.J. Woodchuck Hepatitis Virus Posttranscriptional Regulatory Element Enhances Expression of Transgenes Delivered by Retroviral Vectors. // Journal of Virology. 1999. T. 73. №4. C. 2886-2892] и сигнал полиаденелирования (bGH poly (A)) [Goodwin E.C., Rottman F.M. The 3'-flanking sequence of the bovine growth hormone gene contains novel elements required for efficient and accurate polyadenylation. // The Journal of biological chemistry. 1992. T. 267. №23. C. 16330-4] (Фиг. 2).
На фиг. 2 представлена генетическая конструкция на базе экспрессионного вектора pCAGGS для экспрессии генно-инженерного канала TRPV1ΔCa2+ с измененной ионной селективностью. Конструкция содержит синтетический промотор CAG, открытую рамку считывания, кодирующую TRPV1ΔCa2+ и репортерный белок tdTomato, слитые через саморасщепляющийся пептид р2А, посттрансляционный элемент WPRE и сигнал полиаденелирования (bGH poly (А)). Название полученного вектора - pCAGGS-CAG-TRPV1ΔCa2+-p2A-tdTomato.
Аналогичная конструкция, в которой последовательность, кодирующая катионный канал TRPV1ΔCa2+, была заменена на последовательность, кодирующую нативный канал TRPV1 человека, использовалась для сравнения электрофизиологических свойств и способности проводить катионы кальция в клетках, экспрессирующих трансгены. Полученный вектор с нативным каналом TRPV1 человека был назван pCAGGS-CAG-TRPV1-p2A-tdTomato.
Наработанные и очищенные плазмидные векторы, содержащие конструкции с последовательностями, кодирующими TRPV1ΔCa2+ и нативный TRPV1 человека, использовались для трансфекции клеток линии HEK293.
Для регистрации изменений внутриклеточной концентрации катионов кальция в ответ на температурную стимуляцию или на действие агониста TRPV1 канала капсаицина клетки дополнительно подвергались трансфекции плазмидным вектором pCS2+, содержащим последовательность флуоресцентного кальциевого сенсора GCaMP6s [Chen T.-W., Wardill T.J., Sun Y., Pulver S.R., Renninger S.L., Baohan A., Schreiter E.R., Kerr R.A., Orger M.B., Jayaraman V., Looger L.L., Svoboda K., Kim D.S. Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity. // Nature. 2013. T. 499. №7458. C. 295-300], находящуюся под контролем промоторного региона CMV.
В тех клетках, в которых детектировался сигнал репортерного красного флуоресцентного белка tdTomato, проводился анализ их способности отвечать на термоактивацию или действие агониста капсаицина путем регистрации токов через клеточную мембрану или изменений внутриклеточной концентрации катионов кальция.
Регистрацию токов через клеточную мембрану осуществляли методом патч-кламп [The Axon Guide for Electrophysiology and Biophysics Laboratory Techniques, by R. Sherman-Gold (Editor) Axon Instruments, Inc, Part Number 2500-102 Rev A. Printed in U.S.A., 1993] на клетках линии HEK293, трансфецированных плазмидным вектором pCAGGS-CAG-TRPV1ΔCa2+-p2A-tdTomato или pCAGGS-CAG-TRPV1-p2A-tdTomato, в режиме удержания мембранного потенциала -20 мВ. На клетку, от которой производится электрофизиологическое отведение, через стеклянный микрокапилляр, подведенный непосредственно к самой клетке, подавался физиологический буферный раствор, содержащий 10 мкМ капсаицина. Капсаицин, связываясь с соответствующим сайтом связывания на канале TRPV1ΔCa2+ или на нативном канале TRPV1, вызывал возникновение токов через мембрану, направленных внутрь клетки (Фиг. 3).
На Фиг. 3 представлены изменения тока через мембрану клеток, экспрессирующих канал TRPV1ACa2+ (1) или нативный канал TRPV1 (2), на кратковременное действие 10 мкМ капсаицина (3). Активация капсаицином канала TRPV1ΔCa2+ вызывает ток, направленный внутрь клетки. Токи, направленные внутрь клетки, вызывают деполяризацию клеточной мембраны.
Кальциевый имиджинг (визуализация изменений концентрации внутриклеточного кальция) на клетках, трансфецированных плазмидными векторами, проводился с использованием эпифлуоресцентного микроскопа. Флуоресцентный кальциевый сенсор GCaMP6s возбуждался светом диодного осветителя с длиной волны 470 нм. Регистрацию сигнала флуоресценции осуществляли с помощью цифровой камеры в режиме периодической записи изображений с интервалом 1 сек. С помощью программных средств определяли среднее значение сигнала от каждой клетки, экспрессирующей либо канал TRPV1ΔCa2+ (1), либо нативный канал TRPV1 человека. Сигнал далее усреднялся по более чем ста клеткам и нормализовался на среднее значение интенсивности флуоресценции в первые 60 циклов записи (первые 60 сек каждой съемки). Далее строились кривые зависимости нормализованного сигнала от времени. Термоактивацию канала TRPV1ΔСа2+ или нативного канала TRPV1 человека осуществляли путем последовательного нагрева окружающего клетки физиологического буферного раствора с 37°С до 39, 41 и 43°С на 30 сек с интервалом между нагревами в 90 сек. Анализ сигнала в клетках, экспрессирующих канал TRPV1ΔСа2+, не выявил изменений концентрации внутриклеточного кальция при нагревах в отличие от клеток, экспрессирующих нативный канал TRPV1 человека, в которых эти изменения были (Фиг. 4).
На Фиг. 4 представлены усредненные ответы клеток на нагревы (сплошная линия, шкала слева) и температура окружающего физиологического буфера (пунктирная линия, шкала слева). Аналогичным образом добавление капсицина (конечная концентрация 10 мкМ) к клеткам, экспрессирующим канал TRPV1ΔСа2+, не вызывала изменений концентрации внутриклеточного кальция, тогда клетки с нативным каналом TRPV1 человека демонстрировали увеличение сигнала флуоресценции кальциевого сенсора в ответ на добавление капсаицина в той же концентрации (Фиг. 5).
На фиг. 5 представлены усредненные ответы клеток (изменение интенсивности сигнала флуоресцентного кальциевого сенсора GCaMP6s) на добавление 10 мкМ капсаицина.
Суммарно, полученные данные подтверждают, что канал TRPV1ΔСа2+ деполяризует клеточную мембрану в отсутствие проводимости двухвалентных катионов кальция.
Настоящее изобретение не предназначено для модификации генетической целостности клеток зародышевой линии человека, не предполагает использование человеческих эмбрионов.
--->
Перечень последовательностей
<110> Федеральное государственное автономное образовательное учреждение
высшего образования «Российский национальный исследовательский медицинский
университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской
Федерации (Federalnoe gosudarstvennoe autonomnoe obrazovatelnoe uchrezhdenie
vysshego obrazovaniya «Rossijskij natsionalnyj issledovatelskij meditsinskij
universitet imeni N.I. Pirogova» Ministerstva zdravookhraneniya Rossijskoj
Federatsii)
<120> Нуклеиновая кислота, кодирующая термочувствительный канал TRPV1 человека
с измененной ионной селективностью для управления мембранным потенциалом клеток
<160> 3
<210> SEQ ID NO: 1
<211> 839
<212> ПРТ
<213> Искусственная
<220>
<221> Мутаген
<222> (643), (645)
<223> Термочувствительный канал TRPV1 человека с измененной ионной
селективностью, обеспечивающий деполяризацию клеточной мембраны и лишенный
проводимости двухвалентных катионов кальция (TRPV1ΔCa2+)
<400> 1
Met Lys Lys Trp Ser Ser Thr Asp Leu Gly Ala Ala Ala Asp Pro Leu
1 5 10 15
Gln Lys Asp Thr Cys Pro Asp Pro Leu Asp Gly Asp Pro Asn Ser Arg
20 25 30
Pro Pro Pro Ala Lys Pro Gln Leu Ser Thr Ala Lys Ser Arg Thr Arg
35 40 45
Leu Phe Gly Lys Gly Asp Ser Glu Glu Ala Phe Pro Val Asp Cys Pro
50 55 60
His Glu Glu Gly Glu Leu Asp Ser Cys Pro Thr Ile Thr Val Ser Pro
65 70 75 80
Val Ile Thr Ile Gln Arg Pro Gly Asp Gly Pro Thr Gly Ala Arg Leu
85 90 95
Leu Ser Gln Asp Ser Val Ala Ala Ser Thr Glu Lys Thr Leu Arg Leu
100 105 110
Tyr Asp Arg Arg Ser Ile Phe Glu Ala Val Ala Gln Asn Asn Cys Gln
115 120 125
Asp Leu Glu Ser Leu Leu Leu Phe Leu Gln Lys Ser Lys Lys His Leu
130 135 140
Thr Asp Asn Glu Phe Lys Asp Pro Glu Thr Gly Lys Thr Cys Leu Leu
145 150 155 160
Lys Ala Met Leu Asn Leu His Asp Gly Gln Asn Thr Thr Ile Pro Leu
165 170 175
Leu Leu Glu Ile Ala Arg Gln Thr Asp Ser Leu Lys Glu Leu Val Asn
180 185 190
Ala Ser Tyr Thr Asp Ser Tyr Tyr Lys Gly Gln Thr Ala Leu His Ile
195 200 205
Ala Ile Glu Arg Arg Asn Met Ala Leu Val Thr Leu Leu Val Glu Asn
210 215 220
Gly Ala Asp Val Gln Ala Ala Ala His Gly Asp Phe Phe Lys Lys Thr
225 230 235 240
Lys Gly Arg Pro Gly Phe Tyr Phe Gly Glu Leu Pro Leu Ser Leu Ala
245 250 255
Ala Cys Thr Asn Gln Leu Gly Ile Val Lys Phe Leu Leu Gln Asn Ser
260 265 270
Trp Gln Thr Ala Asp Ile Ser Ala Arg Asp Ser Val Gly Asn Thr Val
275 280 285
Leu His Ala Leu Val Glu Val Ala Asp Asn Thr Ala Asp Asn Thr Lys
290 295 300
Phe Val Thr Ser Met Tyr Asn Glu Ile Leu Ile Leu Gly Ala Lys Leu
305 310 315 320
His Pro Thr Leu Lys Leu Glu Glu Leu Thr Asn Lys Lys Gly Met Thr
325 330 335
Pro Leu Ala Leu Ala Ala Gly Thr Gly Lys Ile Gly Val Leu Ala Tyr
340 345 350
Ile Leu Gln Arg Glu Ile Gln Glu Pro Glu Cys Arg His Leu Ser Arg
355 360 365
Lys Phe Thr Glu Trp Ala Tyr Gly Pro Val His Ser Ser Leu Tyr Asp
370 375 380
Leu Ser Cys Ile Asp Thr Cys Glu Lys Asn Ser Val Leu Glu Val Ile
385 390 395 400
Ala Tyr Ser Ser Ser Glu Thr Pro Asn Arg His Asp Met Leu Leu Val
405 410 415
Glu Pro Leu Asn Arg Leu Leu Gln Asp Lys Trp Asp Arg Phe Val Lys
420 425 430
Arg Ile Phe Tyr Phe Asn Phe Leu Val Tyr Cys Leu Tyr Met Ile Ile
435 440 445
Phe Thr Met Ala Ala Tyr Tyr Arg Pro Val Asp Gly Leu Pro Pro Phe
450 455 460
Lys Met Glu Lys Ile Gly Asp Tyr Phe Arg Val Thr Gly Glu Ile Leu
465 470 475 480
Ser Val Leu Gly Gly Val Tyr Phe Phe Phe Arg Gly Ile Gln Tyr Phe
485 490 495
Leu Gln Arg Arg Pro Ser Met Lys Thr Leu Phe Val Asp Ser Tyr Ser
500 505 510
Glu Met Leu Phe Phe Leu Gln Ser Leu Phe Met Leu Ala Thr Val Val
515 520 525
Leu Tyr Phe Ser His Leu Lys Glu Tyr Val Ala Ser Met Val Phe Ser
530 535 540
Leu Ala Leu Gly Trp Thr Asn Met Leu Tyr Tyr Thr Arg Gly Phe Gln
545 550 555 560
Gln Met Gly Ile Tyr Ala Val Met Ile Glu Lys Met Ile Leu Arg Asp
565 570 575
Leu Cys Arg Phe Met Phe Val Tyr Ile Val Phe Leu Phe Gly Phe Ser
580 585 590
Thr Ala Val Val Thr Leu Ile Glu Asp Gly Lys Asn Asp Ser Leu Pro
595 600 605
Ser Glu Ser Thr Ser His Arg Trp Arg Gly Pro Ala Cys Arg Pro Pro
610 615 620
Asp Ser Ser Tyr Asn Ser Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Glu Leu Phe Lys
625 630 635 640
Phe Thr Val Gly Tyr Gly Asp Leu Glu Phe Thr Glu Asn Tyr Asp Phe
645 650 655
Lys Ala Val Phe Ile Ile Leu Leu Leu Ala Tyr Val Ile Leu Thr Tyr
660 665 670
Ile Leu Leu Leu Asn Met Leu Ile Ala Leu Met Gly Glu Thr Val Asn
675 680 685
Lys Ile Ala Gln Glu Ser Lys Asn Ile Trp Lys Leu Gln Arg Ala Ile
690 695 700
Thr Ile Leu Asp Thr Glu Lys Ser Phe Leu Lys Cys Met Arg Lys Ala
705 710 715 720
Phe Arg Ser Gly Lys Leu Leu Gln Val Gly Tyr Thr Pro Asp Gly Lys
725 730 735
Asp Asp Tyr Arg Trp Cys Phe Arg Val Asp Glu Val Asn Trp Thr Thr
740 745 750
Trp Asn Thr Asn Val Gly Ile Ile Asn Glu Asp Pro Gly Asn Cys Glu
755 760 765
Gly Val Lys Arg Thr Leu Ser Phe Ser Leu Arg Ser Ser Arg Val Ser
770 775 780
Gly Arg His Trp Lys Asn Phe Ala Leu Val Pro Leu Leu Arg Glu Ala
785 790 795 800
Ser Ala Arg Asp Arg Gln Ser Ala Gln Pro Glu Glu Val Tyr Leu Arg
805 810 815
Gln Phe Ser Gly Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Glu Val Phe Lys Ser
820 825 830
Pro Ala Ala Ser Gly Glu Lys
835
<210> SEQ ID NO: 2
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Прямой праймер F1 для внесения нуклеотидных замен в кДНК, кодирующую
канал TRPV1 человека для получения канала TRPV1 человека с измененной ионной
селективностью, обеспечивающего деполяризацию клеточной мембраны и лишенного
проводимости двухвалентных катионов кальция (TRPV1ΔCa2+)
<400> 2
tacggcgacc tggagttcac tg 22
<210> SEQ ID NO: 3
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная
<220>
<223> Обратный праймер R1 для внесения нуклеотидных замен в кДНК, кодирующую
канал TRPV1 человека для получения канала TRPV1 человека с измененной ионной
селективностью, обеспечивающего деполяризацию клеточной мембраны и лишенного
проводимости двухвалентных катионов кальция (TRPV1ΔCa2+)
<400> 3
gcccacggtg aacttgaaca gctc 24
<---
Claims (1)
- Нуклеиновая кислота, кодирующая термочувствительный канал TRPV1 человека с измененной ионной селективностью, обеспечивающий деполяризацию клеточной мембраны и лишенный проводимости двухвалентных катионов кальция, имеющий последовательность SEQ ID NO: 1.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2784086C1 true RU2784086C1 (ru) | 2022-11-23 |
Family
ID=
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2430750C2 (ru) * | 2006-02-21 | 2011-10-10 | Айрм Ллк | Способы и композиции для лечения гипералгезии |
RU2022100590A (ru) * | 2015-03-31 | 2022-03-10 | Облик Терапьютикс Аб | Новые способы селекции эпитопов |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2430750C2 (ru) * | 2006-02-21 | 2011-10-10 | Айрм Ллк | Способы и композиции для лечения гипералгезии |
RU2022100590A (ru) * | 2015-03-31 | 2022-03-10 | Облик Терапьютикс Аб | Новые способы селекции эпитопов |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Lina Duo, Ting Wu и др., Gain of Function of Ion Channel TRPV1 Exacerbates Experimental Colitis by Promoting Dendritic Cell Activation, Molecular Therapy: Nucleic Acids Vol. 22 December 2020, P924-936. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5544659B2 (ja) | 改変された光受容体チャネル型ロドプシンタンパク質 | |
US8759492B2 (en) | Engineered red-shifted channelrhodopsin variants | |
JP5866332B2 (ja) | 感光性イオンを通過させる分子 | |
ES2724803T3 (es) | Polipéptidos opsinas y métodos de utilización de los mismos | |
US9163094B2 (en) | Light-activated fusion proteins and uses therefor | |
JP2006217866A (ja) | 光感受性を新たに賦与した神経細胞 | |
US9676836B2 (en) | cDNA-derived nucleic acids encoding red-shifted channelrhodopsins | |
JP2018529335A (ja) | 光応答性ポリペプチド及びその使用方法 | |
JP7492777B2 (ja) | 光応答性タンパク質及びその利用 | |
CN107531765A (zh) | 阴离子通道视紫红质的组合物及其使用方法 | |
US20210403518A1 (en) | Bistable type ii opsins and uses thereof | |
Ma et al. | The STIM-Orai pathway: light-operated Ca 2+ entry through engineered CRAC channels | |
RU2784086C1 (ru) | Нуклеиновая кислота, кодирующая термочувствительный канал TRPV1 человека с измененной ионной селективностью для управления мембранным потенциалом клеток | |
WO2021182646A1 (ja) | 色認識のための光応答性タンパク質及びその利用 | |
EP4223768A1 (en) | Novel mutant bacteriorhodopsin-like-channelrhodopsin ion channel | |
WO2017207761A1 (en) | Mutant light-inducible ion channel of chrimson | |
Lu et al. | Optogenetics for neural tissue engineering applications | |
Qasim et al. | Optogenetics: A cellular photoactivation method and its applications in biomedical sciences | |
CN115335525A (zh) | 经修饰的通道视紫红质 | |
CA3059652A1 (en) | New optogenetic tool | |
Tochitsky | Photochemical control of neuronal activity: methods and clinical application | |
CN110267972A (zh) | 由多特征视蛋白进行的用于视力恢复的光学调制以及其其他应用 | |
Chuong | Development of next-generation optical neural silencers |