RU2774710C2 - Антитело против подокаликсина и tra-родственного белка, способы его получения и применения в качестве противоопухолевого терапевтического средства - Google Patents
Антитело против подокаликсина и tra-родственного белка, способы его получения и применения в качестве противоопухолевого терапевтического средства Download PDFInfo
- Publication number
- RU2774710C2 RU2774710C2 RU2018136094A RU2018136094A RU2774710C2 RU 2774710 C2 RU2774710 C2 RU 2774710C2 RU 2018136094 A RU2018136094 A RU 2018136094A RU 2018136094 A RU2018136094 A RU 2018136094A RU 2774710 C2 RU2774710 C2 RU 2774710C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- cells
- tra
- monoclonal antibody
- therapeutic agent
- Prior art date
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 title claims description 136
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 title claims description 136
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 16
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 21
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 19
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims description 87
- 210000001671 Embryonic Stem Cells Anatomy 0.000 claims description 36
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 21
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 claims description 12
- 108091008116 antibody drug conjugates Proteins 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 11
- 230000035693 Fab Effects 0.000 claims description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 7
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010017758 Gastric cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008443 Pancreatic Carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 claims description 5
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 claims description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 238000011068 load Methods 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 35
- 230000003211 malignant Effects 0.000 description 26
- 102000004401 Podocalyxin Human genes 0.000 description 25
- 108090000917 Podocalyxin Proteins 0.000 description 25
- 210000004408 Hybridomas Anatomy 0.000 description 18
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 14
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 12
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 12
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 12
- 201000009030 carcinoma Diseases 0.000 description 11
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 11
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 11
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 10
- 108010070144 Single-Chain Antibodies Proteins 0.000 description 10
- 102000005632 Single-Chain Antibodies Human genes 0.000 description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 10
- 210000000170 Cell Membrane Anatomy 0.000 description 9
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 102100002977 CDR1 Human genes 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic Effects 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 6
- 239000002609 media Substances 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 6
- 102000004851 Immunoglobulin G Human genes 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 230000002934 lysing Effects 0.000 description 5
- 229960002743 Glutamine Drugs 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 230000002055 immunohistochemical Effects 0.000 description 4
- 210000001072 Colon Anatomy 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000000496 Pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 3
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement Effects 0.000 description 3
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- CCUAQNUWXLYFRA-IMJSIDKUSA-N Ala-Asn Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC(N)=O CCUAQNUWXLYFRA-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000481 Breast Anatomy 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 210000003238 Esophagus Anatomy 0.000 description 2
- JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N Glu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N Gly-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N HEPES Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CN=CN1 VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000004854 Immunoglobulin M Human genes 0.000 description 2
- 231100000416 LDH assay Toxicity 0.000 description 2
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N Met-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- DASWEROEPLKSEI-UIJRFTGLSA-N Monomethyl auristatin E Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)C1=CC=CC=C1 DASWEROEPLKSEI-UIJRFTGLSA-N 0.000 description 2
- 210000000214 Mouth Anatomy 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000001672 Ovary Anatomy 0.000 description 2
- 102100004162 PODXL Human genes 0.000 description 2
- 101700030075 PODXL Proteins 0.000 description 2
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N Pro-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)[O-])C(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- 210000002307 Prostate Anatomy 0.000 description 2
- 239000007759 RPMI Media 1640 Substances 0.000 description 2
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N Ser-Gln Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Arginine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 description 2
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 2
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 2
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 2
- 231100000765 Toxin Toxicity 0.000 description 2
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 2
- BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N Val-His Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 2
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- -1 excipients Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 2
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002843 lactate dehydrogenase assay Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 2
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 2
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- OFPTZWGZSRJCOT-MSPNRCMCSA-M potassium;2-[(1S,2S,3R,4S,5S,6R)-3-(diaminomethylideneamino)-4-[(2R,3R,4R,5S)-3-[(2S,3S,4S,5R,6S)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy-2,5,6-trihydroxycyclohexyl]guanidine;(2S,5R,6R)-3,3-d Chemical compound [K+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O OFPTZWGZSRJCOT-MSPNRCMCSA-M 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive Effects 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000392 somatic Effects 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 108020003112 toxins Proteins 0.000 description 2
- UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Serine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 206010001488 Aggression Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 Bone Marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102100000248 DLC1 Human genes 0.000 description 1
- 101710031659 DLC1 Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- WZUVPPKBWHMQCE-VYIIXAMBSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@@]2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-VYIIXAMBSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 210000003734 Kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 Lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 210000002990 Parathyroid Glands Anatomy 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000952 Spleen Anatomy 0.000 description 1
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101700046225 US17 Proteins 0.000 description 1
- URRBLVUOXIGNQR-HXUWFJFHSA-N [(1R)-1-phenylethyl] N-(2-aminoethyl)-N-[(3-methoxy-4-phenylmethoxyphenyl)methyl]carbamate Chemical compound C1([C@@H](C)OC(=O)N(CCN)CC=2C=C(C(=CC=2)OCC=2C=CC=CC=2)OC)=CC=CC=C1 URRBLVUOXIGNQR-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000015861 cell surface binding Effects 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 230000001809 detectable Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal Effects 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000004547 gene signature Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000003899 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 200000000023 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N o-xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005443 oral cavity cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920003258 poly(methylsilmethylene) Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 108091005683 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035402 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биохимии, в частности к моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые обладают селективным связыванием с TRA-подокаликсином. Также раскрыто противоопухолевое терапевтическое средство для лечения злокачественного новообразования, связанного с TRA-подокаликсином, содержащее моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Изобретение обладает способностью эффективно лечить заболевания, ассоциированные с TRA-подокаликсином. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 8 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
По настоящей заявке в соответствии с 35 U.S.C. 119(e) испрашивается приоритет по предварительной патентной заявке США № 62/307690 под названием "PODOCALYXIN AND TRA-RELATED ANTIBODY, METHODS FOR PREPARATION AND USES FOR TREATMENT OF AGGRESSIVE AND/OR METASTATIC CANCER", зарегистрированной 14 марта 2016 года, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к антителу, специфическому в отношении плюрипотентных и эмбриональных стволовых клеток. Настоящее изобретение дополнительно относится к антителу, являющемуся реактивным и имеющим связывающую активность по отношению к эмбриональной форме белка подокаликсина. Настоящее изобретение дополнительно относится к противоопухолевому терапевтическому средству, включающему антитело или его фрагмент в качестве активного ингредиента для регрессирования, снижения или устранения злокачественных клеток.
Предпосылки изобретения
Нормальные эмбриональные стволовые клетки человека являются плюрипотентными стволовыми клетками, дифференцирующимися в двести различных типов клеток, составляющих организм человека. Эмбриональная карцинома представляет собой злокачественные плюрипотентные стволовые клетки человека, происходящие из опухолей половых клеток человека, и известна как злокачественный эквивалент нормальных эмбриональных стволовых клеток. Нормальные эмбриональные стволовые клетки и эмбриональная карцинома экспрессируют антигены, ассоциированные с плюрипотентностью, на поверхности их плазматической мембраны. Известно, что, по меньшей мере, некоторые антигены, ассоциированные с плюрипотентностью, утрачиваются при дифференцировке и не экспрессируются в нормальных клетках и тканях или экспрессируются на низком уровне.
Известно, что многие злокачественные новообразования человека имеют генную сигнатуру эмбриональных стволовых клеток и повторно экспрессируют антигены, ассоциированные с плюрипотентностью, и эмбриональные антигены, не присутствующие на дифференцированных клетках или присутствующие на низком уровне. Согласно теории клеточного перепрограммирования, касающейся происхождения злокачественных новообразований, их причиной является перепрограммирование нормальных клеток и их дедифференцировка в обратном направлении в сторону примитивных эмбрионально-подобных злокачественных клеток со свойствами стволовых клеток. Считают, что эти примитивные эмбрионально-подобные злокачественные стволовые клетки являются источником злокачественных новообразований и движущей силой прогрессирования заболевания и его резистентности, возникающей почти повсеместно при использовании общепринятых способов терапии. Кроме того, считают, что терапевтический таргетинг и устранение этих примитивных эмбрионально-подобных стволовых клеток будут приводить к существенному к эффективному лечению злокачественных опухолей с длительным действием.
Подокаликсин является гликопротеином поверхности клеток, сильно экспрессирующимся на эмбриональных стволовых клетках и плюрипотентных злокачественных стволовых клетках человека. Белок подокаликсин, экспрессирующийся на эмбриональных и плюрипотентных клетках, имеет дополнительные углеводные группы (TRA-1-60 и TRA-1-81, обозначаемые в настоящем описании как TRA), присоединенные к белку подокаликсину. Углеводные группы TRA являются эмбрионально- и плюрипотентно-специфическими и не присутствуют на соматических или дифференцированных клетках. Плюрипотентную и эмбриональную версию подокаликсина называют TRA-подокаликсином. Известно, что эмбриональная и плюрипотентная форма TRA-подокаликсина повторно экспрессируется во многих типах злокачественных новообразований.
Можно получать моноклональные антитела, специфические и реактивные в отношении антигенов, ассоциированных с плюрипотентностью, экспрессирующихся на поверхности злокачественных клеток и нормальных эмбриональных клеток, но не на нормальных дифференцированных клетках организма. Кроме того, можно получать моноклональные антитела, являющиеся реактивными и имеющими специфическую связывающую активность в отношении TRA-подокаликсина. Эти антитела можно использовать в качестве противоопухолевых терапевтических средств в случае злокачественных новообразований, повторно экспрессирующихся эмбриональные антигены и антигены, ассоциированные с плюрипотентностью, такие как TRA-подокаликсин, при дебюте и прогрессировании заболевания.
Целью настоящего изобретения является разработка антитела, специфического в отношении плюрипотентных и эмбриональных стволовых клеток. Кроме того, целью настоящего изобретения является разработка TRA-подокаликсин-специфического антитела. Кроме того, целью настоящего изобретения является разработка терапевтического средства или композиции, включающей антитело или его фрагмент в качестве активного ингредиента. Кроме того, целью настоящего изобретения является введение терапевтического средства или композиции пациенту со злокачественным новообразованием для регрессирования, снижения или устранения злокачественных клеток у пациента.
Сущность изобретения
Моноклональное антитело по настоящему изобретению включает шесть специфических аминокислотных последовательностей, имеющих три определяющие комплементарность области тяжелой цепи и три определяющие комплементарность области легкой цепи.
Моноклональное антитело может являться специфическим и реактивным по отношению к плазматической мембране поверхности эмбриональных стволовых клеток человека и злокачественных плюрипотентных стволовых клеток эмбриональной карциномы. Кроме того, моноклональное антитело может являться специфическим и реактивным по отношению к TRA-подокаликсину.
Моноклональное антитело может иметь специфичность и реактивность в отношении множества злокачественных новообразований человека, выбранных из группы, состоящей из рака ротовой полости, яичников, предстательной железы, молочной железы, поджелудочной железы, толстого кишечника, желудка и пищевода.
В одном из аспектов изобретение относится к моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, содержащему тяжелую цепь и легкую цепь, при этом определяющие комплементарность области тяжелой цепи 1-3 имеют аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1-3, соответственно, и определяющие комплементарность области легкой цепи 1-3 имеют аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4-6, соответственно.
Антитело или его фрагмент могут являться рекомбинантным антителом. Рекомбинантное антитело выбрано из группы, состоящей из химерного антитела человека, гуманизированного антитела и антитела человека.
В определенных вариантах осуществления фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab, Fab', F(ab')2, scFv, диатела, dsFv и пептида, содержащего CDR.
В другом аспекте изобретение относится к моноклональному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, включающему тяжелую цепь и легкую цепь, при этом определяющие комплементарность области тяжелой цепи 1-3 имеют сходство аминокислотной последовательности по меньшей мере 80% по отношению к аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 1-3, соответственно, и определяющие комплементарность области легкой цепи 1-3 имеют аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4-6, соответственно.
Кроме того, определяющие комплементарность области легкой цепи 1-3 могут иметь сходство аминокислотной последовательности по меньшей мере 80% по отношению к аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 4-6, соответственно.
Антитело или его фрагмент могут являться рекомбинантным антителом. Рекомбинантное антитело выбрано из группы, состоящей из химерного антитела человека, гуманизированного антитела и антитела человека.
В определенных вариантах осуществления фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab, Fab', F(ab')2, scFv, диатела, dsFv и пептида, содержащего CDR.
В другом аспекте настоящее изобретение включает противоопухолевое терапевтическое средство, включающее описанное выше моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент.
Средство может находиться в форме композиции, дополнительно включающей компонент, выбранный из группы, состоящей из фармацевтически приемлемого линкера, нагрузки и их комбинаций. Средство может находиться в форме композиции, дополнительно включающей лекарственное средство для получения конъюгата антитело-лекарственное средство. С помощью средства можно направленно воздействовать, выбирать и устранять эмбриональные стволовые клетки из дифференцированных клеток, происходящих из эмбриональных стволовых клеток. Средство может направленно воздействовать на злокачественные клетки, выбранные из группы, состоящей из злокачественных клеток желудка, поджелудочной железы, пищевода, толстого кишечника, молочной железы и предстательной железы.
Композицию можно вводить пациенту посредством внутривенного введения антитела в его изолированной человеческой химерной форме для индуцирования противоопухолевой антителозависимой клеточной цитотоксичности. Альтернативно, композицию можно вводить пациенту посредством внутривенного введения, где композиция дополнительно включает цитотоксическое лекарственное средство для доставки конкретно в злокачественную клетку.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
Аминокислотные последовательности, приведенные в сопутствующем списке последовательностей, представлены с использованием стандартных буквенных сокращений, и список последовательностей включен в настоящее описание в качестве ссылки.
Подробное описание изобретения
Изобретение относится к антителу, специфическому для плюрипотентных и эмбриональных стволовых клеток. Антитело проявляет противоопухолевую активность. Антитело является нереактивным или слабореактивным по отношению к нормальным клеткам и высокоспецифическим и реактивным по отношению к множеству злокачественных клеток. Антитело можно использовать в качестве противоопухолевого терапевтического средства благодаря его свойствам антителозависимой клеточной цитотоксичности, комплементзависимой цитотоксичности и нахождению в виде конъюгата антитело-лекарственное средство. Антитело, конъюгированное с токсином, например, имеет цитотоксическую активность против злокачественных клеток. Антитело является эффективным против широкого спектра злокачественных новообразований, включая, в качестве неограничивающих примеров, рак ротовой полости, яичников, желудка, поджелудочной железы, пищевода, толстого кишечника, молочной железы и предстательной железы.
Антитело по изобретению является моноклональным и обозначено в настоящем описании как бстронгомаб-9A или CM-918. Моноклональное антитело получают с использованием стандартной гибридомной технологии. Последовательность ДНК и аминокислотная последовательность вариабельных областей тяжелых и легких цепей моноклонального антитела CM-918 представлены в настоящем описании. Аминокислотные последовательности определяющих комплементарность областей (CDR) определены с использованием VBASE2.
Моноклональное антитело CM-918 включает следующие аминокислотные последовательности определяющих комплементарность областей тяжелой цепи (hcCDR) 1-3:
- hcCDR #1 GFTFSDFY (SEQ ID NO: 1)
- hcCDR #2 SRNKANDYTT (SEQ ID NO: 2)
- hcCDR #3 ARDGWVEAMDY (SEQ ID NO: 3)
Моноклональное антитело CM-918 включает следующие аминокислотные последовательности определяющих комплементарность областей легкой цепи (lcCDR) 1-3:
- lcCDR #1 QSLVHSNGNTY (SEQ ID NO: 4)
- lcCDR #2 KVS (SEQ ID NO: 5)
- lcCDR #3 SQSTHVPWT (SEQ ID NO: 6)
Моноклональное антитело CM-918 может являться рекомбинантным антителом, включающим не принадлежащее человеку антитело и антитело человека. В альтернативных вариантах осуществления рекомбинантное антитело может являться не принадлежащим человеку, полученным из животного антителом (например, мыши или крысы), полученным из человека антителом, химерным антителом человека или гуманизированным антителом. Антитело, предпочтительно, является антителом человека, специфически связывающимся с клетками человека, например, плюрипотентными и эмбриональными стволовыми клетками. Более конкретно, антитело представляет собой полученное из млекопитающего моноклональное антитело, включая антитела, полученные с помощью гибридом. В определенных вариантах осуществления антитело получают из мыши с использованием общепринятой гибридомной технологии. Антитело можно модифицировать с использованием различных молекул, в качестве неограничивающих примеров, таких как полиэтиленгликоль (PEG). Антитело также можно модифицировать с использованием химиотерапевтического средства, радиоактивного химического вещества или т.п., имеющего цитотоксическую активность.
В определенных вариантах осуществления моноклональное антитело CM-918 имеет реактивность и селективно связывается с эпитопом на белке клеточной адгезии подокаликсине (также известном как подокаликсин-подобный белок 1). Подокаликсин является интегральным мембранным белком, который у людей кодируется геном PODXL. Подокаликсин является сильно гликозилированным трансмембранным белком типа-1, экспрессирующимся в некоторых нормальных клетках. Подокаликсин сильно экспрессируется во множестве злокачественных новообразований и является опухолевым маркером, уровень экспрессии которого коррелирует с агрессивностью опухоли при различных злокачественных новообразованиях. В нормальных клетках подокаликсин имеет молекулярную массу приблизительно 160-164 кДа. Подокаликсин также сильно экспрессируется в нормальных эмбриональных стволовых клетках и злокачественных плюрипотентных стволовых клетках эмбриональной карциномы. Подокаликсин является поверхностным клеточным маркером нормальных эмбриональных стволовых клеток. Подокаликсин экспрессируется во всех эмбриональных и плюрипотентных стволовых клетках в варианте, специфическом для эмбриональных или плюрипотентных клеток, имеющем дополнительные посттрансляционные модификации, не присутствующие в неплюрипотентных и неэмбриональных стволовых клетках. Одной из известных специфических для эмбриональных стволовых клеток посттрансляционных модификаций подокаликсина является дополнительное гликозилирование остова белка подокаликсина, известного как TRA-1-60 и TRA-1-81 (в настоящем описании обозначаемого как эпитоп TRA). Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, полагают, что эпитоп TRA является расширенной тетрасахаридной структурой O-гликана муцинового типа, специфической для плюрипотентных и эмбриональных клеток. Когда эмбриональные стволовые клетки и плюрипотентные злокачественные клетки дифференцируются в соматические клетки, подокаликсин утрачивает эпитоп TRA. TRA не экспрессируется на нормальных соматических и дифференцированных клетках. Кажущаяся молекулярная масса эмбрионального варианта подокаликсина с эпитопами TRA (обозначаемого в настоящем описании как TRA-подокаликсин) составляет приблизительно 200-240 кДа. Известно, что TRA-подокаликсин экспрессируется во множестве типов злокачественных новообразований, включая рак ротовой полости, толстого кишечника, поджелудочной железы, желудка, молочной железы, предстательной железы, головного мозга, яичников и легких.
В определенных вариантах осуществления моноклональное антитело CM-918 является реактивным и селективно связывается с эпитопом TRA, присутствующем на специфическом для эмбриональных и плюрипотентных клетках варианте подокаликсина, TRA-подокаликсине.
В других вариантах осуществления моноклональное антитело CM-918 селективно связывается и имеет реактивность в отношении неизвестного эпитопа на TRA-подокаликсине. В других вариантах осуществления моноклональное антитело CM-918 селективно связывается и имеет реактивность в отношении неизвестного эпитопа, экспрессирующегося на плазматической мембране эмбриональных стволовых клеток и плюрипотентных злокачественных клеток эмбриональной карциномы. В соответствии с настоящим изобретением, следует понимать, что существуют варианты аминокислотной последовательности антитела CM-918, в которых одну, или две, или три аминокислоты в одной или нескольких последовательностях CDR тяжелой цепи (SEQ ID NO: 1-3) заменяют другой аминокислотой. Предпочтительно, эти варианты CM-918 имеют реактивность и селективно связываются с TRA-подокаликсином или имеют реактивность и селективно связываются с плазматической мембраной эмбриональных стволовых клеток.
Варианты аминокислотной последовательности антитела CM-918, в которых одна, или две, или три аминокислоты в одной или нескольких последовательностях CDR легкой цепи (SEQ ID NO: 4-6) заменяют другой аминокислотой, также включены в настоящее изобретение. Предпочтительно, эти варианты CM-918 имеют реактивность и селективно связываются с TRA-подокаликсином или имеют реактивность и селективно связываются с плазматической мембраной эмбриональных стволовых клеток.
В определенных аспектах изобретение относится к антителу, включающему CDR1 тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, а также CDR2 и CDR3, имеющие аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, соответственно. Кроме того, антитело включает CDR1 легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 4, а также CDR2 и CDR3, имеющие аминокислотные последовательности, приведенные SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6, соответственно. Кроме того, в определенных аспектах настоящее изобретение включает антитело, полученное из антитела, представленного в настоящем описании, и функционально эквивалентное ему благодаря замене, делеции, добавлению и/или инсерции одной или нескольких аминокислот. В определенных аспектах настоящее изобретение включает моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий тяжелую цепь и легкую цепь, при этом определяющие комплементарность области тяжелой цепи 1-3 имеют сходство аминокислотной последовательности по меньшей мере 80% по отношению к аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 1-3, соответственно, и определяющие комплементарность области легкой цепи 1-3 имеют аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4-6, соответственно. В других конкретных аспектах настоящее изобретение включает моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий тяжелую цепь и легкую цепь, при этом определяющие комплементарность области тяжелой цепи 1-3 имеют аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1-3, соответственно, и определяющие комплементарность области легкой цепи 1-3 имеют сходство аминокислотной последовательности по меньшей мере 80% по отношению к аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 4-6, соответственно. В других конкретных аспектах настоящее изобретение включает моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, содержащий тяжелую цепь и легкую цепь, при этом определяющие комплементарность области тяжелой цепи 1-3 имеет сходство аминокислотной последовательности по меньшей мере 80% по отношению к аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 1-3, соответственно, и определяющие комплементарность области легкой цепи 1-3 имеют сходство аминокислотной последовательности по меньшей мере 80% по отношению к аминокислотным последовательностям SEQ ID NO: 4-6, соответственно.
Антитело по изобретению не ограничено целыми молекулами антител и могут являться низкомолекулярным антителом или его модифицированной формой при условии, что антитело связывается с поверхностью клетки. Низкомолекулярное антитело включает фрагмент антитела, у которого отсутствует часть целого антитела. Такое частичное отсутствие в молекуле антитело является приемлемым при условии, что полученный фрагмент антитела способе связываться с поверхностью клетки. Предпочтительно, фрагмент антитела содержит (hc)CDR тяжелой цепи, приведенные в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и (lc)CDR легкой цепи, приведенные в SEQ ID NO: 4, 5 и 6. Конкретные примеры низкомолекулярного антитела и фрагмента антитела могут включать Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv (одноцепочечный Fv), dsFv, диатело, sc(Fv)2 или пептид, включающий CDR.
Термин "диатело" относится к бивалентному фрагменту антитела, сконструированному посредством слияния генов. Диатело является димером, содержащим две полипептидных цепи. scFv получают, соединяя области тяжелой и легкой цепи антитела. В scFv области тяжелой и легкой цепи соединяют с помощью линкера, такого как, пептидный линкер. Пептидный линкер, соединяющий вариабельные области, в частности, не ограничен. Например, в качестве линкера можно использовать произвольный одноцепочечный пептид приблизительно из 3-25 остатков. scFv-Fc является низкомолекулярным антителом, содержащим Fc-область, слитую с scFv. Источник scFv, используемого в scFv-Fc, в частности, не ограничен, и, например, можно использовать scFv, полученный из IgM. Кроме того, источник Fc, в частности, не ограничен, и, например, можно использовать Fc, полученный из IgG человека (IgG1 человека и т.д.). sc(Fv)2 является низкомолекулярным антителом, имеющим одну цепь, содержащую области тяжелой цепи и области легкой цепи, соединенные с помощью линкеров или т.п. sc(Fv)2 можно получать, например, соединяя scFv с помощью линкера.
Фрагменты антитела можно получать с использованием различных технологий, известных в этой области, в качестве неограничивающих примеров, таких как, ферментативная обработка антитела для получения его фрагментов.
Для лечения клеточно-пролиферативного заболевания, такого как злокачественное новообразование, предпочтительно, чтобы антитело сохраняло свою эффекторную активность. Конкретно, антитело по настоящему изобретению может иметь аффинность связывания для поверхности клетки и эффекторные функции. Эффекторные функции антитела включают антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) и комплементзависимую цитотоксичность (CDC). Терапевтическое антитело по настоящему изобретению, в частности, в качестве эффекторных функций может обладать активностью ADCC. Антитело по настоящему изобретению, используемое в терапевтических целях, может являться антителом, обладающим цитотоксической активностью. Примеры цитотоксической активности по настоящему изобретению могут включать ADCC и CDC. В настоящем изобретении, ADCC означает активность повреждения клеток-мишеней посредством связывания клеток, несущих рецепторы Fcγ (иммуноцитов и т.д.), через рецепторы Fcγ с Fc-доменами антител, специфически присоединенных к антигенам поверхности клеток-мишеней. CDC означает цитотоксическую активность, опосредованную системой комплемента.
Антитело можно конъюгировать с цитотоксическим веществом. Неограничивающие примеры подходящих цитотоксических веществ включают химиотерапевтическое средство, токсический пептид, радиоактивное химическое вещество или другую нагрузку, такую как лекарственное средство. Такое модифицированное антитело (далее в настоящем описании обозначаемое как конъюгат антитела) можно получать посредством химической модификации полученного антитела. В определенных вариантах осуществления модифицированное антитело включает фармацевтически приемлемый линкер, нагрузку или их комбинации. Если нагрузка является лекарственным средством, получают конъюгат антитело-лекарственное средство. В этой области известны различные способы модификации антитела, и эти способы пригодны для использования в соответствии с настоящим изобретением.
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей в качестве активного ингредиента антитело, связывающееся с поверхностями клеток, например, плюрипотентных и эмбриональных стволовых клеток. Фармацевтическая композиция включает терапевтически эффективное количество антитела. Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество антитела, позволяющее антителу проявлять желаемый терапевтический эффект или профилактический эффект. В варианте осуществления фармацевтическая композиция является ингибитором роста клеток, в частности, противоопухолевым терапевтическим средством. Ингибитор роста клеток и противоопухолевое средство по настоящему изобретению вводят индивидууму, имеющему злокачественное новообразование или, вероятно, имеющему злокачественное новообразование, и может быть эффективным для направленного воздействия, селекции и устранения эмбриональных стволовых клеток из дифференцированных клеток, происходящих из эмбриональных стволовых клеток.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента может содержать конъюгированное с цитотоксическим веществом антитело. Если заболевание, на которое направленно воздействуют с помощью фармацевтической композиции по настоящему изобретению, является злокачественным новообразованием, злокачественное новообразование, на которое направленно воздействуют, в частности, не ограничено и может являться, в частности, раком ротовой полости, раком яичников, раком желудка, раком поджелудочной железы, раком пищевода, раком толстого кишечника, раком молочной железы или раком предстательной железы.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить пациенту перорально или парентерально. Парентеральное введение может быть предпочтительным. Конкретные примеры такого способа введения включают инъекцию, трансназальное, легочное и трансдермальное введение. Примеры инъекционного введения включают внутривенные, внутримышечные, интраперитонеальные и подкожные инъекции, посредством которых фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить системно или местно. Кроме того, способ введения можно выбирать соответствующим образом в соответствии с возрастом или симптомами пациента. Дозу фармацевтической композиции по настоящему изобретению можно выбирать из диапазона доз, например, от 0,0001 мг до 1000 мг на кг массы тела на введение. Альтернативно, дозу можно выбирать из диапазона, например, от 0,001 до 100000 мг на организм. Однако фармацевтическая композиция по настоящему изобретению не ограничена этими дозами. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно составлять стандартными общепринятыми способами, известными в этой области, и она может дополнительно содержать фармацевтически приемлемые носители или добавки. Их примеры включают, в качестве неограничивающих примеров, поверхностно-активные вещества, эксципиенты, красители, ароматизаторы, консерванты, стабилизаторы, буферы, суспендирующие средства, регуляторы тоничности, связывающие средства, разрыхлители, смазочные средства, активаторы текучести и корригирующие вещества. Можно соответствующим образом включать другие общепринято используемые носители. После контакта со злокачественными клетками антитело по настоящему изобретению может повреждать злокачественные клетки или ингибировать их рост. Клетки, с которыми связывается антитело, в частности, не ограничено. В настоящем изобретении клетки, предпочтительно, являются злокачественными клетками.
Специалистам в этой области следует понимать, что можно осуществлять изменения вариантов осуществления, описанных выше, без отклонения от сущности и объема изобретения. Таким образом, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено конкретными описанными вариантами осуществления и следующими приведенными примерами, но должно охватывать модификации, входящие в сущность и объем изобретения.
Примеры
Пример 1. Получение моноклонального антитела CM-918
Моноклональное антитело по изобретению, обозначенное в настоящем описании как бстронгомаб или CM-918, получали с использованием стандартной технологии гибридомы мыши. Мышам интраперитонеально инъецировали свежесобранные клетки NCCIT, суспендированные в стерильном PBS. Каждой мыши вводили 10e6 клеток на инъекцию. После четырех инъекций с интервалами в 2 недели сыворотку иммунизированных мышей тестировали с помощью ELISA и вестерн-блоттинга для идентификации мышей с положительными результатами. Затем мыши с наибольшим титром проводили бустерную иммунизацию перед слиянием за 2-7 дней перед сбором B-клеток из селезенки и слиянием с миеломными клетками мыши NS0 или P3X63Ag8.653.
Гибридомы высевали на 96-луночные планшеты (960 лунок на слияние) и выращивали в течение 14 дней с использованием сред для слияния гибридом, состоящих из 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 20% NCTC-109 (Gibco), 1% об./об. пенициллина-стрептомицина, 2 мМ L-глутамина, 0,4% об./об. добавки для слияния и клонирования гибридом (Sigma-Aldrich), 1-кратных ненезаменимых аминокислот (Gibco), 1-кратной добавки HAT (Gibco), 20 мМ HEPES и 1-кратной среды RPMI 1640 (модифицированной) с L-глутамином. Супернатанты гибридом собирали и подвергали скринингу посредством вестерн-блоттинга против лизата NCCIT для идентификации гибридом, генерирующих антитела IgG, связывающиеся с TRA. Положительные клоны выращивали и подвергали по меньшей мере двум раундам субклонирования посредством ограниченных разведений в 96-луночных планшетах для выделения моноклональных гибридом. Планшеты для субклонирования подвергали скринингу посредством ELISA и положительные моноклональные гибридомы выращивали в средах для гибридом, состоящих из 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 10% NCTC-109 (Gibco), 1% об./об. пенициллина-стрептомицина, 2 мМ L-глутамина, 0,4% об./об. добавки для слияния и клонирования гибридом (Sigma-Aldrich), 1-кратных ненезаменимых аминокислот (Gibco), 1-кратной добавки HT (Gibco), 20 мМ HEPES и 1-кратной среды RPMI 1640 (модифицированной) с L-глутамином.
После подтверждения активности гибридомы с помощью вестерн-блоттинга, моноклональные гибридомы подвергали криоконсервации в средах для гибридом, дополненных 10% DMSO. Антитела CM-918 очищали от супернатантов моноклональных гибридом, культивируемых до истощения в средах для гибридом, содержащих 10% ультранизкого IgGFBS. Супернатанты центрифугировали, а затем пропускали через фильтр 45 мкм для удаления клеток и клеточного детрита. Антитела IgG очищали посредством аффинной хроматографии с использованием колонок HiTrap HP с протеином G от GE LifeSciences. Очищенные mAb обессоливали с использованием колонок Zeba Spin Desalting Columns (ThermoScientific). Вариабельные области тяжелых и легких цепей подвергали секвенированию ДНК и определяли аминокислотные последовательности областей CDR антитела с использованием VBASE2, интегральной базы данных о генах вариабельных областей зародышевой линии из локусов иммуноглобулинов человека и мыши.
Пример 2. Анализ вестерн-блоттинга плюрипотентных клеток с использованием антитела CM-918
При вестерн-блоттинге образцов мембранных белков из плюрипотентных злокачественных клеток эмбриональной карциномы NCCIT (ATCC № CRL2073) и эмбриональных стволовых клеток человека (ESI-017) с использованием антитела CM-918 определяли одну диффузную полосу, соответствующую молекулярной массе 200-240 кДа, в обоих образцах белков, но не определяли реактивность в линиях неплюрипотентных клеток PC3 (ATCC № CRL1435) или A172 (ATCC № CRL1620), не экспрессирующих TRA-подокаликсин. Идентичные результаты блоттинга получали с использованием коммерчески доступного антитела IgM против TRA-1-60 (abcam 16288) при идентичном вестерн-блоттинге. Результаты подтверждали, что антитело CM-918 и антитело против TRA-1-60 связываются со схожим эпитопом. Электрофорез в ПААГ в присутствие SDS и вестерн-блоттинг осуществляли стандартными способами. Образцы мембран клеток в 1% детергенте Chaps (Sigma) в фосфатном буфере анализировали на 8% гелях и переносили на нитроцеллюлозу. Блоты инкубировали с антителом CM-918 или антителом против TRA-1-60 при 1:1000 (концентрация 1 мкг/мл) с последующей инкубацией с вторичными антителами против IGG-HRP или против IGM-HRP при 1-5000 (0,2 мкг/мл) (Millipore) и визуализировали полосы посредством детекции ECL (Amersham Biosciences).
Пример 3. Окрашивание плазматических мембран эмбриональных стволовых клеток и плюрипотентных клеток эмбриональной карциномы с использованием антитела CM-918
Эмбриональные стволовые клетки (ESL-017) и плюрипотентные клетки эмбриональной карциномы NCCIT окрашивали с использованием антитела CM-918, конъюгированного с Alexa 647 (Sigma) (0,5 мкг/мл), и антитела против TRA-1-60 (0,5 мкг/мл) и антитела против IgM-Alexa F488 (Millipore) (0,5 мкг/мл). Флуоресцентная микроскопия с использованием красного канала показала, что антитело CM-918 сильно связывается с плазматической мембраной эмбриональных стволовых клеток и плюрипотентных клеток эмбриональной карциномы, но не с контрольными линиями клеток PC3 (ATCC № CRL1435) или A172 (ATCC № CRL1620), не экспрессирующими TRA-подокаликсин. При наложении флуоресцентных изображений, полученных с использованием красного и зеленого каналов, наблюдали перекрывание идентичного окрашивания с использованием антитела CM-918 и антитела против TRA-1-60, свидетельствующее о том, что антитела связывались с одинаковыми эпитопами на поверхности стволовых клеток.
Пример 4. Иммуногистохимическое (IHC) окрашивание нормальных и злокачественных тканей человека с использованием антитела CM-918
Иммуногистохимическое окрашивание нормальных и злокачественных тканей с использованием CM-918 осуществляли, как описано ниже. Использовали систему оценок от 0 до 3: 0 - отсутствие окрашивания, 1 - фокальное окрашивание (<5%); 2 - умеренное окрашивание (<50%); и 3 - сильное окрашивание (>50%). Окрашенные срезы тканей оценивали патологи. Баллы окрашивания 2 или 3 определяли в следующих злокачественных тканях: рак поджелудочной железы - 22 из 38 образцов; рак предстательной железы - 19 из 41 образца; рак молочной железы - 45 из 145 образцов; рак яичников - 18 из 30 образцов; рак желудка - 8 из 8 образцов; рак толстого кишечника - 15 из 30 образцов; и рак легких - 32 из 66 образцов. Экспрессия в нормальных тканях человека была очень ограниченной, в диапазоне от нулевой экспрессии в почти всех нормальных тканях, включая костный мозг, до минорной фокальной экспрессии в некоторых образцах поджелудочной железы, пищевода и толстого кишечника. Почки имели положительную оценку во всех образцах, при этом приблизительно 1% окрашивания CM-918 наблюдали в трубочках. Единственной нормальной тканью, имевшей оценку 2, являлась паращитовидная железа, в случае которой 2 из 9 образцов имели оценку в 2 балла. Результаты показали, что в случае CM-918 наблюдали окрашивание мембран при множестве различных злокачественных новообразований и очень ограниченное окрашивание нормальных тканей.
Все ткани фиксировали в 10% забуференном формалине в течение 24 часов, нарезали по 5 мкм и помещали на положительно заряженные предметные стекла. Перед окрашиванием предметные стекла сушили при 60°C в течение ночи. После депарафинизации в ксилоле (Fisher Scientific, кат. № X3P-1GAL) срезы регидратировали с помощью 100% этанола (Eki-Chem, кат. № 4085-1GL), 95% этанола и 70% этанола (Eki-Chem, кат. № 4089-1GL). Затем срезы погружали в 1-кратный Diva Decloaker (Biocare Medical, кат. № DV2004LX) и подвергали тепловой обработке с помощью камеры Decloaking chamber (Biocare Medical, модель: NxGen). Затем срезы блокировали BLOXALL (Vector labs, кат. № SP-6000) и универсального реагента для блокирования/разведения IHC PowerVision (Leica, кат. № BD09-15). Первичное антитело наносили на каждое предметное стекло в концентрации 2 мкг/мл в PBS, оставляя при комнатной температуре на 1 час. После промывки PBS реагент PowerVision Post Blocking (Leica, кат. № DPVO+15Post) наносили на 20 мин при комнатной температуре. Затем предметные стекла инкубировали с поли-HRP IgG против мыши/кролика PowerVision (Leica, кат. № DPVO-15HRP) в течение 30 мин при комнатной температуре с последующей цветной реакцией с DAB (Vector labs, кат. № SK4105). Предметные стекла докрашивали гематоксилином (Vector labs, кат. № H-3404). Между инкубациями с различными реагентами или антителами предметные стекла промывали PBS. Срезы эмбриональной карциномы включали в окрашивание для обеспечения технической точности определения экспрессии белка-мишени в тканях. Эксперименты с отрицательным контролем проводили в присутствие антител изотипического контроля (Biolegend, кат. № 401401) параллельно во всех анализах.
Пример 5. Кривые доза-эффект в отношении жизнеспособности клеток для конъюгата антитело CM-918-лекарственное средство
Получали конъюгат антитело-лекарственное средство CM-919-vc-MMAE: раствор CM-918 в PBS обрабатывали TCEP при 37°C для восстановления межцепочечных дисульфидных связей. В реакционную смесь добавляли раствор MC-vc-PAB-MMAE (малеимидокапроил-валин-цитрулин-p-аминобензилоксикарбонил-монометил ауристатин E) для соединения остатка малеимида из MC-vc-PAB-MMAE с CM-918. Полученный конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC) обессоливали на колонке SephadexG50 для удаления остаточных непрореагировавших токсинов и для замены буфера на PBS (pH 7,2). Соотношение лекарственного средства и антитела (DAR) определяли с помощью соотношения поглощения УФ при 248 и 280 нм. Для определения распределения молекул DAR осуществляли HIC (хроматографию с гидрофобными взаимодействиями) и SEC (эксклюзионную хроматографию).
Осуществляли анализ жизнеспособности клеток с использованием плюрипотентных клеток NCCIT, эмбриональных стволовых клеток (ESL-017) и контрольных клеток PCS, не экспрессирующих TRA-подокаликсин: клетки-мишени высевали на 96-луночные планшеты при плотности от 3×103 до 1×104 клеток на лунку (90 мкл) и инкубировали клетки в инкубаторе при 5% CO2 в течение 24 часов. Клетки обрабатывали антителом (10 мкл на лунку) следующим образом: начинали с концентрации 100 нМ и снижали до полулогарифмического разведения, 6 повторений на концентрацию, и последние лунки без антитела использовали в качестве отрицательного контроля. Клетки инкубировали в инкубаторе при 5% CO2 в течение от 24 часов до 7 дней. Реагент для люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo® (Promega, кат. № 7572) перед использованием уравновешивали до комнатной температуры. В каждую лунку наносили 100 мкл реагента CellTiter-Glo® и смешивали содержимое в течение 2 минут на орбитальном шейкере для индуцирования лизиса клеток. Планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут для стабилизации люминесцентного сигнала. Люминесценцию регистрировали с помощью микроспектрофотометра для чтения планшетов (FiltermaxF5, Molecular Devices, Sunnyvale, CA).
Результаты анализа жизнеспособности клеток показали, что IC50 гибели клеток при использовании конъюгата антитело-лекарственное средство CM-918-vc-MMAE составляла 2,7 нМ в случае клеток NCCIT, 5,6 нМ в случае эмбриональных стволовых клеток и наблюдали отсутствие эффекта в случае контрольных клеток PC3 при концентрации CM-918-vcMMAE до 100 нМ. Антитело изотипического контроля, идентичным образом конъюгированное с MMAE, не обладало эффектом в случае всех трех линий клеток в концентрации до 100 нМ. Результаты свидетельствовали о том, что конъюгат антитело CM-918-лекарственное средство является очень эффективным в уничтожении плюрипотентных злокачественных клеток эмбриональной карциномы и эмбриональных стволовых клеток человека, но не клеток, не экспрессирующих TRA-подокаликсин.
Пример 6. Мышиная модель ксенотрансплантата плюрипотентных злокачественных клеток NCCIT, обработанная конъюгатом антитело CM-919-лекарственное средство
Пятнадцати безтимусным мышам подкожно инъецировали 2×106 плюрипотентных злокачественных стволовых клеток NCCIT и позволяли опухолям достигнуть размера 200 мм3, после чего мышей разделяли на 3 группы по 5: 5 мышам проводили 4 инъекции физиологического раствора; 5 мышам вводили CM-vc-MMAE в количестве 3 мг/кг, Q4Dx4; еще пяти мышам вводили антитело изотипического контроля-vc-MMAE в количестве 3 мг/кг, Q4Dx4. Результаты свидетельствовали о том, что по истечении 35 дней мыши, которым инъецировали физиологический раствор, и мыши, которым инъецировали изотипический контроль, имели опухоли со средним размером 1000 мм3. В случае мышей, которым вводили конъюгат антитело CM-918-лекарственное средство, 4 из 5 мышей не имели определимых опухолей, и 1 мышь имела опухоль размером приблизительно 25 мм3. В случае антитела изотипического контроля, конъюгированного с MMAE, как с CM-918, наблюдали результаты, схожие с результатами у мышей, которым вводили физиологический раствор, со средним размером опухолей 1000 мм3. Результаты свидетельствовали о том, что конъюгат антитело-лекарственное средство CM-919-vc-MMAE является эффективным в лечении злокачественных опухолей из плюрипотентных стволовых клеток у мышей.
Пример 7. Анализ антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) с использованием антитела CM-918
Анализ ADCC с использованием антитела CM-918 и плюрипотентных злокачественных клеток NCCIT показал цитотоксичность 12-15% и активность ADCC CM-918, при этом контрольные клетки, не экспрессирующие TRA-подокаликсин, имели цитотоксичность 2%. Контрольное антитело IgG имело цитотоксичность 2% в случае клеток NCCIT. Результаты свидетельствовали о том, что антитело CM-918 имеет активность ADCC в отношении плюрипотентных злокачественных клеток, экспрессирующих TRA-подокаликсин.
PBMC выделяли из крови здоровых доноров с использованием градиента фиколла. Клетки-мишени высевали на 96-луночные планшеты в количестве 1×104/лунку и инкубировали со свежевыделенными PBMC в соотношении E:T=25:1 или 50:1 в течение 4 ч. при 37°C. Концентрация тестового антитела и контрольного антитела IgG-Fc являлась фиксированной и составляла 190 нМ. После совместной инкубации измеряли цитотоксичность клеток с использованием анализа LDH. Процент цитотоксичности клетки-мишени вычисляли посредством вычитания фоновых значений поглощения контрольных эффекторных клеток и клеток-мишеней (без антитела) и принятия только клеток-мишеней (спонтанный лизис) за 0% и только лизированных клеток-мишеней (максимальный лизис) за 100%.
Пример 8. Анализ обусловленной комплементом цитотоксичности (CDC) с использованием антитела CM-918
Осуществляли анализ CDC, и он показал, что плюрипотентные злокачественные стволовые клетки NCCIT имели цитотоксичность 18% при 100 нМ антитела CM-918 и цитотоксичность 10% при 10 нМ антитела CM-918. Результаты анализа цитотоксичности CDC клеток NCCIT с использованием 100 нМ контрольного антитела показали цитотоксичность <1%. Результаты свидетельствовали о том, что антитело CM-918 может вызывать активность CDC в отношении плюрипотентных злокачественных стволовых клеток, экспрессирующих TRA-подокаликсин на плазматической мембране на поверхности клетки.
Комплемент человека инкубировали с 104 клеток-мишеней при объемном соотношении 1:4 в 96-луночном формате. Тестовое антитело нагружали в серии полулогарифмических разведений с 10 точками, начиная с 190 нМ. Контрольное антитело IgG-Fc добавляли только в концентрации 190 нМ. Антитела инкубировали совместно с клетками-мишенями и комплементом в течение 4 ч. при 37°C. После совместной инкубации измеряли цитотоксичность клеток с использованием анализа LDH (Roche). Процент цитотоксичности клетки-мишени вычисляли посредством вычитания фоновых значений поглощения контрольного комплемента и клеток-мишеней (без антитела) и принятия только клеток-мишеней (спонтанный лизис) за 0% и только лизированных клеток-мишеней (максимальный лизис) за 100%.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<160> КОЛИЧЕСТВО SEQ ID NOS: 6
<210> SEQ ID NO 1
<211> ДЛИНА: 8
<212> ТИП: БЕЛОК
<213> ОРГАНИЗМ: МЫШЬ
<400> ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ: 1
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Tyr
1 5
<210> SEQ ID NO 2
<211> ДЛИНА: 10
<212> ТИП: БЕЛОК
<213> ОРГАНИЗМ: МЫШЬ
<400> ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ: 2
Ser Arg Asn Lys Ala Asn Asp Tyr Thr Thr
1 5 10
<210> SEQ ID NO 3
<211> ДЛИНА: 11
<212> ТИП: БЕЛОК
<213> ОРГАНИЗМ: МЫШЬ
<400> ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ: 3
Ala Arg Asp Gly Trp Val Glu Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> SEQ ID NO 4
<211> ДЛИНА: 11
<212> ТИП: БЕЛОК
<213> ОРГАНИЗМ: МЫШЬ
<400> ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ: 11
Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> SEQ ID NO 5
<211> ДЛИНА: 3
<212> ТИП: БЕЛОК
<213> ОРГАНИЗМ: МЫШЬ
<400> ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ: 3
Lys Val Ser
1
<210> SEQ ID NO 6
<211> ДЛИНА: 9
<212> ТИП: БЕЛОК
<213> ОРГАНИЗМ: МЫШЬ
<400> ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ: 9
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr
<110> SCHOPPERLE, WILLIAM MICHAEL
TAN, EDWIN SAAVEDRA
JU, YAWEN
HOLMQVIST, MATS HARALD
TAK, YOUNGBIN
HOLMQVIST, AN MARY
<120> АНТИТЕЛО ПРОТИВ ПОДОКАЛИКСИНА И TRA-РОДСТВЕННОГО БЕЛКА, СПОСОБЫ ЕГО
ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО
СРЕДСТВА
<130> 302977-00042-2
<140> PCT/US17/22109
<141> 2017-03-13
<150> 62/307,690
<151> 2016-03-14
<160> 6
<170> MICROSOFT WORD
<210> 1
<211> 8
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Tyr
1 5
<210> 2
<211> 10
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 2
Ser Arg Asn Lys Ala Asn Asp Tyr Thr Thr
1 5 10
<210> 3
<211> 11
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 3
Ala Arg Asp Gly Trp Val Glu Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 4
Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 3
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 5
Lys Val Ser
1
<210> 6
<211> 9
<212> Белок
<213> Mus musculus
<400> 6
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr
1 5
2
<---
Claims (9)
1. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые обладают селективным связыванием с TRA-подокаликсином, содержащие тяжелую цепь и легкую цепь, при этом определяющие комплементарность области тяжелой цепи 1-3 имеют аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1-3, соответственно, и определяющие комплементарность области легкой цепи 1-3 имеют аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4-6, соответственно.
2. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где указанное антитело или его фрагмент является рекомбинантным антителом.
3. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.2, где рекомбинантное антитело выбрано из группы, состоящей из химерного антитела человека, гуманизированного антитела и антитела человека.
4. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab, Fab', F(ab')2, scFv, диатела, dsFv и пептида, содержащего CDR моноклонального антитела.
5. Противоопухолевое терапевтическое средство для лечения злокачественного новообразования, связанного с TRA-подокаликсином, содержащее моноклональное антитело или антигенсвязывающий фрагмент по п.1 в терапевтическом эффективном количестве.
6. Противоопухолевое терапевтическое средство по п.5, где указанное средство находится в форме композиции, дополнительно содержащей компонент, выбранный из группы, состоящей из фармацевтически приемлемого линкера, нагрузки и их комбинаций.
7. Противоопухолевое терапевтическое средство по п.5, где указанное средство находится в форме композиции, дополнительно содержащей лекарственное средство для получения конъюгата антитело-лекарственное средство.
8. Противоопухолевое терапевтическое средство по п.5, где с помощью указанного средства направленно воздействуют, выбирают и устраняют эмбриональные стволовые клетки из дифференцированных клеток, происходящих из эмбриональных стволовых клеток.
9. Противоопухолевое терапевтическое средство по п.5, где указанное средство направленно воздействует на злокачественные клетки, выбранные из группы, состоящей из злокачественных клеток желудка, поджелудочной железы, пищевода, толстого кишечника, молочной железы и предстательной железы.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662307690P | 2016-03-14 | 2016-03-14 | |
| US62/307,690 | 2016-03-14 | ||
| PCT/US2017/022109 WO2017160725A2 (en) | 2016-03-14 | 2017-03-13 | Podocalyxin and tra-related antibody, methods of preparation and uses as an anti-cancer therapeutic agent |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018136094A RU2018136094A (ru) | 2020-04-15 |
| RU2018136094A3 RU2018136094A3 (ru) | 2020-07-31 |
| RU2774710C2 true RU2774710C2 (ru) | 2022-06-22 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010094981A2 (en) * | 2009-02-20 | 2010-08-26 | Fusion Antibodies Limited | Antibody therapy |
| US7858752B2 (en) * | 2006-12-05 | 2010-12-28 | Abbott Laboratories | Recombinant antibodies against hepatitis C virus and methods of obtaining and using same |
| CN102939305A (zh) * | 2010-04-08 | 2013-02-20 | Jn生物科学有限责任公司 | 对cd122的抗体 |
| RU2555538C2 (ru) * | 2008-11-20 | 2015-07-10 | Сентокор Орто Байотек Инк. | Культура плюрипотентных стволовых клеток на микроносителях |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7858752B2 (en) * | 2006-12-05 | 2010-12-28 | Abbott Laboratories | Recombinant antibodies against hepatitis C virus and methods of obtaining and using same |
| RU2555538C2 (ru) * | 2008-11-20 | 2015-07-10 | Сентокор Орто Байотек Инк. | Культура плюрипотентных стволовых клеток на микроносителях |
| WO2010094981A2 (en) * | 2009-02-20 | 2010-08-26 | Fusion Antibodies Limited | Antibody therapy |
| CN102939305A (zh) * | 2010-04-08 | 2013-02-20 | Jn生物科学有限责任公司 | 对cd122的抗体 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113347994B (zh) | 使用her3抗原结合分子治疗和预防癌症 | |
| CN109219618B (zh) | 针对表皮生长因子受体变体iii和cd3的单特异性和双特异性抗体及其用途 | |
| JP2022515318A (ja) | 抗体及びその用途 | |
| US10533046B2 (en) | Anti-CK8 antibodies for use in the treatment of colorectal cancers | |
| JP2022062018A (ja) | ポドカリキシン及びｔｒａ関連抗体、調製方法、並びに抗癌治療剤としての使用 | |
| CN109988240B (zh) | 抗gpc-3抗体及其用途 | |
| CN108138172B (zh) | 抗体 | |
| TWI837517B (zh) | 抗claudin 18.2和cd3的雙特異性抗體以及其用途 | |
| KR20230060509A (ko) | 넥틴-4 항체 및 이의 용도 | |
| JP2024520188A (ja) | 抗ネクチン－４抗体およびその使用 | |
| JP7024072B2 (ja) | 抗ｃｄ３抗体およびそれを含む癌処置用医薬組成物 | |
| RU2774710C2 (ru) | Антитело против подокаликсина и tra-родственного белка, способы его получения и применения в качестве противоопухолевого терапевтического средства | |
| EP4161962A1 (en) | Human anti-grp94 antibodies and uses | |
| KR102669477B1 (ko) | 신규 항-pvr 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 이의 용도 | |
| WO2023221935A1 (zh) | 结合pd-l1和cldn18.2的抗体及其用途 | |
| KR101856904B1 (ko) | Pauf 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 용도 | |
| KR20230154020A (ko) | 클라우딘-6에 대한 항체 및 이의 용도 | |
| KR20240055852A (ko) | D3-결합 분자 및 이의 용도 | |
| CN117597362A (zh) | 抗紧密连接蛋白-6的抗体及其用途 | |
| WO2023174897A1 (en) | Composition comprising an antibody which binds to human srrm2 present on the cell surface of a target cell | |
| KR20200120541A (ko) | 프로그램화된 세포 사멸 단백질 리간드-1 (pd-l1)에 대한 항체 및 이의 용도 | |
| EA043079B1 (ru) | Анти-msln-антитело и фармацевтическая композиция для лечения онкологических заболеваний, содержащая его |