RU2774446C2 - Антитело для специфического связывания с рецептором интерлейкина 4 - Google Patents
Антитело для специфического связывания с рецептором интерлейкина 4 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2774446C2 RU2774446C2 RU2019100002A RU2019100002A RU2774446C2 RU 2774446 C2 RU2774446 C2 RU 2774446C2 RU 2019100002 A RU2019100002 A RU 2019100002A RU 2019100002 A RU2019100002 A RU 2019100002A RU 2774446 C2 RU2774446 C2 RU 2774446C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gly
- ser
- seq
- leu
- ala
- Prior art date
Links
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 title claims abstract description 244
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 title claims abstract description 244
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 title claims description 19
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 title claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 103
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 103
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 229940028885 Interleukin-4 Drugs 0.000 claims abstract description 50
- 201000005794 allergic hypersensitivity disease Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 200000000018 inflammatory disease Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract 8
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims description 98
- 208000006673 Asthma Diseases 0.000 claims description 20
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 19
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 16
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 claims description 15
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 claims description 15
- 206010064212 Eosinophilic oesophagitis Diseases 0.000 claims description 14
- 201000000708 eosinophilic esophagitis Diseases 0.000 claims description 14
- 206010012434 Dermatitis allergic Diseases 0.000 claims description 12
- 201000004624 dermatitis Diseases 0.000 claims description 12
- 206010003816 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 11
- 208000005679 Eczema Diseases 0.000 claims description 11
- 208000000592 Nasal Polyps Diseases 0.000 claims description 11
- 231100001003 eczema Toxicity 0.000 claims description 11
- 206010039073 Rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 201000009596 autoimmune hypersensitivity disease Diseases 0.000 claims description 9
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N Theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 7
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 claims description 5
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 claims description 5
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 claims description 5
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 claims description 5
- 229940023808 Albuterol Drugs 0.000 claims description 4
- 229940092705 Beclomethasone Drugs 0.000 claims description 4
- VOVIALXJUBGFJZ-VXKMTNQYSA-N Budesonide Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3O[C@@H](CCC)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O VOVIALXJUBGFJZ-VXKMTNQYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960004436 Budesonide Drugs 0.000 claims description 4
- 229940088597 Hormone Drugs 0.000 claims description 4
- 229960001361 Ipratropium Bromide Drugs 0.000 claims description 4
- 229960003088 Loratadine Drugs 0.000 claims description 4
- JCCNYMKQOSZNPW-UHFFFAOYSA-N Loratadine Chemical compound C1CN(C(=O)OCC)CCC1=C1C2=NC=CC=C2CCC2=CC(Cl)=CC=C21 JCCNYMKQOSZNPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N Mesalazine Chemical compound NC1=CC=C(O)C(C(O)=O)=C1 KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UCHDWCPVSPXUMX-TZIWLTJVSA-N Montelukast Chemical compound CC(C)(O)C1=CC=CC=C1CC[C@H](C=1C=C(\C=C\C=2N=C3C=C(Cl)C=CC3=CC=2)C=CC=1)SCC1(CC(O)=O)CC1 UCHDWCPVSPXUMX-TZIWLTJVSA-N 0.000 claims description 4
- KASDHRXLYQOAKZ-XDSKOBMDSA-N Pimecrolimus Chemical compound C/C([C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@]2(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)[C@@H](OC)C[C@@H](C)C/C(C)=C/[C@H](C(C[C@H](O)[C@H]1C)=O)CC)=C\[C@@H]1CC[C@H](Cl)[C@H](OC)C1 KASDHRXLYQOAKZ-XDSKOBMDSA-N 0.000 claims description 4
- NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N Salbutamol Chemical compound CC(C)(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(CO)=C1 NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001967 Tacrolimus Drugs 0.000 claims description 4
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000278 Theophylline Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000924 antiasthmatic agent Substances 0.000 claims description 4
- NBMKJKDGKREAPL-DVTGEIKXSA-N beclomethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(Cl)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O NBMKJKDGKREAPL-DVTGEIKXSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 4
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 4
- LHLMOSXCXGLMMN-VVQPYUEFSA-M ipratropium bromide Chemical compound [Br-].O([C@H]1C[C@H]2CC[C@@H](C1)[N@@+]2(C)C(C)C)C(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 LHLMOSXCXGLMMN-VVQPYUEFSA-M 0.000 claims description 4
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 229960004963 mesalazine Drugs 0.000 claims description 4
- 229960005127 montelukast Drugs 0.000 claims description 4
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drugs Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002571 phosphodiesterase inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 229960005330 pimecrolimus Drugs 0.000 claims description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 4
- 229960002052 salbutamol Drugs 0.000 claims description 4
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 claims description 3
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 3
- 229940102223 Injectable Solution Drugs 0.000 claims description 2
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 claims description 2
- 239000003199 leukotriene receptor blocking agent Substances 0.000 claims 2
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims 2
- 239000003087 receptor blocking agent Substances 0.000 claims 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims 2
- 230000001131 transforming Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 117
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 111
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 107
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 99
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 85
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 83
- HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Alanine Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)C(N)CS HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 81
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 71
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 69
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 65
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 65
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 64
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 61
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 60
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 59
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 58
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 57
- VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N Val-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 56
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 56
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 51
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 50
- XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N (2S)-2-[[2-[(2-azaniumylacetyl)amino]acetyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN XPJBQTCXPJNIFE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 46
- ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 46
- XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 46
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 46
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 46
- SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N α-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 46
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 42
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 42
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 40
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 39
- LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N 0.000 description 39
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 39
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 38
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 38
- PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N Arg-Gln Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 37
- VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Asparagine Chemical compound OC(=O)CC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N Gln-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 37
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 37
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 37
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 37
- GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Threonine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 37
- 108010077037 tyrosyl-tyrosyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 37
- FSHURBQASBLAPO-WDSKDSINSA-N Ala-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N FSHURBQASBLAPO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 36
- JSLGXODUIAFWCF-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Asparagine Chemical compound NC(N)=NCCCC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O JSLGXODUIAFWCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 36
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 36
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 36
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 36
- BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-4-[[(1S)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 35
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 2-[[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 35
- XTWSWDJMIKUJDQ-RYUDHWBXSA-N Arg-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XTWSWDJMIKUJDQ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 35
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 35
- UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 35
- BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N Thr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 35
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 35
- SIGGQAHUPUBWNF-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O SIGGQAHUPUBWNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N Phe-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 34
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 34
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 33
- BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N Val-His Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 31
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 30
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 30
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 30
- UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N Pro-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)[O-])C(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 28
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 26
- KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 24
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 23
- 108010044655 lysylproline Proteins 0.000 description 23
- GJSURZIOUXUGAL-UHFFFAOYSA-N 2-((2,6-Dichlorophenyl)imino)imidazolidine Chemical compound ClC1=CC=CC(Cl)=C1NC1=NCCN1 GJSURZIOUXUGAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 22
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 22
- DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N Gly-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 22
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 22
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N gly ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 22
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 22
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N pro glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 22
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 22
- 108010035534 tyrosyl-leucyl-alanine Proteins 0.000 description 22
- UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Serine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N (2S)-5-amino-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 21
- INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N (4S)-4-amino-5-[[(2S,3S)-1-[[(1S)-1-carboxy-2-methylpropyl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 21
- MPZWMIIOPAPAKE-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[[1-carboxy-4-(diaminomethylideneamino)butyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N MPZWMIIOPAPAKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 21
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 21
- FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N (2S)-2-[[(2S)-2,5-diamino-5-oxopentanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 20
- SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-4-carboxybutanoyl)amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N 0.000 description 20
- RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Arginine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RGTVXXNMOGHRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Glutamine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 20
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 20
- RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Arginine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 20
- LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- UBAQSAUDKMIEQZ-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 UBAQSAUDKMIEQZ-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 20
- KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N gln-tyr Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 19
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 19
- 239000002609 media Substances 0.000 description 18
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 17
- 108010045269 tryptophyltryptophan Proteins 0.000 description 17
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 16
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 16
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 16
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfizole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 14
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 14
- NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 13
- HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N Asp-His Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 12
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 12
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 12
- 101710007377 H1-4 Proteins 0.000 description 11
- 230000000275 pharmacokinetic Effects 0.000 description 11
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N 0.000 description 9
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 9
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 9
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 9
- MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 8
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 8
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 8
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 7
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 7
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 7
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 210000001616 Monocytes Anatomy 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 6
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 6
- -1 small molecule compound Chemical class 0.000 description 6
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 6
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 5
- 102100019494 CCL17 Human genes 0.000 description 5
- 101700084100 CCL17 Proteins 0.000 description 5
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 5
- JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N Leucyl-Glutamine Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 102100006400 CSF2 Human genes 0.000 description 4
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 4
- 210000003979 Eosinophils Anatomy 0.000 description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 4
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 4
- YBRHKUNWEYBZGT-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Threonine Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(=O)NC(C(O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 YBRHKUNWEYBZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 4
- CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N (2S)-2-[[2-[(2-azaniumylacetyl)amino]acetyl]amino]propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CN CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- 210000000138 Mast Cells Anatomy 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N Phe-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Asparagine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 3
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 3
- 230000036231 pharmacokinetics Effects 0.000 description 3
- 230000001737 promoting Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 3
- WYBVBIHNJWOLCJ-IUCAKERBSA-N Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N WYBVBIHNJWOLCJ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 229950003468 Dupilumab Drugs 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N His-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 2
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 2
- NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N Tyr-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 2
- HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N Tyr-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Aspartate Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002429 anti-coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 229940082638 cardiac stimulant Phosphodiesterase inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 2
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 108091003598 dupilumab Proteins 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000003068 static Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N (2S)-1-[(2S)-2-azaniumyl-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N (2S)-2-[[(2R)-2-amino-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PMOOKBAYUNEHOF-IKHMJLPLSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[[(4aR,6aR,6bS,8aS,14aR,14bR)-8a-carboxy-4,4,6a,6b,11,11,14b-heptamethyl-1,2,3,4a,5,6,7,8,9,10,12,13,14,14a-tetradecahydropicen-3-yl]oxy]-3,5-dihydroxy-4-[(1R,2R,3S,4R)-2,3,4-trihydroxycyclohexyl]oxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@H](O[C@H]([C@@H]1O)OC1CC[C@]2(C)[C@H]3CCC=4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2C1(C)C)C)(C)CC[C@]1(CCC(CC1=4)(C)C)C(O)=O)C(O)=O)[C@@H]1CC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O PMOOKBAYUNEHOF-IKHMJLPLSA-N 0.000 description 1
- BUXAPSQPMALTOY-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-3-sulfanylpropanoyl)amino]pentanedioic acid Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(O)=O BUXAPSQPMALTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXUFDWZBHKUGKK-CABZTGNLSA-N 2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]propanoyl]amino]acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 CXUFDWZBHKUGKK-CABZTGNLSA-N 0.000 description 1
- MGHKSHCBDXNTHX-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[(4-amino-1-carboxy-4-oxobutyl)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O MGHKSHCBDXNTHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N Asn-Pro Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005261 Aspartic Acid Drugs 0.000 description 1
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Aspartyl-L-proline Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- BVRPESWOSNFUCJ-LKTVYLICSA-N BNC210 Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 BVRPESWOSNFUCJ-LKTVYLICSA-N 0.000 description 1
- 210000003651 Basophils Anatomy 0.000 description 1
- 108010007539 Blocking Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 210000004507 Chromosomes, Artificial Anatomy 0.000 description 1
- 230000035700 Clearance Rate Effects 0.000 description 1
- 206010009802 Coagulopathy Diseases 0.000 description 1
- 229920001405 Coding region Polymers 0.000 description 1
- 229940064701 Corticosteroid nasal preparations for topical use Drugs 0.000 description 1
- 229960001334 Corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N Cys-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- VBIIZCXWOZDIHS-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS VBIIZCXWOZDIHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003238 Esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 101700053597 FCER2 Proteins 0.000 description 1
- 102100014608 FCER2 Human genes 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N Glu-Pro Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YBTCBQBIJKGSJP-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N Gly-Cys Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C([O-])=O MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102100020039 HPGDS Human genes 0.000 description 1
- 101700056286 HPGDS Proteins 0.000 description 1
- 229960002897 Heparin Drugs 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N Heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N His-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 FBTYOQIYBULKEH-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CN=CN1 VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- WSDOHRLQDGAOGU-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 WSDOHRLQDGAOGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRPDZHJNLYNFFT-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 WRPDZHJNLYNFFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000018983 IL4R Proteins 0.000 description 1
- 210000004969 Inflammatory Cells Anatomy 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- UWBDLNOCIDGPQE-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Lysine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN UWBDLNOCIDGPQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002510 Keratinocytes Anatomy 0.000 description 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- 210000003141 Lower Extremity Anatomy 0.000 description 1
- YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-ZFWWWQNUSA-N Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 1
- IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N Met-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- JMEWFDUAFKVAAT-UHFFFAOYSA-N Methionyl-Asparagine Chemical compound CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O JMEWFDUAFKVAAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 1
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N Phe-Pro Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- BHMBVRSPMRCCGG-OUTUXVNYSA-N Prostaglandin D2 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@@H]1[C@@H](C\C=C/CCCC(O)=O)[C@@H](O)CC1=O BHMBVRSPMRCCGG-OUTUXVNYSA-N 0.000 description 1
- 210000003752 Saphenous Vein Anatomy 0.000 description 1
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BXLYSRPHVMCOPS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO BXLYSRPHVMCOPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 Cells Anatomy 0.000 description 1
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- KAFKKRJQHOECGW-JCOFBHIZSA-N Thr-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 KAFKKRJQHOECGW-JCOFBHIZSA-N 0.000 description 1
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Cysteine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Lysine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N Trp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 MYVYPSWUSKCCHG-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- IBIDRSSEHFLGSD-YUMQZZPRSA-N Val-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IBIDRSSEHFLGSD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Cysteine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001631 Vena Cava, Inferior Anatomy 0.000 description 1
- URRBLVUOXIGNQR-HXUWFJFHSA-N [(1R)-1-phenylethyl] N-(2-aminoethyl)-N-[(3-methoxy-4-phenylmethoxyphenyl)methyl]carbamate Chemical compound C1([C@@H](C)OC(=O)N(CCN)CC=2C=C(C(=CC=2)OCC=2C=CC=CC=2)OC)=CC=CC=C1 URRBLVUOXIGNQR-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 1
- 108010081404 acein-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010078114 alanyl-tryptophyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010038850 arginyl-isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceuticals Drugs 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 231100000406 dermatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002538 fungal Effects 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N gly pro Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 210000002443 helper T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 102000024888 human IL4R protein Human genes 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000000495 immunoinflammatory Effects 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 102000003835 leukotriene receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000146 leukotriene receptors Proteins 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 1
- 108010062313 mepolizumab Proteins 0.000 description 1
- 229960005108 mepolizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 101710005265 pgdP Proteins 0.000 description 1
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]OC(=O)C([H])(N([H])*)C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940083878 topical for treatment of hemorrhoids and anal fissures Corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу для специфического связывания с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R). Также раскрыты молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая указанное антитело; вектор экспрессии, клетка-хозяин, содержащие указанную молекулу нуклеиновой кислоты; фармацевтическая композиция, cлитый белок, конъюгат, содержащие указанное антитело. Раскрыты способ получения указанного антитела; применение указанного антитела, слитого белка или конъюгата, для изготовления лекарственного препарата; способ лечения, предупреждения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, с помощью указанного антитела. Изобретение обладает способностью эффективно лечить заболевания, ассоциированные с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R). 24 н. и 8 з.п. ф-лы, 5 ил., 15 табл., 10 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к области биофармацевтики. Конкретнее, настоящее изобретение относится к антителу, которое способно связываться с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), и путям его применения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Интерлейкин-4 (IL-4) представляет собой цитокин, вырабатываемый преимущественно активированными T-клетками, моноцитами, базофилами, тучными клетками и эозинофилами. IL-4 вовлечен во множество биологических процессов, и его биологические эффекты, известные в уровне техники, включают в себя стимуляцию пролиферации активированных B-клеток и T-клеток и дифференцировку CD4+ T-клеток в T-хелперные клетки II типа. Более того, исследования показали, что IL-4 обладает множественными эффектами в опосредовании иммунных ответов на заболевания, такие как аллергические заболевания, аутоиммунные заболевания, инфекционные заболевания и опухоли, и обладает терапевтическими эффектами в отношении опухолей, аутоиммунных заболеваний и инфекционных заболеваний и т.п. При этом IL-4 также может регулировать иммунный ответ на введение вакцины. Следовательно IL-4 всегда представлял собой интересный объект для исследования, привлекая обширное внимание.
IL-13 также представляет собой цитокин, вырабатываемый активированными T-клетками, который обладает разными функциями в разных типах клеток, таких как моноциты, B-клетки, тучные клетки и кератиноциты. IL-13 может подавлять высвобождение воспалительных цитокинов и хемокинов из моноцитов, индуцировать пролиферацию и дифференцировку B-клеток и способствовать синтезу IgE. IL-13 и IL-4 имеют много общих свойств относительно биологических функций, включая подавление высвобождения медиаторов воспаления из моноцитов, индуцирование дендритообразного развития макрофагов, содействие экспрессии CD23 на поверхности моноцитов и стимуляцию синтеза иммуноглобулинов B-клетками. В то же время IL-13 также обладает собственными биологическими особенностями, которые в основном включают: содействие дифференцировке моноцитов человека и изменение антигенов на поверхности клетки; индуцирование пролиферации и дифференцировки B-клеток и содействие секреции антител из B-клеток; регуляцию синтеза IgE, таким образом обладая связью с аллергическими реакциями в организме; подавление роста опухолевых клеток; ингибирование репликации HIV; и т.п.
Биологическая активность IL-4 опосредуется специфическим рецептором IL-4 на поверхности клетки (IL-4R, который у человека называют «hIL-4R»). IL-4R человека представляет собой гетеродимер, образованный двумя полипептидными цепями, в которых альфа-цепь (hIL-4Rα, UniProtKB: P24394) характеризуется высокой аффинностью к IL-4. Исследования показали, что альфа-цепь рецептора клеточной поверхности IL-13 (IL-13Rα-цепь) также образует другую форму комплекса IL-4R с IL-4Rα-цепью. Так как IL-4Rα-цепь в комплексе IL-4R играет главную роль в связывании с IL-4 и другими вовлеченными цитокинами, IL-4Rα-цепь в настоящее время изучается в качестве основного объекта. Более того, было клинически доказано, что моноклональные антитела человека к IL-4Rα-цепи являются эффективными в облегчении тяжести и лечении патологических состояний, таких как астма, экзема, атопический дерматит и т.п.
Рецептор интерлейкина 4 человека, как известно, образуется в виде растворимой формы белка (shIL-4Rα, SEQ ID NO: 94), который подавляет пролиферацию клеток, опосредованную IL-4, и повышающую регуляцию IL-5, опосредованную T-клетками. Две формы рецептора являются ассоциированными с аллергической реакцией, которая проявляется в виде заболеваний, таких как аллергический ринит, синусит, астма, экзема и т.д. Следовательно, блокирующие антитела, которые нацеливаются на белок, могут помочь в лечении и облегчении тяжести указанных заболеваний.
Астма представляет собой хроническое воспалительное заболевание дыхательных путей, при котором вовлечено много воспалительных клеток, таких как эозинофилы, тучные клетки и лимфоциты, а ее конкретный патогенез все еще неясен. Так как цитокины, такие как IL-4, играют важную роль в возникновении и развитии бронхиальной астмы, разработка антител, специфичных в отношении IL-4, является одним из эффективных путей лечения астмы. Ингибирование IL-4/IL-4Rα может иметь эффективный иммуномодулирующий эффект в отношении астмы.
Аллергический ринит (AR) характеризуется патогенезом, во многом общем с патогенезом астмы и, как и астма, принадлежит к аллергии I типа. При этом в ходе исследований было обнаружено, что IL-4, IL-17 и IgE играют важную роль в патогенезе аллергического ринита. На текущий момент лекарственная терапия имеет приоритет в отношении лечения AR, в котором интраназальные кортикостероиды и антигистаминные средства занимают центральную позицию.
Атопический дерматит (AD), также известный как гетеротопный дерматит, или наследственный аллергический дерматит, представляет собой общеизвестное дерматологическое заболевание, которое наиболее часто встречается у детей и подростков и часто усложняется определенными наследственными аллергическими заболеваниями, такими как аллергический ринит, астма и т.п. Вовлечение иммунологических факторов, таких как IL-4 и IL-13, является одним из основных причин патогенеза.
Эозинофильный эзофагит (EoE) представляет собой хроническое иммуновоспалительное заболевание, характеризующееся инфильтрацией эозинофилов (EOS) во всех слоях пищевода. Проявление EoE связано с дисфункцией Th2-клеток. В настоящее время протоколы с высокой специфичностью, такие как новое биологическое средство, направленное на IL-5 (такое как меполизумаб), начали пользоваться большой популярностью в исследованиях. Несмотря на то, что посредством иммуномодулирующей терапии были достигнуты результаты в животных моделях, остается необходимость в исследованиях с клиническими испытаниями с участием людей. Лекарственные препараты, такие как ингибиторы PGD2, антитела к TNF-α и антитела к IL-13, в настоящее время находятся на этапе исследования.
Лекарственные препараты на основе моноклональных антител, нацеливающиеся на hIL-4R, на данный момент вошли в этап клинических испытаний, например, дупилумаб, который показал хорошую эффективность в фазе II клинического испытания в отношении атопического дерматита. В дополнение к дупилумабу другие моноклональные антитела к hIL-4R были заявлены в патентных заявках компаниями, например, патент US 7186809 и патент US 7638606.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение предусматривает антитело, специфичное к IL-4R, которое получено с помощью скрининга и оптимизации, и при этом антитело может служить в качестве блокирующего связывание IL-4 с IL-4R средства и может применяться для лечения воспалительных или аллергических заболеваний посредством связывания с IL-4R.
Со ссылкой на нумерацию аминокислотных остатков последовательности, изложенной под SEQ ID NO: 58, антитело по настоящему изобретению содержит серин в положении 31 (31Ser) вариабельной области легкой цепи, содержащейся в нем, и со ссылкой на нумерацию аминокислотных остатков последовательности, изложенной под SEQ ID NO: 93, антитело содержит аспарагиновую кислоту в положении 103 (103Asp) и тирозин в положении 104 (104Tyr) вариабельной области тяжелой цепи, содержащейся в нем. При этом 31Ser расположен в CDR1 вариабельной области легкой цепи антитела по настоящему изобретению соответственно, а 103Asp и 104Tyr расположены в CDR3 вариабельной области тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению соответственно.
Предпочтительно вариабельная область легкой цепи антитела по настоящему изобретению содержит CDR1, изложенную под SEQ ID NO: 2, и вариабельная область тяжелой цепи антитела содержит CDR3, изложенную под SEQ ID NO: 19.
Предпочтительно вариабельная область легкой цепи антитела по настоящему изобретению содержит комбинацию CDR1, CDR2 и CDR3, выбранных из группы, состоящей из:
(1) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 5;
(2) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 4, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 5;
(3) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 6;
(4) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 7;
(5) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 8;
(6) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 4, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 6;
(7) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 4, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 7; и
(8) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 4, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 8; и
вариабельная область тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению содержит комбинацию CDR1, CDR2 и CDR3, выбранных из группы, состоящей из:
(1) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 14, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 17, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19;
(2) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 14, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 18, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19;
(3) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 15, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 17, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19;
(4) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 15, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 18, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19;
(5) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 16, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 18, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19; и
(6) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 16, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 17, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19.
Более предпочтительно антитело по настоящему изобретению содержит вариабельную область легкой цепи, выбранную из аминокислотных последовательностей, представленных в виде следующих последовательностей: SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55 и SEQ ID NO: 57, и антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из аминокислотных последовательностей, представленных в виде следующих последовательностей: SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 91 и SEQ ID NO: 92.
Более предпочтительно антитело по настоящему изобретению содержит комбинацию вариабельной области легкой цепи, и вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из:
(1) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 62;
(2) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 63;
(3) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 59;
(4) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 60;
(5) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 61;
(6) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 67;
(7) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 65;
(8) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 66;
(9) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 64;
(10) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91;
(11) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 74;
(12) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 75;
(13) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 76;
(14) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 77;
(15) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 78;
(16) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 80;
(17) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 40, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(18) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 41, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(19) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(20) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 62;
(21) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91;
(22) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 49, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(23) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 50, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(24) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 45, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(25) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 46, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(26) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 47, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(27) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(28) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 62;
(29) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91;
(30) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(31) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 62;
(32) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91; и
(33) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 51, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает антитело, которое может связываться с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R). Антитело содержит вариабельную область легкой цепи (VL), а вариабельная область легкой цепи содержит комбинацию CDR1, CDR2 и CDR3, выбранную из группы, состоящей из:
(1) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 1, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 5;
(2) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 5;
(3) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 4, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 5;
(4) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 1, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 4, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 5;
(5) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 6;
(6) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 7;
(7) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 8;
(8) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 1, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 6;
(9) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 4, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 6;
(10) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 4, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 8;
(11) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 1, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 4, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 8 и
(12) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 1, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 8;
и/или
антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), и вариабельная область тяжелой цепи содержит комбинацию CDR1, CDR2 и CDR3, выбранную из группы, состоящей из:
(1) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 14, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 17, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19;
(2) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 14, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 18, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19;
(3) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 14, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 17, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 20;
(4) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 14, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 18, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 20;
(5) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 15, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 17, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19;
(6) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 16, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 17, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19; и
(7) CDR1, изложенной под SEQ ID NO: 14, CDR2, изложенной под SEQ ID NO: 18, и CDR3, изложенной под SEQ ID NO: 19.
Далее, что касается каркасных областей антитела по настоящему изобретению, описанного выше, вариабельная область легкой цепи антитела по настоящему изобретению предпочтительно содержит комбинацию FR1, FR2, FR3 и FR4, выбранную из группы, состоящей из:
(1) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 9, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 10, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 12, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 13; и
(2) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 9, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 11, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 12, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 13.
Предпочтительно вариабельная область тяжелой цепи антитела содержит комбинацию FR1, FR2, FR3 и FR4, выбранную из группы, состоящей из:
(1) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 21, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(2) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 22, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(3) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 23, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(4) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 24, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(5) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 24, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 35, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(6) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 25, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(7) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 26, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(8) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 27, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(9) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 29, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(10) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 30, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(11) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 24, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 33, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(12) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 24, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 36, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(13) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 24, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 37, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(14) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 31, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(15) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 27, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 35, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(16) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 26, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 35, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(17) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 25, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 35, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(18) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 28, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 35, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(19) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 28, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 34, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(20) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 23, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 35, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38;
(21) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 22, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 35, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38; и
(22) FR1, изложенной под SEQ ID NO: 21, FR2, изложенной под SEQ ID NO: 32, FR3, изложенной под SEQ ID NO: 35, и FR4, изложенной под SEQ ID NO: 38.
В соответствии с составом домена вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи антитела, известного из уровня техники, вариабельная область легкой цепи или вариабельная область тяжелой цепи антитела по настоящему изобретению содержит вышеуказанные компоненты домена в порядке FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 или содержит вышеуказанные компоненты домена в порядке (X)n-FR1-(X)n-CDR1-(X)n-FR2-(X)n-CDR2-(X)n-FR3-(X)n-CDR3-(X)n-FR4-(X)n, в котором X представляет собой любой аминокислотный остаток, и n представляет собой ноль или целое число, которое больше чем ноль.
Предпочтительно антитело, предусмотренное настоящим изобретением, содержит вариабельную область легкой цепи, выбранную из аминокислотных последовательностей, представленных в виде следующих последовательностей:
SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57 и SEQ ID NO: 58;
и/или
антитело, предусмотренное настоящим изобретением, содержит вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из аминокислотных последовательностей, представленных в виде следующих последовательностей:
SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92 и SEQ ID NO: 93.
В соответствии с конкретными вариантами осуществления настоящего изобретения антитело, предусмотренное настоящим изобретением, содержит комбинацию вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из:
(1) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 62;
(2) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 63;
(3) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 59;
(4) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 60;
(5) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 61;
(6) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 67;
(7) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 65;
(8) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 66;
(9) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 64;
(10) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 68;
(11) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 69;
(12) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 70;
(13) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 71;
(14) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 72;
(15) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 73;
(16) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 89;
(17) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 88;
(18) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 87;
(19) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 86;
(20) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 83;
(21) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 82;
(22) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 81;
(23) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 85;
(24) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 84;
(25) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91;
(26) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 90;
(27) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 74;
(28) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 75;
(29) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 76;
(30) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 77;
(31) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 78;
(32) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 80;
(33) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 39, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(34) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 40, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(35) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 41, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(36) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 42, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(37) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 43, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(38) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(39) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 62;
(40) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 68;
(41) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 72;
(42) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 82;
(43) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 85;
(44) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91;
(45) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 48, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(46) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 49, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(47) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 50, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(48) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 45, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(49) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 46, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(50) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 47, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(51) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 56, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(52) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(53) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 62;
(54) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 68;
(55) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 72;
(56) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 82;
(57) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 85;
(58) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91;
(59) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(60) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 62;
(61) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 68;
(62) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 72;
(63) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 82;
(64) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 85;
(65) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 54, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91;
(66) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 53, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(67) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 51, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(68) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 52, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(69) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 52, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 62;
(70) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 52, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91;
(71) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 58, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 92;
(72) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 57, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 93;
(73) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 44, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 93;
(74) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 58, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 91;
(75) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 55, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 93; и
(76) вариабельной области легкой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 51, и вариабельной области тяжелой цепи, изложенной под SEQ ID NO: 93.
Антитело, предусмотренное настоящим изобретением, способно связываться с IL-4R и функционирует как антагонист IL-4R. Предпочтительно антитело способно связываться с IL-4Rα, предпочтительно с IL-4Rα млекопитающих, более предпочтительно с IL-4Rα человека, еще более предпочтительно с растворимым IL-4Rα человека.
аффинность связывания антитела, предусмотренного настоящим изобретением, с IL-4Rα можно определить с помощью способа Biacore или ELISA. Было определено, что антитело связывает IL-4Rα с аффинностью, которая составляет менее 100 нМ, менее 10 нМ, менее 1 нМ, менее 0,5 нМ и даже менее 0,1 нМ.
В одинаковых условиях отношение уровня экспрессии антитела, предусмотренного настоящим изобретением, к уровню экспрессии эталонного антитела составляет 0,1-3:1, предпочтительно 0,3-3:1, более предпочтительно 0,4-3:1, более предпочтительно 0,5-3:1, еще более предпочтительно 0,6-3:1, более предпочтительно 0,7-3:1, еще более предпочтительно 1-3:1.
В отношении типа антитела, антитело, предусмотренное настоящим изобретением, может представлять собой моноклональное антитело, полностью или частично гуманизированное антитело или химерное антитело.
Или предпочтительно антитело представляет собой иммуноглобулин, предпочтительно IgA, IgD, IgE, IgG или IgM, более предпочтительно подтипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, еще более предпочтительно подтипа IgG2 или IgG4.
В еще одном аспекте настоящее изобретение предусматривает слитый белок или конъюгат, содержащий антитело по настоящему изобретению. Слитый белок или конъюгат могут дополнительно содержать рецептор клеточной поверхности, активный белок или активный полипептид, низкомолекулярное соединение, такое как аминокислота и сахарид, низкомолекулярный полимер или другие части, химически модифицирующие антитело и т.д., связанные с антителом по настоящему изобретению с помощью химических или физических способов.
В еще одном аспекте настоящее изобретение предусматривает последовательность нуклеиновой кислоты, которая может кодировать вариабельную область тяжелой цепи и/или вариабельную область легкой цепи антитела, предусмотренного настоящим изобретением.
Предпочтительно последовательность нуклеиновой кислоты может кодировать тяжелую цепь и/или легкую цепь антитела, предусмотренного настоящим изобретением.
В еще одном аспекте настоящее изобретение также предусматривает вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, предусмотренную настоящим изобретением. Вектор может представлять собой эукариотический вектор экспрессии, прокариотический вектор экспрессии, искусственную хромосому, фаговый вектор или т.п.
Вектор или последовательность нуклеиновой кислоты, описанные выше, можно применять для трансформации или трансфекции клеток-хозяев в целях сохранения или экспрессии антитела и т.п. Соответственно, настоящее изобретение также предусматривает клетку-хозяина, трансформированную или трансфицированную с помощью последовательности нуклеиновой кислоты или вектора. Клетка-хозяин может представлять собой любую прокариотическую или эукариотическую клетку, например, бактериальную клетку или клетку насекомого, гриба, растения или животного.
Антитело, предусмотренное настоящим изобретением, может быть получено с помощью любого способа, известного из уровня техники. Например, сначала вариабельная область тяжелой цепи и/или вариабельная область легкой цепи антитела или тяжелая и/или легкая цепь антитела могут быть получены из последовательности нуклеиновой кислоты, предусмотренной настоящим изобретением, а затем собраны в антитело с любым другим доменом антитела; или клетку-хозяина, предусмотренную настоящим изобретением, культивируют в условиях, при которых клетка-хозяин может экспрессировать вариабельную область тяжелой цепи и/или вариабельную область легкой цепи антитела или тяжелую и/или легкую цепь антитела для сборки в антитело.
Необязательно способ дополнительно включает стадию выделения полученного антитела.
Антитело, слитый белок или конъюгат, последовательность нуклеиновой кислоты, вектор или клетка-хозяин, предусмотренные настоящим изобретением, или антитело, полученное с помощью способа, описанного выше, могут содержаться в фармацевтической композиции и, более конкретно, в фармацевтическом препарате для различных целей, согласно фактической необходимости. Следовательно, в дополнительном аспекте настоящее изобретение также предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую антитело, слитый белок или конъюгат, последовательность нуклеиновой кислоты, вектор, клетку-хозяина по настоящему изобретению и/или антитело, полученное с помощью способа, описанного выше.
Необязательно фармацевтическая композиция может представлять собой фармацевтический препарат. Фармацевтический препарат представляет собой, например, инъекционный раствор.
Фармацевтическая композиция или фармацевтический препарат могут дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество, в зависимости от конкретной лекарственной формы.
Фармацевтическая композиция или фармацевтический препарат также могут содержать по меньшей мере один из следующих лекарственных препаратов: антиастматические средства, такие как альбутерол и т.д., антигистаминные средства, такие как лоратадин и т.д., иммуносупрессивные средства, такие как такролимус и пимекролимус и т.д., блокаторы М-рецептора, такие как ипратропия бромид и т.д., блокаторы рецептора лейкотриена, такие как монтелукаст и т.д., ингибиторы фосфодиэстеразы, такие как теофилин и т.д., нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, такие как 5-аминосалициловая кислота и т.д., гормоны, такие как беклометазон и будесонид и т.д., другими словами, антитело, слитый белок или конъюгат, последовательность нуклеиновой кислоты, вектор, клетка-хозяин, предусмотренные настоящим изобретением, или антитело, полученное с помощью способа по настоящему изобретению, описанного выше, можно применять в комбинации с другими лекарственными препаратами при необходимости.
В еще одном дополнительном аспекте настоящее изобретение также предусматривает применение антитела, слитого белка или конъюгата, последовательности нуклеиновой кислоты, вектора, клетки-хозяина или антитела, полученного с помощью способа изготовления лекарственного препарата для предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания.
Предпочтительно воспалительное или аллергическое заболевание предусматривает аутоиммунное заболевание, такое как аллергический дерматит, астма, эозинофильный эзофагит, экзема, аллергический ринит, носовой полип, ревматоидный артрит и т.п.
В еще одном аспекте настоящее изобретение предусматривает способ предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, и при этом способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, антитела, слитого белка или конъюгата, последовательности нуклеиновой кислоты, вектора, клетки-хозяина, предусмотренных настоящим изобретением и/или антитела, полученного с помощью способа по настоящему изобретению.
Предпочтительно субъект представляет собой млекопитающее, более предпочтительно субъект представляет собой человека.
Предпочтительно воспалительное или аллергическое заболевание предусматривает аутоиммунное заболевание, такое как аллергический дерматит, астма, эозинофильный эзофагит, экзема, аллергический ринит, носовой полип, ревматоидный артрит и т.п.
Другие лекарственные препараты можно применять в комбинации для предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, например, способ дополнительно включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, по меньшей мере одного лекарственного препарата, выбранного из группы, состоящей из: антиастматических средств, таких как альбутерол и т.д., антигистаминных средств, таких как лоратадин и т.д., иммуносупрессивных средств, таких как такролимус и пимекролимус и т.д., блокаторов М-рецепторов, таких как ипратропия бромид и т.д., блокаторов рецепторов лейкотриенов, таких как монтелукаст и т.д., ингибиторов фосфодиэстеразы, таких как теофилин и т.д., нестероидных противовоспалительных леакрственных средств, таких как 5-аминосалициловая кислота и т.д., гормонов, таких как беклометазон и будесонид и т.д.
Предпочтительно лекарственный препарат вводят одновременно или последовательно с антителом, слитым белком или конъюгатом, последовательностью нуклеиновой кислоты, вектором, клеткой-хозяином, предусмотренными настоящим изобретением, и/или антителом, полученным с помощью способа по настоящему изобретению.
В еще одном дополнительном аспекте настоящее изобретение также предусматривает набор, и при этом набор содержит антитело, слитый белок или конъюгат, последовательность нуклеиновой кислоты, вектор, клетку-хозяина, предусмотренные настоящим изобретением, и/или антитело, полученное с помощью способа по настоящему изобретению.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Настоящее изобретение может быть более простым для понимания в комбинации с неограничивающими вариантами осуществления по настоящему изобретению и прилагаемыми графическими материалами, в которых представлено следующее.
На фигуре 1 показаны фармакокинетические кривые, полученные с применением антител по настоящему изобретению, у мыши.
На фигуре 2 показаны фармакокинетические кривые, полученные с применением антител по настоящему изобретению, у макака-крабоеда.
На фигуре 3 представлены панели 3A-3C, на которых показано специфическое связывание антител по настоящему изобретению с клетками TF-1, экспрессирующими IL-4Rα, определенное с помощью FACS, где на панели 3A показан сигнал флуоресценции без добавления антитела L1012H1031 по настоящему изобретению; на панели 3B показан сигнал флуоресценции с добавлением антитела L1012H1031 по настоящему изобретению; на панели 3C показано наложение сигналов панелей 3A и 3B для сравнения.
На фигуре 4 представлены панели 4A-4D, на которых показано, что специфическое связывание антител по настоящему изобретению с клетками TF-1, экспрессирующими IL-4Rα, блокировано sIL-4Rα, что присутствует в системе, как определено с помощью FACS, где на панели 4A показан сигнал флуоресценции без добавления антитела L1012H1031 по настоящему изобретению; на панели 4B показан сигнал флуоресценции с добавлением антитела L1012H1031 по настоящему изобретению; на панели 4C показан сигнал флуоресценции с добавлением антитела L1012H1031 по настоящему изобретению и sIL-4Rα; и на панели 4D показано наложение сигналов панелей 4A-4C для сравнения.
На фигуре 5 представлены панели 5A-5B, на которых показан эффект антител по настоящему изобретению в отношении подавления высвобождения TARC и MDC, определенный с помощью ELISA, где на панели 5A показан результат, заключающийся в том, антитело L1020H1031 по настоящему изобретению подавляет высвобождение TARC, и на панели 5B показан результат, заключающийся в том, что антитело L1020H1031 по настоящему изобретению подавляет высвобождение MDC.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Настоящее изобретение будет дополнительно детально описано в комбинации с конкретными вариантами осуществления в дальнейшем. Специалистам в данной области техники следует принимать во внимание, что предусмотренные варианты осуществления применяются только для иллюстрации настоящего изобретения, а не для ограничения объема настоящего изобретения каким-либо образом.
Все экспериментальные способы в следующих примерах являются традиционными способами если не указано иное. Исходные материалы, применяемые в следующих примерах, являются коммерчески доступными, полученными из обычных запасов биохимических реагентов, если не указано иное.
В следующих примерах антитела, показанные в таблице 1, и их эффекты представлены в качестве примера и являются проверенными.
Таблица 1. Антитела, приводимые в качестве примера, предусмотренные настоящим изобретением
Пример 1. Получение антител по настоящему изобретению и определение уровней экспрессии с помощью электрофореза в SDS-PAGE-геле в невосстанавливающих условиях
Последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, вставляли в вектор pFUSE2ss-CLIg-hK (Invivogen, номер по каталогу: pfuse2ss-hclk) с применением сайтов рестрикции EcoRI и BsiWI с конструированием вектора экспрессии легкой цепи. Последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, вставляли в вектор pFUSEss-CHIg-hG2 (Invivogen, номер по каталогу: pfusess-hchg2) или вектор pFUSEss-CHIg-hG4 (Invivogen, номер по каталогу: pfusess-hchg4) с применением сайтов рестрикции EcoRI и NheI с конструированием вектора экспрессии тяжелой цепи.
Культивирование и трансфекцию клеток Expi293 проводили в соответствии с руководством набора системы экспрессии Expi293™ от Invitrogen (номер по каталогу: A14635). Плотность клеток доводили до 2×106 клеток/мл для трансфекции и добавляли на каждый мл культуры клеток 0,6 мкг вектора экспрессии легкой цепи, описанного выше, и 0,4 мкг вектора экспрессии тяжелой цепи, описанного выше, а надосадочную жидкость из культуры собирали через четыре дня.
Культуральную надосадочную жидкость подвергали электрофорезу в SDS-PAGE-геле в невосстанавливающих условиях в соответствии с протоколом, описанным в Appendix 8, the Third edition of the "Molecular Cloning: A Laboratory Manual".
Изображения получали с помощью сканирующей системы для получения изображений геля от BEIJING JUNYI Electrophoresis Co., LTD и количественную оценку для определения уровней экспрессии антител после временной трансфекции проводили в геле с применением программного обеспечения Gel-PRO ANALYZER . Результаты выражали относительно уровня экспрессии контрольного антитела 1 (контрольное антитело 1 конструировали в соответствии с патентом US 7186809, которое содержит вариабельную область легкой цепи, изложенную под SEQ ID NO: 10 из патента US 7186809, и вариабельную область тяжелой цепи, изложенную под SEQ ID NO: 12 из патента US 7186809, то же самое ниже) (контрольное антитело 2 конструировали в соответствии с патентом US 7638606, которое содержит вариабельную область легкой цепи, изложенную под SEQ ID NO: 6 из патента US 7638606, и вариабельную область тяжелой цепи, изложенную под SEQ ID NO: 42 из патента US 7638606, то же самое ниже). Что касается результатов, см. таблицы 2a-2c ниже.
Таблица 2a. Уровни экспрессии антител по настоящему изобретению после временной трансфекции (антител, уровни экспрессии которых значительно выше, чем уровни экспрессии контрольного антитела 1)
Таблица 2b. Уровни экспрессии антител по настоящему изобретению после временной трансфекции (антител, уровни экспрессии которых немного ниже, чем уровень экспрессии контрольного антитела 1)
Таблица 2c. Уровни экспрессии антител по настоящему изобретению после временной трансфекции (антител, уровни экспрессии которых значительно ниже, чем уровень экспрессии контрольного антитела 1)
Пример 2. Выявление подавляющего эффекта антител по настоящему изобретению в отношении пролиферации клеток TF-1 с помощью hIL-4 или hIL-13
1. Получение реагентов
Раствор hIL-4 (Invivogen, номер по каталогу: rhil-4): hIL-4 растворяли в 100 мкл PBS, содержащего 0,1% BSA (Beyotime, номер по каталогу: ST023), с получением раствора с концентрацией 100 мкг/мл, а растворенный hIL-4 распределяли в центрифужные пробирки объемом 1,5 мл (Nunc) в объеме 5 мкл на пробирку и затем пробирки хранили в холодильнике при -20°C.
Раствор WST-1 (Beyotime, номер по каталогу: C0036): электроноакцепторное средство объемом 5 мл (C0036-2) добавляли к порошку WST-1 (C0036-1) и получали раствор WST-1, когда порошок WST-1 полностью растворялся, затем его распределяли в центрифужные пробирки объемом 1,5 мл (Nunc) в объеме 620 мкл на пробирку и потом пробирки хранили в холодильнике при -20°C.
2. Культура клеток TF-1
Замороженные в жидком азоте клетки TF-1 (ATCC: CRL-2003™) извлекали, взбалтывали на водяной бане при 37°C для быстрого растворения. Растворенную суспензию клеток переносили в центрифужную пробирку объемом 15 мл, а затем в нее добавляли среду 1640 до 10 мл. Пробирку центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин, надосадочную жидкость из нее удаляли и клеточные осадки сохраняли и промывали еще раз. 10 мл среды 1640, содержащей 10% FBS и 2 нг/мл GM-CSF (Sino Biological, номер по каталогу: 10015-H01H), добавляли в пробирку и получали плотность клеток, составляющую 1×105-1×106 клеток/мл. Суспензию переносили в колбу для клеточной культуры T75 (Nunc) и клетки статически культивировали в инкубаторе (Thermo) при 37°C, 5% CO2. Каждые 2-3 дня суспензию клеток извлекали, центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин и клетки ресуспендировали в среде объемом 10 мл. Затем подсчитывали 1×106 клеток и переносили в новую колбу для клеточной культуры T75, и в нее добавляли среду до объема 10 мл. Клетки непрерывно пассировали 2-3 раза для достижения хорошего состояния (клетки были яркими и имели немного неправильную форму при суспендировании по отдельности) для эксперимента по блокированию пролиферации.
3. Получение и очистка антител
a) Образцы культуральной надосадочной жидкости антител по настоящему изобретению:
клетки Expi293 трансфицировали с помощью плазмид, несущих разные группы генов антител, и 200 мкл культуральной надосадочной жидкости извлекали через 4 дня после трансфекции, а затем центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм и использовали для эксперимента по блокированию пролиферации.
b) Образцы очищенных антител по настоящему изобретению: для каждого антитела по настоящему изобретению культуральную надосадочную жидкость, клетки которой экспрессируют антитело, пропускали через фильтр с размером пор 0,22 мкм и затем очищали с помощью колонки для аффинной хроматографии с белком А GE MabSelect Sure (номер по каталогу: 11003494) в системе очистки GE AKTA purifier 10. Очищенное антитело собирали и концентрировали с применением концентратора с ультрафильтрацией Amicon (номер по каталогу: UFC903096) и затем проводили количественную оценку. Антитело разбавляли с помощью PBS до концентрации от 0 до 1 мкг/мл для эксперимента по блокированию пролиферации.
4. Эксперимент по блокированию пролиферации
Выращенные до достаточного состояния клетки в колбе для клеточной культуры T75 извлекали и переносили в центрифужную пробирку объемом 15 мл, которую затем центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость удаляли и клеточные осадки ресуспендировали с помощью 10 мл PBS, центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость удаляли и клеточные осадки ресуспендировали в 10 мл среды 1640 (без GM-CSF), содержащей 10% FBS, центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость удаляли и клеточные осадки ресуспендировали в 5 мл среды 1640 (без GM-CSF), содержащей 10% FBS. Клетки подсчитывали и плотность клеток доводили до 5×105 клеток/мл с помощью добавления среды. Суспензию клеток добавляли в 96-луночный планшет в объеме 80 мкл на лунку (лунки по внешнему кругу оставляли без клеток для предотвращения испарения). Для каждого антитела по настоящему изобретению 10 мкл очищенного антитела с разными концентрациями или 10 мкл соответствующей культуральной надосадочной жидкости добавляли к клеткам в 96-луночный планшет (в 3 лунки повторности). Затем hIL-4 разбавляли до 50 нг/мл с помощью среды 1640, содержащей 10% FBS, и добавляли в соответствующие лунки в 96-луночном планшете в объеме 10 мкл на лунку так, чтобы конечная плотность клеток составляла 4×105 клеток/мл, концентрация hIL-4 составляла 5 нг/мл и объем в каждой лунке 96-луночного планшета составлял 100 мкл. Вводили группу отрицательного контроля (в 3 лунках повторности), в которой не добавляли hIL-4 или антитело и добавляли только такое же количество клеток и такой же объем среды для культивирования. При этом вводили группу положительного контроля (в 3 лунках повторности) с добавлением hIL-4 в такой же концентрации и такого же объема среды, и в данной группе не добавляли антитело. 200 мкл PBS добавляли в каждую лунку по внешнему кругу 96-луночного планшета для клеточной культуры для предотвращения испарения жидкости во внутреннем круге. 96-луночный планшет для клеточной культуры помещали в инкубатор с 5% CO2 при 37°C для статического культивирования.
Вышеописанный эксперимент повторяли с помощью такой же процедуры с применением 500 нг/мл hIL-13 (его конечная концентрация составляла 50 нг/мл после добавления в клетки).
5. Статистическая обработка данных
После статического культивирования клеток в 96-луночном планшете для клеточной культуры в течение 72 часов в инкубаторе с 5% CO2 к клеткам в каждую лунку добавляли 10 мкл раствора WST-1. 96-луночный планшет для клеточной культуры помещали в инкубатор с 5% CO2 при 37°C для дополнительного статического культивирования. 24 ч спустя 96-луночный планшет помещали в Flexstation 3 (Molecular Devices) и считывали значения OD450-OD650.
Для культуральных надосадочных жидкостей антител по настоящему изобретению их значения OD450-OD650 (значение OD) и значения группы положительного контроля и группы отрицательного контроля применяли для расчета степени подавления следующим образом: степень подавления = (значение OD надосадочной жидкости трансфицированных клеток - значение OD группы положительного контроля) / (значение OD группы отрицательного контроля - значение OD группы положительного контроля) × 100%. Результаты блокирующего эффекта антител по настоящему изобретению в отношении пролиферации клеток TF-1 с помощью hIL-4 или hIL-13 показаны в таблицах 3a-3b ниже.
Для очищенных антител по настоящему изобретению с разными концентрациями измеренные данные OD450-OD650 вводили в программное обеспечение prism5, в котором значение группы отрицательного контроля было установлено как самое низкое, значение группы положительного контроля было установлено как самое высокое, и использовали логарифм концентрации антитела. Кривую логарифма концентрации антитела и значения OD450-OD650 аппроксимировали с помощью программного обеспечения prism5. Рассчитанные значения IC50 показаны в таблице 4 ниже.
Таблица 3a. Результаты скрининга подавляющих эффектов антител по настоящему изобретению в отношении активности пролиферации клеток TF-1 (антител с увеличенными уровнями подавления по сравнению с контрольным антителом 1).
Таблица 3b. Результаты скрининга подавляющих эффектов антител по настоящему изобретению в отношении активности пролиферации клеток TF-1 (антител с такими же или сниженными уровнями подавления по сравнению с контрольным антителом 1).
Таблица 4. Данные по активности очищенных антител (600-900 мл) после временной трансфекции
Пример 3. Выявление показателей способности антител по настоящему изобретению к связыванию с sIL-4Rα с применением ELISA
1. Получение реагентов
Раствор sIL-4Rα (PEPRO TECH, номер по каталогу: 200-04R): брали sIL-4Rα и к нему добавляли 1 мл ddH2O, размешивали путем переворачивания и затем получали раствор с концентрацией 100 мкг/мл. Раствор хранили в холодильнике при -20°C после разделения на порции.
Образец для тестирования: для каждого антитела по настоящему изобретению 10 мкл и 2 мкл надосадочной жидкости клеточной культуры клеток Expi293, экспрессирующих антитело после временной трансфекции (среда представляла собой среду экспрессии Expi293, Invitrogen, номер по каталогу: A1435102; суспендирование клеточной культуры проводили в течение 4 дней при 100 об./мин в инкубаторе с 8% CO2) соответственно добавляли к 990 мкл и 998 мкл PBS с получением образцов антител для тестирования при разбавлениях 1:100 и 1:500.
Контрольный образец: в качестве образцов отрицательного контроля культуральную надосадочную жидкость нормальных клеток (нетрансфицированные клетки Expi293; среда представляла собой среду экспрессии Expi293, Invitrogen, номер по каталогу: A1435102; суспендирование клеточной культуры проводили в течение 4 дней при 100 об./мин в инкубаторе с 8% CO2) также разбавляли при 1:100 и 1:500.
2. Выявление с применением ELISA
100 мкл раствора sIL-4Rα с концентрацией 100 мкг/мл добавляли к 9,90 мл PBS, размешивали путем переворачивания и затем получали буфер для иммобилизации антигенов с концентрацией 1,0 мкг/мл. Полученный буфер для иммобилизации антигенов добавляли в 96-луночный планшет ELISA (Corning) в объеме 100 мкл на лунку. 96-луночный планшет ELISA инкубировали в течение ночи в холодильнике при 4°C. На следующий день раствор из него удаляли и PBS, содержащий 2% BSA, добавляли в 96-луночный планшет ELISA ряд за рядом в объеме 300 мкл на лунку. 96-луночный планшет ELISA инкубировали в течение 2 часов в холодильнике при 4°C. Затем PBS, содержащий 2% BSA, удаляли и планшет промывали 3 раза с помощью PBST. Разбавленные антитела для тестирования последовательно добавляли в соответствующие лунки, при этом также добавляли нормальные культуральные надосадочные жидкости в качестве образцов отрицательного контроля. Для каждого образца применяли три дублированные лунки в объеме 100 мкл каждая. Планшет ELISA заворачивали в предохраняющую пленку (или покрывали) и инкубировали в течение 1 ч при 10°C в инкубаторе с постоянной температурой. Затем 96-луночный планшет ELISA извлекали и раствор из него удаляли. После промывания с помощью PBST 3 раза добавляли раствор TMB (Solarbio, номер по каталогу: PR1200) в 96-луночный планшет ELISA ряд за рядом в объеме 100 мкл на лунку. 96-луночный планшет ELISA выдерживали при комнатной температуре в течение 5 минут и сразу же добавляли 2 M раствор H2SO4 для прекращения реакции. 96-луночный планшет ELISA помещали в Flexstation 3 (Molecular Devices), считывали значения OD450 и собирали, рассчитывали и анализировали данные. Результаты выражали относительно аффинности контрольного антитела 1. Что касается результатов, см. таблицы 5a-5c ниже.
Таблица 5a. Значения аффинности антител по настоящему изобретению к sIL-4Rα (антител, значения аффинности которых значительно больше, чем значения аффинности контрольного антитела 1)
Таблица 5b. Значения аффинности антител по настоящему изобретению к sIL-4Rα (антител, значения аффинности которых такие же или немного ниже, чем значения аффинности контрольного антитела 1)
Таблица 5c. Значения аффинности антител по настоящему изобретению к sIL-4Rα (антител, значения аффинности которых значительно ниже чем значения аффинности контрольного антитела 1)
Пример 4. Фармакокинетика антител по настоящему изобретению у мыши
Серии фармакокинетических экспериментов осуществляли на мышах для дополнительного скрининга антител.
Отбирали мышей SPF Balb/c в возрасте 6-8 недель и осуществляли подкожную инъекцию антител (антител по настоящему изобретению или контрольного антитела 2) в дозе 5 мг/кг (массы мыши). Образцы крови собирали в моменты времени перед введением (0 ч) и через 2, 8, 24, 48, 72, 120, 168, 216, 264, 336 ч после введения. Для забора крови животных анестезировали посредством ингаляции изофлурана, образцы крови брали из глазничного венозного сплетения, и объем образца от каждого животного составлял приблизительно 0,1 мл; через 336 ч после введения животных анестезировали посредством ингаляции изофлурана и затем умерщвляли после забора крови из полой нижней вены.
К образцам крови не добавляли антикоагулянта, а сыворотку выделяли из каждого образца посредством центрифугирования при 1500 g в течение 10 мин при комнатной температуре в течение 2 ч после забора крови. Собранные надосадочные жидкости сразу же переносили в новые маркированные центрифужные пробирки и затем обеспечивали временное хранение при -70°C. Концентрации антител у мышей определяли с помощью ELISA.
1. Получение реагентов
Раствор sIL-4Rα (PEPRO TECH, номер по каталогу: 200-04R): брали sIL-4Rα и к нему добавляли 1 мл ddH2O, размешивали путем переворачивания и затем получали раствор с концентрацией 100 мкг/мл. Раствор хранили в холодильнике при -20°C после разделения на порции.
Образец для тестирования: 1 мкл сыворотки, собранной в разные моменты времени, добавляли к 999 мкл PBS, содержащего 1% BSA, с получением образца сыворотки для тестирования в разбавлении 1:1000.
Стандартный образец: антитело для тестирования разбавляли до концентрации 0,1 мкг/мл с помощью PBS, содержащего 1% BSA и 0,1% нормальной сыворотки животного (Beyotime, номер по каталогу: ST023). После этого 200, 400, 600, 800, 900, 950, 990 и 1000 мкл PBS, содержащего 1% BSA и 0,1% нормальной сыворотки животного, соответственно добавляли к 800, 600, 400, 200, 100, 50, 10 и 0 мкл антител для тестирования с концентрацией 0,1 мкг/мл, и стандартные образцы антител по настоящему изобретению, таким образом, получали с конечной концентрацией 80, 60, 40, 20, 10, 5, 1 или 0 нг/мл соответственно.
2. Выявление с применением ELISA
250 мкл раствора sIL-4Rα с концентрацией 100 мкг/мл добавляли к 9,75 мл PBS, размешивали путем переворачивания и затем получали буфер для иммобилизации антигенов с концентрацией 2,5 мкг/мл. Полученный буфер для иммобилизации антигенов добавляли в 96-луночный планшет ELISA (Corning) в объеме 100 мкл на лунку. 96-луночный планшет ELISA инкубировали в течение ночи в холодильнике при 4°C после заворачивания в предохраняющую пленку (или покрытия). На следующий день 96-луночный планшет ELISA извлекали и раствор из него удаляли, а PBS, содержащий 2% BSA, добавляли в него в объеме 300 мкл на лунку. 96-луночный планшет ELISA инкубировали в течение 2 часов в холодильнике при 4°C после заворачивания в предохраняющую пленку (или покрытия). Затем 96-луночный планшет ELISA извлекали и раствор из него удаляли, а планшет промывали 3 раза с помощью PBST. Разбавленные стандартные антитела и сыворотку для выявления последовательно добавляли в соответствующие лунки и для каждого образца делали три дублированных лунки в объеме 100 мкл каждая. Планшет ELISA заворачивали в предохраняющую пленку (или покрывали) и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем раствор из 96-луночного планшета ELISA удаляли и планшет промывали с помощью PBST 3 раза. Далее раствор TMB (Solarbio, номер по каталогу: PR1200) добавляли в 96-луночный планшет ELISA ряд за рядом в объеме 100 мкл на лунку. 96-луночный планшет ELISA выдерживали при комнатной температуре в течение 5 минут и сразу же добавляли 2 M раствор H2SO4 для прекращения реакции. 96-луночный планшет ELISA затем помещали в Flexstation 3 (Molecular Devices), считывали значения OD450, собирали данные и результаты рассчитывали с помощью программного обеспечения Winnonlin. Результаты фармакокинетических исследований показаны на фигуре 1 и в таблице 6 ниже.
Таблица 6. Результаты фармакокинетических исследований антител по настоящему изобретению у мыши
Пример 5. Фармакокинетика антител по настоящему изобретению у макака-крабоеда
Серии фармакокинетических экспериментов осуществляли на макаках-крабоедах для дополнительного скрининга антител.
Отбирали макаков-крабоедов в возрасте 3-5 лет весом 2-5 кг каждый и осуществляли подкожную инъекцию антител (антител по настоящему изобретению или контрольного антитела 2) в дозе 5 мг/кг (вес макака-крабоеда). Антитело или контрольное антитело 2 для введения тщательно экстрагировали с помощью одноразового обеззараженного шприца и осуществляли многоточечные инъекции подкожно на внутренней стороне бедра животного, и вводимый объем на каждую точку составлял не более 2 мл. Образцы цельной крови собирали из подкожной вены задней конечности животного в моменты времени перед введением (0 h) и через 0,5, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 120, 168, 240, 336 ч, 432 ч, 504 ч, 600 ч, 672 ч после введения. Объем крови, собранной от каждого животного, составлял приблизительно 0,1 мл каждый раз.
К образцам крови не добавляли антикоагулянта, а сыворотку выделяли из каждого образца посредством центрифугирования при 1500 g в течение 10 мин при комнатной температуре в течение 2 ч после забора крови. Собранные надосадочные жидкости сразу же переносили в новые маркированные центрифужные пробирки и затем обеспечивали временное хранение при -70°C. Концентрацию антител у макаков-крабоедов определяли согласно способу, описанному в примере 4. Результаты фармакокинетических исследований показаны на фигуре 2 и в таблице 7 ниже.
Таблица 7. Результаты фармакокинетических исследований антител по настоящему изобретению у макака-крабоеда
Пример 6. Выявление связывания антител по настоящему изобретению с клетками TF-1 с применением FACS
1. Клеточная культура
Клетки TF-1 (ATCC: CRL-2003™), замороженные в жидком азоте, извлекали, осторожно взбалтывали на водяной бане при 37°C для быстрого растворения. Растворенную суспензию клеток переносили в центрифужную пробирку объемом 15 мл, а затем в нее добавляли среду 1640 (Hyclone, номер по каталогу: SH30809.01B) до 10 мл. Пробирку центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин, надосадочную жидкость из нее удаляли и клеточные осадки сохраняли и промывали еще раз. Плотность клеток доводили до 1×105-1×106 клеток/мл с помощью среды 1640, содержащей 10% FBS (Hyclone, номер по каталогу: SV30184.02) и 2 нг/мл GM-CSF (Sino Biological, номер по каталогу: 10015-H01H). Суспензию переносили в колбу для клеточной культуры T75 (Nunc) и клетки статически культивировали в инкубаторе (Thermo) при 37°C, 5% CO2. Каждые 2-3 дня суспензию клеток извлекали, центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин и клетки ресуспендировали в 10 мл среды. Затем подсчитывали 1×106 клеток и переносили в новую колбу для клеточной культуры T75, и в нее добавляли среду до объема 10 мл. Клетки непрерывно пассировали 2-3 раза для достижения хорошего состояния (клетки были яркими и имели немного неправильную форму при суспендировании по отдельности) для эксперимента.
2. Обработка клеток
Брали клетки Tf-1 и подсчитывали их под микроскопом. Клетки делили на три группы и помещали в три центрифужные пробирки объемом 1,5 мл соответственно. Число клеток для каждой группы составляло 1×106. Клетки центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин и затем ресуспендировали в 1 мл холодного PBS, содержащего 1% BSA, для повторного промывания. Затем клетки центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин и добавляли 45 мкл холодного PBS, содержащего 1% BSA, в каждую центрифужную пробирку для ресуспендирования клеток, а затем 5 мкл (500 мкг/мл) антитела L1021H1031, L1020H1031 или L1012H1031 по настоящему изобретению добавляли в первую центрифужную пробирку, а 5 мкл PBS добавляли во вторую центрифужную пробирку в качестве отрицательного контроля. Клетки оставляли на льду в течение 45 мин и затем центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин. После этого клетки ресуспендировали в 1 мл холодного PBS, содержащего 1% BSA, для повторного промывания и центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин 499 мкл холодного PBS, содержащего 1% BSA, добавляли в каждую центрифужную пробирку для ресуспендирования клеток и затем в нее добавляли 1 мкл FITC-маркированного антитела козы к IgG человека (H+L) (Beyotime, номер по каталогу: A0556). После нахождения на льду в течение 45 мин клетки центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин и ресуспендировали в 1 мл холодного PBS, содержащего 1% BSA, для повторного промывания. Таким образом получали клетки для выявления.
3. Выявление с помощью FACS
Прибор FACS и его операционная система работали в соответствии с правильным протоколом. После установки правильных параметров клетки добавляли в трубку для детектирования для выявления сигнала флуоресценции канала FL1. Результаты анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo 7.6, и они показаны на фигуре 3, панели 3A-3C. Можно видеть, что антитела по настоящему изобретению способны специфически связывать клетки TF-1, экспрессирующие IL-4Rα.
Пример 7. Выявление блокирующего эффекта растворимого hIL-4 Rα (sIL-4Rα) в отношении связывания антител с клетками TF-1 с помощью FACS
1. Получение реагентов
Раствор hIL-4 (Invivogen, номер по каталогу: rhil-4) получали, как описано в примере 2.
2. Клеточная культура
Клетки TF-1 (ATCC: CRL-2003™) культивировали, как описано в примере 6.
3. Смешивание sIL-4Rα с антителами по настоящему изобретению
10 мкл (100 мкг/мл) sIL-4Rα и 5 мкл (500 мкг/мл) антитела L1021H1031, L1020H1031 или L1012H1031 по настоящему изобретению смешивали до однородности в центрифужной пробирке объемом 1,5 мл при молярном соотношении 2:1. Смесь 10 мкл PBS и 5 мкл антитела L1021H1031, L1020H1031 или L1012H1031 по настоящему изобретению служила в качестве положительного контроля, и 15 мкл PBS служили в качестве отрицательного контроля. Центрифужные пробирки помещали в инкубатор при 37°C в течение 1 ч.
4. Обработка клеток
Брали клетки TF-1 и затем подсчитывали их под микроскопом. Клетки делили на четыре группы и помещали в четыре центрифужные пробирки объемом 1,5 мл соответственно. Число клеток для каждой группы составляло 1×106. Клетки центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин и затем ресуспендировали в 1 мл холодного PBS, содержащего 1% BSA, для повторного промывания. Затем клетки центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин и добавляли 35 мкл холодного PBS, содержащего 1% BSA, в каждую центрифужную пробирку для ресуспендирования клеток, а затем 15 мкл каждой из разных смесей антител и контроль, полученные на стадии 3, добавляли в пробирки соответственно. После нахождения на льду в течение 45 мин клетки центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин и ресуспендировали в 1 мл холодного PBS, содержащего 1% BSA, для повторного промывания, и центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин 499 мкл холодного PBS, содержащего 1% BSA, добавляли в каждую центрифужную пробирку для ресуспендирования клеток, а затем в нее добавляли 1 мкл FITC-маркированного антитела козы к IgG человека (H+L) (Beyotime, номер по каталогу: A0556). После нахождения на льду в течение 45 мин клетки центрифугировали при 800 об./мин в течение 5 мин и ресуспендировали в 1 мл холодного PBS, содержащего 1% BSA, для повторного промывания. Таким образом получали клетки для выявления.
5. Выявление с помощью FACS
Прибор FACS и его операционная система работали в соответствии с правильным протоколом. После установки правильных параметров клетки добавляли в трубку для детектирования для выявления сигнала флуоресценции канала FL1. Результаты анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo 7.6, и они показаны на фигуре 4, панели 4A-4D. Можно увидеть, что sIL-4Rα может специфически и эффективно блокировать специфическое связывание антител по настоящему изобретению с клетками TF-1.
Пример 8. Определение аффинности антитела с помощью Bicore
Антитело к Fc (AHC) человека (GE Healthcare) связывали с чипом CM5, а затем антитело по настоящему изобретению захватывали с помощью AHC. Затем sIL-4Rα человека при разных концентрациях пропускали по поверхности чипа, на которой захватывалось антитело по настоящему изобретению. Для захвата и связывания антитело по настоящему изобретению разбавляли до 2 мкг/мл и антиген sIL-4Rα разбавляли до 0,39, 0,78, 1,56, 3,13, 6,25, 12,5, 25,0, 50,0 и 100,0 нМ. Затем экспериментальный способ устанавливали в программе управления Biacore T200, после чего экспериментальная программа работала с целью выявления. Результаты показаны в таблице 8 ниже.
Таблица 8. Результаты выявления аффинности антитела
Пример 9. Исследование подавляющего эффекта антител по настоящему изобретению в отношении высвобождения TARC и MDC с применением ELISA
10 мл свежей крови (от донора) с добавлением гепарина для предотвращения свертывания смешивали с PBS при комнатной температуре в соотношении 1:1 и затем смесь осторожно добавляли к 20 мл раствора для разделения лимфоцитов человека (Solarbio, номер по каталогу: P8610), приготовленного заранее. После центрифугирования при 1500 об./мин в течение 30 мин при комнатной температуре слой PBMC осторожно удаляли и дважды промывали с помощью PBS. Клетки окончательно разбавляли с помощью среды 1640, содержащей 10% FBS и 200 МЕ/мл IL-2 и затем добавляли в 24-луночный планшет в количестве 1×106 клеток на лунку. После этого антитело L1020H1031 с конечной концентрацией 1000, 300, 100, 30 или 10 нг/мл добавляли в каждую лунку с последующим добавлением в них IL-4 с конечной концентрацией 10 нг/мл (или IL-13 с конечной концентрацией 100 нг/мл). Выявление осуществляли в соответствии со способом, предусмотренным набором Human TARC ELISA (Abcam, номер по каталогу: ab183366) или набором Human MDC ELISA (Abcam, номер по каталогу: ab179885), после 72 часов культивирования.
Результаты показаны на фигуре 5, панели 5A-5B, и согласно им антитела по настоящему изобретению могут эффективно подавлять высвобождение TARC и MDC, и подавляющий эффект на высвобождение увеличивается с увеличением концентрации антитела.
Пример 10. Эффект конкретных аминокислот на фармакокинетику и уровни экспрессии антител по настоящему изобретению
Фармакокинетические свойства in vivo антител про настоящему изобретению дополнительно определяли и сравнивали в данном примере с целью исследовать возможные эффекты конкретных аминокислот в конкретных положениях на фармакокинетические свойства антител у животных. Конкретный экспериментальный способ был аналогичен описанному в примере 4, и результаты показаны в таблице 9 ниже.
Таблица 9. Результаты определения фармакокинетических свойств in vivo антител по настоящему изобретению
Что касается конкретной последовательности, аминокислота в положении 103 в последовательности тяжелой цепи H1031 (SEQ ID NO. 91) антитела (в CDR3) представляет собой Asp (103Asp), и аминокислота в положении 104 представляет собой Tyr (104Tyr). По сравнению с антителами, которые не содержат 103Asp и 104Tyr в тяжелой цепи, антитела по настоящему изобретению, которые содержат 103Asp и 104Tyr, характеризуются в 2-4 раза большей площадью под кривой лекарственный препарат-время и на приблизительно 70% сниженной скоростью выведения.
Уровни экспрессии антител по настоящему изобретению также определяли и сравнивали с целью исследовать возможные эффекты конкретных аминокислот в конкретных положениях на экспрессию антител. Культивирование и трансфекцию клеток Expi293 осуществляли в соответствии с примером 1, а собранную культуральную надосадочную жидкость затем пропускали через фильтр с размером пор 0,22 мкм и потом очищали с помощью колонки для аффинной хроматографии с белком А GE MabSelect Sure (номер по каталогу: 11003494) в системе очистки GE AKTA purifier 10. Очищенное антитело собирали и концентрировали с применением трубки концентратора с ультрафильтрацией Amicon (номер по каталогу: UFC903096) и затем проводили количественную оценку. Результаты количественной оценки показаны в таблице 10 ниже.
Таблица 10. Результаты определения уровней экспрессии антител по настоящему изобретению
Что касается конкретной последовательности, аминокислота в положении 31 в последовательности легкой цепи L1012 (SEQ ID NO. 44), L1020 (SEQ ID NO. 55) или L1023 (SEQ ID NO. 51) антитела (в CDR1) представляет собой Ser (31Ser). По сравнению с антителами, которые не содержат 31Ser в легкой цепи, антитела по настоящему изобретению, которые содержат 31Ser, характеризуются в 2-5 раза большим уровнем экспрессии.
Вышеизложенное описание вариантов осуществления настоящего изобретения не предназначено ограничивать настоящее изобретение, и специалисты в данной области техники могут осуществлять различные изменения и вариации в соответствии с настоящим изобретением, которые находятся в пределах объема правовой охраны настоящего изобретения без отступления от его сущности и объема.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> СУЧЖОУ КОННЕКТ БИОФАРМАСЬЮТИКАЛС, ЛТД
<120> АНТИТЕЛО ДЛЯ СВЯЗЫВАНИЯ С РЕЦЕПТОРОМ ИНТЕРЛЕЙКИНА 4
<130> LC16210014P
<150> CN2016103992544
<151> 08-06-2016
<160> 94
<170> PatentIn версия 3.3
<210> 1
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR1-1
<400> 1
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 2
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR1-2
<400> 2
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 3
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR2-1
<400> 3
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 4
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR2-2
<400> 4
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro
1 5
<210> 5
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR3-1
<400> 5
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 6
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR3-2
<400> 6
Gln Gln Tyr Asp His Ser Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 7
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR3-3
<400> 7
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Ala Gly Trp Thr
1 5 10
<210> 8
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LCDR3-4
<400> 8
Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala Gly Trp Thr
1 5 10
<210> 9
<211> 23
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LFR1-1
<400> 9
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 10
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LFR2-1
<400> 10
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Phe
1 5 10 15
<210> 11
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LFR2-2
<400> 11
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 12
<211> 32
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LFR3-1
<400> 12
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 13
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> LFR4-1
<400> 13
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 14
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR1-1
<400> 14
Arg Asn Ala Met Phe
1 5
<210> 15
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR1-2
<400> 15
Arg Asn Ala Met His
1 5
<210> 16
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR1-3
<400> 16
Asp Tyr Ala Met Phe
1 5
<210> 17
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR2-1
<400> 17
Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg
<210> 18
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR2-2
<400> 18
Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg
<210> 19
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR3-1
<400> 19
Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 20
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HCDR3-2
<400> 20
Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp
1 5
<210> 21
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-1
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 22
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-2
<400> 22
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 23
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-3
<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 24
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-4
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 25
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-5
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 26
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-6
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 27
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-7
<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 28
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-8
<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 29
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-9
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 30
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-10
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 31
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR1-11
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Asp
20 25 30
<210> 32
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR2-1
<400> 32
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 33
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR2-2
<400> 33
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 34
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR3-1
<400> 34
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
1 5 10 15
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 35
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR3-2
<400> 35
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
1 5 10 15
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 36
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR3-3
<400> 36
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Glu Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
1 5 10 15
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 37
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR3-4
<400> 37
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
1 5 10 15
Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 38
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HFR4-1
<400> 38
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 39
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1007)
<400> 39
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 40
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1008)
<400> 40
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1009)
<400> 41
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 42
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1010)
<400> 42
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1011)
<400> 43
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 44
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1012)
<400> 44
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 45
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1016)
<400> 45
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 46
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1017)
<400> 46
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Ala
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 47
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1018)
<400> 47
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 48
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1013)
<400> 48
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 49
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1014)
<400> 49
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 50
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1015)
<400> 50
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 51
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1023)
<400> 51
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 52
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1024)
<400> 52
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 53
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1022)
<400> 53
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 54
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1021)
<400> 54
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 55
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1020)
<400> 55
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 56
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1019)
<400> 56
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 57
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1000)
<400> 57
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 58
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VL(L1001)
<400> 58
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp His Ser Ala
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 59
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1009)
<400> 59
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 60
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1010)
<400> 60
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 61
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1011)
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 62
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1007)
<400> 62
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 63
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1008)
<400> 63
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 64
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1015)
<400> 64
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 65
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1013)
<400> 65
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 66
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1014)
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 67
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1012)
<400> 67
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 68
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1016)
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 69
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1017)
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 70
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1018)
<400> 70
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 71
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1019)
<400> 71
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 72
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1020)
<400> 72
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 73
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1021)
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 74
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1033)
<400> 74
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 75
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1034)
<400> 75
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 76
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1035)
<400> 76
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 77
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1036)
<400> 77
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 78
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1037)
<400> 78
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Glu Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 79
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1039)
<400> 79
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 80
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1038)
<400> 80
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 81
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1028)
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1027)
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 83
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1026)
<400> 83
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 84
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1030)
<400> 84
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 85
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1029)
<400> 85
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 86
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1025)
<400> 86
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 87
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1024)
<400> 87
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 88
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1023)
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 89
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1022)
<400> 89
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 90
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1032)
<400> 90
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 91
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1031)
<400> 91
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 92
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1000)
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 93
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> VH(H1001)
<400> 93
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Asn
20 25 30
Ala Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Tyr Tyr Phe Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 94
<211> 209
<212> БЕЛОК
<213> человек
<220>
<223> sIL4R?
<400> 94
Gly Asn Met Lys Val Leu Gln Glu Pro Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met
1 5 10 15
Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser
20 25 30
Thr Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala
35 40 45
His Thr Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly Gly Ala Gly Cys Val Cys His
50 55 60
Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Ala Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu
65 70 75 80
Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu
85 90 95
His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn Leu Thr Val His Thr Asn Val
100 105 110
Ser Asp Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn
115 120 125
Tyr Leu Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn
130 135 140
Asp Pro Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser
145 150 155 160
Leu Arg Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala
165 170 175
Arg Val Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp
180 185 190
Ser Pro Ser Thr Lys Trp His Asn Ser Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln
195 200 205
His
<---
Claims (56)
1. Антитело для специфического связывания с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), где антитело содержит вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую следующую комбинацию CDR1, CDR2 и CDR3:
CDR1, изложенную под SEQ ID NO: 2, CDR2, изложенную под SEQ ID NO: 3, и CDR3, изложенную под SEQ ID NO: 8;
и
антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую следующую комбинацию CDR1, CDR2 и CDR3:
CDR1, изложенную под SEQ ID NO: 14, CDR2, изложенную под SEQ ID NO: 18, и CDR3, изложенную под SEQ ID NO: 19.
2. Антитело по п. 1, где вариабельная область легкой цепи антитела содержит аминокислотную последовательность как представлено в SEQ ID NO: 55;
и
вариабельная область тяжелой цепи антитела содержит аминокислотную последовательность как представлено в SEQ ID NO: 91.
3. Антитело по любому из пп. 1, 2, где антитело способно связываться с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R);
предпочтительно антитело способно связываться с IL-4Rα, предпочтительно с IL-4Rα млекопитающего, более предпочтительно с IL-4Rα человека, еще более предпочтительно с растворимым IL-4Rα человека;
более предпочтительно антитело способно связываться с IL-4Rα с аффинностью, которая составляет менее 100 нМ, менее 10 нМ, менее 1 нМ, менее 0,5 нМ или даже менее 0,1 нМ.
4. Антитело по любому из пп. 1-3, где антитело представляет собой моноклональное антитело, полностью или частично гуманизированное антитело или химерное антитело;
предпочтительно антитело представляет собой иммуноглобулин, более предпочтительно IgA, IgD, IgE, IgG или IgM, еще более предпочтительно подтипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
5. Антитело по любому из пп. 1-4, где антитело представляет собой подтип IgG4 человека.
6. Слитый белок для специфического связывания с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), где слитый белок содержит антитело по любому из пп. 1-5.
7. Слитый белок для специфического связывания с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), где слитый белок содержит антитело по п. 5.
8. Конъюгат для специфического связывания с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), где конъюгат содержит антитело по любому из пп. 1-5 и другой фрагмент, выбранный из группы, состоящей из рецептора клеточной поверхности, активного белка или полипептида, низкомолекулярного соединения, низкомолекулярного полимера и другой части, химически модифицирующей антитело, и где конъюгат не представляет собой слитый белок по п. 6 или 7.
9. Конъюгат для специфического связывания с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), где конъюгат содержит антитело по п. 5 и другой фрагмент, выбранный из группы, состоящей из рецептора клеточной поверхности, активного белка или полипептида, низкомолекулярного соединения, низкомолекулярного полимера и другой части, химически модифицирующей антитело, и где конъюгат не представляет собой слитый белок по п. 6 или 7.
10. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела по любому из пп. 1-5.
11. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь и легкую цепь антитела по любому из пп. 1-5.
12. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела по п. 5.
13. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая тяжелую цепь и легкую цепь антитела по п. 5.
14. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 11 или 13, для трансформации или трансфекции клеток-хозяев в целях экспрессии антитела.
15. Клетка-хозяин, трансформированная или трансфицированная с помощью молекулы нуклеиновой кислоты по п. 11 или 13 или вектора экспрессии по п. 14, для экспрессии тяжелой и легкой цепи антитела.
16. Способ получения антитела по любому из пп. 1-5, где способ включает: культивирование клетки-хозяина по п. 15 в условиях, при которых клетка-хозяин может экспрессировать тяжелую цепь и легкую цепь антитела;
при этом способ необязательно дополнительно включает выделение полученного антитела.
17. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), содержащая эффективное количество антитела по любому из пп. 1-5.
18. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), содержащая эффективное количество слитого белка по п. 6 или 7.
19. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), содержащая эффективное количество конъюгата по п. 8 или 9.
20. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), содержащая эффективное количество антитела, полученного с помощью способа по п. 16.
21. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 17-20, где фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтический препарат, который предпочтительно представляет собой инъекционный раствор;
предпочтительно фармацевтическая композиция или фармацевтический препарат дополнительно содержат фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество;
предпочтительно фармацевтическая композиция или фармацевтический препарат дополнительно содержат по меньшей мере один из следующих лекарственных препаратов: антиастматическое средство, такое как альбутерол и т.д., антигистаминное средство, такое как лоратадин и т.д., иммуносупрессивное средство, такое как такролимус и пимекролимус и т.д., блокатор М-рецепторов, такой как ипратропия бромид и т.д., блокатор рецепторов лейкотриенов, такой как монтелукаст и т.д., ингибитор фосфодиэстеразы, такой как теофилин и т.д., нестероидное противовоспалительное лекарственное средство, такое как 5-аминосалициловая кислота и т.д., гормон, такой как беклометазон и будесонид и т.д.
22. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), содержащая эффективное количество антитела по п. 5.
23. Применение антитела по любому из пп. 1-5 для изготовления лекарственного препарата для предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R);
при этом предпочтительно воспалительное или аллергическое заболевание предусматривает аутоиммунное заболевание, такое как аллергический дерматит, астма, эозинофильный эзофагит, экзема, аллергический ринит, носовой полип, ревматоидный артрит и т.п.
24. Применение антитела по п. 5 для изготовления лекарственного препарата для предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R);
при этом предпочтительно воспалительное или аллергическое заболевание предусматривает аутоиммунное заболевание, такое как аллергический дерматит, астма, эозинофильный эзофагит, экзема, аллергический ринит, носовой полип, ревматоидный артрит и т.п.
25. Применение слитого белка по п. 6 или 7 для изготовления лекарственного препарата для предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R);
при этом предпочтительно воспалительное или аллергическое заболевание предусматривает аутоиммунное заболевание, такое как аллергический дерматит, астма, эозинофильный эзофагит, экзема, аллергический ринит, носовой полип, ревматоидный артрит и т.п.
26. Применение конъюгата по п. 8 или 9 для изготовления лекарственного препарата для предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R);
при этом предпочтительно воспалительное или аллергическое заболевание предусматривает аутоиммунное заболевание, такое как аллергический дерматит, астма, эозинофильный эзофагит, экзема, аллергический ринит, носовой полип, ревматоидный артрит и т.п.
27. Применение антитела, полученного с помощью способа по п. 16, для изготовления лекарственного препарата для предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R);
при этом предпочтительно воспалительное или аллергическое заболевание предусматривает аутоиммунное заболевание, такое как аллергический дерматит, астма, эозинофильный эзофагит, экзема, аллергический ринит, носовой полип, ревматоидный артрит и т.п.
28. Применение по любому из пп. 23-27, где воспалительное или аллергическое заболевание, ассоциированное с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), представляет собой аллергический дерматит, астму, эозинофильный эзофагит или носовой полип.
29. Способ предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), и при этом способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, антитела по любому из пп. 1-5, слитого белка по п. 6 или 7, конъюгата по п. 8 или 9, или антитела, полученного с помощью способа по п. 16;
при этом предпочтительно субъект представляет собой млекопитающее;
более предпочтительно субъект представляет собой человека;
предпочтительно воспалительное или аллергическое заболевание предусматривает аутоиммунное заболевание, такое как аллергический дерматит, астма, эозинофильный эзофагит, экзема, аллергический ринит, носовой полип, ревматоидный артрит и т.п.
30. Способ предупреждения, лечения или облегчения тяжести воспалительного или аллергического заболевания, ассоциированного с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), и при этом способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, антитела по п. 5;
при этом предпочтительно субъект представляет собой млекопитающее;
более предпочтительно субъект представляет собой человека;
предпочтительно воспалительное или аллергическое заболевание предусматривает аутоиммунное заболевание, такое как аллергический дерматит, астма, эозинофильный эзофагит, экзема, аллергический ринит, носовой полип, ревматоидный артрит и т.п.
31. Способ по п. 29 или 30, где воспалительное или аллергическое заболевание, ассоциированное с рецептором интерлейкина 4 (IL-4) (IL-4R), представляет собой аллергический дерматит, астму, эозинофильный эзофагит или носовой полип.
32. Способ по любому из пп. 29-31, где способ дополнительно включает введение субъекту по меньшей мере одного лекарственного препарата, выбранного из группы, состоящей из: антиастматического средства, такого как альбутерол и т.д., антигистаминного средства, такого как лоратадин и т.д., иммуносупрессивного средства, такого как такролимус и пимекролимус и т.д., блокатора М-рецепторов, такого как ипратропия бромид и т.д., блокатора рецепторов лейкотриенов, такого как монтелукаст и т.д., ингибитора фосфодиэстеразы, такого как теофилин и т.д., нестероидного противовоспалительного лекарственного средства, такого как 5-аминосалициловая кислота и т.д., гормона, такого как беклометазон и будесонид и т.д.;
при этом предпочтительно лекарственное средство вводят одновременно или последовательно с антителом по любому из пп. 1-5, слитым белком по п. 6 или 7, конъюгатом по п. 8 или 9 или антителом, полученным с помощью способа по п. 16.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610399254.4 | 2016-06-08 | ||
| CN201610399254.4A CN107474134B (zh) | 2016-06-08 | 2016-06-08 | 用于结合白细胞介素4受体的抗体 |
| PCT/CN2017/087592 WO2017211319A1 (zh) | 2016-06-08 | 2017-06-08 | 用于结合白细胞介素4受体的抗体 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019100002A RU2019100002A (ru) | 2020-07-14 |
| RU2019100002A3 RU2019100002A3 (ru) | 2020-10-07 |
| RU2774446C2 true RU2774446C2 (ru) | 2022-06-21 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2362780C2 (ru) * | 2003-12-22 | 2009-07-27 | Глаксо Груп Лимитед | Nogo-a-нейтрализующие иммуноглобулины для лечения неврологических заболеваний |
| RU2423383C2 (ru) * | 2004-09-17 | 2011-07-10 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Антитела к ox40l |
| RU2513689C1 (ru) * | 2012-12-14 | 2014-04-20 | Общество с ограниченной ответственностью "РД-БИОТЕХ" | Антитело к эритропоэтину человека (варианты) и продуцирующий моноклональное антитело к эритропоэтину штамм гибридомы |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2362780C2 (ru) * | 2003-12-22 | 2009-07-27 | Глаксо Груп Лимитед | Nogo-a-нейтрализующие иммуноглобулины для лечения неврологических заболеваний |
| RU2423383C2 (ru) * | 2004-09-17 | 2011-07-10 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Антитела к ox40l |
| RU2513689C1 (ru) * | 2012-12-14 | 2014-04-20 | Общество с ограниченной ответственностью "РД-БИОТЕХ" | Антитело к эритропоэтину человека (варианты) и продуцирующий моноклональное антитело к эритропоэтину штамм гибридомы |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11866491B2 (en) | Antibody for binding to interleukin 4 receptor | |
| CN109311974B (zh) | 抗人白细胞介素-17a单克隆抗体、其制备方法和应用 | |
| TW201827079A (zh) | 治療發炎症狀的方法 | |
| CN111393526B (zh) | 抗gdf15中和性单克隆抗体及其应用 | |
| RU2715606C2 (ru) | СЛИТАЯ С Fc α-ЦЕПЬ ВЫСОКОАФФИННОГО РЕЦЕПТОРА IgE | |
| CN106336459B (zh) | 抗人白细胞介素-17a单克隆抗体、其制备方法和应用 | |
| WO2016062766A1 (en) | Treatment of il-6r related diseases | |
| AU2021255445A1 (en) | Antibody to human interleukin-4 receptor α, preparation method therefor and use thereof | |
| CA3200767A1 (en) | Anti-tslp antibody pharmaceutical composition and use thereof | |
| CN108178798B (zh) | pH工程化的NGF抗体及其医药用途 | |
| CN109678959B (zh) | 抗cd40抗体及其应用 | |
| KR20170045222A (ko) | 항-tnf-알파 항체 요법을 받은 건선 환자의 치료 방법 | |
| RU2774446C2 (ru) | Антитело для специфического связывания с рецептором интерлейкина 4 | |
| JP2023547176A (ja) | アトピー性皮膚炎又は関連症状を治療及び／又は防止するためのｉｌ－１８アンタゴニストの使用 | |
| WO2024130541A1 (zh) | 一种靶向IL-1α的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| WO2020259593A1 (zh) | 包含抗lag-3抗体的制剂、其制备方法及其用途 | |
| CN116102659A (zh) | 一种抗il-17/vegf双功能融合蛋白及其用途 | |
| CN112675300A (zh) | 包含抗gitr抗体的制剂及其制备方法和用途 |