RU2774424C1 - Способ амплификации области VP1 генома энтеровирусов вида Enterovirus B - Google Patents
Способ амплификации области VP1 генома энтеровирусов вида Enterovirus B Download PDFInfo
- Publication number
- RU2774424C1 RU2774424C1 RU2021137233A RU2021137233A RU2774424C1 RU 2774424 C1 RU2774424 C1 RU 2774424C1 RU 2021137233 A RU2021137233 A RU 2021137233A RU 2021137233 A RU2021137233 A RU 2021137233A RU 2774424 C1 RU2774424 C1 RU 2774424C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- enterovirus
- cdna
- region
- gene
- species
- Prior art date
Links
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 title claims abstract description 31
- 241000988556 Enterovirus B Species 0.000 title claims abstract description 28
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 claims abstract description 34
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 34
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 17
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- UGQMRVRMYYASKQ-KMPDEGCQSA-N Inosine Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KMPDEGCQSA-N 0.000 claims abstract 2
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 claims abstract 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 claims description 5
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 229920000272 Oligonucleotide Polymers 0.000 claims 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 101710043203 P23p89 Proteins 0.000 description 10
- 101700038759 VP1 Proteins 0.000 description 10
- 101710003000 ORF1/ORF2 Proteins 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 241000988559 Enterovirus A Species 0.000 description 5
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 5
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 4
- 230000002550 fecal Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 210000001175 Cerebrospinal Fluid Anatomy 0.000 description 3
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 3
- 206010014909 Enterovirus infection Diseases 0.000 description 3
- 241000709700 Coxsackievirus A9 Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 2
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 2
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 2
- 201000009906 meningitis Diseases 0.000 description 2
- 102000004040 Capsid Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 241001635223 Coxsackievirus B2 Species 0.000 description 1
- 241000709643 Echovirus E9 Species 0.000 description 1
- 206010070971 Enteroviral infection Diseases 0.000 description 1
- 241001529459 Enterovirus A71 Species 0.000 description 1
- 241000693328 Enterovirus B69 Species 0.000 description 1
- 241000991586 Enterovirus D Species 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N Ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001207270 Human enterovirus Species 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 206010029331 Neuropathy peripheral Diseases 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 206010038683 Respiratory disease Diseases 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000002856 computational phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007849 hot-start PCR Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины. Описан способ амплификации области VP1 генома энтеровирусов вида Enterovirus В методом «гнездовой» полимеразной цепной реакции с использованием олигонуклеотидных праймеров:
в 1-ом раунде ПЦР 224: 
и 3742 BR1 - 5'-
во 2-ом раунде ПЦР 2223BFL: 5'-
и 3059BRL: 
для амплификации кДНК фрагмента кДНК 5' области гена 1D вирусов вида Enterovirus В и олигонуклеотидные праймеры:
для амплификации кДНК фрагмента кДНК 3' области гена 1D вирусов вида Enterovirus В, где N - любой из А, Т, G или С, R - А или G, Y - С или Т; I - инозин. Изобретение расширяет арсенал средств для генотипирования энтеровирусов. 4 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, касается способа видоспецифичной амплификации кДНК энтеровирусов вида Enterovirus методом «гнездовой» полимеразной цепной реакции и может быть использовано для получения полной нуклеотидной последовательности гена 1D, кодирующего капсидный белок VP1.
Энтеровирусы (сем. Picornaviridae, род Enterovirus) характеризуются иммунологическим и генетическим многообразием. В настоящее время известно более 100 типов энтеровирусов, которые могут вызывать заболевания человека, полиморфные по клиническим проявлениям (полиомиелит, нейропатии, серозный менингит, миокардиты, гастроэнтерит, респираторные заболевания, конъюнктивиты и т.д.) и различные по тяжести течения.
На основе особенностей молекулярной организации энтеровирусы, патогенные для человека, разделены на 4 вида: Enterovirus А (ЭВ-А) (Коксаки А 2-8, 10, 12, 14, 16; ЭВ-А71, 76, 89-91, 114, 120-125), Enterovirus В (ЭВ-В) (Коксаки В1-6; Коксаки А9; ECHO 1-7, 9, 11-21, 24-27, 29-33; ЭВ-В69, 73-75, 77-88,93, 97, 98, 100, 106, 107, 110-114), Enterovirus С (ЭВ-С) (полиовирусы типа 1-3; Коксаки А1, 11, 13, 17, 19-22, 24; ЭВ-С 95, 96, 99, 102, 104,105, 109, 113, 116, 117, 118) и Enterovirus D (ЭB-D)(ЭBD68, 70, 94, 111, 120) [www.picomaviridae. com]. Циркуляция энтеровирусов наблюдается повсеместно. С конца XX века и до настоящего времени во многих странах фиксируется высокий уровень заболеваемости энтеровирусной инфекцией, обусловленный формированием и распространением эпидемических вариантов энтеровирусов. Наиболее часто у больных с энтеровирусной инфекцией выявляют вирусы видов Enterovirus А и Enterovirus В. Вирусы вида Enterovirus А являются основными возбудителями экзантемных форм энтеровирусной инфекции, вирусы вида Enterovirus В - энтеровирусного менингита.
В настоящее время для генотипирования энтеровирусов используют способы частичного секвенирования области VP1 генома, в результате которых получают нуклеотидную последовательность размером 375 н.о. [Nix W.A., Oberste M.S. and Pallansch M.A. Sensitive, seminested PCR amplification of VP1 sequences for direct identification of all enterovirus serotypes from original clinical specimen // J. Clin. Microbiol. - 2006. - Vol.44. №. 8. - P. 2698-2704; патент РФ №2743352, 2021]. Фрагмента такого размера достаточно для определения типа энтеровируса и первичной филогенетической характеристики изучаемого штамма, но не достаточно для полной характеристики гена 1D, кодирующего структурный белок VP1 энтеровируса, и, в большинстве случаев, для достоверности и информативности филогенетического анализа.
Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков является способ дифференциальной амплификации фрагментов кДНК энтеровирусов видов Enterovirus A-D методом ОТ-ПЦР для последующего секвенирования с использованием специфических праймеров (таблица 1) для получения полной нуклеотидной последовательности гена VP1 энтеровирусов [Oberste M.S., Maher К, Williams A.J., Dybdahl-Sissoko N., Brown B.A., Gookin M.S., 
S., Mishrik N., Uddin M., Pallansch M.A. Species-specific RT-PCR amplification of human enteroviruses: a tool for rapid species identification of uncharacterized enteroviruses // J. Gen. Virol. - 2006. - Vol.87(Pt 1). - P. 119-128.]. Известный способ представляет собой вариант ОТ-ПЦР области VP1 генома, позволяющий успешно проводить амплификацию фрагментов кДНК энтеровирусов всех видов, пассированных в клеточных культурах, но недостаточно эффективный для анализа первичного материала.
Задачей, решаемой изобретением, является разработка способа амплификации полной последовательности гена 1D, кодирующего белок VP1 энтеровирусов вида Enterovirus В.
Технический результат, достигаемый при реализации изобретения, заключается в разработке эффективного способа ОТ-ПЦР фрагмента кДНК области VP1 генома вирусов вида Enterovirus В для получения полной нуклеотидной последовательности гена 1D энтеровирусов вида Enterovirus В в результате увеличения выхода продуктов амплификации.
Указанный технический результат достигается использованием при проведении «гнездовой» ПЦР кДНК области VP1 генома вирусов вида Enterovirus В набора видоспецифичных олигонуклеотидных праймеров:
Способ осуществляется следующим образом.
Выделенную из образца энтеровирус-содержащего первичного материала РНК используют в качестве матрицы для получения кДНК в реакции обратной транскрипции с последующей амплификацией кДНК генома вирусов вида Enterovirus. В первом раунде ПЦР для амплификации кДНК используют праймеры 224 и 3742 BR1, во втором раунде ПЦР для амплификации фрагмента кДНК 5' области гена 1D используют пару праймеров 2223BFL и 3059BRL, для 3' области - пару праймеров 2940BFR и 3599BRR.
Сущность заявленного изобретения поясняется чертежами, где: на Фиг. 1 изображена электрофореграмма кДНК 5' (1 ряд) и 3' (2 ряд) областей гена 1D 11 штаммов разных типов энтеровирусов вида Enterovirus В (Коксаки А9 (CVA9), Коксаки В2 (CVB2), ЕСНО6 (Е6), ECHO 11 (E11), ЕСНО 20 (Е20), выделенных на культуре ткани RD. Трек k-1 - отрицательный контроль 1-го раунда ПЦР, трек k-2 - отрицательный контроль 2-го раунда ПЦР, М - маркер размера фрагмента кДНК;
на Фиг. 2 изображена электрофореграмма кДНК 5' (1 ряд) и 3'(2 ряд) областей гена 1D штаммов вируса ЕСНО9, выявленного в пробах клинического материала: ликворе (л), носоглоточных мазках (н/гл), фекальных образцах (ф). Трек EVA - результат амплификации пробы, содержащей вирус вида Enterovirus А, трек k- - отрицательный контроль 2-х раундов ПЦР, М - маркер размера фрагмента кДНК;
на Фиг. 3 изображена электрофореграмма кДНК 5' (1 ряд) и 3'(2 ряд) областей гена 1D штаммов вируса ЕСНО3О, выявленного в пробах клинического материала: ликворе (л), фекальных образцах (ф). Трек k-1 -отрицательный контроль 1-го раунда ПЦР, трек k-2 - отрицательный контроль 2-го раунда ПЦР, М - маркер размера фрагмента кДНК;
на Фиг. 4 изображена электрофореграмма кДНК 5' (1 ряд) и 3'(2 ряд) областей гена 1D штаммов вирусов ЕСНО9 (Е9), ECHO 11 (E11) и ECHO 18 (El8), выявленных в носоглоточных мазках. Трек k-1 - отрицательный контроль 1-го раунда ПЦР, трек k-2 - отрицательный контроль 2-го раунда ПЦР, М - маркер размера фрагмента кДНК.
Сущность способа поясняется примерами.
Пример 1. Осуществление способа.
Для исследования использовали штаммы вирусов вида Enterovirus В, выделенные на культуре чувствительных клеток, и образцы первичного материала: ликвор, фекальные экстракты, носоглоточные смывы, водные концентраты, содержащие вирусы вида Enterovirus В. РНК энтеровирусов выделяли при помощи коммерческого набора для выделения вирусной РНК «РИБО-преп» (Интерлабсервис, Россия) в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Выделенную РНК использовали в качестве матрицы для получения кДНК в реакции обратной транскрипции. Реакцию проводили в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 10 мкл РНК, 2 пкмоль каждого праймера (AN32, AN33, AN34 и AN35), буфер для M-MLV-ревертазы, 0,15 мМ каждого дНТФ, 40 ед. РНКазина, 20 ед. M-MLV-ревертазы. Смесь инкубировали в течение 30 минут при температуре 42°С и в течение 5 минут при температуре 95°. Первый раунд ПЦР проводили в 25 мкл реакционной смеси для 1-го раунда, содержащей 5 мкл кДНК, буфер для Taq-полимеразы, 0,2 мМ каждого дНТФ, 25 пкмоль каждого из праймеров для 1-го раунда ПЦР, 1,5 ед. Taq-полимеразы. Реакцию проводили в режиме: 94°С - 2 мин, (94°С - 15 с, 42°С - 15 с, 60°С - 30 с) × 42 цикла, 72°С - 2 мин.Во втором раунде амплификацию фрагментов к ДНК 5' и 3' областей гена 1D вирусов вида Enterovirus В проводили отдельно, в разных пробирках.
Для постановки 2-го раунда ПЦР по 5 мкл амплификата 1-го раунда вносили в каждую из двух пробирок с реакционной смесью, содержащей буфер для Taq-полимеразы, 0,2 мМ каждого дНТФ, 25 пкмоль каждого из праймеров для 2-го раунда ПЦР (Таблица 2), 1,5 ед. FastStart Taq-полимеразы или Hot Taq-полимеразы или любой другой Taq-полимеразы для ПЦР с «горячим» стартом. Объем реакционной смеси - 25 мкл. Реакцию проводили в режиме: 94°С - 2 мин, (94°С - 15 с, 55°С - 15 с, 72°С - 30 с) × 42 цикла, 72°С - 2 мин. Продукты амплификации (приблизительно 800-850 пар нуклеотидов для фрагмента кДНК 5' области гена 1D, и 620-670 пар нуклеотидов для фрагмента кДНК 3' области гена 1D) визуализировали методом электрофореза в 1,5% агарозном геле, содержащем 0,5 мг/мл бромида этидия.
Амплифицированные фрагменты кДНК энтеровирусов секвенировали на любом автоматическом генетическом анализаторе, в соответствии с инструкцией производителя, с использованием для мечения фрагментов кДНК 5' и 3' областей гена 1D вирусов вида Enterovirus В соответствующих праймеров (Таблица 2).
Пример 2. Исследование штаммов вирусов вида Enterovirus В, содержащихся в образцах первичного материала.
Провели амплификацию фрагментов кДНК 5' и 3' областей гена 1D 11 штаммов энтеровирусов вида Enterovirus В (Коксаки А9 (CVA9), Коксаки В2 культуре чувствительных клеток. С использованием заявленного способа эффективно амплифицировались фрагменты к ДНК 5' и 3' областей гена 1D всех исследованных штаммов энтеровирусов вида Enterovirus В, относящихся к разным типам.
Пример 3. Исследование штаммов вирусов вида Enterovirus В, обнаруженных в образцах первичного материала.
Провели амплификацию фрагментов кДНК 5' и 3' областей гена 1D 33 штаммов энтеровирусов вида Enterovirus В разных типов (ЕСНО9, ЕСНО11, ЕСНО18, ЕСНО30), обнаруженных в образцах первичного материала: ликворе, носоглоточных смывах, фекальных образцах. Установлено, что оба фрагмента кДНК: 5' и 3' областей гена 1D, с использованием заявляемого способа амплифицировались у 26 из 33 исследованных штаммов вирусов вида Enterovirus В, обнаруженных в первичных пробах клинического материала, что составило 78,79%. При исследовании первичных проб клинического материала, содержащих вирусы вида Enterovirus В, способом-прототипом эффективность амплификации, в среднем, составила 27,59%.
Проведенные исследования подтвердили высокую эффективность амплификации полной последовательности гена 1D, кодирующего белок VP1 энтеровирусов вида Enterovirus В, при анализе первичных образцов клинического материала, что свидетельствует о достижении технического результата.
Метод разработан и апробирован на базе лаборатории молекулярной эпидемиологии вирусных инфекций с референс-центром по мониторингу энтеровирусных инфекций ФБУН «ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора.
Claims (9)
- Способ амплификации области VP1 генома энтеровирусов вида Enterovirus В, включающий выделение геномной РНК, проведение реакции обратной транскрипции с использованием олигонуклеотидных праймеров AN32: GTYTGCCA, AN33: GAYTGCCA, AN34: CCRTCRTA, AN35: RCTYTGCCA, «гнездовой» полимеразной цепной реакции с использованием олигонуклеотидного праймера
- 224:отличающийся тем, что при проведении полимеразной цепной реакции в первом раунде используют олигонуклеотидный праймер
- 3742
- во втором раунде олигонуклеотидные праймеры
- и
-
- для амплификации кДНК фрагмента кДНК 5' области гена 1D вирусов вида Enterovirus В и олигонуклеотидные праймеры:
-
- для амплификации кДНК фрагмента кДНК 3' области гена 1D вирусов вида Enterovirus В, где N - любой из А, Т, G или С, R - А или G, Y - С или Т; I - инозин.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2774424C1 true RU2774424C1 (ru) | 2022-06-21 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2365870C (en) * | 1999-03-31 | 2011-06-28 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Typing of human enteroviruses |
| RU2460803C2 (ru) * | 2010-10-27 | 2012-09-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство промышленности и торговли Российской Федерации (Минпромторг России) | Способ дифференциальной диагностики респираторных вирусных инфекций методом мультиплексной пцр с детекцией в режиме реального времени и перечень последовательностей для его осуществления |
| RU2506317C2 (ru) * | 2012-04-17 | 2014-02-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство промышленности и торговли Российской Федерации (Минпромторг России) | Способ выявления кишечных вирусов в клинических образцах и воде методом мультиплексной пцр с детекцией в режиме реального времени и перечень последовательностей для его осуществления |
| RU2743352C1 (ru) * | 2020-05-19 | 2021-02-17 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциальной амплификации фрагмента области VP1 генома энтеровирусов видов Enterovirus A и Enterovirus B |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2365870C (en) * | 1999-03-31 | 2011-06-28 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Typing of human enteroviruses |
| RU2460803C2 (ru) * | 2010-10-27 | 2012-09-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство промышленности и торговли Российской Федерации (Минпромторг России) | Способ дифференциальной диагностики респираторных вирусных инфекций методом мультиплексной пцр с детекцией в режиме реального времени и перечень последовательностей для его осуществления |
| RU2506317C2 (ru) * | 2012-04-17 | 2014-02-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство промышленности и торговли Российской Федерации (Минпромторг России) | Способ выявления кишечных вирусов в клинических образцах и воде методом мультиплексной пцр с детекцией в режиме реального времени и перечень последовательностей для его осуществления |
| RU2743352C1 (ru) * | 2020-05-19 | 2021-02-17 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ дифференциальной амплификации фрагмента области VP1 генома энтеровирусов видов Enterovirus A и Enterovirus B |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2017212904A1 (ja) | 複数のプライマーセットを組み合わせたｌａｍｐ法を用いたアフリカ豚コレラウイルスの迅速検出法 | |
| CN111004870A (zh) | 新型冠状病毒n基因核酸检测试剂盒 | |
| CN113005226A (zh) | 检测SARS-CoV-2的寡核苷酸和试剂盒 | |
| CN111118211A (zh) | 基于环介导等温扩增技术的牛结节性皮肤病检测试剂盒及方法 | |
| KR100942388B1 (ko) | 일본뇌염바이러스 검출을 위한 프라이머 세트, 내부컨트롤 리보핵산, 이를 포함하는 역전사 중합효소 연쇄반응 키트 및 이를 이용한 중합효소 연쇄반응 방법 | |
| US9702017B2 (en) | HEV assay | |
| Hakhverdyan et al. | Development of a real-time PCR assay based on primer-probe energy transfer for the detection of swine vesicular disease virus | |
| KR102174967B1 (ko) | 인플루엔자 바이러스 검출용 프라이머 세트, 이를 포함하는 검출용 키트 및 이를 이용한 검출 방법 | |
| CN106987657B (zh) | 用于鉴别牛病毒腹泻病毒和牛轮状病毒的引物组合及其应用 | |
| RU2743352C1 (ru) | Способ дифференциальной амплификации фрагмента области VP1 генома энтеровирусов видов Enterovirus A и Enterovirus B | |
| RU2774424C1 (ru) | Способ амплификации области VP1 генома энтеровирусов вида Enterovirus B | |
| CN110714097A (zh) | 一种同时检测a、b、c三组轮状病毒的方法 | |
| McMenamy et al. | Development of a minor groove binder assay for real-time one-step RT-PCR detection of swine vesicular disease virus | |
| KR101236197B1 (ko) | 웨스트나일바이러스와 일본뇌염바이러스의 감별 진단 | |
| KR101912488B1 (ko) | 분자 검출 분석법 | |
| CN116064953A (zh) | 同管检测猴痘病毒核酸并分型的试剂盒、方法及其应用 | |
| EP3885455A1 (en) | Method and kit for the detection of sars-cov-2 virus in a sample based on reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (rt-lamp) | |
| CN107988429B (zh) | 一种检测狂犬病毒的试剂及其应用 | |
| CN114480726A (zh) | 非洲猪瘟病毒核酸检测的引物探针组、试剂盒及检测方法 | |
| CN113151599A (zh) | 用于检测新型冠状病毒的引物组、试剂、试剂盒及检测方法 | |
| CN117344061B (zh) | 一种同时检测五种人源病毒ebv、hbv、hcv、hiv、hpv的方法、试剂盒、引物和探针及其应用 | |
| KR101567765B1 (ko) | 실시간 중합효소 연쇄반응을 통한 소파보바이러스의 정량 검출방법 | |
| WO2023121335A1 (ko) | 유행성궤양증후군 검출용 조성물 및 이의 검출방법 | |
| WO2007038117A2 (en) | Detecting foot-and-mouth disease virus | |
| CN116790816A (zh) | 猫杯状病毒和猫疱疹病毒i型检测引物探针组合物、试剂盒及检测方法 |