RU2770369C2 - Микрорнк-19а/19в для применения в лечении патологического состояния, связанного с потерей костной массы или снижением мышечной функции - Google Patents
Микрорнк-19а/19в для применения в лечении патологического состояния, связанного с потерей костной массы или снижением мышечной функции Download PDFInfo
- Publication number
- RU2770369C2 RU2770369C2 RU2019135323A RU2019135323A RU2770369C2 RU 2770369 C2 RU2770369 C2 RU 2770369C2 RU 2019135323 A RU2019135323 A RU 2019135323A RU 2019135323 A RU2019135323 A RU 2019135323A RU 2770369 C2 RU2770369 C2 RU 2770369C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mirna
- inhibitor
- disease
- seq
- paragraphs
- Prior art date
Links
- 230000004220 muscle function Effects 0.000 title claims abstract description 27
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims abstract description 79
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 39
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 36
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 206010031243 Osteogenesis imperfecta Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims abstract description 10
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000001076 sarcopenia Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 95
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 57
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 22
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 15
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 13
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 12
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 7
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 claims description 7
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 7
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 5
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 claims description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 52
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 50
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 37
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 34
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 25
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 20
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 17
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 16
- 238000010603 microCT Methods 0.000 description 16
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 13
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 13
- 102100036893 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 12
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 11
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 11
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 10
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 9
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 9
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 7
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 7
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009547 dual-energy X-ray absorptiometry Methods 0.000 description 6
- 238000013230 female C57BL/6J mice Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 6
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 6
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000004072 osteoblast differentiation Effects 0.000 description 5
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 229940122361 Bisphosphonate Drugs 0.000 description 3
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 3
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 150000004663 bisphosphonates Chemical class 0.000 description 3
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- -1 methoxyethyl Chemical group 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 3
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 2-amino-7-methyl-1,7-dihydro-6H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC(O)=C2N(C)C=NC2=N1 FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 4-sulfanylidene-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound SC=1C=CNC(=O)N=1 OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 5-(hydroxymethyl)cytosine Chemical compound NC=1NC(=O)N=CC=1CO RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 7-deaza-adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1C=CN2 PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCGHYQLFMPXSDU-UHFFFAOYSA-N 7-methyladenine Chemical compound C1=NC(N)=C2N(C)C=NC2=N1 HCGHYQLFMPXSDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 2
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 101001135770 Homo sapiens Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 2
- 101001135995 Homo sapiens Probable peptidyl-tRNA hydrolase Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 206010049565 Muscle fatigue Diseases 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 2
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000007591 Tartrate-Resistant Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108010032050 Tartrate-Resistant Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000004141 dimensional analysis Methods 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 2
- 210000003194 forelimb Anatomy 0.000 description 2
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 2
- 201000003617 glucocorticoid-induced osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000058004 human PTH Human genes 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 2
- 229960005460 teriparatide Drugs 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-5-ethoxy-5-oxopentanoic acid Chemical compound CCOC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHUHBFMZVCOEOV-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazo[4,5-c]pyridin-4-amine Chemical compound NC1=NC=CC2=C1N=CN2 UHUHBFMZVCOEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- LHYQAEFVHIZFLR-UHFFFAOYSA-L 4-(4-diazonio-3-methoxyphenyl)-2-methoxybenzenediazonium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=C([N+]#N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C([N+]#N)=CC=2)=C1 LHYQAEFVHIZFLR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CC1=CNC(=S)NC1=O ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXBCLNRMQPRVTP-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1,5-dihydroimidazo[4,5-c]pyridin-4-one Chemical compound O=C1NC(N)=CC2=C1N=CN2 KXBCLNRMQPRVTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1h-pyrimidine-2-thione Chemical compound NC1=CC=NC(S)=N1 DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)N=C1N QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 6-methyladenine Chemical compound CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CLGFIVUFZRGQRP-UHFFFAOYSA-N 7,8-dihydro-8-oxoguanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1NC(=O)N2 CLGFIVUFZRGQRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 7-deazaguanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1CC=N2 LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical compound C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 1
- HRYKDUPGBWLLHO-UHFFFAOYSA-N 8-azaadenine Chemical compound NC1=NC=NC2=NNN=C12 HRYKDUPGBWLLHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 1
- RGKBRPAAQSHTED-UHFFFAOYSA-N 8-oxoadenine Chemical class NC1=NC=NC2=C1NC(=O)N2 RGKBRPAAQSHTED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035657 Abasia Diseases 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 1
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 1
- 102100023387 Endoribonuclease Dicer Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 101000907904 Homo sapiens Endoribonuclease Dicer Proteins 0.000 description 1
- 101000869796 Homo sapiens Microprocessor complex subunit DGCR8 Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 244000062730 Melissa officinalis Species 0.000 description 1
- 235000010654 Melissa officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 208000037848 Metastatic bone disease Diseases 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940122938 MicroRNA inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100032459 Microprocessor complex subunit DGCR8 Human genes 0.000 description 1
- 208000023178 Musculoskeletal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003788 Neoplasm Micrometastasis Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 208000003076 Osteolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000001164 Osteoporotic Fractures Diseases 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000006467 TATA-Box Binding Protein Human genes 0.000 description 1
- 108010044281 TATA-Box Binding Protein Proteins 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000011374 additional therapy Methods 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000000123 anti-resoprtive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 1
- 239000002617 bone density conservation agent Substances 0.000 description 1
- 230000010072 bone remodeling Effects 0.000 description 1
- 230000008416 bone turnover Effects 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002247 constant time method Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- DMSZORWOGDLWGN-UHFFFAOYSA-N ctk1a3526 Chemical compound NP(N)(N)=O DMSZORWOGDLWGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 229960001251 denosumab Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 229940053641 forteo Drugs 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N fusidic acid Chemical class O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C(O)=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 208000029791 lytic metastatic bone lesion Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091091751 miR-17 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069239 miR-17-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091050874 miR-19a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086850 miR-19a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091088468 miR-19a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091007426 microRNA precursor Proteins 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000324 minimal toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000004682 mucosal barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009756 muscle regeneration Effects 0.000 description 1
- 208000017445 musculoskeletal system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 239000006218 nasal suppository Substances 0.000 description 1
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 description 1
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000004824 osteo-anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000010 osteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000577 osteoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000026011 regulation of ossification Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/711—Natural deoxyribonucleic acids, i.e. containing only 2'-deoxyriboses attached to adenine, guanine, cytosine or thymine and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/29—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2525/00—Reactions involving modified oligonucleotides, nucleic acids, or nucleotides
- C12Q2525/10—Modifications characterised by
- C12Q2525/207—Modifications characterised by siRNA, miRNA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу лечения или предупреждения заболевания или патологического состояния, связанного с потерей костной массы. Также раскрыт способ лечения или предупреждения заболевания или патологического состояния, связанного со снижением мышечной функции, а также к способу лечения или предупреждения связанного с раком разрушения кости. Изобретение эффективно для лечения остеопороза, несовершенного остеогенеза, мышечной атрофии, саркопении и кахексии. 12 н. и 20 з.п. ф-лы, 6 ил., 11 пр.
Description
Изобретение относится к ингибиторам микроРНК-19a и -19b и их применению для лечения или предупреждения состояний или заболеваний, связанных с потерей костной массы, в частности, остеопороза и несовершенного остеогенеза (НО). Ингибиторы также пригодны для индуктирования анаболического действия на кость, либо по отдельности, либо при введении в сочетании с паратиреоидным гормоном или его рекомбинантным фрагментом. Изобретение дополнительно относится к ингибиторам микроРНК-19a и -19b и их применению для лечения или предупреждения состояний или заболеваний, связанных со снижением мышечной функции, в частности, мышечной дегенерации и мышечной атрофии. Ингибиторы также пригодны для стабилизации и/или укрепления мышечной функции. Кроме того, ингибиторы микроРНК-19a и -19b могут применяться для лечения или предупреждения связанного с раком разрушения кости или метастазирования в кость.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Остеопороз является наиболее распространенным заболеванием опорно-двигательной системы у женщин и мужчин, часто приводящим к остеопоротическим переломам. Указанные переломы часто увеличивают заболеваемость и смертность, особенно среди пожилых людей, и поэтому представляют собой серьезную медицинскую и социально-экономическую проблему. Хотя кость является высокодинамичной тканью, постоянно разрушающейся и восстанавливающейся на протяжении всей жизни путем резорбирующих кость остеокластов и формирующих кость остеобластов, указанные процессы тесно связаны и сбалансированы для поддержания постоянной костной массы. С возрастом резорбция кости увеличивается, а формирование кости снижается, что приводит к снижению костной массы и, в конечном итоге, к остеопорозу.
Известные антирезорбтивные препараты, такие как бисфосфонаты или RANKL-нейтрализующее антитело (Деносумаб ©), обеспечивают подходы к терапии остеопороза путем ингибирования активности остеокластов, предупреждая тем самым дальнейшую потерю костной массы. Напротив, введение рекомбинантного фрагмента паратиреоидного гормона (называемого в литературе ПТГ 1-34 или терипаратидом (Фортео ©/Форстео ©)) в настоящее время является единственной доступной остеоанаболической терапией. Однако терапия ПТГ требует ежедневных инъекций фрагмента ПТГ 1-34, и общая продолжительность терапии ограничена 24 месяцами из-за соображений безопасности. Соответственно, существует необходимость в дополнительных вариантах терапии, предотвращающих потерю костной массы и/или приводящих к увеличению костной массы и плотности кости.
МикроРНК представляют собой некодирующие РНК, которые могут блокировать экспрессию кодирующих белок генов. Обнаружено, что микроРНК кодируются в геноме многих организмов, в том числе млекопитающих и животных, не являющихся млекопитающими. МикроРНК способны связываться с 3'-нетранслируемой областью (3'-НТО) мРНК (матричной РНК) гена-мишени благодаря комплементарности ее оснований. В зависимости от комплементарности связывающей последовательности и вовлеченных белков микроРНК ингибируют трансляцию мРНК или вызывает разложение мРНК. Частичная комплементарность оснований между микроРНК и родственной мРНК обычно приводит к ингибированию трансляции мРНК, тогда как совершенная комплементарность оснований вызывает разложение мРНК.
МикроРНК обычно имеют длину от 18 до 24 нуклеотидов, и их получают путем поэтапного процессинга молекул-предшественников. МикроРНК транскрибируются с помощью полимеразы II или III либо из кодирующих генов, либо из интронов. Первичный транскрипт, полученный в результате транскрипции генов, называется первичной микроРНК (прай-микроРНК). Она имеет длину от 500 до 3000 нуклеотидов и несет 7-метилгуанозиновый кэп на 5'-конце и поли-A-хвост на 3'-конце. Прай-микроРНК подвергается процессингу ферментом РНКазой III Drosha и дцРНК-связывающим белком DGCR8 в ядре клетки в микроРНК-предшественник (пре-микроРНК) длиной от 70 до 80 нуклеотидов. Пре-микроРНК образует характерную структуру шпильки и экспортируется через нуклеиновые поры в цитоплазму, где она подвергается процессингу ферментом РНКазой III Dicer в дц-микроРНК длиной от 17 до 24 нуклеотидов. Dicer взаимодействует с белком, который специфически связывается с дц-микроРНК, чтобы раскрутить указанные дуплексы. Получающиеся в результате оц-микроРНК могут препятствовать экспрессии соответствующей мРНК-мишени.
Сообщалось, что несколько микроРНК участвуют в регуляции множества физиологических процессов и процессов развития. В последнее время микроРНК привлекли значительное внимание в качестве потенциальных терапевтических мишеней для лечения таких заболеваний, как гепатит C [1], хронический лимфоцитарный лейкоз [2], колоректальный рак [3], ожирение [4] или шизофрения [5].
Настоящее изобретение основано на осознании того, что микроРНК-19a и микроРНК-19b участвуют в регуляции формирования кости, и что ингибирование указанных микроРНК является высокоэффективным способом предупреждения или снижения потери костной массы. Соответственно, ингибирование указанных микроРНК пригодно для лечения таких заболеваний, как остеопороз, связанных с потерей костной массы. Ингибиторы микроРНК-19a и микроРНК-19b оказывают анаболическое действие и могут применяться по отдельности или в сочетании друг с другом. В предпочтительном варианте осуществления один или более ингибиторов микроРНК-19a и/или микроРНК-19b применяют в сочетании с паратиреоидным гормоном или его фрагментом, таким как ПТГ 1-34, для усиления анаболического действия на кость. Изобретение также демонстрирует, что микроРНК-19a и микроРНК-19b участвуют в регуляции регенерации мышц и, в частности, в предупреждении снижения мышечной массы, силы и/или работоспособности. Как показано в приведенных ниже примерах, ингибирование указанных микроРНК эффективно для предупреждения потери мышечной функции в различных условиях. Следовательно, ингибирование указанных микроРНК также пригодно для лечения таких заболеваний, как мышечная дистрофия, мышечная атрофия, саркопения или кахексия, такой как раковая кахексия. Изобретение дополнительно демонстрирует, что ингибиторы микроРНК-19a и микроРНК-19b могут применяться для предупреждения или лечения вызванного раком разрушения кости и метастазов в кости, в частности, метастазирования рака молочной железы в кость.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В одном из аспектов изобретение обеспечивает ингибитор микроРНК-19a и/или микроРНК-19b для применения в способе лечения заболевания, связанного с потерей костной массы. Заболевание, связанное с патологической степенью потери костной массы, может представлять собой, например, заболевание, характеризующееся аномальной резорбцией кости и/или формированием кости в условиях высокого метаболизма костной ткани. Ниже в настоящем документе показано, что ингибирование микроРНК-19а и/или микроРНК-19b приводит к сильному анаболическому действию на кость, что демонстрирует пригодность ингибиторов микроРНК-19а и/или микроРНК-19b для лечения заболеваний и состояний, сопровождающихся патологическим уровнем потери костной массы. Такие заболевания и состояния включают, в частности, остеопороз и несовершенный остеогенез (ОИ). Таким образом, в предпочтительном аспекте заболевание и состояние, подлежащие лечению ингибиторами микроРНК-19a и/или микроРНК-19b, представляет собой остеопороз. В контексте настоящего документа термин «остеопороз» включает все формы остеопороза, такие как первичный, вторичный и постменопаузальный остеопороз. Также включены остеопороз, вызванный дефицитом половых стероидов, и остеопороз, вызванный глюкокортикоидами. Ингибиторы также будут пригодны для лечения состояний, при которых необходимо анаболическое действие на кость. Например, временное применение ингибиторов у пациентов с переломами костей может помочь естественному процессу заживления путем индуктирования костной массы. В предпочтительном аспекте ингибитор микроРНК-19a и/или микроРНК-19b применяют по отдельности, то есть без какого-либо другого активного ингредиента. В еще одном предпочтительном аспекте ингибитор микроРНК-19a и/или микроРНК-19b применяют в сочетании с паратиреоидным гормоном или его фрагментом, таким как ПТГ 1-34. Ингибитор микроРНК-19а и/или микроРНК-19b эффективно усиливает анаболическое действие на кость, оказываемое ПТГ 1-34.
В еще одном аспекте изобретение обеспечивает ингибитор микроРНК-19a и/или микроРНК-19b для применения в способе лечения заболевания, связанного с потерей мышечной массы или функции. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что ингибирование экспрессии микроРНК-19а и/или микроРНК-19b значительно увеличивает или восстанавливает мышечную функцию. Следовательно, ингибиторы микроРНК-19а и/или микроРНК-19b также подходят для терапевтического применения при лечении таких заболеваний, как мышечная дистрофия или мышечная атрофия. В предпочтительном аспекте ингибиторы микроРНК-19а и/или микроРНК-19b применяют для лечения мышечной дистрофии, саркопении, кахексии, такой как раковая кахексия, или мышечной атрофии. В еще одном предпочтительном аспекте ингибиторы микроРНК-19a и/или микроРНК-19b применяют для лечения потери мышечной функции, связанной с остеопорозом, такой как остеопороз, вызванный дефицитом половых стероидов, или остеопороз, вызванный глюкокортикоидами. В еще одном предпочтительном аспекте ингибиторы микроРНК-19а и/или микроРНК-19b применяют для лечения потери мышечной функции, связанной с метастазированием рака молочной железы в кость. В еще одном предпочтительном аспекте ингибиторы микроРНК-19a и/или микроРНК-19b применяют для лечения потери мышечной функции, связанной с несовершенным остеогенезом (НО). В еще одном предпочтительном аспекте ингибиторы микроРНК-19a и/или микроРНК-19b применяют для лечения потери мышечной функции, связанной с мышечной дистрофией, в частности, наследственной мышечной дистрофией из-за мутации гена дистрофина, например типа Дюшенна или типа Беккера-Кинера.
В другом аспекте изобретение обеспечивает ингибитор микроРНК-19a и/или микроРНК-19b для применения в способе предупреждения или лечения связанного с раком разрушения кости. Авторами настоящего изобретения было обнаружено, что ингибиторы микроРНК-19а и/или микроРНК-19b эффективно ингибируют пролиферацию разрушающих кость клеток метастатического рака молочной железы MDA-MB-231. Соответственно, ингибиторы микроРНК-19а и/или микроРНК-19b могут применяться для терапевтического лечения или предупреждения связанного с раком остеолиза, лечения или предупреждения метастазирования в кость, такого как метастазы в кость, вызванные раком молочной железы.
В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретение обеспечивает ингибитор микроРНК-19a и/или микроРНК-19b для применения в способе лечения несовершенного остеогенеза (НО). Несовершенный остеогенез, также известный как болезнь «хрустального человека», представляет собой редкое генетическое заболевание, поражающее кости, вызываемое одной или несколькими мутациями в гене, кодирующем коллаген I типа. Было выявлено несколько мутаций и подтипов, вызывающих НО. У людей с НО могут происходить переломы костей практически без телесных повреждений. НО может варьироваться от очень тяжелой до легкой степени. Индивидуумы с наиболее тяжелым типом НО могут умереть при рождении. Выжившие люди с тяжелым НО могут иметь искривленные руки и ноги, очень низкий рост и быть неспособны ходить. Люди с самой легкой формой НО могут иногда ломать кости и иметь нормальный рост и продолжительность жизни. Переломы могут происходить в любой кости, но чаще всего происходят на руках и ногах. В настоящее время стандарт лечения тяжелых форм НО включает применение бисфосфонатов и хирургическое вмешательство для установки штифтов в кости с целью их укрепления. Антирезорбтивное лечение бисфосфонатами направлено на уменьшение остеокласт-зависимой резорбции кости. За счет уменьшения резорбции достигается более высокая костная масса. Хотя качество кости остается низким, более высокая костная масса значительно снижает риск перелома. Кроме того, было показано, что костеобразующие агенты эффективны для дополнительного увеличения костной массы и в настоящее время изучаются в клинических исследованиях. Поскольку было показано, что ингибиторы микроРНК-19а и/или микроРНК-19b улучшают формирование кости и костную массу при различных условиях, они подойдут для лечения НО.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Известно, что микроРНК-19a и/или -19b экспрессируются из полицистронного кластера miR-17~92, содержащего микроРНК 17, 18, 19a, 20a, 19b-1 и 192. Некоторые из этих микроРНК ранее были связаны с раком у людей.
В изобретении предложено применение ингибиторов микроРНК-19a и/или -19b для лечения заболеваний, связанных либо с потерей костной массы, либо со снижением мышечной функции. Хотя изобретение не ограничено в этом отношении, предпочтительно, чтобы субъект, пораженный заболеваниями или состоянием, представлял собой человека. Предпочтительно возраст субъекта составляет по меньшей мере 30 лет, предпочтительно по меньшей мере 40 лет, по меньшей мере 45 лет, по меньшей мере 50 лет, по меньшей мере 55 лет, по меньшей мере 60 лет или по меньшей мере 65 лет.
В целом, может быть использована молекула любого типа, взаимодействующая с микроРНК-19a и/или микроРНК-19b, или их пре-микроРНК, снижая или блокируя экспрессию или функцию любой из этих микроРНК или их соответствующих пре-микроРНК. Предпочтительно, чтобы используемые в настоящем документе ингибиторы представляли собой молекулы нуклеиновой кислоты, такие как молекулы рибонуклеиновой кислоты (РНК) или дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), или их производные, модифицированные, как поясняется ниже. Особенно предпочтительно, чтобы ингибиторы представляли собой олигонуклеотиды ДНК или РНК, содержащие или состоящие из последовательности, позволяющей им гибридизоваться с их родственными микроРНК, то есть микроРНК-19а и/или микроРНК-19b, с образованием дуплекса, предупреждающего связывание микроРНК с их мРНК-мишенью. Специалистам в данной области техники известны другие способы ингибирования микроРНК-19а и/или микроРНК-19b, или их пре-микроРНК, и такие способы включают микроРНК-губки, анти-микроРНК на основе лентивирусного вектора (miRZip) и ингибиторы Tough Decoy.
В контексте настоящего документа термин «олигонуклеотид» относится к олигомеру или полимеру нуклеотидных мономеров. Согласно изобретению олигонуклеотид может иметь любую длину, но предпочтительно он будет иметь длину от 8 до 50 нуклеотидов, более предпочтительно от 10 до 40 нуклеотидов, от 12 до 30 нуклеотидов, от 15 до 25 нуклеотидов и наиболее предпочтительно от 18 до 24 нуклеотидов. Например, олигонуклеотид может иметь длину 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50 нуклеотидов. Для некоторых областей применения олигонуклеотид также может содержать более 50 нуклеотидов, например 60, 70, 80, 90 или 100 нуклеотидов. Олигонуклеотид может представлять собой одноцепочечную, двухцепочечную или частично двухцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты. Способы получения олигонуклеотидов широко известны и включают химический синтез или способы на основе ПЦР (полимеразной цепной реакции).
Олигонуклеотид предпочтительно будет состоять из нуклеотидных мономеров, связанных фосфодиэфирными мостиками. Однако также можно использовать олигомеры или полимеры, в которых сахарофосфатный остов заменен функционально схожими структурами, например, пептидным остовом или фосфорамидным, тиофосфатным, метилфосфонатным или дитиофосфатным остовом. В некоторых случаях эти модификации приводят к повышенной устойчивости олигонуклеотида к ферментативному разложению нуклеазами после введения субъекту, подлежащему лечению.
Кроме того, изобретение также охватывает олигонуклеотиды, имеющие один или более модифицированных остатков сахара. Например, одна или более гидроксильных групп могут быть заменены галогенами или алифатическими группами, или они могут быть функционализированы простыми эфирами, аминами или подобными структурами. В предпочтительном варианте осуществления олигонуклеотид содержит один или более сахаров, в которых 2'-гидроксил был модифицирован путем добавления метильной (OMe) или метоксиэтильной (MOE) группы. Эти модификации сахара обеспечивают более высокую стабильность и устойчивость к ферментативному разложению.
Олигонуклеотид согласно изобретению также может содержать модифицированные основания наряду с природными основаниями аденином, гуанином, тимином, цитозином и урацилом, или вместо них. Указанные модифицированные основания включают, например, 5-метилцитозин, 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метиладенин, 6-метилгуанин, 2-тиоурацил, 2-тиотимин, 2-тиоцитозин, 5-галоурацил, 5-галоцитозин, 5-пропинилурацил, 5-пропинилцитозин, 6-азоурацил, 6-азоцитозин, 6-азотимин, 5-урацил, 4-тиоурацил, 8-тиоалкиладенин, 8-гидроксиладенины, 8-тиоладенин, тиоалкилгуанин, 8-гидроксилгуанин, 8-тиолгуанин, 7-метилгуанин, 7-метиладенин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин, 7-деазааденин, 3-деазагуанин и/или 3-деазааденин.
Помимо вышеизложенного олигонуклеотид согласно изобретению также может содержать одну или более модификаций на его 3'- и/или 5'-конце. Например, один или оба конца могут быть связаны с защитными группами, чтобы сделать олигонуклеотид менее подверженным ферментативному разложению нуклеазами.
Предпочтительно ингибиторы микроРНК-19a и/или микроРНК-19b являются по существу комплементарными микроРНК-19a и/или микроРНК-19b. Последовательность ингибиторов анти-микроРНК-19a (5'-TGCATAGATTTGCAC-3') и анти-микроРНК-19b (5'-TGCATGGATTTGCAC-3') представлена в SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, соответственно. Последовательности микроРНК-19a и микроРНК-19b приведены в SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, соответственно. Олигонуклеотид по существу комплементарен любой из этих последовательностей, если он обладает по меньшей мере 70 % идентичностью последовательности на протяжении по меньшей мере 10, 12, 14, 16, 18 или 20 нуклеотидов. Предпочтительно олигонуклеотид обладает по меньшей мере 70 % идентичностью последовательности на протяжении 20 нуклеотидов. Предпочтительно идентичность последовательности составляет по меньшей мере 80 %, по меньшей мере 90 % или по меньшей мере 95 %. Особенно предпочтительно, чтобы олигонуклеотид был полностью комплементарным на протяжении по меньшей мере 10, 12, 14, 16, 18 или 20 нуклеотидов. В одном из вариантов осуществления область комплементарности будет иметь менее 5 несовпадений, например, 4, 3, 2 или 1 несовпадение.
В особенно предпочтительном аспекте ингибитор микроРНК-19a и/или микроРНК представляет собой ДНК, содержащую
(а) последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(b) комплемент последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(c) вариант любой из последовательностей (a) или (b), идентичный им по меньшей мере на 70 % и который может создавать гибрид с микроРНК-19a и/или микроРНК-19b.
Описанные выше ингибиторы предпочтительно вводят в виде фармацевтической композиции. Таким образом, в еще одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим (а) ингибитор микроРНК-19a и/или микроРНК-19b, такой как нуклеиновая кислота или аналог нуклеиновой кислоты, и (b) фармацевтически приемлемый носитель. Как описано выше, ингибитор предпочтительно будет представлять собой молекулу ДНК или РНК. В одном из аспектов фармацевтическая композиция предпочтительно предназначена для применения в способе лечения заболевания, связанного с потерей костной массы. В еще одном аспекте фармацевтическая композиция предпочтительно предназначена для применения в способе лечения заболевания, связанного с потерей мышечной функции.
Приготовление фармацевтических композиций, содержащих ингибиторы на основе нуклеиновых кислот, хорошо известно специалистам в области фармацевтики. Обычно такие композиции готовят в форме для инъекций либо в виде жидких растворов, либо в виде суспензий. Фармацевтически активный ингибитор может быть смешан с эксципиентами, совместимыми с ингибиторами при применении у людей. Фармацевтические композиции согласно изобретению обычно содержат физиологически приемлемый носитель вместе с растворенными или диспергированными в нем молекулами ингибитора микроРНК в качестве активного ингредиента.
Фармацевтически приемлемые носители включают, например, воду, физиологический раствор, растворы Рингера или раствор декстрозы. Дополнительные подходящие носители для композиций, содержащих ингибиторы микроРНК, описаны в стандартных учебниках, например, в «Remington's Pharmaceutical Sciences», Mack Pub. Co., New Jersey (1991). В дополнение к носителю фармацевтическая композиция согласно изобретению может также содержать смачивающие агенты, буферные агенты, стабилизаторы, красители, консерванты и тому подобное в любой концентрации, при условии, что эти соединения не влияют на ингибирующую активность ингибиторов микроРНК согласно изобретению.
Для доставки ингибиторов микроРНК в место, требующее лечения, возможны различные способы введения. Фармацевтическая композиция может быть приготовлена, например, для парентерального введения. Парентеральное введение включает внутривенное, внутрикожное, внутриартериальное, подкожное, местное, чресслизистое, чрескожное или ректальное введение. Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления фармацевтическая композиция приготовлена для инъекции или инфузии.
Фармацевтические композиции, подходящие для инъекций, обычно включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсий для немедленного приема. Кроме того, композиция должна быть стабильной в обычных условиях производства и хранения. Для поддержания стерильности фармацевтическая композиция обычно включает консерванты, такие как парабены, хлорбутанол, фенол, аскорбиновая кислота, тимеросал и тому подобное, для подавления роста микроорганизмов в продукте. Для внутривенного или внутриартериального введения подходящие носители могут включать физиологический раствор, бактериостатическую воду, Cremophor EL™ (BASF) или забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS). Носитель также может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, многоатомный спирт (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль, и тому подобное) и их подходящие смеси. Пролонгированная абсорбция инъекционных композиций может быть обеспечена включением в композицию агента, замедляющего абсорбцию, например, моностеарата алюминия или желатина. Стерильные инъекционные растворы могут быть получены путем включения ингибиторов микроРНК в необходимом количестве в подходящий растворитель с одним или более из вышеупомянутых ингредиентов с последующей стерильной фильтрацией. Аналогично, дисперсии готовят путем включения ингибиторов микроРНК в стерильный носитель, содержащий дисперсионную среду и необязательно другие ингредиенты, как указано выше. Стерильные растворы также могут быть получены путем обеспечения ингибиторов микроРНК в форме стерильного порошка способами, известными в данной области техники, такими как вакуумная сушка или лиофилизация, и восстановлением порошка стерильной жидкостью с получением готового раствора для инъекции. В качестве альтернативы, фармацевтическая композиция согласно изобретению также может быть введена путем непрерывной инфузии.
Введение фармацевтической композиции также может быть достигнуто путем трансмукозальной или трансдермальной доставки. Для трансмукозального или трансдермального введения фармацевтическая композиция, содержащая ингибиторы микроРНК согласно изобретению, будет содержать вещества, обеспечивающие проникновение, подходящие для проникновения через кожный барьер или барьер слизистой. Такие вещества, обеспечивающие проникновение, известны из уровня техники и включают, например, для трансмукозального введения - детергенты, соли желчных кислот и производные фузидовой кислоты. Трансмукозальное введение может быть осуществлено посредством применения назальных спреев или суппозиториев. Для трансдермального введения активные соединения входят в состав мазей, бальзамов, гелей или кремов, как общеизвестно из уровня техники. Трансдермальные композиции могут быть введены, например, с помощью пластырей или микроигл. Предпочтительно соединения готовят в форме суппозиториев с обычными основами для суппозиториев, такими как масло какао и другие глицериды для ректальной доставки.
В одном из вариантов осуществления ингибиторы микроРНК объединяют с носителями, которые будут защищать ингибиторы от выведения из организма, такими как состав с контролируемым высвобождением, включая имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Можно применять поддающиеся биологическому разложению, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, сложные полиортоэфиры и полимолочная кислота. Способы приготовления составов с контролируемым высвобождением хорошо известны в данной области техники. Кроме того, могут быть получены композиции с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, имеющие вид формованных изделий, например пленок или микрокапсул. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают сложные полиэфиры, гидрогели, полилактиды, сополимеры L-глутаминовой кислоты и этил-L-глутамата, неразлагаемый этиленвинилацетат, разлагаемые сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты и тому подобное.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или состояния, связанного с патологическим уровнем потери костной массы, такого как остеопороз и НО, включающему введение терапевтически эффективного количества ингибитора микроРНК-19a и/или микроРНК-19b, или фармацевтической композиции, как определено выше, содержащей такой(ие) ингибитор(ы). В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или состояния, связанного с потерей мышечной функции, такого как мышечная дистрофия, саркопения, кахексия, такая как раковая кахексия, или мышечная атрофия, включающему введение терапевтически эффективного количества ингибитора микроРНК-19a и/или микроРНК-19b, или фармацевтической композиции, как определено выше, содержащей такой(ие) ингибитор(ы).
Терапевтически эффективное количество ингибиторов микроРНК обычно представляет собой количество, которое при введении является достаточным для эффективного блокирования или снижения экспрессии микроРНК-19а и/или микроРНК-19b, или их соответствующих прай- или пре-микроРНК. В целом, для целей изобретения может быть использована молекула любого типа, которая препятствует экспрессии микроРНК-19а и/или микроРНК-19b.
Специалистам в данной области будет ясно, что количество ингибитора, подлежащее введению пациенту, будет зависеть от нескольких факторов, таких как возраст и масса тела пациента, а также природа и тяжесть симптомов, подлежащих лечению. Количество ингибитора, оказывающее желаемое терапевтическое действие, может быть определено в случае каждого отдельного пациента с использованием рутинных экспериментов. Как правило, дозировка ингибитора микроРНК на массу тела варьируется от приблизительно 0,1 мг на кг массы тела пациента до приблизительно 50 мг на кг массы тела пациента, и более предпочтительно от приблизительно 0,5 мг на кг массы тела пациента до приблизительно 20 мг на кг массы тела пациента, и еще более предпочтительно от 1 мг на кг массы тела пациента до приблизительно 10 мг на кг массы тела пациента. Схема введения может включать одно или более введений ингибитора в сутки.
Например, лечение может продолжаться в течение по меньшей мере 2 недель, по меньшей мере 3 недель, по меньшей мере 4 недель, по меньшей мере 5 недель, по меньшей мере 6 недель, по меньшей мере 7 недель, по меньшей мере 8 недель, по меньшей мере 9 недель, по меньшей мере 10 недель, по меньшей мере 11 недель или по меньшей мере 12 недель. Для некоторых показаний лечение может продолжаться в течение по меньшей мере 4 месяцев, по меньшей мере 5 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 7 месяцев, по меньшей мере 8 месяцев, по меньшей мере 9 месяцев, по меньшей мере 10 месяцев, по меньшей мере 11 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев или по меньшей мере 18 месяцев. Период лечения будет определяться практикующим врачом с учетом нескольких факторов, таких как природа и тяжесть симптомов, подлежащих лечению, способ введения и тому подобное.
ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На фиг. 1 показано увеличение костной массы in vivo путем ингибирования микроРНК-19a/b. (а): диаграмма Венна, демонстрирующая снижение микроРНК при лечении мышей ПТГ или антителом к склеростину, соответственно. (b): экспрессия микроРНК-19a и микроРНК-19b в костях мышей, получавших ПТГ или Scl-Ab. (c): экспрессия микроРНК-19a и микроРНК-19b в остеобластах черепа, стимулированных in vitro с помощью ПТГ или Wnt3a. (d): дифференцировка остеобластов черепа, трансфицированных рандомизированным контрольным ингибитором микроРНК (ранд.), ингибиторами (анти-микроРНК) микроРНК-19a или микроРНК-19b, или комбинацией анти-микроРНК-19a и -19b (19a/b), оцененная по окрашиванию на активность щелочной фосфатазы. (e): окрашивание по Фон Косса проксимального отдела большеберцовой кости и двойное флуоресцентное мечение формирования кости (вставки). (f): гистоморфометрический анализ проксимального отдела большеберцовой кости. (g): окрашивание по Фон Косса четвертого поясничного позвонка тех же животных, что и в (e)-(f). (h): ОК/ОТ (объем кости/объем ткани) четвертого поясничного позвонка тех же животных, что и в (e)-(f). Средние значения ± СКО. *p менее 0,05, **p менее 0,01, ***p менее 0,001 по сравнению с носителем, #p менее 0,05, ###p менее 0,001 по сравнению с рандомизированным контролем. (i)-(k): сканирование с помощью микрокомпьютерной томографии (микро-КТ) дистального отдела бедренной кости (i, j) и поперечные срезы средней трети бедренной кости (k) тех же животных, что и в (e), после прекращения лечения. (l): количественная оценка анализа микро-КТ дистального отдела бедренной кости тех же животных, что и в (e). Средние значения ± СКО. *р менее 0,05 по сравнению с рандомизированным контролем. Сокращения: ОК/ОТ, объем кости/объем ткани; ПМ/ПК, поверхность минерализации/поверхность кости; СФК/ПК, скорость формирования костей/поверхность кости; САМ - скорость аппозиции минералов; ПО/ПК, поверхность остеоидов/поверхность кости; ПОб/ПК, поверхность остеобластов/поверхность кости; КОб/ПК, количество остеобластов/поверхность кости; ЭП/ПК, эрозированная поверхность/поверхность кости; ПОк/ПК, поверхность остеокластов/поверхность кости; КОк/ПК, количество остеокластов/поверхность кости; ТГ - толщина губчатого вещества; РГ, разобщенность губчатого вещества; ТЧ - трабекулярное число; ИМС, индекс модельной структуры.
На фиг. 2 показано, что ингибирование микроРНК-19a и микроРНК-19b усиливает анаболическое действие на кость при лечении иПТГ (интактным ПТГ) и восстанавливает костную массу в мышиной модели остеопороза. (а): окрашивание по Фон Косса и (b): гистоморфометрический анализ проксимального отдела большеберцовых костей 12-недельных самцов мышей генотипа Dmp1-Cre-; Tgif1fl/fl после лечения прерывистым введением ПТГ и/или еженедельными инъекциями анти-микроРНК-19a/b в течение четырех недель. Сокращения см. в условных обозначениях к фиг. 1. На масштабной линейке показан 1 мм. (c): изменение отношения ОК/ОТ с течением времени для большеберцовых костей самок мышей, у которых был вызван остеопороз с помощью овариэктомии (ОВЭ) за 21 день до начала еженедельного лечения анти-микроРНК-19a/b. (d)-(f), сканы микро-КТ дистального отдела бедренных костей (d, e) и поперечных срезов средней трети бедренных костей (f) тех же животных, что и в (с), после прекращения лечения. (g)-(i), микро-КТ-анализ ОК/ОТ губчатого вещества бедренных костей (g), большеберцовых костей (h) и четвертых поясничных позвонков (i) через 70 дней после овариэктомии. (j) модель действия микроРНК-19a/b. Средние значения ± СКО. *р менее 0,05, ***р менее 0,001 по сравнению с ранд, носителем; ##p менее 0,01 по сравнению с анти-микроРНК-19a/b, носителем; §§§p менее 0,001 по сравнению с ранд., иПТГ. *р менее 0,05 по сравнению с имитацией операции; ранд. #p менее 0,05, ##p менее 0,01 по сравнению с ОВЭ; ранд.
На фиг. 3 показано действие анти-микроРНК-19a/b на вызванную овариэктомией потерю мышечной функции у мышей. (а): гистологический анализ передней большеберцовой мышцы от мышей-самцов дикого типа C56Bl/6, которым инъецировали меченые FAM рандомизированные или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотиды. Стрелки указывают на центральные ядра. (b): сократительная способность ex vivo длинного разгибателя пальцев (EDL) у самок мышей C57Bl/6J, подвергнутых овариэктомии или имитации операции, после введения рандомизированных (ранд.) или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидов. (c): сократительная способность ex vivo камбаловидной мышцы у самок мышей C57Bl/6J, подвергнутых овариэктомии или имитации операции, после введения ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидов. (d): усталость ex vivo длинного разгибателя пальцев у самок мышей C57Bl/6J, подвергнутых овариэктомии или имитации операции, после введения ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидов. (e): усталость ex vivo камбаловидной мышцы у самок мышей C57Bl/6J, подвергнутых овариэктомии или имитации операции, после введения ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидов. *р менее 0,05 по сравнению с ОВЭ; ранд.
На фиг. 4 показано действие анти-микроРНК-19a/b на рост клеток рака молочной железы MDA-MB-231, метастазировавшего в кость, in vitro. (а): пролиферация клеток MDA-MB-231, трансфицированных ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидами. (b): пролиферация клеток MDA-MB-231, трансфицированных ранд. или микроРНК-19a/b олигонуклеотидами. **р менее 0,01 по сравнению с ранд.
На фиг. 5 показано, что ингибирование микроРНК-19a и микроРНК-19b уменьшает метастазы рака молочной железы в кости и восстанавливает вызванную раком молочной железы потерю костной массы и мышечной функции. (а) количественное определение сигнала биолюминесценции у мышей с опухолями, получавших рандомизированные (ранд., квадратики) или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотиды (треугольники) в течение четырех недель. (b) анализ с помощью микро-КТ проксимального отдела большеберцовой кости у мышей, не имеющих опухолей (контроль), и у мышей с метастазами в кости после лечения ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидами. (c) сократительная способность ex vivo камбаловидной мышцы у мышей, не имеющих опухолей (контроль), и у мышей с опухолями после введения ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидов. (d) усталость ex vivo камбаловидной мышцы у мышей, не имеющих опухолей (контроль), и у мышей с опухолями, которым вводили ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотиды. Средние значения ± СКО. *р менее 0,05 по сравнению с мышами, не имеющими опухолей.
На фиг. 6 показано действие анти-микроРНК-19a/b на вызванную глюкокортикоидами потерю костной массы и мышечной функции у мышей. (а) масса жировой ткани у мышей после лечения плацебо или глюкокортикоидами (преднизолоном) и доставки скремблированных (ранд.) или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидов, измеренные с помощью двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DXA). (b) масса тела, измеренная с помощью DXA. (c)-(e) анализ с помощью DXA минеральной плотности кости у мышей после лечения плацебо или преднизолоном и доставки ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидов во всем теле (c), бедренных костях (d) и позвоночнике (e). (f)-(h) вес икроножной мышцы во влажном состоянии (f), четырехглавой мышцы (g) и передней большеберцовой мышцы (h) у мышей, получавших плацебо или преднизолон и ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотиды. (i) сила мышц in vivo, определенная после 2 недель лечения плацебо или преднизолоном и ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидами, с использованием теста силы захвата передними конечностями в вертикальном положении. (j) функциональный мышечный тест in vivo (сила плантарной флексии) у мышей, получавших плацебо или преднизолон и ранд. или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотиды. Средние значения ± СКО. *P менее 0,05 по сравнению с мышами, получавшими соответствующее плацебо, #P менее 0,05 по сравнению с мышами, получавшими преднизолон и ранд.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Анализ экспрессии микроРНК in vivo
Чтобы идентифицировать микроРНК, которые регулируются в ответ на анаболический стимул кости, авторы вводили 8-недельным мышам рекомбинантный фрагмент человеческого паратиреоидного гормона (ПТГ 1-34) или антитело к склеростину (Scl-Ab). В частности, самцам мышей дикого типа инъецируют носитель, 100 мкг/кг ПТГ 1-34 (Bachem) или 100 мкг/кг Scl-Ab. Через 4 часа общую РНК, включая малые РНК, выделяли из костей мышей с использованием тризола (Invitrogen) в соответствии с инструкциями, предоставленными производителем. Для анализа экспрессии синтезируют кДНК (комплементарную ДНК) из 1 мкг общей РНК с использованием набора для синтеза кДНК ProtoScript First Strand (NEBioLabs). Количественную ПЦР в реальном времени (РТ-кПЦР) проводят с помощью системы обнаружения CFX96 (BioRad) с использованием SYBR Green Master Mix (BioRad). После нормализации к мРНК TATA-связывающего белка (Tbp) рассчитывают относительные уровни экспрессии и кратную индукцию каждого гена-мишени с использованием сравнительного метода CT (ΔΔCT). Малые РНК выделяют из различных тканей мышей с помощью тризола. Набор QuantimiR (SBI System Biosciences) используют для добавления полиА-хвоста к малым РНК для синтеза кДНК в соответствии с рекомендациями производителя. Относительную экспрессию микроРНК определяют с помощью SYBR Green Detection (BioRad) с использованием универсального обратного праймера и специфического прямого праймера, разработанного для каждой интересующей микроРНК. Экспрессию U6 используют в качестве внутреннего контроля, а относительную экспрессию микроРНК рассчитывают с использованием метода ΔΔCT.
Результаты: Лечение мышей ПТГ или Scl-Ab снижало экспрессию 35 или 129 микроРНК в кости, соответственно. Было обнаружено, что экспрессия 22 микроРНК подавлялась при обоих вариантах лечения (фиг. 1a). Среди микроРНК, экспрессия которых повсеместно подавлялась, были идентифицированы микроРНК-19a и микроРНК-19b. Прямая количественная оценка экспрессии микроРНК-19a/b в кости подтвердила их негативную регуляцию ПТГ и Scl-Ab (фиг. 1b).
Пример 2. Анализ экспрессии микроРНК in vitro
Для исследования действия стимуляции остеобластов черепа ПТГ 1-34 и Wnt3a был проведен анализ in vitro. Остеобласты черепа выделяют у мышей 2-3-дневного возраста и размножают в α-MEM, содержащей 10 % FBS и P/S. Остеобласты стимулируют носителем, ПТГ 1-34 (100 мкМ) или Wnt3a (100 нг/мл) в течение 4 часов, и малые РНК выделяют из клеток с использованием набора miRNEasy (Qiagen). После синтеза кДНК экспрессию микроРНК-19a и микроРНК-19b анализируют с помощью РТ-кПЦР. Экспрессию U6 используют в качестве внутреннего контроля, а относительную экспрессию микроРНК рассчитывают с использованием метода ΔΔCT.
Результаты: как стимуляция ПТГ 1-34, так и Wnt3a вызывают снижение экспрессии микроРНК-19a/b в остеобластах черепа (фиг. 1c).
Пример 3. Анализ дифференцировки остеобластов in vitro
Чтобы проверить, можно ли влиять на дифференцировку остеобластов черепа путем вмешательства в экспрессию микроРНК-19a/b, клетки трансфицируют олигонуклеотидами, сконструированными для связывания и ингибирования эндогенной микроРНК-19a (анти-микроРНК-19a: 6-FAM/TGCATAGATTTGCAC) и микроРНК-19b (анти-микроРНК-19b: 6-FAM/TGCATGGATTTGCAC). Эти синтетические олигонуклеотиды содержат тиофосфатные связи в остове для оптимального использования в функциональных исследованиях, а также обладают оптимизированными фармакокинетическими и фармакодинамическими свойствами и минимальной токсичностью. Кроме того, 5'-метка флуоресцеина FAM позволяет контролировать эффективность трансфекции in vitro и доставку в ткани in vivo. Клетки трансфицируют анти-микроРНК-19a/b (50 нМ), используя систему электропорации Neon (Invitrogen). Дифференцировку остеобластов индуцируют, добавляя в α-MEM 0,2 мМ L-аскорбиновой кислоты и 10 мМ β-глицерофосфата (оба от Millipore). Дифференцировку остеобластов определяют по окрашиванию щелочной фосфатазы (ALP) после фиксации клеток в 4 % нейтрально забуференном растворе формальдегида. Для окрашивания ALP клетки инкубируют с нафтолом AS-MX/Fast Blue (оба от Sigma-Aldrich) в растворе трис-HCl в течение 15 минут при комнатной температуре.
Результаты: было обнаружено, что дифференцировка остеобластов черепа усиливалась за счет трансфекции ингибиторами против микроРНК-19a и микроРНК-19b синергетическим образом (фиг. 1d).
Пример 4. Анализ костей у мышей, получавших анти-микроРНК-19a/b
Чтобы проверить, может ли лечение комбинацией ингибиторов против микроРНК-19a и микроРНК-19b (анти-микроРНК-19a/b) оказывать анаболическое действие на кость in vivo, 8-недельных мышей лечили в течение 28 дней с помощью еженедельных внутривенных (в/в) инъекций анти-микроРНК-19a/b, а затем определяют костную массу. За 7 и 2 дня до умерщвления мышам вводят кальцеин (40 мг/кг) и демоциклин (20 мг/кг, Sigma-Aldrich) соответственно. Большеберцовые кости и тела четвертых поясничных позвонков (L4) собирают и фиксируют в 3,7 % забуференном PBS формальдегиде. Для гистоморфометрического анализа бельшеберцовые кости и L4 погружают в метилметакрилат и толуидиновый синий. Проводят окрашивания по Фон Косса и тартрат-устойчивой кислой фосфатазы (TRAP) проводят с использованием сагиттальных срезов 4 мкм. Количественные гистоморфометрические измерения кости выполняют в соответствии со стандартизированными протоколами (стандарты ASBMR) [6] с использованием системы OsteoMeasure (OsteoMetrics). Для трехмерного анализа свойств трубчатой кости и тела позвонка используют микрокомпьютерную томографию (микро-КТ). Тела четвертых поясничных позвонков (L4) мышей анализируют с использованием микрокомпьютерной томографии высокого разрешения с фиксированным размером изотропного вокселя 10 мкм (максимальное напряжение 70 кВ при X мкА и времени интеграции 400 мс; Viva80 micro-CT; Scanco Medical AG). Этот порог был подтвержден путем ручной оценки 10 отдельных томографических срезов из четырех образцов на группу для выделения минерализованной ткани и сохранения ее морфологии при исключении неминерализованных тканей. Все анализы проводят на костной ткани, извлеченной в цифровой форме, с использованием методов подсчета расстояний в трехмерном пространстве (Scanco Medical AG).
Результаты: лечение анти-микроРНК-19a/b увеличило массу губчатого вещества проксимального отдела большеберцовой кости. Гистоморфометрический анализ показал, что обработка анти-микроРНК-19a/b активировала перестройку костной ткани путем усиления параметров остеобластов и остеокластов с улучшенным формированием кости, что привело к общему увеличению костной массы (фиг. 1e и 1f). Анаболическое действие на кость при лечении анти-микроРНК-19a/b было подтверждено на телах позвонков L4 (фиг. 1g и 1h) и на дистальном отделе бедренной кости с использованием микрокомпьютерной томографии (микро-КТ) (фиг. 1i - 1l).
Пример 5. Совместное лечение ингибиторами микроРНК-19a/b и прерывистым введением ПТГ (1-34)
Поскольку и ПТГ, и анти-микроРНК-19a/b увеличивают костную массу, было оценено совместное лечение. Рекомбинантный фрагмент человеческого паратиреоидного гормона (ПТГ 1-34; 100 мкг/кг массы тела, Biochem) или носитель вводят внутрибрюшинно пять раз в неделю в течение трех недель 8-недельным самцам мышей. Анти-микроРНК-19a/b или контроль ранд. вводят раз в неделю в качестве совместного лечения.
Результаты: анти-микроРНК-19a/b усиливают обусловленное ПТГ увеличение костной массы в большеберцовых костях самцов мышей (фиг. 2a и 2b).
Пример 6. Ингибиторы микроРНК-19a/b на модели остеопороза
Поскольку снижение костной массы является отличительной чертой остеопороза, было проверено, может ли увеличение костной массы путем введения анти-микроРНК-19a/b также быть полезным при лечении остеопороза у женщин. Для этого 8-недельных самок мышей подвергают овариэктомии, чтобы лишить их половых стероидов, что приводило к серьезной потере массы губчатого вещества в большеберцовой кости. Чтобы имитировать клиническую ситуацию, лечение анти-микроРНК-19a/b начинают после того, как остеопороз полностью развился, через 21 день после овариэктомии путем еженедельных инъекций анти-микроРНК-19a/b или рандомизированного контроля.
Результаты: эта терапия предотвратила дополнительную потерю костной массы через 14 дней после первого введения лекарственных средств, таким образом уменьшая потерю костной массы в этой модели остеопороза. Количественное определение массы губчатого вещества дистального отдела бедренной кости, проксимального отдела большеберцовой кости и тел позвонков L4 после прекращения лечения подтвердило, что лечение анти-микроРНК-19a/b оказывает защитное действие против потери костной массы при остеопорозе.
Пример 7. Гистологический анализ мышц
Было проанализировано действие анти-микроРНК-19a/b на вызванную овариэктомией потерю мышечной функции. Гистологический анализ проводят посредством инъекции меченых FAM рандомизированных или анти-микроРНК-19a/b олигонуклеотидов раз в неделю (10 мг/кг, в/в) в течение 4 недель 8-недельным самцам мышей C56Bl/6 дикого типа. Через неделю после последней обработки мышей умерщвляют и собирают мышцы (переднюю большеберцовую мышцу). Мышцы погружают в соединение с оптимальной температурой резания (OCT) до получения срезов в замороженном состоянии с помощью криостата. Срезы тканей окрашивают растворами Шифф-иодной кислоты (PAS) и гематоксилина.
Результаты: в стационарном состоянии ядра расположены на краю мышечных волокон. Нельзя не отметить, что в обработанных анти-микроРНК-19a/b мышечных волокнах наблюдалось смещение ядер от периферии к центральному положению (фиг. 3А), что свидетельствует об активной спонтанной перестройке мышечной ткани в ответ на ингибирование микроРНК-19a/b.
Пример 8. Функциональный анализ мышц
Для исследования влияния результатов, полученных в примере 7, на функцию мышц, проводят функциональные тесты ex vivo с использованием свежесобранных мышц (длинного разгибателя пальцев и камбаловидной мышцы). 8-недельных самок мышей C57Bl/6J подвергают овариэктомии или имитируют операцию и через три недели обрабатывают рандомизированным контролем (ранд.) или анти-микроРНК-19a/b (10 мг/кг, в/в) раз в неделю в течение семи недель. Через одну неделю после последней инъекции мышей умерщвляют и анализируют сократительную способность ex vivo длинного разгибателя пальцев (EDL) и камбаловидной мышцы с использованием специального устройства, предназначенного для измерения свойств мышц мыши in situ, ex vivo и in vivo (Aurora Scientific). Для этого EDL и камбаловидную мышцу отсекают от задней конечности, к сухожилиям мышц привязывают стальные крючки и устанавливают мышцы между датчиком силы. Стимулируют сокращение мышц с помощью сверхмаксимального раздражителя между двумя электродами. Для исследований на усталость длинный разгибатель пальцев и камбаловидную мышцу стимулируют с частотой 70 Гц в течение 50 повторов и регистрируют максимальную тетаническую силу. Данные собирают и анализируют с использованием программ динамического мышечного контроля/сбора данных (DMC) и анализа данных динамического мышечного контроля (DMA) (Aurora Scientific).
Результаты: функциональные тесты показали, что овариэктомия значительно снижала силу (фиг. 3b и 3c) и упругость (фиг. 3d и 3e) длинного разгибателя пальцев и камбаловидной мышцы. Анти-микроРНК-19a/b (10 мг/кг, в/в, раз в неделю в течение семи недель) восстанавливают как силу, так и упругость до уровня контроля имитацией (фиг. 3b-3e). Это убедительно указывает на то, что антагонистическое воздействие на микроРНК-19a/b защищает от вызванной овариэктомией потери мышечной функции. Эти результаты показывают, что микроРНК-19a/b является новой мишенью в лечении сниженной мышечной функции.
Пример 9. Рост клеток рака молочной железы, метастазировавшего в кость
Приведенные выше результаты подтверждают мнение о том, что антагонистическое воздействие на микроРНК-19a/b является остеозащитным. Поэтому было проверено, может ли обработка анти-микроРНК-19a/b ослабить активность разрушающих кость клеток рака молочной железы MDA-MB-231. Чтобы проверить эту гипотезу, клетки рака молочной железы MDA-MB-231 трансфицируют нуклеотидами анти-микроРНК-19a/b, miR-19a/b или соответствующими ранд. контролями. Клетки выращивают в течение 4 дней in vitro, и пролиферацию клеток определяют с помощью MTS-теста каждый день до окончания эксперимента.
Результаты: обработка разрушающих кость клеток рака молочной железы MDA-MB-231 нуклеотидами анти-микроРНК-19a/b значительно снижала пролиферацию раковых клеток к 3 и 4 дню, тогда как доставка нуклеотидов микроРНК-19a/b повышала пролиферацию раковых клеток в эти же моменты времени по сравнению с контролем. Эти данные убедительно свидетельствуют о том, что ингибирование эндогенной микроРНК-19a/b в клетках рака молочной железы MDA-MB-231 может препятствовать способности к разрушению кости в контексте заболевания метастатическим раком молочной железы.
Пример 10. Лечение метастатического заболевания костей
Было проверено, может ли лечение анти-микроРНК-19a/b ослабить активность разрушающих кость клеток рака молочной железы MDA-MB-231 и защитить от вызванного раком молочной железы остеолитического заболевания in vivo. Клетку рака молочной железы MDA-MB-231, стабильно экспрессирующую ген люциферазы, инъецируют в левый желудочек 8-недельных самок мышей с иммунодефицитом SCID. Микрометастазы были обнаружены через две недели после инъекции клеток рака молочной железы с помощью биолюминесцентной визуализации (BLI), и мышей случайным образом распределяют в две группы лечения. Одна группа получала рандомизированный олигонуклеотид (ранд.; 10 мг/кг), а другая группа получала анти-микроРНК-19a/b (10 мг/кг) внутривенно (в/в) раз в неделю в течение четырех недель. Опухолевую нагрузку измеряли еженедельно с помощью BLI. Через одну неделю после последней инъекции мышей умерщвляют и анализируют сократительную способность камбаловидной мышцы ex vivo с использованием специального устройства, предназначенного для измерения свойств мышц мыши in situ, ex vivo и in vivo (Aurora Scientific). Для этого камбаловидную мышцу отсекают от задней конечности, к сухожилиям мышц привязывают крючки и устанавливают мышцы между датчиком силы. Стимулируют сокращение мышц с помощью сверхмаксимального раздражителя между двумя электродами. Для исследований на усталость камбаловидную мышцу стимулируют с частотой 70 Гц в течение 50 повторов и регистрируют максимальную тетаническую силу. Данные собирают и анализируют с использованием программ динамического мышечного контроля/сбора данных (DMC) и анализа данных динамического мышечного контроля (DMA) (Aurora Scientific). Для трехмерного анализа трубчатой кости используют микрокомпьютерную томографию (микро-КТ). Трубчатые кости мышей анализируют с использованием микрокомпьютерной томографии высокого разрешения с фиксированным размером изотропного вокселя 10 мкм (максимальное напряжение 70 кВ при X мкА и времени интеграции 400 мс; Viva80 micro-CT; Scanco Medical AG). Этот порог был подтвержден путем ручной оценки 10 отдельных томографических срезов из четырех образцов на группу для выделения минерализованной ткани и сохранения ее морфологии при исключении неминерализованных тканей. Все анализы проводят на костной ткани, извлеченной в цифровой форме, с использованием методов подсчета расстояний в трехмерном пространстве (Scanco Medical AG).
Результаты: визуализация BLI показала значительное снижение роста опухолей в костях мышей, получавших анти-микроРНК-19a/b, по сравнению с контрольными мышами, получавшими ранд. (фиг. 5a). Рак молочной железы вызывал значительную потерю костной массы у мышей, получавших ранд., что предотвращалось еженедельным лечением анти-микроРНК-19a/b (фиг. 5b). Функциональные мышечные тесты показали, что анти-микроРНК-19a/b (10 мг/кг, в/в, раз в неделю в течение четырех недель) восстанавливают вызванную раком потерю как силы, так и выносливости камбаловидной мышцы (фиг. 5c и 5d). Это убедительно указывает на то, что антагонистическое воздействие на микроРНК-19a/b снижает метастатическую нагрузку на кость и защищает от вызванной раком молочной железы потери костной массы и мышечной функции.
Пример 11. Лечение остеопороза, вызванного глюкокортикоидами
Для исследования того, участвует ли анти-микроРНК-19a/b в вызванном глюкокортикоидами остеопорозе, пеллеты плацебо или преднизолона (2,1 мг/кг/сут) подкожно имплантируют 4-месячным самкам мышей C57Bl/6J. За один день до имплантации пеллет и затем раз в неделю мыши получают рандомизированный контроль (ранд.) или анти-микроРНК-19a/b (10 мг/кг, в/в). Минеральную плотность кости (МПК) и массу жировой ткани в организме измеряют до и после 4 недель лечения с помощью двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DEXA, Piximus). Силу мышц in vivo определяли через 2 недели лечения с помощью теста силы захвата передними конечностями в вертикальном положении. Функциональные мышечные тесты in vivo (сила плантарной флексии) выполняют с использованием специального устройства, предназначенного для измерения свойств мышц мыши in vivo (Aurora Scientific). Максимальную силу сокращения мышц нормируют к массе тела. Через 4 недели лечения мышей умерщвляют и измеряют вес икроножной, четырехглавой и передней большеберцовой (TA) мышц во влажном состоянии.
Результаты: измерение с помощью двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии выявило увеличение массы жировой ткани при лечении глюкокортикоидами (преднизолоном), что было предотвращено еженедельной доставкой анти-микроРНК-19a/b (фиг. 6a). Никаких изменений в общей массе тела не наблюдалось (фиг. 6b). Кроме того, МПК была значительно снижена в бедренных костях и в позвоночнике мышей, получавших преднизолон (фиг. 6c-e). Мыши, получавшие анти-микроРНК-19a/b, были защищены от вызванной глюкокортикоидами потери МПК (фиг. 6c-e). Хотя глюкокортикоиды снижают мышечную массу у мышей, получавших как ранд., так и анти-микроРНК-19a/b, масса икроножной, четырехглавой и передней большеберцовой мышц была значительно выше у мышей, получавших анти-микроРНК-19a/b по сравнению с контрольными мышами, получавшими ранд. (фиг. 6f-h). Важно отметить, что лечение анти-микроРНК-19a/b предотвращало вызванную глюкокортикоидами потерю мышечной функции, определяемую с помощью тестов силы захвата и плантарной флексии (фиг. 6i, j).
Источники информации
1. Janssen, H.L.A. et al., Treatment of HCV Infection by Targeting MicroRNA, N. Engl. J. Med. 368, 1685-1694 (2013).
2. Musilova K. & Mraz M., MicroRNAs in B cell lymphomas: How a complex biology gets more complex", Leukemia, 2015 29 (5), 1004-17 (2015).
3. Nielsen B.S., et al., High levels of microRNA-21 in the stroma of colorectal cancers predict short disease-free survival in stage II colon cancer patients, Clin Exp Metastasis 28 (1): 27-38 (2010).
4. Romao J.M. et al., MicroRNA regulation in mammalian adipogenesis, Exp. Biol. Med. 236 (9), 997-1004 (2011).
5. Hommers L.G. et al., Heterogeneity and Individuality: microRNAs in Mental Disorders, J Neural Transm. 122 (1): 79-97 (2015).
6. Parfitt, A.M. et al., Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee. J. Bone Miner. Res. 2, 595-610 (1987).
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ
SEQ ID NO: 1 - 5'-TGCATAGATTTGCAC-3' (анти-микроРНК-19a)
SEQ ID NO: 2 - 5'-TGCATGGATTTGCAC-3' (анти-микроРНК -19b)
SEQ ID NO: 3 - 5'-UGUGCAAAUCUAUGCAAAACUGA-3'(микроРНК-19a)
SEQ ID NO: 4 - 5'-UGUGCAAAUCCAUGCAAAACUGA-3'(микроРНК -19b)
Claims (44)
1. Способ лечения или предупреждения заболевания или патологического состояния, связанного с потерей костной массы, включающий введение ингибитора микроРНК-19а и/или микроРНК-19b, где указанное заболевание или патологическое состояние представляет собой остеопороз или несовершенный остеогенез (НО).
2. Способ лечения или предупреждения заболевания или патологического состояния, связанного со снижением мышечной функции, включающий введение ингибитора микроРНК-19а и/или микроРНК-19b, где указанное заболевание или патологическое состояние представляет собой мышечную атрофию, саркопению или кахексию.
3. Способ лечения или предупреждения связанного с раком разрушения кости, включающий введение ингибитора микроРНК-19а и/или микроРНК-19b.
4. Способ по п. 3, где указанное связанное с раком разрушение кости вызвано метастазированием в кость.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где указанный ингибитор представляет собой нуклеиновую кислоту, такую как ДНК или РНК, или аналог нуклеиновой кислоты.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где указанный ингибитор вводят путем внутривенного, подкожного, трансдермального или трансмукозального введения.
7. Способ по любому из пп. 1-6, где указанный ингибитор содержит последовательность ДНК или РНК, связывающуюся с или снижающую экспрессию микроРНК-19а и/или микроРНК-19b.
8. Способ по п. 7, где указанный ингибитор представляет собой ДНК, содержащую
(а) последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(b) комплемент последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(c) вариант любой из последовательностей (a) или (b), идентичный им по меньшей мере на 80 % и который может гибридизоваться с микроРНК-19a и/или микроРНК-19b.
9. Способ лечения заболевания или патологического состояния, связанного с потерей костной массы, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей (a) ингибитор микроРНК-19а и/или микроРНК-19b и (b) фармацевтически приемлемый носитель, где указанное заболевание или патологическое состояние представляет собой остеопороз или несовершенный остеогенез (НО).
10. Способ лечения заболевания или патологического состояния, связанного со снижением мышечной функции, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей (a) ингибитор микроРНК-19а и/или микроРНК-19b и (b) фармацевтически приемлемый носитель, где указанное заболевание или патологическое состояние представляет собой мышечную атрофию, саркопению или кахексию.
11. Способ лечения связанного с раком разрушения кости, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей (a) ингибитор микроРНК-19а и/или микроРНК-19b и (b) фармацевтически приемлемый носитель.
12. Способ по любому из пп. 9-11, где указанный ингибитор представляет собой нуклеиновую кислоту или аналог нуклеиновой кислоты.
13. Способ по любому из пп. 9-12, где указанный ингибитор представляет собой ДНК или РНК.
14. Способ по любому из пп. 9-13, где указанный ингибитор вводят путем инфузии или инъекции.
15. Способ по любому из пп. 9-14, где указанный ингибитор содержит последовательность ДНК или РНК, связывающуюся с и ингибирующую или снижающую экспрессию микроРНК-19а и/или микроРНК-19b.
16. Способ по любому из пп. 9-15, где указанный ингибитор представляет собой ДНК, содержащую
(а) последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(b) комплемент последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(c) вариант любой из последовательностей (a) или (b), идентичный им по меньшей мере на 70 % и который может гибридизоваться с микроРНК-19a и/или микроРНК-19b.
17. Применение ингибитора микроРНК-19а и/или микроРНК-19b для лечения или предупреждения заболевания или патологического состояния, связанного с потерей костной массы, где указанное заболевание или патологическое состояние представляет собой остеопороз или несовершенный остеогенез (НО).
18. Применение ингибитора микроРНК-19а и/или микроРНК-19b для лечения или предупреждения заболевания или патологического состояния, связанного со снижением мышечной функции, где указанное заболевание или патологическое состояние представляет собой мышечную атрофию, саркопению или кахексию.
19. Применение ингибитора микроРНК-19а и/или микроРНК-19b для лечения или предупреждения связанного с раком разрушения кости.
20. Применение по п. 19, где указанное связанное с раком разрушение кости вызвано метастазированием в кость.
21. Применение по любому из пп. 17-20, где указанный ингибитор представляет собой нуклеиновую кислоту, такую как ДНК или РНК, или аналог нуклеиновой кислоты.
22. Применение по любому из пп. 17-21, где указанный ингибитор содержится в композиции, пригодной для внутривенного, подкожного, трансдермального или трансмукозального введения.
23. Применение по любому из пп. 17-22, где указанный ингибитор содержит последовательность ДНК или РНК, связывающуюся с или снижающую экспрессию микроРНК-19а и/или микроРНК-19b.
24. Применение по п. 23, где указанный ингибитор представляет собой ДНК, содержащую
(а) последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(b) комплемент последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(c) вариант любой из последовательностей (a) или (b), идентичный им по меньшей мере на 80 % и который может гибридизоваться с микроРНК-19a и/или микроРНК-19b.
25. Применение фармацевтической композиции, содержащей (a) ингибитор микроРНК-19а и/или микроРНК-19b и (b) фармацевтически приемлемый носитель, для лечения заболевания или патологического состояния, связанного с потерей костной массы, где указанное заболевание или патологическое состояние представляет собой остеопороз или несовершенный остеогенез (НО).
26. Применение фармацевтической композиции, содержащей (a) ингибитор микроРНК-19а и/или микроРНК-19b и (b) фармацевтически приемлемый носитель, для лечения заболевания или патологического состояния, связанного со снижением мышечной функции, где указанное заболевание или патологическое состояние представляет собой мышечную атрофию, саркопению или кахексию.
27. Применение фармацевтической композиции, содержащей (a) ингибитор микроРНК-19а и/или микроРНК-19b и (b) фармацевтически приемлемый носитель, для лечения связанного с раком разрушения кости.
28. Применение по любому из пп. 25-27, где указанный ингибитор представляет собой нуклеиновую кислоту или аналог нуклеиновой кислоты.
29. Применение по любому из пп. 25-28, где указанный ингибитор представляет собой ДНК или РНК.
30. Применение по любому из пп. 25-29, где указанный ингибитор содержится в композиции, пригодной для инфузии или инъекции.
31. Применение по любому из пп. 25-30, где указанный ингибитор содержит последовательность ДНК или РНК, связывающуюся с и ингибирующую или снижающую экспрессию микроРНК-19а и/или микроРНК-19b.
32. Применение по любому из пп. 25-31, где указанный ингибитор представляет собой ДНК, содержащую
(а) последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(b) комплемент последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или
(c) вариант любой из последовательностей (a) или (b), идентичный им по меньшей мере на 70 % и который может гибридизоваться с микроРНК-19a и/или микроРНК-19b.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| LULU100182 | 2017-04-06 | ||
| LU100182A LU100182B1 (en) | 2017-04-06 | 2017-04-06 | Therapeutic use of microRNA 19A/19B |
| PCT/EP2018/058828 WO2018185270A1 (en) | 2017-04-06 | 2018-04-06 | Microrna 19a/19b for use in treating a pathological condition associated with bone loss or reduced muscle function |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019135323A RU2019135323A (ru) | 2021-05-06 |
| RU2019135323A3 RU2019135323A3 (ru) | 2021-07-12 |
| RU2770369C2 true RU2770369C2 (ru) | 2022-04-15 |
Family
ID=59009748
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019135323A RU2770369C2 (ru) | 2017-04-06 | 2018-04-06 | Микрорнк-19а/19в для применения в лечении патологического состояния, связанного с потерей костной массы или снижением мышечной функции |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11013755B2 (ru) |
| EP (1) | EP3606537B1 (ru) |
| JP (2) | JP2020512819A (ru) |
| KR (1) | KR20190134753A (ru) |
| CN (1) | CN110545823A (ru) |
| AU (1) | AU2018249676B2 (ru) |
| BR (1) | BR112019020794A2 (ru) |
| CA (1) | CA3057568A1 (ru) |
| IL (1) | IL269683B2 (ru) |
| LU (1) | LU100182B1 (ru) |
| RU (1) | RU2770369C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201908599UA (ru) |
| WO (1) | WO2018185270A1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2166940C2 (ru) * | 1993-03-11 | 2001-05-20 | Зимогенетикс, Инк. | Способ уменьшения потерь костной ткани, способ лечения остеопороза и применение соединения |
| WO2010071826A2 (en) * | 2008-12-19 | 2010-06-24 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Methods for treating osteoclast-related disease, compounds and compositions thereof |
| WO2017053622A1 (en) * | 2015-09-22 | 2017-03-30 | MiRagen Therapeutics, Inc. | MiR-19 MODULATORS AND USES THEREOF |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1656222B (zh) * | 2002-03-27 | 2011-11-30 | 艾格拉治疗公司 | 反义iap核碱基寡聚物及其应用 |
| US8101564B2 (en) * | 2006-05-03 | 2012-01-24 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods for regulating osteoclast differentiation and bone resorption using LRRc17 |
| KR101760758B1 (ko) * | 2008-05-14 | 2017-07-24 | 애그리컬쳐 빅토리아 서비스 피티와이 엘티디 | 질병 및 장애를 치료하기 위한 안지오게닌 또는 안지오게닌 아고니스트의 이용 |
| AU2015200383A1 (en) * | 2010-05-06 | 2015-02-19 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Monitoring health and disease status using clonotype profiles |
| US20140219964A1 (en) * | 2013-02-07 | 2014-08-07 | Children's Medical Center Corporation | Methods for inducing cardiomyocyte proliferation |
-
2017
- 2017-04-06 LU LU100182A patent/LU100182B1/en active IP Right Grant
-
2018
- 2018-04-06 BR BR112019020794A patent/BR112019020794A2/pt active Search and Examination
- 2018-04-06 JP JP2019554798A patent/JP2020512819A/ja active Pending
- 2018-04-06 WO PCT/EP2018/058828 patent/WO2018185270A1/en unknown
- 2018-04-06 RU RU2019135323A patent/RU2770369C2/ru active
- 2018-04-06 CA CA3057568A patent/CA3057568A1/en active Pending
- 2018-04-06 IL IL269683A patent/IL269683B2/en unknown
- 2018-04-06 AU AU2018249676A patent/AU2018249676B2/en active Active
- 2018-04-06 US US16/499,520 patent/US11013755B2/en active Active
- 2018-04-06 EP EP18717883.5A patent/EP3606537B1/en active Active
- 2018-04-06 CN CN201880023632.6A patent/CN110545823A/zh active Pending
- 2018-04-06 SG SG11201908599U patent/SG11201908599UA/en unknown
- 2018-04-06 KR KR1020197032937A patent/KR20190134753A/ko not_active Application Discontinuation
-
2021
- 2021-05-14 US US17/320,649 patent/US11793828B2/en active Active
-
2023
- 2023-02-14 JP JP2023020602A patent/JP2023058653A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2166940C2 (ru) * | 1993-03-11 | 2001-05-20 | Зимогенетикс, Инк. | Способ уменьшения потерь костной ткани, способ лечения остеопороза и применение соединения |
| WO2010071826A2 (en) * | 2008-12-19 | 2010-06-24 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Methods for treating osteoclast-related disease, compounds and compositions thereof |
| WO2017053622A1 (en) * | 2015-09-22 | 2017-03-30 | MiRagen Therapeutics, Inc. | MiR-19 MODULATORS AND USES THEREOF |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| MOGILYANSKY E. et al., The miR-17/92 cluster: a comprehensive update on its genomics, genetics, functions and increasingly important and numerous roles in health and disease, Cell Death and Differentiation, 2013, Vol. 20, pp. 1603-1614. * |
| MOGILYANSKY E. et al., The miR-17/92 cluster: a comprehensive update on its genomics, genetics, functions and increasingly important and numerous roles in health and disease, Cell Death and Differentiation, 2013, Vol. 20, pp. 1603-1614. PEIFU TANG et al., The role of MicroRNAs in Osteoclasts and Osteoporosis, RNA Biology, 2014, 11:11, pp. 1355-1363. * |
| PEIFU TANG et al., The role of MicroRNAs in Osteoclasts and Osteoporosis, RNA Biology, 2014, 11:11, pp. 1355-1363. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA3057568A1 (en) | 2018-10-11 |
| US20210268014A1 (en) | 2021-09-02 |
| JP2020512819A (ja) | 2020-04-30 |
| AU2018249676A1 (en) | 2019-10-17 |
| EP3606537B1 (en) | 2024-07-31 |
| SG11201908599UA (en) | 2019-10-30 |
| KR20190134753A (ko) | 2019-12-04 |
| EP3606537A1 (en) | 2020-02-12 |
| US11793828B2 (en) | 2023-10-24 |
| US20200038425A1 (en) | 2020-02-06 |
| AU2018249676B2 (en) | 2024-03-14 |
| RU2019135323A3 (ru) | 2021-07-12 |
| IL269683B1 (en) | 2023-10-01 |
| US11013755B2 (en) | 2021-05-25 |
| JP2023058653A (ja) | 2023-04-25 |
| CN110545823A (zh) | 2019-12-06 |
| LU100182B1 (en) | 2018-10-15 |
| BR112019020794A2 (pt) | 2020-04-28 |
| IL269683A (en) | 2019-11-28 |
| WO2018185270A1 (en) | 2018-10-11 |
| RU2019135323A (ru) | 2021-05-06 |
| IL269683B2 (en) | 2024-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107002082B (zh) | 反义寡核苷酸作为tgf-r信号传导的抑制剂 | |
| US20090082297A1 (en) | Compositions and Methods for Regulating Gene Expression | |
| JP2015523853A (ja) | Ａｔｐ２ａ２発現を調節するための組成物及び方法 | |
| JP2015518710A (ja) | ヘモグロビン遺伝子ファミリー発現を調節するための組成物及び方法 | |
| EP3033425A1 (en) | Compositions and methods for modulating expression of frataxin | |
| JP2016521556A (ja) | Ｆｏｘｐ３発現を調節するための組成物及び方法 | |
| JP7318166B2 (ja) | マイクロｒｎａ２２の阻害剤 | |
| US20240067963A1 (en) | Compositions and methods for treatment of cardiac diseases | |
| RU2770369C2 (ru) | Микрорнк-19а/19в для применения в лечении патологического состояния, связанного с потерей костной массы или снижением мышечной функции | |
| EP3775172A2 (en) | Splice-switching oligonucleotides and methods of use | |
| US8685727B2 (en) | Regulation of macrophage activation using miR-125b | |
| WO2014053014A1 (en) | Modulation of rna activity and vascular permeability | |
| KR102106587B1 (ko) | Dlk1-Dio3 클러스터에 위치한 miRNA 또는 이의 변이체를 유효성분으로 포함하는 근육질환 또는 악액질의 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
| KR101783444B1 (ko) | miR-33-5p 를 이용한 뇌신경세포 보호 물질 스크리닝 방법 | |
| US20100113577A1 (en) | Isolated nucleic acid molecules corresponding to micro rna 145 (mirna-145) and their use in treating colon cancer | |
| KR101465301B1 (ko) | Ｄｌｘ5 유전자에 작용하는 마이크로ＲＮＡ 억제제를 포함하는 골형성 촉진용 조성물 및 방법 | |
| JPWO2009145067A1 (ja) | 疼痛の治療剤およびその利用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant |