RU2769828C1 - Производные урацила, обладающие противовирусной активностью в отношении sars-cov-2 - Google Patents

Производные урацила, обладающие противовирусной активностью в отношении sars-cov-2 Download PDF

Info

Publication number
RU2769828C1
RU2769828C1 RU2021139390A RU2021139390A RU2769828C1 RU 2769828 C1 RU2769828 C1 RU 2769828C1 RU 2021139390 A RU2021139390 A RU 2021139390A RU 2021139390 A RU2021139390 A RU 2021139390A RU 2769828 C1 RU2769828 C1 RU 2769828C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cov
sars
uracil
compounds
compound
Prior art date
Application number
RU2021139390A
Other languages
English (en)
Inventor
Михаил Станиславович Новиков
Мария Петровна Парамонова
Елена Сергеевна Гуреева
Инна Вадимовна Должикова
Андрей Эдуардович Синявин
Дарья Владимировна Васина
Наталия Петровна Антонова
Надежда Анатольевна Кузнецова
Игорь Андреевич Иванов
Сергей Игоревич Луйксаар
Сергей Анатольевич Золотов
Надежда Леонидовна Лубенец
Елизавета Александровна Токарская
Анастасия Андреевна Захарова
Тимофей Андреевич Ремизов
Олег Васильевич Рубальский
Артем Петрович Ткачук
Владимир Алексеевич Гущин
Наиля Ахатовна Зигангирова
Борис Савельевич Народицкий
Денис Юрьевич Логунов
Александр Леонидович Гинцбург
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority to RU2021139390A priority Critical patent/RU2769828C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2769828C1 publication Critical patent/RU2769828C1/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/45—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cycloheximide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/52—Two oxygen atoms
    • C07D239/54—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/52—Two oxygen atoms
    • C07D239/54—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals
    • C07D239/545—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals with other hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/553—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals with other hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms with halogen atoms or nitro radicals directly attached to ring carbon atoms, e.g. fluorouracil

Abstract

Группа изобретений относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, а именно к новым N1,N3-дизамещенным производным урацила и их фармацевтически приемлемым солям, обладающим противовирусным действием в отношении SARS-CoV-2. Предложено соединение общей формулы I или его фармацевтически приемлемая соль, где: X - алкил или оксиалкил (С1-С12), Ar - замещенная ароматическая группа, Ar - ароматическая группа, Y - атом кислорода, R1 - карбоксил или галоген, в N3-положении урацила полиметиленовый линкер может включать от 1 до 12 метиленовых групп. Технический результат: эффективное ингибирование репликации SARS-CoV-2. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 14 ил., 12 пр.

Description

Область техники
Группа изобретений относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, а именно, к новым N1,N3-дизамещенным производным урацила, обладающим противовирусным действием в отношении SARS-CoV-2, и как таковые полезны при лечении и профилактики COVID-19. Это изобретение также относится к применению таких соединений для ингибирования репликации SARS-CoV-2 у млекопитающих, особенно людей, а также к фармацевтической композиции для ингибирования репликации SARS-CoV-2 у млекопитающих.
Уровень техники
Коронавирус SARS-CoV-2, вызвавший глобальную пандемию коронавирус-ассоциированного острого респираторного заболевания (coronavirus-associated acute respiratory disease 19, сокращенно COVID-19), представляет собой третий задокументированный случай проникновения в человеческую популяцию коронавирусов животных. Предыдущие вспышки коронавируса SARS-CoV и MERS хотя и имели угрожающе высокую смертность в 10% и 40% соответственно, но не приводили к гибели более тысячи человек за все время наблюдения. Текущая пандемия с момента проникновения вируса за пределы Китая, насчитывает около 260 млн. заболевших и более 5 млн. погибших. Отсутствие устойчивого коллективного иммунитета в очередной раз привело к лавинообразному росту заболевших и перегрузке систем здравоохранения даже в наиболее развитых странах из-за появления новой генетической линии дельта B.1.617.2.
Действенной мерой, способной разгрузить систему здравоохранения от перегрузки и снизить смертность до формирования коллективного иммунитета, остается режим изоляции. К сожалению, даже среди вакцинированных всегда имеются люди, не защищенные вакциной. В силу особенностей иммунитета на фоне быстрой изменчивости вируса, разработка специфических средств профилактики с широким спектром действия становится особенно актуальной задачей.
Клиническая картина COVID-19 показывает, что по меньшей мере в 80% случаев SARS-CoV-2 вызывает относительно легко протекающее заболевание, которое сводится к воспалению верхних и нижних дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта. Тем не менее примерно в 20% случаях развиваются клинически выраженные формы, требующие госпитализации. Описаны и тяжелые формы COVID-19. Для снижения нагрузки на здравоохранение и экономику необходимы как средства терапии, позволяющие сократить период заболевания при легком течении, так и средства, снижающие вероятность развития тяжелого течения, требующего госпитализации.
Известны соединения, обладающие противовирусной активностью и имеющие в своей структуре урацил [1-5]. Для ряда соединений показана активность в отношении аденовируса человека, цитомегаловируса, а также вируса иммунодефицита человека. Их активность в отношении SARS-CoV-2 в настоящий момент не изучена. Таким образом, в настоящее время отсутствуют доступные специфические противовирусные лекарственные средства на основе производных урацила для специфической терапии COVID-19, а доступные неспецифические методы терапии не демонстрируют удовлетворительных результатов в аспектах эффективности и токсичности. В связи с этим, разработка эффективных и малотоксичных препаратов с прямым действием на репликацию SARS-CoV-2 сохраняет свою актуальность.
Раскрытие сущности изобретения
Коронавирусное заболевание 2019 г. (COVID-19) первоначально было описано как новое инфекционное респираторное заболевание в конце 2019 г. Новый патогенный коронавирус, коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2), оказался возбудителем COVID-19. Клинические проявления COVID-19 варьируются от бессимптомной инфекции до пневмонии и острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), цитокинового шторма, коагулопатии, тромбоза и ряда других внелегочных синдромов. В некоторых случаях доброкачественное течение болезни может очень быстро ухудшиться в течение второй недели болезни, что часто требует дополнительной интенсивной терапии. Хотя аберрантные иммунные ответы могут приводить к возникновению некоторых патологий COVID-19, очевидно, что высокий уровень репликации вируса на ранней стадии заболевания связан с серьезностью течения заболевания. Таким образом, существует острая потребность в противовирусном средстве, которое не требует парентерального введения и, следовательно, может быть назначено на ранней стадии заболевания. Учитывая текущее понимание патогенеза COVID-19, такая стратегия, включающая раннюю эффективную противовирусную терапию, должна иметь высокую вероятность успеха.
Задачей предлагаемого изобретения является создание новых, высокоэффективных, селективных и малотоксичных антивирусных агентов действующих непосредственно на SARS-CoV-2 для лечения COVID-19.
Технический результат заявленного изобретения заключается в том, что созданы новые N1,N3- дизамещённые производные урацила, которые обладают противовирусной активностью по отношению к вирусу SARS-CoV-2, в частности способны эффективно ингибировать репликацию SARS-CoV-2.
Технический результат достигается за счет того, что синтезировано соединение, представляющее собой N1,N3- дизамещённое производное урацила, отвечающее общей формуле I:
Figure 00000001
или его фармацевтически приемлемую соль;
где:
X алкил или оксиалкил (С1-С12),
Ar замещенная ароматическая группа,
Ar ароматическая группа,
Y атом кислорода,
R1 карбоксил или галоген,
В N3-положении урацила полиметиленовый линкер может включать от 1 до 12 метиленовых групп.
Также, особо предпочтительные соединения формулы I включают в себя соединения, где наиболее предпочтительными являются:
4-[5-[3-[5-(4-Фторфенокси)пентил]-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2H)-ил]пентилокси] бензойной кислоты
или
4-[[5-[3-(Антрацен-9-илметил)-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2H)-ил]пентил]окси]бензойной кислоты
или
4-[4-[2,6-Диоксо-3-(4-бромнафтил-1-метил)-3,6-дигидропиримидин-1(2H)-ил]бутокси]­бензойная кислота
Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению разработанных соединений для ингибирования репликации SARS-CoV-2 у млекопитающего.
Также, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для ингибирования репликации SARS-CoV-2 у млекопитающего, включающей эффективное количество разработанного соединения или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель и/или носитель.
В рамках настоящего изобретения признак «фармацевтически приемлемые соли» относится к фармацевтически приемлемым солям, получаемым с помощью присоединения кислоты для соединений из формулы I. Кислоты, которые применяют для получения фармацевтически приемлемых солей для вышеупомянутых основных соединений по этому изобретению, являются такими, которые образуют нетоксичные соли при присоединении кислоты, то есть соли, содержащие фармакологически приемлемые анионы, такие как соли гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, нитрат, сульфат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, ацетат, лактат, цитрат, кислый цитрат, тартрат, битартрат, сукцинат, малеат, фумарат, глюконат, сахарат, бензоат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, паратолуолсульфонат и памоат [то есть 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоат)].
Изобретение также относится к солям присоединения основания к соединениям из формулы I. Химические основания, которые можно применять в качестве реагентов для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения основания к соединениям формулы I, имеющих кислую природу, являются те основания, которые образуют нетоксичные основные соли с такими соединениями. Такие нетоксичные основные соли включают в себя, но не ограничиваются ими, производные от фармакологически приемлемых катионов, таких как катионы щелочных металлов (например, калия и натрия) и катионы щелочноземельных металлов (например, кальция и магния), соли аммония или водорастворимые соли присоединения амина, такого как N-метилглюкамин (меглумин), и низшие иные соли фармацевтически приемлемых органических аминов.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показана схема синтеза N1-замещённых производных урацила (цифры на схеме представляют собой сквозную нумерацию соединений, расшифровка которых приведена в примере 1).
На фиг.2 показана схема синтеза соединений Z870, Z871, Z873 и Z874 (цифры на схеме представляют собой сквозную нумерацию соединений, расшифровка которых приведена в примере 2).
На фиг. 3 показана схема синтез соединения Z876 (цифры на схеме представляют собой сквозную нумерацию соединений, расшифровка которых приведена в примере 3).
На фиг.4 показана схема синтез соединения Z601 (цифры на схеме представляют собой сквозную нумерацию соединений, расшифровка которых приведена в примере 4).
На фиг.5 показана схема синтез соединения Z611. (цифры на схеме представляют собой сквозную нумерацию соединений, расшифровка которых приведена в примере 5).
На фиг. 6 показана схема синтез соединения Z875. (цифры на схеме представляют собой сквозную нумерацию соединений, расшифровка которых приведена в примере 6).
На фиг.7 показана схема синтез соединения Z1005. (цифры на схеме представляют собой сквозную нумерацию соединений, расшифровка которых приведена в примере 7).
На фиг. 8 показана схема синтез соединения Z1006. (цифры на схеме представляют собой сквозную нумерацию соединений, расшифровка которых приведена в примере 8).
На фиг. 9 показаны химические структуры соединений из тестируемой панели.
На фиг 10 представлена оценка жизнеспособности клеток под действием панели соединений.
На фиг. 11 представлена оценка эффективности соединений против SARS-CoV-2 по уровню ингибирования CPE.
На фиг. 12 представлена оценка эффективности соединений против SARS-CoV-2 с помощью кПЦР-ОТ по уровню снижения вирусной нагрузки.
На фиг. 13 представлена оценка эффективности соединений против SARS-CoV-2-индуцированного СРЕ.
На фиг. 14 представлена оценка эффективности соединений на цикл репликации SARS-CoV-2.
Осуществление изобретения
Осуществление изобретения подтверждается следующими примерами.
Пример 1. Общая методика синтеза N1-замещённых производных урацила [1, 3, 4] (фиг.1)]
Смесь урацила (53,53 ммоль) и хлорида аммония (0,3 г, 5,60 ммоль) в гексаметилдисилазане (15 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 10 ч в инертной среде до получения прозрачного раствора. Избыток силилирующего агента был удален под вакуумом. Остаточное прозрачное масло 2,4-бис (триметил-силилокси) пиримидина растворяли в 100 мл безводного 1,2-дихлорэтана и добавляли соотвевующий бромида (53,53 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником 30 ч, охлаждали до комнатной температуры и обрабатывали 15 мл iPrOH. Выпавший осадок отфильтровывали и дополнительно очищали колоночной хроматографией в смеси EtOH / 1,2-дихлорметан.
Пример 2. Общая методика синтеза кислот Z870, Z871, Z873 и Z874 (фиг.2).
Смесь 1.416 ммоль 1-замещенного урацила (4) и 0.29 г (2.098 ммоль) K2CO3 в растворе 10 мл ДМФА перемешивали при 80°C в течение 1 ч, добавляли 1.40 ммоль метиловый эфир 4-(4-бромбутокси)бензойной кислоты (5) или 4-(5-бромпентилокси)бензойной кислоты (6) и перемешивали при той же температуре в течение 24 ч. Затем реакционную массу упарили в вакууме, остаток экстрагировали 1,2-дихлорэтаном (4 × 25 мл) и экстракт упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией с последующим упариванием элюента при пониженном давлении. Остаток растворили в смеси этанол (50 мл) и вода (30 мл), добавили 0.3 г (7.500 ммоль) NaOH и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение двух суток. Этанол упарили при пониженном давлении, остаток разбавили водой (200 мл) и подкислили соляной кислотой до значения рН 2. Выпавший осадок отфильтровали, сушили на воздухе и продукт кристаллизовали из смеси этилацетат–гексан (2:1).
Пример 3. Синтез соединения Z876 (фиг.3).
Смесь 0.5 г (1.643 ммоль) 1-(антрацен-9-илметил)урацила (7) [5] и 0.29 г (2.098 ммоль) K2CO3 в растворе 10 мл ДМФА перемешивали при 80°C в течение 1 ч, добавляли 0.48 г (1.594 ммоль) метилового эфира 4-(5-бромпентилокси)бензойной кислоты (6) и перемешивали при той же температуре в течение 24 ч. Затем реакционную массу упарили в вакууме, остаток экстрагировали 1,2-дихлорэтаном (4 × 25 мл) и экстракт упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией с последующим упариванием элюента при пониженном давлении. Остаток растворили в смеси этанол (50 мл) и вода (20 мл), добавили 0.3 г (7.500 ммоль) NaOH и полученную смесь перемешивали при 60 °C в течение двух суток. Этанол упарили при пониженном давлении, остаток разбавили водой (200 мл) и подкислили соляной кислотой до значения рН 2. Выпавший осадок отфильтровали, сушили на воздухе и продукт кристаллизовали из смеси этилацетат–гексан (3:1).
Пример 4. Синтез соединения Z601 (фиг.4).
Смесь 0.4 г (1.586 ммоль) 1-(нафтил-1-метил)урацила (1) [1] и 0.35 г (2.532 ммоль) K2CO3 в растворе 10 мл ДМФА перемешивали при 80°C в течение 1 ч, добавляли 0.44 г (1.532 ммоль) метилового эфира 4-(4-бромбутокси)бензойной кислоты (2) и перемешивали при той же температуре в течение 24 ч. Затем реакционную массу упарили в вакууме, остаток обработали 100 мл воды, экстрагировали 1,2-дихлорэтаном (4 × 25 мл) и экстракт упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией с последующим упариванием элюента при пониженном давлении. Остаток растворили в смеси этанол (50 мл) и вода (30 мл), добавили 0.35 г (8.750 ммоль) NaOH и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение двух суток. Этанол упарили при пониженном давлении, остаток разбавили водой (200 мл) и подкислили соляной кислотой до значения рН 2. Выпавший осадок отфильтровали, сушили на воздухе и продукт кристаллизовали из смеси этилацетат–гексан (2 : 1).
Пример 5. Синтез соединения Z611 (фиг.5)
Смесь 0.5 г (1.643 ммоль) 1-(антрацен-9-илметил)урацила (3) [2] и 0.29 г (2.098 ммоль) K2CO3 в растворе 10 мл ДМФА перемешивали при 80°C в течение 1 ч, добавляли 0.56 г (1.666 ммоль) метилового эфира 1-бром-(6-бромгексилокси)бензола (4) и перемешивали при той же температуре в течение 24 ч. Затем реакционную массу упарили в вакууме, остаток экстрагировали 1,2-дихлорэтаном (4 × 25 мл) и экстракт упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией с последующим упариванием элюента при пониженном давлении. Остаток кристаллизовали из смеси этилацетат–гексан (3 : 1).
Пример 6. Синтез соединения Z875 (фиг.6)
Смесь 0.5 г (1.416 ммоль) 1-[5-(4-бромфенокси)пентил]урацила (5) [3] и 0.3 г (2.171 ммоль) K2CO3 в растворе 10 мл ДМФА перемешивали при 80°C в течение 1 ч, охладили до комнатной температуры, добавили 0.32 г (1.397 ммоль) метилового эфира 4-(4-бромбутокси)бензойной кислоты (6) и перемешивали при той же температуре в течение 24 ч. Затем реакционную массу упарили в вакууме, остаток обработали 100 мл воды, экстрагировали 1,2-дихлорэтаном (4 × 25 мл) и экстракт упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией с последующим упариванием элюента при пониженном давлении. Остаток растворили в смеси этанол (50 мл) и вода (30 мл), добавили 0.3 г (7.500 ммоль) NaOH и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение двух суток. Этанол упарили при пониженном давлении, остаток разбавили водой (200 мл) и подкислили соляной кислотой до значения рН 2. Выпавший осадок отфильтровали, сушили на воздухе и продукт кристаллизовали из смеси этилацетат–гексан (3 : 1).
Пример 7. Синтез соединения Z1005 (фиг.7)
Смесь 0.4 г (1.586 ммоль) 1-(нафтил-2-метил)урацила (7) [1] и 0.35 г (2.532 ммоль) K2CO3 в растворе 10 мл ДМФА перемешивали при 80°C в течение 1 ч, добавляли 0.44 г (1.532 ммоль) метилового эфира 4-(4-бромбутокси)бензойной кислоты (2) и перемешивали при той же температуре в течение 24 ч. Затем реакционную массу упарили в вакууме, остаток обработали 100 мл воды, экстрагировали 1,2-дихлорэтаном (4 × 25 мл) и экстракт упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией с последующим упариванием элюента при пониженном давлении. Остаток растворили в смеси этанол (50 мл) и вода (30 мл), добавили 0.35 г (8.750 ммоль) NaOH и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение двух суток. Этанол упарили при пониженном давлении, остаток разбавили водой (200 мл) и подкислили соляной кислотой до значения рН 2. Выпавший осадок отфильтровали, сушили на воздухе и продукт кристаллизовали из смеси этилацетат–гексан (2:1).
Пример 8. Синтез соединения Z1006 (фиг.8)
Смесь 0.4 г (1.502 ммоль) 1-(4-бромнафтил-1-метил)урацила (8) [1] и 0.3 г (2.171 ммоль) K2CO3 в растворе 10 мл ДМФА перемешивали при 80°C в течение 1 ч, добавляли 0.43 г (1.497 ммоль) метилового эфира 4-(4-бромбутокси)бензойной кислоты (2) и перемешивали при той же температуре в течение 24 ч. Затем реакционную массу упарили в вакууме, остаток обработали 100 мл воды, экстрагировали 1,2-дихлорэтаном (4 × 25 мл) и экстракт упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией с последующим упариванием элюента при пониженном давлении. Остаток растворили в смеси этанол (50 мл) и вода (30 мл), добавили 0.3 г (7.500 ммоль) NaOH и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение двух суток. Этанол упарили при пониженном давлении, остаток разбавили водой (200 мл) и подкислили соляной кислотой до значения рН 2. Выпавший осадок отфильтровали, сушили на воздухе и продукт кристаллизовали из смеси этилацетат–гексан (2 : 1).
Пример 9. Методы анализа синтезированных соединений
1Н ЯМР-спектры соединений регистрировали на спектрометре Bruker Avance 400 (400 МГц) в DMSO-d6 с использованием тетраметилсилана в качестве внутреннего стандарта. В описании спектров использованы следующие стандартные сокращения: м.д., миллионные доли; уш., уширенный; с, синглет; д, дублет; дд, дублет дублетов; ддд, дублет дублет дублетов; т, триплет; к, квартет; м, мультиплет). Температуры плавления веществ определяли в стеклянных капиллярах на приборе Mel-Temp 3.0 (Laboratory Devices Inc., US). Тонкослойную хроматографию выполняли на пластинах Merck TLC Silica gel 60 F254 с проявлением в ультрафиолетовом свете с использованием УФ-лампы VL-6.LC (Франция) при длине волны 254 нм.
4-[5-[3-[5-(4-Фторфенокси)пентил]-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2 H )-ил]пентилокси]бензойная кислота (Z870)
Выход 88%, Т.пл. 133-135 °C, R f 0.54 (i-PrOH-этилацетат-NH4OH, 9:6:5); Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), d, м.д.: 1.38-1.46 (4H, м, CH2 × 2), 1.60-1.75 (8H, м, CH2 × 4), 3.62-4.08 (8H, м, CH2 × 4), 5.60 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-5), 6.87 (2H, д, J = 9 Гц, H-3’, H-5’), 6.91 (2Н, д, J = 8.9 Гц, H-3”, H-5”), 6.99 (2Н, д, J = 7.9 Гц, H-2”, H-6”), 7.40 (2H, д, J = 8.9 Гц, H-2’, H-6’), 7.59 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-6).
4-[5-[3-[5-(2-Бромфенокси)пентил]-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2 H )-ил]пентилокси]бензойная кислота (Z871).
Выход 84%, Т.пл. 91-92 °C, R f 0.55 (i-PrOH-этилацетат-NH4OH, 9:6:5); Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), d, м.д.: 1.36-1.45 (4H, м, CH2 × 2), 1.61-1.77 (8H, м, CH2 × 4), 3.60-4.07 (8H, м, CH2 × 4), 5.56 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-5), 6.86 (1H, т, J = 6.8 Гц, Н-4’), 6.74 (1H, д, J = 8.8 Гц, H-3”, H-5”), 7.07 (1H, д, J = 8.2 Гц, H-6’), 7.01 (2H, д, J = 8.8 Гц, H-2”, H-6”), 7.31 (1H, т, J = 7.0 Гц, H-5’), 7.54 (1H, д, J = 7.9 и 1.4 Гц, H-3’), 7.65 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-6).
4-[4-[3-[3-(4-Бромфенокси)пропил]-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2 H )-ил]бутокси]бензойная кислота (Z873).
Выход 79%, Т.пл. 122-124 °C, R f 0.51 (i-PrOH-этилацетат-NH4OH, 9:6:5); Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), d, м.д.: 1H NMR (DMSO-d 6), d, м.д.: 1.58 (2H, кв, J = 7.3 Гц, CH2), 1.66 (2H, кв, J = 7.5 Гц, CH2), 2.01 (2H, кв, J = 6.2 Гц, CH2), 3.69 (2H, т, J = 7.1 Гц, N(1)CH2), 3.89 (2H, т, J = 6.4 Гц, OCH2), 3.99 (2H, т, J = 6.7 Гц, N(3)CH2), 4.09 (2H, т, J = 5.9 Гц, OCH2), 5.53 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-5), 6.72 (1H, д, J = 8.8 Гц, H-3”, H-5”), 6.87 (2H, д, J = 9.0 Гц, H-3’, H-5’), 7.04 (2H, д, J = 8.8 Гц, H-2”, H-6”), 7.43 (2H, д, J = 8.9 Гц, H-2’, H-6’), 7.62 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-6).
4-[5-[3-[5-(3,5-Диметилфенокси)пентил]-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2 H )-ил]пентилокси]бензойная кислота (Z874).
Выход 81%, Т.пл. 103.5-105 °C, R f 0.57 (i-PrOH-этилацетат-NH4OH, 9:6:5); Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), d, м.д.: 1.36-1.44 (4H, м, CH2 × 2), 1.59-1.73 (8H, м, CH2 × 4), 2.24 (6H, с, CH3 × 2), 3.64-4.09 (8H, м, CH2 × 4), 5.55 (1H, д, J = 7.9 Гц, урацил H-5), 6.51 (2H, с, H-2’, H-6’), 6.53 (1H, с, H-4’), 6.74 (1H, д, J = 8.9 Гц, H-3”, H-5”), 6.99 (2H, д, J = 8.8 Гц, H-2”, H-6”), 7.64 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-6).
4-[[5-[3-(Антрацен-9-илметил)-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2 H )-ил]пентил]окси]бензойная кислота (Z876).
Выход 76%, Т.пл. 173-176 °C, R f 0.52 (i-PrOH-этилацетат-NH4OH, 9:6:5); Спектр 1H ЯМР (CDCl3), d, м.д.: 1.31 (2H, квин, J = 6.8 Гц, CH2), 1.59 (2H, квин, J = 7.6 Гц, CH2), 1.67 (2H, квин, J = 7.6 Гц, CH2), 3.54 (2H, т, J = 7.1 Гц, NCH2), 3.77 (2H, т, J = 6.1 Гц, OCH2), 5.68 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-5), 6.13 (2Н, с, СН2), 6.72 (1H, д, J = 8.8 Гц, H-3’, H-5’), 6.92 (1H, т, J = 7.6 Гц, урацил H-6), 7.00 (2H, д, J = 8.8 Гц, H-2’, H-6’), 7.45 (2H, т, J = 6.8 Гц, H-3”, H-6”), 7.54 (2H, т, J = 6.8 Гц, H-2”, H-7”), 7.98 (2H, д, J = 8.3 Гц, H-1”, H-8”), 8.41 (1H, c, H-10”), 8.53 (2H, д, J = 9.1 Гц, H-4”, H-5”).
4-[4-[2,6-Диоксо-3-(нафтил-1-метил)-3,6-дигидропиримидин-1(2 H )-ил]бутокси]­бензойная кислота (Z601)
Выход 76%, Т.пл. 183-184.5 °C, R f 0.52 (i-PrOH-этилацетат-NH4OH, 9:6:5); Спектр 1H ЯМР (CDCl3), d, м.д.: 1.67 (2H, квин, J = 8.2 Гц, CH2), 1.88 (2Н, квин, J = 7.9 Гц, CH2), 4.01-4.08 (4Н, м, СН2 × 2), 5.32 (2Н, с, СН2), 5.64 (1Н, д, J = 8.1 Гц, урацил H-5), 6.91 (1H, д, J = 8.9 Гц, H-3’, H-5’), 6.99 (1H, д, J = 7.9 Гц, урацил H-6), 7.36-7.48 (2Н, м, ароматические Н), 7.50-7.57 (2Н, м, ароматические Н), 7.87-7.95 (3Н, м, ароматические Н), 8.03 (2H, д, J = 8.9 Гц, H-2’, H-6’).
1-(Антрацен-9-илметил)-3-[6-(4-бромфенокси)гексил]урацил (Z611)
Выход 66%, Т.пл. 109.5-111 °C, R f 0.68 (1,2-дихлорэтан-этилацетат, 1:1); Спектр 1H ЯМР (CDCl3), d, м.д.: 1.31 (2H, квин, J = 6.8 Гц, CH2), 1.59 (2H, квин, J = 7.6 Гц, CH2), 1.67 (2H, квин, J = 7.6 Гц, CH2), 3.54 (2H, т, J = 7.1 Гц, NCH2), 3.77 (2H, т, J = 6.1 Гц, OCH2), 5.68 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-5), 6.13 (2Н, с, СН2), 6.72 (1H, д, J = 8.8 Гц, H-3’, H-5’), 6.93 (1H, т, J = 7.6 Гц, урацил H-6), 7.37 (2H, д, J = 8.8 Гц, H-2’, H-6’), 7.45 (2H, т, J = 6.8 Гц, H-3”, H-6”), 7.54 (2H, т, J = 6.8 Гц, H-2”, H-7”), 7.98 (2H, д, J = 8.3 Гц, H-1”, H-8”), 8.41 (1H, c, H-10”), 8.53 (2H, д, J = 9.1 Гц, H-4”, H-5”).
4-[[5-[3-[5-(4-бромфенокси)пентил]-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2 H )-ил]­метил]бензойная кислота (Z875)
Выход 77%, Т.пл. 186-187 °C, R f 0.52 (i-PrOH-этилацетат-NH4OH, 9:6:5); Спектр 1H ЯМР (ДМСО-D6), d, м.д.: 1.37 (2H, квин, J = 8.1 Гц, CH2), 1.33-1.74 (4H, м, СН2 × 2), 3.74 (2H, т, J = 7.0 Гц, NCH2), 3.91 (2H, т, J = 6.6 Гц, OCH2), 5.04 (2Н, с, ArСН2), 5.76 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-5), 6.76 (1H, д, J = 9.1 Гц, H-3’, H-5’), 7.34 (1H, д, J = 8.3 Гц, H-3”, H-5”), 7.41 (2H, д, J = 8.8 Гц, H-2’, H-6’), 7.76 (1H, д, J = 7.8 Гц, урацил H-6), 7.88 (2H, д, J = 8.3 Гц, H-2”, H-6”).
4-[4-[2,6-Диоксо-3-(нафтил-2-метил)-3,6-дигидропиримидин-1(2 H )-ил]бутокси]­бензойная кислота (Z1005)
Выход 72%, Т.пл. 143.5-145 °C, R f 0.52 (i-PrOH-этилацетат-NH4OH, 9:6:5); Спектр 1H ЯМР (ДМСО-D6), d, м.д.: 1,47 (2H, квин, J = 7,9 Гц, CH2); 1,70 (2H, квин, J = 7,3 Гц, CH2); 3,75 (2H, т, J = 7,3 Гц, NCH2); 3,89 (2H, т, J = 6,4 Гц, OCH2); 5,15 (2H, c, ArCH2); 5,77 (1H, д, J = 7,9 Гц, урацил H-5); 6,84 (2H, д, J = 9,0 Гц, H-3’, H-5’); 7,40 (2H, д, J = 9,1 Гц, H-2’, H-6’); 7,41-7,48 (3H, ароматические H); 7,73 (1H, c, H-1”); 7,76 (1H, д, J = 7,9 Гц, урацил H-6); 7,82-7,86 (3H, м, ароматические H).
4-[4-[2,6-Диоксо-3-(4-бромнафтил-1-метил)-3,6-дигидропиримидин-1(2 H )-ил]бутокси]­бензойная кислота (Z1006)
Выход 69%, Т.пл. 195.5-197.5 °C, R f 0.52 (i-PrOH-этилацетат-NH4OH, 9:6:5); Спектр 1H ЯМР (CDCl3), d, м.д.: 1.73 (2H, квин, J = 8.0 Гц, CH2), 1.88 (2Н, квин, J = 7.9 Гц, CH2), 3.92 (2H, т, J = 6.4 Гц, NCH2); 4.03 (2H, т, J = 7.5 Гц, OCH2), 5.34 (2Н, с, ArСН2), 5.63 (1Н, д, J = 8.0 Гц, урацил H-5), 6.75 (1H, д, J = 9.1 Гц, H-3’, H-5’), 6.97 (1Н, д, J = 7.9 Гц, ароматические Н), 7.19 (1Н, д, J = 7.6 Гц, ароматические Н), 7.34 (2H, д, J = 9.0 Гц, H-2’, H-6’), 7.57-7.65 (2Н, м, ароматические Н), 7.76 (1H, д, J = 7.7 Гц, урацил H-6), 7.94 (1Н, дд, J = 7.7 и 1.4 Гц, ароматические Н), 8.32 (1Н, дд, J = 7.8 и 1.4 Гц, ароматические Н).
Пример 10. Определение цитотоксичности in vitro.
Клетки Vero E6 (ATCC CRL-1586) культивировали при 370С и 5% CO2, в полной ростовой среде DMEM (Gibco, США), дополненной 10% эмбриональной бычьей сывороткой (FBS; HyClone, США), 1× GlutaMAX и 1× pen-strep solution (Gibco, США). Оценка токсичности соединений проводили методом скрининга библиотеки соединений (фиг. 9). Для этого клетки Vero E6 высевали в 96-луночные планшеты (2×104 клеток/лунку) в полной ростовой среде DMEM за сутки до эксперимента. Затем, раствор, содержащий не более 100 мкМ каждого соединения, добавляли к монослою клеток. Планшеты инкубировали в течение 72 ч при 370С и 5% CO2. После этого, в лунки добавляли раствор МТТ (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromide, 0.5 мг/мл; ПанЭко, Россия), с последующей инкубацией в течение 4 ч. МТТ метод использовали для измерения клеточной метаболической активности в качестве индикатора жизнеспособности, пролиферации и цитотоксичности клеток. Далее, из лунок отбирали супернатант и растворяли выпавшие кристаллы формазана в ДМСО (диметилсульфоксид; ПанЭко, Россия). Оптическую плотность измеряли при 590 нм с использованием планшетного ридера SPECTROstar Nano microplate reader (BMG LABTECH).
При исследовании жизнеспособности клеток Vero E6 под действием изучаемых аналогов урацила было выяснено, что практически все соединения обладают низкой цитотоксичностью. 50% цитотоксическая концентрация (СС50) находилась выше 100 мкМ (фиг. 10). Незначительное снижение (около 20%) жизнеспособности клеток наблюдали под действием 100 мкМ соединения Z875. Средний цитотоксический эффект проявили соединения Z872 и Z1007, для которых значение СС50 составило ≥ 25 мкМ.
Пример 11. Исследование антивирусного эффекта против SARS-CoV-2.
В работе использовали следующие штаммы SARS-CoV-2 – PMVL-30 (EPI_ISL_872643, B.1.1.141) и “дельта” вариант (B.1.617.2). Вирусы были изолированы из назо/орофарингеального смыва и прошли три последовательных пассажа на клетках Vero E6. Первоначально, проводили скрининговое исследование панели соединений на наличие антивирусного эффекта против «дикого штамма» SARS-CoV-2 PMVL-30. Для этого клетки Vero E6 высевали в 96-луночные планшеты (2×104 клеток/лунку) в полной ростовой среде DMEM за сутки до эксперимента. К клеткам добавляли различные разведения соединений (100, 25, 6.25 мкМ) и инкубировали в течение 1 ч при 370С и 5% CO2. После этого, производили заражение клеток SARS-CoV-2 при 100TCID50 (50% тканевая инфекционная доза). Планшеты инкубировали в течение 72 ч при 370С и 5% CO2. Вирус-индуцированный цитопатический эффект (СРЕ) оценивали с помощью МТТ метода, как описано ранее [11, 12]. После обнаружения соединений, которые активно ингибируют SARS-CoV-2, проводили дополнительные исследования их противовирусной активности в отношении “дельта” варианта SARS-CoV-2 как описано выше. Антивирусный эффект для лидерных соединений был также исследован с помощью ПЦР по уровню снижения вирусной нагрузки SARS-CoV-2.
Для 11 соединений была проведена оценка противовирусного действия против SARS-CoV-2 с использованием клеток Vero E6. Скрининг панели ингибиторов на обнаружение их антивирусной активности проводили с использованием 100 мкМ концентрации соединений, против SARS-CoV-2-индуцированного цитопатического эффекта (СРЕ). Обнаружено, что практически все соединения способны на 90-100% блокировать СРЕ (фиг. 11). Однако, наличие метила в N5 положении урацила в соединении Z872 приводило к полной потери антивирусной активности. Ввиду того, что соединение Z1007 при 100 мкМ обладает наиболее высокой токсичностью по отношению к клеткам Vero E6, его противовирусная активность была оценена при 25 мкМ, для которой ингибирование СРЕ составило в среднем 23,3%.
Дополнительно, противовирусный эффект был подтвержден с помощью ПЦР. Наиболее активные соединения из представленных панелей, приводили к значительному снижению вирусной нагрузки SARS-CoV-2. Соединение Z876 снижало нагрузку примерно на три порядка, в то время как для остальных наблюдалось падение нагрузки в среднем на два порядка в супернатанте SARS-CoV-2 инфицированных клеток Vero E6 (фиг. 12).
Противовирусная активность наиболее активных соединений из исследуемой панели была протестирована в анализе цитопатогенного эффекта (CPE) в культуре клеток Vero E6 против “дельта” варианта SARS-CoV-2 линии B.1.617.2, для определения их полуингибирующих концентраций (IC50). В результате было обнаружено, что соединения активно ингибируют СРЕ SARS-CoV-2, со значениями IC50 от 31.57 до 4.53 мкМ (фиг. 13). Наиболее высокая ингибирующая активность наблюдалась для соединений Z611, Z870 и Z876, для которых значения IC50 не превышали 10 мкМ. Соединения Z611 и Z876 имеют родственную структуру с наличием антрацена в линкерной части в положении N1 урацила. Основным отличием соединения Z870 от схожих по структуре соединений из данной панели, являлось наличие фторфеноксипентильного заместителя, в то время как другие соединения содержали бромфеноксипентильный заместитель.
Пример 12. Исследование влияния соединений на стадии цикла репликации SARS-CoV-2
Был проведен анализ по определению на какой стадии жизненного цикла SARS-CoV-2 соединения проявляют эффект [13]. Клетки Vero E6 высевали в 96-луночные планшеты (3×104 клеток/лунку). Клетки инфицировали SARS-CoV-2 PMVL-30 при MOI 0.1 (множественность инфекции), а затем инкубировали еще 1 ч. Далее, вирусный инокулят удаляли, и клетки дважды промывали ростовой средой DMEM. Через 1 ч после инокуляции, к инфицированным клеткам добавляли соединения из исследуемой библиотеки в концентрации 25 мкМ в указанные моменты времени с последующей инкубацией при 370С и 5% СО2 в течение 16 ч после инокуляции (один жизненный цикл вируса). Супернатант из лунок отбирали и анализировали с помощью ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Для определения вирусной нагрузки SARS-CoV-2, использовали набор «SARS-CoV-2 FRT» (НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, Россия) с последующей постановкой и анализом на QuantStudio 5 (Applied Biosystems) или CFX96 Touch (Bio-Rad).Относительное количество РНК SARS-CoV-2 определяли с помощью калибровочной прямой, для построения которой при каждой постановке анализа тестировали калибровочные стандарты. Калибровочные стандарты представляли собой рекомбинантные конструкции амплифицируемого фрагмента генома SARS-CoV-2 с известной концентрацией.
Чтобы выяснить противовирусный механизм действия соединений из исследуемой панели, были проведены эксперименты позволяющие определить на какой стадии (стадиях) репликации вируса SARS-CoV-2 они проявляют свою противовирусную активность. Для этого к культуре клеток Vero E6 добавляли 25 мкМ соединений в разные моменты времени репликации вируса, включая прикрепление и проникновение вируса (entry), пост-проникновение и в течение всей вирусной инфекции. Для этого исследования SARS-CoV-2 “дикий тип” был выбран в качестве примера пандемического коронавируса человека. В этом анализе клетки Vero E6 были инфицированы SARS-CoV-2 при MOI равном 0.1, с последующим измерением количества копий вируса через 16 ч после инфекции в супернатанте клеточной культуры методом количественной ПЦР. Результаты ПЦР показали, что исследуемые соединения не подавляют репликацию вируса на стадии прикрепления и проникновения вируса (фиг. 14). Однако, данный анализ показал, что соединения действуют на стадии после проникновения вируса и в течение всей вирусной инфекции, снижая вирусную нагрузку на несколько порядков. Кроме этого, полученные данные свидетельствуют о том, что данные соединения могут быть эффективными в качестве профилактических и лечебных средств при COVID-19.
В результате проведенных исследований открыт новый класс ненуклеозидных ингибиторов репродукции SARS-CoV-2, обладающих высоким противовирусным эффектом in vitro, включая антивирусную активность против “дельта” варианта SARS-CoV-2. Приведенные примеры подтверждают выполнение поставленной задачи, а именно, создание новых, высокоэффективных, селективных и малотоксичных антивирусных агентов для лечения новой коронавирусной инфекции COVID-19.
Список использованных источников информации.
1. Novikov M.S., Babkov D.A., Paramonova M.P., Khandazhinskaya A.L., Ozerov A.A., Chizhov A.O., Andrei G., Snoeck R., Balzarini J., Seley-Radtke K.L. Synthesis and anti-HCMV activity of 1-[ω-(phenoxy)alkyl]uracil derivatives and analogues thereof. Bioorg. Med. Chem., 2013, 21 (14), 4151–4157.
2. Novikov M.S., Babkov D.A., Paramonova M.P., Chizhov A.O., Khandazhinskaya A.L., Seley-Radtke K.L. A highly facile approach to the synthesis of novel 2-(3-benzyl-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahydropyrimidin-1-yl)-N-phenylacetamides. Tetrahedron Lett., 2013, 54 (6), 576-578.
3. Paramonova M.P., Babkov D.A., Valuev-Elliston V.T., Ivanov A.V., Kochetkov S.N., Pannecouque C., Balzarini J., Novikov M.S. Synthesis and Anti-HIV-1 Activity of 1-[ω-(Phenoxy)alkyl- and -alkenyl]uracil Derivatives. Pharmaceutical Chemistry J. 2013, 47 (9), 459-463.
4. Paramonova M.P., Ozerov A.A., Chizhov A.O., Snoeck R., Andrei G., Khandazhinskaya A.L., Novikov M.S. Synthesis of uracil-coumarin conjugates as potential inhibitors of virus replication. Mendeleev Commun., 2019, 29 (6), 638-639.
5. Malik V., Singh P., Kumar S. Regioselective synthesis of 1-allyl- and 1-arylmethyl uracil and thymine derivatives. Tetrahedron, 2005, 61 (16), 4009-4014.
6. Driouich, JS., Cochin, M., Lingas, G. et al. Favipiravir antiviral efficacy against SARS-CoV-2 in a hamster model. Nat Commun 12, 1735 (2021). https://doi.org/10.1038/s41467-021-21992-w.
7. Suzanne J. F. Kaptein, Sofie Jacobs, at al., Favipiravir at high doses has potent antiviral activity in SARS-CoV-2−infected hamsters, whereas hydroxychloroquine lacks activity. Proceedings of the National Academy of Sciences Oct 2020, 117 (43) 26955-26965; DOI: 10.1073/pnas.2014441117.
8. Williamson, B.N., Feldmann, F., Schwarz, B. et al. Clinical benefit of remdesivir in rhesus macaques infected with SARS-CoV-2. Nature 585, 273–276 (2020). https://doi.org/10.1038/s41586-020-2423-5.
9. Cox, R.M., Wolf, J.D. & Plemper, R.K. Therapeutically administered ribonucleoside analogue MK-4482/EIDD-2801 blocks SARS-CoV-2 transmission in ferrets. Nat Microbiol 6, 11–18 (2021). https://doi.org/10.1038/s41564-020-00835-2.
10. Goldberg E, Ben Zvi H, Sheena L, Sofer S, Krause I, Sklan EH, Shlomai A. A real-life setting evaluation of the effect of remdesivir on viral load in COVID-19 patients admitted to a large tertiary centre in Israel. Clin Microbiol Infect. 2021 Jun;27(6):917.e1-917.e4. doi: 10.1016/j.cmi.2021.02.029. Epub 2021 Mar 9. PMID: 33705849; PMCID: PMC7939997.
11. Altaf, I., Nadeem, M.F., Hussain, N. et al. An in vitro antiviral activity of iodine complexes against SARS-CoV-2. Arch Microbiol 203, 4743–4749 (2021). https://doi.org/10.1007/S00203-021-02430-3.
12. De Meyer S, Bojkova D, Cinatl J, Van Damme E, Buyck C, Van Loock M, Woodfall B, Ciesek S. Lack of antiviral activity of darunavir against SARS-CoV-2. Int J Infect Dis. 2020 Aug;97:7-10. doi: 10.1016/j.ijid.2020.05.085. Epub 2020 May 29. PMID: 32479865; PMCID: PMC7258847. https://doi.org/10.1016/j.ijid.2020.05.085.
13. Yuan, S., Yin, X., Meng, X. et al. Clofazimine broadly inhibits coronaviruses including SARS-CoV-2. Nature 593, 418–423 (2021). https://doi.org/10.1038/s41586-021-03431-4 https://doi.org/10.1038/s41586-021-03431-4.

Claims (15)

1. Соединение, представляющее собой N1,N3-дизамещённое производное урацила, отвечающее общей формуле I:
Figure 00000002
или его фармацевтически приемлемая соль, где:
X - алкил или оксиалкил (С1-С12),
Ar - замещенная ароматическая группа,
Ar - ароматическая группа,
Y - атом кислорода,
R1 - карбоксил или галоген,
в N3-положении урацила полиметиленовый линкер может включать от 1 до 12 метиленовых групп.
2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение выбрано из группы, включающей:
4-[5-[3-[5-(4-фторфенокси)пентил]-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2H)-ил]пентилокси] бензойную кислоту,
4-[[5-[3-(антрацен-9-илметил)-2,6-диоксо-3,6-дигидропиримидин-1(2H)-ил]пентил]окси]бензойную кислоту,
4-[4-[2,6-диоксо-3-(4-бромнафтил-1-метил)-3,6-дигидропиримидин-1(2H)-ил]бутокси]­бензойную кислоту.
3. Применение соединения по пп.1, 2 для ингибирования репликации SARS-CoV-2 у млекопитающего.
4. Фармацевтическая композиция для ингибирования репликации SARS-CoV-2 у млекопитающего, включающая эффективное количество соединения по пп.1, 2 или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель и/или носитель.
RU2021139390A 2021-12-28 2021-12-28 Производные урацила, обладающие противовирусной активностью в отношении sars-cov-2 RU2769828C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021139390A RU2769828C1 (ru) 2021-12-28 2021-12-28 Производные урацила, обладающие противовирусной активностью в отношении sars-cov-2

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021139390A RU2769828C1 (ru) 2021-12-28 2021-12-28 Производные урацила, обладающие противовирусной активностью в отношении sars-cov-2

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2769828C1 true RU2769828C1 (ru) 2022-04-06

Family

ID=81075997

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021139390A RU2769828C1 (ru) 2021-12-28 2021-12-28 Производные урацила, обладающие противовирусной активностью в отношении sars-cov-2

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2769828C1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0033503A2 (de) * 1980-01-31 1981-08-12 Henkel Kommanditgesellschaft auf Aktien Arzneimittel mit cytostatischer Wirkung sowie Verwendung von mehrfach mit Glycidylgruppen substituierten N-heterocyclischen Ringverbindungen in pharmazeutischen Zubereitungen
WO2008133128A1 (ja) * 2007-04-18 2008-11-06 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. 縮合複素環誘導体、それを含有する医薬組成物及びその医薬用途
RU2761950C1 (ru) * 2020-12-08 2021-12-14 Федеральное государственное учреждение «Федеральный исследовательский центр «Фундаментальные основы биотехнологии» Российской академии наук» Производные ди(диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан)-5-нитропиримидина и их применение для лечения коронавирусных инфекций, в частности вызванных вирусом SARS-Cov-2

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0033503A2 (de) * 1980-01-31 1981-08-12 Henkel Kommanditgesellschaft auf Aktien Arzneimittel mit cytostatischer Wirkung sowie Verwendung von mehrfach mit Glycidylgruppen substituierten N-heterocyclischen Ringverbindungen in pharmazeutischen Zubereitungen
WO2008133128A1 (ja) * 2007-04-18 2008-11-06 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. 縮合複素環誘導体、それを含有する医薬組成物及びその医薬用途
RU2761950C1 (ru) * 2020-12-08 2021-12-14 Федеральное государственное учреждение «Федеральный исследовательский центр «Фундаментальные основы биотехнологии» Российской академии наук» Производные ди(диазониадиспиро[5.2.5.2]гексадекан)-5-нитропиримидина и их применение для лечения коронавирусных инфекций, в частности вызванных вирусом SARS-Cov-2

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BABKOV D.A., et al. Toward the discovery of dual HCMV-VZV inhibitors: Synthesis, structure activity relationship analysis, and cytotoxicity studies of long chained 2-uracil-3-yl-N-(4-phenoxyphenyl)acetamides, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2015, 23, 7035-7044. *
PARAMONOVA M.P., et al. Synthesis of uracil-coumarin conjugates as potential inhibitors of virus replication. Mendeleev Commun., 2019, 29 (6), 638-639. *
PARAMONOVA M.P., et al. Synthesis of uracil-coumarin conjugates as potential inhibitors of virus replication. Mendeleev Commun., 2019, 29 (6), 638-639. BABKOV D.A., et al. Toward the discovery of dual HCMV-VZV inhibitors: Synthesis, structure activity relationship analysis, and cytotoxicity studies of long chained 2-uracil-3-yl-N-(4-phenoxyphenyl)acetamides, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2015, 23, 7035-7044. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2599013C2 (ru) Способы и композиции для ингибирования полимеразы
US20110224242A1 (en) Styrlyquinolines, their process of preparation and their therapeutic uses
US8710098B2 (en) Group of amino substituted benzoyl derivatives and their preparation and their use
JP5809702B2 (ja) 新規化合物及びその製造方法
JP2015524457A (ja) ジヒドロキシピリミジン炭酸誘導体及びウイルス性疾患の治療、改善又は予防における使用
US20140171444A1 (en) Inhibitors of Mycobacterium Tuberculosis Malate Synthase, Methods of Making and Uses Thereof
CN108558756B (zh) 2-芳基-2,3-二氢-4(1h)-喹啉酮缩氨基脲类化合物及其应用
WO2018174442A1 (ko) 코로나 바이러스 감염으로 인한 질환 치료용 화합물
KR20110137941A (ko) 신규한 티오우레아 또는 우레아 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 ａｉｄｓ 예방 또는 치료용 약학 조성물
WO2022107745A1 (ja) Ｃｏｖｉｄ－１９の治療剤又は予防剤
WO2023286844A1 (ja) 抗ウイルス活性等の生理活性を有する化合物
US20160168144A1 (en) Compositions and methods for modulating the activity of epstein-barr nuclear antigen 1
JP5833143B2 (ja) フェニル−イソオキサゾール誘導体およびその製造方法
JP2006328065A (ja) 抗原虫薬としての新規のビカルコフェン、及びそのプロドラッグ
CN104302624A (zh) 抗疟疾剂
Xu et al. Discovery of novel substituted N-(4-Amino-2-chlorophenyl)-5-chloro-2-hydroxybenzamide analogues as potent human adenovirus inhibitors
CA2579089A1 (en) Inhibition of viruses using rnase h inhibitors
RU2769828C1 (ru) Производные урацила, обладающие противовирусной активностью в отношении sars-cov-2
JPH02218654A (ja) 安息香酸誘導体、それらの製造方法およびそれらを含有する薬剤
EP4119165A1 (en) Novel 3,5-diaminobenzoic acid compound, and pin1 inhibitor and therapeutic agent for inflammatory diseases using same
KR101045985B1 (ko) 아릴 디케토산（ａｄｋ） 유도체를 유효성분으로 포함하는 사스 코로나 바이러스 저해용 조성물
US8779202B2 (en) Compositions and methods for the treatment of giardiasis
KR20200023034A (ko) 이속사졸 유도체 및 그의 제조방법
KR101007469B1 (ko) 사스 코로나 바이러스의 ｒｎａ 유사매듭구조에 결합하여 리보솜 틀 이동을 억제하는 호모피페라진계 화합물
JPWO2002053550A1 (ja) ベンゾフラン誘導体及びそれを含有する医薬組成物