RU2768743C2 - Композиция на основе rmp и способы ее применения - Google Patents
Композиция на основе rmp и способы ее применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2768743C2 RU2768743C2 RU2019120008A RU2019120008A RU2768743C2 RU 2768743 C2 RU2768743 C2 RU 2768743C2 RU 2019120008 A RU2019120008 A RU 2019120008A RU 2019120008 A RU2019120008 A RU 2019120008A RU 2768743 C2 RU2768743 C2 RU 2768743C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rmp
- composition
- composition according
- erythrocytes
- subject
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 81
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 59
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 claims abstract description 34
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 claims abstract description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 27
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims abstract description 13
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 claims abstract 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 40
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 39
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 15
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 10
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 8
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 claims description 7
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 5
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims description 5
- 206010073391 Platelet dysfunction Diseases 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical group OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 claims description 2
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 229940125507 complex inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 229940072645 coumadin Drugs 0.000 claims description 2
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 claims description 2
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 claims description 2
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 claims 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 claims 1
- 108010014806 prothrombinase complex Proteins 0.000 claims 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 11
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 11
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 abstract 1
- 102100033639 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 27
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 27
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 26
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 20
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 13
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 13
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 102100035716 Glycophorin-A Human genes 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 101001074244 Homo sapiens Glycophorin-A Proteins 0.000 description 7
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 208000013544 Platelet disease Diseases 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 3
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 3
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 3
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 3
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNZCBYKSOIHPEH-UHFFFAOYSA-N Apixaban Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N1C(C(=O)N(CC2)C=3C=CC(=CC=3)N3C(CCCC3)=O)=C2C(C(N)=O)=N1 QNZCBYKSOIHPEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 2
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 2
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 2
- 208000024659 Hemostatic disease Diseases 0.000 description 2
- 102000002261 High-Molecular-Weight Kininogen Human genes 0.000 description 2
- 108010000487 High-Molecular-Weight Kininogen Proteins 0.000 description 2
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 2
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000001567 anti-fibrinolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 2
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 2
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000002555 ionophore Substances 0.000 description 2
- 230000000236 ionophoric effect Effects 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000013169 thromboelastometry Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- NTBLZMAMTZXLBP-UHFFFAOYSA-M 2-acetylsulfanylethyl(trimethyl)azanium;iodide Chemical compound [I-].CC(=O)SCC[N+](C)(C)C NTBLZMAMTZXLBP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000002004 Afibrinogenemia Diseases 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000018240 Bone Marrow Failure disease Diseases 0.000 description 1
- 206010065553 Bone marrow failure Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 208000033131 Congenital factor II deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 206010016075 Factor I deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 208000013607 Glanzmann thrombasthenia Diseases 0.000 description 1
- 108091005250 Glycophorins Proteins 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 206010051125 Hypofibrinogenaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000007646 Hypoprothrombinemias Diseases 0.000 description 1
- 206010021113 Hypothermia Diseases 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000009714 Severe Dengue Diseases 0.000 description 1
- 102100021685 Stomatin Human genes 0.000 description 1
- 108700037714 Stomatin Proteins 0.000 description 1
- 208000007587 Transfusion-Related Acute Lung Injury Diseases 0.000 description 1
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 description 1
- 201000000839 Vitamin K Deficiency Bleeding Diseases 0.000 description 1
- 206010047634 Vitamin K deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000027276 Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 102000003801 alpha-2-Antiplasmin Human genes 0.000 description 1
- 108090000183 alpha-2-Antiplasmin Proteins 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 229940075522 antidotes Drugs 0.000 description 1
- 239000000504 antifibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 229940082620 antifibrinolytics Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003698 antivitamin K Substances 0.000 description 1
- 229960003886 apixaban Drugs 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 1
- 208000014759 blood platelet disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003710 calcium ionophore Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004323 caveolae Anatomy 0.000 description 1
- 210000002583 cell-derived microparticle Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- FDEODCTUSIWGLK-RSAXXLAASA-N clopidogrel sulfate Chemical compound [H+].OS([O-])(=O)=O.C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl FDEODCTUSIWGLK-RSAXXLAASA-N 0.000 description 1
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 description 1
- 229960003850 dabigatran Drugs 0.000 description 1
- YBSJFWOBGCMAKL-UHFFFAOYSA-N dabigatran Chemical compound N=1C2=CC(C(=O)N(CCC(O)=O)C=3N=CC=CC=3)=CC=C2N(C)C=1CNC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 YBSJFWOBGCMAKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004969 dalteparin Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 201000002950 dengue hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940047562 eliquis Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960000610 enoxaparin Drugs 0.000 description 1
- 210000003617 erythrocyte membrane Anatomy 0.000 description 1
- CJAONIOAQZUHPN-KKLWWLSJSA-N ethyl 12-[[2-[(2r,3r)-3-[2-[(12-ethoxy-12-oxododecyl)-methylamino]-2-oxoethoxy]butan-2-yl]oxyacetyl]-methylamino]dodecanoate Chemical compound CCOC(=O)CCCCCCCCCCCN(C)C(=O)CO[C@H](C)[C@@H](C)OCC(=O)N(C)CCCCCCCCCCCC(=O)OCC CJAONIOAQZUHPN-KKLWWLSJSA-N 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 208000027826 familial dysfibrinogenemia Diseases 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 102000010660 flotillin Human genes 0.000 description 1
- 108060000864 flotillin Proteins 0.000 description 1
- 229960001318 fondaparinux Drugs 0.000 description 1
- KANJSNBRCNMZMV-ABRZTLGGSA-N fondaparinux Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NS(O)(=O)=O)[C@@H](OC)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@H]1O[C@H]1[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O4)NS(O)(=O)=O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O2)NS(O)(=O)=O)[C@H](C(O)=O)O1 KANJSNBRCNMZMV-ABRZTLGGSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000002085 hemarthrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- -1 hormonal therapy Substances 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002631 hypothermal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 208000020658 intracerebral hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 210000002284 membrane microdomain Anatomy 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 229940124641 pain reliever Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000007112 pro inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 201000007183 prothrombin deficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229960001148 rivaroxaban Drugs 0.000 description 1
- KGFYHTZWPPHNLQ-AWEZNQCLSA-N rivaroxaban Chemical compound S1C(Cl)=CC=C1C(=O)NC[C@@H]1OC(=O)N(C=2C=CC(=CC=2)N2C(COCC2)=O)C1 KGFYHTZWPPHNLQ-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 230000009919 sequestration Effects 0.000 description 1
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 230000003558 thrombophilic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000723 toxicological property Toxicity 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000016794 vitamin K deficiency hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940019333 vitamin k antagonists Drugs 0.000 description 1
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000012137 von Willebrand disease (hereditary or acquired) Diseases 0.000 description 1
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 1
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 1
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/66—Phosphorus compounds
- A61K31/683—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
- A61K31/685—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols one of the hydroxy compounds having nitrogen atoms, e.g. phosphatidylserine, lecithin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/18—Erythrocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/19—Platelets; Megacaryocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для лечения чрезмерного кровотечения у субъекта, и способу лечения чрезмерного кровотечения у субъекта. Композиция содержит полученные из эритроцитов микрочастицы (RMP) для лечения чрезмерного кровотечения у субъекта, где полученные из эритроцитов микрочастицы демонстрируют ацетилхолинэстеразную (AchE) активность, которая составляет менее 350 пмоль/мин на 106частиц/мкл. Способ лечения чрезмерного кровотечения у субъекта. Вышеописанная композиция сохраняет высокую гемостатическую эффективность, при этом не демонстрирует заметной токсичности. 2 н. и 14 з.п. ф-лы, 2 табл., 4 ил., 1 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ
Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США № 62/428155, поданной 30 ноября 2016 г., содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей полученные из эритроцитов микрочастицы (RMP), и способам ее применения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Чрезмерное кровотечение является одним из наиболее распространенных опасных для жизни осложнений при травме и геморрагических осложнениях. Переливание крови является основой лечения чрезмерной кровопотери. Методы лечения, нацеленные на первопричины нарушений гемостаза, различаются в зависимости от этиологии. Переливание тромбоцитов или вмешательства, которые увеличивают количество тромбоцитов, используют для остановки кровотечения вследствие низкого количества тромбоцитов (тромбоцитопения). В случае нарушений коагуляции обычно вводят замену фактора крови. При гемофилии А субъекту вводят фактор VIII, тогда как гемофилия В требует лечения фактором IX.
Существующие способы лечения имеют существенные недостатки. Например, донорская кровь для переливания становится все более дефицитной и дорогой вследствие растущего спроса, ограниченного предложения и более строгих правил. По данным Американского Красного Креста, только в США ежедневно требуется примерно 36000 единиц эритроцитов. См. www.redcrossblood.org/learn-about-blood/blood-facts-and-statistics. Стоимость госпитализации вследствие побочных эффектов, связанных с переливанием крови, превышает 10 миллиардов долларов в год. Hannon & Gjerde: The contemporary economics of transfusions. In Perioperative Transfusion Medicine; Speiss R D, Spence R K, Shander A (eds.), Lippincott Williams and Wilkins, p. 13 (2006). Переливания также связаны со многими краткосрочными и долгосрочными осложнениями, включая анафилаксию, гемолитические реакции, иммуносупрессию, вызванную переливанием крови, болезнь «трансплантант против хозяина» и синдром острого посттрансфузионного повреждения легких (TRALI). Микрочастицы тромбоцитов (PMP) и лиофилизированные целые тромбоциты (LyoPLT) имеют недостатки, такие как, например, высокая стоимость, недостаток тромбоцитов, риск тромбообразования и иммунореактивность. Тромбоциты являются высокоиммуногенными благодаря HLA, ABO, Rh и тромбоцит-специфичным антигенам, перекрестная совместимость которых встречается редко, поэтому часто возникают побочные реакции. Кроме того, известно, что тромбоциты имеют тканевый фактор (TF), который является тромбогенным.
В данной области техники сохраняется потребность в агентах, которые можно вводить безопасно и немедленно после обнаружения чрезмерного кровотечения при приемлемых затратах.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем описании предложена композиция, содержащая полученные из эритроцитов микрочастицы (RMP), которые демонстрируют ацетилхолинэстеразную (AchE) активность менее 350 пмоль/мин/106 частиц (например, менее 200 пмоль/мин/106 частиц). В различных аспектах 20-50% RMP в композиции содержат фосфатидилсерин. Необязательно композиция сокращает время до образования начального сгустка, что измерено с помощью тромбоэластографии (ТЭГ) в цельной крови и плазме, например, по меньшей мере, на две минуты. Также, необязательно, средний диаметр RMP составляет примерно 0,40-0,6 мкм. Кроме того, предложен способ лечения чрезмерного кровотечения у субъекта, включающий введение субъекту композиции RMP, описанной в настоящем документе.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фигура 1 представляет собой гистограмму, демонстрирующую сравнение ацетилхолинэстеразной активности (AChE) (мкМ/мин/106 RMP; ось Y), выраженной в RMP-1, RMP-2 и RMP-3, описанных в примерах.
Фигура 2 представляет собой гистограмму, демонстрирующую сравнение сокращения времени свертывания (минуты; ось Y), опосредованное 5 мкМ (левый столбец) или 10 мкМ (правый столбец) RMP-1, RMP-2 и RMP-3, описанных в примерах.
Фигура 3 представляет собой гистограмму, демонстрирующую сравнение прочности сгустка (увеличение ТЭГ MA; ось Y), опосредованной RMP-1, RMP-2 и RMP-3, описанных в примерах.
Фигура 4 представляет собой гистограмму, демонстрирующую сравнение анти-ТАП-опосредованного фибринолиза (повышение TG относительно контроля (мм/мин); ось Y), индуцированного RMP-1, RMP-2 и RMP-3, описанных в примерах.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем документе предложены улучшенные композиции полученных из эритроцитов микрочастиц (RMP) и способы применения для уменьшения кровотечения у субъекта. RMP имеют множество преимуществ в качестве гемостатических агентов, включая (но не ограничиваясь ими) простоту и экономичность получения и минимальную иммуногенность. Эритроциты (RBC) являются наиболее распространенным типом клеток крови, обеспечивая практически неограниченный и экономичный источник для получения RMP. RMP имеют неограниченный срок годности при хранении при комнатной температуре и не требуют хранения в банках крови, что делает их особенно предпочтительными в чрезвычайных ситуациях. Кроме того, RMP, полученный из Rh-отрицательных эритроцитов типа O (универсальные RMP), можно вводить немедленно без учета перекрестной совместимости.
Настоящее описание основано, по меньшей мере частично, на неожиданном определении субпопуляции RMP с характеристиками, которые в особенности предпочтительны для терапевтического применения. Конкретная субпопуляция, демонстрирующая характеристики, описанные в настоящем документе, является новой и обеспечивает технические преимущества перед ранее описанными популяциями RMP с точки зрения, например, эффективности и пониженной токсичности. Продукты разрушения эритроцитов, включая RMP, связывали с провоспалительными реакциями, токсичностью и серьезными побочными эффектами. См., например, Danesh et al., Blood. 2014;123(5):687-696; and Zwicker et al., Br J Haematol. 2013; 160(4): 530-537. В самом деле, повышенный уровень микрочастиц связан с различными тромбофильными состояниями, такими как серповидноклеточная анемия (Camus et al., Blood. 2012; 120(25):5050) и тромботическая тромбоцитопения (TTP) (Galli et al., Thromb Haemost 1996. 75(3):427-31) и связан с токсическими явлениями после переливания крови (Donadee et al., Circulation 2011; 124:465-476). Описанные ранее композиции RMP несут риск побочных эффектов. Примечательно, что описанная в настоящем документе субпопуляция RMP эффективно уменьшает кровотечение, в то же время значительно минимизируя токсичность и побочные эффекты.
В описании согласно настоящему документу описаны различные аспекты субпопуляции RMP, представленных в композиции. Композиции, содержащие RMP, отображающие одну любую комбинацию или все признаки, описанные в настоящем документе, рассматриваются и охватываются настоящим изобретением.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к композиции, содержащей полученные из эритроцитов RMP, демонстрирующие значительно сниженную ацетилхолинэстеразную активность (AchE). Снижение AchE активности коррелирует со снижением токсичности RMP in vivo. В различных вариантах реализации RMP в композиции демонстрируют AchE активность, составляющую менее 20000 пмоль/мин/106 частиц (например, от 20000 пмоль/мин/106 частиц до 50 пмоль/мин/106 частиц, где 50 пмоль/мин/106 частиц или 25 пмоль/мин/106 частиц является необязательным нижним пределом для любого из диапазонов, описанных в настоящем документе). В предпочтительных вариантах реализации RMP демонстрируют AchE активность, составляющую менее 10000 пмоль/мин/106 частиц, менее 5000 пмоль/мин/106 частиц, менее 2500 пмоль/мин/106 частиц, менее 1000 пмоль/мин/106 частиц, менее 500 пмоль/мин/106 частиц, менее 350 пмоль/мин/106 частиц, менее 250 пмоль/мин/106 частиц, менее 200 пмоль/мин/106 частиц или менее 150 пмоль/мин/106 частиц. В иллюстративном аспекте RMP демонстрируют AchE активность, составляющую менее 350 пмоль/мин/106 частиц. Способы обнаружения AchE активности известны в данной области (см., например, Ellman et al., Biochemical Pharmacology 1961; 7(2):88-95; Xie et al., J. Biol. Chem. 2007; 282:11765-11775; Wolkmer et al., Experimental Parasitology 2014; 132(4):546-549) и описаны в примере, приведенном настоящем документе.
В качестве альтернативы или в дополнение, RMP содержат значительно сниженный уровень липидных рафтов или их компонентов по сравнению с ранее описанными популяциями RMP. Липидные рафты, также называемые «устойчивыми к детергентам мембранами» (DRM), представляют собой мембранные микродомены, богатые холестерином и сфинголипидами. По существу все природные клеточные микрочастицы (MP) состоят в основном из липидных рафтов. Примечательно, что композиция согласно настоящему изобретению в различных вариантах реализации содержит меньшее количество липидных рафтов (которое не ограничивается неповрежденными липидными рафтами, но включает компоненты липидных рафтов), чем достигнуто ранее. Просто для удобства в описании этого аспекта настоящего описания содержание липидных рафтов в RMP можно сравнивать с содержанием липидных рафтов в цельных (т.е. не фрагментированных) эритроцитах. В различных аспектах содержание липидных рафтов в RMP в композиции составляет 10% или менее (например, 5% или менее, 3% или менее, 2% или менее, 1% или менее, 0,5% или менее (например, как 0,1% или 0,05%)), чем содержание липидов в цельных эритроцитах. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, AChE может служить суррогатной мерой липидных рафтов, поскольку белок закрепляется в клеточных мембранах с помощью трансмембранного белка PRiMA (богатого пролином мембранного якоря) и внедряется в микродомены липидных рафтов. См., например, Xie at al., J. Biol. Chem. 2010; 285(15): 11537-11546, в котором также представлены материалы и способы определения содержания липидных рафтов в биологическом образце. Альтернативные маркеры липидного рафта включают, но не ограничиваются ими, стоматин, флотиллин и кавеолы. Липидные рафты также можно охарактеризовать с применением способов протеомики. См., например, Foster and Chan, Subcell Biochem. 2007;43:35-47.
В качестве альтернативы или дополнительно, 20%-50% RMP в композиции содержат фосфатидилсерин. Например, необязательно, 30%-45% RMP в композиции содержат фосфатидилсерин. В этом отношении композиция обеспечивает субпопуляцию RMP с оптимальным уровнем фосфатидилсериновой активности для стимуляции гемостаза (например, стимуляции коагуляции, уменьшения кровотечений) при минимизации тромбогенного потенциала. Фосфатидилсерин можно определять различными способами. Например, суррогатная мера фосфатидилсерина включает обнаружение связывания аннексина V с помощью проточной цитометрии. См., например, Koopman et al., «Annexin V for flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on B cells undergoing apoptosis». Blood 1994; 84(5):1415-20. В одном иллюстративном способе определяют соотношение клеток, связывающих аннексин V+, к CD235a+ (общий маркер RMP). В различных аспектах соотношение AnV+/CD235a+ составляет 0,2-0,5, например, 0,3-0,4.
Необязательно внутренняя плотность RMP в композиции составляет менее 3,5% от внутренней плотности интактных эритроцитов. В некоторых аспектах RMP имеют внутреннюю плотность примерно 0,1%-3,5% (например, примерно 0,5%-3%, примерно 0,5%-2,5% или примерно 1%-2%) от внутренней плотности цельных эритроцитов. Внутренняя плотность RMP может быть определена с применением различных способов, включая, но не ограничиваясь ими, сигнал бокового рассеяния проточной цитометрии, как описано в настоящем документе. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, полагают, что снижение внутренней плотности связано с пониженным содержанием гемоглобина. Свободный гемоглобин может быть токсичным in vivo, приводя, например, к почечной недостаточности. См., например, Gladwin et al., J Clin Invest. 2012;122(4):1205-1208. RMP композиции согласно настоящему изобретению демонстрируют пониженную токсичность.
В различных вариантах реализации композиция сокращает время до образования начального сгустка, что определяют с помощью тромбоэластографии (ТЭГ) в цельной крови и плазме. В этом отношении композиция необязательно сокращает время до образования начального сгустка, что определяют с помощью тромбоэластографии, по меньшей мере на две минуты (например, по меньшей мере на три минуты или по меньшей мере на четыре минуты). В различных вариантах реализации композиция сокращает время до образования начального сгустка, что определяют с помощью тромбоэластографии (ТЭГ) в цельной крови и плазме, на примерно от двух до примерно пяти минут. Действительно, в различных вариантах реализации композиция восстанавливает нормальное свертывание, на что указывает более короткое время образования сгустка, более быстрое образование сгустка или более стабильное развитие сгустка, что определяют с помощью ТЭГ или ротационной тромбоэластометрии (ROTEM) в цельной крови и плазме.
В качестве альтернативы или в дополнение, RMP в композиции имеют средний диаметр примерно 0,40-0,70 мкм, например, примерно 0,40-0,60 мкм или примерно 0,40-0,50 мкм. Необязательно средний диаметр RMP составляет примерно 0,45-0,50 мкм. Размер RMP можно определять с применением любого из множества рутинных лабораторных методов, включая методы, описанные в примере.
RMP представляют собой продукты разложения эритроцитов. RMP могут быть получены из свежих эритроцитов (то есть эритроцитов, выделенных из образцов крови в течение 24 часов для получения RMP) или из хранящихся эритроцитов. В связи с этим эритроциты необязательно замораживают до получения RMP. Например, в различных аспектах эритроциты замораживали на срок не более одного месяца, не более двух месяцев, не более трех месяцев, не более четырех месяцев или дольше. RMP могут быть получены с применением любого из ряда способов разрушения мембран эритроцитов, включая обработку ультразвуком, центрифугирование, нагревание и обработку ионофорами. В различных вариантах реализации RMP получают путем проталкивания эритроцитов через отверстие для получения разрушенных эритроцитов и последующей фрагментации разрушенных эритроцитов путем бомбардировки на твердой поверхности. Напряжение сдвига, создаваемое при проталкивании эритроцитов через отверстие под давлением, например, по меньшей мере, 25000 psi (например, давление примерно 35000 psi), разрезает эритроциты, и последующая стадия бомбардировки дополнительно фрагментирует эритроциты для получения популяции RMP с характеристикой(ами), описанной в настоящем документе. RMP в композиции могут быть свежими (то есть полученными из эритроцитов в течение 24 часов для введения субъекту) или находящимися на хранении. Поскольку RMP имеют увеличенный срок годности, композицию можно хранить в течение продолжительных периодов времени. RMP, полученные из крови с истекшим сроком годности, так же эффективны, как RMP из очень свежей крови; таким образом, настоящее описание обеспечивает средство для применения донорской крови, которая в противном случае может быть непригодной для клинического применения.
Также предложен способ лечения чрезмерного кровотечения у субъекта. Способ включает введение субъекту композиции, содержащей RMP, описанной в настоящем документе. Например, способ включает введение композиции, содержащей RMP, демонстрирующие ацетилхолинэстеразную активность (AchE) менее 350 пмоль/мин/106 частиц и/или имеющие средний диаметр примерно 0,40-0,6 мкм, и/или при этом 20%-50% RMP в композиции содержат фосфатидилсерин, и/или при этом композиция сокращает время до образования начального сгустка, что определяют с применением тромбоэластографии (ТЭГ) в цельной крови и плазме (например, по меньшей мере на две минуты).
В настоящем документе термин «лечить» и «лечение» относится к любому снижению кровотечения у субъекта. «Лечить» и «лечение» включает терапевтические и профилактические меры. Специалисту в данной области техники будет понятно, что любая степень защиты или ослабления чрезмерного кровотечения является благоприятной для субъекта, такого как пациент-человек. Соответственно, в одном аспекте способ осуществляют как можно быстрее после определения риска возникновения аномальной кровопотери у субъекта (например, перед операцией у субъекта, страдающего или подверженного риску возникновения коагуляции или нарушения тромбоцитов) или как можно быстрее после возникновения кровотечения.
Чрезмерное кровотечение может быть вызвано различными расстройствами или состояниями и может быть врожденным или приобретенным (например, вызванным другими терапевтическими агентами). Субъект может страдать (то есть, чрезмерное кровотечение вызвано), например, нарушением тромбоцитов или нарушением свертываемости крови. Нарушения свертываемости крови включают нарушения гемостаза, вызванные недостаточной активностью фактора свертывания крови. Факторы свертывания крови включают, но не ограничиваются ими, фактор V (FV), FVII, FVIII, FIX, FX, FXI, FXIII, FII (ответственный за гипопротромбинемию) и фактор фон Виллебранда. Субъект может страдать хроническим заболеванием печени. Расстройства тромбоцитов вызваны недостаточной функцией тромбоцитов или аномально низким числом тромбоцитов в токе крови. Низкое количество тромбоцитов может быть вызвано, например, недостаточной выработкой, секвестрацией тромбоцитов или неконтролируемым разрушением. Тромбоцитопения (дефицит тромбоцитов) может присутствовать по различным причинам, включая химиотерапию и другую лекарственную терапию, лучевую терапию, хирургическое вмешательство, случайную кровопотерю и другие заболевания. Например, тромбоцитопения необязательно связана с недостаточностью костного мозга, апластической анемией, миелодиспластическим синдромом или лейкемией. Расстройства тромбоцитов также включают, но не ограничиваются ими, болезнь фон Виллебранда, паранеопластическую дисфункцию тромбоцитов, тромбастению Гланцмана и болезнь Бернарда-Сулье. Чрезмерное кровотечение также может быть вызвано геморрагическими состояниями, вызванными травмой; дефицитом одного или более контактных факторов, таких как FXI, FXII, прекалликреин и высокомолекулярный кининоген (HMWK); дефицит витамина К; нарушение фибриногена, включая афибриногенемию, гипофибриногенемию и дисфибриногенемию; и дефицит альфа2-антиплазмина. В различных вариантах реализации чрезмерное кровотечение вызвано хирургическим вмешательством, травмой, внутримозговым кровоизлиянием, заболеванием печени, заболеванием почек, тромбоцитопенией, дисфункцией тромбоцитов, гематомами, внутренним кровоизлиянием, гемартрозами, гипотермией, менструацией, беременностью и геморрагической лихорадкой Денге.
Необязательно чрезмерное кровотечение вызвано медикаментозным лечением. Например, в различных вариантах реализации чрезмерное кровотечение вызвано антикоагулянтом, таким как разжижающие кровь средства, такие как кумадин (варфарин, который также является антагонистом витамина К), гепарин (например, гепарин с низкой молекулярной массой, такой как эноксапарин или дальтепарин), ингибитор комплекса протромбиназы (например, фондапаринукс или ривароксабан), ингибитор FXa (например, апиксабан (Eliquis)) или ингибитор тромбина (например, дабигатран). Чрезмерное кровотечение также может быть вызвано аспирином (который ингибирует функцию тромбоцитов и может привести к серьезному кровотечению, особенно в сочетании с другими расстройствами или лекарствами), клопидогрелем (PLAVIX) и тому подобным. Эти антикоагулянты не имеют антидотов, и геморрагические осложнения, вызванные этими антикоагулянтами, опасны для пациентов. Композиция согласно настоящему изобретению эффективна для лечения и/или предотвращения чрезмерного кровотечения в этих условиях.
В различных вариантах реализации субъект проходит терапию разжижающим кровь средством (или лечение разжижающим кровь средством прекращают в течение некоторого периода времени, таким образом, биологические эффекты разжижающего кровь средства сохраняются). Одним из преимуществ композиции согласно настоящему изобретению является то, что RMP данной композиции корректируют гемостатические нарушения, вызванные разжижающими кровь средствами, даже в присутствии разжижающих кровь средств. Композиция согласно настоящему изобретению демонстрирует универсальную гемостатическую активность и, как таковая, подходит для лечения кровотечений у пациентов, которые страдают множественными гемостатическими нарушениями.
Композицию (например, фармацевтическую композицию) готовят с применением физиологически приемлемого (то есть фармакологически приемлемого) носителя, буфера, вспомогательного вещества или разбавителя. Конкретный применяемый носитель ограничен только химико-физическими факторами, такими как растворимость и отсутствие реакционной способности с RMP, и путем введения. Физиологически приемлемые носители хорошо известны в данной области техники. Иллюстративные фармацевтические формы, подходящие для инъекционного применения, включают, без ограничения, стерильные водные растворы или дисперсии. Инъецируемые составы дополнительно описаны, например, в Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott Co., Philadelphia. Pa., Banker and Chalmers. eds., pages 238-250 (1982), and ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986)). Фармацевтическую композицию, содержащую RMP, предложенные в настоящем документе, необязательно помещают в емкости вместе с упаковочным материалом, который содержит инструкции по применению таких фармацевтических композиций. В целом такие инструкции содержат конкретные формулировки, описывающие концентрацию реагента, а также, в некоторых вариантах реализации, относительные количества вспомогательных ингредиентов или разбавителей, которые могут быть необходимы для разбавления фармацевтической композиции.
Если это необходимо, композиция содержит один или более дополнительных фармацевтически эффективных агентов. В качестве альтернативы или в дополнение композиция предложена в качестве терапевтического режима, включающего введение других фармацевтически эффективных агентов (одновременно или раздельно во времени). Композицию можно вводить в комбинации с другими веществами и/или другими терапевтическими способами для достижения дополнительного или усиленного биологического эффекта. Совместное лечение включает, но не ограничивается ими, полученные из плазмы или рекомбинантные факторы свертывания, средства для профилактики гемофилии, иммунодепрессанты, антагонисты антител, ингибирующих плазменный фактор (т.е. антиингибиторы), антифибринолитики, антибиотики, гормональную терапию, противовоспалительные средства (например, нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) или стероидные противовоспалительные вещества), прокоагулянты, препараты для разжижения крови и обезболивающие. В одном аспекте введение композиции позволяет снизить дозу совместного лечения, необходимую для достижения необходимого биологического ответа.
Таким образом, настоящее изобретение включает введение субъекту композиции согласно настоящему изобретению в сочетании с одним или более дополнительно подходящими веществами, каждое из которых вводят в соответствии с режимом, подходящим для этого лекарственного средства. Способы введения включают параллельное введение (то есть, по существу, одновременное введение) и последовательное введение (то есть введение в разное время, в любом порядке, с наложением или без него) композиции RMP и одного или более дополнительного подходящего агента(ов). Следует понимать, что разные компоненты необязательно вводят в одной и той же или в отдельных композициях и одинаковыми или разными путями введения.
Конкретный режим введения для конкретного субъекта будет зависеть, отчасти, от количества вводимой композиции, пути введения, конкретного заболевания, подлежащего лечению, факторов, относящихся к реципиенту, а также причины и степени любых побочных эффектов. Количество композиции, вводимой субъекту (например, млекопитающему, такому как человек), и условия введения (например, время введения, способ введения, режим дозирования) являются достаточными для воздействия на необходимый биологический ответ в течение приемлемого времени. Только в качестве иллюстрации, в одном аспекте способ включает введение субъекту, например, от примерно 1·1010 RMP/кг до примерно 3·1011 RMP/кг (например, от примерно 5·1010 RMP/кг до примерно 2·1011 RMP/кг).
В различных аспектах способ включает введение композиции для лечения острого состояния (например, кровотечения, вызванного хирургическим вмешательством или травмой) в течение относительно короткого периода лечения, например, от одного до 14 дней. Также предполагается, что композицию можно вводить в течение более длительного курса лечения (например, продолжительностью в несколько недель или месяцев), если природа состояния пациента требует длительного лечения. В различных вариантах реализации способ включает многократное введение композиции субъекту (например, один раз в день, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день или более).
Подходящие способы введения физиологически приемлемой композиции, такой как композиция, содержащая RMP, как описано в настоящем документе, хорошо известны в данной области техники. Хотя для введения композиции можно применять более одного пути, конкретный путь может обеспечить немедленную и более эффективную реакцию, чем другой путь. В одном аспекте композицию согласно настоящему изобретению для введения RMP в кровоток вводят внутривенно, внутриартериально или внутрибрюшинно. Не внутривенное введение также является подходящим, особенно в отношении низкомолекулярных терапевтических средств. В определенных обстоятельствах необходимо доставлять фармацевтическую композицию, содержащую RMP, как описано в настоящем документе, вагинально, ректально, легочно; путем инъекции интрацеребральным (внутрипаренхиматозным), интрацеребровентрикулярным, внутримышечным, внутриглазным, интрапортальным, внутриочаговым, интрамедуллярным, интратекальным, интравентрикулярным, трансдермальным, подкожным, интраназальным, уретральным или энтеральным способами; с помощью систем замедленного высвобождения; или с помощью имплантационных устройств. Если необходимо, композицию вводят регионарно посредством внутриартериального или внутривенного введения, питая представляющую интерес область, например, через бедренную артерию для доставки к ноге. При применении имплантационного устройства, в одном аспекте устройство имплантируют в любую подходящую ткань, и в различных аспектах доставку композиции осуществляют посредством диффузии, болюса с замедленным высвобождением или непрерывного введения. В других аспектах композицию вводят непосредственно в открытые ткани во время хирургических процедур или лечения травмы или вводят посредством переливания крови.
Ввиду вышеизложенного в настоящем изобретении предложена композиция, описанная в настоящем документе, для применения в способе лечения субъекта, таком как способ лечения расстройства, при котором RMP являются благоприятными. В одном аспекте в настоящем изобретении раскрыта композиция, описанная в настоящем документе, для применения для лечения чрезмерного кровотечения или кровопотери у субъекта, нуждающегося в этом. Способ включает введение субъекту композиции согласно настоящему изобретению в количестве и в условиях, эффективных для лечения или предотвращения, полностью или частично, чрезмерной кровопотери. В настоящем изобретении, кроме того, предложены RMP, имеющие одну или более (или все) характеристик, описанных в настоящем документе, для применения для получения лекарственного средства. Например, RMP можно применять для получения лекарственного средства (например, композиции) для лечения чрезмерного кровотечения или кровопотери у субъекта, нуждающегося в этом.
ПРИМЕРЫ
Полученные из клеток микрочастицы (МР), представляют собой небольшие пузырьки (менее 1 мкм), высвобождаемые при активации или апоптозе клеток. В зависимости от стимула, MP могут быть гетерогенными по фенотипу и функциональным активностям, таким как гемостатическая или тромбогенная или провоспалительная. В данном исследовании были получены три популяции RMP, которые демонстрировали различные комбинации структурных и функциональных характеристик. Изученные характеристики включают PCA (приблизительный показатель гемостатической активности), ацетилхолинэстеразную активность (AchE) и токсичность.
Идентифицировали субпопуляцию RMP, которая продемонстрировала особенно предпочтительные характеристики, связанные с улучшенной эффективностью и сниженной токсичностью, которые демонстрируют нежелательные значения в других композициях RMP.
Одну популяцию RMP получали путем трехкратного продавливания эритроцитов через отверстие (35000 psi) (с применением устройства Constant System Cell Disruptor) для получения разрушенных эритроцитов и дальнейшей фрагментации разрушенных эритроцитов путем бомбардировки на твердой поверхности (RMP-1). Полученные RMP промывали и собирали центрифугированием. Вторую популяцию RMP получали обработкой эритроцитов ионофором кальция (RMP-2). Супернатанты свежих эритроцитов, подвергнутых воздействию Ca 2+/ионофор (A23187) (10 мкМ) в течение 30 минут, центрифугировали для сбора RMP. Третью популяцию освобождали от эритроцитарной массы (PC) после хранения не более 42 дней (RMP-3); эритроциты отбирали из хранящейся PC с интервалами не более 42 дней (хранение при 4°С), затем центрифугировали для восстановления RMP.
Показатели проточной цитометрии определяли по связыванию CD235a (гликофорин A) и аннексина V (AnV). Мечение RMP посредством CD235a проводили путем добавления 20 мкл образца RMP к 4 мкл меченного флуоресценцией mAb и инкубации в течение 20 мин при комнатной температуре при орбитальном встряхивании. Затем смеси разбавляли посредством 1000 мкл холодного HEPES/физиологического раствора (рН 7,4) и хранили на льду до готовности к проточной цитометрии. Для маркера аннексина V 20 мкл образца RMP инкубировали с 3 мкл 0,2 М раствора CaCl2 с добавлением 2 мкл аннексина V-FITC (10 мкг/мл) в течение 20 мин, затем 500 мкл HEPES/физиологический раствор, затем обрабатывали, как указано выше. Затем образцы анализировали на определение MP на проточном цитометре Beckman Coulter FC-500, калибровали с помощью шариков Megamix, чтобы установить подходящее усиливающее напряжение для FS, SS, FL1 и FL2 и подходящее гейтирование для MP. Время выполнения составляло 30 секунд, и скорость потока калибровали, как описано ранее (Jy et al., Thromb Haemost. 2013;110(4):751-60). Подсчет событий был обусловлен флуоресцентным сигналом (FL1 или FL2), а не прямым рассеянием (FS), что обеспечило улучшенную эффективность обнаружения. MP ворота были установлены для размера менее 1 мкм. Неспецифическое связывание mAb оценивали по меченному флуоресценцией изотипическому IgG.
Функциональные тесты включали тромбоэластографию (ТЭГ); сравнивали равные количества образцов каждого типа на основании CD235a, и по мере необходимости их разбавляли объединенной плазмой, не содержащей частиц (PFP). ТЭГ определяет развитие сгустка путем контроля увеличения крутящего момента, передаваемого на центральный штифт, погруженный в чашку с образцом; чашка колеблется периодически на ± 4,5°. Параметры, зарегистрированные в настоящем исследовании, представляли собой следующие: R (отставание относительно образования фибрина), MA (максимальная амплитуда, отражающая функцию тромбоцитов) и TTG (общее образование тромба). Для каждого теста 330 мкл PFP смешивали с 5 или 10 мкл RMP (2·109 частиц/мл) в течение 5 минут, затем добавляли 20 мкл кальция (100 мМ), чтобы инициировать коагуляцию.
Ацетилхолинэстеразную активность (AchE), маркер липидных плотов эритроцитарной плазматической мембраны, анализировали колориметрическим методом (адаптированная версия анализа Ellman AChE). RMP разбавляли с применением фосфатного буфера (pH 7,5, 0,1M). Добавляли 10,6 мкл 0,01 М DTNB и 10,6 мкл 12,5 мМ иодида ацетилтиохолина, и смешивали с 150 мкл разбавленного RMP. Образцы считывали при 405 нм с интервалами 1 мин, 3 мин и 6 мин.
Токсичность RMP оценивали у самцов новозеландских белых кроликов (в среднем 3,8 кг) и самцов крыс линии Спраг-Доули (в среднем 280 г). Все были анестезированы 2% изофлураном. Бедренную артерию и вену канюлировали, а физиологический раствор вводили со скоростью 3 мл/час. Образцы RMP вводили в канюлированную бедренную вену, и кровь отбирали через канюлированную бедренную артерию через различные промежутки времени. Жизненно важные показатели, включая артериальное давление, частоту сердечных сокращений, частоту дыхания, уровни O2 и CO2 в крови, постоянно контролировали. Некоторых животных умерщвляли через 4 часа после инъекции RMP для получения основных органов для патологического исследования. Некоторым животным накладывали швы и возвращали в учреждение по уходу за животными для длительного наблюдения. Их поведение, подвижность, потребление пищи и воды, температуру тела и т.д. контролировали ежедневно в течение первой недели, а затем еженедельно в течение оставшихся 5 недель.
RMP-1 был связан с самым высоким выходом терапевтического продукта, за которым следовал RMP-2, который обеспечивал примерно в 3 раза больше терапевтического продукта, чем RMP-3.
Связывание с AnV выражали как соотношение AnV+/CD235+, и оно является маркером прокоагулянта фосфолипида. Это соотношение было наименьшим для RMP-1 (0,28), затем следовали RMP-2 (0,48) и RMP-3 (0,98).
Размер (средний диаметр) RMP, определяемый с помощью прямого рассеяния (FS), составлял 0,57 мкм для RMP-3. Данное значение было несколько выше, чем у RMP-1 (0,42 мкм) и RMP-2 (0,45 мкм). Процентная внутренняя плотность RMP к эритроциту, измеренная по боковому рассеянию, была наименьшей для RMP-1 (1,5%), затем для RMP-2 (4,8%) и RMP-3 (10,3%).
Ацетилхолинэстеразная активность (AChE) для RMP-3 (15643 пмоль/мин на 106 частиц) была намного выше по сравнению с 3362 пмоль/мин на 106 частиц для RMP-2 и 149 пмоль/мин на 106 частиц для RMP -3. Представляя данные альтернативным способом, активность AChE для RMP-1 (149 пмоль/мин на 106 частиц) была наименьшей, что в 22 и 104 раза ниже, чем у RMP-2 (3362 пмоль/мин на 106 частиц) и RMP-3 (15643 пмоль/мин, на 106 частиц), соответственно.
Прокоагулянтную активность оценивали с применением ТЭГ. Было продемонстрировано наибольшее снижение времени свертывания (время R) для RMP-3 (10,2 мин), затем для RMP-2 (6,7 мин) и RMP-1 (3,6 мин).
Антифибринолитическую активность тестировали в присутствии 0,4 мкг/мл тканевого активатора плазминогена (ТАП). Все три вида RMP эффективно ингибировали ТАП-опосредованный фибринолиз, измеренный по параметрам ТЭГ, включая MA, Ly30 и TTG (общее образование тромба). Наиболее эффективным является RMP-3, за которым следуют RMP-2 и RMP-1.
Введение RMP-1 кроликам и крысам в дозах от 1·1010 до 1,2·1012 RMP/кг не вызывало каких-либо нежелательных явлений в течение шести недель последующего наблюдения после введения. Жизненные признаки, включая частоту сердечных сокращений, артериальное давление, частоту дыхания, уровень кислорода в крови и температуру тела, оставались нормальными в течение одного часа после инфузии RMP. Долгосрочное наблюдение (6 недель) показало нормальное поведение, аппетит и подвижность. При самой высокой дозировке (1,2·1012 RMP/кг) все протестированные крысы оставались живыми и прибавляли массу в течение и в конце шестинедельного периода наблюдения. При этих дозировках время кровотечения было значительно сокращено, а общая кровопотеря в трех различных моделях кровотечения у животных была снижена.
Общее описание характеристик различных субпопуляций RMP, описанных в настоящем документе, приведено в таблице 1. Первая строка представляет собой выход RMP на мл PC. Вторая строка представляет собой соотношение между количеством RMP, обнаруженным с помощью антигликофорина (CD235a), и количеством RMP, обнаруженным посредством связывания аннексина V в проточном цитометре. Третья строка представляет собой размер RMP, рассчитанный по прямым рассеяниям в проточном цитометрическом анализе, откалиброванном с применением шариков трех разных размеров. Последняя строка представляет собой процент внутренней плотности RMP к эритроциту, рассчитанный из бокового рассеивания (SS) анализа проточной цитометрии. Все значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего значения (SEM).
ТАБЛИЦА 1: СВОЙСТВА ПОПУЛЯЦИЙ RMP
| Характеристики | RMP-1 (n=10) | RMP-2 (n=2) | RMP-3 (Неделя 6) (n=10) |
p-величина |
| Выход (x107 RMP/мл RBC) | 1525±64 | 325±15 | 4,4±0,6 | 1 против 2: 0,014 1 против 3: <0,001 2 против 3: 0,030 |
| Соотношение (Аннексин V+ MP:CD235a+ MP) | 0,28±0,03 | 0,48±0,05 | 0,99±0,02 (n=20) |
1 против 2: 0,0016 1 против 3: <0,001 2 против 3: <0,001 |
| Средний диаметр (мкм) | 0,42±0,009 | 0,45±0,003 | 0,57±0,001 | 1 против 2: NS 1 против 3: <0,001 2 против 3: <0,001 |
| % Внутренняя плотность относительно эритроцита | 1,5±0,07 | 4,8±0,03 | 10,3±0,52 | 1 против 2: <0,001 1 против 3: <0,001 2 против 3: 0,039 |
Результаты в настоящем документе демонстрируют преимущества определенного типа RMP, охарактеризованного в настоящем документе. Этот тип RMP демонстрирует отличительные поверхностные характеристики и функциональные активности. Результаты демонстрируют четкие и очевидные различия в функциональных, фенотипических и токсикологических свойствах трех сравниваемых видов. RMP-2 и RMP-3 имеют больший размер, более высокий уровень связывания AnnV и экспрессии AChE по сравнению с RMP-1. RMP-2 и RMP-3 продемонстрировали более высокую прокоагулянтную активность, чем RMP-1, но RMP-1 продемонстрировал прокоагулянтную активность; активность RMP-2 и RMP-3 была выше в этом отношении. RMP-1 связывали с большим количеством терапевтического продукта, полученного на мл эритроцитарной массы.
Из всех сравниваемых параметров наиболее ярким отличием среди данных трех видов RMP является активность AchE. Активность AchE у RMP-1 примерно в 25 и 150 раз ниже, чем у RMP-2 и RMP-3, соответственно. Считается, что AchE ковалентно связан с липидными рафтами и, таким образом, служит суррогатным маркером липидных рафтов. Основываясь на данных AchE, RMP-3 практически лишены липидных рафтов, которые состоят из многих провоспалительных медиаторов, таких как адгезины и лиганды для активации клеток, провоспалительные липиды и цитокины, комплементы, иммунные комплексы и т.д.
До настоящего описания считалось, что гемостатическая эффективность и токсичность неразрывно связаны. Описанные выше результаты демонстрируют, что определенный тип RMP, идентифицированный в настоящем документе, неожиданно не демонстрирует заметной токсичности, но сохраняет высокую гемостатическую эффективность.
Также были изучены характеристики RMP, полученных из ранее замороженных эритроцитов. O+ эритроцитарная масса со сниженным количеством лейкоцитов была приобретена у OneBlood.org. Каждый пакет с эритроцитарной массой разделяли на четыре равные части (70-75 мл). Одну часть эритроцитов хранили при 4°C и применяли для получения RMP в течение семи дней после получения груза. Оставшиеся три части замораживали при -20°С, и размораживали через 1, 2 или 3 месяца после первоначального замораживания для получения RMP. RMP получали путем экструзии под высоким давлением, как описано в настоящем документе, с применением устройства Constant System Cell Disruptor при внутреннем давлении 35000 psi. Количество RMP (выход) измеряли проточной цитометрией с применением PE-меченого моноклонального антитела к гликофорину А в качестве маркера. Прокогаулянтную активность RMP определяли по тромбоэластограмме (ТЭГ). Как показано в таблице 2, полученные композиции RMP, полученные из незамороженных и замороженных эритроцитов, существенно не отличались с точки зрения выхода, прокоагулянтной активности и связывания аннексина V. Применение ранее замороженных эритроцитов позволяет увеличить получение RMP.
| ТАБЛИЦА 2: Получение RMP из замороженных эритроцитов относительно незамороженных | |||
| Источник эритроцитов | Выход RMP (подсчеты/мл крови) | Прокоагулянтная активность/7×107 RMP | Связывание аннексина V (% от общих RMP) |
| Незамороженные эритроциты (Контроль) | 7,0 x109 | 100% | 38% |
| Эритроциты, замороженные в течение 1 месяца | 7,2×109 | 106% | 40% |
| Эритроциты, замороженные в течение 2 месяцев | 7,3×109 | 113% | 42% |
| Эритроциты, замороженные в течение 3 месяцев | 6,9 x109 | 111% | 43% |
Все ссылки, включая публикации, патентные заявки и патенты, процитированные в данном документе, тем самым включены посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая ссылка была индивидуально и конкретно указана для включения в качестве ссылки и была изложена в настоящем документе во всей ее полноте.
Применение артиклей определенной и неопределенной формы и аналогичных объектов в контексте описания заявки (особенно в контексте следующей формулы изобретения) следует толковать как охватывающее как единственное, так и множественное число, если иное не указано в настоящем документе или явно не противоречит контексту. Термины «содержащий», «имеющий», «включающий» и «состоящий из» следует истолковывать как открытые термины (то есть означающие «включающий, но не ограничивающийся»), если не указано иное. Во всем описании, где составы описаны как включающие компоненты или материалы, предполагается, что составы могут также состоять по существу или состоять из любой комбинации перечисленных компонентов или материалов, если не указано иное. Аналогичным образом, когда способы описаны как включающие конкретные стадии, предполагается, что способы также могут по существу состоять или состоять из любой комбинации перечисленных стадий, если не указано иное. Настоящее изобретение, иллюстративно раскрытое в настоящем документе, соответствующим образом может быть осуществлено на практике в отсутствие какого-либо элемента или стадии, которые конкретно не описаны в настоящем документе. Кроме того, любая комбинация вышеописанных элементов во всех возможных их вариациях охватывается настоящим описанием, если иное не указано в настоящем документе или иное явно не противоречит контексту.
Перечисление диапазонов значений в настоящем документе предназначено лишь для применения в качестве сокращенного способа индивидуальной ссылки на каждое отдельное значение, попадающее в диапазон, и каждую конечную точку, если в настоящем документе не указано иное, и каждое отдельное значение и конечная точка включены в заявку как если бы это было отдельно указано в настоящем документе. Применение любых и всех примеров или примерных формулировок (например, «таких как»), представленных в настоящем документе, предназначено лишь для лучшего освещения описания и не налагает ограничений на объем раскрытия, если не заявлено иное. Ни одну формулировку в спецификации не следует толковать как указывающую на любой не заявленный элемент, как существенный для практики описания.
Claims (16)
1. Композиция, содержащая полученные из эритроцитов микрочастицы (RMP) для лечения чрезмерного кровотечения у субъекта, где полученные из эритроцитов микрочастицы демонстрируют ацетилхолинэстеразную (AchE) активность, которая составляет менее 350 пмоль/мин на 106 частиц/мкл.
2. Композиция по п. 1, в которой RMP демонстрирует ацетилхолинэстеразную (AchE) активность, которая составляет менее 200 пмоль/мин на 106 частиц/мкл.
3. Композиция по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что 20%-50% RMP в композиции содержит фосфатидилсерин.
4. Композиция по п. 3, отличающаяся тем, что 30%-45% RMP в композиции содержит фосфатидилсерин.
5. Композиция по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что указанная композиция сокращает время до образования начального сгустка, которое определяют тромбоэластографией (ТЭГ) в цельной крови и плазме, по меньшей мере на две минуты, по меньшей мере на три минуты или по меньшей мере на четыре минуты.
6. Композиция по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что средний диаметр RMP составляет 0,40-0,6 мкм.
7. Композиция по п. 6, отличающаяся тем, что средний диаметр RMP составляет 0,40-0,5 мкм.
8. Композиция по п. 7, отличающаяся тем, что средний диаметр RMP составляет 0,47 мкм.
9. Композиция по любому из пп. 1-8, отличающаяся тем, что внутренняя плотность RMP составляет менее 3,5% внутренней плотности целых эритроцитов.
10. Композиция по п. 9, отличающаяся тем, что внутренняя плотность RMP составляет 0,5-3,0% внутренней плотности целых эритроцитов, как определено сигналом бокового рассеяния поточной цитометрии.
11. Композиция по любому из пп. 1-10, отличающаяся тем, что RMP получены посредством продавливания эритроцитов через отверстие с получением разрушенных эритроцитов и дальнейшей фрагментации разрушенных эритроцитов путем бомбардировки на твердой поверхности.
12. Способ лечения чрезмерного кровотечения у субъекта, где указанный способ включает введение субъекту композиции по любому из пп. 1-11 в количестве, эффективном для лечения чрезмерной кровопотери.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что чрезмерное кровотечение вызвано тромбоцитопенией или дисфункцией тромбоцитов.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что дисфункция тромбоцитов вызвана лекарственной терапией.
15. Способ по п. 12, отличающийся тем, что чрезмерное кровотечение вызвано антикоагулянтом.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что антикоагулянт представляет собой кумадин, низкомолекулярный гепарин, ингибитор комплекса протромбиназы, ингибитор FXa или ингибитор тромбина.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662428155P | 2016-11-30 | 2016-11-30 | |
| US62/428,155 | 2016-11-30 | ||
| PCT/US2017/063700 WO2018102409A2 (en) | 2016-11-30 | 2017-11-29 | Rmp composition and methods of use |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019120008A RU2019120008A (ru) | 2021-01-13 |
| RU2019120008A3 RU2019120008A3 (ru) | 2021-03-09 |
| RU2768743C2 true RU2768743C2 (ru) | 2022-03-24 |
Family
ID=62241842
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019120008A RU2768743C2 (ru) | 2016-11-30 | 2017-11-29 | Композиция на основе rmp и способы ее применения |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11241457B2 (ru) |
| EP (1) | EP3548092B1 (ru) |
| JP (2) | JP7538600B2 (ru) |
| KR (2) | KR20190099436A (ru) |
| CN (1) | CN110799199B (ru) |
| AU (1) | AU2017367084B2 (ru) |
| BR (1) | BR112019010981A2 (ru) |
| CA (1) | CA3045144A1 (ru) |
| DK (1) | DK3548092T3 (ru) |
| ES (1) | ES2924134T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20220892T1 (ru) |
| HU (1) | HUE059678T2 (ru) |
| IL (1) | IL266957B (ru) |
| LT (1) | LT3548092T (ru) |
| MX (1) | MX2019006354A (ru) |
| PL (1) | PL3548092T3 (ru) |
| PT (1) | PT3548092T (ru) |
| RS (1) | RS63537B1 (ru) |
| RU (1) | RU2768743C2 (ru) |
| SI (1) | SI3548092T1 (ru) |
| WO (1) | WO2018102409A2 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130316011A1 (en) * | 2011-01-28 | 2013-11-28 | University Of Miami | Expanded Utility of Red Cell-Derived Microparticles (RMP) for Treatment of Bleeding |
| US9155764B1 (en) * | 2004-12-07 | 2015-10-13 | University Of Miami | Expanded utility of red-cell derived microparticles (RMP) for treatment of bleeding |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4529561A (en) | 1978-03-24 | 1985-07-16 | The Regents Of The University Of California | Method for producing liposomes in selected size range |
| US5332578A (en) | 1989-04-14 | 1994-07-26 | Prp, Inc. | Platelet membrane microparticles |
| KR100260272B1 (ko) * | 1994-02-14 | 2000-07-01 | 마나배 게이사꾸 | Tpo활성을 갖는 단백질의 아미노산을 코딩하는 염기 서열을 포함하는 dna |
| US5690963A (en) | 1995-06-30 | 1997-11-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Freeze dried red blood cells |
| CA2348781A1 (en) | 1998-11-12 | 2000-05-25 | Novolytics Inc. | Compositions and methods for producing vascular occlusion |
| US20030040480A1 (en) | 2001-07-20 | 2003-02-27 | Rasmus Rojkjaer | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and factor XI polypeptides |
| US7294455B2 (en) * | 2003-05-16 | 2007-11-13 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Fixed-dried platelets cross-linked to protein |
| US7811558B2 (en) | 2004-08-12 | 2010-10-12 | Cellphire, Inc. | Use of stabilized platelets as hemostatic agent |
| ATE555799T1 (de) | 2004-12-07 | 2012-05-15 | Univ Miami | Von blutzellen abstammende mikropartikel als blutstillende mittel zur kontrolle von blutungen und behandlung von blutungsstörungen |
| US20080057505A1 (en) | 2006-07-14 | 2008-03-06 | Ping Lin | Methods and compositions for detecting rare cells from a biological sample |
| US10004764B2 (en) * | 2013-11-07 | 2018-06-26 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Red blood cell membrane-derived microparticles and their use for the treatment of lung disease |
| EP3265116B1 (en) | 2015-03-04 | 2021-06-02 | University of Rochester | Systemic and topical application of platelet microparticles to treat bleeding in trauma patients |
-
2017
- 2017-11-29 PL PL17876484.1T patent/PL3548092T3/pl unknown
- 2017-11-29 WO PCT/US2017/063700 patent/WO2018102409A2/en unknown
- 2017-11-29 CA CA3045144A patent/CA3045144A1/en active Pending
- 2017-11-29 BR BR112019010981A patent/BR112019010981A2/pt unknown
- 2017-11-29 SI SI201731199T patent/SI3548092T1/sl unknown
- 2017-11-29 DK DK17876484.1T patent/DK3548092T3/da active
- 2017-11-29 ES ES17876484T patent/ES2924134T3/es active Active
- 2017-11-29 KR KR1020197018762A patent/KR20190099436A/ko not_active IP Right Cessation
- 2017-11-29 HR HRP20220892TT patent/HRP20220892T1/hr unknown
- 2017-11-29 EP EP17876484.1A patent/EP3548092B1/en active Active
- 2017-11-29 HU HUE17876484A patent/HUE059678T2/hu unknown
- 2017-11-29 RU RU2019120008A patent/RU2768743C2/ru active
- 2017-11-29 PT PT178764841T patent/PT3548092T/pt unknown
- 2017-11-29 CN CN201780074200.3A patent/CN110799199B/zh active Active
- 2017-11-29 RS RS20220717A patent/RS63537B1/sr unknown
- 2017-11-29 LT LTEPPCT/US2017/063700T patent/LT3548092T/lt unknown
- 2017-11-29 MX MX2019006354A patent/MX2019006354A/es unknown
- 2017-11-29 US US16/465,054 patent/US11241457B2/en active Active
- 2017-11-29 AU AU2017367084A patent/AU2017367084B2/en active Active
- 2017-11-29 KR KR1020247007757A patent/KR20240049569A/ko not_active Application Discontinuation
- 2017-11-29 JP JP2019529843A patent/JP7538600B2/ja active Active
-
2019
- 2019-05-28 IL IL266957A patent/IL266957B/en unknown
-
2022
- 2022-10-28 JP JP2022173557A patent/JP2023017857A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9155764B1 (en) * | 2004-12-07 | 2015-10-13 | University Of Miami | Expanded utility of red-cell derived microparticles (RMP) for treatment of bleeding |
| US20130316011A1 (en) * | 2011-01-28 | 2013-11-28 | University Of Miami | Expanded Utility of Red Cell-Derived Microparticles (RMP) for Treatment of Bleeding |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| WENCHE JY et al., "Summary", THROMBOSIS AND HAEMOSTASIS, DE, (20130101), vol. 110, no. 10, doi:10.1160/TH12-12-0941, pages 751-760. * |
| WENCHE JY et al., "Summary", THROMBOSIS AND HAEMOSTASIS, DE, (20130101), vol. 110, no. 10, doi:10.1160/TH12-12-0941, pages 751-760. СУХАРЕВА Е.Г.B. и др. Влияние микровезикул эритроцитов на спонтанную агрегацию тромбоцитов. Ярославский педагогический вестник, 2012, 4, стр. 176-180, найдено 17.07.2016 в Интернете на сайте http://vestnik.yspu.org/releases/2012_4e/30.pdf. * |
| СУХАРЕВА Е.Г.B. и др. Влияние микровезикул эритроцитов на спонтанную агрегацию тромбоцитов. Ярославский педагогический вестник, 2012, 4, стр. 176-180, найдено 17.07.2016 в Интернете на сайте http://vestnik.yspu.org/releases/2012_4e/30.pdf. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL3548092T3 (pl) | 2022-10-10 |
| KR20190099436A (ko) | 2019-08-27 |
| RU2019120008A (ru) | 2021-01-13 |
| RU2019120008A3 (ru) | 2021-03-09 |
| BR112019010981A2 (pt) | 2019-10-15 |
| IL266957B (en) | 2022-05-01 |
| AU2017367084A1 (en) | 2019-06-20 |
| MX2019006354A (es) | 2019-10-21 |
| HUE059678T2 (hu) | 2022-12-28 |
| EP3548092A2 (en) | 2019-10-09 |
| DK3548092T3 (da) | 2022-08-01 |
| CA3045144A1 (en) | 2018-06-07 |
| JP7538600B2 (ja) | 2024-08-22 |
| AU2017367084B2 (en) | 2023-11-23 |
| IL266957A (en) | 2019-07-31 |
| SI3548092T1 (sl) | 2022-10-28 |
| US11241457B2 (en) | 2022-02-08 |
| RS63537B1 (sr) | 2022-09-30 |
| LT3548092T (lt) | 2022-10-10 |
| EP3548092A4 (en) | 2021-01-27 |
| JP2020508963A (ja) | 2020-03-26 |
| US20190321406A1 (en) | 2019-10-24 |
| JP2023017857A (ja) | 2023-02-07 |
| PT3548092T (pt) | 2022-08-09 |
| WO2018102409A2 (en) | 2018-06-07 |
| EP3548092B1 (en) | 2022-07-06 |
| CN110799199A (zh) | 2020-02-14 |
| ES2924134T3 (es) | 2022-10-04 |
| CN110799199B (zh) | 2024-01-30 |
| WO2018102409A3 (en) | 2019-12-05 |
| HRP20220892T1 (hr) | 2022-10-14 |
| KR20240049569A (ko) | 2024-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tanaka et al. | Perioperative factor concentrate therapy | |
| JP2011184465A (ja) | 止血を促進するためのフィブリノゲン標的微粒子 | |
| KR20110043654A (ko) | 폰 빌레브란트 인자 또는 제ⅷ 인자 및 혈소판의 억제제에 의하여 유도된 응고장애 치료용 폰 빌레브란트 인자 | |
| Grobler et al. | Reversal of vitamin K antagonists prior to urgent surgery | |
| JP2007507480A5 (ru) | ||
| US20170080027A1 (en) | Expanded utility of red-cell derived microparticles (rmp) for treatment of bleeding | |
| JP2014506569A (ja) | 出血の処置のための赤血球由来微粒子（ｒｍｐ）の拡大された有用性 | |
| Hadjilaou et al. | Pathogenetic mechanisms and treatment targets in cerebral malaria | |
| Keshava et al. | Therapeutic doses of recombinant factor VIIa in hemophilia generates thrombin in platelet‐dependent and‐independent mechanisms | |
| RU2768743C2 (ru) | Композиция на основе rmp и способы ее применения | |
| Murphy et al. | Blood component and pharmacologic therapy for hemostatic disorders | |
| US20170153256A1 (en) | Methods for treating bleeding disorders using a platelet subpopulation | |
| Kjellberg | Coagulation during and after cardiopulmonary bypass with focus on heparin, protamine, aprotinin and platelet function | |
| Apelseth et al. | Plasma and cryoprecipitate for transfusion | |
| Martinez et al. | Congenital bleeding disorders | |
| Banini et al. | Coagulopathy: Pathophysiology, Evaluation, and Treatment | |
| Agostini et al. | Blood Products, Derivates, and Prohemostatic Drugs | |
| Huddleston et al. | 22 HEMOSTASIS | |
| Shah et al. | Coagulation factor concentrates and pharmacologic therapies for acquired bleeding disorders | |
| Chang et al. | HEMOSTASIS AND BLOOD TRANSFUSION | |
| SCHMAIER | Acquired Bleeding Disorders | |
| Hiller | Bleeding disorders | |
| Phillips et al. | Hematologic Disease and Heart Disease | |
| Diekamp | Adamzikl/, Steppat DZ, Mi//er JZ, Carstensen LZ, Schapke MZ, Washington GZ, F/esch B. | |
| Leung | XIII HEMORRHAGIC DISORDERS |