RU2750894C1 - Вакцина для защиты свиней от actinobacillus pleuropneumoniae - Google Patents
Вакцина для защиты свиней от actinobacillus pleuropneumoniae Download PDFInfo
- Publication number
- RU2750894C1 RU2750894C1 RU2020123741A RU2020123741A RU2750894C1 RU 2750894 C1 RU2750894 C1 RU 2750894C1 RU 2020123741 A RU2020123741 A RU 2020123741A RU 2020123741 A RU2020123741 A RU 2020123741A RU 2750894 C1 RU2750894 C1 RU 2750894C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- actinobacillus pleuropneumoniae
- infection
- baculovirus
- toxin
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 58
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 title claims abstract description 50
- 241000282887 Suidae Species 0.000 title claims abstract description 17
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims abstract description 50
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims abstract description 50
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims abstract description 28
- 101000657454 Actinobacillus pleuropneumoniae RTX-I toxin determinant A from serotypes 1/9 Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 17
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 38
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 19
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 5
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 4
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 201000006509 pleuropneumonia Diseases 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 241000606750 Actinobacillus Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 101710110950 Protein S100-A10 Proteins 0.000 description 2
- 102100029796 Protein S100-A10 Human genes 0.000 description 2
- 229920004929 Triton X-114 Polymers 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 244000144980 herd Species 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000004034 viscosity adjusting agent Substances 0.000 description 2
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100148259 Actinobacillus pleuropneumoniae apxIIA gene Proteins 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 1
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 1
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 108700020497 Nucleopolyhedrovirus polyhedrin Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000606752 Pasteurellaceae Species 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000012377 Salvia columbariae var. columbariae Nutrition 0.000 description 1
- 240000005481 Salvia hispanica Species 0.000 description 1
- 235000001498 Salvia hispanica Nutrition 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 101150051095 apxIA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150015540 apxIIC gene Proteins 0.000 description 1
- 101150112048 apxIIIA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000014167 chia Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 101150047356 dec-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000284 endotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002346 endotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 208000013435 necrotic lesion Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 239000006176 redox buffer Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/285—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Pasteurellaceae (F), e.g. Haemophilus influenza
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/866—Baculoviral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55544—Bacterial toxins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области ветеринарии, а именно к инфектологиии и иммунологии, и предназначенна для защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae. Вакцина для защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae содержит токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, адъювант и фармацевтически приемлемый носитель, причем токсин RTX представляет собой ApxI. В других воплощениях представлены применения токсина RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемого бакуловирусом, и способ защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae. Использование группы изобретений позволяет повысить эффективность защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.
Description
ОБЛАСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение, главным образом, относится к вакцине для защиты свиней от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к вакцине, направленной против плевропневмонии свиней - распространенного по всему миру заболевания, вызывающего значительные экономические потери в свиноводстве. Этиологическим фактором плевропневмонии свиней является Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) - грамотрицательная бактерия, принадлежащая семейству Pasteurellaceae. Заболевание передается капельным путем или посредством прямого контакта с инфицированной свиньей и характеризуется геморрагическими, фибринозными и некротическими очагами в легких. Клиническая картина может находиться в диапазоне от молниеносной до хронической, и бессимптомные свиньи-переносчики могут передавать заболевание при поступлении в неинфицированные стада. Исходя из капсульных полисахаридов и компонентов O-цепи липополисахарида (LPS), было описано 15 сероваров. Серотипирование и другие способы генетического типирования для Actinobacillus pleuropneumoniae внесли значительный вклад в мониторинговые и эпидемиологические исследования. Эти инструменты предоставили важную информацию для принятия решения в программах контроля, нацеленных на устранение вирулентных типов этих бактерий. В Северной Америке серовары 1, 5 и 7 описаны как наиболее распространенные, в то время как серовары 2 и 9 наиболее часто выделяются в Европе, и серовар 15 является преобладающим изолятом австралийских свиней.
Факторы вирулулентности, описанные для Actinobacillus pleuropneumoniae, включают LPS, капсульные полисахариды, токсины Apx I-IV (также называемые повторами в токсинах или токсинами RTX), наружные мембранные белки (OMP) и различные системы усвоения железа. Токсины RTX Actinobacillus pleuropneumoniae (токсины Apx I, II и III) описаны Frey в Trends in Microbiology 257, Vol. 3, No. 7, July 1995. Позднее был обнаружен четвертый RTX-токсин APP (названный Apx IV) (см. Dreyfus et al. in Veterinary Microbiology, 2004, April 19; 99 (3-4): 227-238). Однако общий вклад каждого компонента в процесс инфицирования остается неясным, также как и механизмы патогенеза бактерий. Практически все из доступных в настоящее время вакцин против A. pleuropneumoniae представляют собой либо инактивированные цельноклеточные бактерины, либо комбинации субъединиц токсинов и белков Apx, необязательно в комбинации с фракциями наружной мембраны. В любом случае стало хорошо понятно, что для достижения достаточной защиты в вакцине должен присутствовать липополисахарид (LPS) (Julien Gouré et al., BMC Genomics 2009, 10:88, опубликованная 24 февраля 2009 года; Dubreuil et al., Animal Health Research Reviews 1(2): 73-93, декабрь 2000 года). Действительно, известно, что специфическое связывание между LPS и токсинами Apx играет основную роль в повышении иммуногенности токсинов (см., среди прочего, Ramjeet et al. in Molecular Biology, 2008, 70(1), pp 221-235), которая может объяснять достаточную защиту комбинированной субъединичной вакцины, где присутствует токсин Apx в комплексе с LPS.
Серьезным недостатком липополисахарида является его эндотоксическая природа, и, таким образом, он ассоциирован с множеством нежелательных побочных эффектов, таких как выраженная вялость, диарея, рвота, потеря аппетита или даже смерть. На первый взгляд, это, таким образом, наводит на мысль о снижении количества LPS в вакцине или об обезвреживании LPS. Однако достаточная вакцина против APP зависит от присутствия LPS и, таким образом, как широко известно, снижение количества LPS имманентно снижает эффективность вакцин. Альтернативно, негативное влияние LPS может быть устранено добавлением в вакцину антибиотика полимиксина, как известно из WO2011/015614. Однако с нормативной точки зрения добавление антибиотика в вакцину строго ограничено. Таким образом, это решение не может быть использовано ввиду юрисдикции в области регулирования.
Действительно, в настоящее время понятно, что для достижения такого высокого уровня защиты в вакцине должен присутствовать по меньшей мере один токсин Apx, причем токсин присутствует в иммунологическом комплексе с гетеромолекулой, такой как LPS. Хотя известно, что очищенные токсины Apx могут обеспечить некоторый уровень защиты (см., среди прочего, Bhatia et al. в Veterinary Microbiology, 29, 1991, 147- 158), понятно, что для достижения достаточной защиты использования очищенного токсина Apx в качестве антигена в вакцине недостаточно. Известны многие примеры токсина Apx, экспрессируемого в грамотрицательных бактериях E. coli. Хотя иногда его называют "очищенным" рекомбинантным токсином Apx при продуцировании в E. coli, в каждом из этих случаев токсин находится в комплексе с LPS в результате контакта с LPS, содержащимися в клеточной стенке бактерий E. coli. Также в данной области известны более экзотические экспрессирующие системы для получения действительно очищенного токсина Apx не в комплексе с LPS или другим гетеротоксином. Kyung-Yeol Lee et al. описали в FEMS Immunol Med Microbiol 48, 2006, 381-389, индукцию защитного иммунного ответа против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae посредством рекомбинантного токсина Apx, продуцированного в трансгенном растении табака. Однако не было показано защиты у свиней. Также вакцину необходимо было вводить посредством четырех последовательных доз, вводимых перорально. Для практики вакцинации свиней это не является реалистичной возможностью. Соответственно, Mi-Young Kim et al. показали в Protein Expression and Purification 132, 2017, 116-123, что токсин Apx мог экспрессироваться в трансгенном каллюсе риса, и что очищенный токсин при введении интраназально мог обеспечить по меньшей мере некоторую защиту против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae у мышей. Однако защита у свиней не была показана, не говоря уже о защите на уровне, сравнимом с коммерчески доступными вакцинами для защиты против APP.
ЗАДАЧА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задачей изобретения является предоставление альтернативной вакцины для достаточной защиты поросят от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, предпочтительно на уровне, сравнимом с защитой, которой достигают при использовании коммерчески доступной вакцины против APP.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Для выполнения задачи изобретения была разработана вакцина для защиты свиней от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, причем вакцина содержит токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, и фармацевтически приемлемый носитель.
Неожиданно, данная вакцина, содержащая выделенный токсин без LPS или другого гетеротоксина, может обеспечивать достаточную защиту даже на уровне, сравнимом с защитой, которую достигают с использованием вакцины, такой как Porcilis® APP (MSD Animal Health, Boxmeer, Нидерланды). Хотя бакуловирусная экспрессия по существу широко известна и используется многие годы для экспрессии иммуногенов либо вирусных, либо бактериальных патогенов, ее не использовали для обеспечения достаточной вакцины против APP посредством экспрессии одного или нескольких токсинов RTX. Бакуловирусы представляют собой ДНК-вирусы, способные инфицировать более 600 видов насекомых. Наиболее часто используемым бакуловирусом в биотехнологии является Autographa californica. Бакуловирус имеет кольцевую двухцепочечную ДНК (∼134 т.п.н.), которая упакована в стержневидный нуклеокапсид, и имеет оболочку, состоящую из мембраны, происходящей из клеток-хозяев. После инфицирования насекомых бакуловирус может высвобождаться из клеток в форме почек или может быть заключен в полиэдр, состоящий из экспрессируемого вирусом полиэдрина и белков p10. Полиэдрин и белки p10 экспрессируются в большом количестве, однако они не являются обязательными для репликации бакуловируса, таким образом, можно клонировать гетерологичные гены под контроль промотора полиэдрина или p10 для получения рекомбинантного бакуловируса. Полученный рекомбинантный бакуловирус можно использовать для инфицирования культивируемых клеток насекомых для устойчивой экспрессии белка, как известно с 1980-х годов. На сегодняшний день разработаны различные коммерческие системы бакуловирусных векторов (например, Bac-to-BacTM, Invitrogen; BaculoDirectTM, Invitrogen; ProEasyTM, AB Vector), позволяющие клонирование генов и конструирование рекомбинантного бакуловируса по типу "включай и работай" (см., например, Lin SY, Chen GY, Hu YC. Recent Pat Biotehnol 2011; 5:1-11). Более того, был разработан ряд сконструированных бакуловирусных векторов, таких как flashBACTM и flashBACGOLDTM (Oxford Expression Technologies Ltd) для повышения экспрессии рекомбинантных белков путем делеции определенных вирусных генов (например, chiA и v-cath) в геноме бакуловируса (например, см. Hitchman RB, Possee RD, King LA. Recent Pat Biotechnol 2009;3:46-54). Кроме того, система MultiBacTM (Geneva Biotech) позволяет быстрое и универсальное конструирование бакуловируса с множеством экспрессирующих кассет для генов путем встраивания эндонуклеазы и перестановки Cre-loxP. Напротив, система SweetBacTM на основе MultiBac разработана для решения проблем гликозилирования в клетках насекомых и экспрессии белков, преобразованных в белки млекопитающих (например, см. Palmberger D, Klausberger M, Berger I, et al. Bioengineered 2013;4:78-83).
Также изобретение обеспечило токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом для применения в способе защиты свиней от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae путем введения животному вакцины, содержащей токсин RTX и фармацевтически приемлемый носитель.
Далее, изобретение позволяет использовать токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, для получения вакцины для защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, путем смешения токсина RTX с фармацевтически приемлемым носителем, и способа защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, путем введения вакцины, содержащей токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, и фармацевтически приемлемый носитель, свинье.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Вакцина представляет собой фармацевтическую композицию, которая является безопасной для введения рассматриваемому животному и способна индуцировать защитный иммунитет у этого животного против патогенного микроорганизма, т.е. индуцировать успешную защиту против инфицирования микроорганизмом. Как правило, вакцину можно составлять с использованием известных в данной области способов, которые в основном включают смешение одного или нескольких антигенов (живых или инактивированных, цельноклеточных, экстракта, очищенной фракции или субъединицы) с фармацевтически приемлемым носителем, например, жидким носителем, таким как (необязательно забуференная) вода или твердый носитель, такой как обычно используют для получения лиофилизированных вакцин. Необязательно добавляют другие вещества, такие как адъюванты, стабилизаторы, модификаторы вязкости или другие компоненты в зависимости от предполагаемого применения или требуемых свойств вакцины.
Фармацевтически приемлемый носитель представляет собой биологически совместимую среду, а именно, среду, которая после введения не индуцирует значительных неблагоприятных реакций у рассматриваемого животного и способна презентировать антиген иммунной системе животного-хозяина после введения вакцины. Такой фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой, например, жидкость, содержащую воду, и/или любой другой биологический совместимый растворитель или твердый носитель, такой как носители, обычно используемые для получения лиофилизированных вакцин (на основе сахаров и/или белков), необязательно содержащий иммуностимулирующие вещества (адъюванты). Необязательно добавляют другие вещества, такие как стабилизаторы, модификаторы вязкости или другие компоненты, в зависимости от предполагаемого применения или требуемых свойств соответствующей вакцины.
Защита против инфекции микроорганизмом представляет собой способствование предупреждению, смягчению или излучению инфекции этим микроорганизмом или нарушения, возникающего в результате этой инфекции, например, предупреждению или снижению одного или нескольких клинических признаков в результате инфицирования патогеном.
Системное введение вакцины означает, что вакцина достигает кровеносной системы организма, т.е. системы, включающей сердечно-сосудистую и лимфатическую систему, таким образом, влияя на организм в целом вместо конкретного места, такого как желудочно-кишечный тракт. Системное введение можно проводить, например, посредством введения вакцины в мышечную ткань (внутримышечное), в дерму (интрадермальное), под кожу (подкожное), под определенную слизистую оболочку (подслизистое), в вены (внутривенное) и т.д.
Токсины RTX Actinobacillus pleurpneumoniae (токсины Apx) представляют собой белковые токсины, продуцируемые Actinobacillus pleurpneumoniae, которые вносят значительный вклад в патогенез плевропневмонии свиней. ApxI (приблизительно 105 кДа) является в высокой степени гемолитическим и цитотоксическим для лейкоцитов, и кодируется геном apxIA (1023 кодона), который является частью оперона apxI-CABD. ApxII (приблизительно 105 кДа) является слабо гемолитическим и умеренно цитотоксическим. Оперон apxII содержит структурный ген apxIIA (956 кодонов) и ген apxIIC. ApxIII (приблизительно 120 кДа), кодируемый геном apxIIIA (1052 кодона), является не гемолитическим, но в высокой степени цитотоксическим в отношении легочных макрофагов свиней. ApxIV кодируется геном apxIVA, длина которого варьируется от приблизительно 1382 до приблизительно 1805 в различных серотипах. ApxIV обладает значительным сходством последовательности с регулируемыми железом белками RTX Neisseria meningitidis, FrpA и FrpC. Как широко известно, рекомбинантная экспрессия токсина RTX APP может обеспечивать белок, который представляет собой только часть встречающегося в природе токсина Appx (без частей, которые не являются необходимыми для достижения достаточного иммунного ответа) и имеет идентичность последовательность в перекрывающейся области, которая составляет менее 100% с встречающимся в природе токсином, предпочтительно имеет идентичность более 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 вплоть до 100% с любым из встречающихся в природе ApxI, ApxII, ApxIII или ApxIV. Идентичность последовательностей можно определять с использованием программы BLAST с помощью алгоритма blastp с параметрами по умолчанию. Как правило, иммуногенная фракция Apx имеет длину по меньшей мере приблизительно 35% от полноразмерного белка (см. Infection and Immunity, Vol. 70, No. 11, Nov. 2002, p 6464-6467), например, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 вплоть до 100%, однако было показано, что даже фракции меньше 35% являются потенциально эффективными в качестве иммуногенов (см. Vaccine, 17 (1999), 441-447).
ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В первом варианте осуществления вакцина содержит токсин RTX ApxI. ApxI продуцируется многими сероварами APP и, таким образом, посредством наличия только этого токсина в вакцине может быть достигнута широкая защита.
В другом варианте осуществления вакцину вводят системно, например, посредством внутримышечного или внутрикожного введения.
Изобретение далее объяснено с использованием следующих неограничивающих примеров.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Рекомбинантная экспрессия ApxI
Конструирование вектора для переноса pFastbac-ApxIA
Ген rApxIA синтезировали на основе аминокислотной последовательности ApxIA Actinobacillus pleuropneumoniae штамма 4074, номер доступа Swiss prot: P55128. Ген подвергали оптимизации кодонов для использования вместо полиэдрина бакуловируса и включали последовательность Козак (TATAAAT) и 3’-гексагистидиновую метку. Ген rApxIA-His клонировали после промотора полиэдрина плазмиды pFastbac1 (Life Technologies, Carlsbad, США) в качестве фрагмента BamHI с получением плазмиды pFastbac-ApxIA TAT.
Получение рекомбинантного бакуловируса BacdCCApxIA-TAT
Рекомбинантный бакуловирус получали с использованием плазмиды, как описано в настоящем описании выше, в системе Bac to Bac (Life Technologies, Carlsbad, США) в соответствии с протоколом изготовителя. Клетки E. coli, использованные для трансформации, содержали родительский бакуловирус с делецией генов хитиназы и v-катепсина (Kaba SA, Salcedo AM, Wafula PO, Vlak JM, van Oers MM. J Virol Methods. 2004 Dec 1;122(1):113-8.). Бактерии E.coli выращивали в среде без животных компонентов (ACF).
ДНК BacdCCApxIA-TAT выделяли из E.coli и использовали для трансфекции в клетки Spodoptera frugiperda (Sf)9-900. Клетки Sf9-900 выращивали в среде, свободной от животных компонентов. Экспрессию белка ApxIA 110 кДа подтверждали с использованием гелей SDS-PAGE, вестерн-блоттинга и иммунофлуоресцентного анализа с использованием моноклонального антитела против гистидиновой метки. Супернатанты после трансфекции один раз амплифицировали и полученную исходную вирусную культуру использовали для всех дальнейших вирусных культур.
Очистка продуцированного бакуловирусом ApxIA с использованием His-метки
Клетками Sf9-900 инфицировали бакуловирус BacdCCApxIA-TAT с множественностью инфекции 0,1, а затем проводили культивирование в течение от 4 до 5 суток при 27,5°C. Из этих клеток очищали белок rApxIA-His с использованием системы для очистки белка AKTA Avant (GE Healthcare Life Sciences, Cleveland, США) с использованием колонки HIStrap FF. Получали лизаты из клеток насекомых, инфицированных BacdCCApxIA-TAT, с использованием лизирующего буфера Triton X114 (0,15 M NaCl, 10 мМ Tris-HCl pH8, 2,5 мМ CaCl2, 1 мМ DTT, 1% triton X114). После центрифугирования осадок ресуспендировали в промывочном буфере (50 мМ Tris pH=8, 300 мМ NaCl, 6 M мочевина, 2,5 мМ CaCl2, 1 мМ DTT) и фильтровали с использованием 0,45-мкм фильтра перед внесением в AKTA Avant. После уравновешивания колонки денатурирующим промывочным буфером образец два раза вносили в колонку со скоростью 3 мл/мин. Белок, связавшийся с колонкой, ренатурировали с использованием окислительно-восстановительного буфера (50 мМ Tris pH=8, 300 мМ NaCl, 2,5 мМ CaCl2, 0,1% окисленный глутатион, 0,01% восстановленный глутатион, 1 мМ DTT) и элюировали из колонки посредством линейного градиента имидазола с использованием элюирующего буфера (50 мМ Tis pH=8, 300 мМ NaCl, 2,5 мМ CaCl2, 1 мМ DTT, 500 мМ имидазол). Очищенный белок ApxI подвергали диализу против буфера для диализа (50 мМ Tris pH=8, 300 мМ NaCl, 2,5 мМ CaCl2) с использованием кассет Slide-A-Lyzer Dialysis Cassettes (Thermo Scientific, Waltham, США) с несколькими заменами буфера.
Пример 2: Эффективность вакцины
Вакцинный состав
Для исследования получали две различных вакцины. Первая вакцина содержала очищенный экспрессированный бакуловирусом ApxI, полученный способом, описанным в примере 1. Вторая вакцина для применения в качестве положительного контроля была сравнима с коммерчески доступной вакциной Porcilis® APP, содержащей ApxI и ApxII, очищенные из культурального супернатанта A. pleuropneumoniae (и, таким образом, в комплексе с LPS), также обозначаемые как "нативные ApxI+ApxII". Исследуемая вакцина отличалась от коммерчески доступной вакцины Porcilis® APP тем, что она не содержала токсин ApxIII. Однако для нагрузки полевым изолятом серотипа 10 это не имеет значения (серотип 10 не продуцирует ApxIII). Антигены смешивали с адъювантом, содержавшим минеральное масло (XSolve, доступный от MSD Animal Health, Boxmeer, Нидерланды) в конечной концентрации 25 мкг/мл для каждого антигена.
Протокол вакцинации
Использовали три группы по восемь поросят из стада, свободного от A. pleuropneumoniae. Эти две вакцины вводили внутримышечно в качестве дозы 2 мл в возрасте пять и девять недель. Остальным восьми поросятам инъецировали PBS, и их использовали в качестве невакцинированной группы отрицательного контроля. Проводили взятие образцов крови с регулярными интервалами для серологии.
Нагрузка путем инфицирования A. pleuropneumoniae серотипа 10
В возрасте приблизительно 12 недель всем 24 поросятам давали нагрузку путем инфицирования.
Заражение проводили посредством полевого изолята серотипа 10 (штамм HV211) A. pleuropneumoniae. Заражающую культуру получали непосредственно перед заражением. Поросят заражали A. pleuropneumoniae через аэрозоль. Аэрозоль вводили посредством небулайзера Devilbis Nebulizer (общее количество 30 мл). Заражающую дозу определяли путем подсчета бляшек, и было обнаружено, что суспензия содержала 7,0×108 б.о.е./мл.
После заражения оценивали респираторное заболевание и другие аномалии в течение периода, составляющего семь суток, после чего выживших животных умерщвляли, и проводили их вскрытие.
Использованная оценочная система была следующей:
0= нормальный
1= дрожание
2= подавленность
3= увеличенная частота дыхания
4= рвота
5= диарея
6= кашель
7= брюшное дыхание
8= диспноэ
Для соответствия гуманному обращению с животными, животных, которых считали умирающими, умерщвляли.
Свиней, которые погибли или которых умертвили исследовали в отношении типичных очагов Actinobacillus pleuropneumoniae, степень которых на долю легкого оценивали по шкале 0-5 (максимальный показатель на животное: 35). Также легкие выживших животных оценивали на седьмые сутки после заражения.
Результаты
Все свиньи были серологически негативными в начале эксперимента и во время заражения происходила сероконверсия вакцинированных животных по ApxI, при определении посредством ELISA с нативным ApxI в качестве наносимого антигена. Основные титры антител составляли log2 12,9±1,6 и 13,1±1,1 для групп Baculo-ApxI и нативных ApxI+ApxII, соответственно. В таблице 1 представлено обобщение результатов заражения и в таблице 2 представлены клинические аномалии, наблюдаемые для отдельных свиней.
Таблица 1 Защита поросят
| Вакцина | Смертность [n/ntot] |
Средний показатель очагов повреждения легкого |
| Baculo-ApxI | 2/8* | 1,5 ± 3,1* |
| Нативные ApxI+ApxII | 1/8* | 0,4 ± 1,1* |
| PBS | 8/8 | 20,3 ± 5,7 |
*: значимо отличались от контролей (p<0,05,точный критерий Фишера для уровня смертности и U-критерий Манна-Уитни для показателей очагов повреждения)
Таблица 2 Клинические аномалии на группу
| Baculo-ApxI | Нативные ApxI+ApxII | PBS | ||||
| свинья | Аномалия1 | День смерти2 | Аномалия1 | День смерти2 | Аномалия1 | День смерти2 |
| 1 | 2 | - | 2 | - | 2,3,7,8 | 1 |
| 2 | 2,7 | 3 | 2,3,7 | 1 | 2,3,7,8 | 1 |
| 3 | 0 | - | 0 | - | 2,3,7,8 | 1 |
| 4 | 2,5 | - | 0 | - | 2,3,7,8 | 1 |
| 5 | 0 | - | 0 | - | 2,3,7,8 | 1 |
| 6 | 2,3,7 | 3 | 0 | - | 2,3,7,8 | 1 |
| 7 | 0 | - | 2,7 | - | 2,3,7,8 | 1 |
| 8 | 0 | - | 0 | - | 2,3,7,8 | 1 |
1 Наблюдаемые клинические аномалии (оцененные как описано для нагрузки путем инфицирования)
2 Умершие/умерщвленные на указанные сутки после заражения
Наблюдали значительное уменьшение клинических признаков, смертности и повреждения легких для обеих вакцинированных групп. Различие между двумя группами вакцин не были статистически значимыми. Таким образом, можно сделать заключение, что вакцина, содержащая токсин RTX, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, обеспечивает защиту, сходную с защитой, обеспечиваемой коммерческой вакциной Porcilis® APP.
Claims (6)
1. Вакцина для защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, содержащая токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, адъювант и фармацевтически приемлемый носитель, причем токсин RTX представляет собой ApxI.
2. Применение токсина RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемого бакуловирусом, в способе защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae путем введения животному вакцины, содержащей токсин RTX, адъювант и фармацевтически приемлемый носитель, причем токсин RTX представляет собой ApxI.
3. Применение по п.2, отличающееся тем, что вакцину вводят системно.
4. Применение по п.3, отличающееся тем, что вакцину вводят либо внутримышечно, либо интрадермальным путем.
5. Применение токсина RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемого бакуловирусом, для получения вакцины для защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, путем смешения токсина RTX с адъювантом и фармацевтически приемлемым носителем, причем токсин RTX представляет собой ApxI.
6. Способ защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae путем введения свинье вакцины, содержащей токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, адъювант и фармацевтически приемлемый носитель, причем токсин RTX представляет собой ApxI.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP17209021 | 2017-12-20 | ||
| EP17209021.9 | 2017-12-20 | ||
| PCT/EP2018/085752 WO2019121861A1 (en) | 2017-12-20 | 2018-12-19 | A vaccine to protect a pig against actinobacillus pleuropneumoniae |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2750894C1 true RU2750894C1 (ru) | 2021-07-05 |
Family
ID=60702397
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020123741A RU2750894C1 (ru) | 2017-12-20 | 2018-12-19 | Вакцина для защиты свиней от actinobacillus pleuropneumoniae |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20210077610A1 (ru) |
| EP (1) | EP3727439A1 (ru) |
| JP (1) | JP2021506833A (ru) |
| CN (1) | CN111511393A (ru) |
| BR (1) | BR112020012137A2 (ru) |
| RU (1) | RU2750894C1 (ru) |
| WO (1) | WO2019121861A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2824493C1 (ru) * | 2023-12-18 | 2024-08-08 | Общество с ограниченной ответственностью "Центр биотехнологической обработки продуктов питания при институте микроэкологии" (ООО "ЦБО Микроэкологии") | Штамм бактерии Actinobacillus pleuropneumoniae 8 серотипа, предназначенный для получения моно- и поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику актинобациллезной плевропневмонии свиней |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114057892B (zh) * | 2021-11-04 | 2023-02-10 | 长沙爱科博生物科技有限公司 | 胸膜肺炎放线杆菌融合蛋白及其编码基因和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0595188A2 (en) * | 1992-10-27 | 1994-05-04 | Nippon Zenyaku Kogyo Co. Ltd. | Process for producing vaccine for a bacterial toxin belonging to the RTX toxin family |
| WO2011015614A1 (en) * | 2009-08-06 | 2011-02-10 | Intervet International B.V. | A vaccine directed against porcine pleuropneumonia and a method to obtain such a vaccine |
| WO2016093157A1 (ja) * | 2014-12-08 | 2016-06-16 | エヌエーアイ株式会社 | 新規アジュバント |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPN631495A0 (en) * | 1995-11-02 | 1995-11-23 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Vaccine and biological vector(I) |
| EP0810283A3 (en) * | 1996-05-31 | 1997-12-10 | Akzo Nobel N.V. | Live attenuated RTX-procucing bacteria of the family Pasteurellaceae |
| US6783764B1 (en) * | 1997-04-10 | 2004-08-31 | Akzo Nobel Nv | Actinobacillus pleuropneumoniae subunit vaccine |
-
2018
- 2018-12-19 JP JP2020533124A patent/JP2021506833A/ja active Pending
- 2018-12-19 RU RU2020123741A patent/RU2750894C1/ru active
- 2018-12-19 US US16/954,055 patent/US20210077610A1/en not_active Abandoned
- 2018-12-19 EP EP18829815.2A patent/EP3727439A1/en active Pending
- 2018-12-19 CN CN201880082804.7A patent/CN111511393A/zh active Pending
- 2018-12-19 WO PCT/EP2018/085752 patent/WO2019121861A1/en unknown
- 2018-12-19 BR BR112020012137-1A patent/BR112020012137A2/pt unknown
-
2022
- 2022-04-14 US US17/721,115 patent/US20220233675A1/en active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0595188A2 (en) * | 1992-10-27 | 1994-05-04 | Nippon Zenyaku Kogyo Co. Ltd. | Process for producing vaccine for a bacterial toxin belonging to the RTX toxin family |
| WO2011015614A1 (en) * | 2009-08-06 | 2011-02-10 | Intervet International B.V. | A vaccine directed against porcine pleuropneumonia and a method to obtain such a vaccine |
| WO2016093157A1 (ja) * | 2014-12-08 | 2016-06-16 | エヌエーアイ株式会社 | 新規アジュバント |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| AHRENS U. Et al. Efficacy of the classical swine fever (CSF) marker vaccine Porcilis Pesti in pregnant sows. Vet Microbiol 2000 Nov; 77 (1-2): abstract. * |
| AHRENS U. Et al. Efficacy of the classical swine fever (CSF) marker vaccine Porcilis Pesti in pregnant sows. Vet Microbiol 2000 Nov; 77 (1-2): abstract. CHUNLAI WANG et al. Positive role for rApxIVN in the immune protection of pigs against infection by Actinobacillus pleuropneumoniae. Vaccine, 27, (2009): 5816-5821. MAHENDRASINGH RAMJEET et al. Mutation in the LPS outer core biosynthesis gene, galU, affects LPS interaction with the RTX toxins ApxI and ApxII and cytolytic activity of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1. Mol Microbiol 2008 Oct 18; 70 (1): 221-35. * |
| CHUNLAI WANG et al. Positive role for rApxIVN in the immune protection of pigs against infection by Actinobacillus pleuropneumoniae. Vaccine, 27, (2009): 5816-5821. * |
| MAHENDRASINGH RAMJEET et al. Mutation in the LPS outer core biosynthesis gene, galU, affects LPS interaction with the RTX toxins ApxI and ApxII and cytolytic activity of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1. Mol Microbiol 2008 Oct 18; 70 (1): 221-35. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2824493C1 (ru) * | 2023-12-18 | 2024-08-08 | Общество с ограниченной ответственностью "Центр биотехнологической обработки продуктов питания при институте микроэкологии" (ООО "ЦБО Микроэкологии") | Штамм бактерии Actinobacillus pleuropneumoniae 8 серотипа, предназначенный для получения моно- и поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику актинобациллезной плевропневмонии свиней |
| RU2827226C1 (ru) * | 2023-12-19 | 2024-09-23 | Общество с ограниченной ответственностью "Центр биотехнологической обработки продуктов питания при институте микроэкологии" (ООО "ЦБО Микроэкологии") | Штамм бактерий Actinobacillus pleuropneumoniae 2 серотипа, предназначенный для получения моно- и поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику актинобациллезной плевропневмонии свиней |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111511393A (zh) | 2020-08-07 |
| WO2019121861A1 (en) | 2019-06-27 |
| EP3727439A1 (en) | 2020-10-28 |
| US20220233675A1 (en) | 2022-07-28 |
| JP2021506833A (ja) | 2021-02-22 |
| US20210077610A1 (en) | 2021-03-18 |
| BR112020012137A2 (pt) | 2020-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10653763B2 (en) | Subunit immersion vaccines for fish | |
| JP2024059815A (ja) | ブタサーコウイルス３型免疫原性組成物、その製造方法、およびその使用方法 | |
| KR101808903B1 (ko) | Pcv/마이코플라즈마 하이요뉴모니아/prrs 조합 백신 | |
| EP2992897B1 (en) | Immunogenic compositions comprising lawsonia intercellularis | |
| KR101818901B1 (ko) | 돼지흉막폐렴균의 재조합 ApxIA, ApxIIA, ApxIIIA toxin의 N 또는 C 말단 분자 및 불활화 돼지흉막폐렴균을 이용한 돼지 흉막폐렴 백신 조성물 | |
| JP2022519204A (ja) | 不活性化ａｐｘｉａ、ａｐｘｉｉａおよびａｐｘｉｉｉａ毒素 | |
| US7201912B2 (en) | Recombinant immunogenic compositions and methods for protecting against lethal infections from Bacillus anthracis | |
| US20170246286A1 (en) | Attenuated Mannheimia haemolytica Vaccines and Methods of Making and Use | |
| RU2750894C1 (ru) | Вакцина для защиты свиней от actinobacillus pleuropneumoniae | |
| JP2011239780A (ja) | フォトバクテリウム・ダムセラの蛋白質およびその使用 | |
| CN109195624B (zh) | Hev疫苗 | |
| JP2023517684A (ja) | ストレプトコッカス・スイス血清型９、配列型１６に対する防御のためのワクチン | |
| JP2721218B2 (ja) | ブタ赤痢ワクチン | |
| KR102336245B1 (ko) | 돼지 흉막폐렴균 사균체를 포함한 돼지 흉막폐렴 백신 조성물 | |
| RU2775916C2 (ru) | Вакцина для защиты от streptococcus suis | |
| JP7349366B2 (ja) | クロストリジウム類毒素を含むワクチン | |
| JP2023543033A (ja) | 弱毒化ブタ流行性下痢ウイルス | |
| CN112891524A (zh) | 猪肺炎支原体病亚单位疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
| KR20220133632A (ko) | Pedv 스파이크 단백질 s1 유래 단백질 및 페리틴 유래 단백질을 포함하는 재조합 단백질 및 이의 용도 | |
| KR20220056701A (ko) | 재조합 Apx IA-C-terminal, Apx IIA-C-terminal, Apx IIIA-C-terminal 및 Apx IVA-N-terminal 톡소이드를 포함하는 돼지 흉막 폐렴 백신 조성물 | |
| JP2024527138A (ja) | 様々な血清型のストレプトコッカス・スイスに対して保護するためのワクチン | |
| Yu et al. | Roles of Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase in Edwardsiella tarda Pathogenesis | |
| BRPI1003753A2 (pt) | composiÇÕes imunogÊnicas sinÉrgicas baseadas em antÍgenos protÉicos combinados com antÍgeno celular pertussis e toxinas inativadas |