RU2746424C1 - Способ выделения лектина бобов солодки гладкой - Google Patents
Способ выделения лектина бобов солодки гладкой Download PDFInfo
- Publication number
- RU2746424C1 RU2746424C1 RU2019135545A RU2019135545A RU2746424C1 RU 2746424 C1 RU2746424 C1 RU 2746424C1 RU 2019135545 A RU2019135545 A RU 2019135545A RU 2019135545 A RU2019135545 A RU 2019135545A RU 2746424 C1 RU2746424 C1 RU 2746424C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- licorice
- lectin
- precipitate
- smooth
- beans
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
- A61K36/484—Glycyrrhiza (licorice)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу выделения лектина бобов солодки гладкой, в котором высушенные и измельченные бобы солодки смешивают с буфером Трис-HCl и инкубируют полученную смесь при постоянном перемешивании, затем центрифугируют указанную смесь с получением осадка и надосадочной жидкости, отбрасывают полученный осадок и используют надосадочную жидкость для преципитации лектина бобов солодки гладкой 75-80% насыщения сульфата аммония с получением осадка, который подвергают гидрофобной хроматографии и высокоэффективной хроматографии на обращено-фазном носителе силисорб С-8 в градиенте ацетонитрила, и при концентрации ацетонитрила от 35 до 39% получают чистый препарат лектина бобов солодки гладкой. 4 ил., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно биохимии, и может быть использовано, в частности, для выделения лектина бобов солодки гладкой.
В практике известен способ получения обогащенной лектином бобов солодки гладкой фракции, основанный на экстракции растительного сырья специальным кальциево-магниевым буфером. Этим буферным раствором заливали приготовленное и высушенное растительной сырье в соотношение 1 : 5 в темные склянки, смесь постоянно перемешивали при температуре 20°С в течение 10 дней для экстракции биологически активных веществ (Сухенко Л.Т. Дикорастущие растения флоры юга России как источник ценных фитокомпонентов с противомикробными и биорегуляторными свойствами Дисс. доктора биол.наук. Астрахань 2012).
Недостатками этого способа являются:
- низкая чистота продукта,
- низкая эффективность и невысокий выход продукта;
- длительность проведения;
Целью представленного изобретения является повышение степени очистки и ускорение способа очистки лектина бобов солодки гладкой.
Указанный технический результат достигается тем, что выделение проводят, используя водно-солевой экстракт измельченных бобов солодки гладкой , а на последующих стадиях проводят преципитацию 75-80% сульфатом аммония, гидрофобную хроматографию и высокоэффективную хроматографию на обращеннофазном носителе силосорб С-8 в градиенте ацетонитрила и при концентрации ацетонитрила от 35 до 39% получают чистый препарат лектина бобов солодки гладкой.
Степень очистки лектина составила 117, а выход более 52 %. Всего из 1кг сухого порошка бобов солодки гладкой получено 523,0мг лектина, который до дальнейшего использования хранился при -24°С.
В доступной нам литературе способа очистки лектина бобов солодки гладкой до гомогенного состояния не известно.
Для выделения лектина собирали плоды солодки гладкой, которые созревают в конце августа, сентябре. Именно бобы солодки гладкой, по аналогии с горохом, фасолью и др. растениями наиболее богаты углеводсвязывающими протеинами [Гаммерман, А.Ф. Лекарственные растения. /А.Ф. Гаммерман. - М.: Высшая школа. - 1990. - 453с.], как показали гемагглютинационные тесты. Использовалось 1000 г высушенной и измельченной массы бобов солодки, собранной в сентябре 2017 г. в Красноярском районе Астраханской области. Химикаты и реагенты, используемые в работе, были аналитической степени чистоты. На первой стадии очистки высушенные и измельченные бобы солодки гладкой смешивали с 10 mM Tris-HCl, буфер pH 7,4 в соотношении 1:1, и инкубировали в течение 560-600 минут, при постоянном перемешивании. Далее указанную смесь центрифугировали в течение 20-30 минут при 8000 об/мин. Образовавшийся осадок отбрасывали. Полученную надосадочную жидкость использовали на следующей стадии очистки.
На второй стадии выделения лектина бобов солодки гладкой использовали надосадочную жидкость. Нами обнаружена способность лектина бобов солодки гладкой преципитировать в растворе сульфата аммония при 75-80% насыщения. Осадок проявлял гемагглютинирующую активность а надосадочная жидкость нет. Сущность поясняется рисунками, где:
Фиг.1. Гемагглютинационная активность лектина бобов солодки гладкой. Концентрация белка в лунках Ц выровнена до уровня 160 мкг / мл.
К(вертикальный ряд)-отрицательный контроль. Ряд 1-надосадочная жидкость после преципитации 80% насыщения сульфата аммония;
Ряд 2- осадок после преципитации 80% насыщения сульфата аммония;
Ряд 3 – очищенный препарат лектина бобов солодки гладкой;
Ряд 4 – исходный водно-солевой экстракт бобов солодки гладкой.
Фиг.2. Очистка лектина солодки гладкой. Гидрофобная хроматография бутирил-Toyoperl. Фракция 1 проявляет гемагглютинирующую активность.
Фиг.3. Обращеннофазная высокоэффективная жидкостная хроматография лектина бобов солодки гладкой. Колонка силосорб С-8 115,0х3,5 мм Элюцтя 0.1% ТФУ и градиент ацетонитрила от 0 до 60%. Пик 5 проявляет гемагглютинирующую активность.
Фиг.4. Электрофорез в полиакриламидном геле. А – водно-солевой экстракт бобов солодки гладкой; Б – фракция после осаждения сульфатом аммония из водно-солевого экстракта; В – Очищенный препарат лектина бобов солодки гладкой.
На третьей стадии осадок, полученный осаждением 75-80% сульфатом аммония подвергали гидрофобной хроматографии на бутирил-тойоперле в линейном градиенте сульфата аммония от 2М до 0 и далее промывка 0,1% тритоном Х-100. Фракции, проявлявшие гемагглютинационную активность, собирали и объединяли
На четвертой, заключительной стадии осуществлялась окончательная очистка лектина бобов солодки гладкой высокоэффективной жидкостной хроматографией на обращено-фазном носителе силосорб С8 в градиенте ацетонитрила. Лектин солодки гладкой, обладающий гемагглютинирующей активностью выходит во фракциях, соответствующих концентрации ацетонитрила от 35до 39%.
Далее в таблице 1. показаны этапы очистки лектина бобов солодки гладкой. Предложенный нами способ дает возможность получить электрофоретически чистый препарат лектина бобов солодки гладкой, повышает эффективность (повышает выход конечного продукта на 63,5%), сокращает время и упрощает очистку лектина бобов солодки гладкой по сравнению со способом (Сухенко Л.Т. Дикорастущие растения флоры юга России как источник ценных фитокомпонентов с противомикробными и биорегуляторными свойствами Дисс. доктора биол. наук, Астрахань 2012). В прототипе лектин бобов солодки гладкой получают в виде обагощенного экстракта, содержащего массу белковых примесей. Главное преимущество предлагаемого способа заключается в получении гомогенного препарата лектина бобов солодки гладкой с высокой степенью чистоты и высокой гемагглютинирующей способностью.
На фиг.4 показано, что препарат лектин бобов солодки гладкой гомогенен при электрофоретическом контроле чистоты.
Ниже приводятся результаты апробации.
Пример №1.
На первой стадии очистки высушенные и измельченные бобы солодки гладкой смешивали с 10 mM Tris-HCl, буфер pH 7,4 в соотношении 1:1, и инкубировали в течение 600 минут, при постоянном перемешивании. Далее указанную смесь центрифугировали в течение 30 минут при 8000 об/мин. Образовавшийся осадок отбрасывали. Надосадочную жидкость использовали на следующей стадии очистки.
На второй стадии выделения лектина бобов солодки гладкой использовали объединенную надосадочную жидкость. Нами обнаружена способность лектина бобов солодки гладкой преципитировать в растворе сульфата аммония при 75% насыщения. Осадок проявлял гемагглютинирующую активность, а надосадочная жидкость нет.
На третьей стадии осадок, полученный осаждением 75% сульфатом аммония подвергали гидрофобной хроматографии на бутирил-тойоперле в линейном градиенте сульфата аммония от 2М до 0 и далее промывка 0,1% тритоном Х-100. Фракции, проявлявшие гемагглютинационную активность, собирали и объединяли.
На четвертой, заключительной стадии осуществлялась окончательная очистка лектина бобов солодки гладкой высокоэффективной жидкостной хроматографией на обращеннофазном носителе силосорб С8 в градиенте ацетонитрила. Лектин солодки гладкой, обладающий гемагглютинирующей активностью выходит во фракциях, соответствующих концентрации ацетонитрила 35%. Полученный элюат диализовали и концентрировали до приемлемого объема (18 мл).
Пример №2
На первой стадии очистки высушенные и измельченные бобы солодки гладкой смешивали с 10 mM Tris-HCl, буфер pH 7,4 в соотношении 1:1, и инкубировали в течение 560 минут, при постоянном перемешивании. Далее указанную смесь центрифугировали в течение 20 минут при 8000 об/мин. Образовавшийся осадок отбрасывали. Надосадочную жидкость использовали на следующей стадии очистки.
На второй стадии выделения лектина бобов солодки гладкой использовали объединенную надосадочную жидкость. Нами обнаруженна способность лектина бобов солодки гладкой преципитировать в растворе сульфата аммония при 80% насыщения. Осадок проявлял гемагглютинирующую активность, а надосадочная жидкость нет.
На третьей стадии осадок, полученный осаждением 80% сульфатом аммония подвергали гидрофобной хроматографии на бутирил-тойоперле в линейном градиенте сульфата аммония от 2М до 0 и далее промывка 0,1% тритоном Х-100. Фракции, проявлявшие гемагглютинационную активность, собирали и объединяли.
На четвертой, заключительной стадии осуществлялась окончательная очистка лектина бобов солодки гладкой высокоэффективной жидкостной хроматографией на обращеннофазном носителе силосорб С8 в градиенте ацетонитрила. Лектин солодки гладкой, обладающий гемагглютинирующей активностью выходит во фракциях, соответствующих концентрации ацетонитрила 39%. Полученный элюат диализовали и концентрировали до приемлемого объема (16 мл).
Предложенный нами способ:
- позволяет получить электрофоретически гомогенный препарат лектина бобов солодки;
- повышает эффективность (повышает выход конечного продукта на 45%),
- сокращает время.
Claims (1)
- Способ выделения лектина бобов солодки гладкой, в котором высушенные и измельченные бобы солодки смешивают с буфером Трис-HCl и инкубируют полученную смесь при постоянном перемешивании, затем центрифугируют указанную смесь с получением осадка и надосадочной жидкости, отбрасывают полученный осадок и используют надосадочную жидкость для преципитации лектина бобов солодки гладкой 75-80% насыщения сульфата аммония с получением осадка, который подвергают гидрофобной хроматографии и высокоэффективной хроматографии на обращенно-фазном носителе силисорб С-8 в градиенте ацетонитрила, и при концентрации ацетонитрила от 35 до 39% получают чистый препарат лектина бобов солодки гладкой.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019135545A RU2746424C1 (ru) | 2019-11-05 | 2019-11-05 | Способ выделения лектина бобов солодки гладкой |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019135545A RU2746424C1 (ru) | 2019-11-05 | 2019-11-05 | Способ выделения лектина бобов солодки гладкой |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2746424C1 true RU2746424C1 (ru) | 2021-04-13 |
Family
ID=75521214
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019135545A RU2746424C1 (ru) | 2019-11-05 | 2019-11-05 | Способ выделения лектина бобов солодки гладкой |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2746424C1 (ru) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1009418B1 (en) * | 1997-08-29 | 2002-03-27 | Alizyme Therapeutics Limited | Robinia pseudoacacia lectin and its uses |
-
2019
- 2019-11-05 RU RU2019135545A patent/RU2746424C1/ru active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1009418B1 (en) * | 1997-08-29 | 2002-03-27 | Alizyme Therapeutics Limited | Robinia pseudoacacia lectin and its uses |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Баймиев А. Х. "Структура углеводсвязывающих участков лектина бобовых растений как детерминанта специфичности взаимодействия с клубеньковыми бактериями", авто, 2007, С.46. * |
Сухенко Л. Т. "Дикорастущие растения флоры юга России как источник ценных фитокомпонентов с противомикробными и биорегуляторными свойствами", диссертация, 2012, С. 387. * |
Сухенко Л. Т. "Дикорастущие растения флоры юга России как источник ценных фитокомпонентов с противомикробными и биорегуляторными свойствами", диссертация, 2012, С. 387. Баймиев А. Х. "Структура углеводсвязывающих участков лектина бобовых растений как детерминанта специфичности взаимодействия с клубеньковыми бактериями", автореферат, 2007, С.46. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ji et al. | Purification and identification of antioxidant peptides from peanut protein isolate hydrolysates using UHR-Q-TOF mass spectrometer | |
JP5728774B2 (ja) | 生物学的に活性な藻類毒素の工業的精製法 | |
CN108610274B (zh) | 一组环γ-聚谷氨酸系列分子及其制备方法和应用 | |
CN105254708B (zh) | 一种胡萝卜籽抗氧化三肽及其制备方法与应用 | |
CN113248568B (zh) | 具有神经元保护功能的富硒蛹虫草活性硒肽及其制备方法和应用 | |
US5445824A (en) | Physiological activating material extracted from coral sand | |
US6506414B2 (en) | Low molecular weight components of shark cartilage, processes for their preparation and therapeutic uses thereof | |
RU2746424C1 (ru) | Способ выделения лектина бобов солодки гладкой | |
CA1176193A (en) | Peptide, process for their preparation and pharmaceutical composition containing them | |
SU1228776A3 (ru) | Способ получени средства,селективно тормоз щего размножение нормальных и лейкемических клеток | |
EP0101063A2 (de) | Neues Polypeptid mit Wirkung auf das Immunsystem, Verfahren zu seiner Isolierung und Reinigung, seine Verwendung und dieses enthaltende Mittel | |
CN109503699A (zh) | 一种带鱼鱼肉降血压肽 | |
CN114773446B (zh) | 一种蜂毒肽及其分离纯化方法 | |
CN115894611B (zh) | 一种具有降血压活性的富硒辣木籽ace抑制肽及其应用 | |
JPH02167069A (ja) | スタフィロコッカス・エピデルミディスおよび医薬組成物 | |
CN107022593A (zh) | 一种富含脯氨酸多肽的初乳肽及其制备方法 | |
US9492486B2 (en) | Preparation of bee venom with allergenic components removed | |
CN113698309B (zh) | 一种从牛肝菌中提取分离甜菜碱脂的方法 | |
CN113845565B (zh) | 一种地龙生物活性小肽及其制备方法和应用 | |
SU624562A3 (ru) | Способ получени вещества, обладающего гормональным действием | |
SU710503A3 (ru) | Способ получени ацетилированных водорастворимых экстрактов, обладающих иммуностимулирующим действием | |
CN107641154B (zh) | 一种鱿鱼生物活性肽及其制备方法 | |
CN112574279A (zh) | 抗氧化亮胱赖肽及其制备方法与用途 | |
US4960756A (en) | Lectin like protein substance, method of obtaining same and anti-tumor agent comprising same | |
US4430264A (en) | Process for the preparation of a selective anorexogenic substance regulating food intake |