RU2740808C1 - System of oligonucleotide primers and probe for detecting dna mycoplasma bovis - Google Patents
System of oligonucleotide primers and probe for detecting dna mycoplasma bovis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2740808C1 RU2740808C1 RU2019125056A RU2019125056A RU2740808C1 RU 2740808 C1 RU2740808 C1 RU 2740808C1 RU 2019125056 A RU2019125056 A RU 2019125056A RU 2019125056 A RU2019125056 A RU 2019125056A RU 2740808 C1 RU2740808 C1 RU 2740808C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- mycoplasma bovis
- bovis
- primers
- bov1
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области микробиологии, биотехнологии и ветеринарии, и может быть использовано для диагностики заболеваний животных вирусной, бактериальной и др. этиологии, а также выявления носительства Mycoplasma bovis у крупного рогатого скота, контроля качества сырья для биотехнологической промышленности и материалов для исследовательской работы.The invention relates to the field of microbiology, biotechnology and veterinary medicine, and can be used to diagnose animal diseases of viral, bacterial and other etiology, as well as to identify the carriage of Mycoplasma bovis in cattle, quality control of raw materials for the biotechnological industry and materials for research work.
Сконструирована система, в состав которой входят пара олигонуклеотидных праймеров, комплементарных видоспецифичному участку в составе гена сахар-киназы Mycoplasma bovis, и обладающих активностью прямого и обратного праймера и имеющих структуруA system has been constructed, which includes a pair of oligonucleotide primers complementary to the species-specific region in the Mycoplasma bovis sugar kinase gene, and possessing forward and reverse primer activity and having the structure
M.bov1 F 5'-GAACTAAGATTGGCGTCAAGACA-3'M.bov1 F 5'-GAACTAAGATTGGCGTCAAGACA-3 '
M.bov1 R 5'-GTTGCTGCAAGCGACACTAA-3'M.bov1 R 5'-GTTGCTGCAAGCGACACTAA-3 '
и флуоресцентно меченный гидролизный зонд для идентификации ДНК Mycoplasma bovis в ходе реакции ПЦР в реальном времени, комплементарный видоспецифичному участку в составе гена сахар-киназы Mycoplasma bovis, расположенному в составе последовательности, фланкируемой вышеуказанными праймерами и имеющий структуруand a fluorescently labeled hydrolysis probe for identification of Mycoplasma bovis DNA during the real-time PCR reaction, complementary to the species-specific region in the Mycoplasma bovis sugar kinase gene, located in the sequence flanked by the above primers and having the structure
M.bov1 Pr 5'-FAM CAGGTCATTATAGTCAATAGATTCAGTA BHQ1-3'M.bov1 Pr 5'-FAM CAGGTCATTATAGTCAATAGATTCAGTA BHQ1-3 '
Использование разработанной системы праймеров и зонда позволяет идентифицировать М. bovis, дифференцировать ее от филогенетически близкородственных микоплазм М. bovigenitalium и детектировать в короткий срок с высокой чувствительностью и специфичностью ДНК этого возбудителя микоплазмоза в биологическом материале от крупного рогатого скота и сырье для биотехнологической промышленности и материалов для лабораторной исследовательской работы.The use of the developed system of primers and a probe makes it possible to identify M. bovis, differentiate it from phylogenetically closely related M. bovigenitalium mycoplasmas, and detect in a short time with high sensitivity and specificity of the DNA of this mycoplasmosis pathogen in biological material from cattle and raw materials for the biotechnological industry and materials for laboratory research work.
Изобретение может быть использовано в ветеринарии для выявления генетического материала одного из возбудителей микоплазмозов крупного рогатого скота - М. bovis, в целях диагностики ассоциированных с ним инфекционных заболеваний, выявления бессимптомного носительства и научных исследований.The invention can be used in veterinary medicine to identify the genetic material of one of the causative agents of mycoplasmosis in cattle - M. bovis, in order to diagnose associated infectious diseases, to identify asymptomatic carriage and scientific research.
Изобретение может применяться в биотехнологии для контроля контаминации сырья животного происхождения микоплазмами вида М. bovis, а также выявления М. bovis в сыворотках, являющихся реактивами для лабораторных исследований, связанных с работой с культурами клеток.The invention can be used in biotechnology to control the contamination of raw materials of animal origin with M. bovis mycoplasmas, as well as to detect M. bovis in sera, which are reagents for laboratory research associated with work with cell cultures.
М. bovis является возбудителем различных заболеваний взрослого крупного рогатого скота и телят ( S., 2015). Заболевания, связанные с данным патогеном, распространены во всем мире. При этом распространенность носительства, при котором колонизация организма М. bovis протекает бессимптомно, может быть значительной, например до 6% телят на животноводческих предприятиях, благополучных по бронхопневмониям молодняка могут быть носителями М. bovis (Kirkbride С.А., 1987). Данный патоген приводит к развитию маститов, бронхопневмоний, артритов и заболеваний репродуктивной системы. Часто отмечается сочетанное поражение различных органов и систем органов. Заболевания, вызываемые М. bovis тяжело поддаются лечению из-за чего часто приводят к выбраковке животных (Maunsell F.P., 2011).M. bovis is the causative agent of various diseases of adult cattle and calves ( S., 2015). Diseases associated with this pathogen are common throughout the world. At the same time, the prevalence of carriage, in which the colonization of the organism of M. bovis is asymptomatic, can be significant, for example, up to 6% of calves at livestock enterprises that are free from bronchopneumonia in young animals can be carriers of M. bovis (Kirkbride SA, 1987). This pathogen leads to the development of mastitis, bronchopneumonia, arthritis and diseases of the reproductive system. Combined damage to various organs and organ systems is often noted. Diseases caused by M. bovis are difficult to treat and often lead to culling of animals (Maunsell FP, 2011).
Также М. bovis может выступать в качестве контаминанта сырья биологического происхождения для биотехнологического производства, что может вести к производственному браку продукции предприятий отрасли.Also M. bovis can act as a contaminant of raw materials of biological origin for biotechnological production, which can lead to defective products of the industry.
Для культивирования М. bovis необходимы специализированные многокомпонентные среды, при этом ее фенотипическая дифференциация от близкородственных микоплазм вида М. bovigenitalium, вызывающих заболевания с более легким течением, затруднена.For the cultivation of M. bovis, specialized multicomponent media are needed, while its phenotypic differentiation from closely related mycoplasmas of the M. bovigenitalium species, which cause diseases with a milder course, is difficult.
Метод полимеразной цепной реакции в реальном времени является чувствительным и специфичным методом выявления ДНК М. bovis (Parker A.M., 2017). В основе данного метода лежит процесс специфической амплификации (накопления) фрагментов ДНК путем матричной репликации, осуществляемой с участием фермента ДНК-полимеразы. При этом процесс амплификации оценивается в ходе осуществления реакции (в реальном времени). В данном случае оценка проводится путем измерения накопления флуоресценции испускаемой флуорохромами, связанными с зондом в составе системы. Необходимым условием для испускания флуоресценции данными флуорохромами является разрушение зонда, происходящее при его связывании с комплементарной последовательностью в присутствии фермента ДНК-полимеразы. При этом активность расщепления зондов и освобождения флуорохромов находится в прямой зависимости от содержания целевых ампликонов в реакционной смеси.Real-time polymerase chain reaction is a sensitive and specific method for detecting M. bovis DNA (Parker A.M., 2017). This method is based on the process of specific amplification (accumulation) of DNA fragments by means of template replication, carried out with the participation of the DNA polymerase enzyme. In this case, the amplification process is evaluated during the reaction (in real time). In this case, the evaluation is carried out by measuring the accumulation of fluorescence emitted by fluorochromes associated with the probe in the system. A prerequisite for the emission of fluorescence by these fluorochromes is the destruction of the probe, which occurs when it binds to the complementary sequence in the presence of the DNA polymerase enzyme. In this case, the activity of the cleavage of probes and the release of fluorochromes is directly dependent on the content of the target amplicons in the reaction mixture.
Праймеры являются компонентами реакционной смеси, обеспечивающими специфичность реакции удвоения нуклеиновых кислот. Они представляют собой короткие олигонуклеотидные последовательности, получаемые путем химического синтеза. По своей структуре праймеры комплементарны высококонсервативным и высокоспецифичным последовательностям в составе целевой ДНК. В случае диагностики инфекционных заболеваний в качестве целевой ДНК выступает ДНК патогена, на идентификацию которого направлена диагностическая система. Зонды являются компонентами реакционной смеси, обеспечивающими специфическую детекцию целевого продукта. Они комплементарны участку последовательности целевых ампликонов и не вступают во взаимодействие с другими последовательностями ДНК в исследуемом материале.Primers are components of the reaction mixture that provide the specificity of the nucleic acid doubling reaction. They are short oligonucleotide sequences obtained by chemical synthesis. Structurally, the primers are complementary to highly conserved and highly specific sequences in the target DNA. In the case of the diagnosis of infectious diseases, the target DNA is the DNA of the pathogen, the identification of which the diagnostic system is aimed at. Probes are components of the reaction mixture that provide specific detection of the target product. They are complementary to a region of the target amplicon sequence and do not interact with other DNA sequences in the test material.
Специфичность реакции ПЦР в реальном времени является ее важной характеристикой, определяющей качество исследования. Наиболее принципиальным для обеспечения специфичности амплификации является выбор фрагмента для подбора праймеров и зонда, а также нуклеотидный состав этих коротких синтетических олигонуклеотидов.The specificity of the real-time PCR reaction is an important characteristic that determines the quality of the study. The most important for ensuring the specificity of amplification is the selection of a fragment for the selection of primers and probe, as well as the nucleotide composition of these short synthetic oligonucleotides.
Наиболее близким аналогом разработанной системы праймеров и зондов являются специфические системы олигонуклеотидных праймеров и зондов, фланкирующие фрагмент гена фактора элонгации Jus А (Boonyayatra S., 2012) и фрагмент гена белка, участвующего в репарации ДНК uvrC (Righter D.J., 2011, Gioia G., 2016). Сконструированные системы праймеров и зондов авторы использовали в ПЦР в реальном времени для идентификации М. bovis. Применение данных праймеров позволяло дифференцировать М. bovis как от М. bovigenitalium, так и от других микоплазм. Отличительной особенностью предлагаемой системы праймеров и зондов для выявления ДНК Mycoplasma bovis является выбор в качестве видоспецифической мишени в геноме микоплазм указанного вида фрагмента гена сахар-киназы.The closest analogs of the developed system of primers and probes are specific systems of oligonucleotide primers and probes flanking a fragment of the gene for the elongation factor Jus A (Boonyayatra S., 2012) and a fragment of the gene for the protein involved in DNA repair uvrC (Righter DJ, 2011, Gioia G., 2016). The authors used the designed systems of primers and probes in real-time PCR to identify M. bovis. The use of these primers made it possible to differentiate M. bovis from both M. bovigenitalium and other mycoplasmas. A distinctive feature of the proposed system of primers and probes for detecting Mycoplasma bovis DNA is the choice of the specified type of sugar kinase gene fragment as a species-specific target in the mycoplasma genome.
Целью настоящего изобретения является разработка системы олигонуклеотидных праймеров и зонда для идентификации М. bovis методом полимеразной цепной реакции в реальном времени.It is an object of the present invention to provide an oligonucleotide primer and probe system for identifying M. bovis by real-time polymerase chain reaction.
Цель достигается конструированием системы специфичных праймеров и зонда для идентификации ДНК одного из возбудителей микоплазмозов крупного рогатого скота М. bovis, имеющих следующую структуру:The goal is achieved by constructing a system of specific primers and a probe for identifying DNA of one of the pathogens of cattle mycoplasmosis M. bovis, having the following structure:
M.bov1 F 5'-GAACTAAGATTGGCGTCAAGACA-3'M.bov1 F 5'-GAACTAAGATTGGCGTCAAGACA-3 '
M.bov1 R 5'-GTTGCTGCAAGCGACACTAA-3'M.bov1 R 5'-GTTGCTGCAAGCGACACTAA-3 '
M.bov1 Pr 5'-FAM CAGGTCATTATAGTCAATAGATTCAGTA BHQ1-3'M.bov1 Pr 5'-FAM CAGGTCATTATAGTCAATAGATTCAGTA BHQ1-3 '
Характеристика олигонуклеотидных праймеров и участка амплифицируемой ДНК.Characterization of oligonucleotide primers and a region of amplified DNA.
На основе данных, представленных в базе GenBank NCBI (National Center for Biotechnology Information), были подобраны праймеры, обозначенные M.bov1 F и M.bov1 R, комплементарные фрагменту гена сахарк-иназы М. bovis и обладающие активностью прямого и обратного праймера. Также был подобран олигонуклеотидный зонд M.bov1, комплементарный участку последовательности генома М. bovis, находящемуся между участками, распознаваемыми праймерами M.bov1 F и M.bov1 R.Based on the data presented in the GenBank NCBI (National Center for Biotechnology Information), primers were selected, designated M.bov1 F and M.bov1 R, complementary to the M. bovis saccharinase gene fragment and possessing forward and reverse primer activity. An oligonucleotide probe M.bov1 complementary to the region of the M. bovis genome sequence located between the regions recognized by the primers M.bov1 F and M.bov1 R.
В качестве положительного контроля эксперименты проводили на клиническом материале от крупного рогатого скота, полученном при обследовании животных на животноводческих предприятиях, где были выявлены случаи бронхопневмонии телят и маститов с симптоматикой, характерной для инфекций, ассоциированных с М. bovis, используя для выделения ДНК мазки из носовой полости молодняка крупного рогатого скота и преддверия влагалища коров.As a positive control, experiments were carried out on clinical material from cattle obtained during the examination of animals at livestock enterprises, where cases of bronchopneumonia of calves and mastitis with symptoms characteristic of infections associated with M. bovis were detected, using nasal swabs to isolate DNA. cavities of young cattle and the vestibule of the sheath of cows.
Примеры конкретного выполнения.Examples of specific implementation.
Пример 1. Методика конструирования олигонуклеотидных праймеров и зонда для идентификации ДНК возбудителя микоплазмоза крупного рогатого скота М. bovis методом ПЦР в реальном времениExample 1. Procedure for the design of oligonucleotide primers and a probe for the identification of DNA of the causative agent of mycoplasmosis in cattle M. bovis by real-time PCR
На основании изучения секвенированных полногеномных последовательностей возбудителя микоплазмозов крупного рогатого скота М. bovis, представленных в международной базе данных Genbank для конструирования праймеров, была выбрана последовательность гена сахар-киназы М. bovis. Размер данного гена составляет составляет 899 п.н. (GenBank NCBI, СР038861.1). В составе указанного гена были выбраны специфические участки ДНК, имеющие нуклеотидные отличия от филогенетически близкородственного вида М. bovigenitalium и других микроорганизмов. Расчетная длина фрагмента ДНК, фланкируемого предлагаемыми праймерами составила 113 п. н.. К данному фрагменту была подобрана специфическая для М. bovis последовательность зонда.Based on the study of the sequenced whole genome sequences of the causative agent of mycoplasmosis in cattle M. bovis, presented in the international Genbank database for the design of primers, the sequence of the M. bovis sugar kinase gene was selected. The size of this gene is 899 bp. (GenBank NCBI, CP038861.1). As part of the specified gene, specific DNA regions were selected that have nucleotide differences from the phylogenetically closely related species M. bovigenitalium and other microorganisms. The estimated length of the DNA fragment flanked by the proposed primers was 113 bp. For this fragment, a specific for M. bovis probe sequence was selected.
С целью определения специфичности подобранной системы праймеров и зондов была проведена оценка гомологии распознаваемого ею участка сходным последовательностям в геномах других организмов in silico путем сравнения указанного участка с генетическими последовательностями, представленными в базе данных GenBank, с помощью алгоритма BLASTN на web-сервере Национального Центра Биотехнологической Информации (NCBI)In order to determine the specificity of the selected system of primers and probes, the homology of the region recognized by it was assessed in silico with similar sequences in the genomes of other organisms by comparing this region with genetic sequences presented in the GenBank database using the BLASTN algorithm on the web server of the National Center for Biotechnological Information (NCBI)
(http://www.ncbi.nlm.mh.gov/BLAST/). На момент проведения анализа in silico гомологии выявлено не было.(http://www.ncbi.nlm.mh.gov/BLAST/). At the time of the in silico analysis, no homology was found.
В качестве компонентов олигонуклеотидного зонда выбраны молекулы флуоресцеина (FAM) и BHQ-1. При этом фотоны, испускаемый флуоресцеином при возбуждении, имеют длину волны около 518 нм, а BHQ-1 обладает высокой способностью к поглощению фотонов с длинами волн данного диапазона.The molecules of fluorescein (FAM) and BHQ-1 were selected as components of the oligonucleotide probe. In this case, photons emitted by fluorescein upon excitation have a wavelength of about 518 nm, and BHQ-1 has a high ability to absorb photons with wavelengths of this range.
Пример 2. Амплификация специфических фрагментов ДНК возбудителя микоплазмоза крупного рогатого скота М. bovis с детекцией накопления специфического фрагмента ДНК методом ПЦР в реальном времени.Example 2. Amplification of specific DNA fragments of the causative agent of mycoplasmosis in cattle M. bovis with detection of the accumulation of a specific DNA fragment by real-time PCR.
С использованием разработанной системы праймеров и зондов были приготовлены реакционные смеси, включавшие по 10 пмоль каждого из компонентов системы для идентификации возбудителя микоплазмозов крупного рогатого скота М. bovis и другие компоненты, необходимые для проведения ПЦР в реальном времени.Using the developed system of primers and probes, reaction mixtures were prepared that included 10 pmol of each of the components of the system to identify the pathogen of mycoplasmosis in cattle M. bovis and other components required for real-time PCR.
Общий объем реакционной смеси 25 мкл на 1 пробу. Для его приготовления в пробирке смешивали следующие компоненты:The total volume of the reaction mixture is 25 μl per sample. To prepare it, the following components were mixed in a test tube:
Готовая смесь для ПЦР марки qPCRmix-HS (ООО "Евроген", Москва) - 5 мклReady mixture for PCR brand qPCRmix-HS (OOO "Evrogen", Moscow) - 5 μl
Праймер M.bov1 F (10 пМ/ мкл) - 1 мклPrimer M.bov1 F (10 pM / μl) - 1 μl
Праймер M.bov1 R (10 пМ/ мкл) - 1 мклPrimer M.bov1 R (10 pM / μl) - 1 μl
Зонд M.bov1 Pr (10 пМ/ мкл) - 1 мклM.bov1 Pr probe (10 pM / μl) - 1 μl
вода деионизированная - 15 мклdeionized water - 15 μl
исследуемая проба ДНК - 2 мкл.investigated DNA sample - 2 μl.
Условия проведения реакции для амплификатора «CFX96» (Bio-Rad, США): этап предварительной денатурации ДНК при 94°С - 5 мин, затем в течение 50 циклов - денатурация ДНК при 94°С - 15 сек; отжиг праймеров при 60°С - 30 сек; элонгация цепи при 70°С - 30 сек. Оценка уровня флуоресценции в пробе проводилась в конце каждого цикла. При наличии в пробе ДНК М. bovis отмечался рост флуоресценции в ходе прохождения реакции (фиг. 1).The reaction conditions for the CFX96 amplifier (Bio-Rad, USA): the stage of preliminary DNA denaturation at 94 ° C - 5 min, then within 50 cycles - DNA denaturation at 94 ° C - 15 sec; annealing of primers at 60 ° С - 30 sec; chain elongation at 70 ° C - 30 sec. The assessment of the level of fluorescence in the sample was carried out at the end of each cycle. In the presence of M. bovis DNA in the sample, an increase in fluorescence was noted during the course of the reaction (Fig. 1).
Пример 3. Определение специфичности реакции амплификации с помощью разработанных олигонуклеотидных праймеров и зонда для идентификации ДНК возбудителя микоплазмоза крупного рогатого скота М. bovis.Example 3. Determination of the specificity of the amplification reaction using the developed oligonucleotide primers and a probe for identifying DNA of the causative agent of mycoplasmosis in cattle M. bovis.
Специфичность реакции определяли путем постановки реакции с клиническими образцами, содержащими ДНК близкородственных патогенов крупного рогатого скота М. bovigenitalium и Ureaplasma diversum, а также образцами ДНК, выделенной из культур близкородственных патогенов человека М. hominis, U. parvum и U. urealyticum.The specificity of the reaction was determined by staging a reaction with clinical samples containing DNA from closely related pathogens of cattle M. bovigenitalium and Ureaplasma diversum, as well as samples of DNA isolated from cultures of closely related human pathogens M. hominis, U. parvum and U. urealyticum.
Выделение ДНК из клинических образцов проводили путем сорбции на кремниевых частицах, ДНК из культур микроорганизмов выделяли путем термического разрушения. Постановку реакции ПЦР осуществляли, как описано в примере 2. При постановке ПЦР с материалом, содержащим ДНК близкородственных микроорганизмов накопления продукта не отмечалось (фиг. 2).Isolation of DNA from clinical samples was carried out by sorption on silicon particles; DNA from cultures of microorganisms was isolated by thermal destruction. The PCR reaction was carried out as described in example 2. When the PCR was performed with the material containing the DNA of closely related microorganisms, the accumulation of the product was not observed (Fig. 2).
Таким образом, разработанная система праймеров и зонда, отличающаяся от аналогов тем, что в качестве мишени используется видоспецифическая последовательность гена сахар-киназы, может быть использована для идентификации М. bovis, позволяет дифференцировать его от близкородственного вида М. bovigenitalium и детектировать в короткий срок с высокой чувствительностью и специфичностью ДНК этого возбудителя микоплазмозов крупного рогатого скота в биологическом материале от животных, а также в биологическом сырье животного происхождения и продуктах на его основе.Thus, the developed system of primers and probe, which differs from analogs in that the species-specific sequence of the sugar kinase gene is used as a target, can be used to identify M. bovis, allows it to be differentiated from the closely related species M. bovigenitalium and detect it in a short time with high sensitivity and specificity of the DNA of this causative agent of mycoplasmosis in cattle in biological material from animals, as well as in biological raw materials of animal origin and products based on it.
Claims (4)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019125056A RU2740808C1 (en) | 2019-08-06 | 2019-08-06 | System of oligonucleotide primers and probe for detecting dna mycoplasma bovis |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019125056A RU2740808C1 (en) | 2019-08-06 | 2019-08-06 | System of oligonucleotide primers and probe for detecting dna mycoplasma bovis |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2740808C1 true RU2740808C1 (en) | 2021-01-21 |
Family
ID=74213090
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019125056A RU2740808C1 (en) | 2019-08-06 | 2019-08-06 | System of oligonucleotide primers and probe for detecting dna mycoplasma bovis |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2740808C1 (en) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2435852C1 (en) * | 2010-06-07 | 2011-12-10 | Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии) | OLIGONUCLEOTIDE PRIMERS AND METHOD OF DETECTING DNA OF Mycobacterium paratuberculosis THAT IS PARATUBERCULOSIS AGENT BY METHOD OF POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) |
-
2019
- 2019-08-06 RU RU2019125056A patent/RU2740808C1/en active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2435852C1 (en) * | 2010-06-07 | 2011-12-10 | Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии) | OLIGONUCLEOTIDE PRIMERS AND METHOD OF DETECTING DNA OF Mycobacterium paratuberculosis THAT IS PARATUBERCULOSIS AGENT BY METHOD OF POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
N.I. POTAPOVA. and others. Development of a test system based on polymerase chain reaction (PCR) in real time for differential diagnosis of mycobacteria, RUDN Bulletin, Medicine Series, Specialty "Pharmacy", N4, 2004, p.300-308. * |
RAM DULAR et al. Camparison of Gen-Probe commercial kit and culture technigue for the diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infection, Journal of clinical Microbiology, May 1988, p.1068-1069. * |
ПОТАПОВА Н.И. и др. Разработка тест-системы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени для дифференциальной диагностики микобактерий, Вестник РУДН, Серия Медицина, Специальность "Фармация", N4, 2004, с.300-308. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Li et al. | Rapid detection of Brucella spp. and elimination of carryover using multiple cross displacement amplification coupled with nanoparticles-based lateral flow biosensor | |
Pusterla et al. | Real‐time polymerase chain reaction: a novel molecular diagnostic tool for equine infectious diseases | |
CN111286559B (en) | Primer, probe and kit for detecting African swine fever virus | |
Léon et al. | Identification of pathogenic Leptospira strains in tissues of a premature foal by use of polymerase chain reaction analysis | |
Gupta et al. | Recombinase polymerase amplification assay combined with a dipstick-readout for rapid detection of Mycoplasma ovipneumoniae infections | |
CN101613751A (en) | The PCR kit for fluorescence quantitative of rapid detection toxoplasma gondii | |
Li et al. | Visual and rapid detection of Leptospira interrogans using multiple cross-displacement amplification coupled with nanoparticle-based lateral flow biosensor | |
RU2486255C1 (en) | OLIGONUCLEOTIDES AND METHOD OF DETERMINING DNA OF BACTERIA BELONGING TO FAMILY Chlamydiaceae | |
CN108531660A (en) | A kind of 3 type real-time quantitative LAMP primer of detection pig circular ring virus, kit and application | |
RU2740808C1 (en) | System of oligonucleotide primers and probe for detecting dna mycoplasma bovis | |
RU2715333C1 (en) | Kit of reagents for detection and identification of dna of brucellosis agents by real-time polymerase chain reaction om-screen-brucellosis-rv | |
CN109762910B (en) | Primer and kit for simultaneously detecting two types of echinococcosis | |
Nour et al. | Amplification of P1 and 16S rRNA genes by nested PCR for detection of Mycoplasma pneumoniae in paediatric patients | |
KR101236197B1 (en) | Differential detection of West nile virus and Japanese encephalitis virus | |
WO2021039777A1 (en) | Method for examining rheumatoid arthritis | |
CN114395643A (en) | Double-channel digital PCR detection kit and method for African swine fever virus | |
RU2732626C1 (en) | System of oligonucleotide primers and probe for detecting dna mycoplasma bovigenitalium | |
JP5205609B2 (en) | Oligonucleotide set for virus detection, EBV, CMV and HHV-6 analysis method and detection kit | |
Nemoto et al. | Loop-mediated isothermal amplification assays for detection of Equid herpesvirus 1 and 4 and differentiating a gene-deleted candidate vaccine strain from wild-type Equid herpesvirus 1 strains | |
Zhao et al. | Development of a multiplex qRT-PCR assay for detection of classical swine fever virus, African swine fever virus, and Erysipelothrix rhusiopathiae | |
CN113549709A (en) | Primer pair, probe and kit for detecting SARS-CoV-2 by utilizing nested RPA technology and application thereof | |
CN111172320A (en) | Detection primer, kit and method for respiratory syncytial virus F gene | |
Osinska et al. | HybProbes-based real-time PCR assay for rapid detection of equine herpesvirus type 2 DNA | |
RU2756474C1 (en) | Test system for detection of sars-cov-2 virus rna in biomaterial from animals, food and environmental objects by the polymerase chain reaction method in real time | |
RU2700477C1 (en) | Test system for detecting the genome of the causative agent of bordetella bronchiseptica dna in farm livestock |