RU2732611C1 - Продуцент кортизола - Google Patents

Продуцент кортизола Download PDF

Info

Publication number
RU2732611C1
RU2732611C1 RU2019132574A RU2019132574A RU2732611C1 RU 2732611 C1 RU2732611 C1 RU 2732611C1 RU 2019132574 A RU2019132574 A RU 2019132574A RU 2019132574 A RU2019132574 A RU 2019132574A RU 2732611 C1 RU2732611 C1 RU 2732611C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cortisol
bacillus cereus
strain
producer
microorganisms
Prior art date
Application number
RU2019132574A
Other languages
English (en)
Inventor
Сергей Анатольевич Петров
Андрей Михайлович Субботин
Елена Геннадиевна Костоломова
Татьяна Владимировна Акунеева
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр Тюменский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук
Андрей Михайлович Субботин
Сергей Анатольевич Петров
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр Тюменский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук, Андрей Михайлович Субботин, Сергей Анатольевич Петров filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр Тюменский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук
Priority to RU2019132574A priority Critical patent/RU2732611C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2732611C1 publication Critical patent/RU2732611C1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/085—Bacillus cereus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Предложено средство для получения кортизола - штамм Bacillus cereus ВКПМ В-12401, продуцирующий глюкокортикостероиды. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств для получения кортизола, используемого в биологических препаратах. 1 табл.

Description

Изобретение относится к области микробиологии. Штамм Bacillus cereus 9-08-СН9 №-12401 может быть использован для получения кортизола.
Кортизол относится к группе глюкокортикоидов. В основном их получают синтетическим и полусентетическим путем (Лавин Н. Эндокринология. Практическое руководство Москва. - "Практика". - 1999. - 1128 с).
Известны микробиологические способы получения кортизола с использованием гриба Tieghemella orchidie шт. 233 (Патент №370229), Mycobaterium globiforme 193 (Патент № SU(11)376440), Arthrobacter globiformis 193 (Патент №2156302), Arthrobacter, Corynebacterium, Bacillus, Nocardia, Streptomyces и др. (Charney W., Herzog H. Microbial transformation of Steroids. Academic Press. Inc. New York. 1967, pp.236-261), Nocardioides simplex BKM Ас-2033Д (Патент № RU 2447154).
Во всех приведенных выше патентах получение конечного клюкокортикоида достигается микробиологической биотрансформацией стероидов, введенных в питательную среду различных микроорганизмов. По завершению процесса биотрансформации конечный продукт выделяют различными биохимическими методами. Сами микроорганизмы, используемые для биотрансформации стероидов, осуществляют дегидрирование стероидов и не являются продуцентами глюкокортикостероидов.
Задачей изобретения является получение средства для продуцирования кортизола.
Указанная задача решается тем, что в качестве продуцента кортизола используется выделенный из образцов многолетнемерзлых пород галоценового периода штамм бактерий Bacillus cereus 9-08-СН9.
Штамм Bacillus cereus 9-08-СН9 идентифицирован и депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУПГосНИИГенетика за № В-12401 (копия справки о депонировании прилагается). Штамм Bacillus cereus 9-08-СН9 выделен из многолетнемерзлых пород (серого ожелезненного песка ниже торфяного горизонта, глубина места отбора пробы 2 м ниже берегового растительного покрова) правого берега реки Чара на 9 км выше по течению реки от поселка Новая Чара (Читинская обл.), координаты: N560 45, 688', Е 1180 11, 440'.
Штамм Bacillus cereus 9-08-СН9 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.
Культурально-морфологические особенности штамма Bacillus cereus 9-08-СН9. Колонии на ГРМ-агаре матовые, шероховатые, мелкие, с неровным краем. Грамположительные палочки имеют центральное расположение споры.
Условия и состав сред для выращивания штамма Bacillus cereus 9-08-СН9. Культивирование указанного штамма осуществляют в термостате посевом клеток бактерий штрихом в стандартные пробирки на скошенный питательный агар для культивирования микроорганизмов (ГРМ-агар (г. Оболенск, ТУ 9398-020-78095326-2006)) или питательный агар для культивирования широкого спектра микроорганизмов (ООО «НПЦ «Биокомпас-С», г. Углич, ТУ 9385-001-64786015-2012)) в аэробных условиях, в термостате при t° от +25 до +36°С 18-24 часа. Все работы по культивированию осуществляют при соблюдении стерильности.
Физиолого-биохимические особенности штамма Bacillus cereus 9-08-СН9: каталаза+, оксидаза+, рост на ЖСА+, лецитиназа-, желатиназа-, кровяной агар+, гемолиз+, МПБ+, МПА+, анаэробный рост-, рост на нитратной среде+, глюкоза K+, арабиноза K+, ксилоза K+, крахмал-, казеин+, восстановление нитратов+, сероводород-, индол-.
Чувствительность к антибиотикам штамма Bacillus cereus 9-08-СН9 № В-12401. Заявляемый штамм чувствителен к пенициллину, эритромицину, налидиксовой кислоте, линкомицину, устойчив к стрептомицину.
Срок хранения высеянного в пробирки на питательную среду штамма Bacillus cereus 9-08-СН9 № В-12401 в холодильнике (2°С - 5°С) 2 месяца.
Штамм бактерий Bacillus cereus 9-08-СН9 № В-12401 не является зоопатогенным или фитопатогенным.
Достижение указанного технического результата изобретения проводилось следующим образом.
Культивирование штамма бактерий Bacillus cereus 9-08-СН9 осуществляли по описанной ниже методике. Штамм бактерий высевали штрихом в пробирки на скошенный, приготовленный стандартным методом, питательный агар (ГРМ-агар, г. Оболенск, ТУ 9398-020-78095326-2006) и культивировали в термостате 48 часа при t=26°С. Затем производили смыв микроорганизмов из каждой пробирки 5 мл дистиллированной воды. Концентрацию микроорганизмов определяли культуральным методом серийных разведений по количеству КОЕ на агаризованной питательной среде в чашках Петри (Герхард, 1984). После определения количества клеток бактерий Bacillus cereus 9-08-СН9 в исходной маточной суспензии плотность культур доводили до рабочей концентрации в 1-3 × 109 КОЕ в 1 мл стерильной дистиллированной воды. Суспензию бактериальных клеток в дистиллированной воде инкубировали в термостате при t = 26°С в течение 3х суток, после чего ее центрифугировали при 3000 об/мин в течение 30 минут.
Определение кортизола осуществляли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). По данным С.Д. Зайко. ведущего специалиста по продукции ЗАО «АНАЛИТИКА», сравнительные исследования показывают высокую степень корреляции результатов ИФА с данными, полученными методом высокоэффективной жидкостной и газовой хроматографии (Определение биогенных аминов в лабораторной практике. С.Д. Зайко / Клинико-лабораторный консилиум, 2009, том 4 (29), с. 54-60.)
Для определения кортизола использовали «Набор реагентов для иммуноферментного определения концентрации кортизола в сыворотке крови», КОРТИЗОЛ-ИФА-БЕСТ, набор реагентов Х-3964, производства АО «ВЕКТОР-БЕСТ», г. Новосибирск. Инструкция по применению утверждена 03.03.2011, Приказом Росздравнадзора №960-Пр/11.
Определение концентрации кортизола в супрнатанте клеток бактерий Bacillus cereus 9-08-СН9 производилась в четырех независимых пробах.
Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью программы «SPSS ver. 11.5. for Windows».
Результаты измерений концентрации кортизола приведены в таблице 1.
Figure 00000001
Референтное значение содержания кортизола в сыворотке крови здорового человека 160-670 нмоль/л
Результаты определения концентрации кортизола в супернатанте клеток бактерий Bacillus cereus 9-08-СН9 показали, что они находятся на уровне референтных значений концентраций данных веществ в биологических жидкостях здорового человека.
Заявленное изобретение позволяет использовать штамм Bacillus cereus 9-08-СН9 в разработке биотехнологических процессов в качестве продуцента кортизола и для создания биопрепаратов на его основе с направленным действием.
Приведенные результаты исследования подтверждают достижение технического результата и соответствие заявленного штамма критериям новизна, изобретательский уровень, промышленная применимость.

Claims (1)

  1. Применение штамма Bacillus cereus 9-08-СН9, депонированного во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУПГосНИИГенетика под номером В-12401, для получения кортизола.
RU2019132574A 2019-10-14 2019-10-14 Продуцент кортизола RU2732611C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019132574A RU2732611C1 (ru) 2019-10-14 2019-10-14 Продуцент кортизола

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019132574A RU2732611C1 (ru) 2019-10-14 2019-10-14 Продуцент кортизола

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2732611C1 true RU2732611C1 (ru) 2020-09-21

Family

ID=72922250

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019132574A RU2732611C1 (ru) 2019-10-14 2019-10-14 Продуцент кортизола

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2732611C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2817849C1 (ru) * 2023-05-25 2024-04-22 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Тюменский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ТюмНЦ СО РАН) Штамм Bacillus megaterium 2-06-TS1 - продуцент кортизола

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2644190C1 (ru) * 2016-10-25 2018-02-08 Вячеслав Владимирович Коллеров Микробиологический способ получения 17α-ацетата гидрокортизона из 17 α,21-диацетата кортексолона
CN109097343A (zh) * 2018-08-09 2018-12-28 中国科学院天津工业生物技术研究所 新月弯胞霉中甾类11β-羟化酶及其编码基因与应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2644190C1 (ru) * 2016-10-25 2018-02-08 Вячеслав Владимирович Коллеров Микробиологический способ получения 17α-ацетата гидрокортизона из 17 α,21-диацетата кортексолона
CN109097343A (zh) * 2018-08-09 2018-12-28 中国科学院天津工业生物技术研究所 新月弯胞霉中甾类11β-羟化酶及其编码基因与应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
COLINGSWORTH D.R. et al.,"A partial microbiological synthesis of hydrocortisone".//J. Biological Chemistry, 1953, N 203, p.807-813. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2817849C1 (ru) * 2023-05-25 2024-04-22 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Тюменский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ТюмНЦ СО РАН) Штамм Bacillus megaterium 2-06-TS1 - продуцент кортизола

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wagener et al. Monoxenic culture of the anaerobic ciliate Trimyema compressum Lackey
CN114990028B (zh) 一种高产短链脂肪酸的丁酸梭菌及其应用
Fiertel et al. On sterols in bacteria
Nishida et al. Isolation of toxigenic strains of Clostridium novyi from soil
RU2732611C1 (ru) Продуцент кортизола
Piersimoni et al. Multicenter evaluation of the MB-Redox medium compared with radiometric Bactec system, Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT), and Löwenstein-Jensen medium for detection and recovery of acid-fast bacilli
RU2817849C1 (ru) Штамм Bacillus megaterium 2-06-TS1 - продуцент кортизола
RU2732622C1 (ru) Штамм Bacillus cereus - продуцент серотонина
Delille Seasonal changes of subantarctic heterotrophic bacterioplankton.
RU2737557C1 (ru) Продуцент дофамина
Postgate Sulfate-free growth of Clostridium nigrificans
CN107523522A (zh) 一株产石杉碱甲和石杉碱乙的解淀粉芽孢杆菌sxz‑n2菌株及用途
Srividya et al. Study of the soil isolates for antimicrobial activity
JPH03244387A (ja) スタウロスポリン発酵法
Kalfas et al. Identification procedures for oral Actinomyces species
Bicknell et al. The rapid identification of enteric organisms by microtechnique
RU2726653C2 (ru) Штамм бактерий Lactobacillus salivarius - продуцент ингибитора цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17
RU2696029C1 (ru) Штамм Streptomyces iakyrus Pe6 ВКПМ Ас-2084 - продуцент антибиотика нибомицина
US3816250A (en) Methane oxidizing bacterial strain m 102, a method for obtaining it and a method for synthesizing protein with it
RU2299440C1 (ru) Способ определения гистидиндекарбоксилазной активности бактерий (варианты)
CN1766081A (zh) 海绵共生微生物混合培养及可培养种群监测方法
JP2757274B2 (ja) 細菌検出法
Kyaw et al. GROWTH CONDITIONS AND OPTIMIZATION PARAMETERS OF FERMENTATION OF SELECTED SOIL BACTERIUM KM-39
Peduzzi et al. Seasonal changes of microbial populations in the sediments of the basins of Lugano and Agno
CN115247131A (zh) 深绿木霉及代谢产物和应用