RU2726653C2 - Штамм бактерий Lactobacillus salivarius - продуцент ингибитора цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17 - Google Patents
Штамм бактерий Lactobacillus salivarius - продуцент ингибитора цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2726653C2 RU2726653C2 RU2019145399A RU2019145399A RU2726653C2 RU 2726653 C2 RU2726653 C2 RU 2726653C2 RU 2019145399 A RU2019145399 A RU 2019145399A RU 2019145399 A RU2019145399 A RU 2019145399A RU 2726653 C2 RU2726653 C2 RU 2726653C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- interleukin
- lactobacillus salivarius
- inhibitor
- cytokine
- icis
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к микробиологии. Предлагается штамм бактерий Lactobacillus salivarius, обладающий способностью продуцировать ингибитор цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17, депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора» под коллекционным номером 1272. Изобретение направлено на получение нового штамма, обеспечивающего повышение продуктивности ингибитора цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17. 1 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к микробиологии. Штамм бактерий Lactobacillus salivarius ICIS-540 может быть использован для получения ингибитора цитокинов интерлейкина-6 (IL-6) и интерлейкина-17 (IL-17).
Аналогов изобретения в патентной и научно-технической литературе не обнаружено.
Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в получении средства для продуцирования ингибитора цитокинов IL-6 и IL-17.
Указанный технический результат, достигнут тем, что получен новый штамм Lactobacillus salivarius ICIS-540.
Штамм Lactobacillus salivarius ICIS-540 выделен из испражнений пациента с дисбактериозом кишечника при обследовании микробиоценоза дистального отдела толстого кишечника в 2015 году в лаборатории биомониторинга и молекулярно-генетических исследований Института клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук г. Оренбурга.
Полученный штамм Lactobacillus salivarius ICIS-540 депонирован в Государственной коллекции нормальной микрофлоры (ГКНМ) ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора» и имеет регистрационный номер 1272.
Штамм Lactobacillus salivarius ICIS-540 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.
Культурально-морфологические признаки.
Грамположительные прямые бесспоровые палочки, располагающиеся поодиночке или в виде цепочек из 2-4 и более клеток или поодиночке. Величина клеток 18-часовой культуры в молоке составляет 10-20 мкм. Клетки равномерно окрашиваются по Граму.
При выращивании на агаре с гидролизованным молоком через 48-72 ч роста штаммы образуют «локонообразные» колонии на поверхности агара и колонии в виде «паучков» в глубине агара. Диаметр колоний - 1-2 мм.
При культивировании на среде МРС-5 и Schaedler-arap в анаэробных или микроаэрофильных условиях через 48-72 ч штаммы образуют круглые без четких границ колонии.
Физиолого-биохимические признаки.
Факультативный анаэроб, микроаэрофил; растет в присутствии азота и углекислого газа в атмосфере.
Температурный диапазон роста 38±1°С, фаза максимального накопления микробных клеток заканчивается к 24-48 ч. Оптимум рН 7,2-7,6.
Ферментирует без образования газа глюкозу, рамнозу, сахарозу, галактозу, лактозу, слабо - сорбит, мальтозу, салицин, магнит. Восстанавливает лакмусовое молоко, образует аммиак аргинина.
Условия хранения лиофильно высушенной культуры: в герметичной упаковке при температуре 4±2°С в защищенном от прямых солнечных лучей месте при относительной влажности воздуха не более 70%. При соблюдении всех норм, срок хранения 12 месяцев.
Условия и состав сред для размножения:
- плотные среды: МРС-5, Schaedler-arap (48-72 часов, 38±1°С, анаэробные условия) и агар с гидролизованным молоком (48 часов 38±1°С, анаэробные условия);
- Schaedler - бульон (24-48 часов, 38±1°С, анаэробные условия).
При проведении полногеномного секвенирования, включая 16rRNA-типирование штамм Lactobacillus salivarius ICIS-540 идентифицирован как штамм вида Lactobacillus salivarius.
Уровень активности продуцируемого Lactobacillus salivarius ICIS-540 ингибитора провоспалительных цитокинов IL-6 и IL-17 определяют согласно известному способу определения антицитокиновой активности микроорганизмов (Бухарин О.В. и др. Антицитокиновая активность микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2011 - №4, С. 56-61).
Уровень активности ингибитора цитокинов IL-6 и IL-17, продуцируемого штаммом Lactobacillus salivarius ICIS-540 выражают в процентах (%) инактивации цитокинов в опыте по сравнению с контролем.
Примеры осуществления изобретения.
Пример 1.
Бульонную культуру Lactobacillus salivarius ICIS-540 получают выращиванием данного штамма в пробирках в жидкой питательной среде следующего состава: гидролизат казеина - 5,67 г.; протеозопептон - 5,00 г.; папаиновый перевар соевой муки - 1,00 г.; дрожжевой экстракт - 5,00 г.; глюкоза - 5,83 г.; NaCl - 1,67 г.; калия гидрофосфат - 0,83 г.; трис - 3,00 г.; L-цистин - 0,40 г.; гемин - 0,01 г. рН=7,6±0,2. Температура 38±1°С, время инкубации 24-48 часа в анаэробных условиях. Полученную бульонную культуру Lactobacillus salivarius ICIS-540 центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 20 минут.
Культуральную жидкость отделяют от бактериальных клеток стеклянной стерильной пипеткой в отдельную емкость. Данная культуральная жидкость представляет собой неочищенный препарат ингибитора провоспалительных цитокинов IL-6 и IL-17.
Наличие и уровень активности полученного неочищенного препарата ингибитора провоспалительных цитокинов интерлейкина-6 (IL-6) и интер-лейкина-17 (IL-17) определяют следующим образом: супернатант Lactobacillus salivarius ICIS-540 соинкубируют с растворами рекомбинантных цитокинов («Sigma», IL-6 и IL-17) в соотношении 1:1 (опытные пробы).
В качестве контрольных проб используют растворы цитокинов IL-6 и IL-17, внесенные в Schaedler-бульон (BBL, США).
Конечная концентрация цитокинов IL-6 и IL-17 в опытных и контрольных пробах составляла - 25, 75, 150, 300 пг/мл.
Опытные и контрольные пробы инкубируют в течение 2 часов (37°С), реакцию останавливают на холоду, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин (+4°С) и отбирают супернатант.
Определение концентрации цитокинов в опытных и контрольных пробах проводят общепринятым иммуноферментным анализом с использованием реагентов «Цитокин» (СП-б, Россия).
Учет результатов проводили на фотометре Multiskan Labsystems (Финляндия) при длине волны 492 нм.
О наличии продуцируемого штаммом Lactobacillus salivarius ICIS-540 ингибитора провоспалительных цитокинов IL-6 и IL-17 судили по способности его супернатанта снижать концентрацию рекомбинантных цитокинов в опыте по сравнению с контролем.
Уровень активности продуцируемого Lactobacillus salivarius ICIS-540 ингибитора провоспалительных цитокинов IL-6 и IL-17 определяли согласно известному способу определения антицитокиновой активности микроорганизмов (Бухарин О.В. и др. Антицитокиновая активность микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2011 - №4, С. 56-61).
Уровень активности ингибитора провоспалительных цитокинов, продуцируемого штаммом Lactobacillus salivarius ICIS-540, составил в отношении цитокина IL-6 при концентрации цитокина в среде 20-75 пг/мл - 100%, 150 пг/мл - 65% и при 300 пг/мл - 50%, а в отношении цитокина IL-17 при концентрации цитокина в среде 20-75 пг/мл - 100%, 150 пг/мл - 70% и при 300 пг/мл - 50%.
Пример 2.
Аналогично примеру 1 проводили эксперименты по определению наличия и уровня активности ингибитора провоспалительных цитокинов ин-терлейкина-6 (IL-6) и интерлейкина-17 (IL-17), продуцируемого штаммом Lactobacillus salivarius ICIS-540 и клиническими изолятами Lactobacillus spp. (L. salivarius 1-9), выделенных из кишечного биотопа.
Результаты исследований приведены в таблице.
Как видно из таблицы, штамм бактерий Lactobacillus salivarius ICIS-540 имеет 100% уровень активности ингибитора провоспалительных цитокинов IL-6 и IL-17 при концентрации цитокинов в среде от 25 до 75 пг/мл, как в отношении цитокина IL-6, так и цитокина IL-17.
У клинических изолятов лактобактерий (L. salivarius 1-9) уровень активности ингибитора провоспалительных цитокинов IL-6 и IL-17 в отношении цитокина IL-6 в среднем составлял при концентрации цитокина в среде 25 пг/мл - 63,3±1,1%, при 75 пг/мл - 15,8±1,0. При создании концентрации цитокина в среде 150 пг/мл среди клинических изолятов лактобактерий только два штамма (L. salivarius 4 и 7) ингибировали в среднем 10,0±1,2% цитокина, при 300 пг/мл активность наблюдалась только у L. salivarius 7-10%, а в отношении цитокина IL-17 в среднем составлял при концентрации цитокина в среде 25 пг/мл - 67,22±3,2%, при 75 пг/мл - 30,8±1,6%. При создании концентрации цитокина в среде 150 пг/мл среди клинических изолятов лактобактерий только три штамма (L. salivarius 2, 4 и 7) ингибировали в среднем 13,3±1,1% цитокина, при 300 пг/мл активность наблюдалась только у L. salivarius 7-5%.
Высокий уровень активности ингибитора провоспалительных цитокинов IL-6 и IL-17, продуцируемого штаммом Lactobacillus salivarius ICIS-540, сохранялся и при более высоких концентрациях цитокинов: при 150 пг/мл его активность составляла 65 и 75%, соответственно, а при 300 пг/мл уровень активности был равен 50% в отношении обоих цитокинов IL-6 и IL-17, что свидетельствует о большей продуктивности ингибитора провоспалительных цитокинов IL-6 и IL-17 заявляемым штаммом Lactobacillus salivarius ICIS-540 по сравнению с клиническими изолятами Lactobacillus spp.
Таким образом, заявляемый штамм бактерий Lactobacillus salivarius ICIS-540 может быть использован в качестве продуцента ингибитора провоспалительных цитокинов интерлейкина-6 (IL-6) и интерлейкина-17 (IL-17).
Claims (1)
- Штамм бактерий Lactobacillus salivarius ICIS-540 - продуцент ингибитора цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17, депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора» под коллекционным номером 1272.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019145399A RU2726653C2 (ru) | 2019-12-26 | 2019-12-26 | Штамм бактерий Lactobacillus salivarius - продуцент ингибитора цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019145399A RU2726653C2 (ru) | 2019-12-26 | 2019-12-26 | Штамм бактерий Lactobacillus salivarius - продуцент ингибитора цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2019145399A RU2019145399A (ru) | 2020-02-25 |
RU2019145399A3 RU2019145399A3 (ru) | 2020-03-23 |
RU2726653C2 true RU2726653C2 (ru) | 2020-07-15 |
Family
ID=69631188
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019145399A RU2726653C2 (ru) | 2019-12-26 | 2019-12-26 | Штамм бактерий Lactobacillus salivarius - продуцент ингибитора цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2726653C2 (ru) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2302458C2 (ru) * | 2001-07-26 | 2007-07-10 | Элиментери Хелс Лимитед | Пробиотический штамм lactobacillus salivarius (варианты), пробиотический препарат на их основе и способ лечения или предупреждения с использованием штаммов lactobacillus salivarius |
RU2684600C1 (ru) * | 2013-12-19 | 2019-04-09 | Н.В. Нютрисиа | Lactobacillus salivarius для лечения мастита |
-
2019
- 2019-12-26 RU RU2019145399A patent/RU2726653C2/ru active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2302458C2 (ru) * | 2001-07-26 | 2007-07-10 | Элиментери Хелс Лимитед | Пробиотический штамм lactobacillus salivarius (варианты), пробиотический препарат на их основе и способ лечения или предупреждения с использованием штаммов lactobacillus salivarius |
RU2684600C1 (ru) * | 2013-12-19 | 2019-04-09 | Н.В. Нютрисиа | Lactobacillus salivarius для лечения мастита |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
LAURA PERAN et al. "Preventative effects of a probiotic, Lactobacillus salivarius ssp. salivarius, in the TNBS model of rat colitis".//World Journal Gastroenterology, 2005, N 11(33), p. 5185-5192. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2019145399A3 (ru) | 2020-03-23 |
RU2019145399A (ru) | 2020-02-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Muhammad et al. | ANTIBIOTIC PRODUCTION BY THERMOPHILIC BACILLUS SPECIE SAT-4. | |
US5252481A (en) | Mutant of bacterium Clostridium histolyticum, a process for the obtaining thereof, and its use in the production of clostripain-free collagenase | |
RU2288263C2 (ru) | Штамм bacillus coagulans sim-7 dsm 14043 для получения l(+)-лактата и способ получения l(+)-лактата | |
RU2381270C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Clostridium acetobutylicum - ПРОДУЦЕНТ БУТАНОЛА, АЦЕТОНА И ЭТАНОЛА | |
US20160053221A1 (en) | Methods and compositions for increasing toxin production | |
Jung et al. | Metabolic differences in Bacillus stearothermophilus grown at 55 C and 37 C | |
RU2726653C2 (ru) | Штамм бактерий Lactobacillus salivarius - продуцент ингибитора цитокинов интерлейкина-6 и интерлейкина-17 | |
RU2343192C2 (ru) | Среда для роста гетеротрофных водорослей или гетеротрофных бактерий, способ их культивирования и субстрат для их роста | |
JP6966096B2 (ja) | 微生物タンパク質を得るための共棲菌 従属栄養細菌Cupriavidus gilardii GBS−15−1菌株 | |
Jain et al. | Production of propionic acid from whey ultrafiltrate by immobilized cells of Propionibacterium shermanii in batch process | |
RU2687137C1 (ru) | Штамм гетеротрофных бактерий Klebsiella pneumonia - ассоциант для получения микробной белковой массы | |
CN114015729B (zh) | 植物乳杆菌在制备乳酸菌素、乳酸和苯乳酸中的应用 | |
RU2670054C1 (ru) | Штамм бактерий Bifidobacterium bifidum ICIS-310 - продуцент ингибитора провоспалительного цитокина INF-γ | |
CN109554321B (zh) | 一种高产脂肽的基因工程菌及其应用 | |
Miyashiro et al. | NOVEL MACROCYCLIC ANTIBIOTICS: MEGOVALICINS A, B, C, D, G AND H I. SCREENING OF ANTIBIOTICS-PRODUCING MYXOBACTERIA AND PRODUCTION OF MEGOVALICINS | |
RU2059716C1 (ru) | Штамм streptococcus lactis - продуцент бактериоцина низина | |
CN116083307B (zh) | 一种生产酯酶和酯类化合物的格氏乳球菌及其应用 | |
Kasai | A study of Leptotrichia buccalis. II. Biochemical and physiological observations | |
RU2575799C2 (ru) | ПРИМЕНЕНИЕ ШТАММА БАКТЕРИЙ BACILLUS CEREUS ГИСК №279 В КАЧЕСТВЕ ПРОДУЦЕНТА ИНГИБИТОРА ЦИТОКИНА ФНО - α | |
Abzaeva et al. | Studying the Effect of Experimental Bases on the Growth Quality of Liquid Nutritional Media for Submerged Cultivation of Plague Microbe Vaccine Strain | |
SU1726515A1 (ru) | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR OGaWa - продуцент внеклеточной нейтральной протеазы | |
KR101185571B1 (ko) | 1,4-디히드록시-2-나프토산 생산능을 가지는 바이쎌라 파라메젠테로이데스 cjnu 0480 균주 및 이의 이용 | |
RU2668805C1 (ru) | Штамм Vibrio parahaemolyticus, используемый в качестве продуцента прямого термостабильного гемолизина (TDH) | |
RU2257412C1 (ru) | Штамм haemophilus influenzae b mech №1 - продуцент капсульного полисахарида - полирибозилрибитолфосфата | |
RU2002802C1 (ru) | Штамм бактерий YERSIMA PESTIS - тест-объект в генетических и микробиологических исследовани х |