RU2731413C1 - Способ диагностики хронического эндометрита у женщин с эндометриозом - Google Patents
Способ диагностики хронического эндометрита у женщин с эндометриозом Download PDFInfo
- Publication number
- RU2731413C1 RU2731413C1 RU2020116167A RU2020116167A RU2731413C1 RU 2731413 C1 RU2731413 C1 RU 2731413C1 RU 2020116167 A RU2020116167 A RU 2020116167A RU 2020116167 A RU2020116167 A RU 2020116167A RU 2731413 C1 RU2731413 C1 RU 2731413C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- middle stage
- phase
- endometriosis
- endometrium
- cells
- Prior art date
Links
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 208000030373 chronic endometritis Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 101000934372 Homo sapiens Macrosialin Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 102100025136 Macrosialin Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims abstract description 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 24
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 23
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims abstract description 17
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims abstract 2
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 claims description 21
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims description 15
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 10
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 8
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 7
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 5
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 5
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 description 4
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 4
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 4
- 208000005641 Adenomyosis Diseases 0.000 description 3
- 206010048461 Genital infection Diseases 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 201000009274 endometriosis of uterus Diseases 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 3
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 208000035175 Oligomenorrhea Diseases 0.000 description 2
- 206010030295 Oligomenorrhoea Diseases 0.000 description 2
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 208000016018 endometrial polyp Diseases 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000035752 proliferative phase Effects 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 206010046811 uterine polyp Diseases 0.000 description 2
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 208000004145 Endometritis Diseases 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 206010027339 Menstruation irregular Diseases 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000000450 Pelvic Pain Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000002357 laparoscopic surgery Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000007778 menstrual function Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011206 morphological examination Methods 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008855 peristalsis Effects 0.000 description 1
- 230000031339 positive regulation of inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000030968 tissue homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к патологической анатомии и гинекологии, и предназначено для диагностики хронического эндометрита у женщин с эндометриозом. Проводят пайпель-биопсию эндометрия в среднюю стадию фазы пролиферации или фазы секреции менструального цикла. Проводят иммуногистохимическое исследование полученного биоматериала путем окрашивания cрезов с применением моноклонального антитела – Bond Ready-to-Use Primary Antibody CD68. Определяют количество макрофагов CD68 путем подсчета количества позитивно-окрашенных клеток на 1 мм2. Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 151 до 293 или в среднюю стадию фазы секреции от 425 до 523, то диагностируют хронический эндометрит. Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 49 до 150 или в среднюю стадию фазы секреции от 74 до 424, это соответствует норме. Изобретение обеспечивает эффективную диагностику хронического эндометрита у женщин с эндометриозом. 3 ил., 4 пр.
Description
Область техники к которой относится изобретение
Изобретение относится к области медицины, а именно к патологической анатомии и гинекологии и может быть использовано для диагностики хронического эндометрита (ХЭ) у женщин с эндометриозом с помощью иммуногистохимической оценки экспрессии маркера макрофагов (CD68) в эутопическом эндометрии.
В научной литературе обсуждается связь хронического эндометрита с эндометриозом. Небезызвестна высокая корреляция эндометриоза с воспалительными заболеваниями органов малого таза (ВЗОМТ). Так, в масштабном ретроспективном исследовании Tai F.W. и соавт. (2018) с участием 141460 пациентов было подтверждено, что риск развития эндометриоза у пациентов с ВЗОМТ повышен в 3 раза [1]. По данным Takebayashi A. и соавт. (2014) ХЭ был ассоциирован с эндометриозом в 53% наблюдений, но корреляций между степенью тяжести и формой эндометриоза с наличием ХЭ выявлено не было [2]. Cicinelli E. и соавт. (2017) опубликовали данные о том, что ХЭ у женщин с эндометриозом наблюдается в 2,7 раза чаще, что составляет примерно 40% [3]. При ХЭ отмечено изменение эндо-миометральной перистальтики, что способствует более активному менструальному рефлюксу крови в брюшную полость [4]. Эндометриоз же известен наличием иммунной дисфункции. Логично предположить, что ХЭ можно рассматривать как сопутствующий фактор в развитии эндометриоза и имплантационных нарушений, а эндометриоз - как фактор, усугубляющий и поддерживающий эти изменения.
Действительно, ХЭ и эндометриоз имеют общие черты: оба являются хроническими воспалительными заболеваниями, в патогенезе которых отчетливо прослеживается изменение иммунного статуса, оба часто сочетаются с ВЗОМТ, оба имеют сходные клинические проявления (нарушения менструальной и репродуктивной функции, хроническая тазовая боль). И тот, и другой отличаются особым микробиологическим составом эндометрия и негативно влияют на рецептивность эндометрия, являясь активными участниками в реализации нарушений фертильности на эндометриальном уровне. В связи с этим использование эндометриоз-специфичного маркера ХЭ с целью диагностики последнего представляется оправданным.
Уровень техники
В патентной литературе описано множество способов диагностики хронического эндометрита, как при помощи гистологического исследования заданных параметров (патенты РФ №247574 и №2674155), определения в менструальной крови уровней различных биомолекул (патенты РФ №2108750, №2697195 и №2587720), а также иммуногистохимическом исследовании экспрессии маркеров иммунной системы как важной патогенетической составляющей в реализации и поддержании ХЭ (патенты РФ №2236013 и №2587325) и определении количественной ОТ-ПЦР в режиме реального времени фактора ангиогенеза (патент РФ №2642621).
В качестве прототипа избран способ диагностики хронического эндометрита и характера воспаления (патент РФ №2236013), согласно которому осуществляют определение маркеров иммунокомпетентных клеток эндометрия иммуногистохимическим методом, позволяющим выявить наличие хронического воспаления в эндометрии и степень его выраженности; для этого исследуют в эндометрии лимфоциты, экспрессирующие маркеры естественных киллерных клеток CD56+ и CD16+ и лимфоциты, экспрессирующие маркер активации HLA-DR+ II класса, участвующие в распознавании антигена. По нарастанию количественных показателей исследуемых маркеров определяют выраженность воспалительного процесса.
Основным недостатком способа-прототипа является недостаточная оценка ХЭ у женщин страдающих эндометриозом. Эутопический эндометрий при эндометриозе отличается наличием иммунных нарушений, проявляющихся в аберрантной экспрессии иммунокомпетентных клеток, что необязательно свидетельствует о наличии ХЭ. В связи с этим способ-прототип не может использоваться для диагностики ХЭ при эндометриозе ввиду большой вероятности постановки неправильного диагноза.
Решаемой технической проблемой явилась диагностика ХЭ у женщин с эндометриозом.
Раскрытие сущности изобретения
Достигаемым техническим результатом является диагностика ХЭ у женщин с эндометриозом по уровню иммуногистохимической экспрессии эндометриоз-специфичного маркера ХЭ в эутопическом эндометрии - CD68.
Нами впервые выявлено, что у женщин с эндометриозом и ХЭ экспрессия маркера макрофагов (CD68) в эутопическом эндометрии достоверно выше как в среднюю стадию фазы секреции, так и среднюю стадию фазы пролиферации при сравнении с женщинами со здоровым эндометрием без эндометриоза. Повышенное количество макрофагов в эндометрии отражает активацию воспалительного процесса и стимуляцию процессов фиброгенеза. Важным преимуществом и отличием данного способа от других является повышение точности диагностики ХЭ у женщин с эндометриозом. Кроме того, оценка специфичного для эндометриоза маркера ХЭ не только в среднюю стадию фазы пролиферации, но и в среднюю стадию фазы секреции, когда эндометрий становится наиболее восприимчивым для имплантации, позволяет использовать дополнительные методы для изучения его рецептивных свойств и прогнозирования вероятности наступления беременности.
Разработан способ диагностики ХЭ у женщин с эндометриозом, согласно которому производят пайпель-биопсию эндометрия в среднюю стадию фазы пролиферации и секреции менструального цикла у женщин с эндометриозом. Полученный материал исследуют методом иммуногистохимии с применением моноклонального антитела - Bond Ready-to-Use Primary Antibody CD68 (514H12). Оценка количества макрофагов (CD68) проводится под увеличением х400 в 5-ти случайных полях зрения путем подсчета позитивно-окрашенных пятен диаметром от 20 до 30 мкм. Результат фиксируется в виде средней плотности распределения макрофагов в эндометрии, то есть количества позитивно-окрашенных клеток на 1 мм2.
Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 151 до 293 или в среднюю стадию фазы секреции от 425 до 523, то выставляется диагноз хронический эндометрит.
Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 49 до 150 или в среднюю стадию фазы секреции от 74 до 424, что соответствует норме, то диагноз хронический эндометрит не ставится.
Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации менее 48 или более 294 или в среднюю стадию фазы секреции менее 73 или более 524, данные значения не соответствуют норме, что свидетельствует об ошибке метода.
В настоящее исследование были включены 55 женщин в возрасте от 29 до 40 лет.
Основную группу (n=40) составили пациентки с морфологически и лапароскопически верифицированным диагнозом наружный генитальный эндометриоз (код по МКБ10 - N80.0), заинтересованные в реализации репродуктивной функции, у которых пайпель-биопсия эндометрия проводилась в связи с заподозренной патологией эндометрия по данным УЗИ, при повторных неудачных попытках переноса эмбрионов в программах вспомогательных репродуктивных технологий при нормальной УЗИ-картине, а также в качестве контроля эффективности лечения ранее гистологически подтвержденного гиперпластического процесса эндометрия.
Группу морфологического контроля (n=15) составили здоровые женщины без эндометриоза и ХЭ (исключенного при гистологическом и иммуногистохимическом исследованиях биоптатов эндометрия), давшие добровольное информированное согласие на участие в исследовании.
Предварительно было проведено стандартное морфологическое исследование биоптатов эндометрия, полученных методом пайпель-биопсии. Материал после гистологической проводки в автоматическом гистопроцессоре Leica ASP 30, заливали в парафин на станции Leica ST 5010. Микроскопическое исследование осуществлялось на триокулярном микроскопе Leica DMLB (окуляры с увеличением х10) с использованием цифровой камеры Leica DFC 420 (Германия). В полученных микропрепаратах проводилась гистологическая оценка стадии и фазы менструального цикла, а также диагностировалась возможная патология эндометрия. Из 40 образцов в основной группе было выявлено 17 (42,5%) - с признаками ХЭ, 5 (12,5%) - с признаками гиперпластического процесса эндометрия в виде очаговой железистой гиперплазии, 7 (17,5%) - с полипами эндометрия, 2 (5%) - с выраженным фиброзом эндометрия и внутриматочными синехиями, 9 (22,5%) - с нормальной морфологической картиной эндометрия, соответствующей исследуемой фазе менструального цикла.
При стандартном гистологическом исследовании признаки ХЭ обнаруживаются не всегда ввиду низкой точности диагностики данного метода, потому что достаточно часто встречаются стертые формы ХЭ эндометрита без классических морфологический проявлений. Таким образом, если не обнаружены классические гистологические признаки ХЭ, нельзя судить о его реальном отсутствии, поэтому с целью повышения точности диагностики все биоптаты эндометрия были исследованы с помощью иммуногистохимии на предмет выявления маркера ХЭ - плазмоцитов (CD138).
Из 40 образцов в основной группе положительное окрашивание клеток выявилось в 29 образцах, что составило 72,5%, тогда как при стандартном морфологическом исследовании ХЭ был выявлен в 17 образцах (42,5%), что в 1,7 раза увеличило точность диагностики. Это позволило окончательно верифицировать ХЭ и скорректировать основную группу исследования, представленную женщинами с эндометриозом и ХЭ, с целью проведения следующего этапа, направленного на изучение экспрессии эндометриоз-специфичного маркера хронического эндометрита - CD68.
Согласно ряду исследований как при эндометриозе, так и при ХЭ отмечена чрезмерная инфильтрация эндометрия иммунными клетками, в частности макрофагами [5,6,7,8]. Макрофаги - это мононуклеарные фагоциты, которые играют важную роль в обеспечении тканевого гомеостаза, иммунной защиты и активации воспалительных реакций за счет высокой экспрессии провоспалительных цитокинов. В норме в эндометрии макрофаги усиливают процессы его циклического ремоделирования и репарации. Фенотип и функции макрофагов регулируются воздействием местных цитокинов, факторов роста и гормонов, аберрантная экспрессия которых наблюдается при эндометриозе и ХЭ. В данном случае повышенное количество макрофагов отражает активацию воспалительного процесса и стимуляцию процессов фиброгенеза. В связи с этим и был выбран исследуемый маркер.
Иммуногистохимическое исследование биоптатов эндометрия, взятых методом пайпель-биопсии, проводилось в качестве второго этапа исследования с использованием моноклонального антитела - Bond Ready-to-Use Primary Antibody CD68 (514H12). Иммуногистохимическое окрашивание производилось в иммуностейнере Leica BOND-maX (Германия). Оценка количества макрофагов (CD68) проводилась на триокулярном микроскопе Leica DMLB (окуляры с увеличение х10) с использованием цифровой камеры Leica DFC 420 (Германия) под увеличением х400 в 5-ти случайных полях зрения путем подсчета позитивно-окрашенных пятен диаметром от 20 до 30 мкм. Результат фиксировался в виде средней плотности распределения макрофагов в эндометрии, то есть количества позитивно-окрашенных клеток на 1 мм2.
В ходе исследования выявлено, что у женщин с эндометриозом и ХЭ экспрессия CD68 достоверно выше при сравнении с женщинами со здоровым эндометрием. Об этом свидетельствует статистически значимая высокая экспрессия CD68 как в среднюю стадию фазы пролиферации (в 2 раза; 195,8 против 99,3, соответственно, р<0,05), так и фазы секреции менструального цикла (в 1,7 раза; 412,2 против 111,3 соответственно, р<0,05) при сравнении с контролем.
Таким образом, на основании полученных статистически значимых результатов установлены уровни экспрессии специфичного для эндометриоза маркера ХЭ - CD68 -, который может использоваться для диагностики данного состояния, а именно:
Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 151 до 293 или в среднюю стадию фазы секреции от 425 до 523, то выставляется диагноз хронический эндометрит.
Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 49 до 150 или в среднюю стадию фазы секреции от 74 до 424, что соответствует норме, то диагноз хронический эндометрит не ставится.
Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации менее 48 или более 294 или в среднюю стадию фазы секреции менее 73 или более 524, данные значения не соответствуют норме, что свидетельствует об ошибке метода.
Осуществление изобретения
Проводят пайпель-биопсию эндометрия в среднюю стадию фазы пролиферации и секреции менструального цикла. Полученный материал после гистологической проводки в автоматическом гистопроцессоре Leica ASP 30, заливают в парафин на станции Leica ST 5010 (Германия). Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) окрашивание cрезов производят в иммуностейнере Leica BOND-maX (Германия) с применением моноклонального антитела - Bond Ready-to-Use Primary Antibody CD68 (514H12). Оценка количества макрофагов (CD68) проводится под увеличением х400 в 5-ти случайных полях зрения путем подсчета позитивно-окрашенных пятен диаметром от 20 до 30 мкм. Результат фиксируется в виде средней плотности распределения макрофагов в эндометрии, то есть количества позитивно-окрашенных клеток на 1 мм2. Трактовка ИГХ реакции проводится путем сравнения полученных данных со следующими параметрами:
Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 151 до 293 или в среднюю стадию фазы секреции от 425 до 523, то выставляется диагноз хронический эндометрит.
Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 49 до 150 или в среднюю стадию фазы секреции от 74 до 424, что соответствует норме, то диагноз хронический эндометрит не ставится.
Если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации менее 48 или более 294 или в среднюю стадию фазы секреции менее 73 или более 524, данные значения не соответствуют норме, что свидетельствует об ошибке метода.
Клинический пример 1.
Пациентка А, 32 года, обратилась с жалобами на отсутствие наступления беременности при регулярной половой жизни в браке без контрацепции в течение 2 лет. Соматически не отягощена. В анамнезе операция по поводу наружного генитального эндометриоза (II-III стадии AFS) 3 года назад, диагноз которого установлен на основании гистологического результата исследования макропрепаратов. Менструальная функция нарушена по типу олигоменореи после инструментального опорожнения полости матки по поводу неразвивающейся беременности на сроке 6-7 недель 2 года назад, которая наступила после завершения гормонального лечения эндометриоза в послеоперационном периоде.
Было проведено генетическое исследование кариотипа эмбриона: хромосомных аномалий не выявлено. Реабилитационные мероприятия после внутриматочного вмешательства не проводились. При микробиологическом обследовании данных за наличие генитальной инфекции не получено. По данным ультразвукового исследования признаки ХЭ не выявлены.
Учитывая жалобы, анамнез и данные лабораторного и инструментального исследований пациентки, выполнена пайпель-биопсия эндометрия в пролиферативную фазу менструального цикла. При гистологическом исследовании биоптата эндометрий соответствовал средней стадии фазы пролиферации, морфологических признаков ХЭ обнаружено не было.
При иммуногистохимической оценке количества позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1мм2, согласно описанной методике, было выявлено 212 клеток, что позволило установить диагноз хронический эндометрит (Фиг.1 - ИГХ с антителом к CD68. Выявлена экспрессия позитивных клеток как в строме эндометрия, так и внутриматочных железах, что соответствует диагнозу хронический эндометрит, ув. 20).
При иммуногистохимической оценке количества позитивно-окрашенных плазмоцитов CD138 в 10 полях зрения было выявлено 15 клеток (при норме 0 клеток), что позволило подтвердить поставленный диагноз и назначить комплексное лечение.
Клинический пример 2.
Пациентка С, 29 лет, обратилась с жалобами на отсутствие наступления беременности при регулярной половой жизни в браке без контрацепции в течение 8 лет. Соматически не отягощена. Отмечает периодические перименструальные выделения. В анамнезе 2 операции по поводу наружного генитального эндометриоза (II-III стадии AFS), диагноз которого установлен при морфологическом исследовании полученных макропрепаратов. Было проведено послеоперационное гормональное лечение после обеих операций. В течение года после отмены гормонального лечения пыталась забеременеть естественным путем. В связи с отсутствием наступления беременности была направлена в центр ВРТ для лечения бесплодия. В анамнезе 3 неудачные попытки переноса эмбрионов в полость матки. При микробиологическом обследовании данных за наличие генитальной инфекции не получено.
Была проведена диагностическая гистероскопия в среднюю стадию фазы секреции менструального цикла - патологических изменений в полости матки не обнаружено. Взят биоптат - обнаружены воспалительные инфильтраты, состоящие преимущественно из лимфо-плазмациарных элементов преимущественно вокруг маточных желез и в строме эндометрия, что в неполной мере отражает морфологическую картину ХЭ, эндометрий в средней стадии фазы секреции.
При иммуногистохимической оценке количества позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1мм2, согласно описанной методике, было выявлено 437 клеток, что позволило установить диагноз хронический эндометрит (Фиг. 2. ИГХ с антителом к CD68. Выявлена выраженная экспрессия позитивных клеток как в строме эндометрия, так и внутриматочных железах, что соответствует диагнозу хронический эндометрит, ув.10).
При иммуногистохимической оценке количества позитивно-окрашенных плазмоцитов CD138 в 10 полях зрения было выявлено 17 клеток (при норме 0 клеток), что позволило подтвердить поставленный диагноз и назначить комплексное лечение.
Клинический пример 3.
Пациентка К, 26 лет, обратилась с жалобами на нерегулярный менструальный цикл по типу олигоменореи и перименструальные кровяные выделения из половых путей. Соматически не отягощена. В анамнезе лапароскопия, вылущивание эндометриоидной кисты, подтвержденной морфологически. Беременность 1 (своевременные роды доношенным здоровым плодом), на данный момент в реализации репродуктивной функции не заинтересована. Нуждается в длительной контрацепции. При микробиологическом обследовании данных за наличие генитальной инфекции не получено. По данным УЗИ органов малого таза выявлены признаки полипа эндометрия и диффузного аденомиоза.
Проведена гистероскопия в пролиферативную фазу менструального цикла, при осмотре полости матки в нижней трети по задней стенке обнаружено полиповидное образование бледно-розового цвета на широком основании 5х3 мм, проведена полипэктомия и биопсия эндометрия. Обнаружены косвенные гистероскопические признаки ХЭ: очаговое усиление сосудистого рисунка, неравномерность эндометрия на всем протяжении, участки мелкоточечной гиперемии, - а также рельеф стенок полости матки в виде хребтов и крипт, что свидетельствует об аденомиозе. При микроскопическом исследовании эндометрий в средней стадии фазы пролиферации, признаков ХЭ не обнаружено.
При иммуногистохимической оценке количества позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1мм2, согласно описанной методике, было выявлено 57 клеток, что исключает ХЭ, несмотря на его косвенные признаки при гистероскопии (Фиг.3 ИГХ с антителом к CD68. Выявлена скудная экспрессия позитивных клеток в строме эндометрия, что не соответствует диагнозу хронический эндометрит, ув.20).
При иммуногистохимической оценке количества позитивно-окрашенных плазмоцитов CD138 в 10 полях зрения не было выявлено ни одной клетки, что подтверждает отсутствие ХЭ. Учитывая отсутствие противопоказаний и наличие аденомиоза с целью контрацепции рекомендована установка ВМК.
Клинический пример 4.
Пациентка М, 30 лет, планирует беременность. В анамнезе наружный генитальный эндометриоз и гиперпластический процесс эндометрия; диагнозы подтверждены морфологически. С целью контроля эффективности лечения гиперпластического процесса эндометрия проведена пайпель-биопсия эндометрия в секреторную фазу менструального цикла. При гистологическом исследовании биоптата эндометрий соответствовал средней стадии фазы секреции, морфологических признаков ХЭ и ГПЭ обнаружено не было. При иммуногистохимической оценке количества позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1мм2, согласно описанной методике, было выявлено 311 клеток, что исключает ХЭ.
При иммуногистохимической оценке количества позитивно-окрашенных плазмоцитов CD138 в 10 полях зрения не было выявлено ни одной клетки, что подтверждает отсутствие ХЭ.
Литература:
1. Tai FW, Chang CY, Chiang JH et al. Association of Pelvic Inflammatory Disease with Risk of Endometriosis: A Nationwide Cohort Study Involving 141,460 Individuals. J Clin Med. 2018; 7(11).
2. Takebayashi A, Kimura F, Kishi Y et al. The association between endometriosis and chronic endometritis. PLoS One. 2014; 9(2): e88354.
3. Cicinelli E, Trojano G, Mastromauro M et al. Higher prevalence of chronic endometritis in women with endometriosis: a possible etiopathogenetic link. Fertil Steril. 2017; 108(2): 289-295.e1.
4. Pinto V, Matteo M, Tinelli R et al. Altered uterine contractility in women with chronic endometritis. Fertil Steril. 2015; 103(4): 1049-1052.
5. Berbic M, Schulke L, Markham R, Tokushige N, Russell P, Fraser IS. Macrophage expression in endometrium of women with and without endometriosis. Hum Reprod. 2009 Feb;24(2):325-32.
6. Takebayashi A, Kimura F, Kishi Y, Ishida M, Takahashi A, Yamanaka A, Wu D, Zheng L, Takahashi K, Suginami H, Murakami T. Subpopulations of macrophages within eutopic endometrium of endometriosis patients. Am J Reprod Immunol. 2015 Mar;73(3):221-31.
7. Sukhikh GT, Shurshalina AV, Veryasov VN. Immunomorphological characteristics of endometrium in women with chronic endometritis. Bull Exp Biol Med. 2006 Jan;141(1):104-6.
8. Li Y, Yu S, Huang C, Lian R, Chen C, Liu S, Li L, Diao L, Markert UR, Zeng Y. Evaluation of peripheral and uterine immune status of chronic endometritis in patients with recurrent reproductive failure. Fertil Steril. 2020 Jan;113(1):187-196.e1.
Claims (1)
- Способ диагностики хронического эндометрита у женщин с эндометриозом, включающий проведение пайпель-биопсии эндометрия в среднюю стадию фазы пролиферации или фазы секреции менструального цикла, проводят иммуногистохимическое исследование полученного биоматериала путем окрашивания cрезов с применением моноклонального антитела – Bond Ready-to-Use Primary Antibody CD68, определяют количество макрофагов CD68 путем подсчета количества позитивно-окрашенных клеток на 1 мм2, если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 151 до 293 или в среднюю стадию фазы секреции от 425 до 523, то диагностируют хронический эндометрит; если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации от 49 до 150 или в среднюю стадию фазы секреции от 74 до 424, что соответствует норме; если количество позитивно-окрашенных клеток CD68 эндометрия на 1 мм2 в среднюю стадию фазы пролиферации менее 48 или более 294 или в среднюю стадию фазы секреции менее 73 или более 524, данные значения не соответствуют норме, что свидетельствует об ошибке метода.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020116167A RU2731413C1 (ru) | 2020-05-17 | 2020-05-17 | Способ диагностики хронического эндометрита у женщин с эндометриозом |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020116167A RU2731413C1 (ru) | 2020-05-17 | 2020-05-17 | Способ диагностики хронического эндометрита у женщин с эндометриозом |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2731413C1 true RU2731413C1 (ru) | 2020-09-02 |
Family
ID=72421607
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020116167A RU2731413C1 (ru) | 2020-05-17 | 2020-05-17 | Способ диагностики хронического эндометрита у женщин с эндометриозом |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2731413C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2820619C1 (ru) * | 2023-09-21 | 2024-06-06 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского" | Способ определения выраженности хронического эндометрита |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2236013C1 (ru) * | 2003-02-10 | 2004-09-10 | Михнина Елена Андреевна | Способ диагностики хронического эндометрита и характера воспаления |
| RU2674155C1 (ru) * | 2017-09-27 | 2018-12-05 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ВСЕРОССИЙСКИЙ ЦЕНТР ЭКСТРЕННОЙ И РАДИАЦИОННОЙ МЕДИЦИНЫ ИМЕНИ А.М. НИКИФОРОВА" (ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России) | Способ определения стадии клинического течения хронического эндометрита, степени активности воспаления и выраженности фиброза с установлением прогноза имплантации и нарушения рецептивности эндометрия |
-
2020
- 2020-05-17 RU RU2020116167A patent/RU2731413C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2236013C1 (ru) * | 2003-02-10 | 2004-09-10 | Михнина Елена Андреевна | Способ диагностики хронического эндометрита и характера воспаления |
| RU2674155C1 (ru) * | 2017-09-27 | 2018-12-05 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ВСЕРОССИЙСКИЙ ЦЕНТР ЭКСТРЕННОЙ И РАДИАЦИОННОЙ МЕДИЦИНЫ ИМЕНИ А.М. НИКИФОРОВА" (ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России) | Способ определения стадии клинического течения хронического эндометрита, степени активности воспаления и выраженности фиброза с установлением прогноза имплантации и нарушения рецептивности эндометрия |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ARUTYUNYAN N.A. Evaluating the efficiency of Immunohistochemical Methods in Diagnosis of Endometrial Status in Women with Uterine Infertility. CTM. 2017; 9(1): 103-107. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2820619C1 (ru) * | 2023-09-21 | 2024-06-06 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского" | Способ определения выраженности хронического эндометрита |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Analysis of the diagnostic value of CD138 for chronic endometritis, the risk factors for the pathogenesis of chronic endometritis and the effect of chronic endometritis on pregnancy: a cohort study | |
| Zolghadri et al. | The value of hysteroscopy in diagnosis of chronic endometritis in patients with unexplained recurrent spontaneous abortion | |
| RU2651762C1 (ru) | Способ оценки рецептивности эндометрия в период "имплантационного окна" | |
| Fitzgerald et al. | The proliferative phase underpins endometrial development: altered cytokine profiles in uterine lavage fluid of women with idiopathic infertility | |
| RU2724381C1 (ru) | Способ оценки рецептивности эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии | |
| Schäfer‐Somi et al. | Kisspeptin‐10 and the G protein‐coupled receptor 54 are differentially expressed in the canine pregnant uterus and trophoblast cells | |
| Vicari et al. | Sperm parameter abnormalities, low seminal fructose and reactive oxygen species overproduction do not discriminate patients with unilateral or bilateral post-infectious inflammatory prostato-vesiculo-epididymitis | |
| Signorile et al. | Pathogenesis of endometriosis: Focus on adenogenesis-related factors | |
| RU2553340C1 (ru) | Способ диагностирования нарушения рецептивности эндометрия у пациенток с миомой матки и бесплодием | |
| RU2731413C1 (ru) | Способ диагностики хронического эндометрита у женщин с эндометриозом | |
| RU2706683C1 (ru) | Способ прогнозирования готовности эндометрия к успешной имплантации эмбриона у женщин с маточной формой бесплодия с использованием компьютерной морфометрии | |
| RU2694882C1 (ru) | Способ прогнозирования рецидива эндометриоидных кист яичника | |
| RU2236013C1 (ru) | Способ диагностики хронического эндометрита и характера воспаления | |
| Arutyunyan et al. | Evaluating the efficiency of immunohistochemical methods in diagnosis of endometrial status in women with uterine infertility | |
| RU2724384C1 (ru) | Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия при пролиферативно-воспалительных нарушениях в эндометрии при эндометриозе, ассоциированном с эндометриальным фактором бесплодия | |
| RU2681219C1 (ru) | Способ прогнозирования рецидивирования эндометриоидных кист яичников после оперативного лечения при помощи иммуногистохимических маркеров | |
| RU2334987C1 (ru) | Способ диагностики патологии эндометрия у больных миомой матки | |
| RU2746644C1 (ru) | Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия при повторных неудачах имплантации, ассоциированных с хроническим эндометритом | |
| RU2734840C1 (ru) | Способ оценки имплантационного потенциала эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии | |
| RU2783849C1 (ru) | Способ диагностики иммунного статуса эндометрия у пациенток с повторными потерями беременности после вспомогательных репродуктивных технологий | |
| Sarkar et al. | Unraveling chronic endometritis: A review | |
| RU2732431C1 (ru) | Способ прогнозирования наступления беременности у женщин с маточной формой бесплодия, обусловленной гиперплазией эндометрия | |
| RU2785487C1 (ru) | Способ прогнозирования инфертильности эякулята у мужчин | |
| RU2735218C1 (ru) | Способ прогнозирования имплантации в программах врт у женщин старшего репродуктивного возраста с трубно-перитонеальным фактором бесплодия | |
| RU2732432C1 (ru) | Способ оценки эндометриальной дисфункции у женщин с первичным эндометриоз-ассоциированным бесплодием |