RU2726067C1 - Способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре родиолы розовой (rhodiola rosea l.) - Google Patents
Способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре родиолы розовой (rhodiola rosea l.) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2726067C1 RU2726067C1 RU2019132882A RU2019132882A RU2726067C1 RU 2726067 C1 RU2726067 C1 RU 2726067C1 RU 2019132882 A RU2019132882 A RU 2019132882A RU 2019132882 A RU2019132882 A RU 2019132882A RU 2726067 C1 RU2726067 C1 RU 2726067C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rhodiola rosea
- biologically active
- active substances
- sulfate
- culture
- Prior art date
Links
- 244000042430 Rhodiola rosea Species 0.000 title claims abstract description 32
- 235000003713 Rhodiola rosea Nutrition 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 20
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 claims description 4
- HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid Chemical compound OC(=O)C(Cl)OC1=CC=C(Cl)C=C1 HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 claims description 2
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 3
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- OOIOHEBTXPTBBE-UHFFFAOYSA-N [Na].[Fe] Chemical compound [Na].[Fe] OOIOHEBTXPTBBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 claims 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims 1
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims 1
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 claims 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims 1
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 claims 1
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 claims 1
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 abstract description 36
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 abstract description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 6
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 abstract description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 244000010815 Phlomis lychnitis Species 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 9
- YCCILVSKPBXVIP-UHFFFAOYSA-N 2-(4-hydroxyphenyl)ethanol Chemical compound OCCC1=CC=C(O)C=C1 YCCILVSKPBXVIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IEBFEMIXXHIISM-UHFFFAOYSA-N rozarin Natural products OC1C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OCC=CC=2C=CC=CC=2)O1 IEBFEMIXXHIISM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- RINHYCZCUGCZAJ-UHFFFAOYSA-N rozavin Natural products OC1C(O)C(O)COC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OCC=CC=2C=CC=CC=2)O1 RINHYCZCUGCZAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 240000004371 Panax ginseng Species 0.000 description 6
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- RINHYCZCUGCZAJ-UHAHJPEESA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(e)-3-phenylprop-2-enoxy]-6-[[(2s,3r,4s,5s)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxymethyl]oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)CO[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC\C=C\C=2C=CC=CC=2)O1 RINHYCZCUGCZAJ-UHAHJPEESA-N 0.000 description 4
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N Abietic-Saeure Natural products C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DBLDQZASZZMNSL-QMMMGPOBSA-N L-tyrosinol Natural products OC[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 DBLDQZASZZMNSL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 4
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 4
- IEBFEMIXXHIISM-YZOUKVLTSA-N Rosarin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC\C=C\C=2C=CC=CC=2)O1 IEBFEMIXXHIISM-YZOUKVLTSA-N 0.000 description 4
- IEBFEMIXXHIISM-XZDFAHJYSA-N Rosarin Natural products O(C/C=C/c1ccccc1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1 IEBFEMIXXHIISM-XZDFAHJYSA-N 0.000 description 4
- KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N Rosin Natural products O(C/C=C/c1ccccc1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N 0.000 description 4
- ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N Salidroside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 4
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- JJYVNURTNGHITH-UHFFFAOYSA-N rosavin Natural products OC1COC(OCC2OC(OC(=O)C=Cc3ccccc3)C(O)C(O)C2O)C(O)C1O JJYVNURTNGHITH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N salidroside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 4
- KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N trans-cinnamyl beta-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC=CC1=CC=CC=C1 KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004330 tyrosol Nutrition 0.000 description 4
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 3
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 3
- 244000297179 Syringa vulgaris Species 0.000 description 3
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 2
- 235000002789 Panax ginseng Nutrition 0.000 description 2
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 2
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 2
- 244000296102 Selinum monnieri Species 0.000 description 2
- 235000019084 Selinum monnieri Nutrition 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000010208 anthocyanin Nutrition 0.000 description 2
- 229930002877 anthocyanin Natural products 0.000 description 2
- 239000004410 anthocyanin Substances 0.000 description 2
- 150000004636 anthocyanins Chemical class 0.000 description 2
- PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N anthraquinone Natural products CCC(=O)c1c(O)c2C(=O)C3C(C=CC=C3O)C(=O)c2cc1CC(=O)OC PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004056 anthraquinones Chemical group 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 description 2
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 230000037039 plant physiology Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- BBNQQADTFFCFGB-UHFFFAOYSA-N purpurin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1 BBNQQADTFFCFGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- OVSKIKFHRZPJSS-DOMIDYPGSA-N 2-(2,4-dichlorophenoxy)acetic acid Chemical compound OC(=O)[14CH2]OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-DOMIDYPGSA-N 0.000 description 1
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 235000002206 Daucus carota subsp carota Nutrition 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 description 1
- 235000016499 Oxalis corniculata Nutrition 0.000 description 1
- 241001024859 Oxalis linearis Species 0.000 description 1
- 101100121891 Pisum sativum SBEI gene Proteins 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 241000218978 Populus deltoides Species 0.000 description 1
- 241000219295 Portulaca Species 0.000 description 1
- 240000009235 Rubia cordifolia Species 0.000 description 1
- 241001149655 Rubia tinctorum Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 235000000842 betacyanins Nutrition 0.000 description 1
- 230000003851 biochemical process Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000005770 birds nest Nutrition 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 description 1
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 description 1
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 nootropic Substances 0.000 description 1
- 230000001777 nootropic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000006361 primary response to stress Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000019702 secondary metabolite biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000002226 simultaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000005765 wild carrot Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре радиолы розовой, характеризующийся тем, что предусматривает культивирование клеток растения Rhodiola rosea L. на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей хитозан, с предварительным 15-минутным облучением ультрафиолетовым светом с длиной волны 315 нм, на свету (16-часовой световой день), при температуре 26°С в течение 28 суток. Изобретение позволяет регулировать содержание биологически активных веществ адаптогенного действия в каллусной культуре родиолы розовой путем введения в питательную среду предшественников биосинтеза вторичных метаболитов и действия стрессовых факторов. 3 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в фармакологической промышленности при получении биологически активных соединений адаптогенного действия, в том числе фенолов (тирозола, салидрозида), а также веществ ароматической природы (розарина, розавина, розина), из клеточной культуры растения invitro.
Rhodiola rosea L. представляет интерес в качестве источника ценных биохимических компонентов для фармакологической промышленности. Из литературных источников известно, что родиола розовая является одним из мощнейших и диапазонных адаптогенных средств. Адаптогены представляют собой особую фармакологическую группу препаратов природного или синтетического происхождения, способных повышать неспецифическую сопротивляемость организма к неблагоприятным факторам внутренней и внешней среды. Родиола розовая, помимо адаптогенных, обладает рядом других фармакологических свойств: антиоксидантными, ноотропными, антидепрессантными, иммуномодулирующими. Поэтому родиола розовая сейчас вызывает высокий интерес исследователей и врачей-клиницистов [Куркин В.А. Родиола розовая (золотой корень): стандартизация и создание лекарственных препаратов: монография. - Самара: ООО «Офорт»; ГБОУ ВПО СамГМУ Минздрава России, 2015. - 240 с.].
Вопросы сырьевой базы для данного растения в настоящее время являются весьма актуальными. Например, отмечается несоответствие возрастающих потребностей промышленности в сырье и возможностей его заготовки. Основным поставщиком считается Россия, однако во многих регионах РФ родиола розовая занесена в Красную книгу. Возможности промышленных заготовок его довольно ограничены в связи с тем, что возобновление зарослей происходит в течение 10-15 лет и для некоторых районов установлены нормы заготовки сырья родиолы розовой с учетом времени восстановления зарослей [Galambosi В. et al. Importance and quality of roseroot growing in the European North // Z. Arznei-Gewurzpfla. - 2010. - Vol.15. - №4. - P. 160-169; Крылов Г.В., Казаринова H.B. Продуктивность золотого корня и его рациональное использование // В кн.: Охрана горных ландшафтов Сибири. Новосибирск, 1973. - С. 162-164.].
Новым решением является использование в качестве альтернативного источника возобновляемого экологически чистого сырья культур клеток лекарственных растений.
Из уровня техники известен штамм культивируемых клеток растений Rubiacordifolia L. - продуцент антрахинонов, полученный в Биолого-почвенном институте ДВО РАН и депонированный во Всероссийской коллекции клеточных культур высших растений при Институте физиологии растений РАН под индексом RC-I (патент РФ №2141525, опубл. 20.11.1999). Штамм RC-I получен из дикорастущего растения марены сердцелистной, собранного в Анучинском районе Приморского края. Штамм представляет собой каллусную ткань рыхлой консистенции желто-оранжевого цвета. Штамм выращивают в накопительном режиме на агаризованной питательной среде. Штамм RC-I является высокопродуктивным источником антрахиноновых пигментов - муньистина и пурпурина. Среднее содержание пигментов составляет 0,89% от массы сухих клеток.
Также известен штамм культивируемых клеток растений Cnidiummonnieri (L.) Cuss, используемый для получения препарата, обладающего рибонуклеазной активностью (патент РФ №2031940, опубл. 27.03.1995). Каллусный штамм Cm-1 получен из дикорастущего растения Cnidiummonnieri (L.) Cuss., заготовленного в Надеждинском районе Приморского края. Ростовой индекс культуры 3030±0,50. Препарат представляет собой белковую фракцию, выделенную из биомассы клеток штамма Cm-1, и имеет следующие характеристики (из расчета на 1 г сухих клеток): суммарная рибонуклеазная активность 52610-79990 ед.; концентрация белка 179-198 опт.ед.; удельная рибонуклеазная активность 270-438 ед./опт.ед. Максимальное накопление рибонуклеазной активности в клетках наблюдается на 35-е сутки культивирования.
В патенте РФ №2639566, опубл. 21.12.2017 описан каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajugaturkestanica (Regel) Briq. в условиях invitro- продуцент туркестерона. Штамм Ajugaturkestanica (Regel) Briq.At21 депонирован во Всероссийской Коллекции культивируемых клеток высших растений под регистрационным номером 88.
Наиболее близким к заявляемому способу (ближайшим аналогом) является штамм культивируемых клеток растения женьшеня настоящего Pg-1 (Panaxginseng С.А. Меу) в условиях invitro - продуцент гинзенозидов, которые широко используются в фармацевтической промышленности и косметологии в качестве адаптогенов (патент РФ №2415927, опубл. 10.04.2011). Штамм культивируемых в условиях invitro клеток растения женьшеня настоящего Pg-1 (Panaxginseng С.А Меу) депонирован в Российской коллекции культивируемых клеток высших растений при учреждении Российской Академии наук, институте физиологии растений им. К.А.Тимирязева РАН под №68 - продуцент гинзенозидов: соединений групп Rg и Rb. В течение длительного культивирования (6-7 циклов) стабильно присутствовали все семь гинзенозидов, характерных для растений. В штамме Pg-1 активизировался синтез соединений Rb-группы и особенно Регинзенозидa. Отношение соединений Rg/Rb групп было достаточно высоким и оставалось стабильным в течение нескольких последовательных циклов культивирования. Полученный штамм женьшеня настоящего Pg-1 синтезирует полный состав соединений Rg- и Rb-групп гинзенозидов и их значительное количество - до 4% от сухой биомассы клеток. Качественный состав всех соединений гинзенозидов Rb- и Rg-групп и их количество было равно значениям, имеющимся в дикорастущем растении женьшеня настоящего.
Основным недостатком всех известных способов является невозможность регуляции содержания веществ с адаптогенной активностью в полученных культурах клеток.
Известно, что на продукционный процесс в культуре клеток invitro могут воздействовать факторы внешней среды. Так, в некоторых экспериментах показано, что регулятор роста растений 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота в большинстве случаев ингибирует продукцию вторичных метаболитов. Его рекомендуют заменить нафтилуксусной или индолилуксусной кислотой, что будет способствовать увеличению продукции антоцианов в суспензионных культурах Populus (тополь канадский) и D. carota (морковь дикая), бетацианинов в суспензиях Portulaca (портулак), никотина в N. tabacum (табак душистый) и др. Однако 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота вызывала стимуляцию биосинтеза каротиноидов в суспензиях D. carota и продукции антоцианов в каллусных культурах Oxalislinearis (оксалис линейный).
Многими исследователями уже доказано, что решающими факторами накопления вторичных метаболитов культурой клеток растений является концентрация регуляторов роста в питательной среде, а также тип и особенно концентрация ауксина или цитокинина, либо их соотношение. Белорусскими учеными - В.М. Юриным и др. изучена каллусная и суспензионная культуры Syringavulgaris (сирень обыкновенная) при разных режимах освещения, чередования длины дня, разных доз ауксинов и витаминов [Юрин, В.М. Культура растительных клеток и тканей: технология получения, разнообразие фармакологически активных метаболитов и приемы регуляции их синтеза // Труды Белорусского государственного университета: научный журнал. - 2009. - Т. 4. - Ч. 2.]. В процессе эксперимента установлено, что каллусы сирени, выращенные в темноте на среде Мурасиге и Скуга (MS) с добавлением 3 мг/л 3-индолилуксусной кислоты, 0,2 мг/л 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты, 0,04 мг/л кинетина, 1 мг/л тиамина и 30 г/л сахарозы, имели лучшие ростовые показатели по сравнению с другими питательными средами.
В естественной среде произрастания растения фактически никогда не находятся в оптимальных условиях. Они постоянно испытывают действие стресса разной силы и продолжительности. Некоторые факторы могут действовать в течение короткого времени (порывы ветра, град), а другие - в течение многих дней. К ним относятся: затопление, высокая или низкая температура, повышенная кислотность почвы, заболачивание и др. Зачастую растения испытывают влияние сразу комплекса неблагоприятных факторов: одновременное влияние высокой температуры и дефицита влаги, избыточной влажности, недостатка кислорода и присутствие патогенных микроорганизмов (фитопатогенных грибов, бактерий, вирусов) и энтомофагов.
Первичная стрессовая реакция сопровождается значительными отклонениями в физиолого-биохимических процессах. Возникают симптомы начальных повреждений растений. Одновременно появляются защитные реакции, которые направлены на устранение этих повреждений. Если воздействие стрессора сильное и быстро нарастает, то организм может погибнуть. В противном случае он адаптируется к стрессору. Растение приспосабливается к новым условиям.
В исследованиях Ю.И. Долгова, К.А. Седова в опытах с Arabidopsisthaliana в культуре каллуса на модифицированной питательной среде Мурасиге и Скуга с различным сочетанием ауксинов и цитокининов, с кратковременной инкубацией при повышенной температуре (40°С) и культивировании на среде с повышенным содержанием сульфата меди (CuSO4⋅5H2O) установлено, что незначительные концентрации меди (20-50 мг/л) стимулировали рост каллуса как в первом, так и во втором пассажах. После первого цикла культивирования прирост каллуса по отношению к контролю составил 70%, а после второго - 50-80%. При увеличении концентрации меди до 60 мг/л наблюдали ингибирование каллуса в обоих пассажах. Выдерживание каллуса в условиях повышенной температуры от 3 до 5 часов стимулировало его рост, а начиная с 5 часов наблюдалось ингибирование роста клеток. Поэтому множество экспериментов направлено на получение повышенного количества полезных вторичных метаболитов в культуре invitro через процедуру стресса.
Техническая задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, состоит в оптимизации способа получения биологически активных соединений адаптогенного действия.
Технический результат, достигаемый использованием настоящего изобретения, состоит в регулировании накопления фенолов (тирозола, салидрозида), а также веществ ароматической природы (розавина, розина, розарина) в каллусной культуре родиолы розовой (Rhodiolarosea L.).
В предлагаемом способе поставленная цель достигается стимулированием роста каллусной культуры Rhodiolarosea L. под действием предшественников биосинтеза вторичных метаболитов (хитозан) и стрессовых факторов (кратковременное облучение ультрафиолетом).
Способ по изобретению осуществляют следующим образом. Стерильные семена родиолы розовой проращивают на среде Мурасиге-Скуга (MS). Проростки возрастом 14 суток используют для получения каллусной культуры.
Для культивирования каллусной культуры родиолы розовой используют модифицированную питательную среду Мурасиге-Скуга с контролируемым содержанием α-нафтилуксусной кислоты, 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты и хитозана (таблица 1). Эффективность культивирования и выход биологически активных веществ повышают путем кратковременного обучения каллусной культуры ультрафиолетовым светом среднего диапазона.
Цикл субкультивирования для каллусной культуры составляет 28 суток. Для выращивания каллусной культуры Rhodiolarosea L. используют чашки Петри. Каллус при пересеве делят на 3-7 частей, в зависимости от прироста. Культивирование проводят в стерильных условиях, на свету, при температуре 26°С, влажности 60-70%.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1
Семена растений родиолы розовой промывают детергентом и для стерилизации помещают в 0,1%-ный раствор сулемы (HgCl2) на 1 мин. После стерилизации материал трехкратно отмывают в течение 20 мин в дистиллированной стерильной воде. Стерильные семена проращивают на среде Мурасиге-Скуга (MS). Проростки возрастом 14 суток используют для получения каллусной культуры.
Культивирование каллусной культуры родиолы розовой осуществляют на питательной среде, состав которой соответствует таблице 1. Контроль - питательная среда, не содержащая хитозана. Питательную среду автоклавируют при 15 мин подготовительного и 15 мин основного режима при добавочном давлении 0,7-0,8 атм. Для выращивания каллусной культуры Rhodiolarosea L. используют чашки Петри (диаметр 60 мм). Каллус при пересеве делят на 3-7 частей, в зависимости от прироста. Культивирование проводят в стерильных условиях, на свету (16-часовой световой день), при температуре 26°С, влажности 60-70%. Используемые в работе колбы и инструменты стерилизуют в течение 60 минут при 180°С в сухожаровом шкафу.
Цикл субкультивирования для каллусной культуры составляет 28 суток.
Результаты анализа содержания основных биохимических соединений в каллусных культурах родиолы розовой, выращенных на питательных средах с добавлением хитозана и без добавления хитозана (таблица 1), приведены в таблице 2. Для определения содержания биохимических соединений в каллусных культурах использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, совмещенной с масс-спектрометрическим детектором.
Согласно данным, представленным в таблице 2, добавление в питательную среду такого предшественника биосинтеза вторичных метаболитов, как хитозан, приводит к незначительному повышению биосинтетической активности каллусной культуры родиолы розовой. Так, содержание розавина в опытном варианте увеличивается на 9,4-10,2% по сравнению с контролем, содержание розарина - на 1,3-3,6%, содержание розина - на 3,9-7,4%, содержание салидрозида - на 3,2-3,8%, содержание тирозола - на 2,7-3,9%.
Пример 2
Семена растений родиолы розовой промывают детергентом и для стерилизации помещают в 0,1%-ный раствор сулемы (HgCl2) на 1 мин. После стерилизации материал трехкратно отмывают в течение 20 мин в дистиллированной стерильной воде. Стерильные семена проращивают на среде Мурасиге-Скуга (MS). Проростки возрастом 14 суток используют для получения каллусной культуры.
Культивирование каллусной культуры родиолы розовой осуществляют на питательной среде, состав которой соответствует таблице 1. Питательную среду автоклавируют при 15 мин подготовительного и 15 мин основного режима при добавочном давлении 0,7-0,8 атм. Для выращивания каллусной культуры Rhodiolarosea L. используют чашки Петри (диаметр 60 мм). Каллус при пересеве делят на 3-7 частей, в зависимости от прироста. Эффективность культивирования и выход биологически активных веществ повышают путем кратковременного (15-минутного) обучения каллусной культуры ультрафиолетовым светом (длина волны 315 нм). Культивирование проводят в стерильных условиях, на свету (16-часовой световой день), при температуре 26°С, влажности 60-70%. Контроль - культивирование каллусной культуры без действия стрессового фактора (облучения ультрафиолетом). Используемые в работе колбы и инструменты стерилизуют в течение 60 минут при 180°С в сухожаровом шкафу.
Цикл субкультивирования для каллусной культуры составляет 28 суток.
Результаты анализа содержания основных биохимических соединений в каллусных культурах родиолы розовой, выращенных в условиях наличия и отсутствия стрессового фактора (облучение ультрафиолетом), приведены в таблице 3. 
Из таблицы 3 следует, что облучение каллусной культуры родиолы розовой ультрафиолетом приводит к значительному увеличению ее способности синтезировать биологически активные вещества - адаптогены. Содержание розавина в опытном варианте увеличивается на 45,2-47,0% по сравнению с контролем, содержание розарина - на 25,7-26,8%, содержание розина - на 42,6-49,0%, содержание салидрозида - на 15,2-18,3%, содержание тирозола - на 16,0-19,4%.
Таким образом, техническим результатом заявленного способа является регуляция содержания биологически активных веществ адаптогенного действия в каллусной культуре родиолы розовой путем введения в питательную среду предшественников биосинтеза вторичных метаболитов (хитозана) и действия стрессовых факторов (облучение ультрафиолетовым светом с длиной волны 315 нм).
Claims (1)
- Способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре родиолы розовой (Rhodiolarosea L.), характеризующийся тем, что проводят культивирование клеток растения Rhodiolarosea L. на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей нитрат аммония 1,65 г, хлорид кальция 0,44 г, сульфат магния 0,37 г, гидрофосфат калия 0,17 г, нитрат калия 1,90 г, борную кислоту 6,2 мг, хлорид кобальта 0,025 мг, сульфат меди (II) 0,025 мг, сульфат железа (II) 27,8 мг, сульфат марганца (II) 22,3 мг, йодид калия 0,83 мг, молибдат натрия 0,25 мг, сульфат цинка 8,6 мг, натрий железную соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 5 мл/л для стокового раствора, содержащего 5,57 г FeSO4⋅7H2O и 7,45 г Na2-ЭДТА на литр воды, сахарозу 30,0 г, инозит 100,0 мг, тиамин 1,0 мг, пиридоксин 1,0 мг, Са-пантетонат 10,0 мг, кинетин 0,05 г, α-нафтилуксусную кислоту 0,1 г, 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту 0,5 г, воду до 1 л, при культивировании дополнительно вводят в питательную среду хитозан в количестве 1,0 г/л, а культивированию предшествует кратковременное в течение 15 минут облучение выращиваемых растительных клеток ультрафиолетовым светом с длиной волны 315 нм.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019132882A RU2726067C1 (ru) | 2019-10-16 | 2019-10-16 | Способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре родиолы розовой (rhodiola rosea l.) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019132882A RU2726067C1 (ru) | 2019-10-16 | 2019-10-16 | Способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре родиолы розовой (rhodiola rosea l.) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2726067C1 true RU2726067C1 (ru) | 2020-07-08 |
Family
ID=71509869
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019132882A RU2726067C1 (ru) | 2019-10-16 | 2019-10-16 | Способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре родиолы розовой (rhodiola rosea l.) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2726067C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2797013C1 (ru) * | 2022-09-02 | 2023-05-30 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Уральский государственный экономический университет" (УрГЭУ) | Способ повышения эффективности культивирования в условиях in vitro каллусной культуры Базилика Обыкновенного (Ocimum basilicum) |
| CN118592281A (zh) * | 2024-08-09 | 2024-09-06 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种红景天属植物种子的繁育方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2415927C1 (ru) * | 2009-12-08 | 2011-04-10 | Учреждение Российской академии наук Институт физиологии растений им. К.А. Тимирязева РАН | ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК РАСТЕНИЯ ЖЕНЬШЕНЯ НАСТОЯЩЕГО Pg-1 (Panax ginseng C.A. Mey) В УСЛОВИЯХ IN VITRO - ПРОДУЦЕНТ ГИНЗЕНОЗИДОВ |
| RU2639566C1 (ru) * | 2016-08-05 | 2017-12-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии растений им. К.А.Тимирязева Российской академии наук | Каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Regel) Briq. в условиях in vitro - продуцент туркестерона |
-
2019
- 2019-10-16 RU RU2019132882A patent/RU2726067C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2415927C1 (ru) * | 2009-12-08 | 2011-04-10 | Учреждение Российской академии наук Институт физиологии растений им. К.А. Тимирязева РАН | ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК РАСТЕНИЯ ЖЕНЬШЕНЯ НАСТОЯЩЕГО Pg-1 (Panax ginseng C.A. Mey) В УСЛОВИЯХ IN VITRO - ПРОДУЦЕНТ ГИНЗЕНОЗИДОВ |
| RU2639566C1 (ru) * | 2016-08-05 | 2017-12-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии растений им. К.А.Тимирязева Российской академии наук | Каллусный штамм культивируемых клеток растения живучка туркестанская Ajuga turkestanica (Regel) Briq. в условиях in vitro - продуцент туркестерона |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| GALAMBOSI, et al., Importance and quality of roseroot Rhodiola rorea L. growing in the European North, Z. Arznei-Gewurzpfla, vol. 15, N4, p.160-164. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2797013C1 (ru) * | 2022-09-02 | 2023-05-30 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Уральский государственный экономический университет" (УрГЭУ) | Способ повышения эффективности культивирования в условиях in vitro каллусной культуры Базилика Обыкновенного (Ocimum basilicum) |
| CN118592281A (zh) * | 2024-08-09 | 2024-09-06 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种红景天属植物种子的繁育方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Staba | Milestones in plant tissue culture systems for the production of secondary products | |
| US6713303B2 (en) | Method for the mass propagation of adventitious roots of ginseng, camphor ginseng and wild ginseng by tissue culture and the improvement of their saponin content | |
| CN104186313B (zh) | 苹果果肉愈伤组织的诱导培养基及其诱导增殖培养方法 | |
| CN107155886A (zh) | 一种无病毒栝楼的培养方法 | |
| RU2726067C1 (ru) | Способ получения биологически активных веществ - адаптогенов в клеточной культуре родиолы розовой (rhodiola rosea l.) | |
| RU2360964C1 (ru) | КУЛЬТУРА КОРНЯ Hed.th. (Hedysarum theinum Krasnob.) - ПРОДУЦЕНТ ИЗОФЛАВОНОВ | |
| Farhadi et al. | The induction and development of somatic embryos from the in vitro cultures of Catharanthus roseus (L.) G. Don | |
| CA1284465C (en) | Method and composition for plant tissue and cell culture | |
| Zia et al. | In vitro selection for NaCl tolerance in Thymus vulgaris L. | |
| JPH1028582A (ja) | 生物学的物質の処理方法 | |
| Tavares et al. | Regeneration of the actinorhizal plant Myrica gale L. from epicotyl explants | |
| CN108353789B (zh) | 一种葡萄果实愈伤组织的诱导方法及其培养基 | |
| Zakiyah et al. | THE GROWTH OF Dendrobium spectabile (Blume) Miq. ORCHID PLANTLET IN VACIN AND WENT (VW) MEDIUM WITH DIFFERENT CONCENTRATIONS OF COCONUT WATER | |
| KR102894752B1 (ko) | 떡잎과 잎조직을 이용한 대마의 조직배양 방법 | |
| Buddhapriya et al. | In vitro micropropagation of Gyrinops walla (Gaerth.) using leaf disc explants | |
| RU2857251C1 (ru) | Способ культивирования in vitro микрочеренков, микропобегов каллусной ткани секвойи вечнозеленой (Sequoia sempervirens L.) | |
| RU2779988C1 (ru) | Способ аэропонного выращивания каучуконосного растения кок-сагыз Taraxacum kok-saghyz R | |
| JP2014054230A (ja) | 植物組織からのカルス及び培養細胞の誘導方法並びに形質転換細胞の作出方法 | |
| RU2394100C2 (ru) | Способ получения алкалоидов | |
| JPS6339595A (ja) | アルカロイドの製造方法 | |
| Al-Jubuory et al. | Influence of Growth Regulators and Tryptophan on Enhancing Production Bioactive Compounds in Callus Cultures of Pistacia weinmannifolia | |
| US4466216A (en) | Method for propagating plants from tissue cultures | |
| JP4686716B2 (ja) | 植物における二次代謝物の産生を増大せしめる方法 | |
| Widiwurjani¹ et al. | The Role of in Vintro Culture to Support Sustainable Agriculture and Agroindustry | |
| Shkopinskij et al. | Effect of cu and co nanoparticles based complex on stratification of grape grafts |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20210209 Effective date: 20210209 |