RU2725954C1 - Пептид, обладающий высокой аффинностью к белку pd-l1, и его применение - Google Patents

Пептид, обладающий высокой аффинностью к белку pd-l1, и его применение Download PDF

Info

Publication number
RU2725954C1
RU2725954C1 RU2019129985A RU2019129985A RU2725954C1 RU 2725954 C1 RU2725954 C1 RU 2725954C1 RU 2019129985 A RU2019129985 A RU 2019129985A RU 2019129985 A RU2019129985 A RU 2019129985A RU 2725954 C1 RU2725954 C1 RU 2725954C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
peptide
protein
seq
high affinity
human
Prior art date
Application number
RU2019129985A
Other languages
English (en)
Inventor
Найшо ЧЖУ
Баоси ЛЮ
Original Assignee
Найшо ЧЖУ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Найшо ЧЖУ filed Critical Найшо ЧЖУ
Application granted granted Critical
Publication of RU2725954C1 publication Critical patent/RU2725954C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к связывающим PD-L1 пептидам, и может быть использовано для получения антагониста белка PD-L1, для детекции или для клинического анализа экспрессии белка PD-L1. Изобретение обеспечивает получение пептида, способного связываться с человеческим PD-L1, с высокой аффинностью. 7 н.п. ф-лы, 6 ил.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение, в частности, относится к пептиду, обладающему высокой аффинностью к белку PD-L1, и к его применению.
Предшествующий уровень техники
Опухоль является серьезным заболеванием, которое угрожает здоровью человека, и трудно осуществить его эффективное предотвращение. В настоящее время основные способы лечения опухолей включают лучевую терапию, химиотерапию и хирургическое лечение, но их терапевтический эффект неудовлетворителен, а 5-летняя выживаемость после операции является низкой. В настоящее время разработка эффективного лекарственного средства для лечения опухолей является актуальной темой в исследованиях рака. В последние годы терапия с использованием контрольных точек иммунитета, представленная анти-PD-1/PD-L1, была исследована как новый подход к лечению опухолей. Три препарата антител к PD-1/PD-L1 были одобрены Управлением по контролю продуктов питания и лекарственных средств США (FDA) для клинического применения. Хотя эти лекарства имеют определенные эффекты, у них есть недостатки, такие как низкая эффективность, побочные эффекты и нецелевое связывание. Поэтому необходимо разработать лекарство, которое будет эффективным, действующим в течение длительного времени и обладающим широким спектром терапевтических эффектов.
Изложение сущности изобретения
Целевой пептид по изобретению получали путем химического синтеза и очистки. Константу диссоциации между пептидом и белком PD-L1 определяли с помощью ELISA, и определяли блокирующий эффект пептида в отношении сигнального пути PD-1/PD-L1. Аффинность пептида к белку PD-L1, экспрессируемому на поверхности опухолевых клеток, определяли проточной цитометрией. Наконец, пептид применяли на модели опухоли мыши, и потенциальная ценность пептида при лечении опухоли была подтверждена изменениями размера опухоли и продолжительности выживания мышей.
Целью настоящего изобретения является обеспечение пептида, обладающего высокой аффинностью связывания с белком PD-L1, и применение пептида при лечении опухоли.
Настоящее изобретение относится к пептиду, обладающему высокой аффинностью к белку PD-L1 человека (обозначенному как PPLC), где пептид имеет аминокислотную последовательность, как указано в SEQ ID NO: 1. Пептид имеет следующие функциональные характеристики: (1) высокую аффинность к белку PD-L1 человека с константой диссоциации Kd 0,75 мкМ (значение Kd указывает концентрацию лиганда, когда половина рецепторов связана с лигандом, и чем меньше значение Kd, тем выше аффинность рецептора в отношении лиганда); (2) он может эффективно блокировать аффинность белка PD-1/PD-L1; (3) он может эффективно связываться с белком PD-L1, экспрессируемым на поверхности клетки; (4) инфузия пептида животным с опухолью позволяет эффективно ингибировать рост опухоли и увеличивать продолжительность выживания животных.
Настоящее изобретение также относится к гену, кодирующему пептид, обладающий высокой аффинностью к человеческому белку PD-L1 (состоящему из вырожденных кодонов соответствующих аминокислот), где ген имеет нуклеотидную последовательность, как указано в SEQ ID NO: 2.
Настоящее изобретение также обеспечивает биотехнологическими средствами серию пептидных последовательностей, имеющих ту же функцию, что и пептид, представленный SEQ ID NO: 1, где пептидные последовательности в основном включают SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4.
Настоящее изобретение также относится к пептиду, содержащему аминокислотные последовательности пептидов, обладающих высокой аффинностью к белку PD-L1, как установлено в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, где пептид представляет собой однократно или многократно повторяемую тандемную или разветвленную молекулярную последовательность пептидной природы, и молекулу, включающую эти последовательности как коровые (т.е. имеющую гомологию более 70%), где молекула имеет аминокислотную последовательность, установленную в SEQ ID NO: 5.
Настоящее изобретение также обеспечивает пептид, модифицированный биологической или химической группой, включающий пептид SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4, обладающие высокой аффинностью к белку PD-L1, в виде коровой последовательности, а его C-концевая группа (N-концевая группа или группа боковой цепи) связана с антигеном или лекарственным средством, или модифицирована ПЭГ, или ковалентно модифицирована другими молекулярными группами.
Настоящее изобретение также относится к модифицированному пептиду, включающему вышеуказанный пептид, обладающий высокой аффинностью к белку PD-L1, который помечен флуорофором FITC, изотопом, хемилюминесцентной группой или ферментным реагентом, и модифицированный пептид можно использовать для детекции белка PD-L1.
Настоящее изобретение также относится к применению указанного выше пептида, обладающего высокой аффинностью к белку PD-L1, при получении антагониста белка PD-L1.
Настоящее изобретение также относится к применению указанного выше пептида, обладающего высокой аффинностью к белку PD-L1, для приготовления агента для детекции или для клинического анализа экспрессии белка PD-L1.
Настоящее изобретение также обеспечивает применение гена, имеющего нуклеотидную последовательность, как указано в SEQ ID NO: 2, при приготовлении антагониста белка PD-L1 или приготовлении агента для детекции с индикатором белка PD-L1.
Пептид по настоящему изобретению, имеющий аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 1, можно использовать в качестве лекарственного средства-антагониста белка PD-L1. Пептид обладает высокой аффинностью связывания с белком PD-L1, блокирует негативный регуляторный сигнальный путь PD-1/PD-L1 иммунитета человека и, таким образом, активирует иммунитет, инициирует цитотоксический эффект Т-клеток в отношении опухолей, и может использоваться в качестве потенциального препарата для таргетной терапии опухолей. Пептид по настоящему изобретению, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4, также можно использовать в качестве антагониста белка PD-L1. Эти пептиды также обладают высокой аффинностью связывания с белком PD-L1, блокируют аффинность PD-1/PD-L1 и инициируют иммунитет для уничтожения опухолевых клеток.
Анализ аффинности пептида PPLC к белку PD-L1.
96-луночный планшет для ELISA покрывали 2 мкг/мл белка PD-L1 при 4°С в течение ночи. Различные концентрации пептида PPLC, меченного FITC, добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 1 часа. После инкубации добавляли конъюгированное с пероксидазой хрена анти-FITC антитело, инкубировали в течение 1 часа и затем добавляли окрашивающий раствор ABTS. Величину оптической плотности при 410 нм определяли с использованием ридера для микропланшетов M5, а GraphPad Prism 6 использовали для построения графиков и анализа. Результаты демонстрируют, что пептид PPLC обладает сильной аффинностью к белку PD-L1 с константой диссоциации Kd 0,75 мкМ (фиг. 1).
Анализ конкурентного связывания между пептидом PPLC и белком PD-1 - PD-L1.
96-луночный планшет для ELISA покрывали 2 мкг/мл белка PD-L1 при 4°С в течение ночи. Различные концентрации пептида PPLC и 1 мкг/мл белка PD-1 смешивали и инкубировали совместно. После инкубации в качестве первичного антитела добавляли кроличьи моноклональные антитела против человеческого PD-1, а затем в качестве вторичного антитела добавляли конъюгированное с пероксидазой хрена моноклональное антитело против IgG кроликов. После проявления окраски ABTS измеряли значение оптической плотности при 410 нм с использованием ридера для микропланшетов M5, а GraphPad Prism 6 использовали для построения графиков и анализа. Результаты демонстрируют, что пептид PPLC позволяет эффективно блокировать связывание PD-1/PD-L1 (фиг. 2).
Анализ связывания пептида PPLC с белком PD-L1, экспрессируемым на поверхности клетки.
Рекомбинантную плазмиду, экспрессирующую рекомбинантный белок PD-L1 человека, трансфицировали в клеточную линию СНО и инкубировали в течение 36 часов. После инкубации добавляли моноклональное антитело анти-PD-L1 или пептид PPLC, меченный FITC, и инкубировали при 4°C в течение 30 минут. После инкубации проводили проточную цитометрию (фиг. 3). После трансфекции плазмиды клетки дополнительно культивировали в течение 36 часов, а затем добавляли пептид PPLC, меченный FITC, и инкубировали при 37°C в течение 30 минут. После инкубации проводили конфокальную флуоресцентную микроскопию (фиг. 4). Результаты демонстрируют, что пептид PPLC может эффективно связываться с белком PD-L1, экспрессируемым на клеточной поверхности (фиг. 3 и фиг. 4).
Влияние пептида PPLC на объем опухоли на животных моделях опухолей.
Экспериментальные животные были разделены на две группы: группа PBS (фосфатный буферный раствор) и группа PPLC. Опухоли вводили подкожно самкам мышей Balb/c в возрасте 6 недель. Спустя две недели, когда размер опухоли достигал 100 мм3, проводили медикаментозное лечение PPLC. Размер опухоли мыши измеряли ежедневно, и изменение регистрировали. Результаты показывают, что пептид PPLC позволяет значительно снизить скорость роста опухоли мыши (фиг. 5) и увеличить продолжительность выживания мышей (фиг. 6).
Можно видеть, что пептид, обеспеченный в настоящем изобретении, обладает высокой аффинностью к белку PD-L1 и может блокировать аффинность белка PD-1/ PD-L1 у человека. Таким образом, пептид может нарушать иммунную толерантность опухолей, активировать иммунитет, инициировать цитотоксический эффект Т-клеток в отношении опухолей и достигать цели лечения опухолей. Следовательно, пептид можно использовать в качестве лекарственного средства для таргетной терапии опухолей. Поскольку пептид PPLC обладает высокой аффинностью к белку PD-L1, его можно использовать для приготовления зонда для обнаружения белка PD-L1. Когда пептид PPLC мечен флуорофором FITC, изотопом, хемилюминесцентной группой или ферментным реагентом, его можно использовать для количественного, качественного определения, и определения расположения белка PD-L1 в различных биологических образцах и клетках.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 демонстрирует аффинность связывания пептида PPLC с белком PD-L1.
Фиг. 2 демонстрирует блокирование связывания PD-1/PD-L1 белка с помощью PPLC.
Фиг. 3 демонстрирует результаты проточной цитометрии. Левая панель показывает результаты обнаружения моноклонального антитела к PD-L1 (PD-L1-Ab), а правая панель показывает результаты обнаружения пептида PPLC. Серым цветом представлены клетки отрицательного контроля PD-L1, красные и синие линии представляют PDO-L1-позитивные CHO-PDL1-экспрессирующие клетки.
Фиг. 4 демонстрирует результаты флуоресцентного конфокального анализа. Верхняя правая панель демонстрирует результаты, полученные с помощью конфокальной микроскопии, показывающие, что FITC-меченный PPLC обладает высокой аффинностью к PD-L1, экспрессируемому на поверхности клеток CHO.
Фиг. 5 показывает, что пептид PPLC ингибирует рост опухоли у мышей.
Фиг. 6 показывает, что пептид PPLC увеличивает продолжительность выживания мыши.
Подробное описание вариантов осуществления
1. Получение и модификация пептидных последовательностей.
Необходимые пептиды, обладающие аффиностью к белку PD-L1 и блокирующие аффинность PD-1/PD-L1 белка, были искусственно синтезированы химическим способом.
2. Синтез и очистка пептида
Смолу Lys(Dde)-Wang замачивали в ДХМ в течение 10 минут, а затем ДХМ удаляли. В смолу добавляли 25% пиперидин (пиперидин/ ДМФА) с 3-кратным объемом, а затем пиперидин сливали после продувания азотом в течение 20 минут. ДМФ добавляли и продували в течение 1 мин. После 6 циклов ДМФА удаляли, и было обнаружено, что смола получала синюю окраску от нингидрина. Продукт является смолой H-Lys(Dde)-Wang. К смоле добавляли три эквивалента Fmoc-Val-OH, HATU, диизопропилэтиламин в ДМФА. После продувки азотом в течение 20 минут реакционный раствор ДМФА удаляли. Добавляли ДМФА, и продували азотом в течение 1 минуты перед удалением реагента. После 3 циклов смола была признана очищенной по реакции с нингидрином. Продукт представляет собой смолу Fmoc-Val-Lys(Dde)-Wang. Неочищенный продукт получали тем же способом. Очистку проводили на колонке Hanbang YCM C18 с использованием ацетонитрила и воды Milli-Q. Таким способом был получен пептид, имеющий высокую специфичность и высокую активность.
3. Аффинность пептида PPLC к белку PD-L1 и результаты экспериментов на животных
(1) Аффинность PPLC к белку PD-L1.
96-луночный планшет для ELISA покрывали 2 мкг/мл белка PD-L1 при 4°С в течение ночи. Различные концентрации пептида PPLC, меченного FITC, добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 1 часа. После инкубации добавляли конъюгированное с пероксидазой хрена анти-FITC антитело, инкубировали в течение 1 часа и затем добавляли окрашивающий раствор ABTS. Величину ОП при 410 нм измеряли с использованием ридера для микропланшетов M5, а GraphPad Prism 6 использовали для построения графиков и анализа. Результаты показывают, что пептид PPLC обладает высокой аффинностью связывания с белком PD-L1 с константой диссоциации Kd 0,75 мкМ.
(2) Анализ конкурентного связывания между пептидом PPLC и PD-1 - PD-L1 белком.
96-луночный планшет для ELISA покрывали 2 мкг/мл белка PD-L1 при 4°С в течение ночи. Различные концентрации пептида PPLC пептида и 1 мкг/мл белка PD-1 смешивали и инкубировали совместно. После инкубации в качестве первичного антитела добавляли кроличьи моноклональные антитела против человеческого PD-1, а затем в качестве вторичного антитела добавляли конъюгированное с пероксидазой хрена моноклональное антитело против IgG кроликов. После проявления цвета ABTS измеряли значение оптической плотности при 410 нм с использованием ридера для микропланшетов M5, а GraphPad Prism 6 использовали для построения графиков и анализа. Результаты показывают, что пептид PPLC может эффективно блокировать связывание PD-1/PD-L1.
(3) Анализ связывания пептида PPLC с белком PD-L1, экспрессируемым на клеточной поверхности.
Рекомбинантную плазмиду, экспрессирующую рекомбинантный белок PD-L1 человека, трансфицировали в клеточную линию СНО и инкубировали в течение 36 часов. После инкубации добавляли моноклональное антитело анти-PD-L1 или пептид PPLC, меченный FITC, и инкубировали при 4°C в течение 30 минут. После инкубации проводили проточную цитометрию. После трансфекции плазмиды клетки дополнительно культивировали в течение 36 часов, а затем добавляли пептид PPLC, меченный FITC, и инкубировали при 37°C в течение 30 минут. После инкубации проводили конфокальную флуоресцентную детекцию. Результаты показывают, что пептид PPLC может эффективно связываться с белком PD-L1, экспрессируемым на клеточной поверхности.
(4) Влияние пептида PPLC на объем опухоли на модели опухоли животного.
Экспериментальные животные были разделены на две группы: группа PBS (фосфатный буферный раствор) и группа PPLC. Опухоли вводили подкожно самкам мышей Balb/c. Спустя две недели, когда размер опухоли достигал 100 мм3, проводили медикаментозное лечение PPLC. Размер опухоли мыши измеряли ежедневно, и изменение регистрировали. Результаты демонстрируют, что пептид PPLC позволяет значительно снизить скорость роста опухоли мыши и увеличить продолжительность выживания мышей.
Как показано на фиг. 1-6, пептид PPLC обладает высокой аффинностью связывания с белком PD-L1 и может блокировать аффинность PD-1/PD-L1 белка на молекулярном уровне. Результаты на животных показали, что размер опухолей у мышей, получавших пептид PPLC, был значительно меньше, чем у контрольной группы. Вышеуказанные результаты показывают, что пептид PPLC может нарушать иммунную толерантность к опухоли, улучшать уничтожение опухолевых клеток Т-клетками и, таким образом, достигать цели лечения опухолей.
4. Промышленная применимость
Иммунотерапия опухолей - это новый метод лечения опухолей, разработанный в последние годы.
Терапия на основе блокады иммунной контрольной точки, представленной PD-1/PD-L1 белком, является важным компонентом иммунотерапии опухолей. В настоящее время некоторые препараты на основе антител к PD-1/PD-L1 были одобрены FDA и показали хорошие результаты в клиническом применении и при лечении таких заболеваний, как меланома. Однако, в то же время, терапия антителами также сталкивается со многими проблемами, такими как высокая иммуногенность, высокая стоимость, серьезные побочные эффекты и нецелевое связывание. Разработка противоопухолевого препарата с целевым эффектом и малой иммуногенностью является важным направлением развития иммунологии сегодня. Пептид, обладающий высокой аффинностью связывания с белком PD-L1, обеспеченный в настоящем документе, позволяет ингибировать связывание PD-1/PD-L1 белка, нарушать иммунную толерантность опухоли и значительно ингибировать рост опухолевых клеток. Таким образом, пептид по настоящему изобретению можно использовать в качестве потенциального лекарственного средства для таргетной терапии опухолей. Кроме того, модифицированный пептид PPLC можно использовать в качестве реагента для обнаружения экспрессии человеческого белка PD-L1.
--->
SEQUENCE LISTING <110> ZHU Naishuo
<120> PEPTIDE HAVING HIGH AFFINITY FOR PD-L1 PROTEIN AND USE THEREOF
<130> 001
<160> 5
<170> Patentln version 3.3
<210>
<211>
<212>
<213> 1
12
PRT
Artificial Sequence
<400> 1
Val Ser Val Ser His Phe Gln Lys Val Trp Val Val
1 5 10
<210>
<211>
<212>
<213> 2
45
DNA
Artificial Sequence
<400> 2
gtgagtgtgtcgcattttcagaaggtttgggttgtgggtggaggt 45
<210>
<211>
<212>
<213> 3
12
PRT
Artificial Sequence
<400> 3
His Glu Ser Trp Leu Pro Ala Tyr Val Leu Gly Ser
1 5 10
<210>
<211>
<212>
<213> 4
12
PRT
Artificial Sequence
<400> 4
His Thr Ser Trp Ile Leu Tyr Gly Glu Thr Gly Trp
1 5 10
<210>
<211>
<212>
<213> 5
40
PRT
Artificial Sequence
<400> 5
Val Ser Val Ser His Phe Gln Lys Val Trp Val Val Asp Met His Glu
Ser Trp Leu Pro Ala Tyr Val Leu Gly Ser Asp Met His Thr Ser Trp
20 25 30
Ile Leu Tyr Gly Glu Thr Gly Trp
35 40
<---

Claims (7)

1. Пептид, обладающий высокой аффинностью к человеческому белку PD-L1, характеризующийся аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4, или тандемный или разветвленный пептид с одним или несколькими повторами из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
2. Ген, кодирующий пептид, обладающий высокой аффинностью к человеческому белку PD-L1, по п. 1, где ген имеет нуклеотидную последовательность, как указано в SEQ ID NO: 2.
3. Пептид, модифицированный биологической или химической группой, включающий пептид, обладающий высокой аффинностью к человеческому белку PD-L1, по п. 1 в качестве коровой последовательности, и где его С-концевая группа, N-концевая группа или группа боковой цепи модифицирована ПЭГ или ковалентно модифицирована другими молекулярными группами.
4. Модифицированный пептид, включающий пептид, обладающий высокой аффинностью к человеческому белку PD-L1, по п. 1, который помечен флуорофором FITC, изотопом, хемилюминесцентной группой или ферментным реагентом, и где модифицированный пептид используется для детекции белка PD-L1.
5. Применение пептида, обладающего высокой аффинностью к человеческому белку PD-L1, по п. 1 для получения антагониста белка PD-L1.
6. Применение пептида, обладающего высокой аффинностью к человеческому белку PD-L1, по п. 1 для приготовления агента для детекции или для клинического анализа экспрессии белка PD-L1.
7. Применение гена, кодирующего пептид, обладающий высокой аффинностью к человеческому белку PD-L1, по п. 2 для получения антагониста белка PD-L1 или получения агента для детекции с индикатором белка PD-L1.
RU2019129985A 2017-02-25 2018-01-25 Пептид, обладающий высокой аффинностью к белку pd-l1, и его применение RU2725954C1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710105087.2 2017-02-25
CN201710105087.2A CN108503691B (zh) 2017-02-25 2017-02-25 一种人pd-l1蛋白高亲和性肽及其应用
PCT/CN2018/074112 WO2018153208A1 (zh) 2017-02-25 2018-01-25 一种人pd-l1蛋白高亲和性肽及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2725954C1 true RU2725954C1 (ru) 2020-07-07

Family

ID=63254285

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019129985A RU2725954C1 (ru) 2017-02-25 2018-01-25 Пептид, обладающий высокой аффинностью к белку pd-l1, и его применение

Country Status (6)

Country Link
US (1) US11377501B2 (ru)
EP (1) EP3587440B1 (ru)
JP (1) JP6974874B2 (ru)
CN (1) CN108503691B (ru)
RU (1) RU2725954C1 (ru)
WO (1) WO2018153208A1 (ru)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110746493A (zh) * 2019-09-06 2020-02-04 中国药科大学 一种pd-l1拮抗剂多肽及其应用
CN110669102A (zh) * 2019-09-06 2020-01-10 中国药科大学 一种具有免疫检查点拮抗活性的多肽及其应用
CN110669108A (zh) * 2019-09-06 2020-01-10 中国药科大学 一种多肽及其应用
CN111548393B (zh) * 2020-04-27 2021-10-26 贵州民族大学 一种线形肽分子及其应用
CN112402622B (zh) * 2020-11-10 2022-04-01 福建医科大学 靶向pd-l1的抗肿瘤多肽纳米药物载体及其应用
CN116731193A (zh) * 2022-03-01 2023-09-12 伯桢生物科技(杭州)有限公司 重组蛋白及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103936835A (zh) * 2014-04-29 2014-07-23 郑州大学 具有抗肿瘤活性的靶向PD-L1IgV亲和肽D1
EA201490369A1 (ru) * 2011-08-01 2014-08-29 Дженентек, Инк. Способы лечения рака с использованием антагонистов, связывающихся с осью pd-1, и ингибиторов mek
WO2016086021A1 (en) * 2014-11-25 2016-06-02 Bristol-Myers Squibb Company Novel pd-l1 binding polypeptides for imaging

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013056716A1 (en) * 2011-10-17 2013-04-25 Herlev Hospital Pd-l1 based immunotherapy
SG10202007111TA (en) * 2014-07-15 2020-09-29 Genentech Inc Compositions for treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and mek inhibitors

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA201490369A1 (ru) * 2011-08-01 2014-08-29 Дженентек, Инк. Способы лечения рака с использованием антагонистов, связывающихся с осью pd-1, и ингибиторов mek
CN103936835A (zh) * 2014-04-29 2014-07-23 郑州大学 具有抗肿瘤活性的靶向PD-L1IgV亲和肽D1
WO2016086021A1 (en) * 2014-11-25 2016-06-02 Bristol-Myers Squibb Company Novel pd-l1 binding polypeptides for imaging

Also Published As

Publication number Publication date
EP3587440A1 (en) 2020-01-01
JP2020508069A (ja) 2020-03-19
WO2018153208A1 (zh) 2018-08-30
US20210230286A1 (en) 2021-07-29
EP3587440A4 (en) 2021-01-13
JP6974874B2 (ja) 2021-12-01
EP3587440B1 (en) 2023-03-15
US11377501B2 (en) 2022-07-05
CN108503691B (zh) 2021-07-23
CN108503691A (zh) 2018-09-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2725954C1 (ru) Пептид, обладающий высокой аффинностью к белку pd-l1, и его применение
CN102836441B (zh) 于感染性与恶性疾病的治疗中提升免疫反应的方法
ES2363162T3 (es) Composicones y procedimientos para el tratamiento de trastornos fibróticos.
CN108135968A (zh) 嵌合多肽组装体及其制备和使用方法
WO2020038147A1 (zh) 抗bcma的单域抗体及其应用
MX2010008571A (es) Anticuerpos anti-trka, y derivados de los mismos.
HUE025294T2 (en) New chemokine-binding polypeptides that are able to inhibit the process of autoimmunity, inflammation and cancer
CN107106655A (zh) 使用白细胞介素‑10治疗疾病和病症的方法
CN112386678B (zh) 多肽或其衍生物的应用
CN107531769A (zh) 原毒素‑ii变体及使用方法
CN105793277A (zh) 原毒素-ii变体及其使用方法
CN102088992A (zh) 肽基二酰基甘油酯
CA2458565A1 (en) New angiogenesis inhibitors based on soluble cd44 receptor hyaluronic acid binding domain
WO2012080822A2 (en) Antitumor peptide derived from a complementarity determining region of a humanized monoclonal antibody to napi2b transporter
KR20230096959A (ko) Il-10을 포함하는 이중 시토카인 융합 단백질
CN101838306A (zh) 一种k4多肽合成产物及其应用
US11629186B2 (en) Anti-CCL8 antibodies and uses thereof
CN110627905B (zh) 靶向vegf与egfr的双功能融合蛋白及其应用
CN100432103C (zh) 有效治疗肿瘤和其它需要除去或破坏细胞的疾病的肽
JP2011016810A (ja) ＮＣＡＭ機能を調節するためのポリ−α２，８−シアル酸模倣ペプチドの使用
KR20140090295A (ko) T 세포 특이적인 인간화 단일조각항체 전달체
JP7006968B2 (ja) 腫瘍壊死因子αの高親和性ペプチド及びその適用
CN107286238B (zh) 抗hcv广谱中和抗体的制备、检测以及应用
KR20200020966A (ko) 면역용 펩티드, 면역용 펩티드의 제조 방법, 그것을 포함하는 면역 질환용 의약 조성물, 및 면역 질환의 치료 방법
Linnik et al. Antibody Bioconjugates Incorporating Bacterial formyl-Met Peptides Engage Neutrophils in Targeted Cell Killing