RU2720509C2 - Комбинированная терапия pac-1 - Google Patents
Комбинированная терапия pac-1 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2720509C2 RU2720509C2 RU2017146346A RU2017146346A RU2720509C2 RU 2720509 C2 RU2720509 C2 RU 2720509C2 RU 2017146346 A RU2017146346 A RU 2017146346A RU 2017146346 A RU2017146346 A RU 2017146346A RU 2720509 C2 RU2720509 C2 RU 2720509C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pac
- cancer
- vemurafenib
- cells
- active substance
- Prior art date
Links
- YQNRVGJCPCNMKT-LFVJCYFKSA-N 2-[(e)-[[2-(4-benzylpiperazin-1-ium-1-yl)acetyl]hydrazinylidene]methyl]-6-prop-2-enylphenolate Chemical compound [O-]C1=C(CC=C)C=CC=C1\C=N\NC(=O)C[NH+]1CCN(CC=2C=CC=CC=2)CC1 YQNRVGJCPCNMKT-LFVJCYFKSA-N 0.000 title claims abstract description 260
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 title description 12
- 101100462537 Caenorhabditis elegans pac-1 gene Proteins 0.000 title description 3
- 101100117764 Mus musculus Dusp2 gene Proteins 0.000 title description 3
- GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N vemurafenib Chemical compound CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(=CN=C3NC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1F GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 224
- 229960003862 vemurafenib Drugs 0.000 claims abstract description 223
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 200
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 129
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 75
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 claims abstract description 74
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 claims abstract description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 64
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 46
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 101000838335 Homo sapiens Dual specificity protein phosphatase 2 Proteins 0.000 claims abstract 14
- 101001080401 Homo sapiens Proteasome assembly chaperone 1 Proteins 0.000 claims abstract 14
- 229960005552 PAC-1 Drugs 0.000 claims abstract 14
- 102100027583 Proteasome assembly chaperone 1 Human genes 0.000 claims abstract 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 252
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 94
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 75
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 74
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 54
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 33
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 claims description 28
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 28
- 229960004066 trametinib Drugs 0.000 claims description 26
- LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N trametinib Chemical group CC(=O)NC1=CC=CC(N2C(N(C3CC3)C(=O)C3=C(NC=4C(=CC(I)=CC=4)F)N(C)C(=O)C(C)=C32)=O)=C1 LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 claims description 25
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 17
- -1 PAC-1 compound Chemical class 0.000 claims description 11
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 10
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 10
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 9
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 8
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000025127 Erdheim-Chester disease Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005099 Langerhans cell histiocytosis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 4
- 102200055464 rs113488022 Human genes 0.000 claims description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 103
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 38
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 19
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 13
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 239000000945 filler Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000007761 synergistic anti-cancer Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004611 cancer cell death Effects 0.000 abstract 1
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 76
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 57
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 37
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 31
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 31
- 102100023712 Poly [ADP-ribose] polymerase 1 Human genes 0.000 description 30
- 108010064218 Poly (ADP-Ribose) Polymerase-1 Proteins 0.000 description 29
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 25
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 25
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 24
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 22
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 22
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 21
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 21
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 20
- 102100029855 Caspase-3 Human genes 0.000 description 19
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 18
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 18
- 102000047934 Caspase-3/7 Human genes 0.000 description 16
- 108700037887 Caspase-3/7 Proteins 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 16
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 16
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 15
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 15
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 13
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 12
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 12
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 12
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 11
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 10
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 10
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 8
- BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N dabrafenib Chemical compound S1C(C(C)(C)C)=NC(C=2C(=C(NS(=O)(=O)C=3C(=CC=CC=3F)F)C=CC=2)F)=C1C1=CC=NC(N)=N1 BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 8
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 8
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 8
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 8
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 8
- 102100031480 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Human genes 0.000 description 7
- 101710146526 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Proteins 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 7
- 229960002465 dabrafenib Drugs 0.000 description 7
- HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N ent-staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 7
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N staurosporine Chemical compound C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1[C@H]1C[C@@H](NC)[C@@H](OC)[C@]4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N 0.000 description 7
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 7
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 7
- 229940125431 BRAF inhibitor Drugs 0.000 description 6
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- GZDRODOYEFEHGG-NUDCOPPTSA-N (4s)-4-[[(2s)-2-acetamido-3-carboxypropanoyl]amino]-5-[[(2s)-1-[[(2s)-3-carboxy-1-oxo-1-[[2-oxo-4-(trifluoromethyl)chromen-7-yl]amino]propan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound FC(F)(F)C1=CC(=O)OC2=CC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(C)=O)C(C)C)=CC=C21 GZDRODOYEFEHGG-NUDCOPPTSA-N 0.000 description 5
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 5
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 5
- 101100327819 Caenorhabditis elegans chl-1 gene Proteins 0.000 description 5
- 101100247317 Physarum polycephalum RAS1 gene Proteins 0.000 description 5
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 5
- 230000009925 apoptotic mechanism Effects 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 5
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 5
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 5
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 4
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 102100030306 TBC1 domain family member 9 Human genes 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 208000004064 acoustic neuroma Diseases 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 230000005756 apoptotic signaling Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 3
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 3
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 3
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 3
- MMNNTJYFHUDSKL-UHFFFAOYSA-N methyl n-[6-[2-(5-chloro-2-methylphenyl)-1-hydroxy-3-oxoisoindol-1-yl]-1h-benzimidazol-2-yl]carbamate Chemical compound C=1C=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=CC=1C(C1=CC=CC=C1C1=O)(O)N1C1=CC(Cl)=CC=C1C MMNNTJYFHUDSKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000012453 solvate Chemical class 0.000 description 3
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- YABJJWZLRMPFSI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-5-[[2-[5-(trifluoromethyl)-1H-imidazol-2-yl]-4-pyridinyl]oxy]-N-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-benzimidazolamine Chemical compound N=1C2=CC(OC=3C=C(N=CC=3)C=3NC(=CN=3)C(F)(F)F)=CC=C2N(C)C=1NC1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 YABJJWZLRMPFSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 2
- 201000005262 Chondroma Diseases 0.000 description 2
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 102100030708 GTPase KRas Human genes 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000584612 Homo sapiens GTPase KRas Proteins 0.000 description 2
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 2
- 201000010133 Oligodendroglioma Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 2
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 208000024447 adrenal gland neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 239000004479 aerosol dispenser Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 101150048834 braF gene Proteins 0.000 description 2
- 208000003362 bronchogenic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 2
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 2
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 2
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- CMJCXYNUCSMDBY-ZDUSSCGKSA-N lgx818 Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C)CNC1=NC=CC(C=2C(=NN(C=2)C(C)C)C=2C(=C(NS(C)(=O)=O)C=C(Cl)C=2)F)=N1 CMJCXYNUCSMDBY-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 208000029340 primitive neuroectodermal tumor Diseases 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 239000011885 synergistic combination Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N triacetin Chemical compound CC(=O)OCC(OC(C)=O)COC(C)=O URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 230000004222 uncontrolled growth Effects 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- GFMMXOIFOQCCGU-UHFFFAOYSA-N 2-(2-chloro-4-iodoanilino)-N-(cyclopropylmethoxy)-3,4-difluorobenzamide Chemical compound C=1C=C(I)C=C(Cl)C=1NC1=C(F)C(F)=CC=C1C(=O)NOCC1CC1 GFMMXOIFOQCCGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RCLQNICOARASSR-SECBINFHSA-N 3-[(2r)-2,3-dihydroxypropyl]-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodoanilino)-8-methylpyrido[2,3-d]pyrimidine-4,7-dione Chemical compound FC=1C(=O)N(C)C=2N=CN(C[C@@H](O)CO)C(=O)C=2C=1NC1=CC=C(I)C=C1F RCLQNICOARASSR-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 75976-10-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 0.000 description 1
- GLANOOJJBKXTMI-UHFFFAOYSA-N 9-(9-formylfluoren-9-yl)fluorene-9-carbaldehyde Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1(C=O)C1(C=O)C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 GLANOOJJBKXTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 206010061424 Anal cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- KHBQMWCZKVMBLN-UHFFFAOYSA-N Benzenesulfonamide Chemical compound NS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 KHBQMWCZKVMBLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical class OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008720 Bone Marrow Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010065553 Bone marrow failure Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 201000000274 Carcinosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102000004041 Caspase 7 Human genes 0.000 description 1
- 108090000567 Caspase 7 Proteins 0.000 description 1
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004091 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 102100026550 Caspase-9 Human genes 0.000 description 1
- 108090000566 Caspase-9 Proteins 0.000 description 1
- 206010007953 Central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000009047 Chordoma Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000009798 Craniopharyngioma Diseases 0.000 description 1
- 201000005171 Cystadenoma Diseases 0.000 description 1
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 102100023266 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710146529 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057649 Endometrial sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005431 Endometrioid Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005231 Epithelioid sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000004066 Ganglioglioma Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 208000002125 Hemangioendothelioma Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 description 1
- 208000029966 Hutchinson Melanotic Freckle Diseases 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036241 Liver adenomatosis Diseases 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108090000744 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004232 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinases Human genes 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 206010029488 Nodular melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- SUDAHWBOROXANE-SECBINFHSA-N PD 0325901 Chemical compound OC[C@@H](O)CONC(=O)C1=CC=C(F)C(F)=C1NC1=CC=C(I)C=C1F SUDAHWBOROXANE-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 102000018886 Pancreatic Polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 206010033701 Papillary thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 229920000776 Poly(Adenosine diphosphate-ribose) polymerase Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 206010051807 Pseudosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000008183 Pulmonary blastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 229920001800 Shellac Polymers 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101000983124 Sus scrofa Pancreatic prohormone precursor Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000014070 Vestibular schwannoma Diseases 0.000 description 1
- 208000012018 Yolk sac tumor Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 206010000583 acral lentiginous melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000009621 actinic keratosis Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 208000002517 adenoid cystic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000001256 adenosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000008395 adenosquamous carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 210000004727 amygdala Anatomy 0.000 description 1
- 201000007696 anal canal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940124650 anti-cancer therapies Drugs 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 230000003127 anti-melanomic effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- 239000002774 b raf kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- ACWZRVQXLIRSDF-UHFFFAOYSA-N binimetinib Chemical compound OCCONC(=O)C=1C=C2N(C)C=NC2=C(F)C=1NC1=CC=C(Br)C=C1F ACWZRVQXLIRSDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000006491 bone marrow cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006189 buccal tablet Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 208000002458 carcinoid tumor Diseases 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000006571 choroid plexus carcinoma Diseases 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 208000009060 clear cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 210000003792 cranial nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 208000001991 endodermal sinus tumor Diseases 0.000 description 1
- 201000003908 endometrial adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000006828 endometrial hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 208000028730 endometrioid adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000008361 ganglioneuroma Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 125000005908 glyceryl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001087 glyceryl triacetate Substances 0.000 description 1
- 235000013773 glyceryl triacetate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000717 hydrazino group Chemical group [H]N([*])N([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 201000004933 in situ carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 208000020082 intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 150000008040 ionic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000845 liver adenoma Toxicity 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 201000010893 malignant breast melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000006178 malignant mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000001525 mentha piperita l. herb oil Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000008479 neoplastic tissue growth Effects 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 201000000032 nodular malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 208000008798 osteoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 208000021255 pancreatic insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005163 papillary serous adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000024641 papillary serous cystadenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000019477 peppermint oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000004560 pineal gland Anatomy 0.000 description 1
- 125000004194 piperazin-1-yl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 201000000443 refractory hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000007416 salivary gland adenoid cystic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010039667 schwannoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- CYOHGALHFOKKQC-UHFFFAOYSA-N selumetinib Chemical compound OCCONC(=O)C=1C=C2N(C)C=NC2=C(F)C=1NC1=CC=C(Br)C=C1Cl CYOHGALHFOKKQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950010746 selumetinib Drugs 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000011452 sequencing regimen Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 208000004548 serous cystadenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N shellac Chemical compound OCCCCCC(O)C(O)CCCCCCCC(O)=O.C1C23[C@H](C(O)=O)CCC2[C@](C)(CO)[C@@H]1C(C(O)=O)=C[C@@H]3O ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N 0.000 description 1
- 239000004208 shellac Substances 0.000 description 1
- 229940113147 shellac Drugs 0.000 description 1
- 235000013874 shellac Nutrition 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000007892 solid unit dosage form Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000011255 standard chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011301 standard therapy Methods 0.000 description 1
- CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(OC)O1 CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 229940081616 tafinlar Drugs 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 208000030045 thyroid gland papillary carcinoma Diseases 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 229960002622 triacetin Drugs 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 201000011531 vascular cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055031 vascular neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000009637 wintergreen oil Substances 0.000 description 1
- 229940034727 zelboraf Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
- A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/12—Aerosols; Foams
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
- A61K9/2027—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
- A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
- A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
- A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
- A61K9/2059—Starch, including chemically or physically modified derivatives; Amylose; Amylopectin; Dextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
- A61K9/4866—Organic macromolecular compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene
Abstract
В изобретении предложены комбинации и способы для индукции гибели раковых клеток. Комбинации и способы их применения включают использование комбинаций для терапии с целью лечения рака и для избирательной индукции апоптоза в раковых клетках. Комбинация содержит соединение РАС-1 (2-(4-бензилпиперазин-1-ил)-N-[(2-гидрокси-3-проп-2-енил-фенил)метилиденамино]ацетамид) в концентрации от 4 мкМ до 12 мкМ и второе действующее вещество, являющееся ингибитором фермента BRAF, имеющего мутацию, представляющее собой вемурафениб. Концентрация вемурафениба составляет от 0,5 мкМ до 30 мкМ. Также комбинация содержит фармацевтически приемлемый разбавитель, наполнитель или носитель. Комбинация РАС-1 и вемурафениба проявляет синергическую противораковую активность и оказывает меньшие нейротоксические эффекты, чем те же количества других соединений и комбинаций соединений, и может быть эффективной при конкретном раковом заболевании, которое приобрело устойчивость к применяемым ранее видам терапии. 4 н. и 18 з.п. ф-лы, 13 ил., 1 табл., 3 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННЫЕ ЗАЯВКИ
В данной заявке заявлен приоритет согласно § 119(e) 35 раздела Кодекса законов США по предварительным заявкам на патент США №62/171882, поданной 5 июня 2015 года, и 62/345629, поданной 3 июня 2016 года, причем заявки включены в данный документ путем ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Апоптоз, или запрограммированная гибель клеток, играет основную роль в развитии и поддержании гомеостаза всех многоклеточных организмов. Распространенным отличительным признаком рака является устойчивость к природным апоптическим сигналам. В зависимости от типа ракового заболевания, эта устойчивость может существовать благодаря повышенной или пониженной регуляции ключевых белков апоптического каскада. Устойчивость также может возникать благодаря мутациям в генах, кодирующих данные белки. Эти изменения могут происходить как во внутреннем апоптическом механизме, который проходит через митохондрии, и каспазу-9, так и внешнем апоптическом механизме, который вовлекает действие рецепторов смерти и каспазы-8. Например, при раковых заболеваниях наблюдали изменения в уровнях белков при здоровом состоянии, таких как р53, Bim, Вах, Apaf-1, FLIP, а также многих других. Эти изменения могут приводить к дефективному апоптическому каскаду, в одном из которых передается ненадлежащим образом предшествующий проапоптический сигнал для активации исполнительных каспаз, каспазы-3 и каспазы-7.
Так как в большинстве апоптических механизмов неизбежно вовлекается активация прокаспазы-3, предшествующие генетические аномалии эффективно «тормозят» апоптические схемы и, в результате, такие клетки пролиферируют атипично. Принимая во внимание основную роль апоптоза при лечении рака, были предприняты усилия по разработке терапевтических средств, которые нацелены на специфические белки в апоптическом каскаде. Однако, поскольку такие терапевтические средства нацелены на ранние (или от промежуточных до верхних) положений в апоптическом каскаде, то раковые заболевания с мутациями у последующих белков таких представителей могут все же сохранять резистентность в отношении получения возможных благоприятных эффектов таких соединений.
Для терапевтических целей преимуществом было бы идентифицировать низкомолекулярные молекулы, которые непосредственно активируют проапоптический белок, дальше по последовательности развития апоптического каскада. При данном подходе может вовлекаться относительно низкое положение в каскаде, таким образом давая возможность обеспечивать гибель даже тех клеток, которые имеют мутации в своем предшествующем апоптическом механизме. Более того, такие терапевтические стратегии могли бы иметь большую вероятность достижения успеха, если бы такой проапоптический белок находился под повышенной регуляцией в раковых клетках. Таким образом, идентификация низкомолекулярных молекул, которые нацелены на последующий эффекторный белок апоптоза, прокаспазу-3, может значительно способствовать существующей противораковой терапии.
Превращение или активация прокаспазы-3 в каспазу-3 приводит к получению активной формы исполнительной каспазы, которая впоследствии катализирует гидролиз большого количества белковых субстратов. При определенных видах рака уровни прокаспазы-3 повышены относительно уровня в нормальной ткани. Исследование первичных изолятов, взятых у 20 пациентов с раком толстой кишки, выявило, что в среднем повышенная регуляция прокаспазы-3 в таких изолятах в шесть раз превышала уровень относительно соседней нераковой ткани. В дополнение к этому, повышенная регуляция прокаспазы-3 отмечается при определенных нейробластомах, лимфомах и раковых заболеваниях печени. Кроме того, была выполнена систематическая оценка уровней прокаспазы-3 в наборе из 60 клеточных линий, используемом для скрининга в исследовательской программе терапевтических средств Национального института рака. В данном исследовании выявлено, что при определенных раковых заболеваниях легкого, почек, меланомах и видах рака молочной железы отмечаются сильно повышенные уровни экспрессии прокаспазы-3. Благодаря роли активной каспазы-3 для достижения апоптоза могут иметь значительную применимость для таргетной противораковой терапии относительно высокие уровни прокаспазы-3 в некоторых типах раковых клеток и многообещающая супрессия ее аутоактивации, опосредованная безопасным захватом, низкомолекулярные молекулы, которые непосредственно модифицируют прокаспазу-3.
Кроме того, комбинированная терапия приобрела повышенную важность для лечения раковых пациентов. Цель комбинированной терапии заключается в достижении аддитивного или синергического эффекта между химиотерапевтическими средствами, что тем самым способствует сокращению периодов лечения, пониженной токсичности и повышенной выживаемости пациента. Лекарственные средства, которые действуют на единственный биохимический механизм, являются особенно сильными претендентами на синергическое действие или потенциирование, так как они могут имитировать «синтетические летальные» генетические комбинации. Таким образом, существует острая необходимость в более эффективных терапевтических средствах для лечения многих форм рака и новые синергические комбинации противораковых лекарственных средств могут способствовать этой цели. Соответственно, существует необходимость в идентификации новой комбинации цитотоксических агентов, которые эффективны для уничтожения раковых клеток, при этом защищая нормальные хозяйские ткани от нежелательной токсичности цитотоксического агента.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В изобретении предложены композиции, которые включают комбинацию из действующих веществ для терапевтического лечения рака. Композиция включает низкомолекулярные лекарственные средства, способные индуцировать гибель раковых клеток. Комбинация лекарственных средств может применяться для различных раковых заболеваний и типов раковых клеток, таких как меланома, рак надпочечников, головного мозга, молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, желчного пузыря, лейкоз, рак печени, рак легкого, лимфома, нейробластома, рак яичника, поджелудочной железы, почки, щитовидной железы, болезнь Эрдгейма-Честера (БЭЧ), гистиоцитоз клеток Лангерганса (ГКЛ) и других известных в данной области. В некоторых вариантах реализации изобретения композиции взаимодействуют непосредственно или опосредованно с представителями механизма запрограммированной гибели клеток, такими как прокаспаза-3. В различных вариантах реализации изобретения композиции являются избирательными для конкретного типа раковых клеток и могут обладать пониженной нейротоксичностью, по сравнению с другими соединениями, которые взаимодействуют с представителями запрограммированной гибели клеток, такими как прокаспаза-3.
Комбинированная противораковая терапия, описанная в данном документе, может включать лекарственные средства, которые нацелены на различные биохимические механизмы, или лекарственные средства, которые поражают различные мишени в том же механизме, имитируя «синтетические летальные» генетические комбинации. Комбинация активатора прокаспазы-3 РАС-1 и ингибиторов киназы BRAF, которая имеет мутацию V600E, показывает значительную синергию в отношении индуцирования апоптической гибели раковых клеток в намного превышающей аддитивный эффект степени. Комбинация РАС-1 и таких ингибиторов гена/фермента BRAF может эффективно снижать опухолевую нагрузку в моделях опухолей, в которых соединения сами по себе оказывали минимальный эффект или не оказывали эффекта. Данные указывают на значительную эффективность комбинации РАС-1 и таких ингибиторов фермента BRAF для лечения рака и, в более широком смысле, показывают, что эта синергическая комбинация может обеспечивать значительно более выраженные терапевтические выгоды.
Соответственно, в изобретении предложена композиция, содержащая (а) соединение РАС-1:
(b) второе действующее вещество, причем действующее вещество является ингибитором фермента BRAF, имеющим мутацию, и
(c) фармацевтически приемлемый разбавитель, наполнитель или носитель.
Ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию, может, например, быть вемурафенибом, дабрафенибом, BMS-908662 (Bristol-Myers Squibb), энкорафенибом (LGX818) (Novartis), PLX3603 (RO5212054) (Hofmann-LaRoche), RAF265 (Novartis), сорафенибомили производным, или пролекарством одного из вышеупомянутых действующих веществ. В частности, эффективные ингибиторы фермента BRAF являются ингибиторами фермента BRAF, имеющего мутацию V600E или V600K. Такие ингибиторы включают вемурафениб и дабрафениб. В других вариантах реализации изобретения композиция дополнительно включает ингибитор МЕК, такой как траметиниб. В альтернативном варианте второе действующее вещество (причем действующее вещество является ингибитором фермента BRAF, имеющего мутацию) можно замещать ингибитором МЕК, таким как траметиниб, для обеспечения отличающейся композиции с двумя действующими веществами. В различных вариантах реализации изобретения эти действующие вещества можно вводить пациенту одновременно или последовательно. Носитель для композиции может включать воду и/или необязательные компоненты для преимущественной доставки действующих веществ, такие как буферное вещество, сахар, целлюлоза, цикл о декстрин или их различные комбинации. В одном варианте реализации изобретения циклодекстрин представляет собой 2-гидроксипропил-р-циклодекстрин.
В изобретении также предложен способ ингибирования роста или пролиферации раковых клеток. Данный способ включает приведение в контакт раковых клеток с эффективным количеством композиции, описанной в данном документе, причем композиция может включать одно или оба из РАС-1 (т.е. первое действующее вещество) и одного или более вторых действующих веществ (например, ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию, и/или ингибитор МЕК). Если композиция включает только одно из РАС-1 и второго действующего вещества, способ может включать последующее приведение в контакт раковых клеток с другим (-и) действующим (-и) веществом (-ами). Таким образом, способ также может включать приведение в контакт раковых клеток с эффективным количеством ингибитора МЕК, одновременно или последовательно с РАС-1 и вторым действующим веществом. Приведение в контакт раковых клеток с такими действующими веществами (например, РАС-1 и вторым и/или третьим действующим веществом) эффективно ингибирует рост или пролиферацию раковых клеток.
В изобретении дополнительно предложен способ индуцирования апоптоза в раковых клетках. Способ может включать приведение в контакт раковой клетки с эффективным количеством РАС-1 и эффективным количеством второго и/или третьего действующего вещества, причем в раковой клетке тем самым индуцируется апоптоз. Приведение в контакт может происходить in vitro. В альтернативном варианте приведение в контакт может происходить in vivo. В одном варианте реализации изобретения раковая клетка может приводиться в контакт с РАС-1 и вторым действующим веществом одновременно. В одном варианте реализации изобретения раковая клетка может приводиться в контакт со вторым действующим веществом перед приведением раковой клетки в контакт с РАС-1. В еще одном варианте реализации изобретения раковая клетка может приводиться в контакт с РАС-1 перед приведением раковой клетки в контакт со вторым действующим веществом. Третье действующее вещество (например, ингибитор МЕК) можно вводить с раковой клеткой перед или после РАС-1, и перед или после второго действующего вещества.
В изобретение также предложен способ лечения рака у нуждающегося в этом пациента. Способ включает введение пациенту, одновременно или последовательно, терапевтически эффективного количества соединения РАС-1 и второго действующего вещества, причем действующее вещество представляет собой ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию, например, мутацию V600E или мутацию V600K, при этом тем самым излечивается рак. В определенных конкретных вариантах реализации изобретения второе действующее вещество представляет собой вемурафениб или дабрафениб:
Как обсуждается выше РАС-1 и второе действующее вещество можно вводить одновременно. В другом варианте реализации изобретения РАС-1 и второе действующее вещество можно вводить последовательно. При последовательном введении второе действующее вещество можно вводить перед РАС-1 или второе действующее вещество можно вводить после РАС-1. В дополнительном варианте реализации изобретения пациенту можно вводить терапевтически эффективное количество ингибитора МЕК. Ингибитор МЕК можно вводить одновременно или последовательно применительно к РАС-1 и второму действующему веществу. Таким образом, в различных вариантах реализации изобретения ингибитор МЕК можно вводить перед, одновременно или после либо РАС-1, либо второго действующего вещества.
Рак (или раковые клетки, как обычно происходит), который приводят в контакт или подвергается лечению, может представлять собой, например, меланому, рак надпочечника, рак головного мозга, рак молочной железы, колоректальный рак, рак пищевода, рак желчного пузыря, рак печени, рак легкого, лимфому, нейробластому, рак яичника, рак поджелудочной железы, рак почки, рак щитовидной железы, болезнь Эрдгейма-Честера (БЭЧ), гистиоцитоз клеток Лангерганса (ГКЛ) или лейкоз, включая волосатоклеточный лейкоз. Меланома может быть устойчивой к BRAFi меланомой, включая устойчивые к вемурафенибу меланомы. Рак щитовидной железы может быть папиллярным раком щитовидной железы. Рак легкого может быть немелкоклеточным раком легкого (НМКРЛ). В некоторых вариантах реализации изобретения рак может быть раком головного мозга, лимфомой или раковыми клетками в костной ткани. Например, рак может быть глиобластомой или олигодендроглиомой. В другом варианте реализации изобретения раковые клетки могут быть клетками остеосаркомы и такой рак лечат как рак костей. Другие типы раковых клеток, которых можно уничтожать или ингибировать, и другие раковые патологические состояния, которые можно лечить, описаны ниже.
Таким образом, в изобретении предложено применение композиций, описанных в данном документе, для использования в лекарственной терапии. Лекарственная терапия может представлять собой излечение рака, например, меланомы и/или других раковых заболеваний, цитируемых в данном документе. В изобретении также предложено применение композиции, описанной в данном документе, для производства лекарственного средства для лечения заболевания у млекопитающего, например, рака у человека. Лекарственное средство может содержать фармацевтически приемлемый разбавитель, наполнитель или носитель.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Приведенные ниже чертежи являются частью данного описания и включены для дополнительной иллюстрации определенных вариантов реализации изобретения или различных аспектов данного изобретения. В некоторых примерах, вариантах реализации изобретения можно достичь наилучшего понимания путем рассмотрения сопровождающих графических материалов в комбинации с представленным в данном документе подробным описанием. Данное описание и сопровождающие графические материалы могут подчеркивать определенный конкретный пример или определенный аспект изобретения. Однако специалист в данной области техники поймет, что части примера или аспекта можно использовать в комбинации с другими примерами или аспектами изобретения.
Фиг. 1А-С. Влияние вемурафениба и РАС-1 на линии клеток V600EBRAF или WTBRAF. (А) Значения IC50 (5 суток) вемурафениба и РАС-1 в наборе из девяти линий клеток. (В) и (С): Линии клеток с V600EBRAF обладают значительно большим процентом клеток, претерпевающих апоптоз (оценено окрашиванием аннексина V-FITC/PI) после обработки вемурафенибом (10 мкМ) и РАС-1 (12 мкМ) (В) или вемурафенибом (0,5 мкМ) и РАС-1 (12 мкМ) (С) в течение 24 ч, тогда как эта комбинация оказывала пренебрежимо малое влияние на линии клеток с диким типом BRAF. Штриховые горизонтальные линии представляют уровень гибели клеток, ожидаемый в результате простого аддитивного эффекта этих двух лекарственных средств. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех независимых экспериментов. Р-значения показаны для 2-стороннего взаимодействия для определения того, является ли отличие воздействия комбинации для индукции апоптоза от аддитивного действия (штриховые горизонтальные линии) отдельных лекарственных средств статистически значимым (* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001).
Фиг. 2А-Е. РАС-1 + вемурафениб проявляет сильную синергию в отношении индукции апоптической гибели и активности каспазы в клетках A375. (А) Показан процент апоптической гибели клеток (оцениваемой по окрашиванию аннексина V/PI и результатам проточной цитометрии), индуцированной после 24 ч обработки. Показанные значения отмечены интенсивностью цвета, где белый представляет низкий % апоптической гибели клеток, а серый представляет высокий % апоптической гибели клеток. (В) Индексы комбинаций (CI) рассчитаны для каждой комбинации с помощью программного обеспечения Combosyn. Значения CI отмечены интенсивностью цвета с наименьшими светло-серыми значениями, а наибольшими - черными. (С) Значительная ферментативная активность каспазы-3/-7 наблюдается в клетках, обработанных комбинацией РАС-1 и вемурафениба. РАС-1 (12 мкМ) и вемурафениб (10 мкМ) сами по себе оказывают очень слабое влияние (р-значения по сравнению с контролем ДМСО > 0,1 во все моменты времени). Активность каспазы-3/-7 в лизатах клеток оценивали с помощью флуорогенного субстрата Ac-DEVD-AFC. Активность выражали как нормализованную по минимальной и максимальной активности, наблюдаемых в данном анализе с 1 мкМ стауроспорина (STS) в качестве положительного контроля. Р-значения показаны для 2-стороннего взаимодействия для определения того, является ли отличие воздействия комбинации от аддитивного действия в указанные моменты времени статистически значимым (* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001). (D) РАС-1 (12 мкМ) и вемурафениб (10 мкМ) сами по себе оказывают очень слабое влияние на расщепление PARP-1 в клетках A3 75, но для комбинации посредством вестерн-блота наблюдают существенное расщепление PARP-1. (Е) Через 24 ч наблюдали отсутствие/низкую степень ингибирования фосфорилирование ERK1/2 при низких концентрациях вемурафениба (0,1 мкМ и 0,25 мкМ). При более высоких концентрациях вемурафениба (0,5 мкМ и 1 мкМ) фосфорилирование ERK1/2 эффективно ингибировалось при добавлении РАС-1 или без него, что указывает на влияние РАС-1 на последующие этапы механизма МАРК. Однако расщепленную PARP-1 наблюдали только в клетках, обработанных комбинацией вемурафениб/РАС-1, даже при концентрациях вемурафениба (0,1 и 0,25 мкМ), когда наблюдали неполное ингибирование фосфорилирования ERK1/2. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех экспериментов.
Фиг. 3А-С. Добавление РАС-1 к комбинации вемурафениб + траметиниб проявляет сильную синергию в отношении индукции апоптической гибели и активности каспазы в клетках A375 и UACC-62. (А) Показан процент апоптической гибели клеток после 24 ч обработки. Комбинация траметиниба (100 нМ) и вемурафениба (10 мкМ) приводит к минимальному увеличению популяции апоптических клеток. Добавление РАС-1 (12 мкМ) приводит к кардинальному увеличению популяции апоптических клеток, что выходит за пределы аддитивного эффекта трех действующих веществ. (В) Траметиниб (100 мкМ) и вемурафениб (10 мкМ) в комбинации оказывают очень слабое влияние на расщепление PARP-1 в клетках A375 и UACC-62, но существенное расщепление PARP-1 и снижение уровня прокаспазы-3 наблюдали при добавлении РАС-1 (12 мкМ) посредством вестерн-блота. (С) Комбинация вемурафениба и траметиниба приводит к аддитивному увеличению активности каспазы-3/-7, но добавление РАС-1 приводит к значительному увеличению ферментной активности каспазы-3/-7 в A375 и UACC-62 через 24 ч. РАС-1 (12 мкМ), вемурафениб (10 мкМ) и траметиниб (100 нМ) сами по себе оказывают очень слабое влияние (р-значения по сравнению с контролем ДМСО > 0,1). Активность выражали как нормализованную по положительному контролю. Штриховые горизонтальные линии представляют уровень гибели клеток, ожидаемый в результате простого аддитивного эффекта этих двух лекарственных средств. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех экспериментов. Р-значения показаны для 2-стороннего взаимодействия для определения того, является ли отличие воздействия комбинации для индукции апоптоза от аддитивного действия отдельных лекарственных средств статистически значимым (* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001).
Фиг. 4А-Е. Комбинация PAC-1 + вемурафениб замедляет опухолевый рост в мышиной модели меланомы подкожного ксенотрансплантата A375. (А) Влияние РАС-1, вемурафениба и их комбинации в модели A375. Мышам, имеющим опухоли, вводили дозы препаратов в течение 15 дней. Мышам вводили дозы РАС-1 один раз в сутки по 100 мг/кг (n=6) посредством в. б. инъекции, вемурафениб - дважды в сутки по 10 мг/кг (n=8) путем (п.о.) или вводили комбинацию PAC-1 + вемурафениб (n=8). Черная линия ниже оси X указывает период времени дозирования для мышей в течение исследования. Объемы опухолей отмечены на графике как среднее значение ± СОС.(В) Значения масс удаленных опухолей. (С) Лизаты опухолей анализировали вестерн-блотом на изменения уровней прокаспазы-3. В качестве контроля нагрузки использовали актин. Количественно определяли интенсивность полос с использованием программы ImageJ. (D) На графике отмечали уровни прокаспазы-3, нормализованные к контролям нагрузки актином. (Е) Процентное содержание позитивных по Ki-67 клеток определяли по иммуногистохимическому окрашиванию образцов опухолей, фиксированных формалином. В каждом образце подсчитывали 2000 клеток для каждой из четырех групп лечения. Р-значения показаны по отношению к контрольным мышам (* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001).
Фиг. 5A-D. Низкие концентрации РАС-1 (1 мкМ) в экспериментах с долговременным культивированием клеток значительно замедляют возобновление роста клеток в комбинации с вемурафенибом. (А) Сравнение значений Emax в клетках А375, обработанных вемурафенибом и РАС-1. (В) Клетки А375 и SK-MEL-5 обрабатывали РАС-1 (4 мкМ) или вемурафенибом (10 мкМ) в течение 30 дней. (С) Клетки А375 обрабатывали РАС-1 (1 мкМ), вемурафенибом (5 мкМ или 10 мкМ) или их комбинацией. Через 5, 10 или 20 дней лунки фиксировали 10% трихлоруксусной кислотой, окрашивали 0,5% красителем сульфородамином В (SRB) и визуализировали с помощью BioRad GelDoc RX. Не показаны изображения образцов с применением контроля и РАС-1 на день 20, потому что клетки были нежизнеспособны из-за чрезмерного разрастания. (D) Результаты количественного определения (С), при котором краситель SRB растворен в 10 мМ основании Трис при рН 10,4, а поглощение считывается при 510 нм. Скорректированные значения поглощения при 510 нм отмечали на графике по отношению к дням непрерывной обработки путем нормализации по поглощению на день 0 перед началом обработки. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех экспериментов. Выполняли Т-тест для лунок, обработанных только вемурафенибом по сравнению с обработкой вемурафенибом и РАС-1 (1 мкМ). На день 10 только лунки, обработанные вемурафенибом (10 мкМ) и РАС-1 (1 мкМ), показали значимое отличие от обработки одним вемурафенибом (10 мкМ) (р=0,049). На день 20 лунки, как указано, обработанные вемурафенибом (5 или 10 мкМ) и РАС-1 (1 мкМ), показали значимое отличие от обработки вемурафенибом (5 или 10 мкМ) (* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001).
Фиг. 6A-D. РАС-1 сохраняет активность в устойчивых к вемурафенибу клетках A375VR (А). Вемурафениб значительно менее активный в A375R по сравнению с исходными A375. (В) Обработка 0,5 или 1 мкМ вемурафениба не способна ингибировать фосфорилирование ERK1/2 в A375VR через 2 ч. В тех же условиях наблюдали полное ингибирование фосфорилирования ERK1/2 в исходной линии клеток А375. (С) РАС-1 сохраняет активность в линии клеток A375R. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех независимых экспериментов. (D) Влияние РАС-1, вемурафениба и их комбинации в модели ксенотрансплантата A375VR. Мышам, имеющим опухоли, вводили дозы препаратов в течение 15 дней. Мышам вводили дозы РАС-1 дважды в сутки по 100 мг/кг (n=7) посредством в. б. инъекции, вемурафениб - дважды в сутки по 10 мг/кг (n=5) путем (п.о.) или вводили комбинацию РАС-1 + вемурафениб (n=5). Черная линия выше оси X указывает период времени дозирования для мышей в течение исследования. Объемы опухолей отмечены на графике как среднее значение ± СОС.Р-значения показаны по отношению к контрольным мышам (* р<0,05).
Фиг. 7А-Е. РАС-1 и вемурафениб проявляют сильную синергию в отношении индукции апоптической гибели и активности каспазы в клетках SK-MEL-5. (А) Показан процент апоптической гибели клеток (оцениваемой по окрашиванию аннексина V/PI и результатам проточной цитометрии), индуцированной после 24 ч обработки. Показанные значения отмечены интенсивностью цвета, где белый представляет низкий % апоптической гибели клеток, а серый представляет высокий % апоптической гибели клеток. (В) Индексы комбинаций (CI) рассчитаны для каждой комбинации с помощью программного обеспечения Combosyn. Значения CI отмечены интенсивностью цвета с наименьшими светло-серыми значениями, а наибольшими - черными. (С) Значительная ферментативная активность каспазы-3/-7 наблюдается в клетках, обработанных комбинацией РАС-1 и вемурафениба; РАС-1 (12 мкМ) и вемурафениб (10 мкМ) сами по себе оказывают очень слабое влияние (р-значения по сравнению с контролем ДМСО > 0,1 во все моменты времени). Активность каспазы-3/-7 в лизатах клеток оценивали с помощью флуорогенного субстрата Ac-DEVD-AFC. Активность выражали как нормализованную по минимальной и максимальной активности, наблюдаемых в данном анализе с 1 мкМ стауроспорина (STS) в качестве положительного контроля. (D) РАС-1 (12 мкМ) и вемурафениб (10 мкМ) сами по себе оказывают очень слабое влияние на расщепление PARP-1 в клетках SK-MEL-5, но для комбинации посредством вестерн-блота наблюдают существенное расщепление PARP-1. (Е) Через 24 ч вемурафениб (0,5 мкМ и 1 мкМ) ингибировал фосфорилирование ERK1/2 при добавлении РАС-1 или без него, что указывает на влияние РАС-1 на последующие этапы механизма МАРК. Однако расщепленную PARP-l наблюдали только в клетках, обработанных комбинацией вемурафениб/РАС-1. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех независимых экспериментов. Р-значения показаны для 2-стороннего взаимодействия для определения того, является ли отличие воздействия комбинации от аддитивного действия в указанные моменты времени статистически значимым (* р<0,05, *** р<0,001).
Фиг. 8А-Е. РАС-1 и вемурафениб проявляют сильную синергию в отношении индукции апоптической гибели и активности каспазы в клетках UACC-62. (А) Показан процент апоптической гибели клеток (оцениваемой по окрашиванию аннексина V/PI и результатам проточной цитометрии), индуцированной после 24 ч обработки. Показанные значения отмечены интенсивностью цвета, где белый представляет низкий % апоптической гибели клеток, а серый представляет высокий % апоптической гибели клеток. (В) Индексы комбинаций (CI) рассчитаны для каждой комбинации с помощью программного обеспечения Combosyn. Значения CI отмечены интенсивностью цвета с наименьшими светло-серыми значениями, а наибольшими - черными. (С) Значительная ферментативная активность каспазы-3/-7 наблюдается в клетках, обработанных комбинацией РАС-1 и вемурафениба; РАС-1 (12 мкМ) и вемурафениб (10 мкМ) сами по себе оказывают очень слабое влияние (р-значения по сравнению с контролем ДМСО > 0,1 во все моменты времени). Активность каспазы-3/-7 в лизатах клеток оценивали с помощью флуорогенного субстрата Ac-DEVD-AFC. Активность выражали как нормализованную по минимальной и максимальной активности, наблюдаемых в данном анализе с 1 мкМ STS в качестве положительного контроля. (D) РАС-1 (12 мкМ) и вемурафениб (10 мкМ) сами по себе оказывают очень слабое влияние на расщепление PARP-1 в клетках UACC-62, но для комбинации посредством вестерн-блота наблюдают существенное расщепление PARP-1. (Е) Через 24 ч вемурафениб (0,5 мкМ и 1 мкМ) ингибировал фосфорилирование ERK1/2 при добавлении РАС-1 или без него, что указывает на влияние РАС-1 на последующие этапы механизма МАРК. Минимальное количество расщепленной PARP-1 наблюдали только в обработанных РАС-1 клетках, оно существенно возрастало в клетках, обработанных комбинацией вемурафениб/РАС-1. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех независимых экспериментов. Р-значения показаны для 2-стороннего взаимодействия для определения того, является ли отличие воздействия комбинации от аддитивного действия в указанные моменты времени статистически значимым (*** р<0,001).
Фиг. 9A-D. Влияние РАС-1а (12 мкМ) по сравнению с РАС-1 (12 мкМ) в комбинации с вемурафенибом (30 мкМ) через 24 ч обработки в линиях клеток (А) А375, (В) SK-MEL-5 и (С) UACC-62, как оценивали по графикам аннексии V-FITC/PI. Установленный процент апоптоза нормализован относительно контрольного образца с ДМСО. Штриховые горизонтальные линии представляют уровень гибели клеток, ожидаемый в результате простого аддитивного эффекта этих двух лекарственных средств. (D) РАС-1 (12 мкМ) и вемурафениб (10 мкМ) сами по себе оказывают минимальное влияние на расщепление PARP-l в клетках A375, но увеличенное расщепление PARP-1 наблюдают для комбинации. РАС-1а (12 мкМ) в комбинации с вемурафенибом (10 мкМ) не увеличивает расщепление PARP-1. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех независимых экспериментов. Р-значения показаны для 2-стороннего взаимодействия для определения того, является ли отличие воздействия комбинации для индукции апоптоза от аддитивного действия (штриховые горизонтальные линии) отдельных лекарственных средств статистически значимым (*** р<0,001).
Фиг. 10А-С. Влияние комбинации РАС-1 и вемурафениба в линиях клеток с WTBRAF: MIA РаСа-2 (мутантные KRAS и WTBRAF) и CHL-1 (WTKRAS и WTBRAF). (А) Наблюдают отсутствие влияния на активацию прокасазы-3 в линиях клеток MIA РаСа-2 и CHL-1 при обработке РАС-1 (12 мкМ) + вемурафениб (30 мкМ). Активность каспазы-3/-7 в лизатах клеток оценивали с помощью флуорогенного субстрата Ac-DEVD-AFC. Активность выражали как нормализованную по минимальной и максимальной активности, наблюдаемых в данном анализе с 1 мкМ STS в качестве положительного контроля. (В) Наблюдают отсутствие влияния на расщепление PARP-1 в клетках MIA РаСа-2 через 24 ч. (D) РАС-1 (12 мкМ) и вемурафениб (30 мкМ) не оказывают влияния на расщепление PARP-1 в клетках CHL-1 через 24 ч обработки. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех независимых экспериментов.
Фиг. 11. Изображения несущих опухоли мышей, которых умерщвляли через 15 дней непрерывного введения доз. Четыре группы лечения: контрольная (n=6, 0 мг/кг РАС-1 и вемурафениба); мыши, получавшие раз в сутки по 100 мг/кг РАС-1 (n=6), два раза в сутки по 10 мг/кг вемурафениба (n=8) и комбинации 100 мг/кг РАС-1 (раз в сутки) и 10 мг/кг вемурафениба (два раза в сутки) (n=8).
Фиг. 12А-В. Добавление РАС-1 (1 мкМ) при долговременном лечении клеток UACC-62 вемурафенибом значительно замедляет возобновление роста клеток. (А) Клетки UACC-62 обрабатывали РАС-1 (1 мкМ), вемурафенибом (5 мкМ или 10 мкМ) или их комбинацией. Среду смывали каждые 2-3 дня и в каждую лунку добавляли новые соединения. Через 5, 10 или 20 дней лунки фиксировали 10% трихлоруксусной кислотой, окрашивали 0,5% красителем сульфородамином В (SRB) и визуализировали с помощью BioRad GelDoc RX. Не показаны изображения образцов с применением контроля и РАС-1 на день 20, потому что клетки были нежизнеспособны из-за чрезмерного разрастания. (В) Результаты количественного определения (А), при котором краситель SRB растворен в 10 мМ основании Трис при рН 10,4, а поглощение считывается при 510 нм. Скорректированные значения поглощения при 510 нм отмечали на графике по отношению к дням непрерывной обработки путем нормализации по поглощению на день 0 перед началом обработки. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех независимых экспериментов. Выполняли 2-сторонний t-тест для лунок, обработанных только вемурафенибом, по сравнению с обработкой вемурафенибом и РАС-1 (1 мкМ). На день 10 только лунки, обработанные вемурафенибом (10 мкМ) и РАС-1 (1 мкМ), показали значимое отличие от обработки одним вемурафенибом (10 мкМ) (р=0,035). На день 20 лунки, как указано на графике, обработанные вемурафенибом (5 или 10 мкМ) и РАС-1 (1 мкМ), показали значимое отличие от обработки вемурафенибом (5 или 10 мкМ) (* р<0,05, *** р<0,001).
Фиг. 13А-С. Влияние комбинации РАС-1 и вемурафениба на клетки A375VR. (А) Показан процент апоптической гибели клеток (оцениваемой по окрашиванию аннексина V/PI и результатам проточной цитометрии), индуцированной после 24 ч обработки. (В) Наблюдали более выраженную апоптическую гибель клеток в (А), чем прогнозировала независимая модель Блисса. Избыточную гибель клеток рассчитывают как [f(наблюдаемая, апоптическая) - (f(PAC-l, апоптическая) + f(вемурафениб, апоптическая) - f(PAC-l, апоптическая) * f(вемурафениб, апоптическая))]*100%. Это указывает на то, что наблюдаемый эффект является скорее синергическим, чем аддитивным. (С) Синергический эффект РАС-1 и вемурафениба в активации апоптоза у A375VR через 24 ч. Этот эффект исчезал, когда использовали неактивный РАС-1а. Штриховые горизонтальные линии представляют уровень гибели клеток, ожидаемый в результате простого аддитивного эффекта этих двух лекарственных средств. Значения указаны в виде среднего значения ± СОС из по меньшей мере трех независимых экспериментов. Р-значения показаны для 2-стороннего взаимодействия для определения того, является ли отличие воздействия комбинации для индукции апоптоза от аддитивного действия (штриховые горизонтальные линии) отдельных лекарственных средств статистически значимым (* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Многие раковые заболевания не поддаются стандартной химиотерапии или становятся резистентными к конкретным химиотерапевтическим средствам через некоторый период времени. Комбинированная терапия, описанная в данном документе, дает преимущество в отношении активации прокаспазы-1 при участии РАС-1, которая может быть синергической с химиотерапевтическими свойствами второго действующего вещества, такого как ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию, для обеспечения эффективности в условиях, когда одно из действующих веществ может быть менее эффективным или полностью неэффективным. Эти соединения также могут успешно применяться в целевой противораковой терапии, при которой существуют преимущества избирательности по отношению к гибели раковых клеток со сравнимым снижением нежелательных реакций для нераковых клеток, имеющих более низкие уровни прокаспазы-3. Эти пониженные нежелательные реакции могут включать снижения токсичности, в частности нейротоксичности.
Комбинация соединений, композиций и способов, описанных в данном документе, может действовать посредством модуляции апоптоза или запрограммированной гибели клеток и других химиотерапевтических механизмов, которые должны быть эффективны при лечении рака. В одном варианте реализации изобретения модуляция апоптоза осуществляется индукцией или активацией апоптоза. В различных вариантах реализации изобретения введение соединений может быть параллельным или, в альтернативном варианте, последовательным.
Таким образом в изобретении предложен способ потенциирования действующего вещества с помощью РАС-1, например, для лечения меланомы, колоректального рака, рака щитовидной железы, рака легкого или рака яичника. Вовремя апоптоза посредством протеолиза активируется прокаспаза-3 до каспазы-3, а затем эта активная каспаза-3 расщепляет многочисленные клеточные субстраты, выполняя апоптическую программу. Поскольку уровни белка прокаспазы-3 повышены во множестве опухолевых гистологических проб, опосредованная лекарственным средством прямая активация прокаспазы-3 может быть высокоэффективной в качестве избирательной противораковой стратегии.
Определенные соединения могут усиливать активность и аутосозревание прокаспазы-3, и индуцировать апоптоз раковых клеток. Активирующее прокаспазу соединение-1 (РАС-1) усиливает активность прокаспазы-3 посредством хелатирования ингибирующих ионов цинка, индуцируя апоптоз в культуре раковых клеток и обладая эффективностью во многих мышиных моделях опухолей. Обнаружено, что новые комбинации РАС-1 и ингибиторов фермента BRAF, имеющего мутацию, являются синергически эффективными при обработке раковых клеток, как описано в данном документе. Поскольку РАС-1 действует в апоптическом каскаде позже, то оно уникальным образом способно синергически взаимодействовать с широким диапазоном химиотерапевтических действующих веществ, как описано в данном документе.
Меланома представляет собой наиболее часто встречающееся кожное злокачественное новообразование и при метастазах считается наиболее летальной формой рака кожи. Она является пятым наиболее распространенным раковым заболеванием в США. Одной распространенной мутацией при меланоме является замена валина на глутамат (V600E) в киназном домене белка BRAF (Davies et al., Nature 2002, 417, 949). Мутация V600E конститутивно активирует BRAF и последующий путь передачи сигнала MEK-ERK, приводя к онкогенезу. Обнаружение того, что приблизительно 50% меланом содержат мутацию V600E в белке BRAF, стимулировало разработку ингибиторов V600EBRAF и последующее одобрение применения вемурафениба в 2011 г. Ингибиторы V600EBRAF, как вемурафениб (и дабрафениб, одобренный в 2013 г. ), приводят к впечатляющему снижению опухолевой нагрузки в течение недель терапии и продлению выживаемости без прогрессирования на период от трех до четырех месяцев.
Несмотря на их первоначальную противомеланомную активность, быстро возникает устойчивость к ингибиторам V600EBRAF. В большинстве резистентных опухолей наблюдается реактивация механизма передачи сигнала МАРК, побуждая проводить добавление ингибиторов МЕК 1/2 (например траметиниба) в схему лечения от метастатической меланомы. Предшествующая комбинированная терапия с ингибиторами МЕК 1/2 и V600EBRAF является эффективной в замедлении медианного периода времени до возникновения устойчивости от 3,7 до 4,1 месяца у пациентов, которые предварительно не получали лечение ингибитором V600EBRAF, но добавление ингибитора МЕК 1/2 для пациентов, которым уже не помогла предварительная терапия только ингибитором V600EBRAF, приводит к незначительному улучшению противораковой эффективности. Принимая во внимание текущие клинические ограничения существующих видов терапии, изучаются исследования новых и рационально-обоснованных комбинаций с другими ингибиторами киназ. Несмотря на все современные усилия, развитие резистентности к нацеленным на V600EBRAF видам терапии возникает у практически 100% пациентов, проходящих лечение; приобретенная резистентность к лекарственным средствам к этому классу средств остается значительным препятствием для преимуществ, связанных с обеспечением существенного выживания пациентов с метастатической меланомой.
В противоположность многим исследованиям, которые сфокусированы на комбинации вемурафениба с ингибиторами разнообразных и лекарственно-ориентированных киназ, не была всесторонне исследована комбинированная терапия вемурафениба со средствами, которые активируют апоптический механизм. В частности, этот недостаток изучения может объясняться тем фактом, что клетки меланомы обладают множеством дефектов в своих апоптических сигнальных механизмах, придающим им устойчивость ко многим проапоптическим стимулам. Авторы выдвинули гипотезу, что подходящее проапоптическое средство, которое индуцирует нисходящий каскад апоптоза из-за этих апоптических дефектов, должно быть высокосинергическим с ингибиторами V600EBRAF.
Принимая во внимание, что искажения апоптических каскадов передачи сигналов в клетках меланомы предшествуют активации прокаспазы-3, лекарственные средства, непосредственно активирующие прокаспазу-3, являются интересными кандидатами для этой комбинированной терапии. В дополнение к этому, благодаря тому, что меланома обладает повышенной экспрессией прокаспазы-3, активатор прокаспазы-3 должен быть сильным и избирательным по отношению к таким клеткам. Кроме того, известно, что ингибиторы V600EBRAF индуцируют апоптическую гибель клеток, опосредованную каспазой-3; таким образом, комбинация вемурафениба с непосредственным активатором прокаспазы-3 может приводить к существенно усиленной активности каспазы-3 и гибели раковых клеток относительно влияния любого одиночного средства. РАС-1 представляет собой низкомолекулярную молекулу, которая непосредственно активирует клеточную прокаспазу-3 посредством хелатирования лабильных ингибирующих ионов цинка. _ENREF_24Благодаря сверхэкспрессии прокаспазы-3 при раковых заболеваниях различного происхождения, _ENREF_28РАС-1 и его производные избирательно индуцируют апоптоз в раковых клетках, при этом обходя нераковые клетки. РАС-1 проявляет активность единственного средства во множестве мышиных моделей рака, включая модель ксенотрансплантата меланомы. Важно отметить, что в дополнение к благоприятной доклинической активности в мышиных опухолевых моделях, пациенты-люди с раковым заболеванием получают РАС-1 как часть фазы I клинического испытания с марта 2015 г. (NCT02355535).
Вемурафениб, первый одобренный ингибитор BRAF, является таргетной терапией для пациентов с меланомой, у которых имеется белок V600E BRAF (Bollag et al., Nat. Rev. Drug Discov. 2012, 11, 873). Лечение вемурафенибом приводит к апоптозу и быстрой регрессии опухоли, продлевая выживаемость без прогрессирования пациентов с белком V600E BRAF на 5,3 месяца (McArthur et al., Lancet Oncol. 2014, 15, 323). Тогда как вемурафениб представляет значительный прогресс в лечении меланомы, появление устойчивости является значительной проблемой в клинике. Комбинированная терапия вемурафениба с ингибитором МЕК клинически исследована в отношении длительности выживаемости без прогрессирования на 3,7 месяцев, но устойчивость неизбежно возрастает из-за реактивации механизма RAF-MEK-ERK (Larkin et al., N. Engl. J. Med. 2014,371, 1867).
О повышенной экспрессии прокаспазы-3, исполнительной каспазы в апоптическом каскаде, сообщалось при различных раковых заболеваниях, включая меланому (Fink et al., Melanoma Res. 2001, 11, 385; Chen et al., Hum. Pathol. 2009, 40, 950). Поэтому активация прокаспазы-3 низкомолекулярной молекулой является привлекательной терапевтической стратегией для меланомы благодаря ключевой роли, которую играет прокаспаза-3 в апоптическом каскаде. Активирующее прокаспазу-3 соединение-1 (РАС-1) представляет собой низкомолекулярную молекулу, которая хелатирует лабильный пул ионов цинка, ингибирующих прокаспазу-3, таким образом примируя раковые клетки на апоптическую гибель (Peterson et al., J. Mol. Biol. 2009, 388, 144). РАС-1 показало эффективность единственного лекарственного средства в модели ксенотрансплантата меланомы, подтверждая потенциальную активацию прокаспазы-3 в качестве противораковой стратегии (Wang et al., Mol. Oncol. 2014, 8, 1640). Принимая во внимание, что РАС-1 примирует клетки на апоптическую гибель и вемурафениб индуцирует апоптоз в раковых клетках, авторы обнаружили, что вемурафениб в комбинации с РАС-1 существенно усиливает терапевтическую эффективность.
Авторы недавно открыли, что РАС-1 показывает превосходную синергию с ингибиторами фермента BRAF, имеющего мутацию V600E, включая вемурафениб (продаваемый как зелбораф), лекарственное средство, которое недавно одобрено для лечения меланомы. На основе данных авторов (см. Фиг. 1-13), РАС-1 будет демонстрировать эквивалентную синергию со всеми лекарственными средствами в этом классе (ингибиторы фермента BRAF, которые имеют мутацию V600E или V600K), которые также включают дабрафениб (торговое название тафинлар) и другие.
В данном документе описана синергическая активность ингибиторов фермента BRAF, имеющего мутацию V600E, таких как вемурафениб, с РАС-1 в усилении апоптической гибели клеток в различных линиях клеток меланомы, содержащих белок V600E BRAF. Важно отметить, что РАС-1 сохраняет активность у резистентной к вемурафенибу линии клеток A375R, указывая на его полезность при меланомах, которые прогрессировали после лечения BRAF-ингибитором.
Определения
Следующие определения включены для обеспечения четкого и цельного понимания данного описания и формулы изобретения. Используемые в данном документе указанные термины имеют следующие значения. Все другие термины и фразы, использованные в данном описании, имеют свои обычные значения, которые могут быть поняты специалистом в данной области техники. Такие обычные значения можно получить, обратившись к техническим словарям, таким как Hawley's Condensed Chemical Dictionary 14th Edition, by R. J. Lewis, John Wiley & Sons, New York, N. Y., 2001.
Ссылки в описании на «один вариант реализации изобретения», «вариант реализации изобретения» и т.д. указывают на то, что вариант реализации изобретения может включать конкретный аспект, признак, структуру, фрагмент или характеристику, но не каждый вариант реализации изобретения обязательно включает аспект, признак, структуру, фрагмент или характеристику. Более того, такие фразы могут, но не обязательно, относиться к одному и тому же варианту реализации изобретения, относящимся к другим частям описания. Дополнительно, когда конкретный аспект, признак, структура, фрагмент или характеристика описывается в связи с вариантом реализации изобретения, то в компетенции специалиста в данной области техники лежит определение влияния такого аспекта, признака, структуры, фрагмента или характеристики на другие варианты реализации изобретения или связи с ними, независимо от однозначности описания.
Формы единственного числа включают ссылку на множественное число, если из контекста явно не следует обратное. Таким образом, например, ссылка на «соединение» включает множество таких соединений, так что соединение X включает множество соединений X. Дополнительно следует отметить, что формула изобретения может быть составлена в виде исключения любого необязательного элемента. По существу, это утверждение предназначено для выполнения функции предшествующего основания для применения исключающей терминологии, такой как «лишь», «только» и т.п., в связи с любым описанным в данном документе элементом и/или перечислением элементов формулы изобретения, или применения «отрицательных» ограничений.
Термин «и/или» означает любой одни из объектов, любую комбинацию объектов или все из терминов, с которыми связан данный термин. Фразы «один или более» и «по меньшей мере один» легко понятны специалисту в данной области техники, в частности при прочтении в контексте их применения. Например, фраза может означать один, два, три, четыре, пять, шесть, десять, 100 или любой больший предел, приблизительно в 10, 100 или 1000 раз больше, чем указанный меньший предел. Например, один или более заместителей на фенильном кольце относится к количеству от одного до пяти или от одного до четырех, например, если фенильное кольцо двузамещенное.
Термин «около» может относиться к вариации ±5%, ±10%, ±20% или ±25% от указанного значения. Например, «около 50» процентов, в некоторых вариантах реализации изобретения, может содержать вариацию от 45 до 55 процентов. Для целочисленных диапазонов термин «около» может включать одно или два целых числа, больших и/или меньших указанного целого числа на каждом конце диапазона. Если не указано иное, термин «около» предназначен для включения значений, например, массовых процентных содержаний, приближенных к указанному диапазону, которые эквивалентны применительно к функциональности индивидуального ингредиента, композиции или варианта реализации изобретения. Термин около также может модифицировать крайние точки указанного диапазона, как обсуждается выше в этом параграфе.
Как будет понятно специалисту в данной области, все числа, включающие те, которые выражают количества ингредиентов, свойства, такие как молекулярная масса, условия реакции и т.д., являются приближениями и их следует понимать, как необязательно модифицированные во всех случаях термином «около». Эти значения могут изменяться в зависимости требуемых свойств, которые необходимо получить специалистам в данной области техники, использующим указания описаний данного документа. Также понятно, что такие значения по своей природе содержат вариабельность, неизбежно исходящую из стандартных отклонений, возникших при соответствующих исследуемых измерениях.
Как будет понятно специалисту в данной области техники, любая или все цели, в частности касательно обеспечения письменного описания, все перечисленные в данном документе диапазоны также охватывают любой и все поддиапазоны и комбинации своих поддиапазонов, а также отдельные значения, создавая диапазон, в частности, целочисленных значений. Перечисленный диапазон (например, массовых процентных содержаний или углеродных групп) включает каждое конкретное значение, целое число, десятичное число или принадлежность внутри диапазона. Любой перечисленный диапазон можно легко распознавать как в достаточной степени описывающий и обеспечивающий тот же диапазон, разбитый на по меньшей мере равные половины, трети, четвертые, пятые или десятые части. В качестве неограничивающего примера, каждый диапазон обсуждается в данном документе как легко разбиваемый на нижнюю треть, среднюю треть и верхнюю треть и т.д. Как также будет понятно специалисту в данной области техники, все такие выражения как «вплоть до», «по меньшей мере», «больше чем», «менее чем», «более чем», «или больше» и тому подобные, включают указанное число, и такие термины относятся к диапазонам, которые могут быть впоследствии разбиты на поддиапазоны, как обсуждается выше. Таким же образом все соотношения, перечисленные в данном документе, также включают подсоотношения, попадающие в более широкое соотношение. Соответственно, конкретные значения, указанные для радикалов, заместителей и диапазонов, приводятся только для иллюстрации. Они не исключают другие определенные значения или другие значения из определенных диапазонов для радикалов и заместителей.
Специалист в данной области техники также легко распознает, что такие представители обычным образом сгруппированы вместе, как в группе Маркуша, данное изобретение охватывает не только всю группу, отмечаемую как целую, но и каждого представителя группы по отдельности и все возможные подгруппы основной группы. Дополнительно, во всех смыслах, изобретение охватывает только основную группу, но также в основной группе отсутствует один или более из представителей группы. Поэтому в изобретении предусмотрено явное исключение любого одного или более из представителей указанной группы. Соответственно, для любых из описанных категорий или вариантов реализации изобретения могут применяться оговорки, на основании которых любой один или более из перечисленных элементов, видов или вариантов реализации изобретения, могут исключаться из таких категорий или вариантов реализации изобретения, например, для применения в явном отрицательном ограничении.
Термин «приведение в контакт» относится к воздействию от прикосновения, образования контакта или переносу в непосредственную или тесную близость, включая клеточный или молекулярный уровень, например, обуславливая физиологическую реакцию, химическую реакцию или физическое изменение, например, в растворе, в реакционной смеси, in vitro или in vivo.
«Одновременно» означает (1) одновременно по времени или (2) в различные моменты времени в течение курса обычного графика лечения.
«Последовательно» относится к введению одного действующего вещества, применяемого в способе после введения другого действующего вещества. После введения одного действующего вещества следующее действующее вещество можно вводить практически одновременно с первым или следующее действующее вещество можно вводить после эффективного периода времени после первого действующего вещества. Эффективный период времени представляет собой количество времени, предназначенное для реализации максимальной пользы от введения первого действующего вещества.
«Эффективное количество» относится к количеству, эффективному для лечения заболевания, нарушения и/или патологического состояния, или для осуществления указанного эффекта, такого как активация или ингибирование. Например, эффективное количество может быть количеством, эффективным для снижения прогрессирования или тяжести патологического состояния или симптомов, подлежащих лечению. Определение терапевтически эффективного количества вполне соответствует возможностям специалистов в данной области техники. Термин «эффективное количество» предназначен для включения количества соединения, описанного в данном документе, или количества комбинации соединений, описанных в данном документе, например, которые эффективны для лечения заболевания или нарушения, или для лечения симптома заболевания или нарушения в организме хозяина. Таким образом «эффективное количество», в целом, означает количество, обеспечивающее требуемый эффект.
В одном варианте реализации изобретения эффективное количество относится к количеству действующего вещества, описанного в данном документе, которое является эффективным либо самостоятельно, либо в комбинации с фармацевтическим носителем, при одно- или многодозовом введением в клетку или субъекту, например, пациенту, при ингибировании роста или пролиферации, включая уничтожение или остановку роста гиперпролиферативных клеток. Такое ингибирование роста или уничтожение может выражаться как продолжение выживаемости субъекта, например, пациента сверх ожидаемого периода в отсутствии такого лечения, или любого улучшения при прогнозировании для субъекта, относительно отсутствия такого лечения.
Термин «лечащий», «лечить» или «лечение» включают (i) ингибирование заболевания, патологического или клинического состояния, или прекращение его развития; (ii) облегчение заболевания, патологического или клинического состояния и/или (iii) уменьшение симптомов, связанных с заболеванием, патологическим или клиническим состоянием. Таким образом, термины «лечить», «лечение» и «лечащий» могут включать снижение, остановку или обращение прогрессирования, или тяжести патологического состояния или симптомов, подлежащих лечению. По существу, термин «лечение», соответствующим образом, может включать медицинское и/или терапевтическое ведение. В некоторых вариантах реализации изобретения термин «лечение», «лечить» или «излеченный» может относится к (i) снижению или устранению симптомов, или интересующего заболевания (терапия) или (ii) удалению или разрушению опухоли (излечение).
Термины «ингибировать», «проводить ингибирование» и «ингибирование» относятся к замедлению, остановке или обращению роста, или прогрессирования заболевания, инфекции, патологического состояния или группы клеток. Ингибирование может превышать около 20%, 40%, 60%, 80%, 90%, 95% или 99%, например, по сравнению с ростом или прогрессированием, которое происходит в отсутствии лечения или приведения в контакт. Дополнительно, термины «индуцировать», «ингибировать», «потенциировать», «повышать», «увеличивать», «снижать» или подобные отмечают количественные изменения между двумя состояниями и могут относится к по меньшей мере статистически значимым отличиям между этими двумя состояниями. Например, «количество, эффективное для ингибирования роста гиперпоролиферативных клеток» означает, что скорость роста клеток, в некоторых вариантах реализации изобретения, может по меньшей мере статистически значимо отличаться от необработанных клеток. Такие термины могут применяться в данном документе, например, к скоростям пролиферации.
Фраза «ингибирование роста или пролиферации» гиперпоролиферативной клетки, например, неопластической клетки, относится к замедлению, приостановке, прекращению или остановке ее роста или метастазирования и необязательно указывает на полное устранение неопластического роста.
Термин «рак» обычно относится к любой группе из более 100 заболеваний, вызываемых неконтролированным ростом анормальных клеток. Рак может принимать форму солидных опухолей и лимфом, и несолидных раковых новообразований, таких как лейкоз. В отличие от нормальных клеток, которые воспроизводятся до созревания, а затем только при необходимости заменяют поврежденные клетки, раковые клетки могут расти и делиться бесконечно, вытесняя ближайшие клетки и в конце концов распространяясь в другие части организма.
В изобретении предложен способ лечения раковых и злокачественных патологических состояний, и в частности раковых заболеваний, которые несут белок V600E BRAF или белок V600K BRAF. Термин «раковое патологическое состояние» относится к любому состоянию, в котором клетки находятся в анормальном состоянии или патологии, которая характеризуется быстрой пролиферации или неоплазией. Раковое патологическое состояние по своей природе может быть злокачественным или незлокачественным (например, предраковым состоянием). В дальнейшем описания «ракового патологического состояния» могут использоваться термины «гиперпроферативное», «гиперпластическое», «гиперплазия», «злокачественное», «неопластическое» и «неоплазия». Эти термины можно использовать взаимозаменяемо, и они означают включение всех типов гиперпролиферативного роста, гиперпластического роста, раковых видов роста или онкогенных процессов, метастатических тканей или злокачественно трансформированных клеток, тканей или органов, независимо от гистопатологического типа, стадии инвазивности или раковой детерминации (например, злокачественная или незлокачественная).
Термин «неоплазия» относится к росту новых клеток, который приводит к потере восприимчивости к факторам контроля нормального роста, например, неопластический рост клеток. «Гиперплазия» относится к клеткам, осуществляющим аномально высокую скорость роста. Однако эти термины могут применяться взаимозаменяемо, как будет определять их контекст, в целом относясь к клеткам, испытывающим аномальные скорости роста клеток. «Неоплазии» и «гиперплазии» включают опухоли, которые могут быть либо доброкачественной, предзлокачественной опухолью, карциномой in-situ, злокачественной, солидной или несолидной опухолью. Примеры некоторых раковых патологических состояний, которые можно лечить включают, но не ограничиваются ими, рак анального канала, переходно-клеточный рак мочевого пузыря, рак костей, рак молочной железы, рак шейки матки, колоректальный рак, рак желудка, рак головы и шеи, саркому Капоши, лейкоз, рак легкого, такой как бронхогенный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточный рак легкого, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, злокачественную лимфому, нейробластомы, остеогенные карциномы (например рак кости), офтальмологические виды рака (например ретинобластомы и другие раковые заболевания глаза), рак яичника, рак простаты, рак почки, раковые заболевания кожи, такие как меланома, саркомы мягких тканей, рак щитовидной железы и опухоль Вильмса. Другие примеры незлокачественных гиперпролиферативных патологических состояний (например, предраковых патологических состояний), которые входят в объем изобретения, включают, но не ограничиваются ими, аденомы, хондромы, эндохондромы, остеомы, папиллярные опухоли и тому подобные, включая другие раковые заболевания, описанные в данном документе.
Термины «лейкоз» или «лейкозный рак» относится ко всем раковым заболеваниям или неоплазиям гемопоэтической и иммунной системы (кровеносной и лимфатической системы). Эти термины относятся к прогрессирующему злокачественному заболеванию кроветворных органов, отмеченному искаженной пролиферацией и развитием лейкоцитов и их предшественников в крови и костном мозге. Миеломы относятся к другим типам опухолей клеток крови и костного мозга. Лимфомы относятся к опухолям лимфатической ткани. • Примеры лейкоза включают острый миелогенный лейкоз (ОМЛ), острый лимфобластный лейкоз (О Л Л) и хронический миелогенный лейкоз (ХМ Л).
Как описано в данном документе, композиции и способы изобретения можно использовать для лечения различных неопластических нарушений, включая такие патологические состояния как акральная лентигинозная меланома, актинический кератоз, аденокарцинома, аденоидная кистозная карцинома, аденомы, аденосаркома, аденосквамозная карцинома, астроцитарные опухоли, карцинома бартолиновой железы, базальноклеточная карцинома, карциномы бронхиальных желез, капиллярные карциноиды, карцинома, карциносаркома, кавернозный рак, холангиокарцинома, хондросаркома, папиллома/карцинома хориоидного сплетения, светлоклеточная карцинома, цистаденома, опухоль эндодермального синуса, гиперплазия эндометрия, стромальная саркома эндометрия, эндометриоидная аденокарцинома, эпендимальная эпителиоидная саркома Юинга, фиброламеллярная фокальная нодулярная гиперплазия, гастриома, эмбрионально-клеточные опухоли, глиобластома, глюкагонома, геманнибластомы, гемангиоэндотелиома, гемангиомы, аденома печени, аденоматоз печени, гепатоцеллюлярная карцинома, инсулинома, интраэпителиальная неоплазия, интраэпителиальная сквамозная неоплазия, инвазивная сквамозная карцинома, крупноклеточная карцинома, лейомиосаркома, меланома типа злокачественного лентиго, злокачественная меланома, злокачественные мезотелиальные опухоли, медуллобластома, медуллоэпителиома, меланома, нейробластома, нейроэпителиальная аденокарцинома, нодулярная меланома, овсяноклеточный рак, олигодендроглиальная остеосаркома, панкреатический полипептид, папиллярная серозная аденокарцинома, опухоли гипофизарной шишковидной клетки, плазмацитома, псевдосаркома, легочная бластома, почечноклеточный рак, ретинобластома, рабдомиосаркома, саркома, серозная карцинома, мелкоклеточная карцинома, карциномы мягких тканей, секретирующая соматостатин опухоль, сквамозная карцинома, сквамозноклеточная карцинома, субмезотелиальная поверхностная распространяющаяся меланома, недифференцированная карцинома, увеальная меланома, веррукозная карцинома, випома, хорошо дифференцированная карцинома и опухоль Вильмса. Соответственно, описанные в данном документе композиции и способы можно применять для лечения рака кожи, рака мочевого пузыря, рака головного мозга (включая внутричерепные неоплазмы, такие как глиома, менингиома, нейринома и аденома), рака молочной железы, рака толстой кишки, рака легкого (МРЛ или НМРЛ), рака яичника, рака поджелудочной железы, рака простаты и/или других видов рака, указанных в данном документе.
В некоторых вариантах реализации изобретения комбинация РАС-1 и второго действующего вещества (например, ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию, например, действующее вещество вемурафениб) может быть в частности эффективным для лечения меланомы. Другие раковые заболевания, которые можно лечить включают, но не ограничиваются ими, олигодендроглиомы и глиобластомы, включая мультиформную глиобластому (МФГ). Ткани, поражаемые раковыми клетками, могут находиться в самом головном мозге (например, в черепе или спинномозговом канале) или в лимфатической ткани, в кровеносных сосудах, в черепно-мозговых нервах, в полостях головного мозга (оболочках головного мозга), черепе, гипофизарной железе или шишковидной железе. Конкретные формы рака головного мозга, которые можно лечить, включают астроцитомы, хондромы, хондросаркомы, хордомы, лимфомы ЦНС (центральной нервной системы), краниофарингиомы, эпендимомы, ганглиоглиомы, ганглионейромы (также называемые ганглиоцитомы), глиомы, включая астроцитомы, олигодендроглиомы и эпендимомы, геманглиобластомы (также называемые сосудистые опухоли), примитивные нейроэктодермальные опухоли (ПНЭО), такие как медуллобластомы, менингиомы и вестибулярные шванномы (раннее известные как акустическая нейрома / шваннома).
Комбинацию также можно использовать для лечения метастатических опухолей, которые вторгаются в внутричерепную сферу из раковых образований, возникающих в других органах организма. Эти патологические состояния обычно называются вторичными опухолями головного мозга. Вторичные опухоли головного мозга, которые можно лечить комбинацией РАС-1 и второго действующего вещества, включают метастатические опухоли головного мозга, которые происходят из рак легкого, рака молочной железы, злокачественной меланомы, рака почки, рака толстой кишки и других карцином.
Другие примеры раковых патологических состояний, которые входят в объем изобретения, включают, но не ограничиваются ими, нейробластомы и остеогенные карциномы (например, рак кости или неопластический рост ткани в кости). Примеры злокачественных первичных опухолей костей, которые можно лечить комбинацией РАС-1 и второго действующего вещества, включая остеосаркомы, хондросаркомы, саркому Юинга, фибросаркомы и тому подобные, и вторичные опухоли костей, такие как метастатическиеочаги, которые распространились из других органов, включая карциномы молочной железы, легкого и простаты.
Терапевтические средства и их активность
Активирующее прокаспазу соединение-1 (РАС-1; (2-(4-бензилпиперазин-1-ил)-N-[(2-гирокси-3-проп-2-енил-фенил)метилиденамино]ацетамид) избирательно индуцирует апоптоз в раковых клетках. Способы получения РАС-1 описаны в патенте США №8778945 (Hergenrother et al.). РАС-1 усиливает активность прокаспазы-3 посредством хелатирования ингибирующих ионов цинка, индуцируя апоптоз раковых клеток. РАС-1 может усиливать активность и аутосозревание прокаспазы-3, и индуцировать апоптоз раковых клеток. РАС-1 также усиливает химиотерапевтическую активность ингибиторов фермента BRAF, имеющего мутацию (второе действующее вещество), часто где-либо РАС-1, либо второе действующее вещество самостоятельно менее активно или полностью неактивно.
Неожиданно обнаружено, что РАС-1 и его производные могут действовать синергически по отношению к активности ингибиторов фермента BRAF, имеющего мутацию. Соответственно, в изобретении предложены дополнительные варианты реализации изобретения, в которых действующее вещество РАС-1 в описанных в данном документе композициях может заменяться производным РАС-1, описанным в патенте США №8592584 (Hergenrother et al.) или патенте США №8778945 (Hergenrother et al.), причем патенты включены в данный документ путем ссылки, для предоставления дополнительных композиций по данному изобретению. Одним примером таких производных РАС-1 является SPAC-1 (4-((4-(2-(2-(3-аллил-2-гидроксибензилиден)гидразинил)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил)метил)бензолсульфонамид). РАС-1 и его производные также могут действовать синергически в отношении активности ингибиторов МЕК, таких как траметиниб.
Соответственно, РАС-1 можно комбинировать с ингибитором фермента BRAF, имеющего мутацию, как описано в данном документе, и/или с таким ингибитором МЕК, как траметиниб, комбиметиниб, биниметиниб (МЕК162), селуметиниб, PD-325901, CI-1040, PD035901 или ТАК-733. Ингибиторы МЕК являются лекарственными средствами, которые ингибируют активируемые митогенами протеинкиназные ферменты-киназы МЕК1 и/или МЕК2. Их можно использовать для воздействия на механизм MAPK/ERK, который сверхактивируется при некоторых формах рака.
Количество или концентрация РАС-1 или производного РАС-1 в терапевтической композиции может составлять количество или концентрацию, эффективную для ингибирования роста раковых клеток, для индуцирования апоптоза в раковой клетке или для синергического взаимодействия со вторым действующим веществом. Например, концентрация РАС-1 может составлять от около 0,2 мкМ до около 5 мМ или от около 2 мкМ до около 50 мкМ, как правило, около 2,5 мкМ, около 5 мкМ, около 7,5 мкМ, около 10 мкМ, около 12,5 мкМ, около 15 мкМ, около 20 мкМ, около 25 мкМ, около 30 мкМ, около 40 мкМ или около 50 мкМ, или диапазон между любым из вышеупомянутых значений. Аналогично, концентрации второго действующего вещества (например, ингибиторов фермента BRAF, имеющего мутацию, таких как вемурафениб или дабрафениб) могут составлять от около 1 нМ до около 1 мМ или от около 25 нМ до около 1 мМ, как правило, около 1 нМ, около 2 нМ, около 3 нМ, около 5 нМ, около 10 нМ, около 25 нМ, около 50 нМ, около 100 нМ, около 250 нМ, около 500 нМ, около 750 нМ, около 900 нМ, около 1 мкМ, около 2,5 мкМ, около 5 мкМ, около 7,5 мкМ, около 10 мкМ, около 12,5 мкМ, около 15 мкМ, около 20 мкМ, около 25 мкМ, около 30 мкМ, около 40 мкМ, около 50 мкМ, около 75 мкМ, около 100 мкМ, около 125 мкМ, около 150 мкМ, около 200 мкМ, около 250 мкМ, около 300 мкМ, около 500 мкМ, около 750 мкМ или около 1 мМ, или диапазон между любым из вышеупомянутых значений. Специалист в данной области техники может легко преобразовать количество действующего вещества в дозе конкретной концентрации в количество действующего вещества, например, для применения в твердой лекарственной формы.
Данные различных экспериментов показаны на Фиг. 1-13. РАС-1 и вемурафениб проявляют сильную синергию в отношении индукции апоптической гибели и активности каспазы в клетках меланомы. Существенная активация прокаспазы-3 наблюдается в клетках, обработанных РАС-1 + вемурафениб. Дополнительно, самостоятельно 12 мкМ РАС-1 и 10 мкМ вемурафениб оказывают очень слабое влияние на расщепление PARP-1 в клетках A375, но существенное расщепление PARP наблюдают для их комбинации (посредством вестерн-блота). Кроме того, добавление РАС-1 к комбинации вемурафениба и ингибитора МЕК, траметиниб, существенно усиливает активность каспазы-3 и проапоптическое влияние комбинации. Более того, добавление низких концентраций РАС-1, замедляет возобновление роста раковых клеток после обработки вемурафенибом. РАС-1 также остается действенным против резистентных к вемурафенибу клеток A375VR в культуре клеток и синергически взаимодействует с вемурафенибом для проявления противоопухолевых воздействий на рост клеток A375VR in vivo. Данные авторов указывают, что ингибирование передачи сигнала МАРК с одновременной активацией прокаспазы-3 является эффективной стратегией для усиления противоопухолевой активности вемурафениба и уменьшения развития устойчивости. Соответственно, в изобретении предложен способ преодоления устойчивости к вемурафенибу путем введения РАС-1 в комбинации с терапией вемурафенибом и/или терапии с вемурафенибом/ингибитором МЕК пациентов, болеющих резистентным к вемурафенибу раком.
Способы по данному изобретению
В изобретении предложен способ избирательного индуцирования апоптоза в раковой клетке, включающий введение в раковую клетку комбинации соединений, способных модифицировать молекулу прокаспазы-3 указанной раковой клетки; причем комбинация соединений представляет собой РАС-1 и второе действующее вещество. Предложен также способ избирательного индуцирования апоптоза в раковой клетке, включающий введение в раковую клетку комбинации соединений, способных модифицировать молекулу прокаспазы-3 раковой клетки; причем комбинация соединений представляет собой РАС-1 и второе действующее вещество, например, раковая клетка находится в организме пациента, нуждающегося в лечении.
В изобретении предложены дополнительные способы, в которых указанная комбинация соединений представляет собой РАС-1 и второе действующее вещество, например, в качестве способа лечения раковой клетки, включающего (а) идентификацию потенциальной восприимчивости раковой клетки к лечению соединением-активатором прокаспазы и (b) воздействие на раковую клетку эффективного количества комбинации соединения-активатора прокаспазы и второго действующего вещества. Предложены также способы лечения раковой клетки, включающие (а) идентификацию потенциальной восприимчивости раковой клетки к лечению соединением-активатором прокаспазы и (b) воздействие на указанную раковую клетку эффективного количества РАС-1 и второго действующего вещества; причем РАС-1 способно активировать по меньшей мере одну из прокаспазы-3 и прокаспазы-7. Предложен также способ индуцирования гибели раковой клетки (например, уничтожения раковой клетки), включающий введение в раковую клетку действующего вещества и соединения, способного активировать молекулу прокаспазы-3 раковой клетки; такого как РАС-1.
В изобретении дополнительно предложено лекарственное средство, содержащее эффективное количество комбинации РАС-1 и второго действующего вещества. Лекарственное средство можно использовать в способе индуцирования апоптоза в клетке. В некоторых вариантах реализации изобретения комбинация соединений не проникает через гематоэнцефалический барьер до такой степени, которая вызывает у пациента нейротоксические эффекты. Способ по данному изобретению включает приведение в контакт одной или более клеток с эффективным количеством комбинации соединений, описанной в данном документе, in vivo или in vitro. Таким образом, в изобретении также предложены способы лечения клетки, которые включают приведение в контакт клетки с эффективным количеством комбинации соединений, описанной в данном документе, и лечение пациента, нуждающегося в противораковой терапии, эффективным количеством комбинации соединений, описанной в данном документе.
Как описано в данном документе, в изобретении предложен способ лечения пациента, который имеет опухолевые клетки с повышенным уровнем прокаспазы-3. Способ может включать введение пациенту, имеющему опухолевые клетки с повышенным уровнем прокаспазы-3, терапевтически эффективного количества комбинации РАС-1 и второго действующего вещества, описанной в данном документе, или ее композиции. В изобретении дополнительно предложены способы лечения опухолевых клеток с повышенным уровнем прокаспазы-3, включающие воздействие на опухолевую клетку терапевтически эффективного количества комбинации РАС-1 и второго действующего вещества, описанной в данном документе, причем опухолевая клетка излечивается, уничтожается или ингибируется ее рост. Опухоль или опухолевые клетки могут быть злокачественными опухолевыми клетками. В некоторых вариантах реализации изобретения опухолевые клетки являются клетками меланомы, колоректального рака, рак щитовидной железы, рак легкого или рака яичника.
РАС-1 для введения пациенту можно комбинировать со вторым действующим веществом в унитарной лекарственной форме. Комбинированную терапию можно применять в виде одновременной или последовательной схемы. При последовательном введении комбинацию можно применять в виде двух или трех введений.
Комбинированная терапия может обеспечивать «синергию», т.е. при использовании активных ингредиентов вместе достигаемый эффект оказывается больше, чем сумма эффектов, получаемых в результате применения соединений по отдельности. Синергический эффект может достигаться, когда РАС-1 и второе действующее вещество: (1) приготовлены в одном составе и вводятся или доставляются одновременно в комбинированной лекарственной форме; (2) доставляются поочередно или одновременно в виде отдельных лекарственных форм или (3) по некоторым другим схемам. При доставке в виде поочередной терапии синергический эффект можно достигать, когда соединения вводятся или доставляются последовательно, например, в виде отдельных таблеток, пилюлей или капсул, или различными инъекциями в отдельных шприцах. В целом, во время поочередной терапии эффективная дозировка каждого активного ингредиента может применяться последовательно, т.е. периодически, тогда как в комбинированной терапии эффективные дозировки двух или более активных ингредиентов вводят вместе. Синергический противораковых эффект отмечается как противораковый эффект, который превышает предполагаемые чисто аддитивные эффекты отдельных соединений комбинации. Комбинированная терапия дополнительно описана в патенте США №6833373 (McKearn et al.), который включает дополнительные действующие вещества, которые можно комбинировать с РАС-1, и дополнительные типы рака и других патологических состояний, которых можно лечить с помощью РАС-1.
Соответственно, РАС-1 можно применять в комбинации со вторым действующим веществом для лечения рака. Введение РАС-1 может предшествовать или следовать за вторым действующим веществом через интервалы в диапазоне от минут до недель. В вариантах реализации изобретения, в которых второе действующее вещество и РАС-1 применяют к клетке по отдельности, каждый может в целом убедиться, что между каждой доставкой не прошел значительный период времени, так что действующее вещество и РАС-1 все еще способны проявлять комбинированное влияние на клетку. В таких случаях, например, предполагается, что одно вещество может вступать в контакт с клеткой, тканью или организмом в двух режимах практически одновременно (т.е. в течение менее около нескольких минут). В другом аспекте изобретения второе действующее вещество комбинации может вводиться в пределах около 1 минуты, около 5 минут, около 10 минут, около 20 минут, около 30 минут, около 45 минут, около 60 минут, около 2 часов, около 3 часов, около 4 часов, около 6 часов, около 8 часов, около 9 часов, около 12 часов, около 15 часов, около 18 часов, около 21 часов, около 24 часов, около 28 часов, около 31 часов, около 35 часов, около 38 часов, около 42 часов, около 45 часов или через около 48 часов, или больше, до и/или после введения РАС-1. В определенных других вариантах реализации изобретения второе действующее вещество можно вводить в пределах около 1 дня, около 2 дней, около 3 дней, около 4 дней, около 5 дней, около 6 дней, около 8 дней, около 9 дней, около 12 дней, около 15 дней, около 16 дней, около 18 дней, около 20 дней или около 21 дней, до и/или после введения РАС-1. В некоторых ситуациях может требоваться значительно продлить период времени для лечения, однако, когда между соответствующими введениями проходит несколько недель (например, около 1, около 2, около 3, около 4, около 6 или около 8 недель или больше).
Введение химиотерапевтических композиций изобретения пациенту как правило будет следовать общим протоколам введения химиотерапевтических средств, принимая во внимание токсичность, если она есть. Ожидается, что при необходимости циклы лечения могут повторяться. Предполагается также, что в комбинации с описанными комбинациями могут применяться различные стандартные виды терапии или вспомогательные противораковые терапии, а также хирургическое вмешательство. Эти виды терапии включают, но не ограничиваются ими, химиотерапию, иммунотерапию, генную терапию и хирургическую операцию.
Фармацевтические лекарственные формы
Соединения, описанные в данном документе, можно применять для приготовления терапевтических фармацевтических композиций, например, путем комбинирования соединения с фармацевтически приемлемым разбавителем, наполнителем или носителем. Соединения можно добавлять к носителю в форме соли или сольвата. Например, в случаях, когда соединения достаточно основные или кислотные для образования нетоксических солей кислоты или основания, то может быть подходящим введение соединений в виде солей. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли присоединения органических кислот, образованные из кислот, которые образуют физиологически приемлемый анион, например, тозилат, метансульфонат, ацетат, цитрат, малонат, тартрат, сукцинат, бензоат, аскорбат, α-кетоглутарат и β-глицерофосфат.Могут также образовываться пригодные неорганические соли, включая соли гидрохлоридов, галогенидов, сульфатов, нитратов, бикарбонатов и карбонатов.
Фармацевтически приемлемые соли можно получать, используя хорошо известные в данной области техники стандартные процедуры, например, путем проведения реакции достаточно основного соединения, такого как амин, с подходящей кислотой для обеспечения физиологически приемлемого ионного соединения. Аналогичными способами также можно готовить соли карбоновых кислот и щелочных металлов (например, натрия, калия или лития) или щелочноземельных металлов (например, кальция).
Соединения описанных в данном документе формул можно готовить в виде фармацевтических композиций и вводить в различных формах млекопитающему хозяину, такому как пациент-человек. Формы можно специально адаптировать к выбранному пути введения, например, пероральное или парентеральное введение, внутривенному, внутримышечному, местному или подкожному путям.
Описанные в данном документе соединения можно системно вводить в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, таким как инертный разбавитель или усваиваемый пищевой носитель. Для перорального введения соединения можно заключать в капсулы с твердой или мягкой желатиновой оболочкой, прессовать в таблетки или непосредственно вводить в пищу рациона пациента. Соединения также можно объединять с одним или более вспомогательными веществами и использовать в форме таблеток для проглатывания, буккальных таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и тому подобного. Такие композиции и препараты как правило содержат по меньшей мере 0,1% активного соединения. Процентное содержание композиций и препаратов может изменяться и может традиционно составлять от около 0,5%, до около 60%, от около 1% до около 25% или от около 2% до около 10% от массы данной стандартной лекарственной формы. Количество активного соединения в таких терапевтически пригодных композициях может быть таким, чтобы получать эффективный уровень дозирования.
Таблетки, пастилки, пилюли, капсулы и тому подобное, также могут содержать одно или более из следующего: такие связующие, как трагакантовая камедь, аравийская камедь, кукурузных крахмал или желатин; такие наполнители, как фосфат дикальция; такие разрыхлители, как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота и тому подобные и такое смазывающее вещество, как стеарат магния. Можно добавлять такой подсластитель, как сахароза, фруктоза, лактоза или аспартам; или такой ароматизатор, как мятное масло, винтергриновое масло или вишневый ароматизатор. Когда стандартной лекарственной формой является капсула, то она в дополнение к вышеуказанным материалам может содержать такой жидкий носитель, как растительное масло или полиэтиленгликоль. В качестве покрытий или иной модификации физической формы твердой стандартной лекарственной формы могут присутствовать различные другие материалы. К примеру, таблетки, пилюли или капсулы можно покрывать желатином, воском, шеллаком или сахаром и тому подобным. Сироп или эликсир могут содержать активное соединение, сахарозу или фруктозу в качестве подсластителя, метил-и пропилпарабены в качестве консервантов, краситель или такой ароматизатор, как вишеневый или апельсиновый ароматизатор. Любой применяемый при приготовлении любой стандартной лекарственной формы материал должен быть фармацевтически приемлемым и практически нетоксичным в применяемых количествах. В дополнение к этому активное соединение можно включать в препараты и устройства для замедленного высвобождения.
Активное соединение можно вводить внутривенно или внутрибрюшинно путем вливания или инъекции. Растворы активного соединения или его солей можно готовить в воде, необязательно смешанной с нетоксическим поверхностно-активным веществом. Дисперсии также можно готовить в глицерине, жидких полиэтиленгликолях, триацетине или их смесях, или в фармацевтически приемлемых маслах. При обычных условиях хранения и применения препараты содержат консервант для предотвращения роста микроорганизмов.
Фармацевтические лекарственные формы, пригодные для инъекции или вливания могут содержать стерильные водные растворы, дисперсии или стерильные порошки, содержащие активный ингредиент, приспособленный для экстемпорального приготовления стерильных инъекционных или инфузионных растворов, или дисперсий, необязательно инкапсулированных в липосомы. Готовая лекарственная форма должна быть стерильной, жидкой и стабильной в условиях производства, и хранения. Жидкий носитель или разбавитель может представлять собой растворитель или жидкую дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкие полиэтиленгликоли и т.п.), растительные масла, нетоксичные глицериловые сложные эфиры и их подходящие смеси. Надлежащая текучесть может поддерживаться, например, путем образования липосом, поддержанием необходимого размера частиц в случае дисперсий или применением поверхностно-активных веществ. Предупреждение воздействия микроорганизмов можно достигать с помощью различных антибактериальных и/или противогрибковых средств, таких как парабены, хлорбутанол, фенол, сорбиновая кислота, тимеросал и т.п.Во многих случаях будет предпочтительным включать в композицию изотонические агенты, например, сахара, буферные вещества или натрия хлорид. Пролонгированная абсорбция инъекционных композиций может быть обеспечена с помощью агентов, замедляющих абсорбцию, например, моностеарата алюминия и/или желатина.
Стерильные инъекционные растворы можно готовить путем введения активного соединения в необходимом количестве в подходящий растворитель с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, при необходимости, необязательно с последующей стерилизацией фильтрованием. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов, способы приготовления могут включать методы вакуумной сушки и лиофилизации, в результате которых получают порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный ингредиент, требующий присутствия в растворе.
Пригодные твердые носители включают тонкоизмельченные твердые вещества, такие как тальк, глину, микрокристаллическую целлюлозу, силикагель, глинозем и тому подобное. Пригодные жидкие носители включают воду, диметилсульфоксид (ДМСО), спирты, гликоли или водно-спиртовые/гликолевые смеси, в которых может растворяться или диспергироваться соединение при эффективных уровнях концентрации, необязательно с помощью нетоксических поверхностно-активных веществ. Для оптимизации свойств для данного применения можно добавлять такие адъюванты, как ароматизирующие вещества и дополнительные антимикробные средства. Результирующая жидкая композиция может применяться для абсорбентных вкладок, используемых для импрегнированных бандажей и других повязок, или распыляться на пораженную область с использованием распылителя типа насоса или аэрозольного распылителя. С жидкими носителями также могут применяться такие загустители, как синтетические полимеры, жидкие кислоты, соли и сложные эфиры жирных кислот, жирные спирты, модифицированные целлюлозы или модифицированные минеральные материалы.
Пригодные дозировки действующих веществ, описанных в данном документе, могут определяться сравнением их активности in vitro и активности in vivo в моделях на животных. Способы для экстраполяции эффективных дозировок у мышей и других животных для людей известны в данной области, например, см. патент США №4938949 (Borch et al.). Количество соединения или его активной соли или производного, требуемого для применения будет изменяться не только от конкретного выбранного соединения или соли, но также от пути введения, природы патологического состояния, подлежащего лечению, а также возраста и состояния пациента, и будет в конечном итоге зависеть от усмотрения лечащего врача или клинициста.
Однако, в общем, подходящая доза действующих веществ будет находиться в диапазоне от около 0,5 до около 100 мг/кг, например, от около 10 до около 75 мг/кг массы тела в день, например, от 3 до 50 мг на килограмм массы тела реципиента в день, предпочтительно в диапазоне от 6 до 90 мг/кг/день, наиболее предпочтительно в диапазоне от 15 до 60 мг/кг/день. Соединение может быть традиционно готовиться в единичной лекарственной форме; например, содержащей от 5 мг до 1000 мг, традиционно от 10 мг до 750 мг, традиционнее всего от 50 мг до 500 мг активного ингредиента на единичную лекарственную форму. В некоторых вариантах реализации изобретения дозировка РАС-1 будет составлять около 50-250 мг/кг, около 75-150 мг/кг или около 100 мг/кг. В различных вариантах реализации изобретения дозировка ингибитора гена или фермента BRAF будет составлять около от 0,5 мг/кг до около 25 мг/кг, от около 5 мг/кг до около 15 мг/кг или около 10 мг/кг. Дозировки ингибитора МЕК могут составлять сходные количества для любых из этих действующих веществ или составлять от около половины до около одной десятой количества любого из этих действующих веществ. В одном варианте реализации в изобретении предложена композиция, содержащая действующее вещество или комбинацию действующих веществ, описанную в данном документе, приготовленные в виде одной или более из таких стандартных лекарственных форм.
Требуемая доза может традиционно быть представлена в однократной дозе или в виде разделенных доз, вводимых через соответствующие интервалы, например, в виде двух, трех, четырех или более частей дозы в день. Часть дозы саму по себе можно дополнительно разделять, например, на ряд дискретных произвольно распределенных введений, таких как множественные ингаляции из инсуфлятора или пероральным введением.
Комбинация действующих веществ может традиционно вводиться в виде единичной лекарственной форме, например, содержащей от 100 до 5000 мг/м2, от 300 до 4000 мг/м2, от 370 до 3700 мг/м2, от 50 до 750 мг/м2 или от 750 до 4000 мг/м2 действующего вещества на единичную лекарственную форму. Каждое действующее вещество, по отдельности или в комбинации, также можно вводить в дозе от около 1 мг/кг до около 250 мг/кг, от около 10 мг/кг до около 100 мг/кг, от около 10 мг/кг до около 50 мг/кг, от около 50 мг/кг до около 100 мг/кг, от около 10 мг/кг до около 50 мг/кг или около 10 мг/кг, около 25 мг/кг, около 50 мг/кг, около 75 мг/кг, около 100 мг/кг или около 150 мг/кг, или в диапазоне от любого одного из вышеупомянутых значений до любого другого из вышеупомянутых значений. Действующее вещество также можно вводить субъекту для обеспечения в плазме равновесной концентрации лекарственных средств, самостоятельно или в комбинации, от около 1 мкмоль/л до около 25 мкмоль/л или около 10 мкмоль/л, или около 15 мкмоль/л.
В некоторых вариантах реализации в изобретении предложено действующее вещество в эффективной концентрации от около 10 нМ до около 100 мкМ. В другом варианте реализации изобретения эффективная концентрация составляет от около 200 нМ до около 50 мкМ, от около 500 нМ до около 40 мкМ, от около 750 нМ до около 25 мкМ, от около 1 мкМ до около 20 мкМ или от около 1 мкМ до около 10 мкМ. В другом варианте реализации изобретения считается, что эффективная концентрация должна иметь такие значения, как концентрация 50% активности при прямом анализе активации прокаспазы, в анализе индукции апоптоза клеток или при клинической терапевтической оценке на животных. В одном варианте реализации изобретения такое значение составляет менее около 200 мкМ. В другом варианте реализации изобретения значение представляет собой менее около 10 мкМ, но более около 10 нМ. Требуемая доза может традиционно быть представлена в однократной дозе или в виде разделенных доз, вводимых через соответствующие интервалы, например, в виде двух, трех, четырех или более частей дозы в день. Часть дозы саму по себе можно дополнительно разделять, например, на ряд дискретных произвольно распределенных введений.
Описанные в данном документе действующие вещества могут быть эффективными противоопухолевыми средствами и иметь более высокую активность и/или пониженную токсичность по сравнению с введением любого из одиночных средств. В изобретении предложены терапевтические способы лечения рака у пациента или субъекта, такого как млекопитающее, которые вовлекают введение млекопитающему, имеющему рак, эффективного количества соединения или композиции, описанных в данном документе. Млекопитающее включает примата, человека, грызуна, собачьих, кошачьих, крупный рогатый скот, овечьих, лошадиных, свиней, коз, коров и тому подобных. Рак относится к различным типам злокачественной неплазии, например, раку толстой кишки, раку молочной железы, меланоме или лейкозу, среди прочих описанных в данном документе, и в общем характеризуются нежелательной клеточной пролиферацией, например, неконтролируемым ростом, отсутствием дифференциации, инвазией соседней ткани и метастазами.
Способность композиции лечить рак может определяться использованием анализов, хорошо известных в данной области техники. Например, известны схемы протоколов лечения, оценки токсичности, анализа данных, количественного определения гибели опухолевых клеток и биологической значимости при применении наборов для скрининга перевиваемых опухолей. В дополнение к этому способность композиции лечить рак может определяться использованием анализов в ссылках и патентных документах, цитируемых в данном документе.
В изобретении также предложены соединения в форме пролекарств. Любое соединение, которое будет превращаться in vivo с обеспечением РАС-1 или другого действующего вещества, цитируемого в данном документе, является пролекарством. В данной области техники хорошо известны многочисленные способы образования пролекарств. Примеры пролекарств и способов их получения, в том числе, можно найти в Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985), Methods in Enzymology, Vol.42, at pp.309-396, edited by K. Widder, et. al. (Academic Press, 1985); A Textbook of Drug Design and Development, edited by Krosgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5, "Design and Application of Prodrugs," by H. Bundgaard, at pp. 113-191, 1991); H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, Vol. 8, p. 1-38 (1992); H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol.77, p.285 (1988) и Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, pages 388-392).
В дополнение к этому, в некоторых вариантах реализации изобретения РАС-1 можно заменять на производное РАС-1 или другой ингибитор, такой как соединение, описанное в патентах США №7632972 (Hergenrother et al.), 8778945 (Hergenrother et al.) или 8916705 (Hergenrother et al.), публикации патента США №2007/0049602 (Hergenrother et al.), заявке на патент США №12/597287 (Hergenrother et al.) или международной публикации №WO 2014/022858 (Hergenrother et al.), которые включены в данный документ посредством ссылки. Пригодные соединения, способы и методики для противораковой терапии, которые можно применять в комбинации с описанием в данном документе, описаны в вышеупомянутых документах, а также в патентах США №6303329 (Heinrikson et al.), 6403765 (Alnemri), 6878743 (Choong et al.) и 7041784 (Wang et al.) и публикации патента США №2004/0180828 (Shi).
Методы для выполнения исследований и оценки линий раковых клеток можно выполнять, как описано Putt et al., Nature Chemical Biology2006, 2(10), 543-550; Peterson et al., J. Mol. Biol. 2009, 388, 144-158 и Peterson et al, Cancer Res. 2010, 70(18), 7232-7241.
Следующие примеры предназначены для иллюстрации вышеуказанного изобретения и их не следует истолковывать как сужающие его объем. Специалист в данной области техники с легкостью поймет, что примеры предполагают множество других способов, с которыми можно практически осуществлять данное изобретение. Следует понимать, что можно сделать многочисленные вариации и модификации, не выходя за пределы объема данного изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Комбинация вемурафениба и активации прокаспазы-3 является синергической для меланом с мутантным BRAF.
Определение пределов устойчивости к вемурафенибу при долговременной эффективности данного лекарственного средства для лечения метастатических меланом с мутацией V600EBRAF. Ингибирование последующей передачи сигнала МАРК вемурафенибом индуцирует апоптическую гибель клеток, опосредованную каспазой-3, что дает основание предполагать, что добавление активатора прокаспазы-3 может усиливать противораковые эффекты. Авторы здесь показывают, что комбинация РАС-1, активирующего прокаспазу соединения, и вемурафениба обладает высокой синергией для усиления активности каспазы-3 и апоптической гибели клеток в линиях клеток меланомы с мутацией V600EBRAF. Данная комбинация in vivo демонстрирует благоприятный профиль безопасности у мышей и проявляет значимые противоопухолевые эффекты. Авторы дополнительно демонстрируют, что добавление РАС-1 к клинически пригодной комбинации вемурафениба и ингибитора МЕК, траметиниб, резко усиливает активность каспазы-3 и проапоптическое влияние комбинации. Более того, добавление низких концентраций РАС-1 также замедляет возобновление роста клеток после обработки вемурафенибом. Наконец, РАС-1 остается действенным против резистентных к вемурафенибу клеток A375VR в культуре клеток и синергически взаимодействует с вемурафенибом для проявления противоопухолевых воздействий на рост клеток A375VR in vivo. В совокупности, данные авторов указывают, что ингибирование передачи сигнала МАРК с одновременной активацией прокаспазы-3 является эффективной стратегией для усиления противоопухолевой активности вемурафениба и уменьшения развития устойчивости.
Авторы здесь сообщают о синергической активности PAC-1 + вемурафениб и РАС-1 + вемурафениб + траметиниб в отношении усиления активности каспазы-3 и апоптической гибели клеток в меланоме V600EBRAF. В результате увеличенная апоптическая гибель клеток, которую индуцирует комбинация PAC-1 + вемурафениб вызывает значимое уменьшение объема опухолей в мышиной модели ксенотрансплантата меланомы V600EBRAF, сильно превосходит противоопухолевые эффекты отдельных действующих веществ. В дополнение к этому это усиление апоптической гибели в отношении чувствительной к вемурафенибу меланоме путем добавления РАС-1 значительно задерживает возобновление роста клеток после воздействия вемурафениба. Наконец, РАС-1 сохраняет эффективность в отношении чувствительных к вемурафенибу клеток A375VR в культуре и синергически взаимодействует с вемурафенибом в отношении замедления опухолевого роста этих клеток in vivo, демонстрируя применении этой комбинации в меланомах, которые прогрессировали в отсутствии лечения ингибитором BRAF, для которых в настоящее время доступно только несколько вариантов лечения.
Комбинация РАС-1 и вемурафениба усиливает апоптоз в клетках с мутациями V600EBRAF. На наборе из девяти линий клеток различного происхождения и мутационным статусом BRAF вемурафениб является активным (значения IC50 в пределах 200 - 550 нМ) только в линиях клеток с мутацией V600EBRAF, что согласуется с раннее сообщенными значениями (Фиг. 1А). Оценка РАС-1 на том же наборе линий клеток показывает, что РАС-1 сохраняет сходную активность во всех линиях клеток (значения IC50 в пределах 1-4 мкМ), независимо от мутационного статуса (Фиг. 1А). Способность комбинации РАС-1 + вемурафениб индуцировать апоптическую гибель клеток затем оценивали на этих линиях клеток. В условиях (24 ч инкубации с соединениями), в которых ни вемурафениб, ни РАС-1 не индуцировали значительной апоптической гибели (≤10%) в качестве единственных средств, комбинация PAC-1 + вемурафениб индуцирует значительный апоптоз (20-45%) в линиях клеток с мутацией V600EBRAF (Фиг. 1 В). Сходную тенденцию также наблюдали, когда на линиях клеток V600EBRAF проводили оценку более низкой концентрации вемурафениба (0,5 мкМ) в комбинации с РАС-1 (Фиг. 1С). Однако комбинация PAC-1 + вемурафениб не индуцирует синергический апоптоз в линиях клеток с BRAF дикого типа (Фиг. 1В).
РАС-1 и вемурафениб воздействуют синергически в отношении усиления активности каспазы-3 активность и апоптоза в клетках А375, SK-MEL-5 и UACC-62.
С целью более подробного изучения наблюдаемой синергии, апоптическую гибель оценивали на трех линиях клеток меланом V600EBRAF с рядом концентраций РАС-1 и вемурафениба, которые индуцировали минимальный апоптоз при использовании в качестве единственных средств. В этих экспериментах наблюдали большие увеличения популяций апоптических клеток (превышающих аддитивное воздействие только одиночных средств) для А375 (Фиг. 2A),SK-MEL-5 (Фиг. 7А)и иАСС-62(Фиг. 8А). Для количественного определения синергии этой комбинации лекарственных средств рассчитывали индексы комбинации (CI). Комбинация лекарственных средств, которая является синергической, будет иметь значение CI менее 1, тогда как значение равное 1 отражает аддитивное воздействие (Chou, Pharmacol Rev 2006;58:621-81). 93% из рассчитанных значений CI оказываются меньше 1 (A375 на Фиг. 2 В, SK-MEL-5 на Фиг. 7 В и UACC-62 на Фиг. 8В), указывая на синергию для комбинации во всех трех исследуемых линиях клеток.
Для оценки увеличения апоптоза в результате увеличенной активации исполнительных прокаспаз, ферментативную активность каспазы-3/-7 оценивали на клетках А375 (после лизиса) с использованием флуорогенного субстрата. В клетках А375, обработанных только вемурафенибом или РАС-1 (в тех же концентрациях, которые использованы на Фиг. 1В), в такие моменты времени и при таких концентрациях наблюдали пренебрежимо малые увеличения активности каспазы-3 (Фиг. 2С). Однако, когда клетки A3 75 обрабатывали РАС-1 и вемурафенибом, наблюдали существенное увеличение активности каспазы-3 уже через 7 ч после обработки (Фиг. 2С). В анализах вестерн-блота ни одно из одиночных средств не оказало влияния на расщепление PARP-l в такие же моменты времени и при таких же концентрациях; тем не менее комбинация приводила к существенному расщеплению PARP-1 (Фиг. 2D) в результате увеличенной активности каспазы-3/-7 в клетках, обработанных комбинацией PAC-1 + вемурафениб. После обработки комбинацией в течение 24 ч наблюдали практически полное расщепление PARP-1 в клетках А375 (Фиг. 2D). Сходные результаты для анализа активности каспазы-3/-7 и расщепления PARP-1 также наблюдали для клеток SK-MEL-5 (Фиг. 7С и 7D) и UACC-62 (Фиг. 8С и 8D).
У производного РАС-1, РАС-1а, отсутствовал хелатирующий ионы цинка мотив, и поэтому оно не активирует прокаспазу-3 или индукцию апоптоза.
Применение РАС-la в комбинации с вемурафенибом не приводило к существенному увеличению пропорции клеток, проходящих апоптоз для клеток A375, SK-MEL-5 или UACC-62 (Фиг. 9А-С). Данный результат также согласуется с отсутствием увеличенного расщепления PARP-1 в клетках, обработанных комбинацией РАС-1а и вемурафениба (Фиг. 9D), указывая на то, что клетки не подвергаются апоптической гибели.
Ингибирование фосфорилирования ERK1/2 и активация прокаспазы-3 требуется для усиления апоптической гибели клеток. В соответствии с данными на Фиг. 1В не наблюдали усиления активности каспазы-3 или расщепления PARP-1 в двух линиях клеток WTBRAF при обработке комбинацией PAC-1 + вемурафениб (Фиг. 1А-С). Отсутствие синергии PAC-1 + вемурафениб в линиях клеток с WTBRAF, дает основание предполагать, что и ингибирование ERK1/2 и активация прокаспазы-3 требуются для индуцирования кардинального усиления апоптической гибели клеток. Действительно, через 24 ч обработки вемурафенибом не наблюдали ингибирования фосфорилирования ERK1/2 в линии клеток WTBRAF даже при высокой концентрации (30 мкМ) вемурафениба (Фиг. 1В и 1С). Данное наблюдение согласуется с предыдущими сообщениями, в которых вемурафениб не ингибирует фосфорилирование ERK1/2 в клетках WTBRAF, но парадоксальным образом активирует его.
Для дополнительного исследования этого факта клетки A3 75 (с V600EBRAF) обрабатывали РАС-1, вемурафенибом или комбинацией и анализировали на присутствие расщепленной PARP-1 и фосфорилирование ERK1/2. Через 24 ч не наблюдали полосы фocфop-ERKl/2 в клетках, обработанных вемурафенибом (при 0,5 и 1,0 мкМ) и комбинацией (Фиг. 2Е). Однако существенные увеличения количества расщепленной PARP-1 наблюдали только в клетках, обработанных как РАС-1, так и вемурафенибом (Фиг. 2Е). Сходные результаты также наблюдали для клеток SK-MEL-5 (Фиг. 7Е) и UACC-62 (Фиг. 8Е). При низкой концентрации вемурафениба (0,1 и 0,25 мкМ), когда наблюдали неполное ингибирование фосфорилирования ERK1/2, также наблюдали слабое увеличение расщепления PARP-1 над таким расщеплением при воздействии одиночных средств (Фиг. 2Е). Такой результат дает основание предполагать, что даже неполное ингибирование фосфорилирования ERK1/2, активации прокаспазы-3, которые сопровождают передачу сигнала ERK1/2, могут усиливаться при добавлении РАС-1 к обработке вемурафенибом. В своей совокупности данные показывают, что активация прокаспазы-3 посредством РАС-1 кардинально усиливает проапоптическое влияние вемурафениба на линии клеток с мутацией V600EBRAF.
Добавление РАС-1 к вемурафенибу и траметинибу усиливает активность каспазы-3 и апоптоз. Добавление такого ингибитора МЕК1/2, как траметиниб, широко используется в клинике для усиления эффективности вемурафениба для меланом V600EBRAF. Для изучения влияния РАС-1 с этой комбинацией клетки обрабатывали вемурафенибом+траметиниб в присутствии или отсутствии РАС-1 и оценивали апоптоз. В обеих линиях клеток A375 и UACC-62 совместная обработка вемурафенибом+траметаниб приводила к простым аддитивным увеличениям в популяции апоптических клеток (Фиг. 3А). В противоположность этому добавление РАС-1 приводило к большому увеличению популяций апоптических клеток, превышающему аддитивное воздействие только одиночных средств (Фиг. 3А). Совместная обработка вемурафенибом+траметанибом не приводила к расщеплению PARP-1, тогда как добавление РАС-1 приводило к практически количественному расщеплению PARP-1 (Фиг. 3В). Для изучения того, является ли увеличенная апоптическая гибель клеток в присутствии РАС-1 результатом усиленной ферментативной активности исполнительных каспаз, оценивали активность каспазы-3/-7 клеток A375 и UACC-62, обработанных вемурафенибомом+траметинибом плюс или минус РАС-1. Снова наблюдали кардинальное увеличение активности каспазы-3/-7, когда добавляли РАС-1, эффект, который отсутствовал без добавления РАС-1 (Фиг. 3С).
Комбинация вемурафениба и РАС-1 существенно снижает опухолевую нагрузку в модели ксенотрансплантата А375. Для определения противоопухолевого воздействия комбинации PAC-1+вемурафениб in vivo использовали модель ксенотрансплантата A3 75 (Yadav et al., Mol Cancer Ther 2014;13:2253-63). В этой модели бестимусным мышам подкожно инокулировали клетки A3 75 и давали опухолям вырасти, мышей рандомизированно распределяли на основании объема опухолей в четыре группы [F=0,03<Fкритический(3,01)] и вводили дозы РАС-1, вемурафениба или их комбинации в течение 15 дней. Лечение одним РАС-1 приводило к минимальному снижению массы и объема опухолей по сравнению с не получавшими лечение мышами (Фиг. 4А и 4В). Мыши, получавшие дозы только вемурафениба, испытывали умеренное снижение (53%; р=0,04) массы и объема опухолей по сравнению с контролем (Фиг. 4А и 4В), 3 из 8 мышей имели сравнимую массу опухолей, как и контрольные мыши (Фиг. 4В). В противоположность этому у мышей, леченных комбинацией РАС-1 и вемурафениба, были существенно меньшие опухолевые нагрузки по сравнению с контрольными мышами (Фиг. 4А, 4В и Фиг. 11). У этих мышей наблюдали 78% снижение объема опухолей (Фиг. 4А, р=0,0008 по сравнению с контролем), 6 из 8 мышей имели опухоли массой менее 0,2 г) (Фиг. 4В), что указывает на то, что РАС-1 дополнительно усиливает противоопухолевые эффекты вемурафениба in vivo и снижает вариабельность в ответ на лечение.
Проверка уровней прокаспазы-3 в образцах опухолей методом вестерн-блота показала поддающееся измерению и согласующееся снижение в количестве прокаспазы-3 только в образцах опухолей, взятых у мышей, получавших комбинированное лечение, по сравнению с вариабельными ответами у других групп дозирования (Фиг. 4С и 4D). Используя иммуногистохимическое окрашивание, наблюдали существенное снижение процентного содержания экспрессирующих Ki-67 клеток в опухолях, обработанных РАС-1+вемурафениб (Фиг. 4Е), что указывает на то, что комбинация PAC-1+вемурафениб способна не только амплифицировать активацию прокаспазы-3, но также ослаблять пролиферацию клеток. Наконец, у мышей, леченных PAC-1+вемурафениб, не наблюдали гематологических признаков токсичности (табл. 1), что указывает на безопасный профиль данной комбинации. В своей совокупности данные in vivo согласуются с результатами культивирования клеток, показывающими, что синергия PAC-1+вемурафениб приводит к увеличению активности каспазы-3 и индукции апоптической гибели клеток, а также снижению пролиферации клеток.
Таблица 1. Гематологическая и биохимическая токсичность РАС-1 и вемурафениба. Средние данные, полученные от 4 мышей, получавших лечение 100 мг/кг РАС-1 раз в день и 10 мг/кг вемурафениба два раза в день в течение 15 дней. Не идентифицировано клинически значимого подтверждения наличия миелосупрессии, повреждения почек или гепатической токсичности. *Значения числа тромбоцитов были снижены из-за наблюдавшегося слипания тромбоцитов. 1Значения нормального диапазона получены от самок мышей NU/NU лаборатории Charles River возрастом от 8 до 10 недель.
Долговременное лечение РАС-1 предотвращает возобновление роста, а добавление РАС-1 к вемурафенибу задерживает проявление возобновления роста.
Значение Еmax вемурафениба (процент гибели клеток, индуцированной высокими концентрациями соединения) в клетках А375 составляет 96,8±0,3% через 5 дней (Фиг. 5А), указывая, что ~3% клеток A3 75 нечувствительны к вемурафенибу. В тех же условиях РАС-1 имеет значение Еmax 99,4±0,7% (Фиг. 5А), указывая на то, что РАС-1 количественно уничтожает клетки A375 с сохранением очень малого количества нечувствительных клеток. Поэтому авторы выдвигают гипотезу, что долговременное лечение вемурафенибом будет приводить к возобновлению роста раковых клеток, тогда как лечение РАС-1 должно предотвращать возобновление роста. Для исследования этой гипотезы клетки A375 и SK-MEL-5 высаживали при низких плотностях и непрерывно обрабатывали РАС-1 (4 мкМ) или вемурафенибом (10 мкМ) вплоть до 30 дней. В клетках A375 и SK-MEL-5, обработанных вемурафенибом, наблюдали возобновление роста клеток уже через 20 дней (Фиг. 5В). Однако в лунках, обработанных РАС-1, не наблюдали возобновление роста даже после 30 дней (Фиг. 5В). Таким образом, в соответствии с более высоким значением Emax, РАС-1 способно количественно уничтожать клетки, тем самым предотвращая возобновление их роста.
Для исследования того, могут ли низкие концентрации РАС-1 в комбинации с вемурафенибом предотвращать возобновление роста раковых клеток, клетки A375 и UACC-62 высаживали при низких плотностях в 96-луночные планшеты и непрерывно обрабатывали РАС-1 (1 мкМ) или вемурафенибом (5 мкМ или 10 мкМ), или их комбинацией вплоть до 20 дней. Через 5 дней обработки с помощью РАС-1, вемурафениб или комбинации, каждая из них приводила к существенному снижению количества клеток по сравнению с контролем (А375: Фиг. 5С и 5D; UACC-62: Фиг. 12А и 12В). На день 10 не наблюдали различия между обработанными РАС-1 лунками и контролем. В лунках, обработанных 5 мкМ или 10 мкМ вемурафениба гибель клеток составляла, соответственно, 89,4±1,4% и 93,2±1,1%. Однако в лунках, в которых клетки А375 обрабатывали 1 мкМ РАС-1 и 5 мкМ или 10 мкМ вемурафениба, наблюдалась увеличенная гибель клеток, соответственно, 96,1±1,0% и 97,9±0,7%. Впоследствии, для достижения более полной гибели клеток меньшую часть клеток оставляли в лунках, обработанных и РАС-1 и вемурафенибом. Через 20 дней обработки наблюдали существенное возобновление роста колоний в лунках, обработанных только вемурафенибом, но не в лунках, получавших совместную обработку (A375: Фиг. 5С и 5D; UACC-62: Фиг. 12А и 12В). Данных результат указывает на то, что более полная гибель клеток индуцировалась путем совместной обработки клеток с РАС-1, а вемурафениб эффективен в задержке возобновления роста A375 и UACC-62.
РАС-1 синергически взаимодействует с вемурафенибом в отношении резистентной к вемурафенибу меланоме in vivo. Для оценки того, остается ли РАС-1 активным в линии клеток, которая приобрела устойчивость к вемурафенибу, получали резистентную к вемурафенибу линию клеток A375VR путем выращивания исходной линии клеток А375 с последовательно возрастающими концентрациями вемурафениба (0,5 мкМ до 1,0 мкМ) в течение 2 месяцев. Для определения механизма устойчивости A375VR секвенировали гены МЕК1/2, NRAS и АКТ, но обычно сообщаемые мутации, которые могли бы придавать устойчивость обнаружены не были (Rizos et al., Clinical Cancer Research 2014;20:1965-77). Аналогичным образом, также не наблюдали сплайс-вариант мРНК V600EBRAF. Посредством кПЦР установлено, что клетки A375VR имеют приблизительно 3-кратный более высокий уровень мРНК MDR1 по сравнению с A375. Однако, по сравнению с 1000-кратными более высокими уровнями мРНК MDR1 в клетках яичника, резистентных к доксорубицину или цисплатину, уровень сверхэкспрессии мРНК MDR1 считается низким, показывая, что устойчивость маловероятно возникает из-за кардинальной повышенной регуляции фенотипа MDR.
Вемурафениб уничтожает линию клеток A375VR со значением IC50 за 5 дней равным 1,5 мкМ, т.е. в 12 раз менее активен по сравнению с чувствительностью исходной А375 (Фиг. 6А). Более того, Еmax вемурафениба для A375VR составляет 79±6,3%, что на 14% ниже, чем у исходной линии клеток А375. При обработке исходных клеток А375 вемурафенибом (0,5 или 1 мкМ) в течение 2 ч приводит к полному ингибированию фосфорилирования ERK1/2, этот эффект не наблюдался у A375VR, что согласуется с устойчивостью A375VR к вемурафенибу и продолжению передачи сигнала МАРК (Фиг. 6В). В противоположность этому, РАС-1 сохраняет активность против A375VR со значением IC50 равным 2,4 мкМ (по сравнению с 1,2 мкМ для исходной линии клеток, Фиг. 6С) и сходным значением Еmax. Авторы выдвинули гипотезу, что несмотря на неспособность вемурафениба ингибировать фосфорилирование ERK1/2 и передачу сигнала МАРК в резистентной линии клеток A375VR, комбинация может сохранять частичную способность проявлять синергическое воздействие, основанное на расщеплении PARP-1, наблюдаемом для обработки PAC-1+вемурафениб даже в условиях неполного ингибирования фосфорилирования ERK1/2 (Фиг. 2Е). Для исследования того, может ли РАС-1 повторно сенсибилизировать клетки A375VR к индуцированному вемурафенибом апоптозу, клетки A375VR обрабатывали РАС-1 в комбинации с низкими концентрациями вемурафениба. Эта обработка комбинацией приводила к увеличению пропорции клеток, претерпевающих апоптоз (Fig. 13А, 13С), указывая на то, что добавление РАС-1 может обходить механизм устойчивости A375VR к вемурафенибу. Данный эффект исчезал при использовании неактивного варианта РАС-1а (Фиг. 13С). Комбинация PAC-1+вемурафениб была синергической, индуцируя в среднем на 7,5% большую популяцию апоптических клеток, чем предполагалось независимой моделью Блисса (Bliss, Ann Appl Biol 1939;26:585-615) (Фиг. 13A и 13В). Наконец, для определения того, может ли РАС-1 синергически действовать с вемурафенибом in vivo, клетки A375VR подкожно имплантировали бестимусным мышам, и мышам ежедневно в течение 15 дней вводили дозы вемурафениба (10 мг/кг), РАС-1 (100 мг/кг) или их комбинации. Обработка самостоятельно вемурафенибом или РАС-1 не выявляет какого-либо противоопухолевого влияния в этой модели in vivo, тогда как обработка комбинацией ведет к существенному снижению объема опухолей по сравнению с необработанным контролем (Фиг. 6D).
Обсуждение. Принимая во внимание, что искажения апоптических каскадов передачи сигналов в клетках меланомы, являются предшествующими активации прокаспазы-3, низкомолекулярные молекулы, непосредственно активирующие прокаспазу-3, могут индуцировать апоптоз путем обхода дефектной апоптической схемы. Раннее показано, что активация прокаспазы-3 с помощью РАС-1 обладает эффективностью единственного средства против клеток меланомы в культуре (Wang et al., Mol Oncol 2014;8:1640-52; Peterson et al., Cancer Res 2010;70:7232-41; Putt et al., Nat Chem Biol 2006;2:543-50), а сейчас авторы показывают, что PAC-1+вемурафениб или РАС-1+вемурафениб+траметиниб проявляют сильную синергию при индукции активности каспазы-3 и апоптической гибели клеток в меланомах с мутацией V600EBRAF. Кроме меланом, сообщали, что мутация V600EBRAF обнаружена при некоторых других раковых заболеваниях, включая болезнь Эрдгейма-Честера (БЭЧ) (54%), гистиоцитоз клеток Лангерганса (ГКЛ) (57%), немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) (1,5%) и волосатоклеточный лейкоз (100%). В двух недавних исследованиях II фазы сообщали о эффективности вемурафениба при некоторых немеланомных раковых заболеваниях с мутацию V600EBRAF, с многообещающими результатами, обнаруженными у пациентов с НМРЛ, БЭЧ, ГКЛ и рефракторным волосатоклеточным лейкозом. Принимая во внимание, эти клинические данные и настоящую работу авторов, показывающую сильную синергию между РАС-1, вемурафенибом и траметинибом в меланомах V600EBRAF, эти комбинации РАС-1/лекарственного средства могут быть эффективными при других злокачественных заболеваниях с мутацией V600EBRAF.
Параметр Еmax представляет собой подходящий критерий для оценки способности соединения количественно уничтожать раковые клетки в культуре (Fallahi-Sichani et al., Nat Chem Biol 2013;9:708-14). Значения Emax менее 100% подразумевают гетерогенность в способности лекарственного средства уничтожать популяцию раковых клеток. В данном документе авторы показывают, что вемурафениб имеет Еmах ~97% у мутантных по V600EBRAF клетках A375, но значение Еmах для РАС-1 достигает 100%. Благодаря этому в долговременных экспериментах с РАС-1 не наблюдали возобновления роста А375 или SK-MEL-5. Однако, интенсивное возобновление роста наблюдали через 20 дней для клеток A375, UACC-62 и SK-MEL-5, обработанных только вемурафенибом. При добавлении низкой концентрации РАС-1 (1 мкМ) к вемурафенибу у клеток наблюдали от слабого возобновления роста до его отсутствия. Эти результаты указывают, что добавление низких концентраций РАС-1 (1 мкМ, концентрация РАС-1, которая легко достижима n vivo (Lucas et al., Invest New Drugs 2011;29:901-11)), может быть эффективным для задержки развития устойчивости. Существенное увеличение активности каспазы-3, после массивной индукции апоптоза перед продолжением комбинированой обработки, вероятно уничтожает большую часть клеток, которые первоначально были нечувствительны к вемурафенибу. Впоследствии, остается значительно меньшая остаточная популяция клеток, которые не подвержены действию данной обработки, что крайне важно для задержки возобновления роста клеток.
В настоящее время существует мало вариантов лечения для пациентов, у которых развились резистентные к вемурафенибу меланомы. Ингибитор МЕК1/2, траметиниб, несмотря на одобрение для лечения меланом с мутацией V600EBRAF, проявляет ограниченную активность в комбинации с ингибитором BRAF у пациентов, у которых предыдущая терапия не дала результата (Kim et al., J Clin Oncol 2013; 31:482-89). Результаты авторов показывают, что РАС-1 все же сохраняет синергию с вемурафенибом для проявления противоопухолевых эффектов в отношении резистентных к вемурафенибу опухолей. Поэтому добавление РАС-1 может быть конкурентоспособным и альтернативным вариантом лечения для пациентов, меланомы которых прогрессировали после лечения вемурафенибом. Комбинация PAC-1+вемурафениб хорошо переносится, имеет хороший профиль безопасности и проявляет существенные противоопухолевые эффекты in vivo. В настоящее время РАС-1 находится на клиническом исследовании фазы I (NCT02355535), а вемурафениб и траметиниб одобрены как лечение первой линии для меланомы V600EBRAF. Таким образом, существует четкий путь для переноса доклинической демонстрации синергии, описанной в этой работе, на клинические исследования, в которых данная новая комбинация может оцениваться на пациентах-людях с раковыми заболеваниями с мутацией V600EBRAF.
Материалы и методы
Культура клеток и реактивы. A375 (CRL-1619) и CHL-1 (CRL-9446) приобретали у АТСС, соответственно, 11/5/2014 и 11/18/2014. A375SM предоставил проф. Isiah Fidler (Онкологический центр им. М.Д. Андерсона, Техас) 10/30/2014. Все линии клеток, за исключением B16-F10, Н460 и НСТ 116, культивировали в среде DMEM с добавлением 10% ЭБС (Gemini). B16-F10, Н460 и НСТ 116 культивировали в среде RPMI с 10% ЭБС. Вемурафениб, траметиниб и аннексии V-FITC (10040-02) приобретали, соответственно, у LC Laboratories, MedChemExpress и SouthernBiotech. Следующие антитела приобретали у Cell Signalling Technology: анти-PARP-l (9542), анти-каспаза-3 (9662), анти-β-актин (4967), анти-фосфо-ЕЯК1/2 (Thr202/Tyr204) (4370), анти-ЕRK1/2 (4695) анти-IgG кролика, связанное с HRP (7074). Антитело против расщепленной PARP-1 (аb32561) приобретали у Epitomics. РАС-1 и РАС-1а синтезировали, как сообщали раннее (Putt et al., Nat Chem Biol 2006;2:543-50).
Установление аутентичности линий клеток. Установление аутентичности всех человеческих линий клеток (А375, A375SM, CHL-1, Н460, НСТ 116, MIA РаСа-2, SK-MEL-5 и UACC-62) выполняли с использованием анализа PowerPlex16HS (Promega): изучали 15 аутосомальных локусов, X/Y в центре Genetics Core Университета штата Аризона. Фиксировали результаты исследования и ферограммы. Исследование на наличие микоплазм для линии клеток A375 выполняли с использованием ПЦР для выявления микоплазм в ветеринарной диагностической лаборатории Университета штата Иллинойс.
Анализы пролиферации клеток. Высаживали 1000 - 2000 клеток на лунку 96-луночного планшета и давали им возможность прикрепиться перед добавлением к каждой лунке растворов РАС-1 или вемурафениба в ДМСО. Пролиферацию оценивали анализом с сульфородамином В (SRB). _ENREF_36_ENREF_36_ENREF_21
Анализ проточной цитометрии с аннексином V/PI. В 12-луночные планшеты высаживали 70000 клеток и давали им возможность прикрепиться перед добавлением соединений. Клетки обрабатывали соединениями в течение 24 ч при 37°С, после чего их собирали и ресуспендировали в 450 мкл холодного буферного раствора (10 мМ ГЭПЭС, 140 мМ NaCl, 2,5 мМ СаСl2 рН 7,4) предварительно смешанного с красителями аннексии V-ФИТЦ и PI (0,55 мкг/мл). Образцы анализировали на проточном цитометре BD Biosciences LSR II и выполняли анализ данных с использованием FCS Express V3-2.
Анализ активности каспазы-3/7. В 96-луночные планшеты высаживали 5000-8000 клеток и давали им возможность прикрепиться. Клетки обрабатывали 1 мкМ стауроспорина в течение 24 ч или 13 мкМ раптиналя (Palchaudhuri et al., Cell Rep 2015;13:2027-36) в течение 3 ч, в качестве положительного контроля, ДМСО использовали в качестве отрицательного контроля и обрабатывали концентрациями РАС-1 и вемурафениба в течение 0, 2, 4, 7, 10, 12, 16, 20 или 24 ч. Затем планшеты оценивали на активность каспазы-3/7 посредством добавления бифункционального буферного раствора для лизиса и определения активности (200 мМ ГЭПЭС, 400 мМ NaCl, 40 мМ ДТТ, 0,4 мМ ЭДТА, 1% Тритон-Х, рН 7,4) с 20 мкМ Ac-DEVD-AFC (Cayman Chemicals) в качестве флуорогенного субстрата (λex=400 НМ, λem=505 нм). Планшеты предварительно инкубировали при 37°С в течение 30 мин в мультимодовом устройстве считывания Synergy (BioTek), а затем проводили считывание в течение 30 мин с интервалами 3 мин. Рассчитывали кривые для каждой лунки. Активность выражали как нормализованную по минимальной и максимальной активности, наблюдаемых в данном анализе.
Анализ устойчивости in vitro. В 96-луночные планшеты высаживали 800 клеток A375 или UACC-62 и в течение ночи давали им возможность прикрепиться. На следующий день в шести технических повторах проводили обработку вемурафенибом (5 или 10 мкМ) или РАС-1 (1 мкМ) в течение 5, 10 и 20 дней. Каждые 2-3 дня добавляли свежую среду и соединения в течение длительности исследования. В конце периода из 5, 10 или 20 дней лунки фиксировали 10% холодной трихлоруксусной кислотой в течение 1 ч при 4°С. Затем лунки промывали, давая возможность высохнуть и окраситься красителем 0,5% SRB в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем лунки промывали 0,1% уксусной кислотой и давали возможность высохнуть. В этот момент получали изображения планшетов с помощью GelDoc XR (BioRad). Наконец, в лунки добавляли 200 мкл 10 мМ основания Трис (рН>10,4) и считывали значение поглощения при 510 нм с использованием SpectraMax Plus (Molecular Devices). Поглощение при 510 нм откладывали на графике в зависимости от дней, прошедших после обработки, как показатель пролиферации клеток с течением времени эксперимента.
Иммуноблоттинг. Клетки и опухолевые ткани лизировали с использованием буферного раствора RIPА, содержащего смесь ингибиторов фосфатаз и протеаз (Calbiochem). Концентрацию белков каждого образца определяли анализом ВСА (Pierce). Лизаты клеток, содержащие 20 мкл белка, наносили на каждую дорожку гелей с градиентами 4-20% (BioRad) для ДСН-ПААГ-электрофореза. Белки переносили на мембрану PDVF для анализа вестерн-блот.
ПЦР и секвенирование. Лизировали клетки A375 и A375VR и экстрагировали РНК с использованием набора RNeasy (Qiagen). Для проведения реакции обратной транскрипции с использованием набора для синтеза кДНК iScript (BioRad) применяли 900 нг РНК. Реакции кПЦР проводили в системе для быстрой ПЦР в реальном времени 7900НТ (Applied Biosystems). Традиционные реакции ПЦР проводили с использованием набора для ПЦР MyFi Mix (Bioline) для 35 циклов и анализировали результат на 1% агарозном геле. Целевые ампликоны экстрагировали в гели и секвенировали в основном подразделении UIUC. Использованные праймеры можно найти в следующей таблице.
Использовали последовательности праймеров для определения характеристик резистентной к вемурафенибу линии A375VR.
Модель ксенотрансплантатов А375 и A375VR. Все исследования на животных выполняли в соответствии с руководствами UIUC IACUC (протокол №14292). В правый бок бестимусных самок мышей (Charles River) возрастом 6-7 (A375) или 5 (A375VR) недель инъецировали 0,1 мл клеток A375 или A375VR в DМЕМ:матригель (Corning) 1:1. В обеих моделях мышей рандомизированно распределяли в четыре группы лечения: контрольная, получавшие 100 мг/кг РАС-1, 10 мг/кг вемурафениба и комбинацию 100 мг/кг РАС-1 и 10 мг/кг вемурафениба (n=8). Выполняли начальные измерения объема опухолей и начинали введение доз в течение 15 дней. Вемурафениб готовили в виде 5% ДМСО с 1% метилцеллюлозы и вводили его два раза ежедневно через желудочный зонд (п.о.). РАС-1 готовили в 200 мг/мл гидроксипропил-β-циклодекстрина при рН 5,5 и вводили путем внутрибрюшинной (в. б.) инъекции. Измерения длины и ширины опухолей выполняли три раза в неделю и рассчитывали объем опухолей как 0,52*L*W2. В конце исследования мышей умерщвляли и вырезали опухоли. Опухоли взвешивали и использовали для анализов вестерн-блота и иммуногистохимических анализов.
Иммуногистохимические анализы опухолейА375 и количественное определение индекса Ki-67. Иммуногистохимические (ИГХ) анализы проводили на зафиксированных формалином и залитых парафином опухолях A375 толщиной 4 мм после того как окрашиванием Н&Е подтверждали наличие популяции неопластических клеток наряду с приемлемой целостностью ткани. Для анализа ИГХ использовали антитело против Ki-67 (Biocare Medical, №CRM325) и выполняли визуализацию окрашивания с использованием набора хромогенов IntelliPATH FLX DAB (Biocare Medical, №IPK 5010 G80). Миндалевидную железу человека применяли в качестве положительного контроля ткани. Полимер-негативную контрольную сыворотку (мыши и кролика) (Biocare Medical, №NC499) замещали первичным антителом и использовали в качестве отрицательного контроля. Для количественного определения индекса Ki-67 отсчитывали 2000 неопластических клеток и рассчитывали процент позитивных клеток. В опухолях, которые были слишком малы для подсчета 2000 клеток, считали максимальное количество неопластических клеток. Все микропрепараты просматривал один ветеринар-патолог.
Пример 2. Фармацевтические лекарственные формы.
Следующие лекарственные препараты иллюстрируют репрезентативные фармацевтические лекарственные формы, которые можно применять для терапевтического или профилактического введения соединений комбинаций, описанных в данном документе (например, РАС-1 и второе действующее вещество), или их фармацевтически приемлемых солей или сольватов (в данном документе называются «соединения X», в которых может быть одно действующее вещество или комбинация двух действующих веществ):
Эти лекарственные формы можно готовить традиционными процедурами, хорошо известными в фармацевтической сфере. Следует учитывать, что вышеуказанные фармацевтические композиции могут изменяться в соответствии с хорошо известными фармацевтическими методиками для согласования с различными количествами и типами активного ингредиента (-ов)) «соединения X». Аэрозольный препарат (vi) может использоваться в сочетании со стандартным дозирующим аэрозольным распылителем. В дополнение к этому специальные ингредиенты и пропорции приведены для иллюстративных целей. Ингредиенты можно заменять подходящими эквивалентами (например, компонентами, описанными выше) и можно изменять пропорции в соответствии с требуемыми свойствами интересующей лекарственной формы.
Пример 3. Таблетированные формы
Следующий лекарственный препарат иллюстрирует репрезентативные фармацевтические лекарственные формы, которые можно применять для терапевтического или профилактического введения соединений комбинаций, описанных в данном документе (например, РАС-1 и второе действующее вещество), или их фармацевтически приемлемых солей или сольватов:
Второе действующее вещество может быть, например, вемурафенибом, дабрафенибом, BMS-908662 (также известным как XL281), энкорафенибом (LGX818), PLX3603 (RO5212054) или RAF265 (1-метил-5-[2-[5-(трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил]пиридин-4-ил]окси-N-[4-(трифторметил)фенил]-бензимидазол-2-амин). Второе действующее вещество также может быть ингибитором МЕК или комбинацией ингибитора МЕК и одного из вышеупомянутых действующих веществ. Кроме того, для введения ингибитора МЕК (например, в качестве третьего отдельного и последовательного введения действующего вещества) можно применять третью фармацевтическую лекарственную форму, аналогичную таблетке В. Эти лекарственные формы можно готовить традиционными процедурами, хорошо известными в фармацевтической сфере. Следует учитывать, что вышеуказанные фармацевтические композиции могут изменяться в соответствии с хорошо известными фармацевтическими методиками для согласования с различными количествами и типами действующих веществ. В дополнение к этому специальные ингредиенты и пропорции приведены для иллюстративных целей. Ингредиенты можно заменять подходящими эквивалентами (например, компонентами, описанными выше) и можно изменять пропорции в соответствии с требуемыми свойствами интересующей лекарственной формы.
Поскольку конкретные варианты реализации изобретения описаны выше со ссылкой на раскрытые варианты реализации изобретения и примеры, то такие варианты реализации изобретения являются только иллюстративными и не ограничивают объем данного изобретения. Можно выполнять изменения и модификации в соответствии со средними навыками в данной области техники, не отступая от сути изобретения в его более широких аспектах, определенных следующей формулой изобретения.
Все публикации, патенты и патентные документы включены в данный документ путем ссылки, как если бы они были по отдельности включены путем ссылки. Отсутствуют ограничения, не согласующиеся с этим описанием, которые могут быть поняты из него. Изобретение описано со ссылкой на различные конкретные и предпочтительные варианты реализации изобретения и методики. Однако, следует понимать, что можно делать многочисленные вариации и модификации, не выходя за пределы сути и объема данного изобретения.
Claims (31)
1. Комбинация для лечения рака, содержащая:
(а) соединение РАС-1:
(b) второе действующее вещество, являющееся ингибитором фермента BRAF, имеющего мутацию, где второе действующее вещество представляет собой вемурафениб, и концентрация вемурафениба составляет от около 0,5 мкМ до около 30 мкМ; и
(c) фармацевтически приемлемый разбавитель, наполнитель или носитель;
причем концентрация РАС-1 составляет от около 4 мкМ до около 12 мкМ.
2. Комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что второе действующее вещество, являющееся ингибитором фермента BRAF, имеющего мутацию, представляет собой ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию V600E или V600K.
3. Комбинация по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что дополнительно содержит ингибитор MEK, где ингибитор MEK представляет собой траметиниб.
4. Комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что носитель содержит воду, буферное вещество, сахар, целлюлозу, циклодекстрин или их комбинацию.
5. Комбинация по п. 3, где концентрация траметиниба составляет около 100 нМ.
6. Способ ингибирования роста или пролиферации раковых клеток, включающий приведение раковых клеток в контакт с эффективным количеством комбинации по п. 1, что тем самым ингибирует рост или пролиферацию раковых клеток.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что раковые клетки являются меланомными клетками, лимфомными клетками, лейкозными клетками, остеосаркомными клетками, клетками рака молочной железы или клетками карциномы яичника.
8. Способ индукции апоптоза в раковой клетке, включающий приведение раковой клетки в контакт с эффективным количеством соединения РАС-1:
и эффективным количеством второго действующего вещества, причем второе действующее вещество представляет собой ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию, где второе действующее вещество представляет собой вемурафениб, и при этом в раковой клетке тем самым индуцируется апоптоз.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что второе действующее вещество представляет собой ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию V600E или V600K.
10. Способ по п. 8 или 9, дополнительно включающий приведение раковой клетки в контакт с эффективным количеством ингибитора MEK, где ингибитор MEK представляет собой траметиниб.
11. Способ по п. 8, отличающийся тем, что приведение в контакт осуществляется in vivo.
12. Способ по любому одному из пп. 8-11, отличающийся тем, что раковую клетку приводят в контакт с РАС-1 и вторым действующим веществом одновременно.
13. Способ по любому одному из пп. 8-11, отличающийся тем, что раковую клетку приводят в контакт с РАС-1 перед приведением данной раковой клетки в контакт со вторым действующим веществом.
14. Способ по любому одному из пп. 8-11, отличающийся тем, что раковую клетку приводят в контакт с РАС-1 после приведения данной раковой клетки в контакт со вторым действующим веществом.
15. Способ лечения рака у нуждающегося в этом пациента, включающий введение пациенту, одновременно или последовательно, терапевтически эффективного количества соединения РАС-1:
и эффективного количества второго действующего вещества, причем второе действующее вещество представляет собой ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию, где второе действующее вещество представляет собой вемурафениб, и концентрация вемурафениба составляет от около 0,5 мкМ до около 30 мкМ; при этом концентрация РАС-1 составляет от около 4 мкМ до около 12 мкМ, тем самым осуществляя лечение рака.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что второе действующее вещество представляет собой ингибитор фермента BRAF, имеющего мутацию V600E или V600K.
17. Способ по п. 15, отличающийся тем, что соединение РАС-1 и второе действующее вещество вводят одновременно.
18. Способ по п. 15, отличающийся тем, что соединение РАС-1 и второе действующее вещество вводят последовательно.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что соединение РАС-1 вводят перед вторым действующим веществом.
20. Способ по п. 18, отличающийся тем, что соединение РАС-1 вводят после второго действующего вещества.
21. Способ по любому одному из пп. 15-20, отличающийся тем, что рак представляет собой меланому, лейкоз, колоректальный рак, рак щитовидной железы, рак легкого, рак яичника, болезнь Эрдгейма-Честера (БЭЧ) или гистиоцитоз клеток Лангерганса (ГКЛ).
22. Способ по любому одному из пп. 15-21, дополнительно включающий введение пациенту, одновременно или последовательно, терапевтически эффективного количества ингибитора MEK, где ингибитор MEK представляет собой траметиниб.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562171882P | 2015-06-05 | 2015-06-05 | |
US62/171,882 | 2015-06-05 | ||
US201662345629P | 2016-06-03 | 2016-06-03 | |
US62/345,629 | 2016-06-03 | ||
PCT/US2016/036063 WO2016197129A1 (en) | 2015-06-05 | 2016-06-06 | Pac-1 combination therapy |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2017146346A RU2017146346A (ru) | 2019-07-09 |
RU2017146346A3 RU2017146346A3 (ru) | 2019-11-11 |
RU2720509C2 true RU2720509C2 (ru) | 2020-04-30 |
Family
ID=57442182
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017146346A RU2720509C2 (ru) | 2015-06-05 | 2016-06-06 | Комбинированная терапия pac-1 |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US10350207B2 (ru) |
EP (1) | EP3302478B1 (ru) |
JP (1) | JP7033451B2 (ru) |
KR (1) | KR102656027B1 (ru) |
CN (2) | CN108135896A (ru) |
AU (1) | AU2016271527B2 (ru) |
BR (1) | BR112017026140A2 (ru) |
CA (1) | CA2987340C (ru) |
DK (1) | DK3302478T3 (ru) |
ES (1) | ES2906763T3 (ru) |
IL (1) | IL256111B2 (ru) |
MX (1) | MX2017015532A (ru) |
RU (1) | RU2720509C2 (ru) |
WO (1) | WO2016197129A1 (ru) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MX365392B (es) * | 2012-03-06 | 2019-05-31 | Univ Illinois | Composición de combinación de pac-1 y doxorrubicina. |
MX2019008458A (es) | 2017-01-17 | 2019-12-02 | Heparegenix Gmbh | Inhibidores de proteina cinasa para promover la regeneracion hepatica o reducir o prevenir la muerte de hepatocitos. |
CA3082575A1 (en) * | 2017-11-17 | 2019-05-23 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Cancer therapy by degrading dual mek signaling |
CA3114385A1 (en) * | 2018-10-05 | 2020-04-09 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Combination therapy for the treatment of uveal melanoma |
CA3142157A1 (en) * | 2019-05-30 | 2020-12-03 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Procaspase-3 activation and immunotherapy for treatment of cancer |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010091382A1 (en) * | 2009-02-09 | 2010-08-12 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Design, synthesis and evaluation of procaspase activating compounds as personalized anti-cancer drugs |
WO2010091383A2 (en) * | 2009-02-09 | 2010-08-12 | St. Jude Medical | Inflatable minimally invasive system for delivering and securing an annular implant |
WO2013134398A1 (en) * | 2012-03-06 | 2013-09-12 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Procaspase combination therapy for glioblastoma |
WO2013134307A1 (en) * | 2012-03-05 | 2013-09-12 | Ronald Mark Buck | Top mounting bottle container |
WO2014072357A1 (en) * | 2012-11-06 | 2014-05-15 | Interna Technologies B.V. | Combination for use in treating diseases or conditions associated with melanoma, or treating diseases or conditions associated with activated b-raf pathway |
WO2014138279A1 (en) * | 2013-03-05 | 2014-09-12 | University Of Tennessee Research Foundation | Compounds for treatment of cancer |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4938949A (en) | 1988-09-12 | 1990-07-03 | University Of New York | Treatment of damaged bone marrow and dosage units therefor |
US6833373B1 (en) | 1998-12-23 | 2004-12-21 | G.D. Searle & Co. | Method of using an integrin antagonist and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia |
WO2008134474A2 (en) | 2007-04-27 | 2008-11-06 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Compositions and methods including cell death inducers and procaspase activation |
US20070049602A1 (en) | 2005-05-26 | 2007-03-01 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Selective Apoptotic Induction in Cancer Cells Including Activation of Procaspase-3 |
WO2012178038A1 (en) | 2011-06-24 | 2012-12-27 | The Broad Institute, Inc. | Methods of treating cancer |
US8916705B2 (en) | 2011-10-14 | 2014-12-23 | The Board of Trustees of The University of Illilnois | Procaspase-activating compounds and compositions |
AU2013225682B2 (en) | 2012-03-02 | 2016-04-14 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Potent anticancer activity via dual compound activation |
MX365392B (es) | 2012-03-06 | 2019-05-31 | Univ Illinois | Composición de combinación de pac-1 y doxorrubicina. |
CA2879798C (en) | 2012-08-03 | 2022-05-31 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Procaspase enzyme-activating substituted 2-(4-benzylpiperazin-1-yl)-n'-(2-hydroxybenzylidene)acetohydrazide derivatives and compostions thereof |
JP6720075B2 (ja) | 2013-05-31 | 2020-07-08 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションMerck Sharp & Dohme Corp. | 癌のための併用療法 |
CA2917742C (en) | 2013-07-12 | 2020-04-14 | Piramal Enterprises Limited | A pharmaceutical combination for the treatment of melanoma |
-
2016
- 2016-06-06 ES ES16804655T patent/ES2906763T3/es active Active
- 2016-06-06 US US15/579,689 patent/US10350207B2/en active Active
- 2016-06-06 CA CA2987340A patent/CA2987340C/en active Active
- 2016-06-06 MX MX2017015532A patent/MX2017015532A/es unknown
- 2016-06-06 BR BR112017026140-5A patent/BR112017026140A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-06-06 KR KR1020187000157A patent/KR102656027B1/ko active IP Right Grant
- 2016-06-06 AU AU2016271527A patent/AU2016271527B2/en active Active
- 2016-06-06 WO PCT/US2016/036063 patent/WO2016197129A1/en active Application Filing
- 2016-06-06 IL IL256111A patent/IL256111B2/en unknown
- 2016-06-06 EP EP16804655.5A patent/EP3302478B1/en active Active
- 2016-06-06 JP JP2017562987A patent/JP7033451B2/ja active Active
- 2016-06-06 RU RU2017146346A patent/RU2720509C2/ru active
- 2016-06-06 DK DK16804655.5T patent/DK3302478T3/da active
- 2016-06-06 CN CN201680045123.4A patent/CN108135896A/zh active Pending
- 2016-06-06 CN CN202311252422.3A patent/CN117257802A/zh active Pending
-
2019
- 2019-06-10 US US16/436,542 patent/US11129830B2/en active Active
-
2021
- 2021-09-28 US US17/487,473 patent/US20220088019A1/en active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010091382A1 (en) * | 2009-02-09 | 2010-08-12 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Design, synthesis and evaluation of procaspase activating compounds as personalized anti-cancer drugs |
WO2010091383A2 (en) * | 2009-02-09 | 2010-08-12 | St. Jude Medical | Inflatable minimally invasive system for delivering and securing an annular implant |
WO2013134307A1 (en) * | 2012-03-05 | 2013-09-12 | Ronald Mark Buck | Top mounting bottle container |
WO2013134398A1 (en) * | 2012-03-06 | 2013-09-12 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Procaspase combination therapy for glioblastoma |
WO2014072357A1 (en) * | 2012-11-06 | 2014-05-15 | Interna Technologies B.V. | Combination for use in treating diseases or conditions associated with melanoma, or treating diseases or conditions associated with activated b-raf pathway |
WO2014138279A1 (en) * | 2013-03-05 | 2014-09-12 | University Of Tennessee Research Foundation | Compounds for treatment of cancer |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2016271527A1 (en) | 2017-12-14 |
US10350207B2 (en) | 2019-07-16 |
US20190358229A1 (en) | 2019-11-28 |
EP3302478A1 (en) | 2018-04-11 |
US20180161326A1 (en) | 2018-06-14 |
US11129830B2 (en) | 2021-09-28 |
CN117257802A (zh) | 2023-12-22 |
IL256111B2 (en) | 2023-09-01 |
CN108135896A (zh) | 2018-06-08 |
IL256111A (en) | 2018-02-28 |
KR20180083842A (ko) | 2018-07-23 |
CA2987340C (en) | 2024-04-02 |
AU2016271527B2 (en) | 2021-09-02 |
US20220088019A1 (en) | 2022-03-24 |
EP3302478A4 (en) | 2019-02-27 |
RU2017146346A3 (ru) | 2019-11-11 |
CA2987340A1 (en) | 2016-12-08 |
JP2018516936A (ja) | 2018-06-28 |
RU2017146346A (ru) | 2019-07-09 |
IL256111B1 (en) | 2023-05-01 |
MX2017015532A (es) | 2018-04-30 |
WO2016197129A1 (en) | 2016-12-08 |
ES2906763T3 (es) | 2022-04-20 |
BR112017026140A2 (pt) | 2018-08-14 |
JP7033451B2 (ja) | 2022-03-10 |
EP3302478B1 (en) | 2021-11-17 |
KR102656027B1 (ko) | 2024-04-08 |
DK3302478T3 (da) | 2022-02-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2720509C2 (ru) | Комбинированная терапия pac-1 | |
US9486445B2 (en) | Combination therapy for proliferative disorders | |
RU2695228C2 (ru) | Прерывистое введение ингибитора mdm2 | |
JP4130179B2 (ja) | 骨髄腫を処置するためのc−kit阻害剤の使用 | |
CA2992221A1 (en) | Mdm2 inhibitors and combinations thereof | |
RU2607596C2 (ru) | Комбинированная противораковая терапия | |
JP2023145467A (ja) | 組み合わせ療法 | |
US20210290616A1 (en) | Procaspase combination therapy for glioblastoma | |
US20140348819A1 (en) | Methods of Treating Cancer | |
RU2724341C1 (ru) | Комбинированная композиция для предупреждения или лечения рака, содержащая производные бензофенонтиазола в качестве vda и ингибитор топоизомеразы | |
Peh | Procaspase-3 activation as a strategy to overcome resistance to targeted anticancer therapies | |
JP2004527568A (ja) | ゼラチナーゼインヒビターと抗腫瘍剤との組み合わせ、およびその使用 |