RU2707535C2 - Генетическая конструкция, кодирующая структуру т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных vhh-антител, специфичных опухолевому рецептору cd47, для нацеленной иммунотерапии злокачественных новообразований - Google Patents
Генетическая конструкция, кодирующая структуру т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных vhh-антител, специфичных опухолевому рецептору cd47, для нацеленной иммунотерапии злокачественных новообразований Download PDFInfo
- Publication number
- RU2707535C2 RU2707535C2 RU2017146641A RU2017146641A RU2707535C2 RU 2707535 C2 RU2707535 C2 RU 2707535C2 RU 2017146641 A RU2017146641 A RU 2017146641A RU 2017146641 A RU2017146641 A RU 2017146641A RU 2707535 C2 RU2707535 C2 RU 2707535C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- receptor
- encoding
- polynucleotide
- sequence
- Prior art date
Links
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 title claims description 28
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 title abstract description 18
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title abstract description 13
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title abstract description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title description 26
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 title description 23
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title description 14
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 17
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 13
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 10
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 10
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 10
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 6
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 6
- 108091093126 WHP Posttrascriptional Response Element Proteins 0.000 claims description 5
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 claims description 5
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 claims description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 108010032795 CD8 receptor Proteins 0.000 description 6
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 5
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 4
- 101000633784 Homo sapiens SLAM family member 7 Proteins 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 4
- 102100029198 SLAM family member 7 Human genes 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- RJBDSRWGVYNDHL-XNJNKMBASA-N (2S,4R,5S,6S)-2-[(2S,3R,4R,5S,6R)-5-[(2S,3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-2-[(2R,3S,4R,5R,6R)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(E,2R,3S)-3-hydroxy-2-(octadecanoylamino)octadec-4-enoxy]oxan-3-yl]oxy-3-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-5-amino-6-[(1S,2R)-2-[(2S,4R,5S,6S)-5-amino-2-carboxy-4-hydroxy-6-[(1R,2R)-1,2,3-trihydroxypropyl]oxan-2-yl]oxy-1,3-dihydroxypropyl]-4-hydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[C@@H]2O[C@H](CO)[C@H](O[C@@H]3O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]3NC(C)=O)[C@H](O[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H](N)[C@H](O3)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H](N)[C@H](O3)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)C(O)=O)[C@H]2O)[C@H](O)[C@H]1O)[C@@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC RJBDSRWGVYNDHL-XNJNKMBASA-N 0.000 description 2
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- 102100026094 C-type lectin domain family 12 member A Human genes 0.000 description 2
- 101710188619 C-type lectin domain family 12 member A Proteins 0.000 description 2
- -1 CD86 Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 2
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 2
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 2
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100023458 C-type lectin-like domain family 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 1
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 101000906643 Homo sapiens C-type lectin-like domain family 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 1
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101001051490 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule L1 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 1
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 241000283923 Marmota monax Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100024964 Neural cell adhesion molecule L1 Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001492404 Woodchuck hepatitis virus Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000017455 cell-cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010015889 zeta receptor Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению лентивирусного вектора для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR) на основе VHH-антитела к CD47 в Т-клетках человека, и может быть использовано в медицине. Полученные нацеленные Т-клетки, презентирующие CAR к CD47, характеризуются высоким уровнем экспрессии CAR, низкой иммуногенностью и увеличенным временем циркуляции в организме и могут быть использованы для эффективной иммунотерапии злокачественных новообразований. 3 ил., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для элиминации раковых стволовых клеток и предотвращения рецидивов опухолей при нацеленной иммунотерапии злокачественных заболеваний.
На сегодняшний день, одним из самых безопасных и перспективных методов лечения онкологических заболеваний считается иммунотерапия на основе адоптивного Т-клеточного переноса. Данный подход базируется на стандартной методике клеточного переноса, суть которой заключается в получении популяции иммунных клеток пациента (в данном случае CD8+ Т-лимфоцитов), увеличении их количества in vitro и введении обратно пациенту. Для повышения цитотоксической активности Т-клеток и преодоления явления толерантности был разработан подход, заключающийся в создании популяции генетически модифицированных цитотоксических Т-клеток, способных экспрессировать последовательность химерного Т-клеточного рецептора. Благодаря наличию в составе химерного рецептора последовательности антитела, специфичного к определенному опухолевому рецептору, Т-клетка приобретает способность распознавать необходимый антиген на поверхности опухолевой клетки без необходимости активации через систему главного комплекса гистосовместимости.
В уровне техники раскрываются различные генетически модифицированные цитотоксические Т-клетки.
Известен химерный антигенспецифический рецептор на основе гуманизированного антитела против EGFRvIII. Описана выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая химерный антигенспецифический рецептор (CAR), причем указанный CAR включает связывающий домен антитела против EGFRvIII, трансмембранный домен и внутриклеточный домен сигнализации, включающий стимулирующий домен. Кодируемый CAR включает трансмембранный домен, который включает домен белка, выбираемого из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи Т-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 и CD154, а кодируемый внутриклеточный домен сигнализации включает функциональный домен сигнализации CD3 дзета (заявка RU 2015139874).
Известна изолированная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая химерный антигенный рецептор a (CAR) и/или RIAD или эзрин-полипептид, где CAR содержит антигенсвязывающий домен (например, антитело или фрагмент антитела, TCR или фрагмент TCR), который связывается с опухолевым антигеном, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, например, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий костимулирующий домен. В некоторых вариантах осуществления опухолевой антиген выбирают из одного или более: CD19, CD123, CD22, CD30, CD171, CS-1 (также называемый CD2 подмножеством 1, CRACC, SLAMF7, CD319 и 19А24), лектин-подобная молекула-1 С-типа (CLL-1 или CLECL1), CD33, вариант III рецептора эпидермального фактора роста (EGFRvIII); ганглиозид G2 (GD2), ганглиозид GD3 (международная заявка WO 2016172583 (А1), опубл. 2016-10-27).
Известен химерный мономолекулярный Т-клеточный рецептор, специфичный к раково-эмбриональному антигену, включающий одноцепочечное антитело, кодируемое нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, в котором эффекторный фрагмент Т-клеточного рецептора объединен с антиген-распознающей частью, представляющей собой вариабельные фрагменты двух различных антител к раково-эмбриональному антигену (РЭА) (патент RU 2522004 (С2), опубл. 2014-07-10).
Известен генно-инженерный, CD19-специфический химерный рецептор Т-клеток к иммунным клеткам, экспрессирующим химерный рецептор. Настоящее изобретение также относится к применению таких клеток для клеточной иммунотерапии злокачественных новообразований. Химерный рецептор представляет собой одноцепочечный scFvFc: zeta-рецептор, где scFvFc обозначает внеклеточный домен, scFv обозначает цепочки VH и VL одноцепочечного моноклонального антитела к CD19, Fc представляет собой по меньшей мере часть константной области IgG1, а zeta представляет собой внутриклеточный сигнальный домен дзета-цепи человеческого CD3. Внеклеточный домен scFvFc и дзета внутриклеточного домена связаны трансмембранным доменом, таким как трансмембранный домен CD4 (патент US 7446179 (В2), опубл. 2008-11-04).
Известен химерный антигенный рецептор (CAR), специфичный для CD33, вектора, кодирующие их, и рекомбинантные Т-клетки, содержащие CD33 CAR. Изобретение может быть взято в качестве наиболее близкого аналога (прототипа). Раскрытие также включает в себя способы введения генно-модифицированной Т-клетки, экспрессирующей CAR, которая содержит CD33-связывающий домен. Примеры фрагментов антител включают, но не ограничиваются ими, Fab, Fab', F(ab')2, фрагменты scFv-антитела, линейные антитела, однодоменные антитела, такие как sdAb (VL или VH), VHH верблюда (заявка WO 2016014576, опубл. 28.01.2016).
Указанные аналоги имеют ряд принципиальных недостатков, связанных, главным образом, с антигенраспознающей частью химерного рецептора. Антигенраспознающая часть большинства современных химерных рецепторов представлена одноцепочечными scFv-моноклональными антителами. По своей структуре они представляют собой комплекс из тяжелой и легкой вариабельных цепей стандартного антитела, объединенных линкерной последовательностью, от выбора которой, зависит формирование правильной пространственной ориентации вариабельных антиген-распознающих доменов и, как следствие, эффективность распознавания целевых антигенов. Практическое применение существующих аналогов предполагает необходимость проведения расчетов пространственной ориентации вариабельных цепей в зависимости от того или иного линкера, что значительно усложняет рабочий процесс. Другим важным недостатком является высокая молекулярная масса scFv-моноклональных антител, препятствующая эффективной экспрессии последовательности трансгена и презентации рецептора на поверхности Т-клеток. Высокая молекулярная масса антигенраспознающей части химерного рецептора может также являться причиной иммуногенности всей структуры рецептора и приводить к быстрому удалению трансплантированных лимфоцитов из организма пациента.
Решением подобных проблем является замена антигенраспознающего домена на основе scFv-антител верблюжьими одноцепочечными моноклональными VHH-антителами. VHH-антитела характеризуются крайне низкой молекулярной массой и высоким уровнем гомологии с вариабельной тяжелой цепью иммуноглобулина человека, что позволяет избежать иммуногенности химерных рецепторов и значительно увеличить время циркуляции модифицированных лимфоцитов в организме пациента. За счет наличия в составе тяжелой цепи иммуноглобулина единственного вариабельного домена, обладающего большей протяженностью, чем у обычных антител, VHH-антитела отличаются высокой аффинностью к своим лигандам. Этот тип антител также гораздо более удобен для создания иммунных библиотек вариабельных фрагментов и последующего отбора высоко специфичных вариантов антител при помощи фагового или рибосомального дисплея.
Хотя в ближайшем аналоге упомянута возможность включения фрагмента верблюжьих антител, конкретные конструкции не описаны.
Технической задачей изобретения является создание генетической конструкции - лентивирусного вектора, включающего полинуклеотид антигенраспознающего домена VHH, кодирующий Т-клеточный химерный рецептор, специфичный к опухолевому рецептору CD47. Задача решается тем, что разработана генетическая конструкция на основе экспрессионного плазмидного лентивирусного вектора, имеющая в составе последовательность одноцепочечных VHH антител к опухолевому рецептору CD47, кодирующих структуру Т-клеточного химерного рецептора, В состав вектора также входят полинуклеотиды, кодирующие N-концевую сигнальную последовательность рецептора CD8, антиген-распознающую часть, представляющую собой последовательность моноклонального одноцепочечного VHH-антитела, специфичного к CD47, спейсерную область, представленную 12 аминокислотной последовательностью шарнирного домена иммуноглобулина G4; трансмембранный домен рецептора CD28, сигнальный домен, включающий последовательности цитоплазматических доменов: CD28, CD137 и CD3ζ, а также ряд регуляторных элементов: 5' и 3' LTR (long terminal repeat), Rev (RRE или Rev-response element), Env - регуляторную последовательность, обеспечивающую упаковку вирусного генома в структуру вирусной частицы с образованием вириона, сРРТ - центральный полипуриновый тракт, WPRE (посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков), MCS (сайт множественного клонирования) и промотор EF1alpha.
Технический результат, обеспечиваемый предложенной конструкцией: эффективная экспрессия и последующая презентация на поверхности клеток Т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител, характеризующегося высокой аффинностью к опухолевым антигенам (рецептору CD47), простотой создания иммунных библиотек и более высокой результативностью при использовании в нацеленной иммунотерапии злокачественных новообразований. Изобретение иллюстрируют следующие примеры:
Пример 1. Получение генетической конструкции, кодирующей структуру Т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител, специфичных к опухолевому рецептору CD47.
В качестве основы для создания генетической конструкции, содержащей последовательность химерного Т-клеточного рецептора, используют классический лентивирусный вектор следующей структуры (фиг. 1):
В представленный вектор методом клонирования встраивают следующие элементы:
В силу того, что промоторная область цитомегаловируса обеспечивает слабый уровень экспрессии в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов человека, ее заменяют на последовательность промотора EF1alpha.
Рецептор CD47 экспрессируется на многих типах клеток и участвует во множестве клеточных процессов, включая такие механизмы, как пролиферация, дифференцировка, клеточная миграция, адгезия клеток и проведение сигналов, обеспечивающих апоптоз. Исследования показали, что CD47 гиперэкспрессирован в различных типах опухолевых клеток таких, например, как, клетки рака мочевого пузыря или клетки острого миелобластного лейкоза. Таким образом, CD47 представляется одной из перспективных мишеней для направленной терапии. Блокирование этого рецептора нарушает супрессирующее действие опухолевых клеток на компоненты врожденного иммунитета, что способствует развитию противоопухолевого иммунного ответа.
Предварительно приведенные последовательности функциональных элементов химерного рецептора нарабатывают в ходе ПЦР. Разделение амплифицированных фрагментов проводят в ходе горизонтального электрофореза в агарозном геле. Для очистки ДНК-фрагментов используют набор CleanUp Mini (Евроген, Россия). Очищенные фрагменты ДНК и лентивирусный вектор pLenti-CMV-MCS рестрицируют соответствующими эндонуклеазами рестрикции, после чего проводят еще один этап очистки рестрикционных смесей в агарозном геле. На завершающем этапе проводят лигирование полученных генетических последовательностей и экспрессионного вектора. Анализ нуклеотидной последовательности полученной генетической конструкции анализируют методом секвенирования, доказавшим успешность проведенного клонирования. Результатом работы стало получение генетической конструкции, кодирующей структуру Т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител, специфичных к опухолевому рецептору CD47; структура генетической конструкции представлена на фиг. 2.
Пример 2. Структура лентивирусного вектора, кодирующего структуру Т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител, специфичных к опухолевому рецептору CD47
В состав заявленного вектора входят ряд базовых элементов, кодирующих функциональные компоненты структуры Т-клеточного химерного рецептора, а также ряд регуляторных мотивов, обеспечивающих эффективную работу генетической конструкции.
Регуляторные элементы
Базовые функциональные элементы
Пример 3. Анализ эффективности элиминирования раковых клеток Т-лимфоцитами, трансфецированными лентивирусным вектором, кодирующим Т-клеточный химерный рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител, специфичных к опухолевому рецептору CD47.
В ходе in vitro анализа проводят культивирование клеток С047-позититивных (1 - U937, 2 - MDA-MB-468) и CD47-негативных (3 - MDA-MB-231, 4 - SW527) линий в присутствии Т-лимфоцитов, трансфецированных генетической конструкцией, кодирующей Т-клеточный химерный рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител. В качестве контроля используют Т-лимфоциты, трансфецированные исходным лентивирусным вектором, не кодирующим структуру химерного рецептора. По завершении инкубации (24 часа) анализируют количество живых раковых клеток в ходе количественной проточной цитометрии; полученные результаты представлены на фиг. 3.
Полученные результаты свидетельствуют об эффективности элиминирования раковых клеток Т-лимфоцитами, трансфецированными генетической конструкцией, кодирующей Т-клеточный химерный рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител, специфичных к опухолевому рецептору CD47 и позволяют рекомендовать разработанную генетическую конструкцию для использования в иммунотерапии злокачественных заболеваний.
Изобретение иллюстрируют следующие графические материалы:
Фиг. 1 - Схематическое изображение лентивирусного вектора, взятого за основу при создании генетической конструкции, содержащей последовательность химерного Т-клеточного рецептора.
Фиг 2 - Схематичное изображение лентивирусного вектора, кодирующего структуру Т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител, специфичных к опухолевому рецептору CD47.
Фиг. 3 - Результаты анализа эффективности элиминирования раковых клеток Т-лимфоцитами, трансфецированными лентивирусным вектором, кодирующим Т-клеточный химерный рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител, специфичных к опухолевому рецептору CD47. Представлены данные для CD47-позититивных (1 - U937, 2 - MDA-MB-468) и CD47-негативных (3 - MDA-MB-231, 4 - SW527) линий.
Последовательность сигнального домена рецептора CD8
5'-ATGGCCTTACCAGTGACCGCCTTGCTCCTGCCGCTGGCCTTGCTGCTCCACGCCGCCAGGCCG-3'
SEQ ID №1
Последовательность шарнирного домена IgG4 (12 аминокислот)
5'-GAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCG-3'
SEQ ID №2
Последовательность трансмембранного домена рецептора CD8
5'-TTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTG-3'
SEQ ID №3
Сигнальный домен рецептора CD28
5'-AGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCC-3'
SEQ ID №4
Сигнальный домен рецептора CD137
5'-AAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTG-3'
SEQ ID №5
Сигнальный домен рецептора CD3ζ
5'-AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGCAGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGC-3'
SEQ ID №6
Антигенраспознающий домен (VHH-19)
5'-ATGCAGGTGCAGCTCGTGGAGTCAGGGGGAGGCTTGGTGCAGGCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTAAAGTGTCTGGAAACAACTTCAGACGCGTTAATATGGGCTGGTACCGCCAGGCTCCAGGGAAGCAGCGCGACCTCGTCGCATGGATTAGTAACGATGGGGGAACGTATTATGACCGCTCCCTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACACCAAGAACACTATGTTTCTGCAAATGGACAGCCTGAAGCCTGAGGACACAGCCGTCTATTACTGTAATTCCCGCCCAAGTAGTATCTTTGGTTCCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCGGAACCCAAGACACCAAAACCACAACCGG-3'
SEQ ID №7
5' LTR (long terminal repeat) GTAGTCTTATGCAATACTCTTGTAGTCTTGCAACATGGTAACGATGAGTTAGCAACATGCCTTACAAGGAGAGAAAAAGCACCGTGCATGCCGATTGGTGGAAGTAAGGTGGTACGATCGTGCCTTATTAGGAAGGCAACAGACGGGTCTGACATGGATTGGACGAACCACTGAATTGCCGCATTGCAGAGATATTGTATTTAAGTGCCTAGCTCGATACAATAAACGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCA
SEQ ID №8
3' LTR (long terminal repeat) TGGAAGGGCTAATTCACTCCCAACGAAAATAAGATCTGCTTTTTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCA
SEQ ID №9
Rev (RRE или Rev-response element) AGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCCTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCT
SEQ ID №10
Env - регуляторная последовательность, обеспечивающая упаковку вирусного генома в структуру вирусной частицы с образованием вириона GCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCCTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACG
SEQ ID №11
Env - регуляторная последовательность, обеспечивающая упаковку вирусного генома в структуру вирусной частицы с образованием вириона GCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCCTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACG
SEQ ID №11
cPPT - центральный полипуриновый тракт TTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTA
SEQ ID №12
WPRE (посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков) AATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCATCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGC
SEQ ID №13
MCS (сайт множественного клонирования)
GAATTCTCTAGAGTCGAC
SEQ ID №14
Промотор EF1alpha GGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGA
SEQ ID №15
Claims (1)
- Лентивирусный вектор для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR) к CD47 в Т-клетках человека, включающий полинуклеотид с SEQ ID NO: 7, кодирующий антиген-распознающую часть, представляющую собой последовательность VHH к CD47; полинуклеотид с SEQ ID NO: 2, кодирующий шарнирный домен IgG4; полинуклеотид с SEQ ID NO: 4, кодирующий трансмембранный домен рецептора CD28; полинуклеотид с SEQ ID NO: 5, кодирующий CD137, полинуклеотид с SEQ ID NO: 6, кодирующий CD3ζ, SEQ ID NO: 8 и NO: 9 - 5'LTR и 3' LTR соответственно, полинуклеотид SEQ ID NO: 10, кодирующий Rev, полинуклеотид SEQ ID NO: 11, кодирующий регуляторную последовательность Env, обеспечивающую упаковку вирусного генома, SEQ ID NO: 12 - центральный полинуклеотид, кодирующий сРРТ полипуриновый тракт, SEQ ID NO: 13 - последовательность, кодирующая посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков WPRE, SEQ ID NO: 14 - сайт множественного клонирования MCS и SEQ ID NO: 15 - промотор EF1alpha, где сама конструкция лентиновирусного вектора представлена на Фигуре 2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017146641A RU2707535C2 (ru) | 2017-12-28 | 2017-12-28 | Генетическая конструкция, кодирующая структуру т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных vhh-антител, специфичных опухолевому рецептору cd47, для нацеленной иммунотерапии злокачественных новообразований |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017146641A RU2707535C2 (ru) | 2017-12-28 | 2017-12-28 | Генетическая конструкция, кодирующая структуру т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных vhh-антител, специфичных опухолевому рецептору cd47, для нацеленной иммунотерапии злокачественных новообразований |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017146641A RU2017146641A (ru) | 2019-06-28 |
| RU2017146641A3 RU2017146641A3 (ru) | 2019-07-17 |
| RU2707535C2 true RU2707535C2 (ru) | 2019-11-27 |
Family
ID=67209738
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017146641A RU2707535C2 (ru) | 2017-12-28 | 2017-12-28 | Генетическая конструкция, кодирующая структуру т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных vhh-антител, специфичных опухолевому рецептору cd47, для нацеленной иммунотерапии злокачественных новообразований |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2707535C2 (ru) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2420537C2 (ru) * | 2001-01-17 | 2011-06-10 | Трабьон Фармасьютикалз Инк. | Слитые белки связывающий домен-иммуноглобулин |
| RU2426788C1 (ru) * | 2010-03-01 | 2011-08-20 | Федеральное государственное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) | Генетические конструкции для антивич-терапии |
| RU2015139874A (ru) * | 2013-02-20 | 2017-03-24 | Новартис Аг | ЛЕЧЕНИЕ РАКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ХИМЕРНОГО АНТИГЕНСПЕЦИФИЧЕСКОГО РЕЦЕПТОРА НА ОСНОВЕ ГУМАНИЗИРОВАННОГО АНТИТЕЛА ПРОТИВ EGFRvIII |
| RU2015156509A (ru) * | 2015-12-29 | 2017-07-05 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) | Экспрессионный плазмидный лентивирусный вектор для гетерологической экспрессии рекомбинантного человеческого белка cd44 |
| RU2627181C2 (ru) * | 2015-12-29 | 2017-08-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) | Экспрессионный плазмидный лентивирусный вектор для гетерологичной экспрессии рекомбинантного человеческого белка cd47 |
-
2017
- 2017-12-28 RU RU2017146641A patent/RU2707535C2/ru active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2420537C2 (ru) * | 2001-01-17 | 2011-06-10 | Трабьон Фармасьютикалз Инк. | Слитые белки связывающий домен-иммуноглобулин |
| RU2426788C1 (ru) * | 2010-03-01 | 2011-08-20 | Федеральное государственное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) | Генетические конструкции для антивич-терапии |
| RU2015139874A (ru) * | 2013-02-20 | 2017-03-24 | Новартис Аг | ЛЕЧЕНИЕ РАКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ХИМЕРНОГО АНТИГЕНСПЕЦИФИЧЕСКОГО РЕЦЕПТОРА НА ОСНОВЕ ГУМАНИЗИРОВАННОГО АНТИТЕЛА ПРОТИВ EGFRvIII |
| RU2015156509A (ru) * | 2015-12-29 | 2017-07-05 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) | Экспрессионный плазмидный лентивирусный вектор для гетерологической экспрессии рекомбинантного человеческого белка cd44 |
| RU2627181C2 (ru) * | 2015-12-29 | 2017-08-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) | Экспрессионный плазмидный лентивирусный вектор для гетерологичной экспрессии рекомбинантного человеческого белка cd47 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| WEISKOPF K. et al. CD47-blocking immunotherapies stimulate macrophage-mediated destruction of small-cell lung cancer, JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION, 2016, V.126, N. 7, p.2610-2620. * |
| WEISKOPF K. et al. CD47-blocking immunotherapies stimulate macrophage-mediated destruction of small-cell lung cancer, JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION, 2016, V.126, N. 7, p.2610-2620. КУЛУМЗИН С. В. и др.,Основы дизайна химерных антигенных рецепторов, ACTA NATURAE, 2017, V. 9, N 1, с.6-15. BAUER A. et al. Differential signal transduction via T-cell receptor CD3ζ2, CD3ζ-η, and CD3η2 isoforms, PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCE OF THE UNITED STATES OF AMERICA, 1991, V. 88, N. 9, p.3842-3846. TAYLOR D. D. et al. T-cell apoptosis and suppression of T-cell receptor/CD3-zeta by Fas ligand-containing membrane vesicles shed from ovarian tumors, CLINICAL CANCER RESEARCH, 2003, V. 9, N. 14, p.5113-5119. * |
| КУЛУМЗИН С. В. и др.,Основы дизайна химерных антигенных рецепторов, ACTA NATURAE, * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2017146641A (ru) | 2019-06-28 |
| RU2017146641A3 (ru) | 2019-07-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7264954B2 (ja) | Ｈｅｒ２を標的とするキメラ抗原受容体 | |
| US11160833B2 (en) | Bispecific OR-gate chimeric antigen receptor responsive to CD19 and CD20 | |
| JP7320560B2 (ja) | 治療免疫細胞の有効性を改良するための方法 | |
| AU2018204209B2 (en) | Method and compositions for cellular immunotherapy | |
| JP7053053B2 (ja) | 初代細胞のためのトランスポゾンに基づく転移システム | |
| EP3169703B1 (en) | Chimeric antigen receptor and its use | |
| US20160303230A1 (en) | Chimeric antigen receptor for bispecific activation and targeting of t lymphocytes | |
| US11472860B2 (en) | Chimeric antigen receptors | |
| US11970545B2 (en) | T cell-antigen coupler with Y182T mutation and methods of uses thereof | |
| KR102316091B1 (ko) | Bcma를 표적으로 하는 키메라 항원 수용체 및 이의 용도 | |
| CN116829194A (zh) | 用于工程化细胞疗法的靶向细胞因子构建体 | |
| CN104745596B (zh) | 靶向肝癌细胞的细胞制备物 | |
| RU2707535C2 (ru) | Генетическая конструкция, кодирующая структуру т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных vhh-антител, специфичных опухолевому рецептору cd47, для нацеленной иммунотерапии злокачественных новообразований | |
| WO2023023467A1 (en) | Nucleic acid molecules and methods of using the same | |
| CN105802975B (zh) | 靶向her2阳性肿瘤的细胞制备物及其用途 | |
| JP2022548468A (ja) | Ｃａｒ－ｃｄ１２３ベクター及びその使用 | |
| KR20240034205A (ko) | 항EGFRviii 항체, 폴리펩타이드, 상기 폴리펩타이드를 발현하는 세포, 상기 세포를 포함하는 의약 조성물, 상기 세포의 제조 방법 및 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 염기서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터 | |
| KR20240035506A (ko) | 키메라 항원 수용체, 상기 수용체를 발현하는 세포, 상기 세포를 포함하는 의약 조성물, 상기 세포의 제조 방법, 및 상기 키메라 항원 수용체를 코딩하는 염기서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터 | |
| JP2023527462A (ja) | Ｃｄ２２に特異的な抗体およびその使用 | |
| JP2023527621A (ja) | 哺乳類におけるキメラ抗原受容体媒介性免疫応答を刺激するための方法における使用のための、ｐｄ－ｌ１および／またはｐｄ－ｌ２を含む標的化モジュール | |
| CN117683136A (zh) | 嵌合抗原受体、慢病毒、修饰nk细胞及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20210628 Effective date: 20210628 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20210928 Effective date: 20210928 |