RU2700450C1 - Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) - Google Patents
Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2700450C1 RU2700450C1 RU2018134804A RU2018134804A RU2700450C1 RU 2700450 C1 RU2700450 C1 RU 2700450C1 RU 2018134804 A RU2018134804 A RU 2018134804A RU 2018134804 A RU2018134804 A RU 2018134804A RU 2700450 C1 RU2700450 C1 RU 2700450C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- genome
- dna
- provirus
- control sample
- fragment
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест-систему для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV), включающую пластиковые флаконы и пробирки, термостабильный фермент Tag-полимеразу, буфер для постановки реакции, смесь четырех дезоксинуклеотидтрифосфатов, внутренний контрольный образец, положительный контрольный образец - рекомбинантную плазмиду, содержащую фрагмент генома ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота, синтетические олигонуклеотидные праймеры и зонды меченные красителями, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца - смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота и фрагмент генома бактериофага Т4, взятых в соотношении 1:1. Изобретение позволяет достоверно диагностировать геном провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) с целью выявления лейкоза на ранней стадии. 2 ил., 4 табл.
Description
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к лабораторной диагностике возбудителей инфекционных заболеваний, а именно к средствам диагностики инфекции у животных, как в практике ветеринарной службы, так и для научных исследований.
Известен набор реагентов для выявления вируса лейкоза КРС по нуклеотидным последовательностям консервативных областей вирусного генома с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени (патент РФ №2521330, кл. C12Q 1/68, G01N 33/569, 2013 г.), включающий термостабильный фермент Tag-полимеразу, буфер для постановки реакции, смесь четырех дезоксинуклеотидтрифосфатов, внутренний контрольный образец, положительный контрольный образец - рекомбинантную плазмиду, содержащую фрагмент генома ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота, синтетические олигонуклеотидные праймеры и зонды меченные соответствующими флуоресцентными красителями, для специфического сигнала и сигнала внутреннего контрольного образца.
Также известен тест-система для диагностики лейкоза крупного рогатого скота, включающий пластиковые флаконы и пробирки, термостабильный фермент Tag-полимеразу, буфер для постановки реакции, смесь четырех дезоксинуклеотидтрифосфатов, внутренний контрольный образец, положительный контрольный образец - рекомбинантную плазмиду, содержащую фрагмент генома ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота, синтетические олигонуклеотидные праймеры и зонды меченные красителями, (патент РФ №2445370, кл. C12Q 1/68, G01N 33/569, 2012 г. - прототип). С помощью этого тест-системы проводят электрофоретическое определение размера амплифицируемого фрагмента нуклеотидной последовательности.
Однако известный тест- система используется для способа, в котором нуклеотидные последовательности непосредственно читаются по электрофореграмме. Длина фрагментов, которых может быть расшифрована этим методом, ограничивается разрешающей способностью метода гель-электрофореза.
Общим недостатком известных технических решений является отсутствие возможности получения достоверной диагностики выявления генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) с целью выявления лейкоза на ранней стадии.
Техническим результатом заявляемого технического решения является получение достоверной диагностики выявления генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) с целью выявления лейкоза на ранней стадии.
Технический результат достигается тем, что в тест-системе для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV), включающем пластиковые флаконы и пробирки, термостабильный фермент Tag-полимеразу, буфер для постановки реакции, смесь четырех дезоксинуклеотидтрифосфатов, внутренний контрольный образец, положительный контрольный образец - рекомбинантную плазмиду, содержащую фрагмент генома ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота, синтетические олигонуклеотидные праймеры и зонды меченные красителями, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца - смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота и фрагмент генома бактериофага Т4, взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:
Новизна заявляемого технического решения заключается в том, что для получения достоверной диагностики генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) проводят реакцию в одной ПЦР-пробирке (one-tube) с использованием специфичных для участка генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) олигонуклеотидных праймеров флуоресцентно-меченного зонда и разных видов контроля, для которых используют различные формы материала бактериофага Т4: суспензия и фрагмент генома со специфическими к нему праймерами и зондом. Такая постановка ПЦР в реальном времени сокращает и упрощает процедуру анализа, снижает риск контаминации. Кроме того, флуоресцентная детекция продуктов амплификации осуществляется с использованием принципа выщепления флуоресцентной метки на 5 конце олигонуклеотидного зонда.
Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».
Заявляемый тест-система рекомендовано использовать в ветеринарной вирусологии, так как относится к средствам диагностики генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV), что соответствует критерию «промышленная применимость».
Сущность изобретения поясняется чертежами, где представлены скриншоты графиков, на фиг. 1 - представлен канал F AM/Green - для тестирования сигнала от внутреннего контрольного образца - ВКО; на фиг. 2 канал JOE(HEX)/Yellow накопление флуоресцентного сигнала для специфического сигнала тестирования наличия генома (Bovine leukosis virus, BLV).
Пример конкретного использования тест-системы для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV).
Для диагностики используют тест-систему в виде набора реагентов в соответствии инструкцией по применению набора реагентов «ПЦР-ЛЕЙКО3-КРС-ФАКТОР» для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени ТУ 21.10.60-118-51062356-2016, для диагностики in vitro, (http://www.vetfaktor.ru/.).
Набор состоит из комплекта реагентов для проведения мультиплексной ПЦР РВ (комплект №1) и комплекта контрольных образцов (комплект №2).
Состав набора приведен в таблицах 1 и 2.
* Возможна легкая опалесценция
В набор не входят реактивы для экстракции нуклеиновых кислот. Выделение ДНК может проводиться, например, с помощью наборов на основе сорбционного метода, в состав которых входит силика или микроцентрифужные колонки, и также наборов на основе фенол-хлороформной экстракции и т.п. Рекомендуется использовать набор «ДНК/РНК-С-ФАКТОР» либо аналогичный.
Предварительно сорбционным методом выделяют из биологического материала, геном провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV), взятый от животных.
Далее для постановки одноэтапной полимеразной цепной реакции - с одновременным проведением не более 40 циклов амплификации с флуоресцентной детекцией используют тест-систему содержащий специфичные для участка генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) олигонуклеотидные праймеры, зонды, флуоресцентные красители и контрольные образцы в виде внутреннего и положительного. Для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, если концентрация копий нуклеотидных последовательностей отклоняется в большую или меньшую сторону, то наблюдаются повторности сомнительных образцов. Для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и фрагмент генома бактериофага Т4 взятых в соотношении 1:1, если соотношение фрагментов отклоняется в большую или меньшую сторону, то также наблюдаются повторности сомнительных образцов
Фрагмент генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и фрагмент генома бактериофага Т4 представлены следующими нуклеотидными последовательностями:
Использование для разных видов контроля различные формы материала бактериофага Т4: суспензии и фрагмента генома со специфическими к нему праймерами и зондом обусловлено тем, что это позволяет контролировать корректное прохождение реакции в каждой пробирки, а также контролируется этап выделения ДНК из образцов.
Выбор последовательности и расчет первичной структуры олигонуклеотидных праймеров и зондов.
Праймеры, специфичные для ДНК Bovine leukosis virus были отобраны на основе консервативного участка гена "pol" (Bovine leukemia virus complete genome, AF033818.1) и спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems). С помощью BLAST праймеры были проверены на отсутствие гомологии с последовательностями других вирусов и генома человека. Термодинамический анализ выбранных праймеров был выполнен с помощью Vector NTI. Расчетная длина специфического фрагмента составила 98 пар нуклеотидов.
Для детекции продуктов амплификации был подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд TMBLV-P (комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров TMBLV-F и TMBLV-R). Зонд был помечен красителем R6G. Для гашения самопроизвольной флуоресценции на 3'-конце олигонуклеотидного зонда прикреплен гаситель BHQ-1. Основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР были описаны с помощью программы "Oligo 6.0".
В качестве внутреннего контрольного образца использовался бактериофаг Т4, имеющий геномную ДНК порядка 169 - 170 тысяч пар нуклеотидов (Enterobacteria phage Т4Т, complete genome GenBank: HM137666.1). В результате анализа был выбран участок между 400 и 500 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотидные последовательности, рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Праймеры были спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems) и исследованы с использованием BLAST, чтобы подтвердить их специфичность.
Пример использования тест-системы. Для исследования используют цельную кровь. Исследования проводили для взрослых особей и телят старше 14-ти дневного возраста. Кровь отбирали из яремной или хвостовой вены в стерильные пробирки с 3% раствором ЭДТА из расчета 10:1.
Для взятия крови используют одноразовые системы.
Пробы цельной крови с ЭДТА использовали для экстракции ДНК без предварительной подготовки.
Анализ исследуемых проб с использованием тест-системы состоял из трех этапов:
- экстракция нуклеиновых кислот (НК);
- проведение ПЦР РВ;
- учет результатов анализа.
Экстракцию (выделение) НК из исследуемых проб проводили следующим образом. Отбирают необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл, включая отрицательный контроль выделения. Вносят во все пробирки с исследуемыми образцами, включая пробирку для отрицательного контрольного образца (ОКО) по 10 мкл внутреннего контрольного образца (ВКО) BLV.
Вносят исследуемые пробы в объеме согласно инструкции к набору для выделения НК, в пробирку отрицательного контроля выделения (ВК-) вместо исследуемой пробы вносят ОКО, в качестве которого используют деионизированную воду (пробирку обозначить как ВК-).
Подготовка образцов к проведению ПЦР проводят следующим образом.
Для проведения ПЦР общий объем реакционной смеси должен составлять 25 мкл, а объем ДНК-пробы - 10 мкл. Успешное прохождение реакции контролировали путем использования положительного контрольного образца (ПКО) BLV, ВКО BLV и ДНК буфера, где для внутреннего контрольного образца (ВКО) использовали суспензию бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца (ПКО) использовали смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и фрагмент генома бактериофага Т4, взятых в соотношении 1:1, по 5000 копий специфического фрагмента в 10 мкл (в соотношении 1:1).
В отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию ПЦР:
5 мкл ПЦР СМЕСЬ BLV;
10 мкл смеси ПЦР БУФЕР BLV;
0,5 мкл TAQ POLYMERASE
Перемешивают смесь на вортексе и сбрасывают капли кратковременным центрифугированием.
Отбирают необходимое количество пробирок для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб. Вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.
Используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки вносят:
а) в пробирку отрицательного контроля ПЦР (К-) 10 мкл ДНК буфера;
б) в ряд пробирок для исследуемых проб - в каждую внести по 10 мкл ДНК соответствующей пробы, полученной по п. 7.1 (включая пробу ВК-);
в) в пробирку с положительным контролем ПЦР (К+) 10 мкл ПКО BLV.
Далее проводят ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией с помощью прибора «Rotor-Gene Q».
Помещают подготовленные для проведения ПЦР пробирки в ячейки амплификатора и программируют прибор согласно инструкции производителя.
После завершения программы амплификации отработанные пробирки утилизируют в соответствии с МУ 1.3. 2569 -09. и проводят интерпретацию результатов анализа.
Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируют с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в режиме «реального времени» в соответствии с инструкцией производителя к прибору.
Учет результатов ПЦР-анализа проводится по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца).
Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции ДНК в соответствии с таблицей 4.
Появление любого значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на канале JOE(HEX)/Yellow (фиг. 2) и для отрицательного контроля этапа ПЦР К- на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.
Образцы, для которых по каналу FAM/Green (фиг. 1) значение Ct отсутствует или превышает 32 цикл (и при этом по каналу JOE(HEX)/Yellow отсутствует значение Ct) требуют повторного проведения исследования с этапа ПЦР. Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов на канале FAM/Green указывает на присутствие ингибиторов в пробе (ах) или на ошибки при экстракции ДНК или при постановке реакции.
Требуется провести исследование, начиная с этапа экстракции ДНК.
Образец считается положительным (ДНК провируса лейкоза КРС присутствует) если наблюдается экспоненциальный рост сигнала на канале JOE(HEX)/Yellow (фиг. 2), при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (табл. 4). Если для исследуемого образца по каналу JOE(HEX)/Yellow значение Ct определяется позднее 32 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей - он считается спорным и исследуется повторно с этапа выделения НК. Если при повторной постановке наблюдается схожий результат (Ct на канале JOE(HEX)/Yellow более 32), требуется повторное взятие материала от того же животного для проведения ПЦР-исследования и (или) использование альтернативных методов диагностики.
В случае получения значения Ct на канале JOE(HEX)/Yellow менее 32 при исследовании повторно взятого от животного материала - образец считать положительным.
Образец считается отрицательным (ДНК провируса лейкоза КРС отсутствует) если не наблюдается рост сигнала флуоресценции на канале JOE(HEX)/Yellow, при этом значения Ct по каналу FAM/Green и Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (Табл. 4, фиг. 1, 2).
Для доказательства эффективности использования тест-системы для ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени проводился сравнительный анализ чувствительности заявляемого с прототипом, в котором использовался метод ПЦР с электрофоретической детекцией. В результате исследований чувствительность ПЦР с флуоресцентной детекцией при обнаружении ДНК провируса лейкоза КРС на 4,2-5% выше, чем ПЦР с электрофоретической детекцией.
Claims (7)
- Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV), включающая пластиковые флаконы и пробирки, термостабильный фермент Tag-полимеразу, буфер для постановки реакции, смесь четырех дезоксинуклеотидтрифосфатов, внутренний контрольный образец, положительный контрольный образец - рекомбинантную плазмиду, содержащую фрагмент генома ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота, синтетические олигонуклеотидные праймеры и зонды меченные красителями, отличающаяся тем, что для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца - смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота и фрагмент генома бактериофага Т4, взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:
- TMBLV-F CCTACTTTCAGACCCCCTTGAC прямой праймер
- TMBLV-R CATAAGAGCTTAAGGCCTGAG обратный праймер
- TMBLV-P R6G CCAAGCCTCACCTTGGGGCCTCCT BHQ1 зонд
- T4F TACATATAAATCACGCAAAGC
- T4R TAGTATGGCTAATCTTATTGG
- Т4Р FAM ACATTGGCACTGACCGAGTTC BHQ1 зонд.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018134804A RU2700450C1 (ru) | 2018-10-01 | 2018-10-01 | Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018134804A RU2700450C1 (ru) | 2018-10-01 | 2018-10-01 | Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2700450C1 true RU2700450C1 (ru) | 2019-09-17 |
Family
ID=67989569
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018134804A RU2700450C1 (ru) | 2018-10-01 | 2018-10-01 | Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2700450C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2782573C1 (ru) * | 2022-02-07 | 2022-10-31 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2445370C1 (ru) * | 2010-10-28 | 2012-03-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) | Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции |
| RU2521330C2 (ru) * | 2012-06-15 | 2014-06-27 | Государственное научное учреждение Центр экспериментальной эмбриологии и репродуктивных биотехнологий Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ЦЭЭРБ Россельхозакадемии) | Способ выявления вируса лейкоза крс по нуклеотидным последовательностям консервативных областей вирусного генома |
-
2018
- 2018-10-01 RU RU2018134804A patent/RU2700450C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2445370C1 (ru) * | 2010-10-28 | 2012-03-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) | Способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции |
| RU2521330C2 (ru) * | 2012-06-15 | 2014-06-27 | Государственное научное учреждение Центр экспериментальной эмбриологии и репродуктивных биотехнологий Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ЦЭЭРБ Россельхозакадемии) | Способ выявления вируса лейкоза крс по нуклеотидным последовательностям консервативных областей вирусного генома |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2785381C1 (ru) * | 2021-12-24 | 2022-12-07 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Тест-система для выявления ДНК возбудителя криптоспоридиоза (Cryptosporidiosis) в биологическом материале животных и кормах с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |
| RU2782573C1 (ru) * | 2022-02-07 | 2022-10-31 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2680094C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК возбудителя лептоспироза (Leptospira spp.) у сельскохозяйственных животных | |
| RU2700480C1 (ru) | Тест-система для определения видовой принадлежности тканей кур и свиней в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах | |
| RU2694713C1 (ru) | Способ идентификации видовой принадлежности баранины и говядины в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах | |
| RU2727054C1 (ru) | Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции | |
| RU2681473C1 (ru) | Тест-система для обнаружения генома вируса парагриппа 3 типа у крупного рогатого скота с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени | |
| RU2694558C1 (ru) | Способ выявления генома возбудителя коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота | |
| RU2710065C1 (ru) | Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления ДНК вируса АЧС методом петлевой изотермической амплификации | |
| RU2700450C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) | |
| RU2700245C1 (ru) | Способ выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) | |
| RU2726242C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК вируса нодулярного дерматита (LSDV) в биологическом материале животных с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| RU2700449C1 (ru) | Способ выявления ДНК вируса ринотрахеита (bovine herpes virus 1, BoHV-1) у крупного рогатого скота | |
| RU2700254C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК вируса ринотрахеита (bovine herpes virus 1, BoHV-1) у крупного рогатого скота | |
| RU2700479C1 (ru) | Способ определения видовой принадлежности тканей кур и свиней в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах | |
| RU2689718C1 (ru) | Способ выявления генома возбудителя ротовирусной инфекции у сельскохозяйственных животных | |
| RU2694501C1 (ru) | Тест-система для обнаружения генома возбудителя ротовируса типа А у сельскохозяйственных животных с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени | |
| RU2694499C1 (ru) | Тест-система для обнаружения генома возбудителя коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени | |
| RU2700255C1 (ru) | Тест-система для выявления генома возбудителя бруцеллезной инфекции (Brucella spp.) у сельскохозяйственных животных | |
| RU2700448C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК возбудителя орнитоза (Chlamydophila psittaci) у птиц | |
| RU2696306C1 (ru) | Способ выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных | |
| RU2694719C1 (ru) | Тест-система для выявления РНК вируса болезни Шмалленберга у сельскохозяйственных животных | |
| RU2794654C1 (ru) | Способ выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| RU2700247C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК сальмонелл (Salmonella spp.) в биологическом материале животных, продуктах питания и кормах животного и растительного происхождения | |
| RU2703400C1 (ru) | Способ выявления генома возбудителя бруцеллезной инфекции (Brucella spp.) у сельскохозяйственных животных | |
| RU2782573C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| RU2700477C1 (ru) | Тест-система для обнаружения генома возбудителя ДНК Bordetella bronchiseptica инфекции у сельскохозяйственных животных |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201002 |