RU2700109C1 - Method for radionuclidean diagnostics of secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with overexpression of her2/neu using recombinant address molecules darpin9_29 - Google Patents

Method for radionuclidean diagnostics of secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with overexpression of her2/neu using recombinant address molecules darpin9_29 Download PDF

Info

Publication number
RU2700109C1
RU2700109C1 RU2019101463A RU2019101463A RU2700109C1 RU 2700109 C1 RU2700109 C1 RU 2700109C1 RU 2019101463 A RU2019101463 A RU 2019101463A RU 2019101463 A RU2019101463 A RU 2019101463A RU 2700109 C1 RU2700109 C1 RU 2700109C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
darpin9
technetium
molecules
her2
breast cancer
Prior art date
Application number
RU2019101463A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Ольга Дмитриевна Брагина
Владимир Иванович Чернов
Роман Владимирович Зельчан
Анна Александровна Медведева
Иван Геннадьевич Синилкин
Владимир Максимилианович Толмачев
Анжелика Григорьевна Воробьева
Сергей Михайлович Деев
Галина Михайловна Прошкина
Алексей Анатольевич Шульга
Мария Сергеевна Ларькина
Екатерина Александровна Дудникова
Виктор Евгеньевич Гольдберг
Евгений Лхамацыренович Чойнзонов
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук ("Томский НИМЦ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук ("Томский НИМЦ") filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук ("Томский НИМЦ")
Priority to RU2019101463A priority Critical patent/RU2700109C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2700109C1 publication Critical patent/RU2700109C1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B6/00—Apparatus for radiation diagnosis, e.g. combined with radiation therapy equipment
    • A61B6/02—Devices for diagnosis sequentially in different planes; Stereoscopic radiation diagnosis
    • A61B6/03—Computerised tomographs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to oncology and radionuclide diagnostics, and can be used for radionuclide diagnostics of secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with Her2/neu overexpression using recombinant address molecules DARPin9_29. Injection form of the radiopharmaceutical is introduced on the basis of technetium-99m labeled recombinant address molecules DARPin9_29, which is prepared immediately before administration. For this purpose in aseptic conditions 1 ml of eluate 99mTcO4- 7 GBq by means of syringe is added to set for preparation of tricarbonyl technetium and incubated at temperature 100 °C for 30 minutes. After incubation, 1,000 mcl of technetium tricarbonyl is added to 334 mcl of DARPin9_29 at a concentration of the basic substance solution of 3.6 mg/l and incubated at temperature of 40 °C for 60 minutes. Further, the obtained compound is purified from protein impurities and non-technetium-bound DARPin9_29 molecules by means of cleaning columns. Preparation produced after cleansing in dose of 500 MBK is diluted in 10 ml of normal saline and slowly introduced into the patient through a sterilizing filter. In 4 hours after administration of the preparation, a single-photon emission computed tomography is performed on a two-detector gamma camera. Obtained results are evaluated and the malignant tumor is diagnosed when visualizing the RFP fixation in the mammary gland tissues.
EFFECT: higher specificity and informativity and availability of a diagnostic technique for a secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with Her2/neu overexpression.
1 cl, 1 dwg, 1 ex

Description

Изобретение относится к медицине, онкологии, в частности, к радионуклидной диагностике и может быть использовано для диагностики вторичной отечно-инфильтративной формы рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu.The invention relates to medicine, oncology, in particular, to radionuclide diagnostics and can be used to diagnose a secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with overexpression of Her2 / neu.

Несмотря на большое количество известных к настоящему моменту молекулярных мишеней большое внимание по-прежнему уделяется одному из представителей семейства рецепторов эпидермального роста EGFR - Her2/neu, наличие экспрессии которого выявляется на поверхности опухолевых клеток при раке легкого, яичников, желудка, простаты и пр [Slamon D.J., Clark G.M., Wong S.G. Levin W.J., Ullrich A., McGuire W.L. Human breast cancer: correlation of relapse a survival with amplification of the Her-2/neu oncogenes. Science. 1987; 235: 177-182]. Особое место среди злокачественных новообразований занимает рак молочной железы (РМЖ) гиперэкспрессия и/или амплификация гена Her2 клетками при котором относится к одному из неблагоприятных прогностических факторов, обуславливающих агрессивное течение опухолевого процесса, а также низкие показатели общей и безрецидивной выживаемости [Romond Е.Н., Perez Е.А., Bryant J., et.al. Trastuzumab plus adjuvant chemotherapy for operable HER2-positive breast cancer. N. Engl. J. Med. 2005; 353: 1673-1684]. По данным различных исследований частота вновь выявленных случаев инвазивного РМЖ с гиперэкспрессией Her2/neu составляет 15-25%, и чаще всего этот показатель возрастает у пациенток с высокой степенью злокачественности и с метастатическим поражением регионарных лимфатических узлов.Despite the large number of molecular targets currently known, much attention is still paid to one of the representatives of the EGFR epidermal growth receptor family, Her2 / neu, whose expression is detected on the surface of tumor cells in cancer of the lung, ovary, stomach, prostate, etc. [Slamon DJ, Clark GM, Wong SG Levin W.J., Ullrich A., McGuire W.L. Human breast cancer: correlation of relapse a survival with amplification of the Her-2 / neu oncogenes. Science. 1987; 235: 177-182]. A special place among malignant neoplasms is breast cancer (BC), over-expression and / or amplification of the Her2 gene by cells, which refers to one of the unfavorable prognostic factors that determine the aggressive course of the tumor process, as well as low rates of overall and disease-free survival [Romond E.N. , Perez E.A., Bryant J., et.al. Trastuzumab plus adjuvant chemotherapy for operable HER2-positive breast cancer. N. Engl. J. Med. 2005; 353: 1673-1684]. According to various studies, the frequency of newly detected cases of invasive breast cancer with Her2 / neu overexpression is 15-25%, and most often this indicator increases in patients with a high degree of malignancy and with metastatic lesion of the regional lymph nodes.

В настоящее время для определения статуса Her2/neu активно применяются несколько методик: иммуногистохимическое исследование (ИГХ), флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) и хромогенная гибридизация in situ (CISH) [Zahid M., Khan S., Khan R. Detection of Her2/neu gene amplification by fluoroscence in situ hybridization technique. Pathology. 2016; 48 (1): 163-170]. Однако, область применения известных способов ограничена. При несомненных достоинствах используемых методов они имеют ряд существенных недостатков, к которым можно отнести невозможность проведения in vivo исследования для оценки распространенности опухолевого процесса (первичный опухолевый узел, состояние регионарных лимфатических узлов, оценка отдаленных органов и тканей) [Orlando L., Viale G., Bria E. Lutrino E.S., Sperduti I, Carbognin L., Schiavone P., Quaranta A., Fedele P., Caliolo C, Calvani N., Criscuolo M., Cinieri S. Discordance in pathology report after central pathology review: Implications for breast cancer adjuvant treatment. Breast. 2016; 30: 151-155], гетерогенность опухоли, а также недоступность материально-технического оснащения в большинстве лабораторий на территории Российской Федерации [Telugu R.B., Chowhan А.K., Rukmangadha N., Patnayak R., Phaneendra B.V., Prasad B.C., Reddy M.K. Human epidermal growth factor receptor 2/neu protein expression in meningiomas: An immunohistochemical study. J. Neurosci Rural Pract. 2016; 7 (4): 526-531].Currently, several methods are actively used to determine the status of Her2 / neu: immunohistochemical studies (IHC), fluorescence in situ hybridization (FISH) and chromogenic in situ hybridization (CISH) [Zahid M., Khan S., Khan R. Detection of Her2 / neu gene amplification by fluoroscence in situ hybridization technique. Pathology. 2016; 48 (1): 163-170]. However, the scope of known methods is limited. With the undoubted advantages of the methods used, they have a number of significant drawbacks, which include the inability to conduct in vivo studies to assess the prevalence of the tumor process (primary tumor node, the state of regional lymph nodes, evaluation of distant organs and tissues) [Orlando L., Viale G., Bria E. Lutrino ES, Sperduti I, Carbognin L., Schiavone P., Quaranta A., Fedele P., Caliolo C, Calvani N., Criscuolo M., Cinieri S. Discordance in pathology report after central pathology review: Implications for breast cancer adjuvant treatment. Breast. 2016; 30: 151-155], tumor heterogeneity, and the inaccessibility of material and technical equipment in most laboratories in the Russian Federation [Telugu R.B., Chowhan A.K., Rukmangadha N., Patnayak R., Phaneendra B.V., Prasad B.C., Reddy M.K. Human epidermal growth factor receptor 2 / neu protein expression in meningiomas: An immunohistochemical study. J. Neurosci Rural Pract. 2016; 7 (4): 526-531].

Одним из направлений молекулярной визуализации является использование неинвазивных радионуклидных методов [Чернов В.И., Медведева А.А., Синилкин И.Г., Зельчан Р.В., Братина О.Д., Чойнзонов Е.Л. Ядерная медицина в диагностике и адресной терапии злокачественных новообразований. Бюллетень сибирской медицины. 2018; 17 (1): 220-231]. Для таргетной доставки радионуклида необходимо использование структуры, обладающее высокой аффинностью, специфичностью связывания непосредственно с мишенью, локализующейся как в нормальных, так и в патологически измененных тканях, низкой иммуногенностью, и более того, высокой стабильностью, проявляющейся способностью к противостоянию с различными химическими средами в процессе мечения [Stumpp М.Т., Binz Н.К., Amstutz P. DARPins: A new generation of protein therapeutics. Drug Discovery Today. 2008; 13 (15): 695-701]. Более того, в процессе медицинской визуализации высокоаффинные направленные молекулы должны быстро находить мишень в организме пациента, несвязанные компоненты быстро удаляться их организма, таким образом, облегчая визуализацию опухоли и сокращая время между введением препарата и обследованием [Tolmachev V., Orlova A., Andersson K. Methods for radiolabelling of monoclonal antibodies. Methods Mol Biol. 2014; 1060: 309-30]. В последнее время активно изучается новый класс связывающих белков, получивший название «альтернативные каркасные белки», одним из представителей которого являются DARPin (Design Ankyrin Repeat Protein), отвечающие всем необходимым требованиям для создания эффективного радиохимического соединения [

Figure 00000001
A. Designed ankyrin repeat proteins (DARPins): binding proteins for research, diagnostics, and therapy. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2015; 55: 489-511].One of the directions of molecular visualization is the use of non-invasive radionuclide methods [Chernov V.I., Medvedeva A.A., Sinilkin I.G., Zelchan R.V., Bratina O.D., Choynzonov E.L. Nuclear medicine in the diagnosis and targeted therapy of malignant neoplasms. Bulletin of Siberian medicine. 2018; 17 (1): 220-231]. For targeted delivery of a radionuclide, it is necessary to use a structure with high affinity, specificity of binding directly to the target, localized in both normal and pathologically altered tissues, low immunogenicity, and, moreover, high stability, manifested by the ability to withstand various chemical media in the process tagging [Stumpp M.T., Binz N.K., Amstutz P. DARPins: A new generation of protein therapeutics. Drug Discovery Today. 2008; 13 (15): 695-701]. Moreover, in the process of medical imaging, high-affinity directed molecules must quickly find the target in the patient’s body, unbound components are quickly removed by their body, thereby facilitating the visualization of the tumor and reducing the time between drug administration and examination [Tolmachev V., Orlova A., Andersson K Methods for radiolabelling of monoclonal antibodies. Methods Mol Biol. 2014; 1060: 309-30]. Recently, a new class of binding proteins has been actively studied, called “alternative framework proteins”, one of which is DARPin (Design Ankyrin Repeat Protein), which meets all the necessary requirements for creating an effective radiochemical compound [
Figure 00000001
A. Designed ankyrin repeat proteins (DARPins): binding proteins for research, diagnostics, and therapy. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2015; 55: 489-511].

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики с использованием меченных индием-111 альтернативных каркасных белков аффибоди (111In-ABY-025). Применяемый в известном способе радиофармацевтический препарат является специфическим и фиксируется на поверхности мембран опухолевых клеток, экспрессирующих Her2/neu, что позволяет их визуализировать как основной опухолевый узел, так и метастатические очаги [Sorensen J., Sandberg D., Sandstrom M, et.al. First-in-Human Molecular Imaging of HER2 Expression in Breast Cancer Metastases Using the 111In-ABY-025 Affibody Molecule // Tee Journal of Nuclear Medicine. 2014. Vol. 55 (5). P. 730-735]. Основным недостатком данного метода являются недостаточно оптитмальные радиологические характеристики препарата, связанные с длительным периодом полураспада (T1/2=2,8 сут) и следовательно высокой дозой облучения на обследуемого, высокой стоимостью циклотронного производства, а также наличием в его спектре облучения высокоэнергетических гамма-квантов, препятствующих получению качественных сцинтиграфических изображений. Существенным недостатком также является недоступность получения аффибоди на территории Российской Федерации.Closest to the proposed is a diagnostic method using indium-111-labeled alternative affibody framework proteins ( 111 In-ABY-025). The radiopharmaceutical used in the known method is specific and is fixed on the surface of the membranes of tumor cells expressing Her2 / neu, which allows them to visualize both the main tumor node and metastatic foci [Sorensen J., Sandberg D., Sandstrom M, et.al. First-in-Human Molecular Imaging of HER2 Expression in Breast Cancer Metastases Using the 111 In-ABY-025 Affibody Molecule // Tee Journal of Nuclear Medicine. 2014. Vol. 55 (5). P. 730-735]. The main disadvantage of this method is the insufficiently optimal radiological characteristics of the drug associated with a long half-life (T 1/2 = 2.8 days) and, consequently, a high dose of radiation for the subject, high cost of cyclotron production, and the presence of high-energy gamma radiation in its spectrum. quanta that impede the acquisition of high-quality scintigraphic images. A significant drawback is the inaccessibility of obtaining affibody in the Russian Federation.

Новый технический результат - повышение специфичности и информативности и доступности способа диагностики вторичной отечно-инфильтративной формы рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu.A new technical result is an increase in the specificity and information content and accessibility of a method for diagnosing a secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with Her2 / neu overexpression.

Для достижения нового технического результата в способе радионуклидной диагностики вторичной отечно-инфильтративной формы рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu с использованием рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29, включающем введение радиофармпрепарата (РФП) и выполнение сцинтиграфических исследований, вводят инъекционную форму радиофармпрепарата на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29, который изготавливают непосредственно перед введением, для чего в асептических условиях 1 мл элюата 99mTcO4- 7 ГБк с помощью шприца добавляют в набор для приготовления трикарбонильного технеция и инкубируют при температуре 100°С в течение 30 минут, после инкубации 1000 мкл трикарбонила технеция добавляют к 334 мкл DARPin9_29 при концентрации раствора основного вещества 3,6 мг/л и инкубируют при температуре 40°С в течение 60 минут, далее выполняют очистку полученного соединения от белковых примесей и несвязавшихся с технецием молекул DARPin9_29 с помощью очистительных колонок, полученный после очищения препарат в дозе 500 МБК разбавляют в 10 мл физиологического раствора и через стерилизующий фильтр медленно вводят пациенту, через 4 часа после введения препарата пациенту выполняют однофотонную эмиссионную компьютерную томографию на двухдетекторной гамма-камере, оценивают полученные результаты и при визуализации участков гиперфиксации РФП в ткани молочных желез диагностируют злокачественную опухоль.To achieve a new technical result in the method of radionuclide diagnostics of the secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with Her2 / neu overexpression using recombinant targeted molecules DARPin9_29, including the introduction of a radiopharmaceutical (RPS) and scintigraphic studies, an injection form of radiopharmaceutical-based drug 99 is introduced recombinant targeted molecules DARPin9_29, which is made immediately before administration, for which, under aseptic conditions, 1 ml of 99m TcO 4 eluate - 7 GBq with a syringe are added to the set for the preparation of tricarbonyl technetium and incubated at 100 ° C for 30 minutes, after incubation, 1000 μl of tricarbonyl technetium is added to 334 μl of DARPin9_29 at a concentration of a solution of the basic substance of 3.6 mg / l and incubated at at a temperature of 40 ° C for 60 minutes, then the obtained compound is purified from protein impurities and DARPin9_29 molecules not bound to technetium using cleaning columns; after purification, the preparation at a dose of 500 MBK is diluted in 10 ml of physiological solution Twor and through a sterilizing filter, it is slowly administered to the patient, 4 hours after the administration of the drug, the patient undergoes single-photon emission computed tomography on a two-detector gamma camera, the results are evaluated, and when visualizing RFP hyperfixation sites in the mammary gland tissue, a malignant tumor is diagnosed.

Способ осуществляют следующим образом, радиофармацевтический препарат готовят непосредственно перед введением: в набор «CRS Isolink» (Center for Radiopharmaceutical Science, Paul Scherrer Institute, Villigen, Швейцария) для приготовления трикарбонила технеция [99mTc(СО)3(H2O)3]+ добавляют 1 мл (7 ГБк) элюата 99mTcO4- и инкубируют в течение 30 минут при температуре 100°С. После инкубации 1 мл трикарбонила технеция добавляют к 334 мкл (1200 мкг) DARPin9_29 при концентрации раствора основного вещества 3,6 мг/л и инкубируют при температуре 40°С в течение 60 минут (согласно лабораторному регламенту получения РФП ЛР-02069303-0217 от 03.02.2017 г). В дальнейшем выполняют очистку полученного соединения от белковых примесей и несвязавшихся с технецием молекул DARPin9_29 с использованием очистительных колонок NAP-5 (GE Healthcare, Швеция). Радиохимические выход и чистоту определяют с помощью тонкослойной радиохроматографии (ТСРХ). Анализ хроматограмм проводят с использованием хроматографа Hitachi Chromaster HPLC systems с радиоактивным детектором. Полученный после очищения препарат в дозе 500 МБК разбавляют в 10 мл физиологического раствора и через стерилизующий фильтр медленно вводят пациенту. Через 4 часа после введения препарата пациенту выполняют однофотонную эмиссионную компьютерную томографию на двухдетекторной гамма-камере и оценивают полученные результаты и при визуализации участков гиперфиксации РФП в ткани молочных желез диагностируют злокачественную опухоль.The method is as follows, the radiopharmaceutical preparation is prepared immediately before administration: to the CRS Isolink kit (Center for Radiopharmaceutical Science, Paul Scherrer Institute, Villigen, Switzerland) for the preparation of technetium tricarbonyl [ 99m Tc (CO) 3 (H 2 O) 3 ] + add 1 ml (7 GBq) of 99m TcO 4 - eluate and incubate for 30 minutes at 100 ° C. After incubation, 1 ml of technetium tricarbonyl is added to 334 μl (1200 μg) of DARPin9_29 at a concentration of a solution of the basic substance of 3.6 mg / L and incubated at a temperature of 40 ° C for 60 minutes (according to laboratory regulations for obtaining radiopharmaceutical LR-02069303-0217 from 03.02 .2017 g). Subsequently, the obtained compound is purified from protein impurities and DARPin9_29 molecules not bound to technetium using NAP-5 purification columns (GE Healthcare, Sweden). The radiochemical yield and purity are determined using thin-layer radiochromatography (TLC). Chromatogram analysis is carried out using a Hitachi Chromaster HPLC systems chromatograph with a radioactive detector. The drug obtained after purification in a dose of 500 MBK is diluted in 10 ml of physiological saline and slowly administered to the patient through a sterilizing filter. 4 hours after drug administration, a single-photon emission computed tomography on a two-detector gamma camera is performed and the results are evaluated and, when visualizing the sites of RFP hyperfixation in the mammary gland tissue, a malignant tumor is diagnosed.

Способ основан на анализе результатов экспериментальных клинических исследований, для подтверждения, эффективности которого в выявлении злокачественных опухолей молочных желез с гиперэкспрессией Her2/neu были проведено изучение особенностей накопления радиофармацевтического препарата на основе меченных технецием-99 т рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29. С этой целью была сформирована группа из 8 пациенток с верифицированным диагнозом рака молочной железы T4N0-3M0-1: исследуемую подгруппу составляли 4 пациенток с гиперэкспрессией Her2/neu, контрольную - 4 пациентки без экспрессии данного параметра. Всем пациенткам внутривенно вводили радиофармацевтический препарат на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29 в дозе 500 МБк. Радиофармацевтический препарат готовили непосредственно перед введением согласно разработанному авторами лабораторному регламенту: для приготовления набор «CRS Isolink» (Center for Radiopharmaceutical Science, Paul Scherrer Institute, Villigen, Швейцария) для приготовления трикарбонила технеция [99mTc(СО)3(H2O)3]+ добавляли 1 мл (7 ГБк) элюата 99mTcO4- и инкубировали в течение 30 минут при температуре 100°С. После инкубации 1 мл трикарбонила технеция добавляли к 334 мкл (1200 мкг) DARPin9_29 при концентрация раствора основного вещества 3,6 мг/л, и инкубировали при температуре 40°С в течение 60 минут (согласно лабораторному регламенту получения РФП ЛР-02069303-0217 от 03.02.2017 г). В дальнейшем выполняли очистку полученного соединения от белковых примесей и несвязавшихся с технецием молекул DARPin9_29 с использованием очистительных колонок NAP-5 (GE Healthcare, Швеция). Радиохимические выход и чистоту определяли с помощью тонкослойной радиохроматографии (ТСРХ). Анализ хроматограмм проводили с использованием хроматографа Hitachi Chromaster HPLC systems с радиоактивным детектором. Полученный после очищения препарат в дозе 500 МБК разбавляли в 10 мл физраствора и через стерилизующий фильтр медленно вводили пациенту.The method is based on an analysis of the results of experimental clinical studies, to confirm the effectiveness of which in detecting malignant breast tumors with Her2 / neu overexpression, we studied the peculiarities of the accumulation of a radiopharmaceutical based on technetium-99t labeled recombinant targeted DARPin9_29 molecules. For this purpose, a group of 8 patients with a verified diagnosis of breast cancer T 4 N 0-3 M 0-1 was formed : the studied subgroup consisted of 4 patients with Her2 / neu overexpression, the control group consisted of 4 patients without expression of this parameter. All patients received a radiopharmaceutical based on a technetium-99m-labeled recombinant targeted DARPin9_29 molecule at a dose of 500 MBq. A radiopharmaceutical was prepared immediately before administration according to the laboratory regulations developed by the authors: for preparation, the CRS Isolink kit (Center for Radiopharmaceutical Science, Paul Scherrer Institute, Villigen, Switzerland) for the preparation of technetium tricarbonyl [ 99m Tc (CO) 3 (H 2 O) 3 ] + 1 ml (7 GBq) of 99m TcO 4 - eluate was added and incubated for 30 minutes at 100 ° C. After incubation, 1 ml of technetium tricarbonyl was added to 334 μl (1200 μg) of DARPin9_29 at a concentration of a solution of the basic substance of 3.6 mg / L, and incubated at a temperature of 40 ° C for 60 minutes (according to laboratory regulations for obtaining radiopharmaceutical LR-02069303-0217 from 02/03/2017 g). Subsequently, the obtained compound was purified from protein impurities and DARPin9_29 molecules not bound to technetium using NAP-5 purification columns (GE Healthcare, Sweden). Radiochemical yield and purity were determined using thin-layer radiochromatography (TLC). Chromatogram analysis was performed using a Hitachi Chromaster HPLC systems chromatograph with a radioactive detector. The drug obtained after purification at a dose of 500 MBK was diluted in 10 ml of saline and slowly introduced into the patient through a sterilizing filter.

Через 4 часа после внутривенного введения препарата в дозе 500 МБк выполняли ОФЭКТ на двухдетекторной гамма-камере Е.САМ фирмы SIEMENS в стандартном режиме. Производили запись 64 проекций в матрицу 64×64 пикселя с применением низкоэнергетических коллиматоров с энергией 140КэВ. Окно дифференциального дискриминатора настроено на 20%, аппаратное увеличение не использовали.4 hours after intravenous administration of the drug at a dose of 500 MBq, SPECT was performed on a two-detector E.CAM gamma camera from SIEMENS in standard mode. We recorded 64 projections in a 64 × 64 pixel matrix using low-energy collimators with an energy of 140 keV. The differential discriminator window is set to 20%, the hardware magnification was not used.

Полученные при исследовании изображения (сцинтиграммы) подвергали постпроцессинговой обработке с использованием фирменного пакета программ E.Soft (SIEMENS, Германия). Патологическими считались участки повышенной аккумуляции препарата в ткани молочной железы. Кроме того, при постпроцессинговой обработке производился расчет индекса «опухоль/фон», отражающий соотношение накопления препарата в опухолевой ткани и в здоровой ткани молочной железы. Результаты исследования продемонстрировали 100% чувствительность способа в диагностике вторичной отечно-инфильтративной формы рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu, то есть с применением указанного радиофармпрепарата на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29 удалось выявить опухоль у всех 6 пациенток с гиперэкспрессией Her2/neu, включенных в исследование. Произведенные расчеты показали, что средние значения индекса «опухоль/фон» составили 2,01±1,54.The images (scintigrams) obtained during the study were subjected to post-processing processing using the proprietary software package E.Soft (SIEMENS, Germany). Areas of increased accumulation of the drug in breast tissue were considered pathological. In addition, during postprocessing, the tumor / background index was calculated, which reflects the ratio of drug accumulation in tumor tissue and in healthy breast tissue. The results of the study demonstrated 100% sensitivity of the method in the diagnosis of the secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with Her2 / neu overexpression, that is, using the indicated radiopharmaceutical based on technetium-99m-labeled recombinant targeted molecules DARPin9_29, it was possible to detect a tumor in all 6 patients with Her2 / overexpression neu included in the study. The performed calculations showed that the average values of the tumor / background index were 2.01 ± 1.54.

Клинический пример 1.Clinical example 1.

Пациентка М., 54 года: Рак правой молочной железы, ВОИФ, IIIB стадия (T4N0M0).Patient M., 54 years old: Cancer of the right breast, VOIF, stage IIIB (T4N0M0).

Гистологическое исследование: Инвазивная карцинома неспецифического типа 2 степени злокачественности. РЭ-, РП-, Her2/neu+.Histological examination: Invasive carcinoma of nonspecific type 2 malignancy. RE-, RP-, Her2 / neu +.

В плане обследования дополнительно выполнено исследование согласно предлагаемому способу однофотонная эмиссионная компьютерная томография с радиофармпрепаратом на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29. Ha На Фиг 1 через 4 часа после введения визуализируется метаболическая гиперфиксация препарата в проекции опухоли в центральных отделах правой молочной железы.In terms of the survey, a study was additionally carried out according to the proposed method, single-photon emission computed tomography with a radiopharmaceutical based on recombinant targeted molecules DARPin9_29 labeled with technetium-99m. Ha In FIG. 1, 4 hours after administration, the metabolic hyperfixation of the drug is visualized in the projection of the tumor in the central parts of the right mammary gland.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики с применением радиофармацевтического препарата на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29, позволяет отчетливо визуализировать вторичную отечно-инфильтративную форму рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu на метаболическом уровне, а степень аккумуляции представленного радиофармпрепарата в опухоли дает возможность получать сцинтиграфические изображения надлежащего качества. Способ позволит повысить эффективность и специфичность радионуклидной диагностики вторичной отечно-инфильтративной формы рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu.Thus, the proposed diagnostic method using a radiopharmaceutical based on technetium-99m-labeled recombinant targeted molecules DARPin9_29 makes it possible to clearly visualize the secondary edematous infiltrative form of breast cancer with Her2 / neu overexpression at a metabolic level, and the degree of accumulation of the presented radiopharmaceutical in the tumor makes it possible receive scintigraphic images of proper quality. The method will improve the efficiency and specificity of the radionuclide diagnosis of the secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with overexpression of Her2 / neu.

Claims (1)

Способ радионуклидной диагностики вторичной отечно-инфильтративной формы рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu с использованием рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29, включающий введение радиофармпрепарата (РФП) и выполнение сцинтиграфических исследований, отличающийся тем, что вводят инъекционную форму радиофармпрепарата на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29, который изготавливают непосредственно перед введением, для чего в асептических условиях 1 мл элюата 99mTcO4- 7 ГБк с помощью шприца добавляют в набор для приготовления трикарбонильного технеция и инкубируют при температуре 100°С в течение 30 минут, после инкубации 1000 мкл трикарбонила технеция добавляют к 334 мкл DARPin9_29 при концентрации раствора основного вещества 3,6 мг/л и инкубируют при температуре 40°С в течение 60 минут, далее выполняют очистку полученного соединения от белковых примесей и несвязавшихся с технецием молекул DARPin9_29 с помощью очистительных колонок, полученный после очищения препарат в дозе 500 МБК разбавляют в 10 мл физиологического раствора и через стерилизующий фильтр медленно вводят пациенту, через 4 часа после введения препарата пациенту выполняют однофотонную эмиссионную компьютерную томографию на двухдетекторной гамма-камере, оценивают полученные результаты и при визуализации участков гиперфиксации РФП в ткани молочных желез диагностируют злокачественную опухоль.A method for the radionuclide diagnosis of a secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with Her2 / neu overexpression using recombinant targeted DARPin9_29 molecules, comprising administering a radiopharmaceutical (RPS) and performing scintigraphic studies, characterized in that an injected form of a radiopharmaceutical based on labeled techno molecules DARPin9_29, which is made immediately before the administration, which in aseptic conditions, 1 ml of eluate 99m TcO 4- 7 GBq via syringe ADDED they are added to the set for the preparation of tricarbonyl technetium and incubated at a temperature of 100 ° C for 30 minutes; after incubation, 1000 μl of tricarbonyl technetium is added to 334 μl of DARPin9_29 at a concentration of a solution of the basic substance of 3.6 mg / L and incubated at a temperature of 40 ° C for 60 minutes, then the obtained compound is purified from protein impurities and DARPin9_29 molecules not bound to technetium using cleaning columns; after purification, the preparation at a dose of 500 MBK is diluted in 10 ml of physiological saline and through sterilizing the filter is slowly introduced to the patient, 4 hours after the administration of the drug, the patient undergoes single-photon emission computed tomography on a two-detector gamma camera, the results are evaluated, and when visualizing the areas of radiopharmaceutical hyperfixation in the mammary gland tissue, a malignant tumor is diagnosed.
RU2019101463A 2019-01-18 2019-01-18 Method for radionuclidean diagnostics of secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with overexpression of her2/neu using recombinant address molecules darpin9_29 RU2700109C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019101463A RU2700109C1 (en) 2019-01-18 2019-01-18 Method for radionuclidean diagnostics of secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with overexpression of her2/neu using recombinant address molecules darpin9_29

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019101463A RU2700109C1 (en) 2019-01-18 2019-01-18 Method for radionuclidean diagnostics of secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with overexpression of her2/neu using recombinant address molecules darpin9_29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2700109C1 true RU2700109C1 (en) 2019-09-12

Family

ID=67989914

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019101463A RU2700109C1 (en) 2019-01-18 2019-01-18 Method for radionuclidean diagnostics of secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with overexpression of her2/neu using recombinant address molecules darpin9_29

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2700109C1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2737996C1 (en) * 2020-06-08 2020-12-07 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Томский политехнический университет» Method for evaluating neoadjuvant systemic therapy of breast cancer with her2/neu overexpression
RU2762317C1 (en) * 2021-02-24 2021-12-17 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) Method for predicting the status of the epidermal growth factor receptor her2/neu in the main tumor node in breast cancer patients
RU218690U1 (en) * 2022-06-10 2023-06-06 Государственное автономное учреждение здравоохранения Тюменской области "Многопрофильный клинический медицинский центр "Медицинский город" DEVICE FOR EXTERNAL MARKING OF ZONES OF INCREASED ACCUMULATION OF RADIOPHARMACEUTICAL DRUG WITH RADIONUCLIDE VISUALIZATION

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2486518C1 (en) * 2012-01-10 2013-06-27 Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт онкологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (НИИ онкологии СО РАМН) Method for prediction of onset of local recurrences in surgical scars in unicentric invasive duct breast cancer in patients with preserved menstrual function
AU2008331354B2 (en) * 2008-06-16 2014-11-20 F. Hoffmann - La Roche Ag Treatment of metastatic breast cancer by a combination of two anti-HER2 antibodies and a taxane

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2008331354B2 (en) * 2008-06-16 2014-11-20 F. Hoffmann - La Roche Ag Treatment of metastatic breast cancer by a combination of two anti-HER2 antibodies and a taxane
RU2486518C1 (en) * 2012-01-10 2013-06-27 Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт онкологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (НИИ онкологии СО РАМН) Method for prediction of onset of local recurrences in surgical scars in unicentric invasive duct breast cancer in patients with preserved menstrual function

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Li L. et al. SPECT/CT Imaging of the Novel HER2-Targeted Peptide Probe 99mTc-HYNIC-H6F in Breast Cancer Mouse Models. // J Nucl Med. 2017 May; 58(5): 821-6. *
Sorensen J. et al. First-in-human molecular imaging of HER2 expression in breast cancer metastases using the 111In-ABY-025 affibody molecule. // J Nucl Med. 2014. 55 (5): 730-5. *
Беришвиили А.И. Отечно-инфильтративная форма рака молочной железы (клиника, диагностика, лечение, факторы прогноза): дис. д.м.н. Москва. 2011: 212. *
Беришвиили А.И. Отечно-инфильтративная форма рака молочной железы (клиника, диагностика, лечение, факторы прогноза): дис. д.м.н. Москва. 2011: 212. Брагина О.Д. и др. Разработка высокоспецифичного радиохимического соединения на основе меченых 99mТс рекомбинантных адресных молекул для визуализации клеток с гиперэкспрессией Her-2/neu. // Бюллетень сибирской медицины. 2017; 16 (3): 25-33. Henry K.E. et al. Human Epidermal Growth Factor Receptor 2-Targeted PET/Single- Photon Emission Computed Tomography Imaging of Breast Cancer: Noninvasive Measurement of a Biomarker Integral to Tumor Treatment and Prognosis. // PET Clin. 2017 Jul; 12(3): 269-88. Li L. et al. SPECT/CT Imaging of the Novel HER2-Targeted Peptide Probe 99mTc-HYNIC-H6F in Breast Cancer Mouse Models. // J Nucl Med. 2017 May; 58(5): 821-6. *
Брагина О.Д. и др. Разработка высокоспецифaging of Breast Cancer: Noninvasive Measurement of a Biomarker Integral to Tumor Treatment and Prognosis. // PET Clin. 2017 Jul; 12(3): 269-88. *
ичного радиохимического соединения на основе меченых 99mТс рекомбинантных адресных молекул для визуализации клеток с гиперэкспрессией Her-2/neu. // Бюллетень сибирской медицины. 2017; 16 (3): 25-33. Henry K.E. et al. Human Epidermal Growth Factor Receptor 2-Targeted PET/Single- Photon Emission Computed Tomography Im *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2737996C1 (en) * 2020-06-08 2020-12-07 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Томский политехнический университет» Method for evaluating neoadjuvant systemic therapy of breast cancer with her2/neu overexpression
RU2762317C1 (en) * 2021-02-24 2021-12-17 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) Method for predicting the status of the epidermal growth factor receptor her2/neu in the main tumor node in breast cancer patients
RU2800818C1 (en) * 2022-02-07 2023-07-28 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр" Российской академии наук ("Томский НИМЦ") Method of breast cancer diagnostics with her2/neu hyperexpression
RU218690U1 (en) * 2022-06-10 2023-06-06 Государственное автономное учреждение здравоохранения Тюменской области "Многопрофильный клинический медицинский центр "Медицинский город" DEVICE FOR EXTERNAL MARKING OF ZONES OF INCREASED ACCUMULATION OF RADIOPHARMACEUTICAL DRUG WITH RADIONUCLIDE VISUALIZATION

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Schwenck et al. Comparison of 68 Ga-labelled PSMA-11 and 11 C-choline in the detection of prostate cancer metastases by PET/CT
Ballal et al. Novel fibroblast activation protein inhibitor-based targeted theranostics for radioiodine-refractory differentiated thyroid cancer patients: a pilot study
Dijkers et al. Biodistribution of 89Zr‐trastuzumab and PET imaging of HER2‐positive lesions in patients with metastatic breast cancer
SULLIVAN et al. Localization of I-131-labeled goat and primate anti-carcinoembryonic antigen (CEA) antibodies in patients with cancer
Maini et al. Technetium-99m-MIBI scintigraphy in the assessment of neoadjuvant chemotherapy in breast carcinoma
RU2702294C1 (en) Method for radionuclide diagnosing operable breast cancer with overexpression of her2/neu
RU2700109C1 (en) Method for radionuclidean diagnostics of secondary edematous-infiltrative form of breast cancer with overexpression of her2/neu using recombinant address molecules darpin9_29
Ulaner et al. First-in-human HER2-targeted imaging using 89Zr-pertuzumab PET/CT: Dosimetry and clinical application in patients with breast cancer
Raderer et al. 123I-labelled vasoactive intestinal peptide receptor scintigraphy in patients with colorectal cancer
Wang et al. A prospective head-to-head comparison of [68Ga] Ga-P16-093 and [68Ga] Ga-PSMA-11 PET/CT in patients with primary prostate cancer
JP2017214308A (en) Radioactive pharmaceutical composition, and radiolabeled antibody screening method
Raderer et al. Comparison of iodine-123-vasoactive intestinal peptide receptor scintigraphy and indium-111-CYT-103 immunoscintigraphy
RU2720801C1 (en) RADIONUCLIDE DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR BREAST CANCER WITH Her2/neu HYPEREXPRESSION
RU2780943C1 (en) Method for detecting metastasis to regional lymph nodes in breast cancer patients with her2/neu hyperexpression
RU2800818C1 (en) Method of breast cancer diagnostics with her2/neu hyperexpression
Dessureault et al. Pre-operative assessment of axillary lymph node status in patients with breast adenocarcinoma using intravenous 99m technetium mAb-170H. 82 (Tru-Scint® AD™)
RU2737996C1 (en) Method for evaluating neoadjuvant systemic therapy of breast cancer with her2/neu overexpression
RU2800864C1 (en) Method of diagnostics of remote metastasis in breast cancer patients with her2/neu hyperexpression
RU2739107C1 (en) Diagnostic technique for stomach cancer with her2/neu overexpression
Ahmed et al. Diagnostic modalities and radiopharmaceuticals with particular importance of technetium-99m (99mTc)
RU2785387C1 (en) Method for evaluating neoadjuvant chemotherapy in breast cancer patients with her2/neu overexpression
WO2019110845A1 (en) Radiolabeled progastrin in cancer diagnosis
Jiang et al. (18F)-PSMA-1007PET/CT in patients with biochemical recurrence after radical prostatectomy: Diagnostic performance and impact on treatment management
RU2779751C1 (en) Method for prediction of her2/neu epidermal growth factor receptor status in main tumor node in breast cancer patients
RU2762317C1 (en) Method for predicting the status of the epidermal growth factor receptor her2/neu in the main tumor node in breast cancer patients

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20210119

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20211109