RU2695359C1 - Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей - Google Patents
Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2695359C1 RU2695359C1 RU2018125196A RU2018125196A RU2695359C1 RU 2695359 C1 RU2695359 C1 RU 2695359C1 RU 2018125196 A RU2018125196 A RU 2018125196A RU 2018125196 A RU2018125196 A RU 2018125196A RU 2695359 C1 RU2695359 C1 RU 2695359C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lymphocytes
- meningitis
- cerebrospinal fluid
- viral
- bacterial
- Prior art date
Links
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 8
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 56
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims 1
- 206010027260 Meningitis viral Diseases 0.000 abstract description 25
- 201000010044 viral meningitis Diseases 0.000 abstract description 25
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 14
- 206010035551 Pleocytosis Diseases 0.000 description 13
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 13
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 6
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 102000009265 Cerebrospinal Fluid Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010073496 Cerebrospinal Fluid Proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 4
- 238000009593 lumbar puncture Methods 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 102000014702 Haptoglobin Human genes 0.000 description 3
- 108050005077 Haptoglobin Proteins 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 2
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 2
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 2
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000003641 microbiacidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000004493 neutrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 208000034657 Convalescence Diseases 0.000 description 1
- 102000000634 Cytochrome c oxidase subunit IV Human genes 0.000 description 1
- 108050008072 Cytochrome c oxidase subunit IV Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010024641 Listeriosis Diseases 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 206010027253 Meningitis pneumococcal Diseases 0.000 description 1
- 208000034762 Meningococcal Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010058858 Meningococcal bacteraemia Diseases 0.000 description 1
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003701 histiocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000022089 meningococcemia Diseases 0.000 description 1
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007971 neurological deficit Effects 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 208000004593 pneumococcal meningitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики менингитов у детей методом проточной цитометрии, отличающийся тем, что в остром периоде заболевания исследуют субпопуляционный состав лимфоцитов ликвора: CD3+ Т-лимфоциты, CD3-CD16+CD56+ натуральные киллеры, CD3-CD19+ В-лимфоциты, определяют процентное содержание CD3-CD19+ В-лимфоцитов от суммы указанных субпопуляций лимфоцитов ликвора и при относительном содержании CD3-CD19+ В-лимфоцитов выше 2,72% диагностируют бактериальный менингит, а при значениях, равных или ниже 2,72%, – вирусный менингит. Применение данного способа позволяет на раннем этапе заболевания дифференцировать его вирусную, или бактериальную природу, своевременно проводить обоснованную этиотропную терапию, тем самым улучшая результаты лечения и исходы бактериальных и вирусных менингитов у детей. 2 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно, клинической лабораторной диагностике и может быть использовано для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных менингитов.
Актуальность разработки новых диагностических критериев при менингите у детей обусловлена тяжелым течением заболевания, с частым формированием неврологического дефицита в стадии реконвалесценции. Этиологическими факторами менингитов в большинстве случаев являются вирусы и бактерии, однако первичная скрининговая дифференциальная диагностика вирусной, или бактериальной природы заболевания вызывает трудности, что препятствует своевременному назначению этиотропной терапии. Решающее значение для диагностики менингитов имеют исследования состава цереброспинальной жидкости (ЦСЖ), а именно содержания общего белка и числа клеток с их дифференциацией на поли- и мононуклеары Принято считать, что значительное увеличение числа клеток (плеоцитоз) (более 1000 кл/мкл) с преобладанием полинуклеаров, увеличение содержания общего белка ликвора (>1 г/л), указывают на бактериальный гнойный менингит (БГМ), тогда как умеренный плеоцитоз (до 1000 кл/мкл) с преобладанием мононуклеаров и незначительное увеличение общего белка ликвора - на вирусный менингит (ВМ). Однако начальные стадии БГМ могут сопровождаться низким плеоцитозом ликвора с равным количеством поли- и мононуклеаров а вирусный менингит сопровождается увеличением плеоцитоза свыше 1000 кл/мкл, что ограничивает использование плеоцитоза в качестве дифференциально-диагностического критерия вирусных и бактериальных менингитов.
Клетки ликвора обеспечивают реакции врожденного и адаптивного иммунного ответа, направлены на уничтожение возбудителя нейроинфекционного заболевания и имеют качественные и количественные отличия при вирусной, или бактериальной природе менингита. Особый интерес представляют исследования характеристик адаптивного иммунного ответа, обеспечиваемого, прежде всего, лимфоцитами различных субпопуляций. Однако в современной литературе, исследования количественных характеристик лимфоцитов ликвора немногочисленны, что обусловлено их относительно низким, по сравнению с кровью, содержанием.
В современной литературе имеются сведения о субпопуляционном составе лимфоцитов ликвора при некоторых неврологических заболеваниях, включая ВМ и БГМ. Авторы отмечают информативность исследования лимфоцитарного пула ликвора для оценки состояния адаптивного иммунного ответа, однако не рассматривают возможность использования этих показателей с целью дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных менингитов.
На сегодняшний день большинство известных способов дифференциальной диагностики менингитов основано на исследовании биохимических параметров ЦСЖ. Известен способ дифференциальной диагностики вирусного и бактериального менингита, основанный на определении лактоферрина в ЦСЖ. Способ дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных менингитов. Патент на изобретение RU №2323444). Так при значениях лактоферрина в ЦСЖ 0,1 мг/л диагностируют вирусный менингит, при 0,5 мг/л и выше - бактериальный менингит. Метод не обеспечивает точность диагностики, так как возникает сложность в интерпретации промежуточных значений (от 0,11 до 0,49 мг/л). При использовании данного способа необходим достаточно большой объем ликвора (1-2 мл), что зачастую является невозможным при проведении люмбальной пункции у детей.
Известен «Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей» (RU №2541150), основанный на определении в ликворе уровня гаптоглобина. При концентрации гаптоглобина равной или менее 0,7 мг/дл, диагностируют вирусный менингит, при концентрации свыше 0,7 мг/дл - бактериальный менингит. Определение гаптоглобина в ликворе характеризует патобиохимические изменения при ВМ и БГМ, но не оценивает иммунологические реакции, вызванные внедрением вируса, или бактерии в оболочки и ткани мозга.
Известен метод дифференциальной диагностики вирусного и бактериального менингита, состоящий в определении показателей микробицидной активности нейтрофильных лейкоцитов: ферментов миелопероксидазы, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы в ликворе больных методом спектрофотометрического анализа «Способ дифференциальной диагностики гнойных и серозных менингитов у детей». (RU №2499995). Предлагаемые авторами методы лабораторного анализа требуют длительной и многостадийной пробоподготовки, что не позволяет быстро провести дифференциальную диагностику. Использование этого способа включает определение трех ферментов, характеризующих микробицидную активность нейтрофильных лейкоцитов, обуславливающих реакции врожденного иммунитета, и не затрагивает показатели адаптивного иммунного ответа в ликворе.
Близким к предлагаемому способу являются результаты исследования реакций адаптивного иммунного ответа в ликворе, изложенные в работе Kowarik М.С. et. al. (Immune cell subtyping in the cerebrospinal fluid of patients with neurological diseases. // J. Neuro. 2014 (261), 130-143). Авторами исследован субпопуляционный состав лимфоцитов ликвора методом проточной цитометрии при различных заболеваниях центральной нервной системы у взрослых пациентов, включая вирусные (17 человек) и бактериальные менингиты (13 человек). Группы были неоднородны по этиологии. При БГМ установлена менингококковая этиология (2), пневмококковая (4), гемофильная (1), стрептококковая (1), туберкулезная (3), листериозная (1), кампиллобактер (1). Группа больных ВМ также была разнообразной по этиологической структуре и включала двух пациентов с энтеровирусной этиологией заболевания, 8 человек с вирусом простого герпес 1-2 типа, 6 человек с вирусом варицелла зостер и 1-го пациента с цитомегаловирусной этиологией заболевания. Авторы рассчитывали содержание В-лимфоцитов по отношению ко всем лейкоцитам ликвора, включая моноциты, нейтрофилы и другие клетки, что, наряду с неоднородностью групп пациентов по этиологической структуре, не позволило получить достоверных различий между группами. Таким образом, в работе Kowarik М.С. и соавторов исследован субпопуляционный состав лимфоцитов ликвора методом проточной цитометрии, однако не выявлены информативные для диагностики субпопуляции лимфоцитов ликвора и конкретные диапазоны их значений, которые могли быть использованы для дифференциации вирусного и бактериального менингита у детей.
С целью устранения вышеуказанных недостатков авторы предлагают принципиально новый способ дифференциальной диагностики менингитов у детей. Технический результат, достигаемый в данном способе заключается в повышении точности постановки
Это достигается тем, что путем проведения проточной цитометрии, в остром периоде заболевания исследуют субпопуляционный состав лимфоцитов ликвора: CD3+ T-лимфоциты, CD3-CD16+56 натуральные киллеры, CD3-CD19+ В-лимфоциты, определяют отношение содержания В-лимфоцитов к сумме основных популяций лимфоцитов ликвора и при относительном содержании В-лимфоцитов выше 2,72% диагностируют бактериальный менингит, при значениях равных или ниже 2,72% - вирусный.
На протяжении многих лет занимаясь проблемой ликворологических исследований и их использования в клинической лабораторной диагностике, нами была установлена недостаточная эффективность стандартных исследований ликвора для дифференциальной диагностики вирусной, или бактериальной природы заболевания, обусловленная наличием перекрестных значений общего белка и плеоцитоза при вирусных и бактериальных менингитах с равным соотношением моно- и полинуклеаров. Стандартное микроскопическое исследование осадка ликвора не позволяет дифференцировать отдельные субпопуляции лимфоцитов, выполняющие различные функции в реакциях адаптивного иммунного ответа.
Нами обнаружена и доказана важная роль субпопуляций лимфоцитов, а именно Т-лимфоцитов (CD3+), натуральных киллеров (CD3-CD16+CD56) и В-лимфоцитов (CD3-CD19+) в диагностике менингита и необходимость их определения в ликворе для дифференциации вирусной или бактериальной его природы.
Авторы впервые доказали, что максимальной диагностической чувствительностью и специфичностью обладают В-лимфоциты, обеспечивающие гуморальный иммунный ответ, хотя и другие субпопуляции лимфоцитов имеют достоверные отличия при ВМ и БГМ, что делает возможным и необходимым их комплексное исследование.
Выбор лабораторных показателей не был очевидным и был получен в результате многочисленных экспериментальных исследований клеточного осадка ликвора методом проточной цитометрии, позволивших обнаружить значительные изменения в субпопуляционном составе лимфоцитов.
Авторы впервые в образцах ликвора детей с острыми менингитами определили субпопуляции лимфоцитов методом проточной цитометрии
Субпопуляционный состав лимфоцитов ликвора исследован у 73 детей в возрасте от 3 месяцев до 18 лет, находившихся в стационаре ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России в период с 2012-2018 год. Диагноз «вирусный менингит» установлен у 43 детей, бактериальный менингит - у 30 детей. Этиологический диагноз был верифицирован с применением новейших бактериологических и серологических методов в лабораториях Центра, (руководитель отдела молекулярной микробиологии и эпидемиологии д.м.н. проф. Сидоренко С.В.; руководитель отдела вирусологии и молекулярно-биологических методов исследования д.б.н. Мурина Е.А.). У большинства детей с ВМ установлена энтеровирусная этиология (n=40), у двух - смешанная (ЭВ+Парвовирус) и 1-го цитомегаловирусная. Из 30-ти детей с БГМ у 19 установлена менингококковая этиология, у 6 - гемофильная, у 5 - стрептококковая.
При поступлении у всех пациентов обнаружены клинические признаки острого нейроинфекционного заболевания, встречающиеся как при бактериальной, так и при вирусной природе заболевания. При лабораторном исследовании ликвора показатели общего белка и цитоза в среднем были выше у пациентов с бактериальным менингитом по сравнению с вирусным менингитом, однако, было отмечено перекрывание показателей в широком диапазоне (табл. 1).
Так, минимальное значение цитоза при БГМ составляло 66 кл/мкл, при ВМ значения могли достигать 1592 кл/мкл. В 23% случаев при вирусном менингите и 20% при бактериальном менингите наблюдался смешанный плеоцитоз, иногда с преобладанием не характерных для данных нозологических форм клеточных популяций. Так, в большинстве случаев смешанного плеоцитоза при вирусном менингите преобладали нейтрофилы. В половине случаев смешанного плеоцитоза при БГМ в ликворе преобладали мононуклеары. Таким образом, данные стандартного анализа ликвора часто затрудняли дифференциальную диагностику вирусного и бактериального менингита. В связи с этим нами было детально проанализировано относительное содержание основных субпопуляций лимфоцитов ликвора с целью поиска значимых дифференциально-диагностических критериев (табл. 2).
* - выборки статистически достоверно различаются (уровень достоверности Р<0,05).
Для выбора наиболее диагностически значимого показателя проведен РОК анализ чувствительности и специфичности исследованных субпопуляций лимфоцитов ликвора. Наиболее значимыми показателями чувствительности и специфичности для дифференциальной диагностики вирусного и бактериального менингита обладало относительное содержание В-лимфоцитов (CD3-CD19+). Установлено, что относительное содержание В-лимфоцитов в ликворе в остром периоде заболевания выше 2,72% было характерно для бактериального менингита, равное, или менее 2,72% - для вирусного. Чувствительность и специфичность данного критерия составляют 100%.
Предложенный способ осуществляется следующим образом. После проведения диагностической люмбальной пункции у пациентов с подозрением на менингит и стандартного анализа ликвора, ликвор центрифугируют 5 минут при 1600 об/минуту для осаждения клеток, снимают надосадок, оставляя около 100 мкл ликвора с осажденными клетками. В ресуспендированном осадке проводят фенотипирование лимфоцитов по поверхностным маркерам на проточном цитофлуориметре FACSCalibur фирмы Beckton Dickenson (BD), либо ином проточном цитофлуориметре. Используют стандартный набор реагентов MultiTEST (BD) с 4-х цветной панелью антител: CD3/CD8/CD45/CD4 и CD3/CD16+CD56/CD19, меченных флуорохромами. Модификацией стандартного протокола, разработанного для крови, в случае исследования ликвора является отсутствие фазы лизирования эритроцитов. С учетом преаналитического этапа и модификацией метода для анализа лимфоцитов ЦСЖ пробоподготовка занимает 20-25 минут. После пробоподготовки материал анализируется на проточном цитометре с применением программного обеспечения MaltiSET или CellQuest Pro BD (USA). Обработка данных осуществляется с помощью специализированных программ FlowJo или ее аналогов. В ликворе пациентов определяют относительное содержание основных субпопуляций лимфоцитов (CD3+T-лимфоциты, CD3-CD16+CD56+ натуральные киллеры, CD3-CD19+ В-лимфоциты). При относительном содержании В-лимфоцитов ликвора выше 2,72% диагностируют бактериальный менингит, при значениях равных или ниже 2,72% - вирусный.
Длительность проведения анализа, от момента доставки ликвора в лабораторию до получения результатов - 1-1,5 часа, тогда как при использовании стандартных методов этиологической диагностики (микробиологических, полимеразной цепной реакции, иммуноферментного анализа) верификация возбудителя была проведена не ранее суток после поступления биологического материала.
Эффективность предлагаемого способа дифференциальной диагностики менингита может быть подтверждена на конкретных клинических примерах.
Пример №1. Больная К. 4 года. Поступила в ФГБУ ДНКЦИБ на 2-е сутки заболевания с диагнозом «остаточные явления острого респираторного заболевания, подозрение на менингит». В день поступления проведена диагностическая люмбальная пункция. Полученный ликвор бесцветный, прозрачный. Общий белок - 0,377 г/л. Цитоз - 98 кл/мкл: нейтрофилы - 27 кл/мкл, мононуклеары - 71 кл/мкл. Незначительно повышенный общий белок ликвора в совокупности с мононуклеарным плеоцитозом указывали на менингит, предположительно вирусной природы. Для подтверждения диагноза проведено иммунофенотипирование лимфоцитов ликвора методом проточной цитометрии. Относительное содержание основных субпопуляций лимфоцитов составило: CD3+ Т-лимфоцитов - 97,33%, НК (CD3-CD16+56+) - 2,7%, В-лимфоцитов - 0,07%. Относительное содержание В-лимфоцитов в ликворе острого периода заболевания было характерным для вирусного менингита, что в дальнейшем нашло подтверждение при проведении вирусологической диагностики. Методом ПЦР в режиме «реального времени» в ликворе выявлена РНК энтеровируса, по результатам типирования выявлены антигены энтеровируса 68. Диагноз при выписке - энтеровирусный серозный менингит.
Пример №2. Больной Т. 8 месяцев. Доставлен в стационар на 5-е сутки после начала заболевания с подозрением на менингоэнцефалит. Диагностическая пункция проведена на 2-е сутки после госпитализации. Стандартные показатели: ликвор бесцветный, мутный, цитоз - 1708 кл/мкл, белок - 0,75 г/л, нейтрофилы 1491 кл/мкл, мононуклеары - 205 кл/мкл, макрофаги - 108 кл/мкл, плазматические клетки - 1,3 кл/мкл. Нейтрофильный плеоцитоз указывал на бактериальную природу заболевания, однако содержание общего белка ликвора было незначительно увеличено. При иммунофенотипировании лимфоцитов ликвора методом проточной цитометрии установлено, что относительное содержание В-лимфоцитов резко увеличено до 37,2%. Т-лимфоциты составляют 60,1%, НК - 2,7%. Полученные результаты указывали на бактериальную природу заболевания, что нашло подтверждение при верификации возбудителя методом ПЦР в режиме «реального времени» и в реакции латекс-агглютинации (N.miningitidis В). На основании клинико-лабораторных данных был поставлен диагноз: генерализованная менингококковая инфекция серогруппы В, гнойный менингит, менингококкцемия.
Пример №3. Больной Ж. 9 лет 8 месяцев. В стационар ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России поступил на 2-е сутки заболевания с подозрением на менингит. Общее состояние тяжелое за счет общемозгового синдрома, температура тела 36,8 C°. Менингеальные симптомы положительные. Диагностическая пункция произведена в день поступления. Ликвор бесцветный, прозрачный. Общий белок - 0,48 г/л, цитоз - 301 кл/мкл, нейтрофилы 157 кл/мкл, мононуклеары - 144 кл/мкл. Смешанный характер плеоцитоза в совокупности с тяжелым состоянием пациента не позволяли однозначно поставить диагноз. В качестве дополнительного лабораторного критерия проведено иммунофенотипирование лимфоцитов ликвора методом проточной цитометрии. Относительное содержание основных субпопуляций лимфоцитов составило: Т-лимфоцитов - 95,8%, НК - 3,8%, В-лимфоцитов - 0,4%. Относительное содержание В-лимфоцитов в ЦСЖ острого периода пациента указывало на вирусную природу менингита. В дальнейшем это было подтверждено результатами этиологической верификации возбудителя. В ЦСЖ методом ПЦР в режиме «реального времени» обнаружена РНК энтеровируса. Диагноз: Серозный энтеровирусный менингит.
Пример №4. Больной Л. 10 месяцев 10 дней. Поступил в стационар ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России на 2-е сутки заболевания. Общее состояние средней тяжести за счет общеинфекционного синдрома, температура тела 38 C°. Менингеальные симптомы отрицательны. На 3-й сутки произведена диагностическая люмбальная пункция. Ликвор бесцветный, мутноватый. Общий белок - 1,14 г/л. Цитоз - 1005 кл/мкл, нейтрофилы 467 кл/мкл, мононуклеары - 520 кл/мкл, макрофаги - 10,7 кл/мкл, плазматические клетки - 4,3 кл/мкл, гистиоциты - 3,7 кл/мкл. Смешанный характер плеоцитоза не позволял с уверенностью судить о природе заболевания. Было проведено иммунофенотипирование лимфоцитов ликвора методом проточной цитометрии. Относительное содержание основных субпопуляций лимфоцитов составило: Т-лимфоцитов - 81,0%, НК - 10,2%, В-лимфоцитов - 8,8%. Относительное содержание В-лимфоцитов в ЦСЖ острого периода пациента указывало на бактериальную природу менингита. Диагноз был подтвержден результатами верификации возбудителя методом ПЦР в режиме «реального времени». В ликворе пациента обнаружена ДНК Streptococcus pneumoniae. Диагноз: Пневмококковый менингит.
Применение данного способа позволяет на раннем этапе заболевания дифференцировать его вирусную, или бактериальную природу, своевременно проводить обоснованную этиотропную терапию, тем самым, улучшая результаты лечения и исходы бактериальных и вирусных менингитов у детей.
Claims (1)
- Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей методом проточной цитометрии, отличающийся тем, что в остром периоде заболевания исследуют субпопуляционный состав лимфоцитов ликвора: CD3+ Т-лимфоциты, CD3-CD16+CD56+ натуральные киллеры, CD3-CD19+ В-лимфоциты, определяют процентное содержание CD3-CD19+ В-лимфоцитов от суммы указанных субпопуляций лимфоцитов ликвора и при относительном содержании CD3-CD19+ В-лимфоцитов выше 2,72% диагностируют бактериальный менингит, а при значениях, равных или ниже 2,72%, – вирусный.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018125196A RU2695359C1 (ru) | 2018-07-09 | 2018-07-09 | Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018125196A RU2695359C1 (ru) | 2018-07-09 | 2018-07-09 | Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2695359C1 true RU2695359C1 (ru) | 2019-07-23 |
Family
ID=67512402
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018125196A RU2695359C1 (ru) | 2018-07-09 | 2018-07-09 | Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2695359C1 (ru) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2323444C2 (ru) * | 2006-05-22 | 2008-04-27 | Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных менингитов |
RU2541150C1 (ru) * | 2013-12-27 | 2015-02-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства | Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей |
-
2018
- 2018-07-09 RU RU2018125196A patent/RU2695359C1/ru active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2323444C2 (ru) * | 2006-05-22 | 2008-04-27 | Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных менингитов |
RU2541150C1 (ru) * | 2013-12-27 | 2015-02-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства | Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
АЛЕКСЕЕВА Л.А. и др. Субпопуляции лимфоцитов и цитокины в крови и цереброспинальной жидкости при вирусных и бактериальных менингитах у детей // Инфекция и иммунитет. - 2016. - Т.6, No.1. - С.33-44. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Oeschger et al. | Point of care technologies for sepsis diagnosis and treatment | |
Greenlee | Approach to diagnosis of meningitis Cerebrospinal fluid evaluation | |
Araj | Human brucellosis: a classical infectious disease with persistent diagnostic challenges | |
Wicher et al. | Laboratory methods of diagnosis of syphilis for the beginning of the third millennium | |
Tomberlin et al. | Evaluation of neurosyphilis in human immunodeficiency virus-infected individuals | |
US5426028A (en) | Screening method for chronic immune dysfunction syndrome | |
Hopwood et al. | Use of the Pastorex aspergillus antigen latex agglutination test for the diagnosis of invasive aspergillosis. | |
JP2002515974A (ja) | 新生児感染に対する迅速アッセイ | |
WO2017023194A1 (ru) | Способ диагностики иммунной системы и набор для оценки днк молекул trec, krec и количество геном эквивалентов днк | |
Chedore et al. | Rapid molecular diagnosis of tuberculous meningitis using the Gen-Probe amplified Mycobacterium tuberculosis direct test in a large Canadian public health laboratory | |
CN111504886B (zh) | 一组分子在制备新冠肺炎辅助诊断试剂或试剂盒中的应用 | |
RU2695359C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей | |
Ernerudh et al. | Cell surface markers for diagnosis of central nervous system involvement in lymphoproliferative diseases | |
RU2541150C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики менингитов у детей | |
JP6206953B2 (ja) | 成人t細胞白血病の発症し易さを試験する方法 | |
Zucker-Franklin et al. | Hypopigmented mycosis fungoides associated with human T cell lymphotropic virus type I tax in a pediatric patient | |
RU2694223C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите | |
JP2014059299A (ja) | 慢性型成人ヒトt細胞白血病(atl)から急性型atlへの急性転化のし易さを試験する方法 | |
Yavuz et al. | Detection of Brucella among voluntary blood donors in Turkey by using a new real time PCR method | |
CN116622632A (zh) | Cd4 temra在诊断孤独症共病癫痫中的应用 | |
Al-Nafea | Evaluation of Interleukin-17 Level as a Prognostic Marker in Active Antiviral Treated Human Immunodeficiency in Virus Saudi Patients | |
Erhabor et al. | Cd4+ LYMPHOCYTE REFERENCE RANGES IN HEALTHY ADULTS IN PORT HARCOURT, NIGERIA. | |
Bond et al. | Updated Report | |
Mohsin | Evaluate Interleukin-15 in SLE patients and its association with hemolytic anemia | |
Guevara et al. | A Challenging Diagnosis of Febrile Pancytopenia in a Patient With a History of Autoimmune Disease |