RU2691404C2 - Композиция, содержащая сцирпусин а и сцирпусин в, и ее потенциал в качестве средства против ожирения - Google Patents
Композиция, содержащая сцирпусин а и сцирпусин в, и ее потенциал в качестве средства против ожирения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2691404C2 RU2691404C2 RU2017134707A RU2017134707A RU2691404C2 RU 2691404 C2 RU2691404 C2 RU 2691404C2 RU 2017134707 A RU2017134707 A RU 2017134707A RU 2017134707 A RU2017134707 A RU 2017134707A RU 2691404 C2 RU2691404 C2 RU 2691404C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fat
- kcal
- group
- scyrpusin
- cypro
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 50
- 239000000883 anti-obesity agent Substances 0.000 title description 3
- 229940125710 antiobesity agent Drugs 0.000 title description 2
- 229930190723 scirpusin Natural products 0.000 title 2
- 244000075634 Cyperus rotundus Species 0.000 claims abstract description 46
- 235000016854 Cyperus rotundus Nutrition 0.000 claims abstract description 46
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- 239000002038 ethyl acetate fraction Substances 0.000 claims abstract description 31
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims abstract description 29
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 29
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- 235000021286 stilbenes Nutrition 0.000 claims abstract description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 23
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 claims abstract 6
- PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N Stilbene Natural products C=1C=CC=CC=1/C=C/C1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N 0.000 claims description 24
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 23
- PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N stilbene Chemical compound C=1C=CC=CC=1C=CC1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 239000013585 weight reducing agent Substances 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 4
- 150000001629 stilbenes Chemical class 0.000 abstract description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 56
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 55
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 29
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 230000011759 adipose tissue development Effects 0.000 description 18
- 235000019625 fat content Nutrition 0.000 description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 11
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 11
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 9
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 8
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 8
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 7
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 4
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 239000002035 hexane extract Substances 0.000 description 4
- 238000012006 liquid chromatography with tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 244000288157 Passiflora edulis Species 0.000 description 3
- 235000000370 Passiflora edulis Nutrition 0.000 description 3
- IIXHQGSINFQLRR-UHFFFAOYSA-N Piceatannol Natural products Oc1ccc(C=Cc2c(O)c(O)c3CCCCc3c2O)cc1O IIXHQGSINFQLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- CDRPUGZCRXZLFL-OWOJBTEDSA-N piceatannol Chemical compound OC1=CC(O)=CC(\C=C\C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=C1 CDRPUGZCRXZLFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 3
- MTYSFTYBAMMIGE-HNQUOIGGSA-N 4-[(e)-2-[2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3-(3,5-dihydroxyphenyl)-6-hydroxy-2,3-dihydro-1-benzofuran-4-yl]ethenyl]benzene-1,2-diol Chemical compound C=1C(O)=CC=2OC(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)C(C=3C=C(O)C=C(O)C=3)C=2C=1\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 MTYSFTYBAMMIGE-HNQUOIGGSA-N 0.000 description 2
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- MTYSFTYBAMMIGE-IZLXSDGUSA-N Scirpusin B Natural products Oc1cc(O)cc(c1)[C@H]2[C@@H](Oc3cc(O)cc(C=Cc4ccc(O)c(O)c4)c23)c5ccc(O)c(O)c5 MTYSFTYBAMMIGE-IZLXSDGUSA-N 0.000 description 2
- FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N Sudan III Chemical compound OC1=CC=C2C=CC=CC2=C1N=NC(C=C1)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 FHNINJWBTRXEBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 239000002044 hexane fraction Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- MTYSFTYBAMMIGE-UHFFFAOYSA-N scirpusin B-cis Natural products C=1C(O)=CC=2OC(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)C(C=3C=C(O)C=C(O)C=3)C=2C=1C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 MTYSFTYBAMMIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 150000003436 stilbenoids Chemical class 0.000 description 2
- 229940099373 sudan iii Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000004260 weight control Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- AYPZAZPOYROADP-UHFFFAOYSA-N 2-(2-phenylethenyl)phenol Chemical class OC1=CC=CC=C1C=CC1=CC=CC=C1 AYPZAZPOYROADP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclohexen-1-yl)cyclohexan-1-one Chemical compound O=C1CCCCC1C1=CCCCC1 GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028186 ATP-binding cassette sub-family C member 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710150022 ATP-binding cassette sub-family C member 5 Proteins 0.000 description 1
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000011690 Adiponectin Human genes 0.000 description 1
- 108010076365 Adiponectin Proteins 0.000 description 1
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 1
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 241001432959 Chernes Species 0.000 description 1
- 101150065749 Churc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000014311 Cushing syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000234653 Cyperus Species 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000218996 Passiflora Species 0.000 description 1
- 235000011925 Passiflora alata Nutrition 0.000 description 1
- 235000011922 Passiflora incarnata Nutrition 0.000 description 1
- 235000013750 Passiflora mixta Nutrition 0.000 description 1
- 235000013731 Passiflora van volxemii Nutrition 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010769 Prader-Willi syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100038239 Protein Churchill Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000026928 Turner syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000002293 adipogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003486 adipose tissue brown Anatomy 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000011872 anthropometric measurement Methods 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 229940065524 anticholinergics inhalants for obstructive airway diseases Drugs 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 239000002830 appetite depressant Substances 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000000451 chemical ionisation Methods 0.000 description 1
- 239000000812 cholinergic antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 210000003674 cytoplasmic vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 229940111685 dibasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000005980 lung dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100001079 no serious adverse effect Toxicity 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- -1 picetannol Chemical class 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 238000011886 postmortem examination Methods 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000009395 primary hyperaldosteronism Diseases 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000992 solvent dye Substances 0.000 description 1
- 229940033816 solvent red 27 Drugs 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- YCUVUDODLRLVIC-VPHDGDOJSA-N sudan black b Chemical compound C1=CC(=C23)NC(C)(C)NC2=CC=CC3=C1\N=N\C(C1=CC=CC=C11)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1 YCUVUDODLRLVIC-VPHDGDOJSA-N 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 230000001196 vasorelaxation Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
- A61K31/343—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide condensed with a carbocyclic ring, e.g. coumaran, bufuralol, befunolol, clobenfurol, amiodarone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
- A61K31/05—Phenols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
- A61K36/89—Cyperaceae (Sedge family)
- A61K36/8905—Cyperus (flatsedge)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для снижения ожирения у людей, для лечения гиперхолестеринемии у людей, достижения эффектов уменьшения массы тела, индекса массы тела и окружности талии, для поддержания нормальных системных уровней липидов. Композиция, содержащая этилацетатную фракцию метанольного экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, для снижения ожирения у людей. Композиция, содержащая этилацетатную фракцию метанольного экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, для лечения гиперхолестеринемии у людей. Применение композиции для достижения эффектов уменьшения массы тела, индекса массы тела и окружности талии. Применение композиции для поддержания нормальных системных уровней липидов посредством достижения эффектов (а) снижения системных уровней общего холестерина, липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и триглицеридов сыворотки и (б) повышения системных уровней липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). Вышеописанные композиции эффективны для снижения ожирения у людей, для лечения гиперхолестеринемии у людей, достижения эффектов уменьшения массы тела, индекса массы тела и окружности талии, для поддержания нормальных системных уровней липидов. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 18 табл.
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Настоящее изобретение представляет собой заявку РСТ патентной заявки США 14705111, поданной 6 мая 2015 года, которая является частичным продолжением патентной заявки США 13944634, поданной 17 июля 2013 года, которая, в свою очередь, представляет собой обычную подачу предварительной патентной заявки 61672849, поданной 18 июля 2012 г., все из которых включены в настоящее нижеследующее описание для ссылки в полном объеме.
Предшествующий уровень техники Область техники
Изобретение в общем относится к композициям для ингибирования адипогенеза. Более конкретно, в настоящем изобретении раскрыта композиция, содержащая сцирпусин А и сцирпусин В, и ее потенциал в качестве средства против адипогенеза/ожирения.
Описание предшествующего уровня техники
Сцирпусин А в виде димера гидроксистильбена из винного сорта винограда Синьцзян ранее был описан Kong Q et al в J Sci Food Agric. 2010 Apr 15;90(5):823-8. Были отмечены ингибиторная активность сцирпусина А в отношении агрегации бета-амилоидного пептида (Riviere С et al (2010)), его роль в гашении синглетного кислорода, его защитная активность в отношении ДНК (Kong Q et al (2010)), а также ингибиторная активность в отношении бета-секретазы (Jeon SY et al (2007)).
Сцирпусин В является хорошо изученным сосудорасширяющим димером пикеатаннола и был получен в больших количествах из пассифлоры (Sano S et al, "Identification of the strong vaso- relaxing substance scirpusin B, a dimer of piceatannol, from passion fruit (Passiflora edulis) seeds, J Agric Food Chern. 2011 Jun 8; 59(11):6209-13. У сцирпусин В также отмечена мягкой активность в отношении системы глутатиона (GSH) (Maruki-Uchida Н et al (2013)) и активность против ВИЧ (Yang GX et al (2005)).
Ранее сообщалось, что гексановый экстракт корневищ Cyperus rotundus (сыть круглая) обладает способностью препятствовать ожирению. (Administration of Cyperus rotundus rhizomes extract prevents Weight Gain in Obese Zucker rats. Lemaure et al. 2007. Phytother Res. 21: 724 -730.). Гексановая фракция была охарактеризована содержанием а-циперона, ротундена, Р-селинена, каламенена, циперена, d-кадинена, циперотундона, кадалена, пачуленона, нооткатена, сугеонола, g-калакорена, кобусона, циперола, изокобусона и эпи-а-селинена (Yadav et al. International Journal of Pharmaceutical and Clinical Research 2010; 2(1): 20-22). Но в настоящем изобретении раскрыта способность этилацетатной фракции экстракта Cyperus rotundus препятствовать ожирению. Эта этилацетатная фракция не содержит ни одного из многочисленных компонентов гексановой фракции. Данная этилацетатная фракция содержит соединения, относящиеся к стильбеноидам - классу соединений, о присутствии которых в Cyperus rotundus до сих пор не сообщалось ни в одном исследовании. Следовательно, это уникальная комбинация неожиданного обнаружения присутствия соединений, относящихся к стильбеноидам, и, кроме того, их способности препятствовать ожирению. Также неожиданно обнаружено, что после основанного на данных о биоактивности фракционирования корневищ Cyperus rotundus, подфракция этилацетатного слоя была охарактеризована концентрированным содержанием двух димеров пикеатаннола, сцирпусина А и сцирпусина В, которые продемонстрировали превосходный антиадипогенный эффект по сравнению с другой подфракцией, которая содержала высокую концентрацию пикеатаннола наряду с димерами сцирпусином А и сцирпусином В. Таким образом, авторы настоящего изобретения впервые демонстрируют присутствие сцирпусина А и сцирпусина В в этилацетатной фракции корневищ Cyperus rotundus и их способности препятствовать адипогенезу/ожирению.
Таким образом, основной целью настоящего изобретения является раскрытие композиции, содержащей сцирпусин А и сцирпусин В, и ее потенциала в качестве средства против адипогенеза/ожирения.
Другой целью настоящего изобретения является раскрытие способа ингибирования адипогенеза в клетках млекопитающих с использованием композиции, содержащей сцирпусин А и сцирпусин В.
Еще одной целью настоящего изобретения является раскрытие способа контроля ожирения у млекопитающих с применением композиции, содержащей сцирпусин А и сцирпусин В.
Еще одной целью настоящего изобретения является раскрытие способа получения композиций, содержащих А) сцирпусин А и сцирпусин В, и Б) пикеатаннол и его димеры сцирпусин А и сцирпусин В, путем основанного на данных о биоактивности фракционирования корневищ Cyperus rotundus.
Настоящее изобретение достигает вышеупомянутых целей и обеспечивает дополнительные соответствующие преимущества.
Краткое описание изобретения
В настоящем изобретении раскрыты композиции, содержащие сцирпусин А и сцирпусин В, и их потенциал в качестве средств против адипогенеза/ожирения. В изобретении также раскрыт способ контроля ожирения у млекопитающих с применением композиции, содержащей сцирпусин А и сцирпусин В. В настоящем изобретении дополнительно раскрыт способ получения композиций, содержащих А) сцирпусин А и сцирпусин В, и Б) пикеатаннол и его димеры сцирпусин А и сцирпусин В, посредством основанного на данных о биоактивности фракционирования корневищ Cyperus rotundus. Другие отличительные признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из следующего более подробного описания, приведенного в сочетании с сопроводительными изображениями, которые иллюстрируют, в качестве примера, принцип изобретения.
Подробное описание графических материалов
На Фиг. 1 показана принципиальная схема стадий экстракции активных компонентов из корневищ Cyperus rotundus.
На Фиг. 2, 2а, 2б и Фиг. 3, 3а, 3б, 3в показаны результаты ЖХ-МС (жидкостная хроматография с масс-спектрометрией) анализа подфракций III и IV этилацетатного слоя, соответственно, естественно обогащенного димерами пикеатаннола сцирпусином А и сцирпусином В.
На Фиг. 4 и 5 показаны данные МСВР (масс-спектрометрия высокого разрешения), показывающие, что полученные в данном исследовании значения [М+Н] хорошо согласуются со структурой димера и опубликованным по нему данным (Sano et al., 2011).
На Фиг. 6 графически показано уменьшение массы тела у людей с ожирением, которым вводили этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%.
На Фиг. 6а графически показано уменьшение индекса массы тела у людей с ожирением, которым вводили этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%. На Фиг. 6б графически показано уменьшение окружности талии у людей с ожирением, которым вводили этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%.
На Фиг. 7 показаны фотографии уменьшения окружности талии у людей с ожирением (мужчин), которым вводили этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%.
На Фиг. 8а, 8б и 8в показаны фотографии уменьшения окружности талии у людей с ожирением (женщин), которым вводили этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%.
На Фиг. 9а, 9б, 9в, 9г и 9д показаны изменения в системных уровнях липидов у людей с ожирением, которым вводили этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%.
Описание наиболее предпочтительного варианта осуществления
В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к композиции против адипогенеза/ожирения, содержащей сцирпусин А и сцирпусин В, представленные STR#1 и STR#2, соответственно.
В другом наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования адипогенеза в клетках млекопитающих, включающему стадию приведения адипогенных клеток млекопитающих в контакт с композицией, содержащей сцирпусин А и сцирпусин В, представленные STR#1 и STR#2, соответственно.
В еще одном наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу терапевтического ингибирования ожирения, вызванного адипогенезом, у млекопитающих, включающему стадию введения с пищей композиции, содержащей сцирпусин А и сцирпусин В, представленные STR#1 и STR#2 соответственно, млекопитающему, нуждающемуся в указанном терапевтическом ингибировании.
В другом наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению композиции, содержащей сцирпусин А и сцирпусин В, представленные STR#1 и STR#2, для ингибирования адипогенеза в клетках млекопитающих.
В альтернативном варианте осуществления настоящее изобретение также относится к способу основанного на данных о биоактивности фракционирования корневищ Cyperus rotundus для получения композиций против адипогенеза/ожирения, содержащих А) сцирпусин А и сцирпусин В, представленные STR#1 и STR#2, и Б) пикеатаннол и его димеры сцирпусин А и сцирпусин В, представленные STR#1 и STR#2, соответственно, включающему стадии:
1. Высушивания корневищ Cyperus rotundus и их измельчения с образованием крупного порошка;
2. Экстракции порошка стадии 1 добавлением трех объемов гексана с последующим нагреванием, кипячением с обратным холодильником в течение 3 часов и фильтрацией, с получением растворимой в гексане фракции и остаточного материала;
3. Экстракции остаточного материала стадии 2 добавлением трех объемов метанола с последующим нагреванием, кипячением с обратным холодильником в течение 3 часов и фильтрацией, с получением растворимой в метаноле активной фракции и остаточного материала;
4. Растворения растворимой в метаноле активной фракции стадии 3 в водном растворе метанола и последовательного разделения хлороформом (СНСЬ), этилацетатом (ЕЮАс) и метанолом с получением, соответственно, хлороформного слоя, этилацетатного слоя и водно-метанольного слоя;
5. Дополнительного фракционирования хлороформного слоя, этилацетатного слоя и водно-метанольного слоя, основанного на данных о биоактивности, где показателем биоактивности является способность хлороформного слоя, этилацетатного слоя и водно-метанольного слоя ингибировать адипогенез в адипоцитах мыши 3T3-L1 (адипоцитах млекопитающих);
6. Вычисления значений ICso (концентрация полумаксимального ингибирования) (мкг/мл) ингибирования адипогенеза, демонстрируемого
хлороформным слоем, этилацетатным слоем и водно-метанольным слоем (0, 9,39 и 66,42, соответственно);
хлороформным слоем, этилацетатным слоем и водно-метанольным слоем (0, 9,39 и 66,42, соответственно);
7. Фракционирования этилацетатного слоя с помощью фракционирования на колонке для идентификации биомаркера биоактивности (ингибирования адипогенеза), где указанное фракционирование включает стадию, на которой фракции элюируют смесью метанол:хлороформ с увеличивающейся полярностью, с получением подфракций этилацетатного слоя (фракции);
8. Анализа подфракций стадии 7 на предмет биологической активности (способность препятствовать адипогенезу);
9. Идентификации наиболее биоактивных подфракций стадии 8 и их ЖХ-МС анализа для определения биоактивных компонентов сцирпусина А и сцирпусина В; и
10. Проведения препаративной ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) подфракций стадии 7 с получением очищенного димера, и проведение МСВР, ЖХ-МС/МС (жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией) и ЯМР (спектроскопия ядерного магнитного резонанса) анализов подфракций для подтверждения массы и структуры биоактивных компонентов сцирпусина.
Авторы настоящего изобретения исследовали гексановый экстракт, упомянутый на стадии 2, и обнаружили, что сцирпусин А и сцирпусин В в нем отсутствовали. Следовательно, гексановый экстракт, полученный на стадии 1, структурно отличается от этилацетатной фракции, полученной на стадии 7. Таким образом, этилацетатный экстракт Cyperus rotundus сильно отличается от гексанового экстракта, который был предметом исследования в Lemaure et al. 2007. Phytother Res. 21: 724-730.
Следующие разделы этого описания состоят из иллюстративных примеров наиболее предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения.
ПРИМЕР 1: Основанное на данных о биоактивности фракционирование корневищ Cyperus rotundus (Фиг. 1) Методика:
Высушенные корневища Cyperus rotundus измельчали до образования крупного порошка. Затем измельченный порошок экстрагировали добавлением трех объемов гексана с последующим нагреванием, кипячением с обратным холодильником в течение 3 часов и фильтрацией с получением растворимой в гексане фракции и остаточного материала. Остаточный материал дополнительно экстрагировали добавлением трех объемов метанола с последующим нагреванием, кипячением с обратным холодильником в течение 3 часов и фильтрацией с получением растворимой в метаноле активной фракции и остаточного материала. Растворимую в метаноле фракцию растворяли в водном растворе метанола и последовательно разделяли хлороформом (СНОз), этилацетатом (ЕЮАс) и метанолом с получением, соответственно, хлороформного слоя, этилацетатного слоя и водно-метанольного слоя. Проводили дополнительное фракционирование хлороформного слоя, этилацетатного слоя и водно-метанольного слоя, основанное на данных о биоактивности, где показателем биоактивности была способность хлороформного слоя, этилацетного слоя и водно-метанольного слоя ингибировать адипогенез в адипоцитах мыши 3T3-L1 (адипоцитах млекопитающих). В примере 1А, приведенном ниже, объяснена технология окрашивания красителем Масляным красным О, основанная на Salazar Olivo et al (1995), Wu Z et al (1998), Fu M et al (2005), для изучения степени ингибирования адипогенеза. Результаты приведены в Таблице А.
ПРИМЕР 1А: Конечная дифференцировка адипоцитов сопровождается накоплением большого количества липидов в больших цитоплазматических везикулах. Стандартное исследование для измерения дифференцировки адипоцитов в клеточной культуре включает использование красителя Масляного красного О (ORO). ORO представляет собой липидорастворимый ярко-красный краситель, который является надежным индикатором дифференцировки адипоцитов.
Принцип: Масляный красный О (Растворитель красный 27, Судан красный 5В, СЛ. 26125 26125 и C26H24N40) представляет собой лизохром (жирорастворимый краситель) диазокраситель, используемый для окрашивания нейтральных триглицеридов и липидов на замороженных срезах и некоторых липопротеинов на парафиновых срезах. Он имеет вид красного порошка с максимумом поглощения при 518 (359) нм. Масляный красный О является одним из красителей, используемых для окраски Суданом. Схожие красители включают Судан III, Судан IV и Судан черный В. Окрашивание должно проводиться на свежих образцах, так как фиксация спиртом удаляет липиды. Масляный красный О в значительной степени заменил Судан III и Судан IV, поскольку он дает гораздо более насыщенный красный цвет, и поэтому окрашенные области намного легче просматривать. Масляный красный О является жирорастворимым красителем. Жирорастворимые красители проявляют большую растворимость в жироподобных веществах тканей/клеток, чем в обычных водно-спиртовых растворителях красителей. Следовательно, жирорастворимые красители глубоко окрашивают клетки.
3T3-L1 клетки количеством приблизительно 60х104 клеток высевали на 48-72 часов для достижения 70-80% конфлюентности. Через 48 часов добавляли 200 мкл свежеприготовленной AIM (среды, индуцирующей адипогенез). Через 72 часа к лункам добавляли 200 мкл АРМ (среда для прогрессирования адипогенеза) с тестируемыми соединениями в различных концентрациях. Клетки инкубировали в течение 48 часов во влажной атмосфере (37°С) с 5% СОг и 95% воздуха. Супернатант собирали и хранили для оценки содержания лептина, адипонектина, ИЛ-6 и TNF-альфа. Клетки фиксировали добавлением 100 мкл 10% формалина и проводили окрашивание ORO. Оптическую плотность считывали при 492 нм в ридере для микропланшетов.
Результаты выражали в виде значений IC50 с использованием программного обеспечения Graph Pad prism. Процент ингибирования адипогенеза вычисляли следующим образом.
% Ингибирования равен С-Т/Т * 100, где
С - поглощение красителя Масляного красного О в дифференцированных/недифференцированных клетках
Т - поглощение красителя Масляного красного О в обработанных образцом дифференцированных/недифференцированных клеток.
Этилацетатный слой проявил наилучшую биологическую активность в отношении ингибирования адипогенеза с величиной IC50 (мкг/мл), составляющей 9,39.
Эту фракцию затем фракционировали на колонке для идентификации биомаркера биоактивности (ингибирования адипогенеза). Фракционирование на колонке включало стадию элюирования подфракций этилацетатного слоя смесью метанол:хлороформ с увеличивающейся полярностью. Подфракций этилацетатного слоя маркировали как I, И, III и IV, анализировали на предмет биологической активности (способности препятствовать антиадипогенезу). Основные стадии анализа способности препятствовать адипогенезу включали процедуру, описанную в Примере 1А. Результаты приведены в Таблице В.
Подфракций III и IV затем анализировали с помощью ЖХ-МС, причем обе фракции были обогащены димерами пикеатаннола сцирпусином А и сцирпусином В (Фиг. 2 и 3). Анализ ЖХ-МС/МС проводили на спектрометре Thermo Electronics Finnigan LCQ Advantage MAX с использованием колонки RP CI8 (250 x 4,6 мм, размер частиц 5 мкм). Система состояла из детектора Thermo-Finnigan surveyor с фотодиодной матрицей, ЖХ-насоса и автоматического пробоотборника. Подвижная фаза включала градиентное элюирование в течение 35 минут с Растворителем (А) 0,1% уксусной кислотой в воде и Растворителем (В) ацетонитрилом. Концентрацию Растворителя В увеличивали, начиная с 5% в течение 0-5 минут, 5 - 60% в течение 5-20 минут, 60-100% в течение 20-25 минут, 100-5% в течение 25-27 минут и поддерживали постоянной при 5% в течение 27-35 минут. Неподвижная фаза включала колонку С18 Thermo BDS hypersil (размеры - 250 мм х 4,6 мм); Скорость потока: 1 мл/мин; детектирование: 260 нм.
Параметры ионизации: положительный режим APCI (химическая ионизация при атмосферном давлении), напряжение источника - 4,50 кВ, температура капилляра - 225 градусов, напряжение на капилляре - 43,00 В.
Интерпретация данных: масса сцирпусина А согласно опубликованным данным составляет 470,13. Масса [М+Н], наблюдаемая при 18,77 мин. в режиме положительной ионизации с использованием вышеуказанного протокола, составляет 471,08. Масса сцирпусина В составляет 486. Масса [М+Н], наблюдаемая при 17,94 мин в режиме положительной ионизации, составляет 487,05.
Первый уровень подтверждения наличия димеров пикеатаннола в экстракте Cyperus был основан на этой предварительной информации о массе. Присутствие сцирпусина А было непосредственно подтверждено прямым сравнением с аутентичным образцом сцирпусина А.
Затем проводили препаративную ВЭЖХ подфракций с получением очищенного димера сцирпусина В, который затем исследовали с использованием аналитических инструментов масс-спектроскопии высокого разрешения (МСВР), жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ-МС/МС) и спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР) для подтверждения, что полученный димер является сцирпусином В. Данные МСВР показали [М+Н], равное 487,138, что очень хорошо согласуется со структурой димера и опубликованными по нему данными (Sano et al., 2011) (Фиг. 4 и 5), и структуру сцирпусина В также подтверждали с использованием ЯМР с криогенным датчиком (Фиг. 6). Соединение идентифицировали после сравнения с данными, доступными из литературных источников (Sano et al., 2011). Данные ЯМР (CD30D): 6: 56,73, 93,50, 95,39, 100,79, 102,93, 105,87 X 2, 112,21, 112,63, 114,83, 114,91, 117,03, 118,42, 118,61, 122,17, 129,46, 129,53, 133,53, 135,60, 144.90, 145.01, 145,09, 145,21, 146,27, 158,36, 158,56 * 2, 161,46. Спектр ЯМР, полученный в APT (тест на присоединеные протоны) при 500 МГц, дополнительно подтвердил структуру сцирпусина В. Аутентичный образец сцирпусина В, выделенный из пассифлоры по методу Sano et al., 2011, также сравнивали непосредственно со сцирпусином В, выделенным авторами из Cyperus rotundus, как описано выше, и идентичность времен удерживания в ВЭЖХ, данных масс-спектроскопии и данных ЯМР подтвердили присутствие сцирпусина В в Cyperus rotundus самым убедительным образом.
ПРИМЕР 2
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ CYPRO-AF (активная этилацетатная фракция) И CYPRO-D1 (этилацетатная подфракция, естественно обогащенная димерами пикеатаннола сцирпусином А и сцирпусином В) КАК СРЕДСТВА ПРОТИВ ОЖИРЕНИЯ У МЫШЕЙ.
Цель исследования: Целью исследования было оценить эффективность экстрактов Cypro-AF и Cypro-Dl как средства против ожирения у мышей С57.
Подробности системы исследования:
Подробности проведения исследования УСЛОВИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЖИВОТНЫХ
Группирование: Группирование животных проводили в последний день акклиматизации методом рандомизации по массе тела и стратификации. Группирование животных проводили таким образом, чтобы различие в массе тела животных не превышало ± 20% от средней массы тела в каждой группе.
План исследования: животных разделяли на 6 групп, а именно, группы 1, 2, 3, 4, 5 и 6, включавшие по 10 животных (5 самцов и 5 самок) каждая. Подробные сведения о группе, дозы и количество/поле животных по группам представлены в следующей Таблице:
Подробное описание и дозировка состава
Испытуемые образцы Cypro-AF и Cypro-Dl растворяли в дистиллированной воде для приготовления различных доз. Свежеприготовленные тестируемые образцы вводили перорально с помощью желудочного зонда. Объем дозировки на одно животное поддерживали на уровне 10 мл/кг массы тела для всех животных в течение периода исследования. В следующей таблице приведена подробная информация о тестируемом составе.
Индукция ожирения: животных контрольной группы G1 кормили нормальным контрольным кормом D12450В, содержащим 10 ккал% жира, а животных групп G2-G6 кормили кормом с высоким содержанием жира D12492, содержащим 60 ккал% жира, в ходе индукции ожирения и в ходе основного исследования.
Основное исследование:
Основное исследование было начато после индукции ожирения. 3 дозы Cypro-AF и 1 дозу Cypro-Dl вводили животным, начиная с 28-го дня, ежедневно в течение 27 дней. В ходе основного исследования животные получали те же корма, что и на стадии индукции ожирения. Животным контрольной группы G1 и животным контрольной группы G2, получавшей корм с высоким содержанием жира, вводили дистиллированную воду, в то время как другие группы животных получали тестируемые образцы с 28-го по 54-й дня исследования. Объем вводимой дозы поддерживали в соответствии с недельной массой тела отдельного животного. Общая продолжительность исследования составила 61 день (7 дней акклиматизационного периода + 27 дней индукции ожирения + 27 дней основного исследования).
НАБЛЮДЕНИЯ
В течение периода исследования наблюдали следующие показатели. Потребление пищи
Регистрировали потребление пищи каждым животным. Еженедельно вычисляли и фиксировали среднее потребление пищи.
Масса тела
Массу тела каждого животного регистрировали в день поступления, в первый день и после этого еженедельно (± 1 день), в течение периода исследования.
Клинические наблюдения
Всех животных наблюдали на предмет клинических проявлений два раза в день в течение периода исследования.
Лабораторная диагностика
По окончании периода исследования у животных брали образцы крови в пробирки с антикоагулянтом калиевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты (K2-EDTA) для гематологического анализа, и в пробирки без антикоагулянта для биохимического анализа.
Образцы крови, отобранные в пробирки без антикоагулянта, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут с получением сыворотки. Образцы крови собирали гуманно, методом прокола ретроорбитального сплетения под легкой анестезией
эфиром, с помощью тонкой капиллярной трубки. Анализировали следующие гематологические и биохимические показатели.
Гематологические исследования
Следующие гематологические показатели были оценены с помощью Sysmex, КХ-21 (Transasia Bio-Medicals Ltd., Индия):
Биохимический анализ крови
Следующие биохимические показатели образцов сыворотки были проанализированы с помощью анализатора «Erba Mannheim Chern Touch» (Transasia Bio-Medicals Ltd., Индия).
Патологоанатомическое исследование
После окончания периода исследования, на 55-й день, всех животных гуманно умерщвляли путем воздействия избытка диоксида углерода в газовой камере, с
последующим внешним и внутренним макроскопическим исследованием после вскрытия.
Макроскопическое исследование после вскрытия
Животных подвергали внешнему и внутреннему макроскопическому исследованию.
Массы органов
Следующие органы всех животных отделяли в необходимой степени от прилегающих тканей и взвешивали влажными, как можно быстрее, чтобы избежать высыхания: мозг, тимус, печень, надпочечники, почки (парные органы), селезенку, сердце, яичники/тестикулы (парные органы).
Массы жировых отложений
Собирали и взвешивали следующие жировые отложения всех животных.
1. Эпидидимальный жир
2. Бурый жир
3. Овариальный жир
СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ И СОСТАВЛЕНИЕ ОТЧЕТА Исходные данные, полученные в настоящем исследовании, подвергали компьютерной статистической обработке. Компьютерную распечатку данных (в виде приложения) сверяли с первичными данными. После проверки, данные анализировали методом однофакторного ANOVA (дисперсионного анализа) с апостериорным критерием Даннетта, для данных о массе тела, гематологических и биохимических показателях, массах органов с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версии 5.01, GraphPad. Все анализы и сравнения оценивали с доверительной вероятностью 95% (Р меньше 0,05), обозначенной надстрочными индексами: «а», где G1 сравнивают с G3, G4, G5 и G6, и «Ь», где G2 сравнивают с G3, G4, G5 и G6 на протяжении всего отчета, как указано ниже: *: статистически значимо (Р меньше 0,05), где это применимо.
Данные были подвергнуты однофакторному статистическому анализу ANOVA, путем сравнения следующего:
Группы G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)} с группой G3 {CYPRO-AF 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группой G4 {CYPRO-AF 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группой G5 {CYPRO-AF 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира) и группой G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, как представлено ниже:
РЕЗУЛЬТАТЫ
Группы G2 {контрольная группа, получавшая корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, с группой G3 {CYPRO-AF 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группой G4 {CYPRO-AF 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группой G5 {CYPRO-AF 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группой G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, как показано ниже:
Потребление пищи
Сводные данные по среднему за неделю потреблению пищи для самцов и самок животных представлены в Таблице 1 и Таблице 2, соответственно. Статистически значимые различия в потреблении пищи животными в течение периода исследования отсутствовали.
п равно 5; Значения представляют собой среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р больше 0,05
Масса тела
Сводные данные по еженедельной массе тела самцов и самок животных представлены в Таблице 3 и Таблице 4, соответственно.
п равно 5; Значения представляют собой среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р больше 0,05
п равно 5; Значения представляют собой среднее ± среднеквадратическое отклонение; * - значимая разница, Р меньше 0,05
У самцов животных наблюдали статистически значимое увеличение средних значений еженедельных масс тела на 21-й день в группе G3 {CYPRO-AF - 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF - 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира}, группе G5 {CYPRO-AF -200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 - 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
У самцов животных наблюдали статистически значимое увеличение средних значений недельной массы тела на 28-й день в группе G4 {CYPRO-AF - 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 - 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с
группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
У самцов животных наблюдали снижение средних значений еженедельной массы тела на 35-й, 42-й, 49-й и 55-й день в группе G3 {CYPRO-AF - 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF - 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 - 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены введением тестируемых образцов.
У самок животных наблюдали статистически значимое увеличение средних значений еженедельной массы тела на 21-й день в группе G4 {CYPRO-AF -100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 - 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
У самок животных наблюдали статистически значимое увеличение средних значений недельной массы тела на 28-й день в группе G3 {CYPRO-AF - 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF - 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO -D1 - 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
У самок животных наблюдали снижение средних значений недельной массы тела на 35-й, 42-й, 49-й и 55-й день в группе G3 {CYPRO-AF - 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF - 100 мг/кг + корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг + корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 - 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены введением тестируемых образцов.
Клинические наблюдения
Сводные данные по клиническим наблюдениям у самцов и самок животных представлены в Таблице 5 и Таблице 6, соответственно. В течение периода исследования животные были здоровы по данным клинических наблюдений.
п равно 5; N-Норма
п равно 5; N-Норма
Гематология
Сводные данные оценки гематологических показателей у самцов и самок животных представлены в Таблице 7 и Таблице 8, соответственно.
п равно 5; Значения - среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р меньше
0,05
п равно 5; Значения - среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р больше
0,05
п равно 5; Значения - среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р меньше
0,05
п равно 5; Значения - среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р больше
0,05
Сравнительный статистический анализ гематологических показателей группы G1 с группами G3, G4, G5 и G6
Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС) У самцов животных наблюдали статистически значимое увеличение среднего значения МСНС в группе G4 {CYPRO-AF - 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Можно считать указанные изменения несущественными, т.к. дозозависимый ответ отсутствовал.
Средний объем эритроцита и среднее содержание гемоглобина в эритроците У самок животных наблюдали статистически значимое увеличение средних значений MCV и МСН в группе G3 {CYPRO-AF - 50 мг/кг и корм с высоким
содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Можно считать указанные изменения несущественными, т.к. дозозависимый ответ отсутствовал.
Среднее содержание гемоглобина в эритроците и средняя концентрация гемоглобина в эритроците
У самок животных наблюдали статистически значимое увеличение средних значений МСН и МСНС в группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G2 (контрольная группа, получавшая корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}. Можно считать указанные изменения несущественными, т.к. дозозависимый ответ отсутствовал.
Биохимический анализ крови
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ к ответу на запрос экспертизы от 15.01.2019
Сводные данные оценки биохимических показателей крови у самцов и самок животных представлены в Таблице 9 и Таблице 10, соответственно.
п равно 5; Значения - среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р меньше
0,05
0,05
п равно 5; Значения - среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р меньше
п равно 5; Значения - среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р меньше
0,05
п равно 5; Значения - среднее ± среднеквадратическое отклонение; Р меньше
0,05
Сравнительный статистический анализ показателей биохимического анализа крови группы G1 с группами G3, G4, G5 и G6.
Общий белок
У самок животных наблюдали статистически значимое снижение средних значений общего белка в группе G3 {CYPRO-AF -50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G4 {CYPRO-AF - 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1
{контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
Триглицериды
У самок животных наблюдали статистически значимое снижение средних значений триглицеридов в группе G3 {CYPRO-AF -50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF - 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 - 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
Общий холестерин
У самцов животных наблюдали статистически значимое увеличение среднего значения общего холестерина в группе G3 {CYPRO-AF - 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группы G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
У самок животных наблюдали статистически значимое увеличение средних значений общего холестерина в группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
Липиды высокой плотности
У самцов животных наблюдали статистически значимое снижение среднего значения липидов высокой плотности в группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
Липиды низкой плотности
У самцов животных наблюдали статистически значимое увеличение среднего значения липидов низкой плотности в группе G3 (CYPRO-AF - 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF - 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 - 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
Липиды очень низкой плотности
У самок животных наблюдали статистически значимое увеличение среднего значения липидов очень низкой плотности в группе G5 {CYPRO-AF - 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с группой G1 {контрольная группа (с 10 ккал% жира)}. Предполагали, что эти изменения обусловлены различным содержанием жира в корме.
Сравнительный статистический анализ показателей биохимического анализа крови группы G2 с группами G3, G4, G5 и G6
Триглицериды
У самцов животных наблюдалось снижение средних значений триглицеридов в группе G3 {CYPRO-AF 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF -100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF 200 мг/кг + корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Это снижение средних значений триглицеридов может быть обусловлено действием тестируемых образцов.
У самок животных наблюдали статистически значимое снижение средних значений триглицеридов в группе G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Это снижение средних значений триглицеридов может быть обусловлено действием тестируемых образцов.
Было отмечено снижение средних значений триглицеридов в группе G3 {CYPRO-AF 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G5 {CYPRO-AF 200 мг/кг + корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Это снижение средних значений триглицеридов может быть обусловлено действием тестируемых образцов.
Общий холестерин
У самцов животных наблюдали снижение средних значений общего холестерина в группе G3 {CYPRO-AF 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF -100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G5 {CYPRO-AF 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Это снижение средних значений общего холестерина может быть обусловлено действием тестируемых образцов.
У самок животных наблюдали средних значений общего холестерина в группе G3 {CYPRO-AF 50 мг/кг и диета с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF 100 мг/кг и диета с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и диета с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Это снижение средних значений общего холестерина может быть обусловлено действием тестируемых образцов.
Липиды высокой плотности
У самцов животных наблюдали статистически значимое снижение средних значений липидов высокой плотности в группе G3 (CYPRO-AF 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF -100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Статистически значимое снижение средних значений липидов высокой плотности может быть обусловлено действием тестируемых образцов.
У самок животных наблюдали статистически значимое снижение средних значений липидов высокой плотности в группе G3 (CYPRO-AF 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (С 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Эти снижения средних значений липидов высокой плотности могут быть обусловлены действием тестируемых образцов.
Липиды низкой плотности
У самцов животных наблюдали снижение средних значений липидов низкой плотности в группе G5 {CYPRO-AF 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Это снижение средних значений липидов низкой плотности может быть обусловлено действием тестируемых образцов.
Значения липидов очень низкой плотности
У самцов животных наблюдали снижение средних значений липидов очень низкой плотности в группе G3 {CYPRO-AF 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF -100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G5 {CYPRO-AF 200 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Это снижение средних значений липидов очень низкой плотности может быть обусловлено действием тестируемых образцов.
У самок животных наблюдали незначительное снижение средних значений липидов очень низкой плотности в группе G3 {CYPRO-AF 50 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)}, группе G4 {CYPRO-AF 100 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} и группе G6 {CYPRO-D1 10 мг/кг и корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира)} по сравнению с контрольной группой G2, получавшей корм с высоким содержанием жира (с 60 ккал% жира). Эти
снижения значений среднего средних значений липидов очень низкой плотности могут быть обусловлены действием тестируемых образцов.
Выводы. На основании результатов настоящего исследования можно заключить, что тестируемые образцы Cypro-AF и Cypro-Dl оказывали воздействие на снижение таких показателей, как концентрации ЛПВП, триглицеридов, холестерина, ЛПНП и ЛПОНП при ожирении у самцов и самок мышей С57, индуцированном кормом с высоким содержанием жира в дозировках 50, 100 и 200 мг/кг массы тела Cypro-AF и 10 мг/кг массы тела Cypro-Dl. Не отмечено статистически значимых изменений в массе органов и жировых отложениях при паталогоанатомическом исследовании животных.
ПРИМЕР 3. Влияние этилацетатной фракции Cyperus rotundus, содержащей пикеатаннол и его димеры сцирпусин А и сцирпусин В, на контроль массы тела у человека. Исследования эффективности, безопасности и переносимости.
Подробности исследования
Первоочередные цели включали: (i) изучить эффективность экстракта Cyperus rotundus в отношении контроля массы тела у пациентов с ожирением; и (ii) изучить безопасность и переносимость экстракта Cyperus rotundus при контроле массы тела у пациентов с ожирением.
Второстепенная цель заключалась в изучении начала активности экстракта Cyperus rotundus в контроле массы тела у пациентов с ожирением.
Первичные показатели эффективности включали: (i) снижение массы тела и индекса массы тела; (ii) уменьшение окружности талии и индекса талия/бедра (антропометрические измерения); (ш) снижение значений холестерина, триглицеридов, ЛПНП и ЛПОНП от исходного уровня; (iv) увеличение значений ЛПВП от исходного уровня; и (v) доказательства, представляющие собой фотографии пациентов при первом и последнем визите, при этом его/ее личность скрыта.
Вторичные показатели эффективности включали оценку переносимости исследуемого вещества с точки зрения побочных действий и других физических признаков или симптомов у пациентов исследования.
Демографические показатели пациентов (Таблица 11)
Иллюстративные составы, использованные в исследовании с участием людей (Таблицы 12 и 13)
| Таблица 12 | ||
| Ингредиенты (активное исследуемое вещество) | Масса (мг) | |
| 1 | Экстракт Cyperus rotundus(общее содержание стильбенов 5%) – экстракт, содержащий пикеатаннол, сцирпусин A и сцирпусин B | 525 |
| 2 | Двухосновный фосфат калия | 30 |
| 3 | Стеарат магния | 5 |
| Таблица 13 | |
| Ингредиенты (плацебо) | Масса (мг) |
| Микрокристаллическая целлюлоза | 560 |
Активное исследуемое вещество и плацебо, описанные выше, были приготовлены в виде твердых коричневых/коричневых желатиновых капсул размером «00» с массой содержимого 560 мг. Так как исследование представляло собой двойное слепое исследование, как капсула с активным исследуемым веществом, так и капсула с плацебо были идентичными во всех физических аспектах, таких как размер, форма и вес. Случайно выбранная партия активного исследуемого вещества при анализе показала, что содержание пикеатаннола и сцирпусина В в среднем на капсулу составляло 36,18 мг. В более иллюстративных вариантах осуществления иллюстративные составы содержат экстракт Cyperus rotundus, нормализованный до общего содержания стильбенов, включающих пикеатаннол, сцирпусин А и сцирпусин В, более 3%. В иллюстративном примере, приведенном в Таблице 12, представлен экстракт Cyperus rotundus, нормализованный до общего содержания стильбенов, включающих пикеатаннол, сцирпусин А и сцирпусин В, составляющего 5%.
Исследование было проведено в Государственном Аюрведческом медицинском колледже (Government Ayurveda Medical College), Майсур, Индия. Исследование было начато только после получения письменного положительного мнения от институционального этического комитета. В ходе исследования не было внесено никаких дополнительных изменений или поправок в утвержденный протокол. Исследование проводили в соответствии с принципами, провозглашенными в Хельсинкской декларации (Эдинбург, 2000 г.) и согласованным трехсторонним стандартом ICH (Хельсинкской декларации) по надлежащей клинической практике (GCP). Письменная и устная информация об исследовании на языке, понятном пациенту, была предоставлена всем пациентам.
Это рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование с параллельными группами включало в общей сложности 5 визитов в клинику пациентов, участвовавших в исследовании, помимо скринингового визита. График проведения оценок представлен в Таблице 14.
Пациенты были включены в исследование, если было указано «Да» во всех критериях включения и «Нет» в любом из критериев исключения. Критерии включения: 1) пациенты мужского и/или женского пола; 2) возраст от 20 до 65 лет; 3)
повышенный уровень холестерина сыворотки - более 200 мг/дл; 4) повышенные триглицериды сыворотки - более 150 мг/дл; 5) повышенные ЛПНП сыворотки - более 130 мг/дл, и/или повышенные ЛПОНП сыворотки - более 40 мг/дл; 6) ИМТ от большего или равного 30 до 40 кг/м2; 7) желание являться для регулярных последующих врачебных наблюдений; 8) возможность дать письменное информированное согласие. Критерии исключения: 1) прием отпускаемых без рецепта препаратов для снижения веса, препаратов для подавления аппетита центрального действия за последние шесть месяцев; 2) патофизиологические/генетические синдромы, связанные с ожирением (синдром Кушинга, синдром Тернера, синдром Прадера-Вилли); 3) пациенты с проявлениями злокачественных новообразований; 4) пациенты с плохо контролируемым сахарным диабетом (HbAlc (гликированный гемоглобин) более 10%); 5) пациенты с плохо контролируемой гипертензией (более 160/100 мм рт. ст.), 6) пациенты, получающие длительное (более 6 недель) лечение кортикостероидами, антидепрессантами, антихолинергиками и т.д., или любыми другими лекарственными средствами, которые могут влиять на результаты исследования; 7) пациенты, страдающие серьезными системными заболеваниями, требующими длительного медикаментозного лечения (ревматоидный артрит, ризомекулез (Rhizomeculosis), психонейроэндокринные расстройства и т.д.); 8) пациенты, имеющие в анамнезе предсердную фибрилляцию, острый коронарный синдром, инфаркт миокарда, инсульт или тяжелую аритмию за последние 6 месяцев; 9) симптоматичные пациенты с клиническими проявлениями сердечной недостаточности; 10) пациенты с сопутствующим серьезным заболеванием печени (определяемым по показателям аспартатаминотрансферазы (ACT) и/или аланинаминотрансферазы (АЛТ), общего билирубина; 11) щелочной фосфатазы (ЩФ) в 2,5 раза выше верхней границы нормы) или нарушением функции почек (определяемой по показателю креатинина сыворотки более 1,2 мг/дл), тяжелой легочной дисфункцией (неконтролируемая бронхиальная астма и/или хроническая обструктивная болезнь легких [ХОБЛ]), или любым другим состоянием, которое может поставить под угрозу исследование; 12) наличие в анамнезе ВИЧ и других вирусных инфекций; 13) алкоголики и/или наркоманы; 14) предшествующее хирургическое лечение ожирения; 15) история гиперчувствительности к любому из растительных экстрактов или пищевых добавок; 16) беременная/кормящая женщина; 17) пациенты, принимавшие участие в любом другом клиническом испытании за последние шесть (06) месяцев; 18) любое другое
состояние, которое, по мнению главного исследователя, может поставить под угрозу исследование.
Рандомизация, распределение лечения и процедуры исследования Поскольку данное исследование было пилотным, не был рассчитан формальный объем выборки. Каждому участнику был присвоен 6-значный код рандомизации, и исследуемые продукты были распределены персоналом клиники в соответствии со списком кодов рандомизации, созданным независимым статистиком. Двойная анонимность в отношении исследуемых продуктов достигалась путем независимого маскирования наборов дозирования, и поэтому как персонал клиники, так и участники оставались в неведении относительно лечения, получаемого на протяжении всего исследования. Демографические показатели всех вовлеченных пациентов были зафиксированы во время скринингового визита (Таблица 11). В исследование были включены пациенты с ожирением, не получавшие другого лечения за последние 3 месяца. Всем зарегистрированным пациентам было рекомендовано придерживаться графика мероприятий (Таблица 14) исследования. Зарегистрированные пациенты были распределены между активными и плацебо-группами в соотношении 1:1. Пациенты использовали настоящий продукт в амбулаторных условиях и самостоятельно принимали две желатиновые капсулы в день (каждая весом 560 мг), которые были либо активными, либо представляли собой плацебо, по меньшей мере за 30 минут до еды, предпочтительно утром и вечером, в качестве пищевой добавки в течение периода 90 дней. Они должны были приходить для клинических оценок на 15-й день, 30-й день, 60-й и 90-й день. Последующее наблюдение по телефону проводили по меньшей мере через 15 дней после последнего планового визита для определения самочувствия пациента. Ежедневную потребленную пищу и физическую активность пациенты регистрировали в дневниках, предоставленных им при 1-ом посещении. Они проверялись и контролировались исследователями при всех последующих визитах. Соблюдение режима приема добавок проверяли при каждом посещении путем проверки возвращаемых добавок. Сбор данных во время этого клинического исследования и статистический анализ были выполнены отдельными функциональными группами и сертифицированным независимым статистиком, соответственно. Никакие изменения или поправки не были внесены в утвержденный протокол после начала исследования, и никакого промежуточного анализа не проводили в течение периода исследования. Результаты в области безопасности были
измерены путем: 1) физического осмотра и оценки основных жизненных показателей; 2) оценки сообщенных нежелательных явлений (АЕ), если таковые имелись. Результаты эффективности измеряли по 1) массе, ИМТ, окружности талии, окружности бедер и индекса талия/бедра.
Статистический анализ
Для анализа данных клинического исследования с участием людей использовали программное обеспечение для статистического анализа (SAS) версии 9.2. Парный t-критерий Стьюдента, ковариационный анализ (ANCOVA) и критерий Уилкоксона для связных выборок были использованы для соответствующих переменных набора данных для достижения наилучшего статистического заключения о различии между группой, принимавшей активный исследуемый материал и группой, принимавшей плацебо. Значение «р» менее 0,05 считалось статистически значимым. Базовые показатели были суммированы как средние и среднеквадратические отклонения для непрерывных переменных, и как частоты и проценты для дискретных переменных. Метод замены недостающих данных последним документированным значением (LOCF), совокупность всех рандомизированных пациентов согласно назначенному лечению, были использованы для оценки эффективности предметов исследования.
Результаты
Ни один из включенных в исследование пациентов не имел аномального медицинского анамнеза или физических отклонений, выявленных во время скринингового визита или при последующих визитах в ходе исследования. Не было выявлено никаких статистически значимых изменений жизненно важных показателей в группах исследования при любом посещении в ходе исследования. Из 30 рандомизированных пациентов, 26 полностью прошли исследование. Соотношение пациентов мужского и женского пола, прошедших все визиты в ходе исследования, составило 7:19, 3 женщины выбыли из исследования в разные моменты времени, причем анализ в конце исследования показал, что 3 из 4 выбывших пациентов получали плацебо. Процент соблюдения режима лечения у 26 пациентов, полностью прошедших исследование, был хорошим. Минимальный процент соблюдения режима лечения составлял 87,22%, а максимальный составлял 100% и наблюдался у 19 пациентов. Исследование не было досрочно прекращено и было остановлено только после достижения целевого размера выборки 30. Никаких статистически значимых
изменений жизненно важных показателей (Таблица 15) и никаких клинически значимых аномальных лабораторных показателей (Таблицы 16 и 17) не наблюдали от первого до последнего визита и между экспериментальными группами. В течение всего периода исследования было отмечено единственное нежелательное явление, и, по мнению исследователя, оно не была связано с исследуемым продуктом. В данном исследовании не было отмечено серьезных нежелательных явлений или значительных нежелательных явлений. Анализ эффективности этих первичных параметров показывает, что масса, ИМТ и окружность талии достигли статистической значимого различия между двумя экспериментальными группами к концу исследования, в то время как другие два параметра (окружность бедер и индекс талия/бедра) не показали никакого значительного различия между двумя экспериментальными группами. Для нескольких биохимических показателей, таких как определение общего холестерина, триглицеридов, липопротеинов низкой плотности, липопротеинов высокой плотности и липопротеинов очень низкой плотности, было обнаружено статистически значимое (р меньше 0,01) различие между пациентами из двух экспериментальных групп (Таблица 18). Фотографии пациентов до и после периода исследования ясно указывают на эффективность продукта.
Величины представляют собой среднее ± стандартная ошибка *р-значение определено с помощью парного t-критерия Стьюдента
Величины представляют собой среднее ± СКО
Величины представляют собой среднее ± СКО
В другом наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу снижения ожирения у людей, включающему стадию введения указанным людям перорально дважды в день композиции, содержащей этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%, для достижения эффектов уменьшения массы тела, индекса массы тела и окружности талии. В более конкретном варианте осуществления композиция, содержащая этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%, состоит, по существу, из пикеатаннола и его димеров. В еще более конкретных вариантах осуществления композиция, содержащая этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%, состоит, по существу, из пикеатаннола, сцирпусина А и сцирпусина В.
В еще одном наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения гиперхолестеринемии у людей, включающему стадию введения указанным людям перорально дважды в день композиции, содержащей этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%, для достижения эффектов (а) снижения системных уровней общего холестерина, липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и триглицеридов сыворотки, и (б) повышения системных уровней липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). В более конкретном варианте осуществления композиция, содержащая этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%, состоит, по существу, из пикеатаннола и его димеров. В еще более конкретных вариантах осуществления композиция, содержащая этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов 5%, состоит, по существу, из пикеатаннола, сцирпусина А и сцирпусина В.
В качестве дополнительного иллюстративного варианта осуществления настоящее изобретение относится к способу снижения ожирения у людей, включающему стадию введения указанным людям перорально дважды в день композиции, содержащей этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, для достижения эффектов уменьшения массы тела, индекса массы тела и окружности талии.
В более конкретном варианте осуществления композиция, содержащая этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, состоит, по существу, из пикеатаннола и его димеров. В еще более конкретных вариантах осуществления композиция, содержащая
этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, состоит, по существу, из пикеатаннола, сцирпусина А и сцирпусина В.
В качестве дополнительного иллюстративного примера настоящее изобретение также относится к способу лечения гиперхолестеринемии у людей, включающему стадию введения указанным людям перорально дважды в день композиции, содержащей этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, для достижения эффектов (а) снижения системных уровней общего холестерина, липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и триглицеридов сыворотки, и (б) повышения системных уровней липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). В более конкретном варианте осуществления композиция, содержащая этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, состоит, по существу, из пикеатаннола и его димеров. В еще более конкретных вариантах осуществления композиция, содержащая этилацетатную фракцию экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, состоит, по существу, из пикеатаннола, сцирпусина А и сцирпусина В.
Несмотря на то, что изобретение было описано в отношении предпочтительного варианта осуществления, специалистам в данной области должно быть понятно, что изобретение им не ограничено. Скорее, объем настоящего изобретения следует толковать только в сочетании с прилагаемой формулой изобретения.
Claims (10)
1. Композиция, содержащая этилацетатную фракцию метанольного экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, для снижения ожирения у людей.
2. Композиция, содержащая этилацетатную фракцию метанольного экстракта корневищ Cyperus rotundus, нормированную до общего содержания стильбенов более 3%, для лечения гиперхолестеринемии у людей.
3. Композиция по п. 1 или 2, где этилацетатная фракция метанольного экстракта корневищ Cyperus rotundus нормирована до общего содержания стильбенов 5%.
4. Композиция по любому из пп. 1-3, где композиция состоит, по существу, из пикеатаннола и его димеров.
5. Композиция по п. 4, где композиция состоит, по существу, из комбинации пикеатаннола, сцирпусина B и сцирпусина A.
6. Применение композиции по п. 1 для достижения эффектов уменьшения массы тела, индекса массы тела и окружности талии.
7. Применение композиции по п. 2 для поддержания нормальных системных уровней липидов посредством достижения эффектов (а) снижения системных уровней общего холестерина, липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и триглицеридов сыворотки и (б) повышения системных уровней липопротеинов высокой плотности (ЛПВП).
8. Применение по п. 6 или 7, где этилацетатная фракция метанольного экстракта корневищ Cyperus rotundus в указанной композиции нормирована до общего содержания стильбенов 5%.
9. Применение по любому из пп. 6-8, где композиция состоит, по существу, из пикеатаннола и его димеров.
10. Применение по п. 9, где композиция состоит, по существу, из комбинации пикеатаннола, сцирпусина B и сцирпусина A.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14/705,111 US9782450B2 (en) | 2012-07-18 | 2015-05-06 | Composition comprising scirpusin A and scirpusin B and anti-obesity potential thereof |
| US14/705,111 | 2015-05-06 | ||
| PCT/US2015/065441 WO2016178716A1 (en) | 2015-05-06 | 2015-12-14 | Composition comprising scirpusin a and scirpusin b and anti-obesity potential thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017134707A3 RU2017134707A3 (ru) | 2019-06-06 |
| RU2017134707A RU2017134707A (ru) | 2019-06-06 |
| RU2691404C2 true RU2691404C2 (ru) | 2019-06-13 |
Family
ID=57218219
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017134707A RU2691404C2 (ru) | 2015-05-06 | 2015-12-14 | Композиция, содержащая сцирпусин а и сцирпусин в, и ее потенциал в качестве средства против ожирения |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3291805B1 (ru) |
| JP (1) | JP6759243B2 (ru) |
| AU (1) | AU2015394033B2 (ru) |
| CA (1) | CA2979195A1 (ru) |
| ES (1) | ES2835306T3 (ru) |
| RU (1) | RU2691404C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201707106UA (ru) |
| WO (1) | WO2016178716A1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4745989B2 (ja) * | 2007-01-31 | 2011-08-10 | イスクラ産業株式会社 | 肝組織コレステロール改善剤 |
| US20120128808A1 (en) * | 2009-08-04 | 2012-05-24 | Laila Nutraceuticals | Agents from ficus hispida for the amelioration of metabolic syndrome and related diseases |
| WO2014015067A2 (en) * | 2012-07-18 | 2014-01-23 | Muhammed Majeed | Composition comprising scirpusin a and scirpusin b anti-obesity potential thereof |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101274050B (zh) * | 2007-03-28 | 2011-05-18 | 复旦大学 | 荆三棱在制备治疗艾滋病药物中的用途 |
-
2015
- 2015-12-14 EP EP15891398.8A patent/EP3291805B1/en active Active
- 2015-12-14 AU AU2015394033A patent/AU2015394033B2/en active Active
- 2015-12-14 JP JP2017557961A patent/JP6759243B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2015-12-14 SG SG11201707106UA patent/SG11201707106UA/en unknown
- 2015-12-14 CA CA2979195A patent/CA2979195A1/en not_active Abandoned
- 2015-12-14 ES ES15891398T patent/ES2835306T3/es active Active
- 2015-12-14 RU RU2017134707A patent/RU2691404C2/ru active
- 2015-12-14 WO PCT/US2015/065441 patent/WO2016178716A1/en active Application Filing
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4745989B2 (ja) * | 2007-01-31 | 2011-08-10 | イスクラ産業株式会社 | 肝組織コレステロール改善剤 |
| US20120128808A1 (en) * | 2009-08-04 | 2012-05-24 | Laila Nutraceuticals | Agents from ficus hispida for the amelioration of metabolic syndrome and related diseases |
| WO2014015067A2 (en) * | 2012-07-18 | 2014-01-23 | Muhammed Majeed | Composition comprising scirpusin a and scirpusin b anti-obesity potential thereof |
| US20140024706A1 (en) * | 2012-07-18 | 2014-01-23 | Muhammed Majeed | Composition comprising scirpusin a and scirpusin b and anti-adipogenesis/anti-obesity potential thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ф-ла. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2979195A1 (en) | 2016-11-10 |
| JP2018515500A (ja) | 2018-06-14 |
| EP3291805A1 (en) | 2018-03-14 |
| AU2015394033B2 (en) | 2020-10-22 |
| ES2835306T3 (es) | 2021-06-22 |
| RU2017134707A3 (ru) | 2019-06-06 |
| RU2017134707A (ru) | 2019-06-06 |
| JP6759243B2 (ja) | 2020-09-23 |
| EP3291805B1 (en) | 2020-09-16 |
| SG11201707106UA (en) | 2017-09-28 |
| AU2015394033A1 (en) | 2017-09-21 |
| WO2016178716A1 (en) | 2016-11-10 |
| EP3291805A4 (en) | 2018-11-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI444194B (zh) | 抗癌萃取物及化合物 | |
| AU771275B2 (en) | Treatment of diabetic nephropathy and microalbuminuria | |
| Anioke et al. | Investigation into hypoglycemic, antihyperlipidemic, and renoprotective potentials of Dennettia tripetala (Pepper Fruit) seed in a rat model of diabetes | |
| Li et al. | Fengshi Qutong capsule ameliorates bone destruction of experimental rheumatoid arthritis by inhibiting osteoclastogenesis | |
| KR101600212B1 (ko) | 스키르푸신 a 및 스키르푸신 b를 포함하는 조성물 및 이의 항비만 가능성 | |
| US10172903B2 (en) | Composition comprising scirpusin A and scirpusin B and anti-obesity potential thereof | |
| He et al. | The antiinflammatory effects of Xuefu Zhuyu decoction on C3H/HeJ mice with alopecia areata | |
| US10272127B2 (en) | Composition containing stilbene glycoside and preparation and uses thereof for treating diabetes | |
| RU2691404C2 (ru) | Композиция, содержащая сцирпусин а и сцирпусин в, и ее потенциал в качестве средства против ожирения | |
| Zhai et al. | Study on evaluation of toxicology and quality control of Yimusake tablet | |
| Wang et al. | Phlorizin Regulates Synovial Hyperplasia and Inflammation in Rats With Rheumatoid Arthritis by Regulating the mTOR Pathway | |
| OBIDIKE et al. | Hypoglycemic and hypolipidemic effects of Potulaca oleracea aqueous extract is mediated by down regulation of cortisol | |
| EP1841441B1 (en) | Brachystemma calycinum extract for osteoarthritis | |
| Ma et al. | Thinned young apple polyphenols may prevent neuronal apoptosis by up-regulating 5-hydroxymethylcytosine in the cerebral cortex of high-fat diet-induced diabetic mice | |
| Rahman et al. | Effect of Ashwagandharishta on the lipid profile of male and female rats | |
| US20230226131A1 (en) | Therapeutic herbal compositions for improving liver health | |
| Anioke et al. | Research Article Investigation into Hypoglycemic, Antihyperlipidemic, and Renoprotective Potentials of Dennettia tripetala (Pepper Fruit) Seed in a Rat Model of Diabetes | |
| Qiu et al. | Fenugreek extract improves diabetes-induced endothelial dysfunction via the arginase 1 pathway | |
| Fokou Nzodjou et al. | Antihypertensive Potential of the Ethanolic Extract of the Stem Bark of Canarium Schweinfurthii Engl.(Burseraceae) in Wistar Rats: Uplc-Esi-Qtof-Ms/Ms-Based Prediction of Antihypertensive Phytochemicals | |
| CN106606501A (zh) | 连翘苷元在制备预防或治疗系统性红斑狼疮药物中的应用 |