RU2686992C2 - Аптамер для fgf2 и его применение - Google Patents
Аптамер для fgf2 и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2686992C2 RU2686992C2 RU2016141263A RU2016141263A RU2686992C2 RU 2686992 C2 RU2686992 C2 RU 2686992C2 RU 2016141263 A RU2016141263 A RU 2016141263A RU 2016141263 A RU2016141263 A RU 2016141263A RU 2686992 C2 RU2686992 C2 RU 2686992C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- aptamer
- fgf2
- group
- paragraphs
- nucleotide
- Prior art date
Links
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 title claims abstract description 435
- 101150019331 FGF2 gene Proteins 0.000 title 1
- YSFTYXKQUONNFY-NQXPEFQPSA-N fgf2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 YSFTYXKQUONNFY-NQXPEFQPSA-N 0.000 title 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims abstract description 170
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims abstract description 168
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 128
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 126
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 50
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims abstract description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 23
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000036407 pain Effects 0.000 claims abstract description 12
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 claims description 61
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 61
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 54
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 41
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 39
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 claims description 38
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 36
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 31
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 30
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 24
- 239000002719 pyrimidine nucleotide Substances 0.000 claims description 24
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 claims description 23
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 22
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 19
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 claims description 19
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 claims description 17
- 102000044168 Fibroblast Growth Factor Receptor Human genes 0.000 claims description 17
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 15
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 9
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 claims description 8
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 5
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 claims description 5
- 125000000561 purinyl group Chemical class N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 claims 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 32
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 32
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 32
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 31
- 239000002585 base Substances 0.000 description 30
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 24
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 24
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 17
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 16
- -1 VEGF Proteins 0.000 description 15
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 15
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 15
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 14
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 14
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 102000003971 Fibroblast Growth Factor 1 Human genes 0.000 description 11
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Chemical class 0.000 description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 11
- 101100281008 Homo sapiens FGF2 gene Proteins 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 10
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 101150021185 FGF gene Proteins 0.000 description 9
- 241001662443 Phemeranthus parviflorus Species 0.000 description 9
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 9
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 8
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 8
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 8
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 7
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 6
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 6
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 6
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 6
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 5
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 102000008108 Osteoprotegerin Human genes 0.000 description 5
- 108010035042 Osteoprotegerin Proteins 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 5
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 5
- XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N octadec-7-ynoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC#CCCCCCC(O)=O XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 5
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 4
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 4
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 4
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 4
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 4
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 3
- ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F Chemical compound Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 3
- 102100023593 Fibroblast growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710182386 Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100027844 Fibroblast growth factor receptor 4 Human genes 0.000 description 3
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 3
- 101000917134 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor 4 Proteins 0.000 description 3
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 3
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 3
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 3
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 3
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 3
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FVCSARBUZVPSQF-UHFFFAOYSA-N 5-(2,4-dioxooxolan-3-yl)-7-methyl-3a,4,5,7a-tetrahydro-2-benzofuran-1,3-dione Chemical compound C1C(C(OC2=O)=O)C2C(C)=CC1C1C(=O)COC1=O FVCSARBUZVPSQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102100031734 Fibroblast growth factor 19 Human genes 0.000 description 2
- 102100023600 Fibroblast growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710182389 Fibroblast growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000846394 Homo sapiens Fibroblast growth factor 19 Proteins 0.000 description 2
- 101001052035 Homo sapiens Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000692455 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 2
- 206010023203 Joint destruction Diseases 0.000 description 2
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 2
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 2
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 description 2
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 238000006254 arylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- KYKAJFCTULSVSH-UHFFFAOYSA-N chloro(fluoro)methane Chemical class F[C]Cl KYKAJFCTULSVSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 229940124447 delivery agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000006200 ethylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 2
- NNPPMTNAJDCUHE-UHFFFAOYSA-N isobutane Chemical compound CC(C)C NNPPMTNAJDCUHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002669 linoleoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 235000015205 orange juice Nutrition 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N tioguanine Chemical compound N1C(N)=NC(=S)C2=C1N=CN2 WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 description 1
- FPVKHBSQESCIEP-UHFFFAOYSA-N (8S)-3-(2-deoxy-beta-D-erythro-pentofuranosyl)-3,6,7,8-tetrahydroimidazo[4,5-d][1,3]diazepin-8-ol Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NCC2O)=C2N=C1 FPVKHBSQESCIEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- LKJPYSCBVHEWIU-KRWDZBQOSA-N (R)-bicalutamide Chemical compound C([C@@](O)(C)C(=O)NC=1C=C(C(C#N)=CC=1)C(F)(F)F)S(=O)(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LKJPYSCBVHEWIU-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- LVGUZGTVOIAKKC-UHFFFAOYSA-N 1,1,1,2-tetrafluoroethane Chemical compound FCC(F)(F)F LVGUZGTVOIAKKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJDIZQLSFPQPEY-UHFFFAOYSA-N 1,1,2-Trichlorotrifluoroethane Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(Cl)Cl AJDIZQLSFPQPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloro-1,1,2,2-tetrafluoroethane Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(F)Cl DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- OHMHBGPWCHTMQE-UHFFFAOYSA-N 2,2-dichloro-1,1,1-trifluoroethane Chemical compound FC(F)(F)C(Cl)Cl OHMHBGPWCHTMQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGYUQZIGNZFZJS-KTKRTIGZSA-N 2-[2-[(z)-octadec-9-enoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCCOCCO MGYUQZIGNZFZJS-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- JKXYOQDLERSFPT-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-octadecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO JKXYOQDLERSFPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- PMUNIMVZCACZBB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethylazanium;chloride Chemical compound Cl.NCCO PMUNIMVZCACZBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- ZLOIGESWDJYCTF-UHFFFAOYSA-N 4-Thiouridine Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=S)C=C1 ZLOIGESWDJYCTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLOIGESWDJYCTF-XVFCMESISA-N 4-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=S)C=C1 ZLOIGESWDJYCTF-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- KSNXJLQDQOIRIP-UHFFFAOYSA-N 5-iodouracil Chemical compound IC1=CNC(=O)NC1=O KSNXJLQDQOIRIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLCZTRVUXYALDD-IBGZPJMESA-N 7-[[(2s)-2,6-bis(2-methoxyethoxycarbonylamino)hexanoyl]amino]heptoxy-methylphosphinic acid Chemical compound COCCOC(=O)NCCCC[C@H](NC(=O)OCCOC)C(=O)NCCCCCCCOP(C)(O)=O WLCZTRVUXYALDD-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102100022987 Angiogenin Human genes 0.000 description 1
- 102000009075 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010048036 Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010071155 Autoimmune arthritis Diseases 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical class C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N Carmustine Chemical compound ClCCNC(=O)N(N=O)CCCl DLGOEMSEDOSKAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- VOPWNXZWBYDODV-UHFFFAOYSA-N Chlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)Cl VOPWNXZWBYDODV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTOAARAWEBMLNO-KVQBGUIXSA-N Cladribine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(Cl)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 PTOAARAWEBMLNO-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 101100520033 Dictyostelium discoideum pikC gene Proteins 0.000 description 1
- 101100015729 Drosophila melanogaster drk gene Proteins 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100024802 Fibroblast growth factor 23 Human genes 0.000 description 1
- 102100027842 Fibroblast growth factor receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710182396 Fibroblast growth factor receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100021066 Fibroblast growth factor receptor substrate 2 Human genes 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101100120051 Homo sapiens FGF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001051973 Homo sapiens Fibroblast growth factor 23 Proteins 0.000 description 1
- 101000818410 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor substrate 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000779418 Homo sapiens RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 101100390675 Mus musculus Fgf15 gene Proteins 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 description 1
- 238000010934 O-alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 1
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100030485 Platelet-derived growth factor receptor alpha Human genes 0.000 description 1
- 101710148465 Platelet-derived growth factor receptor alpha Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical group CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 108010017898 Shiga Toxins Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N Sorbitan monooleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPMWEFXCIYCJSA-UHFFFAOYSA-N Tetraethylene glycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCO WPMWEFXCIYCJSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N Thiotepa Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- IVTVGDXNLFLDRM-HNNXBMFYSA-N Tomudex Chemical compound C=1C=C2NC(C)=NC(=O)C2=CC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)S1 IVTVGDXNLFLDRM-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010073923 Vascular Endothelial Growth Factor C Proteins 0.000 description 1
- 102000009520 Vascular Endothelial Growth Factor C Human genes 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- LWZFANDGMFTDAV-BURFUSLBSA-N [(2r)-2-[(2r,3r,4s)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl] dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O LWZFANDGMFTDAV-BURFUSLBSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 229940059260 amidate Drugs 0.000 description 1
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 108010072788 angiogenin Proteins 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940045719 antineoplastic alkylating agent nitrosoureas Drugs 0.000 description 1
- 229940045696 antineoplastic drug podophyllotoxin derivative Drugs 0.000 description 1
- 229940045985 antineoplastic platinum compound Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 229910052586 apatite Inorganic materials 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 108010045569 atelocollagen Proteins 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 229940120638 avastin Drugs 0.000 description 1
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 229960000997 bicalutamide Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H calcium citrate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FNAQSUUGMSOBHW-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000001354 calcium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960004256 calcium citrate Drugs 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001714 calcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 1
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 229960005243 carmustine Drugs 0.000 description 1
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960002436 cladribine Drugs 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000447 dimerizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N duocarmycin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=C2NC(C(=O)N3C4=CC(=O)C5=C([C@@]64C[C@@H]6C3)C=C(N5)C(=O)OC)=CC2=C1 VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N 0.000 description 1
- 229960005501 duocarmycin Drugs 0.000 description 1
- 229930184221 duocarmycin Natural products 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- 229960001842 estramustine Drugs 0.000 description 1
- FRPJXPJMRWBBIH-RBRWEJTLSA-N estramustine Chemical compound ClCCN(CCCl)C(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 FRPJXPJMRWBBIH-RBRWEJTLSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N etomidate Chemical compound CCOC(=O)C1=CN=CN1[C@H](C)C1=CC=CC=C1 NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 1
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000003682 fluorination reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 1
- 101150098203 grb2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008311 hydrophilic ointment Substances 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001341 hydroxy propyl starch Substances 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000013828 hydroxypropyl starch Nutrition 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- LIKBJVNGSGBSGK-UHFFFAOYSA-N iron(3+);oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[Fe+3].[Fe+3] LIKBJVNGSGBSGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001282 iso-butane Substances 0.000 description 1
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940092110 macugen Drugs 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical class ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 229960003775 miltefosine Drugs 0.000 description 1
- PQLXHQMOHUQAKB-UHFFFAOYSA-N miltefosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C PQLXHQMOHUQAKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 1
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N n-butane Chemical compound CCCC IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 201000003142 neovascular glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 229940045711 nitrogen mustard analogues Drugs 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 229940045795 other cytotoxic antibiotic in ATC Drugs 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- VSIIXMUUUJUKCM-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;fluoride;triphosphate Chemical compound [F-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O VSIIXMUUUJUKCM-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 229960002340 pentostatin Drugs 0.000 description 1
- FPVKHBSQESCIEP-JQCXWYLXSA-N pentostatin Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC[C@H]2O)=C2N=C1 FPVKHBSQESCIEP-JQCXWYLXSA-N 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 150000003058 platinum compounds Chemical class 0.000 description 1
- YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N podophyllotoxin Chemical class COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N 0.000 description 1
- 239000003600 podophyllotoxin derivative Substances 0.000 description 1
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 description 1
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000035409 positive regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 1
- 229940043274 prophylactic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000763 radioactive isotope labeling Methods 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 229960004432 raltitrexed Drugs 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229910001467 sodium calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 1
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 1
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 235000011067 sorbitan monolaureate Nutrition 0.000 description 1
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- WFWLQNSHRPWKFK-ZCFIWIBFSA-N tegafur Chemical compound O=C1NC(=O)C(F)=CN1[C@@H]1OCCC1 WFWLQNSHRPWKFK-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- 229960001674 tegafur Drugs 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 229960001196 thiotepa Drugs 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 229960003087 tioguanine Drugs 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000013337 tricalcium citrate Nutrition 0.000 description 1
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 229960000875 trofosfamide Drugs 0.000 description 1
- UMKFEPPTGMDVMI-UHFFFAOYSA-N trofosfamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)OCCCN1CCCl UMKFEPPTGMDVMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 1
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000003871 white petrolatum Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/115—Aptamers, i.e. nucleic acids binding a target molecule specifically and with high affinity without hybridising therewith ; Nucleic acids binding to non-nucleic acids, e.g. aptamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/16—Aptamers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/317—Chemical structure of the backbone with an inverted bond, e.g. a cap structure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/322—2'-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/344—Position-specific modifications, e.g. on every purine, at the 3'-end
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
- C12N2310/3521—Methyl
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
- C12N2310/3533—Halogen
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Transplantation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая в себя аптамер, связывающийся с FGF2; комплекс для связывания аптамера с FGF2; лекарственные средства для лечения или профилактики заболевания, сопровождаемого ангиогенезом; заболевания костей и суставов; боли; способ лечения или профилактики вышеперечисленных заболеваний, применение вышеуказанного аптамера или комплекса в получении лекарственного средства для лечения или профилактики вышеперечисленных заболеваний. В одном из вариантов аптамер содержит нуклеотидную последовательность, представленную формулой (1)
N1GGAN2ACUAGGGCN3UUAAN4GUN5ACCAGUGUN6 (формула 1)
Изобретение расширяет арсенал средств для связывания FGF2. 11 н. и 10 з.п. ф-лы, 3 ил., 9 табл., 7 пр.
Description
Область техники
[0001]
Настоящее изобретение относится к аптамеру для FGF2, способу его применения и т.п.
Предшествующий уровень техники
[0002]
Основной фактор роста фибробластов (FGF2 или bFGF) является фактором роста, секретируемым различными клетками, в значительной степени, участвующим в клеточной пролиферации и дифференцировке на стадиях развития и демонстрирующим высокую экспрессию в течение восстановления тканей и в тканях злокачественных новообразований у взрослых.
[0003]
Хотя FGF2 человека имеет множество изоформ, лишь изоформа, имеющая наименьшую молекулярную массу, секретируется внеклеточно. Эта изоформа является белком массой приблизительно 18 кДа, состоящим из 154 аминокислот, не содержащим сахарную цепь и имеющим основную изоэлектрическую точку 9,4. Хотя функция высокомолекулярных изоформ (22, 22,5, 24, 34 кДа) FGF2 с разными открытыми рамками считывания не ясна, считают, что они имеют сигнал ядерной локализации и функцию в ядре.
[0004]
Известно, что белки семейства FGF человека включают 22 типа от FGF1 до FGF23 (FGF15 и FGF19 теперь объединены в FGF19, т.к. они являются одинаковыми молекулами). Посредством филогенетического анализа FGF2 классифицируют в подсемейство FGF1 вместе с FGF1. Гомология аминокислотной последовательности с FGF1 является самой высокой среди всех FGF, и ее значение составляет 55%. Рецептор FGF (FGFR) является рецепторной тирозинкиназой, и его классифицируют на 4 подтипа. Известно, что каждый из FGFR1-3 включает изоформы b и c. FGF2 связывается с FGFR1b, FGFR1c, FGFR2c и FGFR3c и FGFR4, таким образом, димеризуя эти рецепторы.
[0005]
Фибробласты мыши (клетки NIH-3T3) экспрессируют FGFR1 на поверхности клеточной мембраны. Известно, что FGFR1 активируется при связывании с FGF2 человека. Когда FGF2 связывается с FGFR1, путь киназы MAP (митоген-активируемой протеинкиназы), путь PIK3 (фосфатидилинозитол-3-киназы)/AKT1 (протеинкиназы B) и т.п. активируются посредством FRS2 (субстрата 2 рецептора фактора роста фибробластов), Grb2 (белка 2, связанного с рецептором фактора роста), SOS и, в конечном итоге, индуцируют экспрессию различных генов цитокинов и рецепторов, таких как VEGF (предшественник фактора роста эндотелия сосудов)-A, VEGF-C, HGF (фактор роста гепатоцитов), ангиопоэтин-2, VEGFR, PDGFR-α (рецептор-α фактора роста тромбоцитов бета) и т.п.
[0006]
FGF2 содержит гепарин-связывающую область и, подобно другим FGF, связывается с гепарином и гепарансульфатом. Как правило, считают, что FGF2, секретируемый клеткой, связан с гепарансульфатом внеклеточного матрикса, концентрирован и защищен от протеазы. Чтобы функционировать в качестве лиганда, FGF2 должен высвобождаться из внеклеточного матрикса, с которым он связан, в котором FGF-BP (FGF-связанный белок), как сообщают, участвует в стимуляции индукции FGFR.
[0007]
Известно, что FGF2 обладает сильным эффектом, способствующим росту, клеточной миграции, в отношении эндотелиальных клеток сосудов и, в значительной степени, участвует в ангиогенезе опухолевых тканей. Сообщают об особенно высокой концентрации FGF2 в сыворотке в опухоли с множеством кровеносных сосудов, например, злокачественной опухоли почки и т.п., и FGF2 присутствует в различных других опухолях, таких как рак предстательной железы, рак молочной железы, рак легких и т.п.
[0008]
Помимо FGF2, в ангиогенезе участвуют факторы, такие как FGF1, VEGF, ФНО (фактор некроза опухоли), PDGF, EGF (эпидермальный фактор роста), MMP (матричная металлопротеиназа), ангиогенин и т.п. Эти факторы секретируются из опухоли, ангиобластических клеток, поддерживающих клеток и т.п. и участвуют в ангиогенезе в качестве аутокринных или паракринных факторов роста. Однако FGF2 отличается от других факторов, т.к. он действует не только в отношении эндотелиальных клеток сосудов, но также и мезенхимальных клеток, окружающих эндотелиальные клетки, таких как гладкомышечная клетка и т.п. Другими словами, считают, что FGF2 стимулирует мезенхимальные клетки так, что они способствуют экспрессии PDGF, PDGFR, VEGF, HGF и т.п., и эти факторы напрямую повышают рост эндотелиальных клеток сосудов.
[0009]
К настоящему времени предпринято множество попыток разработать лекарственное средство, ингибирующее аномальный ангиогенез в опухолевой ткани для блокирования пути снабжения питательными веществами опухолевой ткани. Существует лекарственное средство, фактически используемое в клинических условиях, такое как гуманизированное моноклональное антитело против VEGF (авастин (зарегистрированная торговая марка)), разработанное Genentech, которое, как подтверждено, демонстрирует эффект в отношении рака толстого кишечника и немелкоклеточного рака легких. Однако до сих пор не разработано сильное противоопухолевое лекарственное средство. Многие из этих лекарственных средств направлены против VEGF и PDGF, и ожидают, что они будут блокировать начальные стадии аномального ангиогенеза, воздействуя на FGF2, функционирующего на более высоких стадиях каскада.
[0010]
Аномальный ангиогенез, помимо опухоли, вовлечен в такие заболевания, как хронические воспаления (например, пародонтоз, склеродермия, неоваскулярная глаукома, артрит и т.п.), псориаз, возрастная дегенерация желтого пятна и т.п.
[0011]
С другой стороны, предпринята попытка использовать сильное ангиогенное действие FGF2 для лечения окклюзирующих сосудистых нарушений и заживления ран. Фактически, препарат FGF2 человека (спрей FIBLAST (зарегистрированная торговая марка)) Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. уже одобрен и продается в качестве лекарственного средства для стимуляции заживления ран.
[0012]
Хотя известно, что FGF2 обладает эффектом стимуляции остеогенеза, он также привлекает к себе внимание в качестве фактора, стимулирующего резорбцию кости, т.к. он участвует в разрушении сустава у пациентов с хроническим ревматоидным артритом. При хроническом ревматоидном артрите, отличающемся аутоиммунным артритом, количество остеокластов повышается для стимуляции резорбции кости, что, в свою очередь, приводит к прогрессированию разрушения кости.
FGF2 стимулирует мезенхимальные клетки так, что они способствуют экспрессии воспалительных цитокинов и факторов роста, таких как PDGF, PDGFR, VEGF, HGF и т.п., а также способствуют ангиогенезу и индуцируют разрушение кости. Выясняли, что FGF2 является ключевой молекулой, вовлеченной в серьезную патологию при хроническом ревматоидном артрите (непатентный документ 1).
[0013]
Остеопротегерин (OPG) является рецептором-ловушкой индуктора остеокластов, RANKL, и известно, что он является антагонистом RANK и супрессирует индукцию дифференцировки в остеокластах и их функцию (непатентный документ 2). Также известно, что OPG, продуцируемый синовиальными клетками, супрессируется при стимуляции FGF2 (непатентный документ 3). Кроме того, FGF2 способствует взаимодействию остеобластов и клеток-предшественников остеокластов посредством индукции высокой экспрессии RANKL остеобластами, в результате чего он стимулирует дифференцировку в остеокласт и активацию (непатентный документ 4).
Если можно будет контролировать функцию FGF2, то, в значительной степени, следует ожидать эффекта в виде терапевтического лекарственного средства в случае разрушения сустава посредством активации остеокласта. Фактически, известно, что прямое введение нейтрализующего антитела против FGF2 в сустав в модели AIA на крысах смягчает симптом. Однако, супрессирующий эффект в отношении его дебюта является небольшим, и, в частности, лечебный эффект посредством введения после дебюта не подтвержден (непатентный документ 5).
[0014]
В последние годы, внимание привлекает использование аптамеров РНК для лекарственных средств, диагностических реагентов и тестовых реагентов; некоторые аптамеры РНК уже находятся на стадии клинических исследований или практического применения. В декабре 2004 года первое в мире лекарственное средство на основе аптамера РНК, макуген, одобрено в США в качестве терапевтического лекарственного средства для возрастной дегенерации желтого пятна. Аптамер РНК относится к РНК, специфически связывающейся с веществом-мишенью, таким как белок, и которую можно получать с использованием способа SELEX (систематической эволюции лигандов экспоненциальным обогащением) (см. патентные документы 1-3). В способе SELEX РНК, специфически связывающаяся с веществом-мишенью, выбрана из совокупности РНК с приблизительно 1014 различными нуклеотидными последовательностями. Используемая структура РНК имеет случайную последовательность из приблизительно 40 остатков, фланкируемых последовательностями праймеров. Этой совокупности РНК позволяют собираться с веществом-мишенью, и только РНК, связавшуюся с веществом-мишенью, собирают с использованием фильтра и т.п. Собранную РНК амплифицируют посредством RT-ПЦР и используют ее в качестве матрицы для следующего раунда. Повторяя эту операцию приблизительно 10 раз, иногда можно получать аптамер РНК, специфически связывающийся с веществом-мишенью.
[0015]
В патентном документе 4 описывают аптамер, связывающийся с FGF2, получаемый указанным выше способом SELEX. Однако последовательности аптамеров отличаются от аптамеров, конкретно приведенных в настоящем описании. Кроме того, в этом документе не предлагают аптамеры, конкретно приведенные в настоящем описании.
[Список документов]
[Патентные документы]
[0016]
Патентный документ 1: WO 91/19813
Патентный документ 2: WO 94/08050
Патентный документ 3: WO 95/07364
Патентный документ 4: WO 2011/099576
[Непатентные документы]
[0017]
Непатентный документ 1: Manabe N. et al. Reumatology. 1999; 38; 714-720
Непатентный документ 2: Yasuda H. et al. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1998; 95; 3597-3602
Непатентный документ 3: Yano K. et al. J. Bone Miner Metab. 2001; 19; 365-372
Непатентный документ 4: Roccisana JL et al. J. Biol. Chem. 279: 10500-10507 (2004)
Непатентный документ 5: Yamashita A. et al. J. Immunol. 2002; 168; 450-457
[СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ]
[Задачи, подлежащие решению посредством изобретения]
[0018]
Настоящее изобретение относится к получению аптамера для FGF2 и способу его применения, и т.п.
[Способы решения задач]
[0019]
Авторы настоящего изобретения осуществляли активные исследования для решения описываемой выше задачи и преуспели в получении аптамера хорошего качества для FGF2, что приводило к осуществлению настоящего изобретения.
[0020]
Таким образом, настоящее изобретение представляет собой следующее.
[1] Аптамер, связывающийся с FGF2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную следующей формулой (1) (где урацил, необязательно, представляет собой тимин) и являющуюся следующей (a) или (b):
N1GGAN2ACUAGGGCN3UUAAN4GUN5ACCAGUGUN6 (формула 1)
каждый из N1 и N6 независимо являются любым из от 0 до нескольких оснований,
N2, N3, N4 и N5 независимо являются любым основанием,
(a) аптамер, где в нуклеотидах, содержащихся в аптамере,
(i) 2'-положение рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является атомом фтора,
(ii) 2'-положение рибозы каждого пуринового нуклеотида является гидроксигруппой;
(b) аптамер (a), где
(i) атом фтора в 2'-положении рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является независимо незамещенным или замещенным атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы и метоксигруппы,
(ii) гидроксигруппа в 2'-положении рибозы каждого пуринового нуклеотида является независимо незамещенной или замещенной атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, метоксигруппы и атома фтора.
[2] Аптамер по п. [1], где
N1 является G, GG, AG, C или пропуском,
N2 является A или U,
N3 является G, C или A,
N4 является G, C или U,
N5 является G или U, и
N6 является UUCN61 или AGUCN62, где N61 и N62 каждый независимо является любым из от 0 до нескольких оснований.
[3] Аптамер по п. [1] или [2], содержащий нуклеотидную последовательность, представленную следующей формулой (2) или (3):
GGGAAACUAGGGCGUUAACGUGACCAGUGUUUCN61 (формула 2)
N1GGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCN62 (формула 3).
[4] Аптамер по любому из пп. [1]-[3], содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2 или 7.
[5] Аптамер по любому из пп. [1]-[3], содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, 3, 4, 5, 6, 8, 10 или 11.
[6] Аптамер по любому из пп. [1]-[5], где 1 или несколько нуклеотидов являются замещенными, делетированными, встроенными или добавленными, являющийся
(a) аптамером, где в нуклеотидах, содержащихся в аптамере,
(i) 2'-положение рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является атомом фтора,
(ii) 2'-положение рибозы каждого пуринового нуклеотида является гидроксигруппой;
(b) аптамером по п. (a), где
(i) атом фтора в 2'-положении рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является независимо незамещенным или замещенным атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы и метоксигруппы,
(ii) гидроксигруппа в 2'-положении рибозы каждого пуринового нуклеотида является независимо незамещенной или замещенной атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, метоксигруппы и атома фтора.
[7] Аптамер по любому из пп. [1]-[6], имеющий длину не более 45 нуклеотидов.
[8] Аптамер по любому из пп. [1]-[7], ингибирующий связывание FGF2 и рецептора FGF.
[9] Аптамер по любому из пп. [1]-[8], где по меньшей мере один нуклеотид является модифицированным.
[10] Комплекс, содержащий аптамер по любому из пп. [1]-[9] и функциональное вещество.
[11] Комплекс по п. [10], где функциональное вещество является аффинным веществом, веществом для мечения, ферментом, средством для доставки лекарственного средства или лекарственным средством.
[12] Лекарственное средство, содержащее аптамер по любому из пп. [1]-[9] или комплекс по пп. [10] или [11].
[13] Лекарственное средство для лечения или профилактики заболевания, сопровождаемого ангиогенезом, заболевания костей и суставов или боли, содержащее аптамер по любому из пп. [1]-[9] или комплекс по пп. [10] или [11].
[14] Способ лечения или профилактики заболевания, сопровождаемого ангиогенезом, заболевания костей и суставов или боли, включающий введение индивидууму эффективного количества аптамера по любому из пп. [1]-[9] или комплекса по пп. [10] или [11].
[15] Аптамер по любому из пп. [1]-[9] или комплекс по пп. [10] или [11] для применения в лечении или профилактике заболевания, сопровождаемого ангиогенезом, заболевания костей и суставов или боли.
[16] Применение аптамера по любому из пп. [1]-[9] или комплекса по пп. [10] или [11] в получении лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания, сопровождаемого ангиогенезом, заболевания костей и суставов или боли.
[Эффект изобретения]
[0021]
Аптамер и комплекс по настоящему изобретению могут быть применимыми в качестве терапевтических или профилактических лекарственных средств, диагностических реагентов или реагентов для заболевания, сопровождаемого ангиогенезом, заболевания костей и суставов или боли. Аптамер и комплекс по настоящему изобретению также могут быть применимыми для очистки и концентрирования FGF2, мечения FGF2, а также детекции и количественного анализа FGF2.
[Краткое описание чертежей]
[0022]
Фиг. 1 является сенсограммой, на которой показано, что аптамеры, представленные аптамерами ID 1 и 2, связываются с FGF2 человека.
Фиг. 2 является сенсограммой, на которой показано, что аптамер, представленный аптамером ID 1, ингибирует связывание FGF2 человека и 4 рецепторов.
Фиг. 3 является сенсограммой, на которой показано, что аптамер, представленный аптамером ID 3, не связывается с FGF1 человека, EGF, NGF, VEGF.
[Описание вариантов осуществления]
[0023]
В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к аптамеру, связывающемуся с FGF2, содержащему нуклеотидную последовательность, представленную следующей формулой (1) (где урацил, необязательно, представляет собой тимин), и являющемуся следующим (a) или (b):
N1GGAN2ACUAGGGCN3UUAAN4GUN5ACCAGUGUN6 (формула 1)
каждый из N1 и N6 независимо является любым из от 0 до нескольких оснований,
N2, N3, N4 и N5 независимо являются любым основанием,
(a) аптамер, где в нуклеотидах, содержащихся в аптамере,
(i) 2'-положение рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является атомом фтора,
(ii) 2'-положение рибозы каждого пуринового нуклеотида является гидроксигруппой;
(b) аптамер по п. (a), где
(i) атом фтора в 2'-положении рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является независимо незамещенным или замещенным атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы и метоксигруппы,
(ii) гидроксигруппа в 2'-положении рибозы каждого пуринового нуклеотида является независимо незамещенной или замещенной атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, метоксигруппы и атома фтора.
[0024]
Аптамер относится к молекуле нуклеиновой кислоты, имеющей связывающую активность в отношении конкретной молекулы-мишени. Аптамер может ингибировать активность конкретной молекулы-мишени посредством связывания с конкретной молекулой-мишенью. Аптамер по настоящему изобретению может являться РНК, ДНК, модифицированной нуклеиновой кислотой или их смесью. Аптамер по настоящему изобретению также может иметь линейную или кольцевую форму.
[0025]
Настоящее изобретение относится к аптамеру, имеющему связывающую активность в отношении FGF2. В одном из вариантов осуществления аптамер по настоящему изобретению может связываться с FGF2 для ингибирования активности FGF2. Т.е. аптамер по настоящему изобретению может иметь ингибиторную активность в отношении FGF2.
[0026]
Ингибиторная активность в отношении FGF2 означает способность к ингибированию в отношении любой активности, которую имеет FGF2. Например, FGF2 действует на клетку, экспрессирующую рецептор FGF, активируя передачу сигнала и индуцируя продукцию различных факторов роста клеток и их рецепторов. Таким образом, ингибиторная активность в отношении FGF2 может являться активностью для ингибирования внутриклеточной передачи сигнала через рецептор FGF. Т.к. экспрессия таких различных факторов роста клеток и их рецепторов приводит к стимуляции активности клеточной пролиферации и активности клеточной миграции, ингибиторная активность в отношении FGF2 означает ингибирование этих активностей.
Таким образом, если аптамер по настоящему изобретению связывается с FGF2 и ингибирует связывание FGF2 и рецептора FGF, можно ингибировать действие, ассоциированное с активацией внутриклеточного пути передачи сигнала через рецептор FGF, например, супрессию гибели клеток, клеточную пролиферацию, супрессию продукцию остеопротегерина (OPG) и т.п.
[0027]
FGF2 является белком, сильно экспрессирующимся на ранних стадиях развития и при дифференцировке, росте, регенерации, и, например, белком, имеющимся аминокислотную последовательность, представленную регистрационным номером EAX05222 или NP001997. FGF2 иногда также обозначают как bFGF (основной FGF), FGFB или HBGF-2. В настоящем изобретении FGF2 продуцируется в организме животного, или его также можно получать из культивируемых клеток, таких как клетки млекопитающих, например, мыши и т.п., клетки насекомых, Escherichia coli и т.п., или их также дополнительно можно получать посредством химического синтеза. При его получении из культивируемых клеток или с помощью химического синтеза вариант легко можно получать способом, известным в этой области. Термин "вариант" FGF2 означает белок или пептид, имеющий по меньшей мере одну активность из активностей, которые FGF2 имеет от природы, имеющий аминокислотную последовательность, являющуюся результатом замены, делеции, добавления и т.п. от одной до нескольких аминокислот в известной аминокислотной последовательности FGF2, или аминокислотную последовательность, состоящую из части известной аминокислотной последовательности FGF2. Если аминокислоту заменяют или добавляют, указанная аминокислота может являться природной аминокислотой или неприродной аминокислотой. В настоящем изобретении термин "FGF2" относится к его вариантам.
[0028]
Термин "рецептор FGF2" означает белок поверхности клетки, с которым связывается FGF2. В качестве рецептора FGF2 известны FGFR1b, FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c и FGFR4. Рецептор FGF2, упоминаемый в настоящем описании, может являться белком, содержащим природную аминокислотную последовательность или ее вариант. В настоящем описании термин "вариант" рецептора FGF2 означает белок или пептид, где от одной до нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности являются замещенными, делетированными, добавленными и т.п., или он имеет аминокислотную последовательность, состоящую из части известной аминокислотной последовательности рецептора FGF2, имеющего связывающую активность в отношении FGF2. В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к аптамеру, ингибирующему связывание FGF2 и рецептора FGF2.
[0029]
Аптамер по настоящему изобретению может проявлять ингибиторную активность в отношении FGF2, полученного из любых млекопитающих. Такие млекопитающие включают приматов (например, человека, обезьяну), грызунов (например, мышь, крысу и морскую свинку) и животных-компаньонов, домашних животных и рабочих животных (например, собаку, кошку, лошадь, крупный рогатый скот, козу, овцу, свинью).
[0030]
В одном из вариантов осуществления аптамер по настоящему изобретению может отличаться тем, что он может ингибировать активность FGF2, но не может ингибировать активность FGF1. Кроме того, в одном из вариантов осуществления аптамер по настоящему изобретению может отличаться тем, что он может ингибировать связывание FGF2 и рецептора FGF2, но не может ингибировать связывание FGF1 и рецептора FGF1. FGF1 является белком семейства FGF и наиболее похож на FGF2.
[0031]
В указанной выше формуле (1) каждый из N1 и N6 независимо является любым из от 0 до нескольких оснований, и N2, N3, N4 и N5 независимо являются любым основанием. В настоящем описании термин "основание" означает любое из аденина (A), гуанина (G), цитозина (C), урацила (U) или тимина (T), составляющих нуклеиновую кислоту.
Хотя количество оснований в N1 конкретно не ограничено, при условии, что аптамер, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную формулой (1), связывается с FGF2, оно может составлять, например, от 0 до приблизительно 10, 0-9, 0-8, 0-7, 0-6, 0-5, 0-4, 0-3, 0-2 и т.п., предпочтительно - 0-2.
Аналогично, хотя количество оснований в N6 конкретно не ограничено, оно может составлять, например, от 0 до приблизительно 10, 0-9, 0-8, 0-7, 0-6, 0-5, 0-4, 0-3 и т.п., предпочтительно - 0-10, 3-9 или 5-8.
[0032]
В предпочтительном варианте осуществления в указанной выше формуле (1)
N1 является G, GG, AG, C или пропуском,
N2 является A или U,
N3 является G, C или A,
N4 является G, C или U,
N5 является G или U, и
N6 является UUCN61 или AGUCN62, где каждый из N61 и N62 независимо является любым из от 0 до нескольких оснований. В настоящем изобретении N1, являющийся "пропуском", означает, что N1 отсутствует в формуле (1), а именно N1 составляет 0 оснований.
Хотя количество оснований в N61 конкретно не ограничено, оно может составлять, например, от 0 до приблизительно 10, 0-7, 0-6, 0-5, 0-4 и т.п., предпочтительно - 0-5, 1-5 или 2-4.
Хотя количество оснований в N62 также конкретно не ограничено, оно может составлять, например, от 0 до приблизительно 10, 0-7, 0-5, 0-4, 0-3 и т.п., предпочтительно - 0-5, 0-4 или 0-3.
В другом предпочтительном варианте осуществления в указанной выше формуле (1)
N1 является G, GG, AG или пропуском,
N2 является A или U,
N3 является G или A,
N4 является C или U,
N5 является G или U
N6 является UUCN61 или AGUCN62, где N61 и N62 определены выше.
[0033]
В предпочтительном варианте осуществления аптамер по настоящему изобретению может содержать нуклеотидную последовательность, представленную следующей формулой (2) или (3):
GGGAAACUAGGGCGUUAACGUGACCAGUGUUUCN61 (формула 2)
N1GGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCN62 (формула 3)
где N1, N61 и N62 определены выше.
[0034]
В предпочтительном варианте осуществления аптамер по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 1-12. Нуклеотидные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 1-12, приведены ниже (где урацил, необязательно, представляет собой тимин) (далее в настоящем описании A, G, C и U указывают на то, что основание в нуклеотиде является аденином, гуанином, цитозином или урацилом, соответственно):
SEQ ID NO: 1:
GGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCUCGA,
SEQ ID NO: 2:
GGGAAACUAGGGCGUUAACGUGACCAGUGUUUCUCGA,
SEQ ID NO: 3:
GGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCCC,
SEQ ID NO: 4:
GGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCC,
SEQ ID NO: 5:
GGGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCCCC,
SEQ ID NO: 6:
AGGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCCC,
SEQ ID NO: 7:
GGGAAACUAGGGCGUUAACGUGACCAGUGUUUCCC,
SEQ ID NO: 8:
CGGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCCG,
SEQ ID NO: 9:
CCGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCGG,
SEQ ID NO: 10:
GGGAUACUAGGGCGUUAACGUUACCAGUGUAGUCCC,
SEQ ID NO: 11:
GGGAUACUAGGGCCUUAAGGUUACCAGUGUAGUCCC,
SEQ ID NO: 12:
GGGAUACUAGGGCAUUUAUGUUACCAGUGUAGUCCC.
В одном предпочтительном варианте осуществления аптамер по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, 3, 4, 5, 6, 8, 10 или 11.
В другом предпочтительном варианте осуществления аптамер по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2 или 7.
В другом предпочтительном варианте осуществления аптамер по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность представленную в SEQ ID NO: 1, 3, 4, 5 или 6.
[0035]
В одном из вариантов осуществления аптамер по настоящему изобретению в любой из указанных выше нуклеотидных последовательностях может содержать нуклеотидную последовательность, где 1 или несколько нуклеотидов являются замещенными, делетированными, встроенными или добавленными при условии, что аптамер все равно связывается с FGF2, и может являться
(a) аптамером, где в нуклеотидах, содержащихся в аптамере,
(i) 2'-положение рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является атомом фтора,
(ii) 2'-положение рибозы каждого пуринового нуклеотида является гидроксигруппой;
(b) аптамером по п. (a), где
(i) атом фтора в 2'-положении рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является независимо незамещенным или замещенным атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы и метоксигруппы,
(ii) гидроксигруппа в 2'-положении рибозы каждого пуринового нуклеотида является независимо незамещенной или замещенной атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, метоксигруппы и атома фтора. Как применяют в настоящем описании, количество указанных выше нуклеотидов, замещенных, делетированных, встроенных или добавленных, конкретно не ограничено при условии, что аптамер все равно связывается с FGF2 даже после замены, делеции, инсерции или добавления. Оно может составлять, например, от 1 до приблизительно 10, предпочтительно - 1-6, более предпочтительно - 1-5, более предпочтительно - 1-4, более предпочтительно - 1-3, наиболее предпочтительно - 1 или 2. Хотя участок нуклеотида, подлежащий замене, делеции, инсерции или добавлению, конкретно не ограничен, при условии, что аптамер все равно связывается с FGF2 даже после замены, делеции, инсерции или добавления в участках, указанных как один тип нуклеотида в указанной выше формуле (1), (2) и (3), нуклеотиды являются замещенными, делетированными, встроенными или добавленными в 1-3, предпочтительно - 1 или 2, более предпочтительно - 1 участке. С другой стороны, если множество типов нуклеотидов может присутствовать в формулах (1), (2) и (3), замене, делеции, инсерции или добавлению можно подвергать большее количество нуклеотидов (например, от 1 до приблизительно 10, предпочтительно - 1-6, более предпочтительно - 1-5, более предпочтительно - 1-4).
[0036]
Длина аптамера по настоящему изобретению конкретно не ограничена, и, как правило, может составлять от приблизительно 10 до приблизительно 200 нуклеотидов, и может составлять, например, не менее приблизительно 20 нуклеотидов (например, не менее 25 нуклеотидов, не менее 30 нуклеотидов, не менее 31 нуклеотидов, не менее 32 нуклеотидов, не менее 33 нуклеотидов), предпочтительно - не менее 25 нуклеотидов, более предпочтительно - не менее 30 нуклеотидов, более предпочтительно - не менее 33 нуклеотидов. Кроме того, оно может составлять, например, не более приблизительно 100 нуклеотидов, как правило, не более приблизительно 80 нуклеотидов, предпочтительно - не более приблизительно 70 нуклеотидов, более предпочтительно - не более приблизительно 60 нуклеотидов, более предпочтительно - не более приблизительно 50 нуклеотидов, более предпочтительно - не более приблизительно 45 нуклеотидов (например, не более 44 нуклеотидов, не более 43 нуклеотидов, не более 42 нуклеотидов, не более 41 нуклеотидов, не более 40 нуклеотидов). Если общее количество нуклеотидов является меньшим, химический синтез и крупномасштабное производство будут более простыми, и есть значительно преимущество в терминах стоимости. Также считают, что химическая модификация является простой, стабильность в организме является высокой, и токсичность является низкой.
Таким образом, длина аптамера по настоящему изобретению, как правило, может составлять от приблизительно 10 до приблизительно 200 нуклеотидов, предпочтительно - 20-80 нуклеотидов, более предпочтительно - 25-60 нуклеотидов, более предпочтительно - 25-50 нуклеотидов, наиболее предпочтительно - 30-45 нуклеотидов.
[0037]
Аптамер по настоящему изобретению может являться конъюгатом, выбранным из группы, состоящей из конъюгата множества аптамеров, содержащего нуклеотидную последовательность, представленную указанной выше формулой (1) (аптамер (A)), конъюгата множества аптамеров, содержащего нуклеотидную последовательность, где 1 или несколько нуклеотидов являются замещенными, делетированными, встроенными или добавленными в нуклеотидной последовательности, представленной указанной выше формулой (1) (аптамер (B)), и конъюгата 1 или множества аптамеров (A) и 1 или множества аптамеров (B). Эти конъюгаты также могут связываться с FGF2.
В настоящем изобретении конъюгацию можно осуществлять посредством тандемного связывания. В конъюгации можно использовать линкер. В качестве линкера можно упомянуть нуклеотидные цепи (например, от 1 до приблизительно 20 нуклеотидов) и ненуклеотидные цепи (например, линкер -(CH2)n-, линкер -(CH2CH2O)n-, гексаэтиленгликолевый линкер, линкер TEG, пептид-содержащий линкер, линкер, содержащий связь -S-S-, линкер, содержащий связь -CONH-, линкер, содержащий связь -OPO3-). Множество, как указано для описываемого выше конъюгата из множества аптамеров, конкретно не ограничено, при условии, что оно составляет два или более, и множество может составлять, например, 2, 3 или 4.
[0038]
Каждый нуклеотид, содержащийся в аптамере по настоящему изобретению, является одинаковым или отличается и может являться нуклеотидом, содержащим гидроксильную группу в 2'-положении рибозы (например, рибозы пиримидинового нуклеотида, рибозы пуринового нуклеотида) (т.е. природного нуклеотида), или нуклеотидом, где гидроксильная группа является замещенной (модифицированной) с помощью любого атома или группы в 2'-положении рибозы (иногда обозначаемым в настоящем описании как "модифицированный нуклеотид").
[0039]
В качестве примеров любого такого атома или группы можно упомянуть нуклеотид, замещенный атомом водорода, атомом фтора или -O-алкильной группой (например, -O-Me-группой), -O-ацильной группой (например, -O-CHO-группой) или аминогруппой (например, -NH2-группой). В аптамере по настоящему изобретению по меньшей мере один тип (например, 1, 2, 3 или 4 типа) нуклеотида также может являться модифицированным нуклеотидом, содержащим гидроксильную группу или описываемый выше любой атом или группу, например, по меньшей мере два типа (например, 2, 3 или 4 типа) групп, выбранных из группы, состоящей из атома водорода, атома фтора, гидроксильной группы и-O-Me-группы, в 2'-положении рибозы.
[0040]
В аптамере по настоящему изобретению все пиримидиновые нуклеотиды могут являться нуклеотидами, где 2'-положение рибозы является атомом фтора или может являться одинаковым или отличаться, и нуклеотидами, где атом фтора является незамещенным или замещенным любым атомом или группой, указанной выше, предпочтительно - атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксильной группы и метоксигруппы. В частности, если в качестве способа получения аптамера по настоящему изобретению используют способ получения с использованием указанного ниже набора DuraScribeTM T7 Transcription Kit (производимого Epicentre), можно получать аптамер, где 2'-положение рибозы всех пиримидиновых нуклеотидов является фторсодержащим. Аптамер по настоящему изобретению, где атом фтора является замещенным другим указанным выше атомом или группой, можно получать указанным ниже способом.
[0041]
В аптамере по настоящему изобретению все пуриновые нуклеотиды могут являться нуклеотидами, где 2'-положение рибозы является атомом фтора или может являться одинаковым или отличаться, и нуклеотидами, где гидроксигруппа является незамещенной, или нуклеотидом, замещенным любым атомом или группой, указанными выше, предпочтительно - атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксильной группы и метоксигруппы в 2'-положении рибозы. Аптамер по настоящему изобретению, где гидроксильная группа является замещенной другим указанным выше атомом или группой, можно получать указанным ниже способом.
[0042]
В аптамере по настоящему изобретению, все пиримидиновые нуклеотиды могут являться нуклеотидами, где атом фтора в 2'-положении рибозы является замещенным любым из указанных выше атомов или групп, например, теми же атомами или группами, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы и -O-Me-группы.
В аптамере по настоящему изобретению, кроме того, все пуриновые нуклеотиды могут являться нуклеотидами, где гидроксигруппа в 2'-положении рибозы является замещенной любым из указанных выше атомов или групп, например, теми же атомами или группами, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, атома фтора и -O-Me-группой.
[0043]
В предпочтительном варианте осуществления, каждый пиримидиновый нуклеотид, содержащийся в аптамере по настоящему изобретению, является нуклеотидом, содержащим атом фтора в 2'-положении рибозы, и каждый пуриновый нуклеотид является нуклеотидом, имеющим гидроксигруппу в 2'-положении рибозы. В другом варианте осуществления указанный выше атом фтора в 2'-положении рибозы каждого пиримидинового нуклеотида независимо необязательно является замещенным атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы и метоксигруппы, и указанная выше гидроксигруппа в 2'-положении рибозы каждого пуринового нуклеотида необязательно независимо является замещенной атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, метоксигруппы и атома фтора.
[0044]
В настоящем описании в описании того, как сахарные группы модифицируют в нуклеотидах, нуклеотиды, составляющие аптамер, считают РНК (т.е. сахарные группы считают рибозой). Однако это не означает, что ДНК исключают из составляющих аптамер нуклеотидов, и модификацию РНК, при необходимости, следует считать модификацией ДНК. Если нуклеотид, составляющий аптамер, является ДНК, например, замену гидроксильной группы в 2'-положении рибозы на X следует считать заменой атома водорода в 2'-положении дезоксирибозы на X.
Если в аптамере по настоящему изобретению урацил заменяют тимином, можно повышать FGF2-связывающую активность, ингибиторную активность в отношении FGF2 и рецептора FGF, стабильность, возможность доставки лекарственного средства и стабильность аптамера в крови и т.п.
[0045]
В аптамере по настоящему изобретению в 1 или нескольких, например, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5 нуклеотидах фосфодиэфирную связи в нуклеотиде можно модифицировать или заменять любыми заместителями. Например, фосфодиэфирную связь можно заменять фосфотиоатной связью, фосфодитиоатной связью, алкилфосфонатной связью, фосфоамидатной связью и т.п. Например, в настоящем описании термин "нуклеотид замещают фосфотиоатной связью" означает, что группа фосфорной кислоты в участке связывания между смежными нуклеотидами является серосодержащей, т.е. фосфодиэфирную связь изменяют на фосфотиоатную связь.
[0046]
В аптамере по настоящему изобретению, один или несколько, например, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5 нуклеотидов, можно заменять мостиковой нуклеиновой кислотой (BNA) или замкнутой нуклеиновой кислотой (ЗНК) для стабилизации аптамера и улучшения его активности. Как применяют в настоящем описании, термин "мостиковая нуклеиновая кислота" относится к нуклеиновой кислоте, имеющей структуру, где аффинность связывания с комплементарной последовательностью повышают посредством ограничения степени свободы нуклеиновой кислоты посредством внутримолекулярной перекрестной сшивки и достигают устойчивости к нуклеазе. Их неограничивающие примеры включают 2',4'-BNA (замкнутую нуклеиновую кислоту (ЗНК)), 2'-O,4'-C-этилен-мостиковую нуклеиновую кислоту (ENA) и т.п.
[0047]
Аптамер по настоящему изобретению является аптамером, связывающимся с FGF2, более предпочтительно - аптамером, который может связываться с FGF2 для ингибирования связывания FGF2 и рецептора FGF. То, ингибирует ли аптамер по настоящему изобретению связывание FGF2 и рецептора FGF, можно оценивать с использованием теста, например, способа поверхностного плазмонного резонанса в примере 1 и т.п.
[0048]
Аптамер по настоящему изобретению может являться аптамером, где остаток сахара (например, рибозу) каждого нуклеотида модифицируют для достижения FGF2-связывающей активности, стабильности, возможности доставки лекарственного средства и т.п. В качестве примеров модификации остатка сахара можно упомянуть замену атома кислорода в 2'-положении, 3'-положении и/или 4'-положении остатка сахара другим атомом и т.п. В качестве типа модификации можно упомянуть фторирование, O-алкилирование (например, O-метилирование, O-этилирование), O-арилирование, S-алкилирование (например, S-метилирование, S-этилирование), S-арилирование и аминирование (например, -NH2). Кроме того, их примеры включают 4'-SRNA, где кислород в 4'-положении заменяют серой, ЗНК (замкнутой нуклеиновой кислотой), где 2'-положение и 4'-положение перекрестно сшивают с помощью метилена, 3'-N-фосфоамидатную нуклеиновую кислоту, где гидроксильную группу в 3'-положение заменяют аминогруппой и т.п. Иногда аптамер по настоящему изобретению получают с использованием указанной модификации атома кислорода в 2'-положении рибозы пиримидинового нуклеотида благодаря способу его получения. Если в качестве способа получения аптамера по настоящему изобретению используют способ получения с использованием указанного ниже набора DuraScribeTM T7 Transcription Kit (производимого Epicentre), получают аптамер, где 2'-положение рибозы, предпочтительно, всех пиримидиновых нуклеотидов является фторсодержащим. Таким образом, можно получать различные варианты аптамеров, имеющих повышенную активность, даже если последовательность оснований является той же, используя такое изменение остатка сахара в полученном аптамере. Учитывая изложенное выше, аптамер по настоящему изобретению, предпочтительно, может являться аптамером, где остаток сахара по меньшей мере в одном нуклеотиде является модифицированным. Такие изменения в остатке сахара можно осуществлять способом, известным в этой области (см., например, Sproat et al., (1991) Nucl. Acid. Res. 19, 733-738; Cotton et al., (1991) Nucl. Acid. Res. 19, 2629-2635; Hobbs et al., (1973) 12 Biochemistry 5138-5145). Чтобы он был специфическим, аптамер, в котором гидроксильную группу в 2'-положении рибозы заменяют атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксильной группы и метоксигруппы, можно получать с использованием, в качестве основы, аптамера, в котором гидроксильную группу в 2'-положении рибозы всех пиримидиновых нуклеотидов заменяют группой фтора.
[0049]
Аптамер по настоящему изобретению также может содержать основание нуклеиновой кислоты (например, пурин или пиримидин), измененное (например, посредством химической замены) для повышения FGF2-связывающей активности, стабильности, возможности доставки лекарственного средства и т.п. В качестве примеров таких изменений можно упомянуть изменение пиримидина в 5-положении, изменение пурина в 6- и/или 8-положениях, изменение с использованием внециклического амина, замену 4-тиоуридином и замену 5-бром- или 5-йодурацилом. Фосфатную группу, содержащуюся в аптамере по настоящему изобретению, можно изменять для придания устойчивости к нуклеазе и гидролизу. Например, P(O)O-группу можно заменять P(O)S (тиоатом), P(S)S (дитиоатом), P(O)N(R)R' (амидатом), P(O)R, P(O)OR, CO или CH2 (формацеталем) или 3'-амином (-NH-CH2-CH2-) [где каждая единица R или R' независимо представляет собой H или замещенный или незамещенный алкил (например, метил, этил)].
Связывающая группа представляет собой, например, -O-, -N- или -S-, и нуклеотиды можно связывать со смежным нуклеотидом с помощью этих связывающих групп.
Изменения также могут включать такие изменения, как кэпирование на 3'- и 5'-конце.
[0050]
Изменение можно дополнительно осуществлять, добавляя на конец полиэтиленгликоль, аминокислоту, пептид, инвертированный dT, нуклеиновую кислоту, нуклеозиды, миристоил, литохолил-олеил, докозанил, лауроил, стеароил, пальмитоил, олеил, линолеоил, другие липиды, стероиды, холестерин, кофеин, витамины, красители, флуоресцентные вещества, противораковые средства, токсины, ферменты, радиоактивные вещества, биотин и т.п. См. такие изменения, например, в патентах США №№ 5660985 и 5756703.
[0051]
В частности, при осуществлении изменения посредством концевого добавления PEG, его молекулярная масса, в частности, не ограничена и предпочтительно составляет 1000-100000, более предпочтительно - 30000-90000. PEG может являться линейным или разветвленным на две или более цепей (разветвленный PEG).
Такой PEG конкретно не ограничен, и специалисты в этой области могут соответствующим образом выбирать и использовать коммерчески доступный или известный PEG (например, http://www.peg-drug.com/peg_product/branched.html). Конкретные предпочтительные примеры PEG, подлежащие использованию в отношении аптамера по настоящему изобретению, включают 2-разветвленный PEG типа GS, имеющий молекулярную массу 40000 (SUNBRIGHT GL2-400GS, производимый NOF CORPORATION), 2-разветвленный PEG типа TS, имеющий молекулярную массу 40000 (SUNBRIGHT GL2-400TS, производимый NOF CORPORATION), 4-разветвленный PEG типа TS, имеющий молекулярную массу 40000 (SUNBRIGHT GL4-400TS производимый NOF CORPORATION), 2-разветвленный PEG типа TS, имеющий молекулярную массу 80000 (SUNBRIGHT GL2-800TS, производимый NOF CORPORATION), 4-разветвленный PEG типа TS, имеющий молекулярную массу 80000 (SUNBRIGHT GL4-800TS, производимый NOF CORPORATION) и т.п.
[0052]
В этом случае в аптамере по настоящему изобретению PEG можно напрямую добавлять в конец. Это является более предпочтительным, чем линкер, имеющий группу, связываемую с PEG и т.п., добавляемым на его конец, и PEG, добавляемым в аптамер по настоящему изобретению посредством линкера.
[0053]
Линкер для PEG и аптамер по настоящему изобретению конкретно не ограничен, и количество углеродных цепей, функциональную группу и т.п. можно соответствующим образом выбирать в соответствии с участком связывания, типом PEG и т.п. Примеры такого линкера включают линкер, имеющий аминогруппу. В частности, при добавлении на 5'-конец можно упомянуть линкер ssH (SAFC) или DMS(O)MT-AMINO-MODIFIER (GLEN RESEARCH) и при добавлении на 3'-конец можно упомянуть TFA Amino C-6 lcaa CPG (ChemGenes) и т.п. При выборе этого линкера, например, к PEG добавляют активную группу N-гидроксисукцинимида, и она реагирует с аминогруппой на стороне линкера, посредством чего аптамер по настоящему изобретению можно связывать с PEG посредством линкера.
[0054]
В качестве PEG и линкера предпочтительно можно использовать коммерчески доступные продукты. Специалисты в этой области могут соответствующим образом определять условия реакции и т.п., относящиеся к связыванию PEG, линкеру и аптамеру по настоящему изобретению.
[0055]
Аптамер по настоящему изобретению можно химически синтезировать, как представлено в настоящем описании, и способом, по существу, известным в этой области. Аптамер связывается с веществом-мишенью разнообразными способами связывания, такими как ионные связи, обусловленные отрицательным зарядом фосфатной группы, гидрофобные связи и водородные связи, обусловленные рибозой, и водородные связи и стэкинг-взаимодействия, обусловленные основаниями нуклеиновых кислот. В частности, ионные связи, обусловленные отрицательным зарядом фосфатной группы, присутствующие в том же количестве, что и входящие в состав нуклеотиды, являются сильными и осуществляют связывание с лизином и аргинином, присутствующим на положительно-заряженной поверхности белка. По этой причине можно заменять основания нуклеиновой кислоты, не вовлеченные в прямое взаимодействие с веществом-мишенью. В частности, т.к. область структуры "стебель" содержит уже образовавшиеся пары оснований и обращена к внутренней стороне двойной спиральной структуры, основания нуклеиновой кислоты вряд ли связываются непосредственно с веществом-мишенью. Таким образом, даже если пару оснований заменяют другой парой оснований, активность аптамера зачастую не повышается. В структурах, где не образуются пары оснований, таких как петлевые структуры, при условии, что основание нуклеиновой кислоты не участвует в прямом связывании с молекулой-мишенью, возможна замена оснований. Что касается модификаций 2'-положения рибозы, функциональная группа в 2'-положении рибозы в редких случаях взаимодействует непосредственно с молекулой-мишенью, но во многих случаях это не имеет никакого значения, и ее можно заменять другой модифицированной молекулой. Таким образом, если функциональная группа, участвующая в прямом связывании с молекулой-мишенью, не является замещенной или делетированной, аптамер часто сохраняет свою активность. Также важно, что общая трехмерная структура существенно не изменяется.
[0056]
Аптамер можно получать с использованием способа SELEX или его улучшенной версии (например, Ellington et al., (1990) Nature, 346, 818-822; Tuerk et al., (1990) Science, 249, 505-510). В способе SELEX концентрируют и выбирают аптамер, проявляющий больший потенциал связывания с веществом-мишенью, повышая количество раундов или используя конкурирующее вещество. Таким образом, корректируя количество раундов SELEX и/или изменяя условия конкуренции, в некоторых случаях можно получать аптамеры с различными силами связывания, аптамеры с различными способами связывания и аптамеры с одинаковой силой связывания или способом связывания, но с разными последовательностями оснований. Способ SELEX включает амплификацию посредством ПЦР; SELEX можно осуществлять с большим разнообразием, вызывая мутацию с использованием в нем ионов марганца и т.п.
[0057]
Аптамеры, полученные посредством SELEX, являются нуклеиновыми кислотами, проявляющими высокую аффинность к веществу-мишени, но это не означает связывание с активным центром вещества-мишени. Таким образом, аптамеры, полученные посредством SELEX, не обязательно действуют на функцию вещества-мишени. FGF2 является основным белком, и считают, что он позволяет нуклеиновым кислотам связываться с ним неспецифически. Аптамер, не связывающийся с активным центром, не влияет на активность вещества-мишени. Фактически, РНК, используемые для контроля, не ингибируют связывание FGF2 и рецептора FGF2.
[0058]
Используя выбранный таким образом активный аптамер, можно осуществлять оптимизированный SELEX для получения аптамера, обладающего более высокой активностью. В оптимизированном SELEX его снова осуществляют после получения матрицы, где аптамер с определенной последовательностью является частично рандомизированным, или матрицу дополняют от приблизительно 10 до 30% случайных последовательностей.
[0059]
Аптамер, полученный посредством SELEX, имеет длину приблизительно 80 нуклеотидов, и, фактически, его трудно получать в качестве фармацевтического средства. Таким образом, предпочтительно повторять попытки методом проб и ошибок для укорачивания аптамера до длины, делающей возможным простой химический синтез (например, приблизительно 60 нуклеотидов или менее, более предпочтительно - приблизительно 50 нуклеотидов или менее, наиболее предпочтительно - 45 нуклеотидов или менее, что делает возможным химический синтез).
В зависимости от дизайна праймеров для аптамера, полученного с помощью SELEX, изменяется простота последующей операции минимизации. Если дизайн праймеров неудачен, последующая разработка будет невозможна, даже если аптамер с активностью выбран с помощью SELEX.
[0060]
Аптамеры легко изменяют, т.к. они делают возможным химический синтез. В случае аптамеров, прогнозируя вторичную структуру с использованием программы MFOLD или прогнозируя стерическую структуру с помощью рентгеноструктурного анализа или ЯМР-анализа, можно, до некоторой степени, прогнозировать, какой нуклеотид можно заменять или подвергать делеции, и где осуществлять инсерцию нового нуклеотида. Предсказанный аптамер с новой последовательностью можно легко химически синтезировать и, используя существующую систему анализа, можно определять, сохраняет ли аптамер активность или нет.
[0061]
Если область, важную для связывания полученного аптамера с веществом-мишенью, идентифицируют посредством повторяющихся попыток методом проб и ошибок, как описано выше, активность во многих случаях остается неизменной, даже если новую последовательность добавляют на оба конца последовательности. Длина новой последовательности конкретно не ограничена.
[0062]
Как указано выше, модификации, подобные модификациям последовательности, делают возможными широкий диапазон дизайна или изменений.
[0063]
Как указано выше, аптамеры делают возможным широкий диапазон дизайна или изменений. Настоящее изобретение также относится к способу получения аптамера, делающего возможным широкий диапазон дизайна или изменений аптамера, содержащего конкретную последовательность (например, последовательность, соответствующую части, выбранной из областей "стебля", внутренних петлевых областей, областей "шпильки" и одноцепочечных областей: далее в настоящем описании сокращенно обозначаемых как фиксированная последовательность при необходимости).
[0064]
Например, способ получения такого аптамера включает получение аптамера, содержащего фиксированную последовательность с использованием одного типа молекулы нуклеиновой кислоты, состоящей из нуклеотидной последовательности, представленной следующим образом:
[0065]
Последовательность праймера (i)- (N)a-фиксированная последовательность- (N)b-последовательность праймера (ii)
[0066]
где (N)a представляет собой нуклеотидную цепь, состоящую из "a" единиц N; (N)b представляет собой нуклеотидную цепь, состоящую из "b" единиц N; каждая из единиц N, идентичных или разных, является нуклеотидом, выбранным из группы, состоящей из A, G, C, U и T (предпочтительно, A, G, C и U). Каждый из "a" и "b", идентичных или разных, может являться любым количеством и может составлять, например, от 1 до приблизительно 100, предпочтительно - от 1 до приблизительно 50, более предпочтительно - от 1 до приблизительно 30, еще более предпочтительно - от 1 до приблизительно 20 или от 1 до приблизительно 10], или может являться множеством типов молекул нуклеиновой кислоты (например, библиотекой молекул нуклеиновой кислоты, отличающихся по количеству a, b и т.д.) и парами праймеров, соответствующих последовательностям праймеров (i) и (ii), соответственно.
[0067]
В качестве аптамера по настоящему изобретению предпочтительным является аптамер по любому из следующих пп. (a'), (b') или (c'), связывающийся с FGF2 и ингибирующий связывание FGF2 и рецептора FGF:
(a') аптамер, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 1-7 (или SEQ ID NO: 2 или 7 или любой из SEQ ID NO: 1 и 3-6) (где урацил может являться тимином), где в нуклеотидах, содержащихся в аптамере,
(i) 2'-положение рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является атомом фтора,
(ii) 2'-положение рибозы каждого пуринового нуклеотида является гидроксигруппой;
(b') аптамер, содержащий нуклеотидную последовательность, где 1-5 (или 1-4 или 1-3) нуклеотидов являются замещенными, делетированными, встроенными или добавленными в нуклеотидную последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 1-7 (или SEQ ID NO: 2 или 7, или любой из SEQ ID NO: 1 и 3-6) (где урацил может являться тимином), где в нуклеотиде, содержащемся в аптамере,
(i) 2'-положение рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является атомом фтора,
(ii) 2'-положение рибозы каждого пуринового нуклеотида является гидроксигруппой; или
(c') аптамер, где в аптамере по п. (a') или (b')
(i) атом фтора в 2'-положении рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является независимо незамещенным или замещенным атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы и метоксигруппы,
(ii) гидроксигруппа в 2'-положении рибозы каждого пуринового нуклеотида является независимо незамещенной или замещенной атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, метоксигруппы и атома фтора, и,
из указанных выше аптамеров, дополнительно предпочтительным является аптамер, имеющий длину 30-45 нуклеотидов.
[0068]
Настоящее изобретение также относится к комплексу, содержащему аптамер по настоящему изобретению и связанному с ним функциональному веществу. Связь между аптамером и функциональным веществом в комплексе по настоящему изобретению может являться ковалентной связью или нековалентной связью. Комплекс по настоящему изобретению может являться комплексом, где связаны аптамер по настоящему изобретению и одно или несколько (например, 2 или 3) функциональных веществ одного типа или разных типов. Функциональное вещество конкретно не ограничено до той степени, пока оно придает аптамеру по настоящему изобретению конкретную функцию или способно изменять (например, улучшать) конкретную характеристику, которой может обладать аптамер по настоящему изобретению. В качестве примеров функционального вещества можно упомянуть белки, пептиды, аминокислоты, липиды, сахара, моносахариды, полинуклеотиды и нуклеотиды. В качестве примеров функционального вещества можно упомянуть аффинные вещества (например, биотин, стрептавидин, полинуклеотиды, обладающие аффинностью к комплементарной последовательности-мишени, антитела, глутатион-сефарозу, гистидин), вещества для мечения (например, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества, радиоактивные изотопы), ферменты (например, пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу), средства для доставки лекарственных средств (например, липосому, микросферы, пептиды, полиэтиленгликоли), лекарственные средства (например, используемые в направленной терапии, такой как калихеамицин и дуокармицин; аналоги азотистого иприта, такие как циклофосфамид, мелфалан, ифосфамид или трофосфамид; этиленимины, такие как тиотепа; нитрозомочевины, такие как кармустин; алкилирующие средства, такие как темозоломид или дакарбазин; фолат-подобные метаболические антагонисты, такие как метотрексат или ралтитрексед; аналоги пурина, такие как тиогуанин, кладрибин или флударабин; аналоги пиримидина, такие как фторурацил, тегафур или гемцитабин; алкалоиды барвинка, такие как винбластин, винкристин или винорелбин и их аналоги; производные подофиллотоксина, такие как этопозид, таксаны, доцетаксел или паклитаксел; антрациклины, такие как доксорубицин, эпирубицин, идарубицин и митоксантрон и их аналоги; другие цитотоксические антибиотики, такие как блеомицин и митомицин; соединения платины, такие как цисплатин, карбоплатин и оксалиплатин; пентостатин, милтефозин, эстрамустин, топотекан, иринотекан и бикалутамид), и токсины (например, токсин рицин, лиатоксин и веротоксин). В некоторых случаях эти функциональные молекулы в конечном итоге удаляют. Кроме того, молекулы могут являться пептидами, которые могут распознаваться и расщепляться ферментами, такими как тромбин, матричная металлопротеиназа (MMP) и фактор X, и могут являться полинуклеотидами, которые могут расщепляться нуклеазами или рестрикционными эндонуклеазами.
[0069]
Аптамер или комплекс по настоящему изобретению можно использовать, например, в качестве лекарственного средства, диагностического реагента, тестового реагента или реагента. В частности, он применим в качестве лекарственного средства для лечения или профилактики заболеваний, сопровождаемых ангиогенезом, таких как возрастная дегенерация желтого пятна и т.п., заболеваний костей и суставов, таких как остеопороз, ревматоидный артрит, остеоартрит, перелом кости и т.п., или боли, или диагностического средства, тестового реагента или реагента.
[0070]
Лекарственное средство по настоящему изобретению может являться средством, составленным с использованием фармацевтически приемлемого носителя. В качестве примеров фармацевтически приемлемого носителя можно упомянуть эксципиенты, такие как сахароза, крахмал, маннит, сорбит, лактоза, глюкоза, целлюлоза, тальк, фосфат кальция и карбонат кальция; связывающие средства, такие как целлюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, полипропилпирролидон, желатин, гуммиарабик, полиэтиленгликоль, сахароза и крахмал; разрыхлители, такие как крахмал, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилкрахмал, натрия крахмал гликолят, бикарбонат натрия, фосфат кальция и цитрат кальция; смазочные средства, такие как стеарат магния, аэросил, тальк и лаурилсульфат натрия; ароматизаторы, такие как лимонная кислота, ментол, глицирризинат аммония, глицин и апельсиновый порошок; консерванты, такие как бензоат натрия, гидросульфит натрия, метилпарабен и пропилпарабен; стабилизаторы, такие как лимонная кислота, цитрат натрия и уксусная кислота; суспендирующие средства, такие как метилцеллюлоза, поливинилпирролидон, и стеарат алюминия; диспергирующие средства, такие как поверхностно-активные вещества; дилюенты, такие как вода, физиологический раствор и апельсиновый сок; основные воски, такие как масло какао, полиэтиленгликоль и керосин; и т.п., но эти примеры не являются ограничивающими.
[0071]
Препараты, подходящие для перорального введения, являются раствором, полученным посредством растворения эффективного количества лиганда в дилюенте, таком как вода, физиологический раствор или апельсиновый сок; капсулами, саше или таблетками, содержащими эффективное количество лиганда в твердой или гранулированной форме; суспензией, полученной посредством суспендирования эффективного количества активного ингредиента в подходящем дисперсанте; эмульсией, полученной посредством диспергирования и эмульгирования раствора эффективного количества активного ингредиента в подходящем дисперсанте, и т.п.
[0072]
Лекарственное средство по настоящему изобретению, по мере необходимости, можно покрывать способом, известным в этой области. в целях маскировки вкуса, растворения в кишечнике, замедленного высвобождения и т.п. В качестве примеров покрывающих средств, используемых для покрытия, используют гидроксипропилметилцеллюлозу, этилцеллюлозу, гидроксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, полиоксиэтиленгликоль, Tween 80, плюроник F68, ацетат-фталат целлюлозы, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетат-сукцинат гидроксиметилцеллюлозы, эудражит (производимый Rohm, Germany, coполимер метакриловой кислоты/акриловой кислоты), красители (например, оксид железа (III), диоксид титана и т.п.) и т.п. Лекарственное средство может являться препаратом с быстрым высвобождением или препаратом с замедленным высвобождением. Примеры основ для препарата с замедленным высвобождением включают липосому, ателоколлаген, желатин, гидроксиапатит, PLGA и т.п.
[0073]
В качестве препаратов, подходящих для парентерального введения (например, внутривенного введения, подкожного введения, внутримышечного введения, местного введения, интраперитонеального введения, интраназального введения, легочного введения и т.п.), доступны водные и неводные изотонические стерильные инъецируемые жидкости, которые могут содержать антиоксидант, буферный раствор, бактериостатическое средство, средство придания изотоничности и т.п. Также можно упомянуть водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующее средство, солюбилизатор, загуститель, стабилизатор, антисептик и т.п. Препарат можно включать в контейнер, такой как ампула или сосуд в объеме единицы дозирования или в нескольких дробных дозах. Активный ингредиент и фармацевтически приемлемый носитель также можно подвергать лиофилизации и хранить в состоянии, которое можно растворять или суспендировать в подходящем стерильном наполнителе непосредственно перед использованием. В дополнение к инъекциям жидкостей, приемлемыми также являются ингалянты и мази. В случае ингалянта активный ингредиент в лиофилизированном состоянии микронизируют и вводят посредством ингаляции с использованием подходящего ингаляционного устройства. Ингалянт, при необходимости, можно составлять с использованием общепринятого поверхностно-активного вещества, масла, ароматизатора, циклодекстрина или его производного и т.п.
[0074]
В настоящем описании в качестве примеров поверхностно-активного вещества можно упомянуть олеиновую кислоту, лецитин, диолеат диэтиленгликоля, тетрагидрофурфурилолеат, этилолеат, изопропилмиристат, глицерилтриолеат, глицерилмонолаурат, глицерил моноолеат, глицерилмоностеарат, глицерилмонолизиноат, цетиловый спирт, стеариловый спирт, полиэтиленгликоль 400, хлорид цетилпиридиния, сорбитантриолеат (торговое название Span 85), сорбитанмоноолеат (торговое название Span 80), сорбитанмонолаурат (торговое название Span 20), полиоксиэтилен-касторовое масло (торговое название HCO-60), полиоксиэтилен (20)-сорбитанмонолаурат (торговое название Tween 20), полиоксиэтилен (20)-сорбитанмонооолеат (торговое название Tween 80), лецитин природного происхождения (торговое название Epiclon), простой эфир олеилполиоксиэтилена (2) (торговое название Brij 92), простой эфир стеарилполиоксиэтилена (2) (торговое название Brij 72), простой эфир лаурилполиоксиэтилена (4) (торговое название Brij 30), простой эфир олеилполиоксиэтилена (2) (торговое название Genapol 0-020), блок-сополимер оксиэтилена и оксипропилена (торговое название Synperonic) и т.п. Span, Tween, Epiclon, Brij, Genapol и Synperonic являются торговыми марками.
В качестве примеров масла можно упомянуть кукурузное масло, оливковое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло и т.п. В случае мази подходящую фармацевтически приемлемую основу (желтый вазелин, белый вазелин, парафин, Plastibase, силикон, белую мазевую основу, пчелиный воск, лярд, растительные масла, гидрофильную мазь, гидрофильный вазелин, очищенный ланолин, гидролизованный ланолин, абсорбирующую воду мазь, гидрофильный Plastibase, полиэтиленгликолевую мазь и т.п.) смешивают с активным ингредиентом и используют в качестве препарата.
[0075]
Ингалянт можно получать общепринятым способом. В частности, ингалянт можно получать посредством измельчения в порошок или сжижения описываемого выше аптамера и комплекса по настоящему изобретению, его смешивания в ингаляционном пропелленте и/или носителе и наполнения им подходящего сосуда для ингаляции. Если описываемый выше аптамер и комплекс по настоящему изобретению является порошком, можно использовать общепринятый механический порошковый ингалятор; в случае жидкости можно использовать ингалятор, такой как небулайзер. В настоящем описании в качестве пропеллента можно широко использовать общеизвестный пропеллент; можно упомянуть соединения хлорфторуглеродной серии, такие как хлорфторуглерод-11, хлорфторуглерод-12, хлорфторуглерод-21, хлорфторуглерод-22, хлорфторуглерод-113, хлорфторуглерод-114, хлорфторуглерод-123, хлорфторуглерод-142c, хлорфторуглерод-134a, хлорфторуглерод-227, хлорфторуглерод-C318, и 1,1,1,2-тетрафторэтан, углеводороды, такие как пропан, изобутан и n-бутан, простые эфиры, такие как диэтиловый простой эфир, сжатые газы, такие как газообразный азот и диоксид углерода и т.п.
[0076]
Если лекарственное средство по настоящему изобретению используют в качестве лекарственного средства для профилактики или лечения указанных выше заболеваний, лекарственное средство по настоящему изобретению можно вводить напрямую в очаг повреждения или вводить другими указанными выше способами.
Т.к. аптамер по настоящему изобретению является одноцепочечной нуклеиновой кислотой, возможна детоксикация посредством введения нуклеотида, содержащего комплементарную последовательность, и существует высокая вероятность получения фармацевтического препарата с более высокой безопасностью, чем нейтрализующее антитело, которое сложно динамически контролировать после введения. Это чрезвычайно предпочтительный аспект в свете проблемы инфекций, вероятно возникающих в организме при лечении лекарственным средством и т.п., вызываемых длительным нахождением антитела в организме. В частности, если лекарственное средство по настоящему изобретению используют в качестве лекарственного средства для профилактики или лечения указанных выше заболеваний, с учетом тяжести заболевания и риска побочных эффектов очевидно, что лекарственное средство, имеющее более высокую безопасность, можно получать с использованием аптамера, делающего возможным простой контроль кинетики in vivo.
[0077]
Дозировку лекарственного средство по настоящему изобретению варьируют в зависимости от типа и активности активного ингредиента, тяжести заболевания, вида животного, являющегося субъектом введения, переносимости лекарственного средства субъектом введения, массы тела, возраста и т.п., и общепринятая дозировка с учетом количества активного ингредиента в сутки для взрослого может составлять от приблизительно 0,0001 до приблизительно 100 мг/кг, например, от приблизительно 0,0001 до приблизительно 10 мг/кг, предпочтительно - от приблизительно 0,005 до приблизительно 1 мг/кг.
[0078]
Кроме того, аптамер или комплекс по настоящему изобретению также можно использовать в качестве средства для доставки лекарственного средства, зонда для визуализации in vivo, зонда для измерения концентрации FGF2 в крови, зонда для окрашивания ткани, зонда для ELISA, лиганда для разделения и очистки FGF2.
[0079]
Настоящее изобретение также относится к твердофазному носителю, содержащему аптамер и комплекс по настоящему изобретению, иммобилизированный на нем. В качестве примеров твердофазного носителя можно упомянуть субстрат, смолу, планшет (например, многолуночный планшет), фильтр, картридж, колонку и пористый материал. Субстрат может являться субстратом, используемым в ДНК-чипах, белковых чипах и т.п.; например, можно упомянуть субстраты никель-PTFE (политетрафторэтилен), стеклянные субстраты, апатитовые субстраты, силиконовые субстраты, субстраты оксида алюминия и т.п., и субстраты, полученные посредством покрывания этих субстратов полимером и т.п. В качестве примеров смолы можно упомянуть агарозные частицы, частицы диоксида кремния, coполимер акриламида и N,N'-метиленбисакриламида, частицы перекрестно сшитого полистиролом дивинилбензола, частицы декстрана, перекрестно сшитого эпихлоргидрином, целлюлозные волокна, перекрестно сшитые полимеры арилдекстрана и N,N'-метиленбисакриламида, монодисперсные синтетические полимеры, монодисперсные гидрофильные полимеры, сефарозу, Toyopearl и т.п., а также включали смолы, полученные посредством связывания различных функциональных групп с этими смолами. Твердофазный носитель по настоящему изобретению может быть применим, например, в очистке, детекции и количественном анализе FGF2.
[0080]
Аптамер и комплекс по настоящему изобретению можно иммобилизовать на твердофазном носителе способом, известным в этой области. Например, можно упомянуть способ, посредством которого в аптамер или комплекс по настоящему изобретению встраивают аффинное вещество (например, описываемое выше) или заранее определенную функциональную группу, а затем иммобилизуют аптамер и комплекс на твердофазном носителе с помощью аффинного вещества или заранее определенной функциональной группы. Настоящее изобретение также относится к способу иммобилизации аптамера или комплекса по настоящему изобретению на твердофазном носителе и получаемому таким образом твердофазному носителю. Заранее определенная функциональная группа может являться функциональной группой, которую можно подвергать реакции присоединения; например, можно упомянуть аминогруппу, тиольную группу, гидроксильную группу и карбоксильную группу. Настоящее изобретение также относится к аптамеру, имеющему такую функциональную группу, встроенную в него.
[0081]
Настоящее изобретение также относится к способу очистки и концентрирования FGF2. В частности, способ очистки по настоящему изобретению позволяет отделять FGF2 от других белков семейства FGF. Способ очистки и концентрирования по настоящему изобретению может включать адсорбцию FGF2 на твердофазном носителе по настоящему изобретению и элюцию адсорбированного FGF2 с использованием элюента. Адсорбцию FGF2 на твердофазном носителе по настоящему изобретению можно осуществлять способом, известным в этой области. Например, FGF2-содержащий образец (например, культуру бактерий или клеток или супернатант культуры, кровь) вводят в твердофазный носитель по настоящему изобретению или содержащую его композицию. FGF2 можно элюировать с использованием элюента, такого как нейтральный раствор. Нейтральный элюент не ограничен и может иметь pH, например, от приблизительно 6 до приблизительно 9, предпочтительно - от приблизительно 6,5 до приблизительно 8,5, и более предпочтительно - от приблизительно 7 до приблизительно 8. Нейтральный раствор также может содержать, например, соль калия (например, KCl), соль магния (например, MgCl2), поверхностно-активное вещество (например, Tween 20, Triton, NP40) и глицерин.
Способ очистки и концентрирования по настоящему изобретению дополнительно может включать промывание твердофазного носителя с использованием промывочного раствора после адсорбции FGF2. Примеры промывочного раствора включают растворы, содержащие мочевину, хелатирующее средство (например, ЭДТА), Трис, кислоту, щелочь, транспортную РНК, ДНК, поверхностно-активные вещества, такие как Tween 20, соли, такие как NaCl, и т.п. Способ очистки и концентрирования по настоящему изобретению дополнительно может включать нагревание твердофазного носителя. Этот этап делает возможными восстановление и стерилизацию твердофазного носителя.
[0082]
Аптамер или комплекс по настоящему изобретению можно использовать в качестве детекторного зонда, в частности, детекторного зонда для FGF2. Способ мечения аптамера конкретно не ограничен, и применимым является, по существу, известный способ. Примеры такого способа включают мечение радиоактивным изотопом, мечение флуоресцентным красителем или флуоресцентным белком и т.п.
[0083]
Настоящее изобретение также относится к способу детекции и количественного анализа FGF2. В частности, настоящее изобретение позволяет определять и количественно анализировать FGF2 отдельно от других белков семейства. Способ детекции и количественного анализа по настоящему изобретению может включать измерение FGF2 с использованием аптамера по настоящему изобретению (например, с использованием комплекса и твердофазного носителя по настоящему изобретению). Способ детекции и количественного анализа FGF2 можно осуществлять аналогично иммунологическому способу, за исключением того, что вместо антитела используют аптамер по настоящему изобретению. Таким образом, используя аптамер по настоящему изобретению вместо антитела аналогично таким способам, как иммуноферментный анализ (EIA) (например, прямой конкурентный ELISA, непрямой конкурентный ELISA, сэндвич-ELISA), радиоиммунологический анализ (RIA), флуоресцентный иммунологический анализ (FIA), способ вестерн-блоттинг, способ иммуногистохимического окрашивания и способ сортинга клеток, можно осуществлять детекцию и количественный анализ. Эти способы могут быть применимы, например, в измерении содержания FGF2 в живых организмах или биологических образцах и в диагностике заболевания, ассоциированного с FGF2.
[0084]
Описания во всех публикациях, упомянутых в настоящем описании, включая патенты и описания патентных заявок, включены в настоящее описание в качестве ссылок в той степени, как если бы каждое из них было упомянуто конкретно.
[0085]
Примеры конкретных вариантов осуществления для практического осуществления настоящего изобретения представлены ниже. Примеры представлены исключительно в целях объяснения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
[Примеры]
[0086]
Пример 1: Получение аптамеров РНК, специфически связывающихся с FGF2
В общепринятом способе SELEX использовали библиотеку приблизительно 30-40-мерных случайных последовательностей с добавлением приблизительно 20-мерных праймеров на оба конца. В этом случае полная длина полученного аптамера составляет приблизительно 80-100 мер, и после этого необходимым являлось укорачивание цепи. Однако укорачивание цепи не обязательно является простым, и зачастую активность коренным образом снижается. Таким образом, основываясь на способе Tailored-SELEX, разработанном NOXXON (Vater et al. Nucleic Acids Res. 31, 2003, el30; Jarosch et al. Nucleic Acids Res. 34, 2006, e86), осуществляли SELEX с использованием совокупности РНК с длиной приблизительно 30 мер, исключающей последовательность праймера.
Используемые ДНК-матрица и последовательности праймеров являются такими, как описано ниже.
ДНК-матрица:
5'-TCGAG-30N-TCCCTATAGTGAGTCGTATTAGCAGCTCCACAGGCTT-3' (SEQ ID NO: 13)
Прямой лигат:
5'-UAAUACGACUCACUAUA-3' (SEQ ID NO: 14)
Прямой праймер:
5'-AAGCCTGTGGAGCTGCTAATACGACTCACTATAGGGA-3' (SEQ ID NO: 15)
Прямой мостик:
5'-TCCCTATAGTGAGTCGTATTA-NH2-3' (SEQ ID NO: 16)
Обратный мостик:
5'-TCTTGTTCAGCTTAGTTCTCTCGAG-3' (SEQ ID NO: 17)
Обратный лигат:
5'-p-GAGAACTAAGCTGAACAAGA-NH2-3' (SEQ ID NO: 18)
[0087]
FGF2 человека (производимый Peprotech Inc.) использовали в качестве вещества-мишени. FGF2 иммобилизовали на агарозной смоле (NHS-активированной сефарозе, производимой GE Healthcare) посредством присоединения по аминогруппе. Присоединение по аминогруппе осуществляли по инструкциям GE Healthcare. Подтверждали степень иммобилизации, исследуя раствор FGF2 перед иммобилизацией и супернатант непосредственно после иммобилизации посредством электрофореза в ПААГ в присутствие SDS. В результате электрофореза в ПААГ в присутствие SDS в супернатанте не определяли полосу FGF2, что подтверждало, что присоединяли почти весь используемый FGF2. Приблизительно 290 пмоль FGF2 иммобилизовали на приблизительно 5 мкл смолы.
[0088]
РНК, используемую в первом раунде (30N-РНК), получали посредством получения двойной цепи химически синтезированной ДНК-матрицы с использованием прямого праймера и ее транскрипции с использованием набора DuraScribe (торговая марка) T7 Transcription Kit (производимого Epicentre). РНК, полученная этим способом, имеет замещенное фтором 2'-положение рибозы пиримидинового нуклеотида. После раунда 2 образуется двухцепочечная ДНК, и 3'-концевая последовательность праймера расщепляется ферментом рестрикции, после чего следует транскрипция.
[0089]
Совокупность РНК добавляли к смоле, на которой иммобилизовали FGF2, и смесь держали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем смолу промывали раствором A для удаления РНК, не связавшейся с FGF2. В настоящем описании раствор A является смешанным раствором 145 мМ хлорида натрия, 5,4 мМ хлорида калия, 1,8 мМ хлорида кальция, 0,8 мМ хлорида магния, 20 мМ Трис (pH 7,6) и 0,05% Tween 20. РНК, связавшуюся с FGF2, выделяли, добавляя элюент и инкубируя при 95°C в течение 10 мин. В качестве элюента использовали смесь 7 M мочевины, 3 мМ ЭДТА и 0,1 M Трис, полученную с pH 6,6. Выделенную РНК амплифицировали посредством RT-ПЦР, транскрибировали с помощью набора DuraScribe (торговая марка) T7 Transcription Kit и использовали в качестве совокупности для следующего раунда. Используя описываемое выше в качестве 1 раунда, осуществляли аналогичную операцию в течение 7 раундов. После завершения SELEX продукт ПЦР клонировали в вектор pGEM-T Easy (производимый Promega), который использовали для трансформации штамма DH5α Escherichia coli (производимого Toyobo). Плазмиду выделяли из отдельной колонии и исследовали последовательности оснований 97 клонов с помощью ДНК-секвенатора (3130xl Genetic Analyzer, производимого ABI).
[0090]
После 7 раундов SELEX исследовали последовательности. Из 89 клонов, 79 клонов являлись конвергентными, и их можно классифицировать на 11 типов. Оставшиеся 10 клонов представляли собой отдельные последовательности.
[0091]
Что касается конвергентных последовательностей, связывающую активность нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 1 и 2, в отношении FGF2 оценивали способом поверхностного плазмонного резонанса. В дальнейшем, нуклеотидные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 1 и 2, приведены как аптамер ID 1 и 2 вместе с модификацией 2'-положения рибозы. Круглыми скобками для каждого нуклеотида указаны модификации в 2'-положении рибозы, и F представляет собой атом фтора. В частности, c(F) представляет собой цитидин, где 2'-положение рибозы заменяют атомом фтора, и u(F) представляет собой уридин, где 2'-положение рибозы заменяют атомом фтора.
Начало каждой последовательности представляет собой 5'-конец, и конец представляет собой 3'-конец.
Аптамер ID 1:
GGGAU(F)AC(F)U(F)AGGGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)AGU(F)C(F)U(F)C(F)GA
Аптамер ID 2:GGGAAAC(F)U(F)AGGGC(F)GU(F)U(F)AAC(F)GU(F)GAC(F)C(F)AGU(F)GU(F)U(F)U(F)C(F)U(F)C(F)GA
[0092]
Для измерения использовали BIAcore2000, производимый BIAcore, и в качестве сенсорного чипа использовали CM4, реагирующий с аминогруппой. FGF2 человека разводили в растворе для иммобилизации (10 мМ ацетат натрия, pH 6) в концентрации 25-40 мкг/мл. Для реакции аминогруппы на стороне белка и карбоксильной группы на стороне чипа использовали этил-3-карбодиимид гидрохлорид и N-гидроксисукцинимид. После реакции осуществляли блокирование с помощью этаноламина-HCl. Количество иммобилизованного FGF2 устанавливали как 2500-4000 RU. Аптамер для аналита получали в количестве 0,15-0,5 мкМ. В качестве подвижного буфера использовали раствор A. В качестве раствора для регенерации использовали 2 M NaCl. FGF2 иммобилизовали на проточной кювете FC2 и вычитали результаты для FC1 для получения конечной сенсограммы.
[0093]
Измеряли связывание 2 последовательностей для нахождения исключительного связывания с FGF2. Сенсограмма, на которой показан статус связывания аптамера, представленного аптамером ID 1 и 2, и FGF2 человека, приведена на фиг. 1. Учитывая изложенное выше, показано, что эти нуклеиновые кислоты являются аптамерами, связывающимися с FGF2.
[0094]
Из 11 клонов, демонстрирующих конвергенцию, выбирали 10 клонов и, используя способ поверхностного плазмонного резонанса, исследовали, ингибируют ли они связывание FGF2 и рецептора FGF2. Для измерения использовали BIAcore2000, производимый BIAcore. Как указано в инструкциях BIAcore, протеин A (21181, производимый PIERCE) иммобилизовали на сенсорном чипе CM5. На нем иммобилизовали приблизительно по 1000 RU FGFR1α человека (IIIc), R2α (IIIc), R3 (IIIc), R4 (производимого R&D Systems), слитого с Fc-частью IgG (производимого R&D systems). В качестве аналита использовали смесь FGF2 (0,1 мкМ), гепарина (0,1 мкМ) (производимого Pfizer) и аптамера (0,15 мкМ). Перед тестированием ингибирования подтверждали, что смесь FGF2 и гепарина связывается с 4 типами рецепторов. В результате теста, аптамеры, представленные как аптамеры ID 1 и 2, демонстрировали сильную ингибиторную активность. Сенсограмма, на которой показано, что аптамер, представленный как аптамер ID 1, ингибирует связывание FGF2 и FGFR1α (IIIc), 2α (IIIc), 3(IIIc), 4, приведена на фиг. 2.
[0095]
Кроме того, определяли степень ингибирования в отношении каждого из 4 типов рецепторов. Определяли степень ингибирования, при этом максимальную степень связывания смеси FGF2 и гепарина принимали как 0 и степень связывания с буфером для инъекции в отдельности - как 100. В настоящем описании степень связывания означает значение RU для пика на сенсограмме. Вычисляли степень ингибирования. Аптамеры, представленные как аптамеры ID 1 и 2, демонстрировали высокое значение не менее 50% для любого рецептора. Степень ингибирования других аптамеров составляла не более 50%. Результаты представлены в таблице 1.
[0096]
Таблица 1
Степень ингибирования аптамеров, представленных как аптамеры ID 1 и 2, ингибирующих связывание FGF2 человека и рецептора FGF
Степень ингибирования (%) | ||||
FGFR1α (IIIc) | FGFR2α (IIIc) | FGFR3 (IIIc) | FGFR4 | |
Аптамер ID 1 | 89% | 88% | 80% | 75% |
Аптамер ID 2 | 89% | 86% | 75% | 73% |
[0097]
Пример 2: Укорачивание цепи аптамеров, представленных в SEQ ID NO: 1 и 2
Осуществляли укорачивание цепи аптамеров, представленных в SEQ ID NO: 1 и 2. Вторичную структуру РНК прогнозировали с использованием программы MFOLD (Zuker, Nucleic Acids Res. 31, 3406-3415, 2003) и осуществляли укорачивание цепи на основе структуры. Получали форму с укороченной цепью, получая ДНК целевой последовательности посредством химического синтеза и транскрибируя ее с использованием набора DuraScribe T7 Transcription Kit. Далее нуклеотидные последовательности (SEQ ID NO: 3 и 7) в фактически полученной форме с укороченной цепью представлены как аптамеры ID 3 и 7 вместе с модификацией 2'-положения рибозы.
[0098]
Аптамер ID 3: аптамер 36 нуклеотидов в длину, измененный относительно аптамера, представленного в SEQ ID NO: 1
GGGAU(F)AC(F)U(F)AGGGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 7: аптамер 35 нуклеотидов в длину, измененный относительно аптамера, представленного в SEQ ID NO: 2
GGGAAAC(F)U(F)AGGGC(F)GU(F)U(F)AAC(F)GU(F)GAC(F)C(F)AGU(F)GU(F)U(F)U(F)C(F)C(F)C(F)
[0099]
То, имеют ли эти нуклеиновые кислоты связывающую активность в отношении FGF2, исследовали способом поверхностного плазмонного резонанса, как в примере 1. Результаты представлены в таблице 2. Обнаруживали, что аптамеры, представленные как аптамеры ID 3 и 7, в значительной степени связываются с FGF2. Кроме того, то, имеют ли аптамеры ингибиторную активность в отношении связывания FGF2 и рецептора FGF2, исследовали способом поверхностного плазмонного резонанса аналогично примеру 1, обнаружив, что аптамеры, представленные как аптамеры ID 3 и 7, демонстрируют высокое ингибирование.
[0100]
Таблица 2
Степень ингибирования аптамеров, представленных как аптамеры ID 3 и 7, ингибирующих связывание FGF2 человека и рецептора FGF
FGFR1α (IIIc) | |
Аптамер ID 3 | 89% |
Аптамер ID 7 | 85% |
[0101]
Пример 3: Специфичность аптамера, представленного как аптамер ID 3
То, связывается ли аптамер FGF2, представленный как аптамер ID 3, с FGF1 из того же семейства FGF или некоторыми факторами роста EGF, β―NGF, VEGF, исследовали способом поверхностного плазмонного резонанса. Измерения осуществляли с использованием BIAcore 2000, производимого BIAcore. В качестве сенсорного чипа использовали чип SA с иммобилизованным на нем стрептавидином. С ним связывалось приблизительно 500 RU аптамера, представленного как аптамер ID 3, с добавлением биотина на 5'-конце. Аптамер с добавлением биотина получали посредством химического синтеза. В качестве белка, служащего лигандом, использовали FGF1, EGF, β―NGF, VEGF, производимый R&D. В качестве подвижного буфера использовали раствор A, используемый в примере 1, с добавлением хлорида натрия до конечной концентрации 0,3 M. В результате обнаруживали, что аптамер, представленный как аптамер ID 3, связывается с FGF2, но не связывается с другими белками. Сенсограмма приведена на фиг. 3.
Учитывая изложенное выше, обнаруживали, что аптамер, представленный как аптамер ID 3, специфически связывается с FGF2.
[0102]
Пример 4: Изменение и модификация аптамера с укороченной цепью
Для повышения FGF2-связывающей активности, стабильности, возможности доставки лекарственного средства и т.п. химически синтезировали нуклеиновые кислоты, представленные как аптамеры ID 3(1)-3(40), аптамеры ID 4 и 4(1)―4(4), аптамер ID 5 и аптамер ID 6, на основе аптамера, представленного в SEQ ID NO: 3. В настоящем описании аптамер, представленный как аптамер ID 4, является аптамером, представленным как аптамер ID 3(19), где один G(M) на 5'-конце и один C(M) на 3'-конце подвергали делеции. Аптамер, представленный как аптамер ID 5, является аптамером, представленным как аптамер ID 3(19), где один G(M) добавляли на 5'-конец и один C(M) добавляли на 3'-конец. Аптамер, представленный как аптамер ID 6, является аптамером, представленным как аптамер ID 3(19), где только A(M) добавляли на 5'-конец. Эти нуклеиновые кислоты получали посредством химического синтеза. То, ингибируют ли полученные аптамеры связывание FGF2 и рецептора FGF2, исследовали аналогично примеру 1. Как применяют в настоящем описании, концентрация аптамера, FGF2, гепарина составляла 0,1 мкМ. В результате эксперимента обнаруживали, что все измеряемые аптамеры сильно ингибировали связывание FGF2 и рецептора FGFR1α (IIIc). Результаты представлены в таблице 3.
[0103]
[Таблица 3-1]
Степень ингибирования аптамеров, ингибирующих связывание FGF2 и рецептора FGFR1α (IIIc) в присутствие гепарина
Степень ингибирования (%) | |
Аптамер ID 3(1) | 84 |
Аптамер ID 3(2) | 89 |
Аптамер ID 3(3) | 87 |
Аптамер ID 3(4) | 89 |
Аптамер ID 3(5) | 87 |
Аптамер ID 3(6) | 78 |
Аптамер ID 3(7) | 89 |
Аптамер ID 3(8) | 84 |
Аптамер ID 3(9) | 89 |
Аптамер ID 3(10) | 89 |
Аптамер ID 3(11) | 88 |
Аптамер ID 3(12) | 89 |
Аптамер ID 3(13) | 88 |
Аптамер ID 3(14) | 87 |
Аптамер ID 3(15) | 86 |
Аптамер ID 3(16) | 87 |
Аптамер ID 3(17) | 88 |
Аптамер ID 3(18) | 89 |
Аптамер ID 3(19) | 93 |
Аптамер ID 3(20) | 96 |
Аптамер ID 3(21) | 97 |
Аптамер ID 3(22) | 98 |
Аптамер ID 3(23) | 91 |
Аптамер ID 3(24) | 90 |
Аптамер ID 3(25) | 90 |
Аптамер ID 3(26) | 99 |
Аптамер ID 3(27) | 99 |
Аптамер ID 3(28) | 91 |
Аптамер ID 3(29) | 91 |
Аптамер ID 3(30) | 99 |
[0104]
[Таблица 3-2]
Степень ингибирования аптамеров, ингибирующих связывание FGF2 и рецептора FGFR1α (IIIc) в присутствие гепарина (продолжение)
Степень ингибирования (%) | |
Аптамер ID 3(31) | 91 |
Аптамер ID 3(32) | 91 |
Аптамер ID 3(33) | 90 |
Аптамер ID 3(34) | 91 |
Аптамер ID 3(35) | 84 |
Аптамер ID 3(36) | 98 |
Аптамер ID 3(37) | 97 |
Аптамер ID 3(38) | 97 |
Аптамер ID 3(39) | 97 |
Аптамер ID 3(40) | 97 |
Аптамер ID 4 | 95 |
Аптамер ID 4(1) | 93 |
Аптамер ID 4(2) | 94 |
Аптамер ID 4(3) | 96 |
Аптамер ID 4(4) | 96 |
Аптамер ID 5 | 94 |
Аптамер ID 6 | 93 |
[0105]
Учитывая изложенное выше, показано, что все аптамеры, представленные как указанные выше аптамеры ID, имеют высокую ингибиторную активность в отношении связывания FGF2 и рецептора FGF.
[0106]
Соответствующие последовательности представлены ниже. Заглавными буквами указана РНК, строчными буквами указана ДНК, и посредством idT указаны инвертированные dT. Круглыми скобками у каждого нуклеотида указана модификация в его 2'-положении, посредством F указан атом фтора, и посредством M указана O-метильная группа. Посредством s указана фосфотиоатная связь. Посредством C6 указан -(CH2)6-линкер, и посредством ssH указан линкер ssH (-CH2-CH2-O-CO-NH-(CH2)6-). PEG40TS2 является 2-разветвленным полиэтиленгликолем типа TS, имеющим молекулярную массу 40000 (SUNBRIGHT GL2-400TS, производимый NOF CORPORATION), PEG80TS4 является 4-разветвленным PEG типа TS, имеющим молекулярную массу 80000 (SUNBRIGHT GL4-800TS, производимый NOF CORPORATION), Y-NHS-40K является Y-образным PEG NHS Esyer (Y-NHS-40K, производимый JenKem Technology USA), имеющим молекулярную массу 40000, ME-100TS является PEG типа TS (SUNBRIGHT ME-100TS, производимый NOF CORPORATION), имеющим молекулярную массу 10000, и PTE-100CS является 4-разветвленным PEG типа CS (SUNBRIGHT PTE-100CS производимый NOF CORPORATION), имеющим молекулярную массу 10000. Каждая из нуклеотидных последовательностей аптамеров ID 3(1)-(40), не содержащие остаток линкера и модифицированный остаток, представленный в SEQ ID NO: 3, и аналогично, нуклеотидные последовательности аптамеров ID 4 и 4(1)-(4), аптамеров ID 5 и 6 представлены в SEQ ID NO: 4-6.
[0107]
Аптамер ID 3(1)
GGGAU(F)AC(F)U(F)AGGGC(F)A(M)U(F)U(F)A(M)A(M)U(F)G(M)U(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(2)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(F)AC(F)U(F)AGGGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(3)
GGGAU(F)AC(F)U(F)AGG(M)GC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(4)
GGGAU(F)AC(F)U(F)AG(M)GGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(5)
GGGAU(F)AC(F)U(F)A(M)GGGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(6)
GGGAU(F)AC(F)U(F)AGGGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)A(M)C(F)C(F)AGU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(7)
GGGAU(F)AC(F)U(F)AGGGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)A(M)GU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(8)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(F)AC(F)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(F)A(M)U(F)U(F)A(M)A(M)U(F)G(M)U(F)U(F)A(M)C(F)C(F)A(M)GU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F))C(F)-idT
Аптамер ID 3(9)
GGGAU(F)A(M)C(F)U(F)AGGGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(10)
GGGAU(F)AC(F)U(F)AGGGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)AG(M)U(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(11)
GGGAU(F)AC(F)U(F)AGGGC(F)AU(F)U(F)AAU(F)GU(F)U(F)AC(F)C(F)AGU(F)GU(F)A(M)GU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(12)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(F)AC(F)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(F)A(M)U(F)U(F)A(M)A(M)U(F)G(M)U(F)U(F)A(M)C(F)C(F)A(M)GU(F)GU(F)AGU(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 3(13)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(F)AC(F)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(F)A(M)U(M)U(M)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(F)A(M)C(F)C(F)A(M)GU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(14)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(F)AC(F)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(F)A(M)U(F)U(F)A(M)A(M)U(F)G(M)U(F)U(M)A(M)C(F)C(F)A(M)GU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(15)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(F)AC(F)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(F)A(M)U(F)U(F)A(M)A(M)U(F)G(M)U(F)U(F)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(16)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(F)AC(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(F)A(M)U(F)U(F)A(M)A(M)U(F)G(M)U(F)U(F)A(M)C(F)C(F)A(M)GU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(17)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)AC(F)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(F)A(M)U(F)U(F)A(M)A(M)U(F)G(M)U(F)U(F)A(M)C(F)C(F)A(M)GU(F)GU(F)AGU(F)C(F)C(F)C(F)
Аптамер ID 3(18)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(19)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 3(20)
idT-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(21)
GL2-400TS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 3(22)
idT-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-C6-GL2-400TS
Аптамер ID 3(23)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)gC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(24)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)gU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(25)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)G(F)C(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(26)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)G(F)U(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(27)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)G(F)U(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(28)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)sGC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(29)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GsC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(30)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)sGU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(31)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GsU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(32)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)sGU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(33)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GsU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 3(34)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)G(F)C(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)G(F)U(F)G(F)U(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 3(35)
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)G(F)C(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)G(F)U(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 3(36)
GL4-800TS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 3(37)
Y-NHS-40K-ssH-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 3(38)
ME-100TS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 3(39)
PTE-100CS-C6-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 3(40)
GL2-400TS-ssH-G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 4: измененная форма аптамера, представленного как аптамер ID 3(19) и имеющего длину 34 нуклеотидов
G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 4(1)
G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)G(F)C(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 4(2)
G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)G(F)C(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)G(F)U(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 4(3)
G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)G(F)C(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)sGU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 4(4)
G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)G(F)C(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)G(F)U(F)GsU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 5: измененная форма аптамера, представленного как аптамер ID 3(19) и имеющего длину 38 нуклеотидов
G(M)G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)C(M)-idT
Аптамер ID 6: измененная форма аптамера, представленного как аптамер ID 3(19) и имеющего длину 37 нуклеотидов
A(M)G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)-idT
[0108]
Пример 5: Оценка ингибиторной активности аптамера в отношении FGF2-зависимой клеточной пролиферации с использованием эндотелиальных клеток пупочной вены человека
Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC) высевали в 96-луночный плоскодонный планшет при 5×103 клеток на лунку и культивировали в течение ночи с использованием среды EGM-2 Bullet Kit для эндотелиальных клеток (CC-3162, производимых Lonza), содержащей 2% эмбриональную телячью сыворотку и факторы роста. Затем среду выбрасывали, клетки дважды промывали буфером PBS и добавляли смесь аптамера, представленного как аптамер ID 3(21), (5, 2,5, 1, 0,5 нМ) и FGF2 (конечная концентрация 0,5 нМ), растворенных в среде исключительно для эндотелиальных клеток, содержащей 2% эмбриональную телячью сыворотку. Через 72 часа исследовали количество жизнеспособных клеток с использованием набора Cell Counting Kit-8. Для измерения поглощения использовали спектрофотометр для чтения микропланшетов (450 нм). Один образец измеряли при n=3. В качестве положительного контроля использовали антитело mAb мыши против FGF2/основного FGF (Ab-3) (3H3) (производимое Calbiochem). Используя значение OD на лунку, полученное при добавлении FGF2 в отдельности и культуры клеток, культивируемой в течение 3 дней, в качестве ингибиторной активности 0%, и значение, полученное с помощью культуры без FGF2, культивируемой в течение 3 дней, в качестве ингибиторной активности 100%, вычисляли ингибиторную активность аптамера из значения OD на лунку, полученного при культивировании с добавлением смеси FGF2 и аптамера. В результате показано, что аптамер, представленный как аптамер ID 3(21), имеет высокую ингибиторную активность в отношении FGF2. Значение IC50 составляло приблизительно 1,0 нМ. Результаты представлены в таблице 4.
[0109]
[Таблица 4]
Супрессия роста клеток HUVEC аптамером, представленным как аптамер ID 3(21), с добавлением FGF2
Степень ингибирования (%) | |
- | 100 |
FGF2 (500 пМ) | 0 |
3H3 (25 нМ)+FGF2 (500 пМ) | 100 |
3H3 (5 нМ)+FGF2 (500 пМ) | 30 |
3H3 (1 нМ)+FGF2 (500 пМ) | 8,5 |
Аптамер ID 3(21) (5 нМ)+FGF2 (500 пМ) | 100 |
Аптамер ID 3(21) (2,5 нМ)+FGF2 (500 пМ) | 86 |
Аптамер ID 3(21) (1 нМ)+FGF2 (500 пМ) | 47 |
Аптамер ID 3(21) (0,5 нМ)+FGF2 (500 пМ) | 0 |
Скремблированная последовательность (5 нМ)+FGF2 (500 пМ) | 11 |
"-" означает отсутствие добавления FGF2.
[0110]
Учитывая изложенное выше, предполагали, что аптамер, представленный как аптамер ID 3(21), ингибирует ангиогенез.
[0111]
Активность различных аптамеров оценивали способом, аналогичным указанному выше, за исключением того, что 96-луночный плоскодонный планшет заменяли планшетом, покрытым коллагеном. Концентрация добавленного FGF2 составляла 0,58 нМ. Результаты представлены в таблице 5. В качестве РНК отрицательного контроля использовали последовательность макугена (зарегистрированная торговая марка) без добавления PEG, и с C6-модификацией 5'-конца и idT-модификацией 3'-конца.
[0112]
[Таблица 5]
Значение IC50 аптамера, супрессирующего рост клеток HUVEC при добавлении FGF2
Аптамер ID | IC50 (нМ) |
3(8) | 27 |
3(12) | 21 |
3(13) | 15 |
3(14) | 12 |
3(15) | 14 |
3(16) | 7,9 |
3(18) | 2,6 |
3(23) | 5,3 |
3(24) | 7,3 |
3(25) | 5,1 |
3(26) | 3,0 |
3(27) | 3,7 |
3(28) | 4,0 |
3(29) | 3,1 |
3(30) | 3,3 |
3(31) | 10 |
3(32) | 4,0 |
3(33) | 4,0 |
4 | 5,0 |
4(1) | 3,8 |
4(2) | 5,1 |
4(3) | 4,6 |
4(4) | 4,5 |
5 | 2,6 |
6 | 3,1 |
РНК отрицательного контроля | >400 |
[0113]
Учитывая изложенное выше, предполагали, что аптамеры, представленные как указанные выше аптамеры ID, аналогично ингибируют ангиогенез.
[0114]
Пример 6: Оценка активности ингибирования аптамером FGF2-зависимой клеточной пролиферации с использованием эндотелиальных клеток пупочной вены человека-2
Способом, аналогичным таковому в примере 5, измеряли ингибиторную активность аптамеров, представленных как аптамеры ID 8-12. Результаты представлены в таблице 6.
Нуклеотидные последовательности аптамеров ID 8-12 представлены в SEQ ID NO: 8-12, соответственно.
[0115]
Аптамер ID 8
NH2-C(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)G(M)-idT
Аптамер ID 9
NH2-C(M)C(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)A(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)G(M)G(M)-idT
Аптамер ID 10
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)G(M)U(M)U(F)A(M)A(M)C(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 11
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)C(M)U(M)U(F)A(M)A(M)G(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
Аптамер ID 12
G(M)G(M)G(M)A(M)U(M)A(M)C(M)U(F)A(M)G(M)G(M)GC(M)A(M)U(M)U(F)U(M)A(M)U(M)G(M)U(F)U(M)A(M)C(M)C(M)A(M)GU(F)GU(F)A(M)G(M)U(M)C(M)C(M)C(M)
[0116]
[Таблица 6]
Значение IC50 аптамера, супрессирующего рост клеток HUVEC при добавлении FGF2
Аптамер ID | IC50 (нМ) |
Аптамер ID 8 | 5,6 |
Аптамер ID 9 | 3,7 |
Аптамер ID 10 | 4,9 |
Аптамер ID 11 | 13 |
Аптамер ID 12 | 2,3 |
Аптамер ID 3(19) | 3,4 |
[0117]
Пример 7: Тестирование модели ангиогенеза мыши
Matrigel, содержащий 0,76% (конечная концентрация) цитрата натрия, (BD MatrigelTM), содержащий FGF-2 человека (производимый R&D), подкожно инъецировали мыши C57BL/6J (самке) возрастом 8 недель под анестезии. Через 7 дней выделяли Matrigel и оценивали уровень ангиогенеза с учетом уровня гемоглобина в Matrigel. Уровень гемоглобина количественно анализировали цианметгемоглобиновым способом с использованием набора Drabkin Reagent Kit. Аптамер растворяли в фосфатном буфере, содержащем 1 мМ хлорида магния, и вводили интраперитонеально один раз в сутки незамедлительно после подкожного введения Matrigel. Исследуемая группа представлена в таблице 7, и результаты представлены в таблице 8. Значительное ингибирование ангиогенеза наблюдали в группе, которой вводили 1 мг/кг аптамера. Учитывая сказанное выше, подтверждали, что аптамер по настоящему изобретению также демонстрирует сильную ингибиторную активность в отношении ангиогенеза в модели на животных.
[0118]
[Таблица 7]
Исследуемая группа
Исследуемая группа | FGF-2 (мкг) | Доза аптамера (мг/кг) | Путь введения | Частота введения | Количество животных (мышей) |
|
1 | Контрольная группа | 0 | 0 | Интраперитонеальный | Раз в сутки | 3 |
2 | Группа, которой вводили растворитель | 1 | 0 | Интраперитонеальный | Раз в сутки | 3 |
3 | Группа, которой вводили низкую дозу аптамера ID 3(22) | 1 | 0,1 | Интраперитонеальный | Раз в сутки | 3 |
4 | Группа, которой вводили высокую дозу аптамера ID 3(22) | 1 | 1 | Интраперитонеальный | Раз в сутки | 3 |
[0119]
[Таблица 8]
Результаты тестирования модели ангиогенеза мыши
Контрольная группа | Количество гемоглобина (мг/мл) | |
1 | Группа, которой вводили растворитель | 0,19 |
2 | Группа, которой вводили низкую дозу аптамера ID 3(22) | 2,2 |
3 | Группа, которой вводили высокую дозу аптамера ID 3(22) | 1,3 |
4 | Контрольная группа | 0,29 |
[0120]
Настоящая заявка основана на патентной заявке № 2014-60966 (дата подачи: 24 марта 2014 года), поданной в Японии, содержание которой включено в настоящее описание в полном объеме.
[Промышленная применимость]
[0121]
Аптамер или комплекс по настоящему изобретению могут быть применимыми в качестве лекарственного средства, или диагностического средства или реагента для заболеваний, таких как заболевание, сопровождаемое ангиогенезом, заболевание костей и суставов, боль и т.п. Аптамер и комплекс по настоящему изобретению также могут быть применимыми для очистки и концентрирования FGF2, мечения FGF2, а также детекции и количественного анализа FGF2.
Claims (44)
1. Аптамер, связывающийся с FGF2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную следующей формулой (1) (где урацил может быть замещен на тимин), и представляющий собой (a) или (b):
N1GGAN2ACUAGGGCN3UUAAN4GUN5ACCAGUGUN6 (формула 1),
каждый из N1 и N6 независимо является любым из от 0 до 10 оснований,
N2, N3, N4 и N5 независимо являются любым основанием,
(a) аптамер, где в нуклеотидах, содержащихся в аптамере,
(i) 2'-положение рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является атомом фтора,
(ii) 2'-положение рибозы каждого пуринового нуклеотида является гидроксигруппой;
(b) аптамер по п. (a), где
(i) атом фтора в 2'-положении рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является независимо незамещенным или замещенным атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы и метоксигруппы,
(ii) гидроксигруппа в 2'-положении рибозы каждого пуринового нуклеотида является независимо незамещенной или замещенной атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, метоксигруппы и атома фтора.
2. Аптамер по п. 1, где
N1 является G, GG, AG, C или пропуском,
N2 является A или U,
N3 является G, C или A,
N4 является G, C или U,
N5 является G или U, и
N6 является UUCN61 или AGUCN62, где каждый из N61 и N62 независимо является любым из от 0 до 10 оснований.
3. Аптамер по п. 1 или 2, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную следующей формулой (2) или (3):
GGGAAACUAGGGCGUUAACGUGACCAGUGUUUCN61 (формула 2),
N1GGAUACUAGGGCAUUAAUGUUACCAGUGUAGUCN62 (формула 3).
4. Аптамер по любому из пп. 1-3, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2 или 7.
5. Аптамер по любому из пп. 1-3, содержащий нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, 3, 4, 5, 6, 8, 10 или 11.
6. Аптамер по любому из пп. 1-5, где от 1 до 10 нуклеотидов являются замещенными, делетированными, встроенными или добавленными, являющийся
(a) аптамером, где в нуклеотидах, содержащихся в аптамере,
(i) 2'-положение рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является атомом фтора,
(ii) 2'-положение рибозы каждого пуринового нуклеотида является гидроксигруппой;
(b) аптамером по п. (a), где
(i) атом фтора в 2'-положении рибозы каждого пиримидинового нуклеотида является независимо незамещенным или замещенным атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы и метоксигруппы,
(ii) гидроксигруппа в 2'-положении рибозы каждого пуринового нуклеотида является независимо незамещенной или замещенной атомом или группой, выбранными из группы, состоящей из атома водорода, метоксигруппы и атома фтора.
7. Аптамер по любому из пп. 1-6, имеющий длину не более 45 нуклеотидов.
8. Аптамер по любому из пп. 1-7, ингибирующий связывание FGF2 и рецептора FGF.
9. Комплекс для связывания аптамера с FGF2, содержащий аптамер по любому из пп. 1-8 и функциональное вещество, где функциональное вещество является аффинным веществом, веществом для мечения, ферментом, средством для доставки лекарственного средства или лекарственным средством.
10. Лекарственное средство для лечения или профилактики заболевания, сопровождаемого ангиогенезом, содержащее аптамер по любому из пп. 1-8 или комплекс по п. 9.
11. Лекарственное средство для лечения или профилактики заболевания костей и суставов, содержащее аптамер по любому из пп. 1-8 или комплекс по п. 9.
12. Лекарственное средство для лечения или профилактики боли, содержащее аптамер по любому из пп. 1-8 или комплекс по п. 9.
13. Способ лечения или профилактики заболевания, сопровождаемого ангиогенезом, включающий введение индивидууму эффективного количества аптамера по любому из пп. 1-8 или комплекс по п. 9.
14. Способ лечения или профилактики заболевания костей и суставов, включающий введение субъекту эффективного количества аптамера по любому из пп. 1-8 или комплекса по п. 9.
15. Способ лечения или профилактики боли, включающий введение субъекту эффективного количества аптамера по любому из пп. 1-8 или комплекса по п. 9.
16. Аптамер по любому из пп. 1-8 или комплекс по п. 9 для применения в лечении или профилактике заболевания, сопровождаемого ангиогенезом.
17. Аптамер по любому из пп. 1-8 или комплекс по п. 9 для применения для лечения или профилактики заболевания костей и суставов.
18. Аптамер по любому из пп. 1-8 или комплекс по п. 9 для применения для лечения или профилактики боли.
19. Применение аптамера по любому из пп. 1-8 или комплекса по п. 9 в получении лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания, сопровождаемого ангиогенезом.
20. Применение аптамера по любому из пп. 1-8 или комплекса по п. 9 для получения лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания костей и суставов.
21. Применение аптамера по любому из пп. 1-8 или комплекса по п. 9 для получения лекарственного средства для лечения или профилактики боли.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014-060966 | 2014-03-24 | ||
JP2014060966 | 2014-03-24 | ||
PCT/JP2015/058992 WO2015147017A1 (ja) | 2014-03-24 | 2015-03-24 | Fgf2に対するアプタマー及びその使用 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016141263A RU2016141263A (ru) | 2018-04-26 |
RU2016141263A3 RU2016141263A3 (ru) | 2018-10-12 |
RU2686992C2 true RU2686992C2 (ru) | 2019-05-06 |
Family
ID=54195529
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016141263A RU2686992C2 (ru) | 2014-03-24 | 2015-03-24 | Аптамер для fgf2 и его применение |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9987298B2 (ru) |
EP (1) | EP3124611B1 (ru) |
JP (1) | JP6634554B2 (ru) |
KR (1) | KR102394676B1 (ru) |
CN (1) | CN106103719B (ru) |
AU (1) | AU2015235020B2 (ru) |
BR (1) | BR112016020984A2 (ru) |
CA (1) | CA2943772C (ru) |
DK (1) | DK3124611T3 (ru) |
ES (1) | ES2768693T3 (ru) |
HU (1) | HUE048529T2 (ru) |
IL (1) | IL247998B (ru) |
MX (1) | MX2016012466A (ru) |
PL (1) | PL3124611T3 (ru) |
PT (1) | PT3124611T (ru) |
RU (1) | RU2686992C2 (ru) |
SG (1) | SG11201607906RA (ru) |
WO (1) | WO2015147017A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3105002A1 (en) | 2018-06-29 | 2020-01-02 | Ribomic Inc. | Aptamer preparation |
CN114853869B (zh) * | 2019-12-10 | 2023-12-26 | 湖南赛奥维生物技术有限公司 | 一种碱性成纤维细胞生长因子替代物及其组合物和应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2410432C1 (ru) * | 2009-11-23 | 2011-01-27 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова | Модифицированные днк аптамеры, ингибирующие активность тромбина |
WO2011099576A1 (ja) * | 2010-02-12 | 2011-08-18 | 国立大学法人 東京大学 | Fgf2に対するアプタマー及びその使用 |
WO2013186857A1 (ja) * | 2012-06-12 | 2013-12-19 | 株式会社リボミック | Fgf2に対するアプタマー及びその使用 |
EA022429B1 (ru) * | 2010-04-12 | 2015-12-30 | Сомалоджик, Инк. | АПТАМЕРЫ К β-NGF И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ЛЕЧЕНИИ β-NGF-ОПОСРЕДОВАННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАССТРОЙСТВ |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6177557B1 (en) * | 1990-06-11 | 2001-01-23 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | High affinity ligands of basic fibroblast growth factor and thrombin |
KR970002255B1 (ko) | 1990-06-11 | 1997-02-26 | 넥스스타 파아마슈티컬드, 인크. | 핵산 리간드 |
PT668931E (pt) | 1992-09-29 | 2006-05-31 | Gilead Sciences Inc | Ligandos de acidos nucleicos e metodos para producao dos mesmos |
ATE518965T1 (de) * | 1992-09-29 | 2011-08-15 | Gilead Sciences Inc | Nukleinsäureliganden und ihre herstellungsmethoden |
EP0724647A4 (en) | 1993-09-08 | 2003-09-17 | Gilead Sciences Inc | NUCLEIC ACIDS AS LIGANDS AND IMPROVED PRODUCTION METHODS |
US7795419B2 (en) * | 2004-05-26 | 2010-09-14 | Rosetta Genomics Ltd. | Viral and viral associated miRNAs and uses thereof |
-
2015
- 2015-03-24 CN CN201580015642.1A patent/CN106103719B/zh active Active
- 2015-03-24 HU HUE15767725A patent/HUE048529T2/hu unknown
- 2015-03-24 PT PT157677253T patent/PT3124611T/pt unknown
- 2015-03-24 PL PL15767725T patent/PL3124611T3/pl unknown
- 2015-03-24 US US15/128,495 patent/US9987298B2/en active Active
- 2015-03-24 RU RU2016141263A patent/RU2686992C2/ru active
- 2015-03-24 ES ES15767725T patent/ES2768693T3/es active Active
- 2015-03-24 JP JP2016510402A patent/JP6634554B2/ja active Active
- 2015-03-24 MX MX2016012466A patent/MX2016012466A/es active IP Right Grant
- 2015-03-24 BR BR112016020984A patent/BR112016020984A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2015-03-24 KR KR1020167029463A patent/KR102394676B1/ko active IP Right Grant
- 2015-03-24 SG SG11201607906RA patent/SG11201607906RA/en unknown
- 2015-03-24 DK DK15767725.3T patent/DK3124611T3/da active
- 2015-03-24 WO PCT/JP2015/058992 patent/WO2015147017A1/ja active Application Filing
- 2015-03-24 EP EP15767725.3A patent/EP3124611B1/en active Active
- 2015-03-24 CA CA2943772A patent/CA2943772C/en active Active
- 2015-03-24 AU AU2015235020A patent/AU2015235020B2/en active Active
-
2016
- 2016-09-22 IL IL247998A patent/IL247998B/en active IP Right Grant
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2410432C1 (ru) * | 2009-11-23 | 2011-01-27 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова | Модифицированные днк аптамеры, ингибирующие активность тромбина |
WO2011099576A1 (ja) * | 2010-02-12 | 2011-08-18 | 国立大学法人 東京大学 | Fgf2に対するアプタマー及びその使用 |
US8772259B2 (en) * | 2010-02-12 | 2014-07-08 | Ribomic Inc. | Aptamer to FGF2 and use thereof |
EA022429B1 (ru) * | 2010-04-12 | 2015-12-30 | Сомалоджик, Инк. | АПТАМЕРЫ К β-NGF И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ЛЕЧЕНИИ β-NGF-ОПОСРЕДОВАННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАССТРОЙСТВ |
WO2013186857A1 (ja) * | 2012-06-12 | 2013-12-19 | 株式会社リボミック | Fgf2に対するアプタマー及びその使用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2016141263A (ru) | 2018-04-26 |
CN106103719B (zh) | 2019-12-13 |
EP3124611A4 (en) | 2017-10-25 |
EP3124611A1 (en) | 2017-02-01 |
MX2016012466A (es) | 2017-01-06 |
KR102394676B1 (ko) | 2022-05-09 |
PT3124611T (pt) | 2020-02-17 |
RU2016141263A3 (ru) | 2018-10-12 |
EP3124611B1 (en) | 2019-11-06 |
PL3124611T3 (pl) | 2020-05-18 |
CA2943772A1 (en) | 2015-10-01 |
AU2015235020A1 (en) | 2016-11-10 |
CA2943772C (en) | 2022-07-19 |
JPWO2015147017A1 (ja) | 2017-04-13 |
IL247998A0 (en) | 2016-11-30 |
JP6634554B2 (ja) | 2020-01-22 |
AU2015235020B2 (en) | 2020-10-22 |
IL247998B (en) | 2020-09-30 |
ES2768693T3 (es) | 2020-06-23 |
US20170157165A1 (en) | 2017-06-08 |
KR20160135819A (ko) | 2016-11-28 |
SG11201607906RA (en) | 2016-11-29 |
BR112016020984A2 (pt) | 2017-10-03 |
HUE048529T2 (hu) | 2020-07-28 |
CN106103719A (zh) | 2016-11-09 |
US9987298B2 (en) | 2018-06-05 |
DK3124611T3 (da) | 2020-01-27 |
WO2015147017A1 (ja) | 2015-10-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6118724B2 (ja) | Ngfに対するアプタマー及びその用途 | |
JP5190573B2 (ja) | ミッドカインに対するアプタマー及びその使用 | |
WO2013186857A1 (ja) | Fgf2に対するアプタマー及びその使用 | |
JP5810356B2 (ja) | キマーゼに対するアプタマー及びその使用 | |
JP5899550B2 (ja) | Fgf2に対するアプタマー及びその使用 | |
JP5602020B2 (ja) | Ngfに対するアプタマー及びその使用 | |
US9506070B2 (en) | Aptamer against midkine and applications thereof | |
RU2686992C2 (ru) | Аптамер для fgf2 и его применение | |
WO2019107532A1 (ja) | キマーゼに対するアプタマー及びその使用 |