RU2682320C1 - Средство для профилактики вирусных инфекций - Google Patents

Средство для профилактики вирусных инфекций Download PDF

Info

Publication number
RU2682320C1
RU2682320C1 RU2018116987A RU2018116987A RU2682320C1 RU 2682320 C1 RU2682320 C1 RU 2682320C1 RU 2018116987 A RU2018116987 A RU 2018116987A RU 2018116987 A RU2018116987 A RU 2018116987A RU 2682320 C1 RU2682320 C1 RU 2682320C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
selenium
prevention
viral
viral infections
titer
Prior art date
Application number
RU2018116987A
Other languages
English (en)
Inventor
Владислав Николаевич Ласкавый
Original Assignee
Владислав Николаевич Ласкавый
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Владислав Николаевич Ласкавый filed Critical Владислав Николаевич Ласкавый
Priority to RU2018116987A priority Critical patent/RU2682320C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2682320C1 publication Critical patent/RU2682320C1/ru
Priority to SG11202010357UA priority patent/SG11202010357UA/en
Priority to US17/250,007 priority patent/US12076389B2/en
Priority to EA202092440A priority patent/EA202092440A1/ru
Priority to CA3098996A priority patent/CA3098996C/en
Priority to PCT/RU2019/000259 priority patent/WO2019216791A1/ru
Priority to EP19799149.0A priority patent/EP3791893A4/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • A61K39/225—Porcine transmissible gastroenteritis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к средству для профилактики вирусных инфекций, содержащему вирусный материал из РНК-содержащих вирусов, имеющих липидную оболочку. Осуществление изобретения позволяет расширить арсенал противовирусных профилактических препаратов. 6 з.п. ф-лы, 2 табл., 6 пр.

Description

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а более конкретно - к фармакологии, и может использоваться для профилактики вирусных инфекций, вызванных РНК-содержащими вирусами, имеющими липидную оболочку, в частности, гриппа, трансмиссивного гастроэнтерита свиней и других вирусных инфекций. Изобретение расширяет арсенал средств заявленного назначения.
Наиболее распространенными вирусными инфекциями у людей являются грипп и простуда. Каждый год приблизительно 10-20% населения земного шара заболевают гриппом, а простуда - наиболее часто возникающая инфекция у людей.
Существует множество неспецифических препаратов для профилактики вирусных инфекций, например, гриппферон, арбидол, ацикловир. Наряду с широко применяемыми неспецифическими профилактическими препаратами разрабатываются и новые - на основе растений (патенты РФ №2505306, 2393871), мицелия грибов (патент РФ №2522880), дипептида (патент РФ №2429875) и пр.
В частности, известно средство для профилактики вирусных инфекций, (см. патент РФ №2505306 по кл. МПК А61К 36/185, опубл. 27.01.2014), содержащее водный экстракт листьев и ветвей растений рода Ribes. Средство предназначено для использования при вирусных инфекциях, включая простуду с первичной инфекцией, вызываемой риновирусами, аденовирусами и/или коронавирусами, грипп, вирусную инфекцию, вызванную ретровирусами.
Поскольку средство представляет собой растительный экстракт, то оно является многокомпонентной системой, которая может проявлять не только положительные действия на вирусы, но и изменять резистентность организма человека и животных.
Другую группу профилактических препаратов составляют специфические средства (вакцины).
Общим свойством всех существующих вакцин является то, что они действуют в отношении конкретного серотипа возбудителя и его антигенного состава.
В частности, известно средство для профилактики вирусных инфекций на основе холодоадаптированного штамма вируса гриппа А/Краснодар/101/59/35 (H2N2) (см. Патент РФ №2354695 по кл. МПК C12N 7/00, опубл. 10.05.2009), содержащее данный штамм в десятикратном разведении, 1% раствор глютамата хитозония и 0,9% раствор хлорида натрия.
Однако, средство действует только в отношении определенного вида вируса (H2N2). Причем, действие данной живой вакцины направлено не на сам вирус, а на усиление иммунного ответа организма.
Наиболее близким к заявляемому является средство для профилактики вирусных инфекций, в частности трансмиссивного гастроэнтерита свиней (см. патент РФ №2463073 по кл. МПК А61К 39/225 опубл. 10.10.2012), содержащее вирусный материал из штамма «ВН-96» вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней в титре 7,0-7,2 lg ТЦД50/мл и физиологический раствор в определенных процентных соотношениях.
Однако, данное средство направлено на профилактику трансмиссивного гастроэнтерита только определенного серотипа возбудителя и неэффективно при иммунодефицитных состояниях животных.
Таким образом, приведенные аналоги не решают проблему внутриклеточного подавления вируса, они только способствуют коррекции иммунитета. Создание противовирусных средств является далеко не решенной задачей. Поэтому поиск новых средств защиты от вирусных инфекций весьма актуален.
Технической проблемой заявляемого изобретения является расширение спектра противовирусных профилактических препаратов и формирование новых подходов к проблеме профилактики вирусных заболеваний человека, особенно гриппа, за счет внутриклеточного подавления вируса.
Достигаемый при этом технический результат заключается в создании простого и недорогого средства для профилактики вирусных заболеваний человека и животных, вызываемых РНК-содержащими вирусами с липидной оболочкой, позволяющего быстро и с минимальными затратами (путем однократного или двукратного введения) проводить профилактику вирусных заболеваний независимо от серотипов вируса (разновидности возбудителя) и его антигенного состава за счет активизации завершенного фагоцитоза вирусов без повышения титра специфических вируснейтрализующих антител.
Для достижения заявляемого результата предложено средство для профилактики вирусных инфекций, содержащее вирусный материал из РНК-содержащих вирусов, имеющих липидную оболочку, и стабилизированный коллоидный селен.
Соотношение весовых частей вирусного материала к стабилизированному коллоидному селену составляет 1:1.
Вирусный материал из РНК-содержащих вирусов имеет титры 6,0-8,0 lg ТЦД50/мл.
Для получения коллоидного селена с размерами частиц от 10 до 15 нм коллоидный селен стабилизируют полиэтиленгликолем, а коллоидного селена с размерами частиц от 20 до 40 нм - цистеином.
Стабилизированный коллоидный селен имеет концентрацию 6,0-6,2%.
В известных авторам источниках патентной и научно-технической документации не описано средства для профилактики вирусных инфекций на основе вирусного материала и стабилизированного коллоидного селена, взятых в равных частях, позволяющего проводить профилактику вирусных заболеваний независимо от разновидности возбудителя и его антигенного состава за счет активизации завершенного фагоцитоза и, как следствие, внутриклеточного подавления вируса.
По мнению авторов, селен с размерами частиц 10-40 нм способен поглощаться фагоцитирующими клетками. Коллоидные частицы селена защищают липидную оболочку вируса от воздействия ферментов клеток макроорганизма. Фагоцит захватывает образованные комплексы селен-вирус и подвергает их «перевариванию» благодаря создавшемуся объему для захвата (фагоцитирования) частиц вирусов, ставших соизмеримыми с бактериями. Это позволяет доставить все структурные элементы вируса (липиды, белки, РНК) в фагоцитирующие клетки, что способствует полному иммунному ответу и развитию «памяти» фагоцитов для дальнейшей защиты макроорганизма от вирусных инфекций.
Известно, что селен - это естественный метаболит (см., например, http://ru.wikipedia.org/wiki; http://www.zdorove-plus.ru/page315.html; http://www.eliform.com/minersl-selenium.html), участвующий в биохимических процессах организма. Как естественный метаболит он не накапливается в клетках, а используется как активизатор обменных процессов в фагоцитах.
Именно коллоидный селен с размерами частиц 10-40 нм в комплексе с вирусными частицами является уникальным стимулятором иммунной защиты макроорганизма на уровне специфического завершенного фагоцитоза.
Таким образом, авторами впервые установлено неочевидное свойство, заключающееся в участии фагоцитов в иммунной защите от вирусных инфекций. Заявляемое изобретение основано на новом механизме иммунной защиты, обусловленном участием фагоцитов в иммунном процессе при вирусных инфекциях, отсутствием увеличения количества антител к возбудителям и наличием «памяти» в фагоцитирующих клетках. То есть защита есть, а антител нет или они образуются в минимальных количествах.
Сказанное позволяет сделать вывод о наличии в заявляемом решении критерия «изобретательский уровень».
Коллоидный селен представляет собой наноразмерные частички селена в растворе (см, например, http://testvich.ru/entsiklopediya/kolloidnyiy-selen-zoloto). Коллоидный селен получают восстановлением разбавленных водных растворов растворимого селена оксидом серы (IV), гидразингидратом, декстрозой, трихлоридом титана или пропусканием электрическою тока через раствор селенистой кислоты (анод - платиновый, катод - покрыт селеном), а также другими способами. Цвет коллоидного селена зависит от условий осаждения и изменяется от фиолетового до красного; плотность такая же, как и порошкообразного селена (см., например, http://ibrain.kz/himiya-svoystva-elementov/selen).
Хорошо известно (см., например, http://texnosila.narod.ru/Foton/nanoteh/Exampl KOAKR3.html), что коллоидные растворы обладают нестабильными свойствами. Нестабильные свойства определяются многими факторами - температурой, плотностью раствора, материалом, количеством и размером частиц, наличием таких внешних воздействий, как вибрация основания, присутствие электромагнитных полей, излучений. Все эти факторы существенно влияют на равновесное состояние коллоидной среды.
В заявляемом изобретении использовали в качестве стабилизирующих факторов добавление к коллоидному раствору селена либо полиэтиленгликоля (при размере частиц селена в растворе 10-15 нм) либо цистеина (при размере частиц селена 20-40 нм), либо белка сыворотки молока (при размере частиц 100 нм и выше). При этом, выбор того или иного стабилизатора был осуществлен экспериментальным путем, зависел от технологии приготовления препарата.
Вирусный материал был получен при культивировании штаммов: вируса трансмиссивного гастроэнтерита и гриппа.
Штамм вируса трансмиссивного гастроэнтерита «ВН-96» - депонирован во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и кормов (ВГНКИ) (справка о депонировании №1103/19 от 27 мая 2009). Выделен в 1988 году из вакцинного штамма «РИМС» на перевиваемой культуре СПЭВ (крупнобляшечный вариант), авирулентный для свиней, титр вируса 7,0 lg ТЦД50/мл.
Штамм вируса гриппа А/Краснодар/101/3 5/59 (H2N2) зарегистрирован в коллекции депозитария НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского (№2439 от 09.06.2008). Предназначен в качестве штамма-донора аттенуации для получения реассортантных живых гриппозных вакцин (см. патент РФ №2354695). Штамм получен методом серийных пассажей в куриных эмбрионах и культуре клеток MDCK при пониженной температуре с последующим 3-х кратным клонированием методом бляшек в культуре клеток MDCK, что обеспечивает генетическую гомогенность штамма.
Средство для профилактики вирусных инфекций представляет собой раствор красно-коричневого цвета, без запаха.
Для получения вирусного материала берут исходный штамм вируса (в частности, штамм вируса трансмиссивного гастроэнтерита «ВН-96», штамм вируса гриппа А/Краснодар/101/35/59 (H2N2), с определенным титром и доводят его до титра 6,0-8,0 lg ТЦД50/мл.
При этом, для профилактики гриппа предпочтителен вирусный материал с титром 8,0 lg ТЦД50/мл, профилактики трансмиссивного гастроэнтерита - с титром 7,0 lg ТЦД50/мл.
Вирусный материал хранят при температуре минус 18-20°С.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример №1. Пример приготовления коллоидного селена с размером частиц 10-15 нм.
Берут 100 мг селенита натрия, содержащего 40 мг селена и растворяют его в 10 мл дистиллированной воды.
Берут 0,52 г солянокислого гидрозина и растворяют в 5 мл дистиллированной воды.
В коническую колбу вносят 10 мл селенита натрия и сразу же приливают 5 мл гидрозина.
Раствор перемешивают на магнитной мешалке при 450 об/мин без нагревания до появления интенсивного окрашивания кирпично-красного цвета (выпадение в осадок аморфного селена) в течение 10 минут.
В колбу приливают 10 мл полиэтиленгликоля (ПЭГ-200) и смесь нагревают до 150°С при интенсивном перемешивании до полного испарения воды (наблюдается прекращение кипения).
После испарения воды на колбу ставят дефлегматор и поднимают температуру до 220°С на 15-30 минут. Смесь охлаждают до комнатной температуры.
Центрифугируют при 4200 об/мин в течение 20 минут.
Надосадок ставят на диализ против фосфатносолевого буфера рН 7,2.
Полученную смесь концентрируют на роторном испарителе с вакуумом при 70°С и скорости вращения 50 об./мин. (25 мл смеси концентрируют до 15 мл). Затем к полученному осадку добавляют физиологический раствор до получения концентрации коллоидного селена 0,062 мг/мл (6,2%).
Размер частиц селена, определенный с использованием электронного микроскопа LIBRA 120 (Carl Zeiss, Германия), составил 10-15 нм.
Пример №2. Пример приготовления коллоидного селена с размером частиц 20-40 нм.
К раствору 0,01М L - цистеина при постоянном перемешивании при комнатной температуре добавляют по каплям раствор 0,001М селенистой кислоты (H2SeO3) в отношении объемов 1:1.
Затем к полученному осадку добавляют физиологический раствор до получения концентрации коллоидного селена 0,061 мг/мл (6,1%).
Размер частиц селена, определенный с использованием электронного микроскопа LIBRA 120 (Carl Zeiss, Германия), составил 20-40 нм.
Пример №3. Пример приготовления коллоидного селена с размером частиц 100-140 нм. Этот коллоидный селен был использован в дальнейших экспериментах также для получения профилактического средства для доказательства эффективности достигаемого результата.
К 2 мл дистиллированной воды добавляют 0,5 мл 1М раствора солянокислого гидразина и 0,125 мл 1М селенита натрия (бурно развивается желто-оранжевая окраска). В течение 30 секунд данный раствор вносят в белок сыворотки молока.
Смесь перемешивают в течение 1 часа. После появления оранжевого окрашивания реакцию останавливают 1М раствором гидроксида натрия доведением РН до 7,62. Полученный раствор диализуют против 0,01 М фосфатно-солевого буфера, затем смесь концентрируют.
К полученному осадку добавляют физиологический раствор до получения концентрации коллоидного селена 0,060 мг/мл (6,0%).
Размер частиц селена, определенный с использованием электронного микроскопа LIBRA 120 (Carl Zeiss, Германия), составил 100-140 нм.
Полученная в примерах 1-3 концентрация коллоидного селена (6,0-6,2%) обеспечивает стабильное состояние субстанции селена с размерами частиц 10-140 нм. Экспериментально было показано, что концентрация селена менее 6,0% и более 6,2% приводит к нарушению требуемых размеров частиц селена или коагуляции селена.
Пример №4
Средство для профилактики вирусных инфекций готовят следующим образом.
Берут 1 мл вирусного материала из штамма «ВН-96» вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней в титре 7,0 lg ТЦД 50/мл, добавляют к нему 1 мл стабилизированного коллоидного селена с размером частиц 20-40 нм, полученную смесь перемешивают.
Готовое средство для профилактики вирусных инфекций представляет собой жидкость красно-коричневого цвета.
Аналогично описанному в примере 4 готовят вирусный материал из штаммов вируса гриппа А/Краснодар/101/35/59 (H2N2).
Пример №5.
Обоснование профилактических свойств заявляемого препарата против гриппа.
В эксперименте было использовано 70 белых мышей, распределенных по 7 группам (по 10 голов в каждой), из которых 2 были контрольными и 5 - опытными группами.
В первой контрольной группе мышей ничем не иммунизировали.
Во второй контрольной группе мышей иммунизировали подкожно препаратом, содержащим 0,1 мл физиологического раствора и 0,1 мл штамма вируса гриппа А/Краснодар/101/35/59 (H2N2) - с титром 8,0 lg ТЦД50/мл. Препарат вводили дважды с интервалом 14 дней.
Во всех опытных группах препарат вводили также подкожно дважды с интервалом между введениями 14 дней.
При этом, в первой опытной группе мышей иммунизировали препаратом, содержащим 0,1 мл коллоидного селена с размером частиц 10-15 нм, стабилизированного полиэтиленгликолем (ПЭГ), и 0,1 мл вирусного материала из штамма вируса гриппа А/Краснодар/101/35/59 (H2N2) - с титром 8,0 lg ТЦД50/мл.
Во второй опытной группе мышей иммунизировали препаратом, содержащим 0,1 мл стабилизированного цистеином коллоидного селена с размером частиц 20-40 нм и 0,1 мл вирусного материала из штамма вируса гриппа А/Краснодар/101/35/59 (H2N2) - с титром 8,0 lg ТЦД50/мл.
В третьей опытной группе мышей иммунизировали препаратом, содержащим 0,1 мл стабилизированного белком сыворотки молока коллоидного селена с размером частиц 100-140 нм и 0,1 мл вирусного материала из штамма вируса гриппа А/Краснодар/101/35/59 (H2N2) - с титром 8,0 lg ТЦД50/мл.
В четвертой и пятой опытных группах мышей иммунизировали препаратом, содержащим 0,1 мл стабилизированного цистеином коллоидного селена с размером частиц 20-40 нм и 0,1 мл вирусного материала из штамма вируса гриппа А/Краснодар/101/35/59 (H2N2) - с титром 7,0 lg ТЦД50/мл (четвертая группа) и с титром 6,0 lg ТЦД50/мл (пятая группа).
Через 28 дней после первого введения препарата все группы мышей были инфицированы интраназально вирулентным штаммом А/Брисбейн/59/07 (H1N1) в дозе 2,0 lg ТЦД50/0,05 мл.
Через 72 часа после инфицирования вирулентным штаммом мыши были умерщвлены с соблюдением этических принципов обращения с лабораторными животными. У мышей были извлечены легкие и из легких была приготовлена 10% суспензия в ступках с тертым стеклом. 10-кратные разведения данной суспензии были внесены в куриные 9-дневные эмбрионы.
Через 48 часов инкубации инфицированных куриных эмбрионов при 37°С в термостате, эмбрионы помещались в холодильник при 4°С на 18-24 часа.
Затем эмбрионы вскрывались, отсасывалась аллантоисная жидкость и определялся титр вирусов в легких у каждой из групп мышей с помощью реакции гемагглютинации. Результаты представлены в таблице 1.
Figure 00000001
Figure 00000002
Из таблицы 1 следует, что титр вирулентного штамма А/Брисбейн/59/07 (H1N1) в легких неиммунных мышей (контроль 1) равнялся 4,5 lg ТЦД50/0,2 мл.
Титр вирулентного штамма А/Брисбейн/59/07 (H1N1) в легких мышей, иммунизированных подкожно дозой штамма вируса гриппа А/Краснодар/101/35/59 (H2N2) с титром 8,0 lg ТЦД50/мл ненамного отличался от титра в первом контроле - 5 lg ТЦД50/0,2 мл.
Однако, наблюдалось заметное снижение титра вирулентного штамма А/Брисбейн/59/07 (H1N1) в легких мышей, иммунизированных подкожно той же дозой штамма А/Краснодар/101/35/59 (H2N2) в комбинации с коллоидным селеном. При этом, при иммунизации препаратом с размером частиц 10-15 нм титр составил 3 lg ТЦД50/0,2 мл, а при иммунизации препаратом с размером частиц 20-40 нм наблюдалось тысячекратное снижение титра.
Не наблюдалось снижения инфекционного титра вирулентного штамма А/Брисбейн/59/07 (H1N1) в легких мышей, иммунизированных подкожно препаратом с размером частиц стабилизированного коллоидного селена 100 нм - 140 нм.
Исследования по использованию вирусного материала из штамма А/Краснодар/101/35/59 (H2N2) с титрами 7,0 lg ТЦД50/мл и 6,0 lg ТЦД50/мл в сочетании со стабилизированным коллоидным селеном с размерами частиц 20-40 нм показали (см. таблицу 1), что препарат с таким содержанием компонентов не дает значительного повышения титров специфических вируснейтрализующих антител (титр равен 80), но обеспечивает эффективную защиту от заражения.
Представленные в примере №5 результаты исследований по определению эффективности защиты при заражении мышей вирулентным штаммом гриппа доказывают, что наилучшая эффективность защиты обеспечивается при введении препарата, содержащего стабилизированный коллоидный селен с размерами частиц 20-40 нм и вирусный материал с титром 6,0-8,0 lg ТЦЦ50/мл.
Дальнейшие исследования по обоснованию эффективной защиты от трансмиссивного гастроэнтерита проводили с использованием препарата, содержащего стабилизированный коллоидный селен с размерами частиц 20-40 нм и вирусный материал против вируса трансмиссивного гастроэнтерита - с титром 8,0 lg ТЦД50/мл.
Поскольку в примере 5 (см. таблицу 1) было показано, что эффективность защиты при гриппе коррелирует с пониженным, а не с повышенным содержанием специфических вируснейтрализующих антител к вирусу гриппа, то оценку эффективности защиты против трансмиссивного гастроэнтерита осуществляли по наличию специфических вируснейтрализующих антител к вирусу трансмиссивного гастроэнтерита на лабораторных животных, соответственно - на мышах и морских свинках, а не путем прямого заражения.
Пример №6.
Обоснование профилактических свойств заявляемого препарата против трансмиссивного гастроэнтерита.
Для доказательства эффективности защиты было сформировано 3 группы морских свинок: по 5 животных в каждой группе.
Одна группа животных была контрольной, им вводили только физиологический раствор в дозе 0,5 мл.
Первой опытной группе животных вводили вирусный материал из штамма вируса трансмиссивного гастроэнтерита «ВН-96» с титром 7,0 lg ТЦД50/мл в сочетании с физиологическим раствором (0,25 мл вирусного материала и 0,25 мл физиологического раствора).
Второй опытной группе вводили вирусный материал из штамма вируса трансмиссивного гастроэнтерита «ВН-96»с титром 7,0 lg ТЦД50/мл мл в сочетании со стабилизированным коллоидным селеном (0,25 мл вирусного материала и 0,25 мл коллоидного селена) с размером частиц 20-40 нм, взятые в соотношении 1:1.
Через 28 дней после введения препаратов определяли титр специфических вируснейтрализующих антител в реакции нейтрализации. Результат представлен в таблице №2.
Figure 00000003
Из таблицы 2 следует, что введение препарата, содержащего вирусный материал из штамма «ВН-96» с титром 7,0 lg ТЦД50/мл в сочетании со стабилизированным коллоидным селеном с размерами частиц 20-40 нм обеспечивает снижение титра специфических вируснейтрализующих антител с 1:128 до 1:8, т.е. в 16 раз.
Таким образом, заявляемое средство для профилактики вирусных заболеваний человека и животных, вызываемых РНК-содержащими вирусами с липидной оболочкой, позволяет быстро и с минимальными затратами (путем однократного или двукратного введения) проводить профилактику вирусных заболеваний независимо от серотипов вируса (разновидности возбудителя) и его антигенного состава за счет активизации завершенного фагоцитоза вирусов без повышения титра специфических вируснейтрализующих антител.
Заявляемое средство расширяет спектр противовирусных профилактических препаратов и позволяет решить проблему профилактики вирусных заболеваний человека, особенно гриппа, за счет внутриклеточного подавления вируса.

Claims (7)

1. Средство для профилактики вирусных инфекций, содержащее вирусный материал из РНК-содержащих вирусов, имеющих липидную оболочку, характеризующееся тем, что оно содержит стабилизированный коллоидный селен.
2. Средство для профилактики вирусных инфекций по п. 1, характеризующееся тем, что соотношение весовых частей вирусного материала к стабилизированному коллоидному селену составляет 1:1.
3. Средство для профилактики вирусных инфекций по п. 1, характеризующееся тем, что вирусный материал из РНК-содержащих вирусов имеет титры 6,0-8,0 lg ТЦД50/мл
4. Средство для профилактики вирусных инфекций по п. 1, характеризующееся тем, что стабилизированный коллоидный селен имеет размеры частиц 10-40 нм.
5. Средство для профилактики вирусных инфекций по п. 1 и 4, характеризующееся тем, что оно содержит стабилизированный полиэтиленгликолем коллоидный селен с размерами частиц от 10 до 15 нм.
6. Средство для профилактики вирусных инфекций по п. 1 и 4, характеризующееся тем, что оно содержит стабилизированный цистеином коллоидный селен с размерами частиц от 20 до 40 нм.
7. Средство для профилактики вирусных инфекций по п. 1, характеризующееся тем, что оно содержит стабилизированный коллоидный селен в концентрации 6,0-6,2%.
RU2018116987A 2018-05-07 2018-05-07 Средство для профилактики вирусных инфекций RU2682320C1 (ru)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018116987A RU2682320C1 (ru) 2018-05-07 2018-05-07 Средство для профилактики вирусных инфекций
SG11202010357UA SG11202010357UA (en) 2018-05-07 2019-04-18 Agent for preventing viral infections
US17/250,007 US12076389B2 (en) 2018-05-07 2019-04-18 Agent for the prevention of viral infections
EA202092440A EA202092440A1 (ru) 2018-05-07 2019-04-18 Средство для профилактики вирусных инфекций
CA3098996A CA3098996C (en) 2018-05-07 2019-04-18 Agent for preventing viral infections
PCT/RU2019/000259 WO2019216791A1 (ru) 2018-05-07 2019-04-18 Средство для профилактики вирусных инфекций
EP19799149.0A EP3791893A4 (en) 2018-05-07 2019-04-18 MEANS OF PREVENTING VIRAL INFECTION

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018116987A RU2682320C1 (ru) 2018-05-07 2018-05-07 Средство для профилактики вирусных инфекций

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2682320C1 true RU2682320C1 (ru) 2019-03-19

Family

ID=65805984

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018116987A RU2682320C1 (ru) 2018-05-07 2018-05-07 Средство для профилактики вирусных инфекций

Country Status (7)

Country Link
US (1) US12076389B2 (ru)
EP (1) EP3791893A4 (ru)
CA (1) CA3098996C (ru)
EA (1) EA202092440A1 (ru)
RU (1) RU2682320C1 (ru)
SG (1) SG11202010357UA (ru)
WO (1) WO2019216791A1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6534320B2 (en) * 1987-07-13 2003-03-18 Abbott Laboratories Process for immunochromatography with colloidal particles
RU2354695C1 (ru) * 2007-07-17 2009-05-10 Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова (ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова) Аттенуированный холодоадаптированный штамм вируса гриппа а/краснодар/101/59/35 (h2n2) для получения штаммов живой интраназальной гриппозной вакцины

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012511522A (ja) 2008-12-12 2012-05-24 ゲオルギオス パンダリス ウイルス感染の予防及び治療のための組成物
RU2393871C1 (ru) 2009-01-11 2010-07-10 Закрытое акционерное общество "Эвалар" Лечебно-профилактическая композиция
RU2429875C2 (ru) 2009-07-28 2011-09-27 Учреждение Российской академии наук Институт молекулярной генетики РАН (ИМГ РАН) Фармацевтическая композиция противовирусного препарата и способ профилактики и лечения вирусных заболеваний этим препаратом
RU2463073C1 (ru) * 2011-03-21 2012-10-10 Государственное научное учреждение Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Саратовский НИВИ Россельхозакадемии) Вакцина против трансмиссивного гастроэнтерита свиней и способ ее применения
RU2549495C1 (ru) 2014-06-27 2015-04-27 Общество с ограниченной ответственностью "НаноФарм-про" Способ получения средства на основе гексаметилентетрамина и наноселена, оказывающего стимулирующее действие на клетки организма

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6534320B2 (en) * 1987-07-13 2003-03-18 Abbott Laboratories Process for immunochromatography with colloidal particles
RU2354695C1 (ru) * 2007-07-17 2009-05-10 Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова (ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова) Аттенуированный холодоадаптированный штамм вируса гриппа а/краснодар/101/59/35 (h2n2) для получения штаммов живой интраназальной гриппозной вакцины

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Tamer M. Sakra, M. Koranyc, Kattesh V. Katti, Selenium nanomaterials in biomedicine—An overview of new opportunities in nanomedicine of selenium, Journal of Drug Delivery Science and Technology, 46 (2018) 223-233. *

Also Published As

Publication number Publication date
CA3098996A1 (en) 2019-11-14
CA3098996C (en) 2024-01-02
US12076389B2 (en) 2024-09-03
EP3791893A4 (en) 2022-03-23
SG11202010357UA (en) 2020-11-27
US20210308251A1 (en) 2021-10-07
EP3791893A1 (en) 2021-03-17
WO2019216791A1 (ru) 2019-11-14
EA202092440A1 (ru) 2021-04-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yang et al. Recent advances in the development of toll-like receptor agonist-based vaccine adjuvants for infectious diseases
Gomes et al. Type of RNA packed in VLPs impacts IgG class switching—implications for an influenza vaccine design
He et al. Advances in aluminum hydroxide-based adjuvant research and its mechanism
Maa et al. Influenza vaccine powder formulation development: spray‐freeze‐drying and stability evaluation
Xu et al. Morphologically virus‐like fullerenol nanoparticles act as the dual‐functional nanoadjuvant for HIV‐1 vaccine
TWI624280B (zh) 經鼻流感疫苗組成物
Soares et al. Oral hepatitis B vaccine: chitosan or glucan based delivery systems for efficient HBsAg immunization following subcutaneous priming
CN107029223A (zh) 合成纳米载体联合疫苗
KR20130083376A (ko) 비강내 전달을 위한 방법 및 조성물
JP2021006567A (ja) アレルギー性疾患および炎症性疾患を、予防するため、抑制するためおよび排除するための、ナノエマルション組成物
NZ579395A (en) Influenza vaccine with improved presevation and stability properties comprising a hydrophobic amino acid, arginine and an acid addition salt
CN112569348B (zh) 一种带状疱疹疫苗
JP6941566B2 (ja) 固定化ウイルス粒子を含むワクチン
WO2024160088A1 (zh) 七叶皂苷和/或其盐化合物作为佐剂在疫苗中的应用
US10980871B2 (en) Vaccine compositions
Wang et al. Immune responses to varicella-zoster virus glycoprotein E formulated with poly (lactic-co-glycolic acid) nanoparticles and nucleic acid adjuvants in mice
JPWO2003014338A1 (ja) 不活性化ウイルスエンベロープの製造方法
RU2682320C1 (ru) Средство для профилактики вирусных инфекций
JP2019527191A (ja) 免疫増強剤、口蹄疫不活化ワクチンおよびその製造方法
EA042873B1 (ru) Средство для профилактики вирусных инфекций
RU2545717C1 (ru) Способ получения адъюванта для вакцин
TWI355940B (en) Vaccine adjuvant and vaccine composition
RU2396978C1 (ru) Способ профилактики развития лейкоза крупного рогатого скота
Guan et al. Construction and characterization of an experimental ISCOMS-based hepatitis B polypeptide vaccine
CN109125264A (zh) 一种抗感染抗肿瘤的粘膜免疫制剂