RU2677866C1 - Способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза с использованием генетических данных - Google Patents
Способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза с использованием генетических данных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2677866C1 RU2677866C1 RU2018109283A RU2018109283A RU2677866C1 RU 2677866 C1 RU2677866 C1 RU 2677866C1 RU 2018109283 A RU2018109283 A RU 2018109283A RU 2018109283 A RU2018109283 A RU 2018109283A RU 2677866 C1 RU2677866 C1 RU 2677866C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- adenomyosis
- combination
- uterine fibroids
- allele
- risk
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицинской диагностики, в частности к способу прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза. Способ включает выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ комбинации полиморфизмов генов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609. Фактором риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза у женщин является комбинация генетических вариантов аллеля G rs2241423 с аллелем G rs7766109 с аллелем A rs4953655 и генотипом TT rs9939609. Изобретение позволит формировать среди женщин на доклиническом этапе группы риска по развитию сочетания миомы матки и аденомиоза и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития миомы матки и аденомиоза. 3 пр.
Description
Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза.
Миома матки – одна из наиболее распространенных доброкачественных опухолей женской половой сферы, которая возникает у 20-40% женщин репродуктивного возраста [Tаylоr D.K., Hоlthоusеr K., Sеgаrs J.H., et. al. Recent scientific advances in leiomyoma (uterine fibroids) research facilitates better understanding and management // J List. 2015. V. 4. P. 183]. Клинические проявления данного заболевания связаны с маточными кровотечениями, болью, сдавливанием смежных органов, невынашиванием беременности [Commandeur A.E., Styer A.K., Teixeira J.M. Epidemiological and genetic clues for molecular mechanisms involved in uterine leiomyoma development and growth // J Human Reproduction Update. 2015. V. 21(5). P. 593-615]. Как следствие, миома матки становится главной причиной гистерэктомии во многих странах мира.
Аденомиоз – доброкачественное заболевание матки, характеризующееся наличием гетеротопических эндометриальных желез и стромы в миометрии [Harada T., Khine Y.M., Kaponis A., et. al. The Impact of Adenomyosis on Women’s Fertility // J Obstetrical & Gynecological Survey. 2016. V. 71(9). P. 557-568]. Является одной из основных причин бесплодия, меноррагии, диспареунии, а также хронических тазовых болей, что в совокупности приводит к общему ухудшению качества жизни женщин.
Актуальность доброкачественных пролиферативных заболеваний матки, к которым относятся миома матки, аденомиоз, связана с достаточно высокой распространенностью и коморбидностью этих патологических состояний вследствие общности этиологии и патогенеза. Поэтому они достаточно часто встречаются сочетано. Так, 80-85% женщин с аденомиозом имеют сопутствующую миому матки [Сочетанные доброкачественные опухоли и гиперпластические процессы матки (миома, аденомиоз, гиперплазия эндометрия): проект клинических рекомендаций по ведению больных / Л. В. Адамян и др. – Москва: Изд-во Научного центра акушерства, гинекологии и перинатологии им. В. И. Кулакова, 2015. – 92 с]. В основе патогенетических механизмов формирования миомы матки и аденомиоза лежат молекулярно-генетические и эпигенетические изменения, тесно связанные с гормональными нарушениями.
С практической точки зрения представляется крайне необходимым выделение критериев индивидуального прогнозирования у женщин риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза на основании исследования генов-кандидатов с целью выявления индивидуумов, предрасположенных к формированию миомы матки и аденомиоза.
В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза на основе данных о комбинации генетических вариантов локусов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609.
Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2017 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров генов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609.
За прототип выбран патент РФ № 2557954 (дата публикации 27.07.2015) «Способ прогнозирования риска развития сочетанных пролиферативных заболеваний репродуктивной системы у женщин», который заключается в выделении ДНК из периферической венозной крови, проведении анализа комбинаций генетических вариантов полиморфных маркеров генов цитокинов гена регулятора активности нормальной экспрессии и секреции Т-клеток (-403 G/А RANTES), макрофагального воспалительного протеина -1β (+1931 A/T MIP1β), фактора стромальных клеток (-801 G/A SDF1), интерлейкина-1 (-511 C/T IL-1B), моноцитарного хемоаттарактанта протеина -1 (C/G MCP-1), интерлейкина-4 (-590 С/T IL-4). Повышенный риск развития сочетания миомы матки с эндометриозом и гиперпластическими процессами эндометрия прогнозируют при выявлении сочетания аллелей -403 А RANTES, G MCP-1,+1931 A MIP 1β, -590 C IL-4 или сочетания аллелей -403 А RANTES,+1931 A MIP 1β, -801 G SDF1, -511 C IL-1B.
Недостаток метода заключается в том, что он позволяет прогнозировать риск развития сочетания миомы матки с эндометриозом и гиперпластическими процессами эндометрия, которое среди женщин встречается значительно реже по сравнению с сочетанием миомы матки и аденомиоза (внутреннего эндометриоза). Согласно данным литературы, сочетание миомы и аденомиоза наблюдается в 80-85% случаев, а сочетаниe миомы мaтки с гиперпластическими процессами эндометрия и гeнитальным эндометриозoм регистрируются в 15-25% случаев [Сочетанные доброкачественные опухоли и гиперпластические процессы матки (миома, аденомиоз, гиперплазия эндометрия): проект клинических рекомендаций по ведению больных / Л. В. Адамян и др. – Москва: Изд-во Научного центра акушерства, гинекологии и перинатологии им. В. И. Кулакова, 2015. – 92 с].
Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза на основе данных о сочетании однонуклеотидных полиморфизмов генов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609.
Технический результат использования изобретения – получение критериев оценки риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья на основе данных о комбинации генетических вариантов локусов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609.
В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза, включающий:
- выделение ДНК из периферической венозной крови;
- анализ полиморфизмов генов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609;
- прогнозирование повышенного риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья в случае выявления комбинации генетических вариантов: аллеля G rs2241423 с аллелем G rs7766109 с аллелем A rs4953655 и генотипом TT rs9939609.
Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза по наличию указанной комбинации генетических вариантов локусов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609.
Способ осуществляют следующим образом:
ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови индивидуумов в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgCl2, 10мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4ºС, 4000 об./мин. в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМNaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и инкубируют образец при 37ºС в течение 16 часов.
На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об./мин. в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -200С. Выделенную ДНК использовали для проведения полимеразной цепной реакции синтеза ДНК.
Анализ всех локусов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609 осуществляют методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК. ПЦР проводят на аппарате IQ5 (Bio-Rad) в режиме real time с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы «Силекс-М» и стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов, синтезированных фирмой «Синтол» с последующим анализом полиморфизмов методом дискриминации аллелей. Для дискриминации аллелей используют программу Bio-Rad «IQ5-Standart Edition».
Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза подтверждает анализ результатов наблюдений 109 женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья РФ, имеющих сочетание миомы матки с аденомиозом и 981 человек контрольной группы. Обследование пациенток проводили врачи гинекологического отделения и отделения вспомогательных репродуктивных технологий перинатального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа. В контрольную группу включали женщин, не имеющих пролиферативных заболеваний органов малого таза и доброкачественных заболеваний молочных желез. Формирование контрольной выборки осуществляли при профилактических осмотрах (диспансеризации). Обследование женщин проводили врачи консультативно-диагностического отделения перинатального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа.
Критерии включения в исследуемые выборки:
1. Женщины русской национальности, родившиеся в Центральном Черноземье России и не имеющие между собой родства;
2. Добровольное согласие пациенток на проведение исследования.
3. В группу больных включали индивидуумов только после установления диагнозов миомы матки и аденомиоза, подтвержденных с помощью клинических, клинико-инструментальных и клинико-лабораторных методов исследования.
Критерии исключения из исследуемых выборок:
1. Пациентки со злокачественными заболеваниями органов малого таза и молочных желез;
2. Женщины с нерусской национальностью, родившиеся вне Центрального Черноземья;
3. Индивидуумы, отказавшиеся от участия в исследовании.
Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществляли в лаборатории «Молекулярной генетики человека» медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета.
Изучение роли комбинации генетических вариантов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609 в формировании сочетания миомы матки и аденомиоза проводили с помощью программного обеспечения АРSampler [http://sources.redhat.com/cygwin/], использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику [A Gibbs sampler for identification of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length [Text] / A. V.Favorov, M. S. Gelfand, A. V. Gerasimova [et al.] // Bioinformatics. – 2005. – Vol. 21, № 10. – P. 2240-2245]. | |
Установлено, что комбинация из четырех генетических вариантов: аллель G rs2241423 с аллелем G rs7766109 с аллелем A rs4953655 и генотипом TT rs9939609 в группе пациенток с сочетанием миомы матки и аденомиоза (30,19%) встречается чаще в 1,64 раза, чем в контрольной группе (18,43%, p=0,004). Следовательно, эта комбинация гентических вариантов является фактором риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза (OR=1,91, 95% CI 1,23-2,99). |
Таким образом, результаты, полученные с помощью биоинформатического анализа, свидетельствуют о значимом вкладе комбинации полиморфных вариантов генов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609 в формирование сочетания миомы матки и аденомиоза. Фактором риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза у женщин является комбинация генетических вариантов аллеля G rs2241423 с аллелем G rs7766109 с аллелем A rs4953655 и генотипом TT rs9939609.
В качестве примеров конкретного выполнения разработанного способа приведены примеры генетического обследования по локусам rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609 трех женщин-добровольцев русской национальности, являющихся жителями Центрального Черноземья, не имеющих среди родственников 1-й степени родства больных доброкачественными пролиферативными заболеваниями матки.
Пример 1. У женщины А. была выявлена комбинация генетических вариантов аллеля G rs2241423 с аллелем G rs7766109 с аллелем A rs4953655 и генотипом TT rs9939609. На основании этого женщина включена в группу риска по развитию сочетания миомы матки и аденомиоза. Повторное обследование через 1 год подтвердило обоснованность прогноза. Назначен комплекс лечебных мероприятий, регулярный профилактический осмотр (посещение гинеколога раз в 6 месяцев).
Пример 2. У женщины В. была выявлена комбинация генетических вариантов аллеля G rs2241423 с аллелем G rs7766109 с аллелем A rs4953655 и генотипом TT rs9939609. На основании этого у нее прогнозируют повышенный риск развития сочетания миомы матки и аденомиоза. Данная женщина включена в группу риска по развитию сочетания миомы матки и аденомиоза, ей назначен комплекс профилактических мероприятий по предупреждению развития миомы матки и аденомиоза (лечение хронических гинекологических заболеваний, рациональное питание, физическая активность, нормализация психо-эмоционального состояния, регулярный профилактический осмотр (посещение гинеколога раз в 6 месяцев и УЗИ органов малого таза) и др.). Повторные осмотры подтвердили эффективность проведенного комплекса профилактических мероприятий.
Пример 3. У женщины С. была выявлена комбинация генетических вариантов аллеля А rs2241423 с аллелем А rs7766109 с аллелем G rs4953655 и генотипом AA rs9939609. На основании этих результатов данную пациентку включили в группу с низким риском развития сочетания миомы матки и аденомиоза, что подтверждено дальнейшим наблюдением.
Применение данного способа позволит формировать среди женщин на доклиническом этапе группы риска по развитию сочетания миомы матки и аденомиоза и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития миомы матки и аденомиоза.
Claims (1)
- Способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК, анализ полиморфизмов генов, отличающийся тем, что анализируют полиморфизмы генов rs2241423, rs7766109, rs4953655 и rs9939609 и прогнозируют повышенный риск развития сочетания миомы матки и аденомиоза у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья в случае выявления комбинации генетических вариантов аллеля G rs2241423 с аллелем G rs7766109 с аллелем A rs4953655 и генотипом TT rs9939609.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018109283A RU2677866C1 (ru) | 2018-03-15 | 2018-03-15 | Способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза с использованием генетических данных |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018109283A RU2677866C1 (ru) | 2018-03-15 | 2018-03-15 | Способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза с использованием генетических данных |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2677866C1 true RU2677866C1 (ru) | 2019-01-22 |
Family
ID=65085025
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018109283A RU2677866C1 (ru) | 2018-03-15 | 2018-03-15 | Способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза с использованием генетических данных |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2677866C1 (ru) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2475740C1 (ru) * | 2011-09-26 | 2013-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Способ выявления наследственной предрасположенности к быстрому росту миомы матки |
RU2557954C1 (ru) * | 2014-05-16 | 2015-07-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития сочетанных пролиферативных заболеваний репродуктивной системы у женщин |
-
2018
- 2018-03-15 RU RU2018109283A patent/RU2677866C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2475740C1 (ru) * | 2011-09-26 | 2013-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Способ выявления наследственной предрасположенности к быстрому росту миомы матки |
RU2557954C1 (ru) * | 2014-05-16 | 2015-07-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития сочетанных пролиферативных заболеваний репродуктивной системы у женщин |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
I.V. PONOMARENKO ET AL. Genetic factors of uterine hyperplastic diseases// Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, 2016. vol. 7. N. 6, p. 3257-3261. * |
Кривошей, И. В. Ассоциации молекулярно-генетических маркеров с формированием гиперпластических процессов матки / И. В. Кривошей, О. Б. Алтухова // Научные ведомости БелГУ. Сер. Медицина. Фармация. - 2015. - N10, вып. 30. - С. 97- 102. * |
Кривошей, И. В. Ассоциации молекулярно-генетических маркеров с формированием гиперпластических процессов матки / И. В. Кривошей, О. Б. Алтухова // Научные ведомости БелГУ. Сер. Медицина. Фармация. - 2015. - N10, вып. 30. - С. 97- 102. I.V. PONOMARENKO ET AL. Genetic factors of uterine hyperplastic diseases// Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, 2016. vol. 7. N. 6, p. 3257-3261. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Liatsikos et al. | HOX A10 and HOX A11 mutation scan in congenital malformations of the female genital tract | |
RU2540928C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития хронической плацентарной недостаточности с синдромом задержки роста плода 2-3-ей степени у беременных | |
Sobalska-Kwapis et al. | New variants near RHOJ and C2, HLA-DRA region and susceptibility to endometriosis in the Polish population—the genome-wide association study | |
RU2468367C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития гиперплазии эндометрия у женщин с генитальным эндометриозом | |
RU2558854C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития эндометриоза | |
RU2677866C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и аденомиоза с использованием генетических данных | |
RU2557954C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития сочетанных пролиферативных заболеваний репродуктивной системы у женщин | |
JP2016077234A (ja) | 子宮内膜症の早期診断のための診断キット、診断マーカー及び検出方法 | |
RU2480763C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития доброкачественной дисплазии молочной железы у женщин с генитальным эндометриозом | |
RU2678970C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития сочетания миомы матки и гиперпластических процессов эндометрия | |
RU2650994C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития генитального эндометриоза | |
RU2453850C2 (ru) | Способ прогнозирования характера поражения матки миоматозными узлами | |
RU2642939C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии | |
RU2650990C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития миомы матки | |
RU2557977C1 (ru) | Способ прогнозирования риска формирования гиперпластических процессов эндометрия | |
RU2679637C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития сочетания генитального эндометриоза и гиперпластических процессов эндометрия на основе молекулярно-генетических данных | |
RU2616246C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития миоматозных узлов больших размеров у пациенток с миомой матки | |
RU2650988C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития гиперпластических процессов эндометрия на основе генетических данных | |
RU2550933C1 (ru) | Способ прогнозирования риска формирования миомы матки | |
RU2557952C1 (ru) | Способ прогнозирования веса новорожденного с учетом полиморфных вариантов локуса 10976 g/afvii | |
RU2557944C1 (ru) | Способ прогнозирования уровня артериального давления у женщин в конце беременности | |
RU2498313C1 (ru) | Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом | |
Chasovnikova et al. | Prevalence of mutations BRCA1 5382insC, and CHEK2 1100delC in the population of Siberian region | |
RU2809910C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития эндометриоза у женщин без отягощенной наследственности с использованием генетических данных | |
RU2816519C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки на основе молекулярно-генетического тестирования |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200316 |