RU2677294C1 - Способ прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы - Google Patents
Способ прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2677294C1 RU2677294C1 RU2018131668A RU2018131668A RU2677294C1 RU 2677294 C1 RU2677294 C1 RU 2677294C1 RU 2018131668 A RU2018131668 A RU 2018131668A RU 2018131668 A RU2018131668 A RU 2018131668A RU 2677294 C1 RU2677294 C1 RU 2677294C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gene
- bronchial asthma
- risk
- allele
- unfavorable
- Prior art date
Links
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 title claims abstract description 29
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 101710119418 Superoxide dismutase [Mn] Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 101710202572 Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 102100032891 Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 102200069059 rs1051740 Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 10
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims description 5
- 108020002908 Epoxide hydrolase Proteins 0.000 claims description 4
- 101150111062 C gene Proteins 0.000 claims 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 17
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 abstract description 2
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 abstract 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 17
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 101150114701 EPHX1 gene Proteins 0.000 description 6
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 6
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102100025403 Epoxide hydrolase 1 Human genes 0.000 description 4
- 101001077852 Homo sapiens Epoxide hydrolase 1 Proteins 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 4
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 230000006851 antioxidant defense Effects 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 3
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005486 Epoxide hydrolase Human genes 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 101150005399 sod2 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 2
- 101000708493 Alternaria alternata Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 229920006051 Capron® Polymers 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 206010058490 Hyperoxia Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010061924 Pulmonary toxicity Diseases 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000007323 disproportionation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- JBKVHLHDHHXQEQ-UHFFFAOYSA-N epsilon-caprolactam Chemical compound O=C1CCCCCN1 JBKVHLHDHHXQEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000000222 hyperoxic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 231100000374 pneumotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000007047 pulmonary toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 description 1
- 239000011150 reinforced concrete Substances 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 108010045815 superoxide dismutase 2 Proteins 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и раскрывает способ прогнозирования риска раннего развития профессиональной бронхиальной астмы. Способ характеризуется тем, что осуществляют определение в сыворотке крови уровня эозинофильного катионного протеина (ЭКП), выделение генетического материала, проведение полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами, амплификацию последовательности в промоторной области гена супероксиддисмутазы MnSOD Т-58С и гена эпоксидгидролазы ЕРНХ1 Tyr-113His и при одновременном обнаружении неблагоприятной аллели С гена MnSOD Т-58С и неблагоприятной аллели С гена ЕРНХ1 Tyr-113His и уровня ЭКП выше 10 мкг/л прогнозируют риск развития профессиональной бронхиальной астмы у работника в течение 5-ти лет от начала работы с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия. Способ может быть использован для прогнозирования риска раннего развития профессиональной бронхиальной астмы у работника в течение 5-ти лет от начала работы с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия. 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования риска раннего развития профессиональной бронхиальной астмы при воздействии на организм вредных производственных факторов сенсибилизирующего и раздражающего действия.
Известен способ прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы, включающий забор венозной крови (см. Патент РФ №2583948, МКИ G01N 33/48, А61В 5/00, 03.12.2014).
Однако данный способ осуществляет прогнозирование риска развития профессиональной бронхиальной астмы на стадии преморбидных изменений, что не позволяет применять его для определения риска развития профессиональной бронхиальной астмы при предварительном медицинском осмотре. Кроме того, используя этот способ, прогнозируют риск развития профессиональной бронхиальной астмы только аллергической формы, не учитывая воздействие химических веществ раздражающего и токсического действия в процессе контакта с ними, что не позволяет прогнозировать риск развития профессиональной бронхиальной астмы неаллергической и смешанной формы.
Задачей настоящего изобретения является прогнозирование риска развития профессиональной бронхиальной астмы у работника в течение 5-ти лет от начала работы с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия при предварительном медицинском осмотре.
Техническим результатом изобретения является возможность своевременного выявления лиц предрасположенных к развитию профессиональной бронхиальной астмы для предупреждения развития профессиональной патологии путем рационального трудоустройства вне контакта с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия, проведения своевременной коррекции и повышения адаптационных способностей организма различными неспецифическими способами.
Указанная задача достигается тем, что в известном способе прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы, включающем забор венозной крови, дополнительно осуществляют определение в сыворотке крови уровня эозинофильного катионного протеина (ЭКП), выделение генетического материала, проведение полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами, амплификацию последовательности в промоторной области гена супероксиддисмутазы MnSOD Т-58С и гена эпоксидгидролазы ЕРНХ1 Tyr-113His, и при одновременном обнаружении неблагоприятной аллели С гена MnSOD Т-58С и неблагоприятной аллели С гена ЕРНХ1 Tyr-113His и уровня ЭКП выше 10 мкг/л прогнозируют риск развития профессиональной бронхиальной астмы у работника в течение 5-ти лет от начала работы с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия.
Супероксиддисмутаза марганец зависимая (СОД 2, SOD2 Mn, митхондриальная) относится к группе антиоксидантных ферментов и контролирует уровень свободных радикалов в клетке. Гены СОД 2 локализуются на 6 хромосоме (6q25). Наличие неблагоприятной аллели С гена MnSOD Т-58С приводит к замене аминокислоты валин (Val) на аланин (Ala), что изменяет вторичную структуру белка, затрудняет транспорт фермента в митохондрии и формирование активного тетрамера MnSOD в митохондриальном матриксе. MnSOD катализирует реакцию дисмутации супероксидного радикала аниона (O2-) в перекись водорода, которая затем преобразуется в безвредные O2 и Н2O под действием глутатионпероксидазы и каталазы. MnSOD играет важную роль в дифференцировке клеток и онкогенезе, в механизме защиты при легочной токсичности, индуцированной гипероксией. Наличие неблагоприятной аллели С гена MnSOD Т-58С является фактором риска раннего развития и тяжелого течения профессиональной бронхиальной астмы в связи с понижением экспрессии гена MnSOD, что приводит снижению уровня MnSOD, обладающей протективными свойствами.
Микросомальная эпоксидгидролаза 1 (ЕРНХ1) фермент второй фазы детоксикации инактивирует реактивные промежуточные метаболиты. Полиморфный вариант гена ЕРНХ1 Т-337С приводит к аминокислотным заменам тирозина на гистидин в 113 положении (Tyr-113His), что изменяет свойства фермента и приводит к снижению его активности на 50% - «медленный» аллель и уменьшает его способность к гидроксилированию ксенобиотиков, в результате чего снижается эффективность инактивации токсических метаболитов, что ведет к развитию «оксидативного стресса», сущность которого заключается в выделении большого, значительно превышающего физиологические потребности, количества свободных радикалов, обладающих мощным повреждающим действием. «Медленный» аллель данного фермента уменьшает его способность к гидроксилированию ксенобиотиков. Наличие неблагоприятной аллели С гена ЕРНХ1 Т-337С является фактором риска раннего развития и тяжелого течения профессиональной бронхиальной астмы в связи со снижением активности микросомальной эпоксидгидролазы 1, что приводит к накоплению промежуточных токсичных метаболитов, которые приводят к усилению токсического действия химических веществ.
Эозинофильный катионный протеин (ЭКП) - это один из основных медиаторов эозинофилов, высвобождаемый из их гранул в ответ на взаимодействие аллергена и IgE-иммуноглобулина. ЭКП является объективным маркером активации эозинофилов. Он составляет 70% от всех белков, продуцируемых эозинофилами, стимулирует секрецию слизи, тормозит пролиферацию Т-лимфоцитов, действует на свертываемость крови, обладает цитотоксичностью. Цитотоксичность ЭКП продемонстрирована в отношении эпителиальных, тучных, гладкомышечных клеток и фибробластов. Уровень ЭКП в плазме крови значительно возрастает при развитии аллергического ответа на попадание в организм аллергена.
Таким образом, одновременное наличие неблагоприятной аллели С гена MnSOD Т-58С, неблагоприятной аллели С гена ЕРНХ1 Т-337С и уровня ЭКП выше 10 мкг/л позволяет прогнозировать риск раннего развития профессиональной бронхиальной астмы при воздействии вредных производственных факторов сенсибилизирующего и раздражающего действия в связи с одновременным нарушением функционирования систем антиоксидантной защиты и детоксикации химических веществ и повышенной активацией эозинофилов, что приводит к усилению токсического воздействия вредных производственных факторов сенсибилизирующего и раздражающего действия и активации воспалительного процесса в дыхательных путях.
Проведенные исследования по патентным и научно-техническим информационным источникам показали, что предлагаемый способ неизвестен и не следует явным образом из изученного уровня техники, т.е. соответствует критериям "новизна" и "изобретательский уровень".
Предлагаемый способ может быть применен в клинических, биохимических, молекулярно-генетических лабораториях, укомплектованных оборудованием, выпускаемым отечественной или зарубежной промышленностью.
Следовательно, заявленный способ является доступным и практически применимым.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.
У пациентов осуществляют забор венозной крови.
В сыворотке венозной крови осуществляют определение уровня эозинофильного катионного протеина (ЭКП).
Определение уровня ЭКП в сыворотке венозной крови у пациента проводят методом твердофазного двухциклового хемилюминисцентного иммунометрического анализа с использованием наборов, например, SIEMENS IMMULITE 2000 (Великобритания) при использовании автоматического анализатора IMMULITE 2000 (SIEMENS, Великобритания) в соответствии с инструкцией к используемому набору.
Далее из цельной крови выделяют ДНК с использованием, например, комплекта реагентов для экстракции ДНК из клинического материала "Ампли Прайм ДНК-сорб-В" в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.
Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) готовят серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации (1÷3) нг/мкл. Данный раствор ДНК используют для постановки полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами.
Выявление полиморфизма Т-58С гена MnSOD проводят с помощью наборов, например, НПФ «Литех», Россия. При этом используют набор реагентов "SNP-экспресс-shot''- PB: разбавитель, реакционная смесь, Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.
Полимеразную цепную реакцию для выявления полиморфизма Т-58С гена MnSOD проводят по следующей программе.
При использовании амплификатора «CFX 96» (BioRad, США) выдерживают пробирки при +94°С - 3 мин, затем 40 циклов: при 94°С - 15 с, при 64°С - 40 с. При этом используют каналы FAM и HEX. Детекция продуктов амплификации осуществляют на каждом цикле амплификации. На основании этих данных управляющая программа строит кривые накопления флуоресцентного сигнала: по каналу FAM - для аллели Val, по каналу HEX - для аллели Ala.
Выявление полиморфизма Tyr-113His гена ЕРНХ1 проводят с помощью наборов, например, НПФ «Литех», Россия. При этом используют набор реагентов "SNP-экспресс": разбавитель, реакционная смесь, Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.
Полимеразную цепную реакцию для выявления полиморфизма Tyr-113His гена ЕРНХ1 проводят по следующей программе.
При использовании термоциклера Т 100 Thermal Cycler (BioRad, США) выдерживают пробирки при +93°С - 1 мин, затем 35 циклов: при 93°С - 10 с, при 64°С - 10 с, при 72°С - 20 с, а в конце при 72°С - 1 мин. После проведения амплификации осуществляют анализ продуктов реакции в 3% агарозном геле с окраской бромистым этидием и визуализацией в проходящем УФ-свете.
При обнаружении одновременного наличия неблагоприятной аллели С гена супероксиддисмутазы, неблагоприятной аллели С гена эпоксидгидроксилазы и уровня ЭКП выше 10 мкг/л прогнозируют развитие профессиональной бронхиальной астмы менее чем через 5 лет от начала работы в контакте с производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет осуществить прогнозирование риска раннего развития профессиональной бронхиальной астмы у работника в течение 5-ти лет от начала работы с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия в процессе проведения предварительного медицинского осмотра при поступлении его на работу. Это позволит своевременно выявлять лиц, предрасположенных к развитию профессиональной бронхиальной астмы, с целью предупреждения развития профессиональной патологии путем рационального трудоустройства вне контакта с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия, а также проведения своевременной коррекции и повышения адаптационных способностей организма различными неспецифическими способами.
Кроме того, предлагаемый способ позволяет повысить воспроизводимость и скорость проведения прогнозирования риска раннего развития профессиональной бронхиальной астмы при воздействии на организм вредных производственных факторов сенсибилизирующего и раздражающего действия, что, в свою очередь, позволит повысить достоверность прогнозирования риска раннего развития профессиональной бронхиальной астмы, например, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и\или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени.
Пример 1. Пациентка Б., 47 лет.
При анализе анамнеза и профессионального маршрута пациента, было выявлено, что пациентка Б. работала на заводе железобетонных изделий в течение 5 лет, подвергаясь воздействию пыли цемента, в состав которой входят хром, никель, кобальт. Через 4 года работы по результатам обследования был поставлен диагноз профессиональная бронхиальная астма.
В процессе медицинского осмотра у пациентки Б. осуществили забор венозной крови.
Кровь исследовали заявленным способом.
Определение уровня ЭКП в сыворотке крови проводили методом твердофазного двухциклового хемилюминисцентного иммунометрического анализа с использованием наборов SIEMENS IMMULITE 2000 (Великобритания) при использовании автоматического анализатора IMMULITE 2000 (SIEMENS, Великобритания) в соответствии с инструкцией к используемому набору.
Далее из цельной крови выделили ДНК с использованием, например, комплекта реагентов для экстракции ДНК из клинического материала "Ампли Прайм ДНК-сорб-В" в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.
Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) приготовили серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации (1÷3) нг/мкл. Данный раствор ДНК использовали для постановки полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами.
Выявление полиморфизма Т-58С гена MnSOD проводили с помощью наборов НПФ «Литех», Россия. При этом использовали набор реагентов "SNP-экспресс-shot" - РВ: разбавитель, реакционная смесь, Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.
Полимеразную цепную реакцию выявления полиморфизма Т-58С гена MnSOD проводили по следующей программе.
При использовании амплификатора «CFX 96» (BioRad, США) выдерживали пробирки при +94°С - 3 мин, затем 40 циклов: при 94°С - 15 с, при 64°С - 40 с. При этом использовали каналы FAM и HEX. Детекция продуктов амплификации осуществлялась на каждом цикле амплификации. На основании этих данных управляющая программа построила кривые накопления флуоресцентного сигнала: по каналу FAM - для аллели Val, по каналу HEX - для аллели Ala.
Выявление полиморфизма Tyr-113His гена ЕРНХ1 проводили с помощью наборов НПФ «Литех», Россия. При этом использовали набор реагентов "SNP-экспресс": разбавитель, реакционная смесь, Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.
Полимеразную цепную реакцию для выявления полиморфизма Tyr-113His гена ЕРНХ1 проводили по следующей программе.
При использовании термоциклера Т 100 Thermal Cycler (BioRad, США) выдерживали пробирки при +93°С - 1 мин, затем 35 циклов: при 93°С - 10 с, при 64°С - 10 с, при 72°С - 20 с, а в конце при 72°С - 1 мин. После проведения амплификации осуществили анализ продуктов реакции в 3% агарозном геле с окраской бромистым этидием и визуализацией в проходящем УФ-свете.
При анализе результатов были выявлены неблагоприятная аллель С гена супероксиддисмутазы, неблагоприятная аллель С гена эпоксидгидроксилазы и уровень ЭКП - 15 мкг/л.
Вывод: у пациентки В. были выявлены неблагоприятная аллель С гена супероксиддисмутазы, неблагоприятная аллель С гена эпоксидгидроксилазы и уровень ЭКП - 15 мкг/л, что свидетельствует нарушении функционирования систем антиоксидантной защиты и детоксикации химических веществ и повышенной активацией эозинофилов. Это привело к усилению токсического воздействия вредных производственных факторов сенсибилизирующего и раздражающего действия, следствием чего явилось ранее развитие профессиональной бронхиальной астмы (через 4 года от начала работы).
Пример 2. Пациентка С, 54 года.
При анализе анамнеза и профессионального маршрута пациентки С, было выявлено, что она работала на ОАО «Залесье-Сервис» ровничницей, оператором ленточного оборудования в контакте с аэрозолем хлопка, капрона, формальдегидом, ацетальдегидом без превышения ПДК в течение 30 лет. В течение этих 30 лет работы по результатам проводимых обследований не было выявлено признаков профессиональная бронхиальная астма
Кровь пациентки С. исследовали заявленным способом.
У пациентки С. осуществили забор венозной крови.
Определение уровня ЭКП в сыворотке крови проводили методом твердофазного двухциклового хемилюминисцентного иммунометрического анализа с использованием наборов SIEMENS IMMULITE 2000 (Великобритания) при использовании автоматического анализатора IMMULITE 2000 (SIEMENS, Великобритания) в соответствии с инструкцией к используемому набору.
Далее из цельной крови выделили ДНК с использованием например, комплекта реагентов для экстракции ДНК из клинического материала "Ампли Прайм ДНК-сорб-В" в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.
Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) приготовили серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации (1÷3) нг/мкл. Данный раствор ДНК использовали для постановки полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами.
Выявление полиморфизма Т-58С гена MnSOD проводили с помощью наборов НПФ «Литех», Россия. При этом использовали набор реагентов "SNP-экспресс-shot" - РВ: разбавитель, реакционная смесь, Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.
Полимеразную цепную реакцию для выявления полиморфизма Т-58С гена MnSOD проводили по следующей программе.
При использовании амплификатора «CFX 96» (BioRad, США) выдерживали пробирки при +94°С - 3 мин, затем 40 циклов: при 94°С - 15 с, при 64°С - 40 с. При этом использовали каналы FAM и HEX. Детекция продуктов амплификации осуществлялась на каждом цикле амплификации. На основании этих данных управляющая программа построила кривые накопления флуоресцентного сигнала: по каналу FAM - для аллели Val, по каналу HEX - для аллели Ala.
Выявление полиморфизма Tyr-113His гена ЕРНХ1 проводили с помощью наборов НПФ «Литех», Россия. При этом использовали набор реагентов "SNP-экспресс": разбавитель, реакционная смесь, Taq-полимераза. Объем амплификационной смеси - 25 мкл.
Полимеразную цепную реакцию для выявления полиморфизма Tyr-113 His гена ЕРНХ1 проводили по следующей программе.
При использовании термоциклера Т 100 Thermal Cycler (BioRad, США) выдерживали пробирки при +93°С - 1 мин, затем 35 циклов: при 93°С - 10 с, при 64°С - 10 с, при 72°С - 20 с, а в конце при 72°С - 1 мин. После проведения амплификации осуществляли анализ продуктов реакции в 3% агарозном геле с окраской бромистым этидием и визуализацией в проходящем УФ-свете.
При анализе результатов было выявлено отсутствие неблагоприятной аллели С гена супероксиддисмутазы, отсутствие неблагоприятной аллели С гена эпоксидгидроксилазы и уровень ЭКП - 7 мкг/л.
Вывод: у пациентки С. было выявлено отсутствие неблагоприятной аллели С гена супероксиддисмутазы, отсутствие неблагоприятной аллели С гена эпоксидгидроксилазы и уровень ЭКП - 7 мкг/л, что свидетельствует о нормальном функционировании систем антиоксидантной защиты и детоксикации химических веществ и нормальной функции эозинофилов, следствием чего явилось отсутствие развития профессиональной бронхиальной астмы через 30 лет от начала работы с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия.
Таким образом, предложенная совокупность приемов прогнозирования риска раннего развития профессиональной бронхиальной астмы может быть использована в процессе предварительных или периодических медицинских осмотров большого количества работающих или поступающих на работу с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия.
Предлагаемый способ может быть использован в клинических, биохимических, молекулярно-генетических лабораториях, укомплектованных оборудованием, выпускаемым отечественной или зарубежной промышленностью при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и/или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени.
Claims (1)
- Способ прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы, включающий забор венозной крови, отличающийся тем, что дополнительно осуществляют определение в сыворотке крови уровня эозинофильного катионного протеина (ЭКП), выделение генетического материала из венозной крови, проведение полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами, амплификацию последовательности в промоторной области гена супероксиддисмутазы MnSOD Т-58С и гена эпоксидгидролазы ЕРНХ1 Tyr-113His и при одновременном обнаружении неблагоприятной аллели С гена MnSOD Т-58С и неблагоприятной аллели С гена ЕРНХ1 Tyr-113His и уровня ЭКП выше 10 мкг/л прогнозируют риск развития профессиональной бронхиальной астмы у работника в течение 5-ти лет от начала работы с вредными производственными факторами сенсибилизирующего и раздражающего действия.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018131668A RU2677294C1 (ru) | 2018-09-04 | 2018-09-04 | Способ прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018131668A RU2677294C1 (ru) | 2018-09-04 | 2018-09-04 | Способ прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2677294C1 true RU2677294C1 (ru) | 2019-01-16 |
Family
ID=65025087
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018131668A RU2677294C1 (ru) | 2018-09-04 | 2018-09-04 | Способ прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2677294C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2716094C1 (ru) * | 2019-03-27 | 2020-03-05 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью | Способ прогнозирования индивидуального риска развития бронхиальной астмы у человека на различные по продолжительности периоды жизни |
| RU2777800C1 (ru) * | 2021-07-30 | 2022-08-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований" | Способ дифференциальной диагностики бронхиальной астмы профессионального и непрофессионального генеза, сформировавшейся в условиях действия токсических промаэрозолей у работников алюминиевой промышленности |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004058042A2 (en) * | 2002-12-30 | 2004-07-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods for evaluating genetic susceptibility and therapy for chronic inflammatory diseases |
| RU2510508C1 (ru) * | 2012-07-13 | 2014-03-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Башкирский государственный университет" | Способ прогнозирования риска развития бронхиальной астмы |
-
2018
- 2018-09-04 RU RU2018131668A patent/RU2677294C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004058042A2 (en) * | 2002-12-30 | 2004-07-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods for evaluating genetic susceptibility and therapy for chronic inflammatory diseases |
| RU2510508C1 (ru) * | 2012-07-13 | 2014-03-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Башкирский государственный университет" | Способ прогнозирования риска развития бронхиальной астмы |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ВАСИЛЬЕВА О.С. и др. Роль молекулярно-генетических исследований в диагностике и профилактике развития профессиональных заболеваний органов дыхания. Пульмонология. Издательство: Научно-практический журнал Пульмонология, Москва, Том 27, N2, 2017, с.198-205. * |
| ПОМЫКАНОВА Ю.С. Биохимические и молекулярно-генетические маркеры различных фенотипов профессиональной бронхиальной астмы. Авто диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Москва, 2016, 23 c. * |
| ХОТУЛЕВА А.Г. и др. Биомаркеры системного воспаления в патогенезе синтропии профессиональной бронхиальной астмы и метаболического синдрома. Медицина труда и промышленная экология. Издательство: Научно-исследовательский институт медицины труда имени академика Н.Ф. Измерова, Москва, N7, 2016, с.39-43. * |
| ХОТУЛЕВА А.Г. и др. Биомаркеры системного воспаления в патогенезе синтропии профессиональной бронхиальной астмы и метаболического синдрома. Медицина труда и промышленная экология. Издательство: Научно-исследовательский институт медицины труда имени академика Н.Ф. Измерова, Москва, N7, 2016, с.39-43. ВАСИЛЬЕВА О.С. и др. Роль молекулярно-генетических исследований в диагностике и профилактике развития профессиональных заболеваний органов дыхания. Пульмонология. Издательство: Научно-практический журнал Пульмонология, Москва, Том 27, N2, 2017, с.198-205. ПОМЫКАНОВА Ю.С. Биохимические и молекулярно-генетические маркеры различных фенотипов профессиональной бронхиальной астмы. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Москва, 2016, 23 c. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2716094C1 (ru) * | 2019-03-27 | 2020-03-05 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью | Способ прогнозирования индивидуального риска развития бронхиальной астмы у человека на различные по продолжительности периоды жизни |
| RU2777800C1 (ru) * | 2021-07-30 | 2022-08-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Восточно-Сибирский институт медико-экологических исследований" | Способ дифференциальной диагностики бронхиальной астмы профессионального и непрофессионального генеза, сформировавшейся в условиях действия токсических промаэрозолей у работников алюминиевой промышленности |
| RU2802198C1 (ru) * | 2022-11-29 | 2023-08-22 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью | Способ прогнозирования риска развития заболеваний органов дыхания у работников, занятых в производстве синтетических моющих средств |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112941201B (zh) | 一种用于多细胞种属鉴别和交叉污染检测的混合引物及其使用方法 | |
| CN112538528A (zh) | 一种检测aldh2基因多态性的引物组及试剂盒 | |
| RU2731390C1 (ru) | Тест-система и способ для выявления РНК коронавируса SARS-COV-2, вируса-возбудителя коронавирусного заболевания 2019 COVID-19, методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Варианты) | |
| RU2677294C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития профессиональной бронхиальной астмы | |
| NL2031171B1 (en) | Primer, Probe and Application for Identifying Brucella Vaccine Strain A 19 and Wild Strain | |
| CN111979313A (zh) | 一种基于多重pcr及高通量测序技术检测耳聋基因致病变异的特异性引物、试剂盒及应用 | |
| CN111304285B (zh) | 基于纳米孔测序平台的泌尿宏基因组样本建库和检测方法 | |
| KR100994996B1 (ko) | 페난트렌 노출 여부 확인용 바이오마커 및 이를 이용한확인 방법 | |
| JP2015524653A (ja) | 対象における薄皮状態のインビトロ診断方法及び関連用途 | |
| Wu et al. | Correlation between single nucleotide polymorphisms in hypoxia-related genes and susceptibility to acute high-altitude pulmonary edema | |
| Lombes et al. | The first pathogenic mitochondrial methionine tRNA point mutation is discovered in splenic lymphoma | |
| US20140377749A1 (en) | Metronidazole resistance in trichomonas vaginalis and single nucleotide polymorphisms | |
| CN116479168A (zh) | 检测5种致腹泻病毒的多重实时荧光定量pcr的核酸组合物、试剂盒及试剂盒的使用方法 | |
| dos Santos et al. | Host factor predictors in long-term nonprogressors HIV-1 infected with distinct viral clades | |
| Wang et al. | Association of connexin gene polymorphism with essential hypertension in Kazak and Han Chinese in Xinjiang, China | |
| CN107058471B (zh) | 一种通过四种microRNA生物标志物联合预测急性高山病发病风险的试剂盒 | |
| RU2803263C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития тяжёлой бронхиальной астмы | |
| CN113278731B (zh) | 用于判断HIV-1感染者抗病毒治疗效果的lncRNA标志物及其应用 | |
| Kurnik et al. | Genetic variants and risk for venous thromboembolic events: summing up the evidence | |
| JP5208028B2 (ja) | Ｅｄ評価方法 | |
| CN109536607B (zh) | Mt-2a基因snp位点在检测重金属中毒易感性中应用 | |
| Diaconu et al. | RAPID AND SENSITIVE DETECTION OF CLOSTRIDIUM BOTULINUM TYPES A AND B BY DROPLET DIGITAL PCR | |
| RADWAN et al. | CORRELATION BETWEEN CIRCULATING CYTOTOXIC MARKERS (CD3 & CD8) AND DISEASE SEVERITY IN PNEUMONIA COVID-19 PATIENTS | |
| CN114807428A (zh) | 长孢轮枝菌实时荧光pcr探针引物组及检测试剂盒和应用 | |
| CN115521971A (zh) | 一种高效的增殖分化细胞的细胞分裂蛋白的检测方法 |