RU2671473C2 - Вакцина против кампилобактериоза - Google Patents
Вакцина против кампилобактериоза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2671473C2 RU2671473C2 RU2015145325A RU2015145325A RU2671473C2 RU 2671473 C2 RU2671473 C2 RU 2671473C2 RU 2015145325 A RU2015145325 A RU 2015145325A RU 2015145325 A RU2015145325 A RU 2015145325A RU 2671473 C2 RU2671473 C2 RU 2671473C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine composition
- glycan
- coli
- campylobacter
- jejuni
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 76
- 206010051226 Campylobacter infection Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 201000004927 campylobacteriosis Diseases 0.000 title claims abstract description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 79
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 claims abstract description 64
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 51
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 23
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 20
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 28
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 claims description 27
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 15
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 claims description 14
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 claims description 3
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 15
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 76
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 54
- PZUPAGRIHCRVKN-UHFFFAOYSA-N 5-[5-[3,4-dihydroxy-6-[(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxymethyl]-5-[3,4,5-trihydroxy-6-[(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxymethyl]oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-[(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxymethyl]oxan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4-triol Chemical compound OCC1OC(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(COC4C(C(O)C(O)CO4)O)O3)O)C(COC3C(C(O)C(O)CO3)O)O2)O)C(COC2C(C(O)C(O)CO2)O)O1 PZUPAGRIHCRVKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 29
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 15
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 13
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 11
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 11
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 8
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 5
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 5
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 5
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 5
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 5
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- NRXWTRNYICXMBF-CACQUXPASA-N n-[(2r,3s,4s,5r)-5-acetamido-4,6-dihydroxy-2-methyloxan-3-yl]acetamide Chemical compound C[C@H]1OC(O)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O NRXWTRNYICXMBF-CACQUXPASA-N 0.000 description 5
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- 101150068826 pglB gene Proteins 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 4
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 4
- 108020003540 O-antigen polymerase Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 description 3
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- -1 dextran sulfate Polymers 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 2
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 2
- 241000589877 Campylobacter coli Species 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 108010089072 Dolichyl-diphosphooligosaccharide-protein glycotransferase Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- UDCWMKJVKMPGDB-KWQUQPGISA-N alpha-D-Man-(1->6)-[alpha-D-Man-(1->3)]-[beta-D-Xyl-(1->2)]-beta-D-Man-(1->4)-beta-D-GlcNAc-(1->4)-[alpha-L-Fuc-(1->3)]-beta-D-GlcNAc Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)O3)O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO3)O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O UDCWMKJVKMPGDB-KWQUQPGISA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNLZBVFSCVTSLA-XMABDTGBSA-N (4r,5r,6r)-6-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]-2,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC(O)(C(O)=O)C[C@@H](O)[C@H]1O NNLZBVFSCVTSLA-XMABDTGBSA-N 0.000 description 1
- FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 1-Hexadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCN FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYAFUXYGTYWWBP-UHFFFAOYSA-N 19-methoxynonadecane-1,2,3-triol Chemical compound COCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)CO PYAFUXYGTYWWBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 2H-pyran Chemical compound C1OC=CC=C1 MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000003930 C-Type Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090000342 C-Type Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241001045128 Campylobacter avium Species 0.000 description 1
- 241000589873 Campylobacter concisus Species 0.000 description 1
- 241000146984 Campylobacter cuniculorum Species 0.000 description 1
- 241000589985 Campylobacter curvus Species 0.000 description 1
- 241000589874 Campylobacter fetus Species 0.000 description 1
- 241001453279 Campylobacter fetus subsp. fetus Species 0.000 description 1
- 241001453248 Campylobacter fetus subsp. venerealis Species 0.000 description 1
- 241000606208 Campylobacter gracilis Species 0.000 description 1
- 241001137866 Campylobacter helveticus Species 0.000 description 1
- 241001290832 Campylobacter hominis Species 0.000 description 1
- 241000305080 Campylobacter hyointestinalis subsp. hyointestinalis Species 0.000 description 1
- 241000305079 Campylobacter hyointestinalis subsp. lawsonii Species 0.000 description 1
- 241000034487 Campylobacter insulaenigrae Species 0.000 description 1
- 101100463764 Campylobacter jejuni subsp. jejuni serotype O:2 (strain ATCC 700819 / NCTC 11168) pglD gene Proteins 0.000 description 1
- 241001277598 Campylobacter lanienae Species 0.000 description 1
- 241000589986 Campylobacter lari Species 0.000 description 1
- 241000283734 Campylobacter lari subsp. concheus Species 0.000 description 1
- 241000589995 Campylobacter mucosalis Species 0.000 description 1
- 241000283735 Campylobacter peloridis Species 0.000 description 1
- 241000589996 Campylobacter rectus Species 0.000 description 1
- 241000589992 Campylobacter showae Species 0.000 description 1
- 241000589990 Campylobacter sputorum Species 0.000 description 1
- 241000920754 Campylobacter sputorum biovar faecalis Species 0.000 description 1
- 241000292054 Campylobacter sputorum biovar paraureolyticus Species 0.000 description 1
- 241000630160 Campylobacter subantarcticus Species 0.000 description 1
- 241001135528 Campylobacter upsaliensis Species 0.000 description 1
- 241000606177 Campylobacter ureolyticus Species 0.000 description 1
- 241000917733 Campylobacter volucris Species 0.000 description 1
- 241000131329 Carabidae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 241001455504 Escherichia coli O2 Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylglycine Chemical compound CN(C)CC(O)=O FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 108010090127 Periplasmic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108010000605 Ribosomal Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 108700003601 dimethylglycine Proteins 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 244000078673 foodborn pathogen Species 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012248 genetic selection Methods 0.000 description 1
- 150000002302 glucosamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001279 glycosylating effect Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 150000002386 heptoses Chemical class 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- KYQCXUMVJGMDNG-SHUUEZRQSA-N keto-3-deoxy-D-manno-octulosonic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CC(=O)C(O)=O KYQCXUMVJGMDNG-SHUUEZRQSA-N 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000012768 mass vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001818 nuclear effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N phenol;hydrate Chemical compound O.OC1=CC=CC=C1 KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
- A61K39/0258—Escherichia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K2039/106—Vibrio; Campylobacter; Not used, see subgroups
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/185—Escherichia
- C12R2001/19—Escherichia coli
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены композиция вакцины и способ вакцинации домашней птицы. Композиция вакцины против кампилобактериоза содержит модифицированные клетки Е. coli, экспрессирующие по меньшей мере один N-гликан или его производное на своей поверхности, полученные по меньшей мере с одного оперона pgl Campylobacter jejeni, и один или более физиологически приемлемый разбавитель, вспомогательное вещество, адъювант или носитель. Способ вакцинации предусматривает введение животному эффективной дозы композиции вакцины. Изобретения обеспечивают профилактику и/или лечение инфекций домашней птицы. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 9 ил., 2 табл., 2 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0001] Настоящее изобретение относится к вакцинам против кампилобактериоза. Более конкретно, настоящее изобретение относится к вакцинам против кампилобактериоза, содержащим клетки Escherichia coli, экспрессирующим гептасахарид гликан Campylobacter jejuni, образующийся в пути N-гликозилирования.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0002] Грамотрицательная бактерия Campylobacter является наиболее частым бактериальным возбудителем гастроэнтерита в Северной Америке и многих промышленно развитых странах. Также Campylobacter является значимым патогеном, вызывающим пищевые отравления у домашнего скота, включая птицу, что является основным источником кампилобактериоза у человека. Таким образом, контроль Campylobacter у домашней птицы на фермах мог бы снизить риск воздействия данного патогена на человека и оказать значительное влияние на безопасность продуктов питания и состояние здоровья населения.
[0003] Campylobacter является эндемичным во многих развивающихся странах, в основном вследствие плохих санитарных условий и близкого контакта человека с животными, которые являются резервуаром для данного патогена. Работа Katarzyna et al. (Expert Rev. Vaccines 8: 625-645, 2009) свидетельствует о том, что в Соединенных Штатах Америки инфекция, вызываемая Campylobacter, вызывает от 1,5 миллионов (данные Всемирной организации здравоохранения) до 2,4 миллионов (данные Государственного центра санитарно-эпидемического контроля США) случаев заболевания в год. Кроме того, согласно данным Всемирной организации здравоохранения приблизительно 1% населения Восточной Европы ежегодно инфицируется видами Campylobacter. Инфекцию у людей вызывают преимущественно два вида: С. coli и С. jejuni, которые обусловливают более чем 95% случаев камбилобактериоза. Клинические проявления инфекции, вызванной Campylobacter, могут варьировать от бессимптомных случаев до тяжелого гастроэнтерита, иногда сопровождающегося длительной диареей со слизистым, кровянистым или водянистым стулом.
[0004] В публикации Jun Lin "Novel Approaches for Campylobacter Control in Poultry" (FOODBORNE PATHOGENS AND DISEASE, Volume 6, Number 7, pp. 755-765, 2009), включенной в настоящую заявку посредством ссылки, обсуждаются разные стратегии со кращения инфицирования Campylobacter у домашней птицы. Lin предлагает три общие стратегии контролирования Campylobacter у домашней птицы на уровне ферм: (1) уменьшение проникновения в окружающую среду (меры биологической безопасности), (2) увеличение резистентности хозяев-птиц с целью снижения носительства Campylobacter в кишечнике (например, конкурентное исключение, вакцинация и генетическая селекция хозяина), и (3) применение противомикробных альтернативных средств для уменьшения и даже эрадикации Campylobacter из организма колонизированных куриц (например, терапия бактериофагами и лечение бактериоцином). Lin также утверждает, что за исключением мер биологической безопасности другие способы вмешательства не доступны для потребителя и все еще находятся в стадии разработки.
[0005] Эрадикация указанных патогенов у домашнего скота может способствовать снижению частоты возникновения инфекции у человека и предотвращению распространения среди сельскохозяйственных животных. Вакцинация на фермах также может уменьшать риск заражения людей при еде или обращении с продуктами животного происхождения, а также заражению вследствие распространения бактерий через навоз. Лечение кампилобактериоза антибиотиками также становится нарастающей проблемой, поскольку устойчивость Campylobacter к антибиотикам, в прошлом эффективным при борьбе с ним, становится более распространенной.
[0006] В свое время гликозилирование считалось явлением, специфически присущим эукариотам, но позже было показано, что оно широко распространено среди простейших и бактерий. Бактериальные О- и N-связи образуются в более широком диапазоне сахаров, а не только в сахарах в составе гликопротеинов эукариот. Обычный путь гликозилирования для белков у бактерий впервые был продемонстрирован у С. jejuni. (Szymanski et al. Molecular Microbiology 32: 1022-1030, 1999). Механизмы гликозилирования С. jejuni были охарактеризованы и даже были успешно перенесены в клетки Е. coli (Wacker et al. Science, 298: 1790-1793, 2002), и было продемонстрировано активное N-гликозилирование белков (Young et al. J Biol Chem, 277: 42530-42539, 2002; Wacker et al. Science, 298: 1790-1793, 2002). Локус гена С. jejuni, называемый pgl (для гликозилирования белка), участвует в гликозилировании многих белков. Молчащие мутации в нем приводят к утрате иммуногенности многих белков, среди многих биологических фенотипов.
[0007] В Публикации заявки на патент США 2006/0165728 А1, в настоящее время патент США №7598354, включенной в настоящую заявку посредством ссылки, описаны специфические и крайне иммуногенные гептасахариды, которые присутствуют во многих периплазматических и поверхностных гликопротеинах С. jejuni. Указанный гептасахарид распространен по меньшей мере у нескольких видов Campylobacter и целого ряда штаммов, которые являются значимыми медицинскими и ветеринарными патогенами (Nothaft et al. Mol. Cell. Proteomics 11: 1203-1219, 2012). Указанный гептасахарид соответствует следующей формуле (I): GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,4-[Glc-β-1,3]GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,3-diNAcBac, где diNAcBac (также называемый ди-N-ацетилбациллосамин) - 2,4-диацетамидо-2,4-,6-тридезокси-D-глюкопираноза, GalNAc - N-ацелилгалактозамин, a Glc - глюкоза. Данная группа гликана является компонентом многих гликопротеинов. У С. jejuni N-гликан важен для взаимодействия С. jejuni с клетками-хозяевами. Мутации в механизме гликозилирования приводят к уменьшению колонизации кишечника у мышей и куриц. У С. jejuni N-гликан важен для присоединения и инвазии в клетки эпителия человека (Szymanski et al. Infect Immun 70: 2242-2244, 2002), колонизации кишечника мышей и куриц (Kelly et al. J Bacteriol 188: 2427-2434, 2006; Szymanski et al. Infect Immun 70: 2242-2244, 2002; Hendrixson & DiRita, Mol Microbiol 52: 471-484, 2004; Karlyshev et al. Microbiology 150: 1957-1964, 2004), природной компетентности у штаммов с системой секреции IV типа (Larsen et al. J Bacteriol 186: 6508-6514, 2004) и для связывания с лектинами С-типа макрофагов человека, MGL (van Sorge et al, Cell Microbiol 11: 1768-1781, 2009). Кроме того, было показано, что поверхностные N-гликаны Campylobacter играют защитную роль в отношении протеаз в кишечнике куриц, что приводит к повышению приспособляемости бактерий (Alemka et al. Infect Immun 81: 1674-82, 2013).
[0008] В Публикации заявки на патент США 2012/0100177 описан штамм Salmonella enterica, содержащий по меньшей мере один оперон pgl С. jejuni или его функциональное производное, и предъявляющий по меньшей мере один N-гликан С. jejuni, или производное такого гликана, на поверхности своей клетки. Была выдвинута гипотеза, что такая модифицированная S. enterica может быть применима в составе вакцины против инфекций, вызываемых Campylobacter, в частности у домашнего скота, такого как птица. Однако к сожалению, в последующих публикациях было показано, что хотя S. enterica, экспрессирующая N-гликан из Campylobacter на своей поверхности, способна создавать колонии в организме куриц, не вызывая заболевания, у куриц, вакцинированных против N-гликана Campylobacter, не было определимого гуморального иммунного ответа (Thommen "Campylobacter N-glycan presenting Salmonella Typhimurium: a new vaccine for broiler chickens?" Zurich Open Repository and Archive, University of Zurich, Dissertation, Vetsuisse Faculty, 2011). Кроме того, у вакцинированных куриц при инфекции, вызванной С. jejuni, колонизация С. jejuni не уменьшалась.
[0009] Потребность в эффективной вакцине для профилактики и/или лечения инфекций, вызываемых Campylobacter у людей и животных, в частности у домашнего скота, и в частности у птицы, сохраняется.
[0010] Данная информация об исходном уровне техники приведена в целях ознакомления со сведениями, которые по мнению заявителя могут объяснить потенциальную значимость настоящего изобретения. Нет необходимости признавать и не следует истолковывать, что любая предшествующая информация являет собой предшествующий уровень техники в сравнении с настоящим изобретением.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0011] Задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы обеспечить вакцину против Campylobacter. Согласно одному аспекту предложена композиция вакцины, содержащая бактерии, модифицированные таким образом, что они экспрессируют по меньшей мере один N-гликан бактерии Campylobacter или производное такого гликана на своей поверхности; и один или более физиологический растворитель, вспомогательное вещество, адъювант или носитель. Согласно определенным вариантам реализации указанным видом Campylobacter является С. jejuni. Указанной бактерией может быть Escherichia coli или Salmonella, и указанная модифицированная бактерия экспрессирует на своей поверхности гептасахарид С. jejuni.
[0012] Согласно определенным вариантам реализации указанная композиция содержит живые, модифицированные клетки E. coli, или живые ослабленные, инактивированные или убитые модифицированные клетки Е. coli. Указанная композиция может содержать суспензию модифицированных бактерий в подходящем буферном растворителе, таком как фосфатно-солевой буфер, и может быть выполнена в форме для перорального введения, введения in ovo, парентерального введения (например, путем инъекции или инфузии), или, например, распыления. Также указанная композиция вакцины может быть выполнена в форме для добавления в корм домашнему скоту, пищевые добавки ил и вводу домашнему скоту, и для введения птице, например, курицам.
[0013] Согласно другому аспекту предложен способ вакцинации животных против Campylobacter, способ, включающий введение животному композиции вакцины, описанной в настоящей заявке, содержащей бактерии, модифицированные таким образом, что они экспрессируют по меньшей мере один N-гликан бактерии Campylobacter или производное такого гликана на своей поверхности; и один или более физиологический растворитель, вспомогательное вещество, адъювант или носитель.
[0014] Известно, что экспрессия N-гликана у сальмонеллы не приводит к индукции защитного иммунного ответа. Неожиданно авторы настоящего изобретения показали, что Е. coli - которая является бактерией, очень похожей на сальмонеллу, и, как ожидалось, должна была дать похожие результаты - действительно вызывала индукцию защитного иммунного ответа у куриц, когда она экспрессировала N-гликан.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0015] Для лучшего понимания настоящего изобретения, а также других аспектов и дополнительных его особенностей, дается ссылка на следующее описание, которое следует применять в сочетании с сопровождающими его фигурами, где:
[0016] На Фигуре 1 показаны лизаты клеток Е. coli, из E. coli, мутантных по полимеразе, обработанные протеиназой K.
[0017] На Фигуре 2 показана структура липид-А-N-гликана и эксперимент на основе ЯМР (ядерно-магнитного резонанса) для компонента N-гликана липида-А Campylobacter jejuni.
[0018] На Фигуре 3 показан эксперимент FACS с мутантом Е. coli по полимеразе.
[0019] На Фигурах 4А, В, С и D показаны эксперименты по вакцинации и провокации, которые описаны в Примере 2, и
[0020] На Фигурах 5А и В показаны специфические антительные ответы куриц на IgY (IgG) N-гликан (ELISA).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0021] Определение
[0022] Если не указано другое, все технические и научные термины, применяемые в настоящей заявке, имеют те же значения, которые обычно подразумевают специалисты в той области техники, к которой относится настоящее изобретение.
[0023] В настоящем описании и формуле изобретения формы единственного числа включают множественное число, если из контекста явно не следует другое.
[0024] В настоящей заявке под термином «содержащий» следует понимать, что нижеследующий перечень не исчерпывающий, и может включать, а может и не включать любые другие дополнительные соответствующие термины, например, при необходимости одно или более дополнительных свойств, компонентов и/или ингредиентов.
[0025] Термины «гликан C. jejuni», «гептасахарид C. jejuni», «N-гликан гептасахарид», «N-гликан Campylobacter» и «гептасахарид» применяются в настоящей заявке взаимозаменяемо и относятся к компоненту-гликану, который присутствует в большинстве поверхностных гликопротеидов и свободных олигосахаридов во многих штаммах и видах Campylobacter. Данный гликан в случае C. jejuni и который в качестве примера приведен в настоящей заявке, имеет формулу: GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,4-[Glc-β-1,3]GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,3-diNAcBac, где diNAcBac - 2,4-диацетамидо-2,4,6-тридезокси-D-глюкопираноза. Указанные термины могут относиться к гликозилированию либо путем N-гликозилирования, либо с применением сахаров, полученных из пути N-гликозилирования или других путей. В недавней работе авторов настоящего изобретения было продемонстрировано, что N-гликан C. jejuni и свободные олигосахариды являются достаточно консервативными в ряду термофильных видов Campylobacter (Nothaft et al. Mol. Cell. Proteomics 11: 1203-1219, 2012), причем некоторые виды вырабатывают гексасахаридное производное указанного гептасахарида, не содержащее боковой глюкозы. Применение альтернативных структур N-гликанов и свободных олигосахаридов, описанных в (Nothaft et al. Mol. Cell. Proteomics 11: 1203-1219, 2012), которые присутствуют у нетермофильных видов Campylobacter, таких как описаны в Публикации РСТ WO/2011/097733, также подразумевается и включено в настоящее изобретение.
[0026] В настоящей заявке термин «антиген» относится к химическим или биологическим категориям, которые вызывают иммунную реакцию у животных или человека. В системе, описываемой в настоящей заявке, антиген содержит гептасахарид бактерии Campylobacter jejuni или их производное в форме N-гликана. В настоящей заявке термин «производное N-гликана» относится к производным гептасахарида, которые вызывают иммунный ответ у животного, аналогичный или более выраженный, чем ответ, вызываемый самим указанным гептасахаридом. N-гликан может быть конъюгирован с носителями, например, такими как белки (как описано в Заявке РСТ №WO 2012/027850) и липиды (Nothaft et al. Mol. Cell. Proteomics 11: 1203-1219, 2012, van Sorge et al. Cell Microbiol 11: 1768-1781, 2009), или более короткими или более длинными сахаридными повторами гептасахарида в полисахариде.
[0027] В настоящей заявке термин «вакцина» относится к композиции для повышения иммунитета у животных или человека к определенным микроорганизмам. Описываемые в настоящей заявке вакцины можно применять у целого ряда животных, например, таких как птицы, например, домашние птицы, а также млекопитающие. Микроорганизмы, на которые направлена вакцина, описываемая в настоящей заявке, являются микроорганизмами из рода Campylobacter.
[0028] В настоящей заявке термин «Campylobacter» относится к роду бактерий, содержащих любой и все виды из рода Campylobacter. Разные виды Campylobacter из указанного рода включают без ограничений С. jejuni, С. hominis, С. rectus, С. lari, С. fetus, С. coli, С. upsaliensis, С. fetus subsp. venerealis, С. fetus subsp. fetus, С. peloridis, С. lari subsp. concheus, C. sputorum, C. gracilis, C. showae, C. lanienae, C. curvus, C. helveticus, C. hyointestinalis subsp. hyointestinalis, С. hyointestinalis subsp. lawsonii, С. mucosalis, C. sputorum bv. paraureolyticus, C. sputorum bv. fecalis, C. ureolyticus, C. insulaenigrae, С. concisus, C. subantarcticus, C. avium, С. cuniculorum и С. volucris.
[0029] Согласно настоящей заявке предложен гликан, и его иммунологически активные фрагменты, которые можно применять в качестве вакцин против инфекции, вызываемой Campylobacter у людей и животных. Такие вакцины могут быть применимы при профилактике или нейтрализации инфекций, вызываемых Campylobacter, у домашнего скота, что позволяет предотвратить поступление данного патогена в пищевую цепь человека. Согласно определенным вариантам реализации гептасахарид С. jejuni и его фрагменты, необязательно связанные с аминокислотой, олигопептидом, липидом, или другой подходящий конъюгат можно применять в качестве вакцины. Например, данную вакцину можно применять для любого животного, которое инфицировано кампилобактерами, для которых N-гликан может быть экспрессирован на поверхности клетки Е. coli в форме гибрида центральной частью липида А.
[0030] Композиция вакцины
[0031] В настоящей заявке предложена композиция вакцины, содержащая модифицированную E. coli, которая была создана так, чтобы экспрессировать по меньшей мере один N-гликан Campylobacter, или его гептасахаридное производное, на своей поверхности. Указанная модифицированная Е. coli является живой, мертвой и/или ослабленной.
[0032] Как было описано выше, гептасахарид Campylobacter является характерным по меньшей мере для нескольких видов Campylobacter и целого ряда штаммов, включая виды, которые являются значимыми медицинскими и ветеринарными патогенами. Он является компонентом многих гликопротеинов, например, включая гликопротеины С. jejuni, именуемые, Cj0200c, Cj0289c, Cj0367c и другие. Было показано, что данный компонент гликана также обладает высокой иммуногенностью, и как и сам данный гликан (и близкие его производные и гликопептиды, содержащие N-гликан или его производные) является хорошим кандидатом для применения в качестве антигена в составе вакцины для иммунизации против многих штаммов и видов Campylobacter у млекопитающих, включая людей, у домашнего скота, включая куриц (Патент США №7598354).
[0033] Е. coli является грамотрицательной бактерией, у которой наружная мембрана покрыта липополисахаридом (ЛПС), который способствует структурной целостности бактерии и создает физический барьер, защищающий мембраны. ЛПС состоит из трех основных компонентов: центральная часть липида А и О-антиген. Липид А заякоривает ЛПС в наружной мембране, а О-антиген является самой удаленной от центра частью ЛПС. Сердцевина представляет собой разветвленный олигосахарид, который соединяет компоненты липида А и О-антигена в ЛПС.
[0034] Штаммом Е. coli, пригодным для получения композиции вакцины, является любой штамм, который можно в достаточной степени ослабить для непатологического введения человеку и/или животным в живой или мертвой форме. Можно применять другие бактерии, такие как Salmonella или другие штаммы Е. coli, которые могут обеспечить достаточную экспрессию и повышение иммунного ответа.
[0035] В настоящей заявке термин «оперон pgl» относится к любому физиологически активному кластеру гликозилирования генов Campylobacter, способному к гликозилированию гомологичных или гетерологичных структур, вырабатываемых штаммом Е. coli, применяемым в составе композиции вакцины. Оперон pgl у С. jejuni кодирует все ферменты, необходимые для синтеза N-гликана гептасахарида С. jejuni, его транспорта через внутреннюю мембрану и переноса к белкам. PglD, Е, F кодируют ферменты, участвующие в биосинтезе ди-N-ацетилбациллосамина, PglC переносит UDP-ди-N-ацетилбациллосамин на андекарпенилфосфат, a PglA, Н и J добавляет остатки GalNAc. Боковая группа Glc присоединяется ферментом PglI. Перенос через внутреннюю мембрану готового гептасахарида происходит благодаря действию PglK, и олигосахарилтрансфераза PglB переносит N-гликан на белок, а также высвобождает гептасахарид в периплазму в его свободной форме.
[0036] Функциональное производное оперона pgl представляет собой кластер генов, полученный из любого оперона pgl Campylobacter, содержащий делеции, мутации и/или замены нуклеотида(ов) или целых генов, но все еще способный производить олиго- или полисахарид, который может соединяться с гомологичными или гетерологичными структурами, вырабатываемыми штаммом E. coli, применяемым в составе композиции вакцины. Один или более оперонов pgl или их производных можно интегрировать в хромосому штамма E. coli, или его/их можно ввести в составе по меньшей мере одной плазмиды. Обычно интеграция в хромосому предпочтительна, поскольку данный вариант более стабилен по сравнению с векторами на основе плазмид, утрата которых может происходить во время культивирования. Следует отметить, что указанный штамм Е. coli может содержать более одного оперона pgl или его производного, производящих один или более N-гликанов или их производных. Согласно определенным вариантам реализации указанная композиция вакцины содержит штамм Е. coli, содержащим опероны pgl более чем одного типа, что приводит к экспрессии на поверхности модифицированной E. coli более чем одной структуры гликанов. Это может благоприятствовать стимуляции более разнонаправленного иммунного ответа у человека или животного в отношении разных видов Campylobacter. Согласно альтернативному варианту реализации указанная композиция вакцины содержит штамм E. coli, содержащий оперон pgl единственного типа, что приводит к экспрессии на поверхности модифицированной E. coli гликанов одной структуры. Это может благоприятствовать стимуляции специфического иммунного ответа у человека или животного в отношении одного вида Campylobacter.
[0037] Необязательно, уровень экспрессии гликана С. jejuni можно регулировать посредством применения разных промоторов или других регуляторных элементов, располагая их до оперона pgl, включая без ограничений промоторы генов рибосомальных белков, а также промоторы из генов, кодирующих устойчивость к антибиотикам, таких как bla, или похожие и предпочтительно сильные промоторы. Данный тип регуляции доступен для кодируемых плазмидой или интегрированных в хромосому оперонов pgl. Кроме того, стабильность плазмиды можно необязательно увеличивать путем включения жизненно-важных генов в плазмиду, при условии делеции указанных генов в геноме штамма Е. coli, применяемого в составе композиции вакцины.
[0038] Согласно альтернативному варианту реализации ген pglB оперона pgl инактивироан, что означает, что соответствующая олигосахаридтрансфераза В либо не экспрессируется, либо по меньшей мере инактивирована как фермент. Продукт гена pglB переносит N-гликан на специфический акцепторный сайт специфического полипептида, который также описан ниже, и высвобождает гептасахарид в его свободной форме. Инактивация трансферазы ведет к тому, что N-гликан или производное N-гликана связывается исключительно липидом А сердцевины акцептора О-антигена в Е. coli, и приводит к обмену GlcNAc на diN-ацетилбациллосамин, поскольку О-антиген-лигаза Е. coli распознает только GlcNAc-содержащие гликаны в сайте присоединения (т.е., на восстанавливающем конце).
[0039] Согласно близкому варианту реализации производное pgl представлет собой такое производное, в котором один или более генов биосинтеза diN-ацетилбациллосамина, pglD, Е, F и переноса инактивированы, а также инактивирован ген pglB. Данный вариант реализации приводит к обмену GlcNAc на diN-ацетилбациллосамин. Включение такого производного pgl в клетку Salmonella приводит к увеличенному клеточному предъявлению и к переносу модифицированного гептасахарида на сердцевину липида А, а не на акцепторы полипептидов (см., Публикацию заявки на патент США №2012/0100177).
[0040] Указанный по меньшей мере один N-гликан С. jejuni, или его производное в форме гептасахарида, может быть любым N-гликаном, вырабатываемым любым опероном pgl Campylobacter, или его функциональным производным, при условии, что указанный гликан иммуногенен в том смысле, что он вызывает иммунный ответ, специфичный для вида Campylobacter.
[0041] Согласно специфическому варианту реализации указанный гликан представляет собой гептасахарид, соответствующий формуле (I), которая описана выше, т.е. GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,4-[Glc-β-1,3]GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,3-diNAcBac, где diNAcBac (также называемый ди-N-ацетилбациллосамин) - 2,4-диацетамидо-2,4,6-тридезокси-D-глюкопираноза.
[0042] Альтернативным вариантом реализации, при котором оперон pgl, где гены для биосинтеза ди-N-ацетилбациллосамина инактивированы или в значительной степени или полностью делетированы, приводит к синтезу производного гептасахарида, соответствующего формуле (II), является GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,4-[Glc-β-1,3]GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,4-GalNAc-α1,3-GlcNAc.
[0043] Согласно определенному варианту реализации указанный N-гликан(ы) или производное(ые), полученные по меньшей мере с одного оперона pgl, или его производного, может быть связан по меньшей мере с одним гомологичным или гетерологичным полипептидом E. coli, который в итоге будет перенесен и предъявлен на поверхности клетки. Полипептид, связанный с N-гликаном (производным) может быть полипептидом любого типа, например, чистым полипептидом (только аминокислоты) или полипептидом с пострансляционными модификациями, например полипептид, связанный с липидом.
[0044] Согласно другому варианту реализации указанный гликан(ы) или его производное(ые) выделены из клеток природного хозяина, находятся в своей свободной олигосахаридной форме, а затем их химически конъюгируют с полипептидом или липидом-носителем.
[0045] Согласно специфическому варианту реализации по меньшей мере один гликан или его производное, полученные по меньшей мере с одного оперона pgl, или его производного, связаны с центральной частью липида A E. coli или его функционально эквивалентным производным. Центральная часть липида А Е. coli представляет собой олигосахаридную структуру, состоящую без ограничений из гексоз, гептоз и KDO (3-дезокси-D-маннооктулозоновой кислоты), соединенных двумя глюкозаминами с ацильными цепями, заякоривающими данную структуру в наружной мембране бактерии. Функционально эквивалентное производное центральной части липида А представляет собой производное, которое способно принимать один или более гликанов или их производных и предъявлять их на поверхности клетки. Следует отметить, что в данном случае указанный гептасахарид или его производное не является N-связанным, поскольку структура центральной части липида А E. coli не является полипептидом.
[0046] Необязательно по меньшей мере один гептасахарид или его производное заменяют собой боковые цепи О-антигена в ЛПС (липополисахариде). Внутренняя и наружная сторона центральной части липида A E. coli остаются неизменными, хотя биосинтез О-антигена устранятся посредством мутации, например, мутации wzy и/или других мутаций. Согласно определенным вариантам реализации по меньшей мере один гептасахарид, его производное или смесь их обоих экспрессируются одновременно с боковыми цепями О-антигена в ЛПС, что приводит к образованию гетерогенного ЛПС, содержащего и О-антиген, и указанный гептасахарид.
[0047] Предпочтительно, а для медицинских приложений весьма важно, чтобы штамм E. coli согласно настоящему изобретению не оказывал патогенного действия при его введении животному или человеку в живой и/или инактивированной форме. Специалисту в данной области техники известно много способов ослабления вирулентных видов E. coli посредством мутации. Например, мутации, которые ослабляют патогенную E. coli (1) мутант CarAB патогенной Escherichia coli O2 птиц ослаблен и пригоден в качестве живой пероральной вакцины против колибациллеза у индеек (Kwaga et al. Infect Immun. 62: 3766-3772, 1994); (2) мутация РНК-шаперона Hfq значительно снижает патогенность VTEC, ЕАЕС и UPEC в модели на нематоде (Bojer et al. Microbes Infect 14: 1034-1039, 2012); (3) мутации генов в фосфат-специфичной транспортной системе (Pst) ослабляют штаммы Е. coli (Buckles et al. Microbiology 152: 153-160, 2006; Daigle et al. Infect and Immun. 63: 4924-4927, 1995).
[0048] Согласно одному конкретному варианту реализации штамм Е. coli применяемый в композиции вакцины, ослабляют посредством частичной или полной инактивации экспрессии О-антигена, например, посредством мутации в гене wzy (приводящей к получению мутанта по полимеразе О-антигена) (Baba et al. Mol. Syst. Biol. 2: 2006).
[0049] Описанные выше штаммы Е. coli обладают высокой иммуногенностью и вызывают иммунный ответ, направленный против инфекции, вызванной Campylobacter, такого как С. jejuni. Кроме того, будучи полученными, они легко размножаются и нарабатываются в большом количестве. Их можно вводить в виде мертвых или живых вакцин, причем живые вакцины позволяют продолжить размножение и поддерживать длительный иммунный стимул в организме хозяина, а также получать полные иммунные ответы с адъювантом или без него.
[0050] Следовательно, настоящее изобретение также связано с медицинским применением живых или мертвых штаммов Е. coli, модифицированных так, чтобы они предъявляли один или более N-гликанов Camplyobacter или их производных, на своей поверхности, в частности для получения лекарственного препарата, предпочтительно вакцины.
[0051] Предпочтительно указанный лекарственный препарат применим при профилактике и/или лечении инфекции и/или колонизации, вызванной С. jejuni, предпочтительно у домашнего скота, более предпочтительно у крупного рогатого кота и птицы, более предпочтительно у птицы, такой как курицы, индюки, гуси и утки.
[0052] Согласно одному аспекту настоящего изобретения предложена композиция вакцины, которая является фармацевтической композицией, пищевой или кормовой добавкой, содержащими мертвую или живую Е. coli, модифицированную так, чтобы она предъявляла один или более N-гликанов Camplyobacter или их производных, на своей поверхности, и физиологически приемлемое вспомогательное вещество, растворитель или носитель. Необязательно указанная композиция вакцины включает дополнительные компоненты или вводится с дополнительными компонентами, такими как, например, адъювант. Согласно другому альтернативному аспекту композиция вакцины, описываемая в настоящей заявке, выполнена в форме для введения с другой композицией вакцины.
[0053] Адъюванты, как правило, содержат вещества, которые стимулируют иммунный ответ хозяина неспецифическим образом. В технике известно множество разных адъювантов. Примеры адъювантов включают полный и неполный адъювант Фрейнда, витамин Е, неионные блок-полимеры и полиамины, такие как сульфат декстрана, карбопол и пиран. Также подходят поверхностно-активные вещества, такие как Span, Tween, гексадециламин, лизолецитин, метоксигексадецилглицрин и сапонины (например, Quil А®). Кроме того, часто применяют пептиды, такие как мурамилпептиды, диметилглицин и тафцин. Наряду с перечисленными адъювантами можно с успехом применять иммуностимулирующие комплексы (ISCOMS), минеральное масло, например, Bayol® или Markol®, растительные масла или эмульсии и Diluvac® Forte.
[0054] Необязательно вакцины смешивают с одним или более стабилизаторами, например, для защиты склонных к распаду компонентов от разложения, чтобы увеличить срок хранения вакцины, или чтобы повысить эффективность лиофилизации. Применимые стабилизаторы включают, например, SPGA (Bovarnik et al. J. Bacteriology 59: 509, 1950), обезжиренное молоко, желатин, бычий сывороточный альбумин, углеводы, например, сорбитол, маннитол, трегалозу, крахмал, сахарозу, декстран или глюкозу, белки, такие как альбумин или казеин, или продукты их распада, и буферы, такие как фосфаты щелочных металлов.
[0055] Композиция вакцины может быть, например, в форме раствора, суспензии или лиофилизированной композиции, подходящей для восстановления перед введением.
[0056] Лиофилизация представляет собой эффективный способ сохранения композиции вакцины. Лиофилизированный материал можно сохранить стабильным в течение многих лет. Температуры хранения для лиофилизированного материала может быть значительно выше нуля градусов, что не наносит вреда материалу. Лиофилизацию можно проводить в соответствии с хорошо известными стандартными процедурами лиофилизации.
[0057] Способ иммунизации
[0058] В настоящей заявке предложен способ иммунизации животного от инфекции, вызываемой Campylobacter. Указанный способ включает этап введения животному композиции вакцины, содержащей E. coli, которая была сконструирована так, чтобы она предъявляла по меньшей мере один N-гликан Camplyobacter или его производное, на своей поверхности, как описано выше.
[0059] Кампилобактериоз представляет собой заболевание, вызываемое Campylobacter. Наиболее частыми симптомами являются диарея, боль в животе, лихорадка, головная боль, тошнота и/или рвота. Обычно данные симптомы сохраняются приблизительно только три-шесть дней. Однако в редких случаях инфекция, вызываемая Campylobacter, может вызывать длительные осложнения, такие как, например, синдром Джуллиана-Барр (GBS), артрит и бактериемию. Следовательно, вакцины, описываемые в настоящей заявке, применимы при иммунизации животных, включая человека и домашний скот, такой как курицы, которые являются основной причиной заболеваний, распространяющихся через пищеварительный тракт, у человека. Следовательно, в настоящей заявке также предложен способ профилактики или минимизации эффекта заболевания или расстройства, вызванного Campylobacter. Согласно особым вариантам реализации заболеванием или расстройством, вызванным Campylobacter, является кампилобактериоз, синдром Джуллиана-Барр (GBS) и/или артрит и/или бактериемия, хотя другие виды Campylobacter связаны с другими патологическими состояниями, такими как периодонтит и выкидыши.
[0060] Согласно варианту реализации, при котором композиция вакцины применяется для вакцинации домашнего скота, есть разные пути введения указанной композиции, которые могут быть удобны для массовой вакцинации. Введение можно проводить с питьевой водой, пищей или кормом, при помощи спрея/распылителя (например, курицам в возрасте одного дня в транспортных контейнерах, или животным в закрытой среде, например, в птичниках), в виде глазных капель, путем прокалывания или скарификации (кожный путь в перепонку крыла или стопу), путем инъекции (например, внутримышечной или подкожной) или введения in-ovo.
[0061] Необязательно животным вводят начальную дозу композиции вакцины, а затем одну или более бустер-доз с соответствующими интервалами времени. Специалист в данной области техники может легко определить объем дозы и режим дозирования, подходящие для конкретного приложения. В данном примере мы проводили начальную вакцинацию птицам в возрасте 1 неделя, вводя им 1×108 живых или фиксированных в формалине клеток Е. coli (или с любой другой гликоконъюгированной вакциной, т.е., N-гликан С. jejuni, связанный с ТохС). Мы вводили одну бустер-дозу с тем же количеством бактериальных клеток (или белка) через две недели. Провокация кампилобактером обычно проводилась еще через неделю, и птиц подвергали эвтаназии через 1 неделю после провокации (как описано ниже).
[0062] Чтобы улучшить понимание изобретения, описываемого в настоящей заявке, приведены следующие примеры. Следует понимать, что данные примеры приведены только в целях иллюстрации. Следовательно, они не должны ни коим образом ограничивать область настоящего изобретения.
ПРИМЕРЫ
[0063] Пример 1: Получение вакцины
[0064] N-гликан Campylobacter jejuni, присоединенный к белку
[0065] Экспрессия и очистка белка ToxC-GT, гликозилированного N-гликаном С.
jejuni: Белок ToxC-GT, гликозилированный N-гликаном С. jejuni экспрессировали в клетках E. coli BL21, экспрессирующих оперон pgl С. jejuni, и очищали посредством хроматографии с Ni-NTA (нитрилотрехуксусной кислотой), как описано в опубликованной заявке РСТ на международный патент №WO 2012/027850. Белок подвергали дальнейшей очистке при помощи ионообменной хроматографии с применением системы AEKTA FPLC, снабженной анионообменной колонки 2,5 мл MonoQ. Подвижной фазой был буфер 50 мМ Tris-HCl, рН 8,0 с градиентом NaCl в пределах 0-500 мМ NaCl в 30 объемах колонки. Фракции, содержащие глюкоконъюгат, анализировали в 12,5% полиакриламидном геле с додецил-сульфатом натрия (SDS PAGE), два раза пропускали через 1 г абсорбента для удаления липида (LRA, «Supelco»), проводили диализ с обменом на ФСБ и перед применением устанавливали концентрацию белка 0,5 мг/мл. Концентрацию белка определяли с применением стандартных способов (тест Бредфорда) с применением повышенных концентраций БСА в ФСБ для получения стандартной кривой.
[0066] N-гликан Campylobacter jejuni, присоединенный к структуре центральной части липида A E. coli: получение вакцины на основе E. coli
[0067] Клетки Е. coli, экспрессирующие гептасахарид С. jejuni, были описаны ранее (Nothaft et al. Molecular and Cellular Proteomics 11: 1203-1219). Клетки выращивали в жидком бульоне (2 × бульон YT (бульон из дрожжевого экстракта и триптона) при 37°С и интенсивном взбалтывании (220 об/мин) до достижения стационарной фазы. Клетки отбирали посредством центрифугирования и дважды промывали стерильным ФСБ. Количество клеток определяли посредством разлива в планшеты последовательных разведений суспензии клеток до оптической плотности OD600, равной 2,0, и применяли либо в таком виде, либо фиксированными в формалине.
[0068] Клетки Е. coli из ночной культуры, экспрессирующие локус pgl С. jejuni, отбирали посредством центрифугирования и дважды промывали стерильным ФСБ, как описано в Nothaft et al. Mol. Cell. Proteomics 11: 1203-1219, 2012. Затем 1 мл клеток, OD600 для которых при помощи стерильного ФСБ была доведена до 1,0, центрифугировали и повторно суспендировали в 100 мкл 1-кратного буфера Лэммли и нагревали в течение 10 мин до 95°С. Добавляли протеиназу до конечной концентрации 200 мкл/мл, и пробу инкубировали при 60°С в течение 1 ч, после чего инкубировали в течение 5 мин на льду и центрифугировали в течение 15 мин. Аликвоты надосадочной жидкости разделяли при помощи стандартного 12,5% SDS-PAGE. Гепатсахарид, присоединенный к структуре центральной части липида А, визуализировали при помощи Вестерн-блоттинга, как было описано (Nothaft et al. Molecular and Cellular Proteomics 11: 1203-1219), с применением N-гликан Campylobacter jejuni-специфической антисыворотки hR6, в качестве основного антитела, и антитела на белок кролика, конъюгированный со щелочной фосфатазы, в качестве дополнительного антитела (Фигура 1). На первой дорожке показаны обработанные протеиназой K лизаты клеток из мутанта Е. coli по О-антиген-полимеразе, экспрессирующего оперон гликозилирования белка C. jejuni с активным геном pglB (pACYC184pglBmut). Образование гибрида липид A-N-гликан отмечено стрелкой. На дорожке 2 показаны обработанные протеиназой K лизаты контрольных клеток из мутанта Е. coli по О-антиген-полимеразе с пустым вектором (pACYC184). Маркеры молекулярной массы (MW в килодальтонах, кДа) показаны слева. Полосы с более высокой молекулярной массой представляют собой компоненты Е. coli, которые в обоих препаратах проявляли перекрестную реактивность.
[0069] Ядерная магнитно-резонансная спектроскопия (ЯМР) очищенного компонента липид A-N-гликан. Гликолипиды получали из восьми литров культуры с OD600=1.0 мутанта Е. coli по О-антиген-полимеразе, экспрессирующего оперон гликозилирования белка C. jejuni с активным геном pglB (pACYC184pglBmut). ЛПС экстрагировали при смеси фенол-вода, проводили диализ, обрабатывали АсОН, чтобы осадить нуклеиновые кислоты, проводили диализ, высушивали, гидролизовали в 2% АсОН и разделяли на биогеле Р6. Фракции анализировали посредством ЯМР. Фракции, которые содержали сигналы от N-гликана С. jejuni, объединяли и разделяли на анионообменной колонке Hitrap с градиентом NaCl. Фракции анализировали посредством ЯМР. Фракции, которые содержали сигналы от N-гликана C. jejuni, подвергали обессоливанию посредством хроматографии на сефадексе G-15. Присоединение подтверждали при помощи спектроскопия ядерного эффекта Оверхаузера (NOESY) и гетероциклической корреляционной спектроскопии нескольких связей (НМВС). Можно было наблюдать специфические химические сдвиги для N-гликана С. jejuni, все 1-4-связи компонентов N-гликана С. jejuni давали ядерное усиление Оверхаузера 1:4 и 1:6, и заданные значения хорошо согласовывались с ранее опубликованными данными (Фигура 2 и Таблица 1, и Nothaft et al. Molecular and Cellular Proteomics 11: 1203-1219, 2012). Производное N-гликана С. jejuni с GlcNAc вместо diNAcBac в качестве восстановления конечного сахара (Фигура 2) присоединяли через O-7 L-глицеро-D-манногептозы центральной части липида А. Все сигналы от Hep (L) были обнаружены посредством анализа основного множества корреляций, и заданные значения для центральной части липида A E. coli согласовывались с опубликованными данными (Muller-Loennies et al. Journal of Biological Chemistry 278:, 34090-34101, 2003, и Таблица 1).
[0070] Анализ посредством флуоресцентной сортировки клеток (FACS). Сначала 1 мл клеток E. coli с OD600=1.0 осаждали посредством центрифугирования и суспендировали в 1 мл блокирующего раствора (ФСБ, 5% обезжиренного молока). Клетки исследовали с применением N-гликан С. jejuni-специфической антисыворотки hR6 и конъюгированной с Алекса-флор-546 антисывороткой на белок кролика, и анализировали посредством FACS. Данные FACS обрабатывали при помощи программы FACS Diva. Для идентификации и разблокировки интактных клеток применяли контрастную окраску DAPI (4',6-диамидин-2-фенилиндол). Анализ популяции из 2×104 клеток показал значительное увеличение флуоресценции для клеток E. coli, экспрессирующих N-гликан С. jejuni, по сравнению с контрольными клетками E. coli с пустым вектором (pACYC184), что подтверждает, что N-гликан C. jejuni присутствует на поверхности клеток (фигура 3). Появление пика и геометрия пика показывает, что каждая клетка E. coli предъявляла сопоставимое количество N-гликана С. jejuni на своей поверхности.
[0071] Пример 2: Вакцинация и провокация
[0072] Введение курицам гликоконъюгата ToxC-GT посредством инъекций (Фигура 4D) или посредством перорального введения (Фигура 4А), а также живых штаммов (Фигура 4В и С) модифицированной E. coli, описанной в примере 1, приводило к значительному снижению содержания Campylobacter в слепой кишке куриц, подвергаемых провокации. Было проведено три эксперимента с вакцинацией куриц с применением Е. coli, экспрессирующей гептасахарид С. jejuni, чтобы продемонстрировать повышение иммунитета куриц против Campylobacter. Результаты указанных экспериментов показаны на Фигурах 4А, В и С.
[0073] В первом эксперименте с вакцинацией куриц провокацию проводили в о трех группах куриц. Контрольная группа с ФСБ включала четырех куриц, а в группе 2 и 3 было по восемь куриц. Условия для групп 1 и 2 приведены в таблице 2. Группе 3 через желудочный зонд вводили мертвые клетки E. coli, экспрессирующие на поверхности гептасахарид N-гликан C. jejuni, в дни 7 и 21. Впоследствии птиц повергали провокации следующим образом: группа 1 (контроль) получали через желудочный зонд 300 мкл ФСБ; группы 2 и 3 получали через желудочный зонд 300 мкл ФСБ, содержащие 102 клеток С. jejuni 81-176. В день 35 куриц повергали эвтаназии и определяли уровень колонизации посредством посева последовательных разведений содержимого слепой кишки каждой птицы на селективный агар Кармали. После инкубации чашек Петри в течение 48 часов при микроаэробных условиях определяли число колониеобразующих единиц (КОЕ). Результаты графически показаны на Фигуре 4А, и уровни колонизации показаны как КОЕ на грамм содержимого слепой кишки. Горизонтальные полоски соответствуют медиане для каждой группы. Более конкретно, результаты показывают, что вакцина на основе N-гликана уменьшает колонизацию Campylobacter у куриц. На чашках группы 1 не было обнаружено колониеобразующих единиц (контроль с ФСБ), тогда как у птиц из группы 2 была выявлена колонизация со средним значением 1010 клеток кампилобактера на грамм содержимого слепой кишки. В группе 3 колонизация уменьшалась приблизительно на 4 логарифмических единицы.
[0074] Во втором эксперименте с вакцинацией куриц провокацию проводили в отношении трех групп куриц. Группы 1 и 2 включали по 6 куриц, группа 3 включала 8 куриц. Условия для групп 1 и 2 приведены в таблице 2. Группе 3 через желудочный зонд вводили живые клетки E. coli, экспрессирующие гептасахарид N-гликан С. jejuni, в дни 7 и 21. Концентрации материала для провокации и уровень колонизации определяли, как описано в первом эксперименте. Результаты графически показаны на фигуре 4В, и уровни колонизации показаны как КОЕ на грамм содержимого слепой кишки. Горизонтальные полоски соответствуют медиане для каждой группы. Результаты показывают, что вакцина на основе N-гликана уменьшает колонизацию Campylobacter у куриц. На чашках группы 1 не было обнаружено колониеобразующих единиц (контроль с ФСБ), тогда как у птиц из группы 2 была выявлена колонизация со средним значением 1010 клеток Campylobacter на грамм содержимого слепой кишки. В группе 3 ни у одной из птиц колонизация была на неопределимом уровне.
[0075] В третьем эксперименте, показанном на Фигуре 4С, провокацию проводили в отношении 4 групп куриц. Группа 1 включала 6 куриц, группы 2, 3 и 4 включали по 8 куриц. Условия для групп 1 и 2 приведены в таблице 2. Группам 3 и 4 через желудочный зонд вводили вакцины в дни 7 и 21. Птицы из 3-ей группы получали живые клетки E. coli, не экспрессирующие на поверхности N-гликан, а птицы группы 4 получали живые клетки E. coli, экспрессирующие на своей поверхности гептасахарид N-гликан С. jejuni. Результаты графически показаны на фигуре 4С, и уровни колонизации показаны как КОЕ на грамм содержимого слепой кишки. Горизонтальные полоски соответствуют медиане для каждой группы. Результаты показывают, что вакцина на основе N-гликана воспроизводимо уменьшает колонизацию Campylobacter у куриц, и что клетки E. coli, не экспрессирующие N-гликан, не обладают пробиотическим эффектом, поскольку уровень колонизации Campylobacter после провокации был сходным с уровнем у птиц группы 2.
[0076] В четвертом эксперименте, который показан на Фигуре 4D, провокацию проводили в отношении шести групп куриц, в каждой из которых было по восемь куриц. Условия для каждой группы приведены в таблице 2.
[0077] Аналогично предыдущим экспериментам в день 1 у 10% птиц отбирали клоакальные мазки (5 случайно выбранных птиц) и завевали на селективный агар Кармали, чтобы подтвердить, что у птиц нет колонизации С. jejuni. После 48-часовой инкубации при микроаэробных условиях при 37°С колоний Campylobacter не наблюдалось.
[0078] Аналогично предыдущим экспериментам в день 7 у каждой птицы отбирали до 50 мкл крови (до иммунизации). Сыворотку готовили следующим образом: после хранения проб крови при 37°С в течение 1 ч после центрифугирования (5 мин, 18000xg, 4°С) надосадочную жидкость (сыворотку) переносили в новую пробирку и добавляли глицерин до конечной концентрации 10%. Сыворотку хранили при -20°С до дальнейшего применения. Последующее противомикробное лечение проводили следующим образом: Группа 1 (контроль ФСБ) и 2 (контроль колонизации) получали 300 мкл ФСБ с полным адъювантом Фрейнда в день 7 и такое же количество неполного адъюванта Фрейнда в день 21 (150 мкл ФСБ+150 мкл адъюванта), путем инъекции в два участка в грудную клетку со 150 мкл состава для вакцинации (без гликокнъюгата) на один участок. Группа 3 не получала антиген в день 7, но получала 1 дозу ToxC-GT, гликозилированного N-гликаном C. jejuni (100 мкг белка в 150 мкл ФСБ+150 мкл полного адъюванта Фрейнда) в день 21; группа 4 получала 1 дозу ToxC-GT, гликозилированного N-гликаном С. jejuni, с полным адъювантом Фрейнда в день 7 и не получала антиген в день 21. Группа 5 получала 2 дозы (в день 7 с полным адъювантом Фрейнда и в день 21 с неполным адъювантом Фрейнда) 100 мкг ToxC-GT, гликозилированного N-гликаном C. jejuni, в форме инъекции в заднюю конечность (150 мкл состава для вакцинации в каждую нижнюю конечность), а группа 6 получала 2 дозы через желудочный зонд (в день 7 и день 21) 300 мкл ФСБ, содержащих 108 живых клеток Е. coli, экспрессирующих на своей поверхности N-гликан C. jejuni.
[0079] Аналогично предыдущим экспериментам в день 28 у каждой птицы из групп 1-6 отбирали кровь (перед иммунизацией), и сыворотку готовили и хранили, как было описано выше. Впоследствии птиц подвергали провокации следующим образом: группа 1 (отрицательный контроль) перорально через зонд получала 300 мкл ФСБ; группы 2-6 перорально через зонд получали 300 мкл ФСБ, содержащие 102 клеток С. jejuni 81-176. В день 34 куриц подвергали эвтаназии, отбирали кровь (окончательный отбор крови) путем прокола сердца, сыворотку готовили и хранили, как было описано выше. Уровень колонизации определяли путем посева последовательных разведений содержимого слепой кишки каждой птицы на селективном агаре Кармали. Колониеобразующие единицы определяли после инкубации на чашках Петри в течение 48 часов при микроаэробных условиях.
[0080] Результаты графически показаны на фигуре 4D, и уровни колонизации показаны как КОЕ на грамм содержимого слепой кишки. Горизонтальные полоски соответствуют медиане для каждой группы. Более конкретно, результаты показывают, что вакцина на основе N-гликана уменьшает колонизацию Campylobacter у куриц, и что вакцины, содержащие живые клетки E. coli, экспрессирующие на своей поверхности N-гликан C. jejuni, у куриц проявляют себя лучше, чем вакцины на основе гликопротеина (см. ниже).
[0081] На чашках группы 1 не было обнаружено колониеобразующих единиц (контроль с ФСБ), тогда как у птиц из группы 2 была выявлена колонизация со средним значением 1010 клеток кампилобактера на грамм содержимого слепой кишки. Колонизация уменьшалась у группы 3, группы 4 и группы 5, где среднее количество КОЕ составило 2.2×104, 6.8×105 и 5.5×104 на грамм содержимого слепой кишки, соответственно. Колонизация в группе 6 была почти устранена, и среднее количество КОЕ составило 100 на грамм содержимого слепой кишки. Кроме того, 5 из 8 птиц не продемонстрировали никаких признаков колонизации С. jejuni. Это явно указывает на то, что лечение вакциной на основе белка и N-гликана С. jejuni приводит к уменьшению колонизации после провокации кампилобактером, независимо от времени проведения инъекции участка введения вакцины, и что пероральная вакцинация клетками E. coli, которые экспрессируют на своей поверхности гептасахарид, почти полностью упраздняла колонизацию кампилобактера. Кроме того, было продемонстрировано самоограничение штамма Е. coli, применяемого в составе вакцины, поскольку Е. coli обнаруживалась в содержимом слепой кишки данной группы, когда его засевали на селективную среду LB Kan-Cm. Во всех экспериментах наблюдалось устранение вакцинного штамма живой Е. coli из организма куриц.
[0082] Для анализа N-гликан-специфического иммунного ответа, более конкретно, IgY (IgG) N-гликан-специфического антительного ответа у куриц, проводили исследование на основе ELISA. Свободный олигосахарид (fOS) из С. jejuni готовили, как было описано ранее (Dwivedi et al. Biopolymers, 99: 772-7830, 2013) и соединяли с БСА посредством восстановительного аминирования, как было описано ранее (Nothaft et al. Mol. Cell. Proteomics 11: 1203-1219, 2012). Образование конъюгата БСА- Cj-N-гликана подтверждали посредством Вестерн-блоттинга с применением антисыворотки R1-4. После корректировки концентрации до 1 мг/мл при помощи ФСБ гликоконъюгат хранили при 4°С до дальнейшего применения. В десять планшетов на 96 лунок Maxisorb наносили 500 нг конъюгата БСА-Cj-N-гликана и оставляли на ночь при 4°С. После удаления несвязанного антигена планшет блокировали в течение 1 ч при комнатной температуре путем добавления 100 мкл ФСБ-Т, 5% обезжиренного молока при взбалтывании. После слива блокирующего раствора добавляли 100 мкл растворов антитела и инкубировали в течение 1, как описано выше. Растворы антитела содержали N-гликан-специфическую антисыворотку, разведенную в отношении 1:3000 в ФСБ-Т, 1% обезжиренного молока или сыворотки куриц (приготовленной из пробы крови из 2-го отбора (т.е. день 28) из экспериментов по вакцинации) и разводили в соотношении 1:50 в ФСБ-Т, 1% обезжиренного молока. Планшеты инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре, как было описано, и каждую лунку промывали 3 раза в течение 5 мин 100 мкл ФСБ-Т. После добавления 100 мкл раствора дополнительного антитела (либо на бело кролика АР (1:50) для контроля R1-4, либо на IgY цыпленка (1:500) для экспериментальных проб) инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре, затем дополнительное антитело удаляли и лунки промывали 4 раза в течение 5 мин 100 мкл ФСБ-Т. После последнего этапа отмывки оставшийся раствор для отмывки полностью удаляли из каждой лунки, и в планшет в качестве субстрата добавляли PNPP (р-нитрофенилфосфат). Иммунореактивность каждой сыворотки определяли после сканирования планшета при OD405 на планшетном ридере.
[0083] С. jejuni N-гликан-специфические антитела присутствовали (Фигура 5А) в сыворотке, приготовленной из крови, отобранной за 28 дней до провокации Campylobacter, у птиц, вакцинированных 1 дозой ToxC-GT с гликаном в день 21 (грудная клетка, в/м) (исследуемая группа 3), 2 дозами ToxC-GT с гликаном в день 7 и 21 (грудная клетка, в/м) (исследуемая группа 4), 2 дозами ToxC-GT с гликаном в день 7 и 21 (задняя конечность, в/м) (исследуемая группа 5) и 2 мертвых клеток E. coli (исследуемая группа 6). Антительный ответ (выражаемый как OD405) был максимальным в исследуемой группе 6, и большинство куриц в данной исследуемой группе не демонстрировали колонизации. Антительный ответ в группах положительного и отрицательного контроля колонизации (исследуемая группа 1 и 2) был ниже предела определения. Горизонтальные полоски показывают медиану для каждой группы.
[0084] С. jejuni N-гликан-специфические антитела присутствовали (Фигура 5В) в сыворотке, приготовленной из крови, отобранной за 28 дней до провокации Campylobacter, у птиц, вакцинированных живой E. coli, предъявляющей N-гликан на своей поверхности (исследуемая группа 4). Это соответствует эксперименту по вакцинации №3, показанному на Фигуре 4С. Антительный ответ (выражаемый как OD405) у птиц, вакцинированных живой E. coli, без гликана, (исследуемая группа 3) и из групп положительного и отрицательного контроля колонизации (исследуемая группа 1 и 2) был ниже предела определения. Горизонтальные полоски показывают медиану для каждой группы.
[0085] Наблюдалось следующее:
1) добавление в корм курицам мертвых E. coli, экспрессирующих гептасахарид С. jejuni, с последующей провокацией С. jejuni приводило к уменьшению колонизации С. jejuni в кишечнике куриц приблизительно на 4 логарифмических единицы (Фигура 4А); и
2) добавление в корм курицам живых E. coli, экспрессирующих гептасахарид C. jejuni, с последующей провокацией С. jejuni последовательно вызывало уменьшение колонизации С. jejuni в кишечнике куриц более чем на 7 логарифмических единиц (Фигура 4В, С и D).
[0086] Очевидно, что вакцины, содержащие мертвые или живые клетки Е. coli, экспрессирующие гептасахарид С. jejuni, способны значительно усиливать иммунитет куриц в отношении провокации C. jejuni.
[0087] Контрольный эксперимент
[0088] Чтобы продемонстрировать, что снижение колонизации С. jejuni является результатом вакцинации живыми Е. coli, экспрессирующими гептасахарид С. jejuni, а не пробиотического эффекта в связи с воздействием живых клеток E. coli, содержимое слепой кишки птиц, которых вакцинировали живым штаммом E. coli, также засевали на среду, селективную для E. coli, как упоминалось выше. Отсутствие колоний Е. coli у куриц, вакцинированных живыми Е. coli, указывает на то, что Е. coli выводились до окончания эксперимента.
[0089] Все публикации, патенты и заявки на патенты, упоминаемые в данном описании, указывают на уровень техники в той области, к которой относится данное изобретение, и включены в настоящую заявку посредством ссылки, так же как если бы каждая отдельная публикация, патент или заявка на патент были особо и индивидуально включены посредством ссылки.
[0090] Изобретение, описанное таким образом, очевидно, может варьировать и по-разному видоизменяться. Такие варианты не должны рассматриваться как отклонение от духа и области изобретения, и все такие модификации, которые должны быть очевидны специалистам в данной области техники, должны быть включены в область настоящего изобретения, охватываемую следующей формулой изобретения.
Claims (14)
1. Композиция вакцины против кампилобактериоза, содержащая: модифицированные клетки Е. coli, экспрессирующие по меньшей мере один N-гликан или его производное на своей поверхности, полученные по меньшей мере с одного оперона pgl Campylobacter jejeni; и один или более физиологически приемлемый разбавитель, вспомогательное вещество, адъювант или носитель.
2. Композиция вакцины по п. 1, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит живую модифицированную Е. coli или живую ослабленную модифицированную Е. coli.
3. Композиция вакцины по п. 1, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит инактивированные или убитые клетки модифицированной Е. coli.
4. Композиция вакцины по п. 1, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит суспензию модифицированных бактерий в соответствующем буферном растворителе, таком как фосфатно-солевой буфер.
5. Композиция вакцины по п. 1, дополнительно содержащая адъювант, стабилизатор или консервант.
6. Композиция вакцины по п. 1, отличающаяся тем, что указанная композиция выполнена в форме для перорального введения, введения in ovo или парентерального введения (например, посредством инъекции или инфузии).
7. Композиция вакцины по п. 6, отличающаяся тем, что указанная композиция вакцины выполнена в форме для распыления или для добавления в корм, пищевые добавки или питьевую воду домашнему скоту.
8. Композиция вакцины по любому из пп. 1-7, выполненная в форме для введения домашней птице.
9. Композиция вакцины по п. 8, отличающаяся тем, что указанной домашней птицей являются курицы.
10. Способ вакцинации домашней птицы против Campylobacter, включающий введение животному композиции вакцины, содержащей эффективную дозу композиции вакцины по п. 1.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что указанная домашняя птица представляет собой цыпленка.
12. Способ по п. 10, отличающийся тем, что указанную композицию вакцины вводят путем распыления или в составе фармацевтической композиции, корма, пищевой добавки или с питьевой водой.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанная фармацевтическая композиция выполнена в форме для перорального введения, введения in ovo, введения путем инъекции или инфузии.
14. Способ по любому из пп. 10-13, включающий второй этап введения указанной композиции вакцины.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361808875P | 2013-04-05 | 2013-04-05 | |
| US61/808,875 | 2013-04-05 | ||
| PCT/CA2014/050341 WO2014161090A1 (en) | 2013-04-05 | 2014-04-04 | Campylobacter vaccine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015145325A RU2015145325A (ru) | 2017-05-11 |
| RU2671473C2 true RU2671473C2 (ru) | 2018-10-31 |
Family
ID=51657361
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015145325A RU2671473C2 (ru) | 2013-04-05 | 2014-04-04 | Вакцина против кампилобактериоза |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10258680B2 (ru) |
| EP (1) | EP2991675B1 (ru) |
| CN (1) | CN105307677B (ru) |
| BR (1) | BR112015025288B1 (ru) |
| CA (1) | CA2907795C (ru) |
| ES (1) | ES2753369T3 (ru) |
| HK (1) | HK1216149A1 (ru) |
| PL (1) | PL2991675T3 (ru) |
| RU (1) | RU2671473C2 (ru) |
| WO (1) | WO2014161090A1 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110520153B (zh) * | 2017-01-27 | 2024-04-02 | 佛罗里达大学研究基金公司 | 在禽类中控制肠道沙门氏菌和减少弯曲杆菌的食品安全疫苗 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2086259C1 (ru) * | 1994-08-03 | 1997-08-10 | Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности | Ассоциированная инактивированная вакцина против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза мелкого рогатого скота |
| US20120100177A1 (en) * | 2009-03-27 | 2012-04-26 | Eidge-Noessische Technische Hochschule Zurich | Salmonella enterica presenting c. jejuni n-glycan or derivatives thereof |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6713073B1 (en) * | 1998-07-24 | 2004-03-30 | Megan Health, Inc. | Method of vaccination of newly hatched poultry |
| CA2477794C (en) * | 2002-03-07 | 2013-08-20 | Eidgenoessische Technische Hochschule Zuerich | System and method for the production of recombinant glycosylated proteins in a prokaryotic host |
| US7598354B2 (en) | 2002-08-01 | 2009-10-06 | National Research Council Of Canada | Campylobacter glycans and glycopeptides |
| PT2311972E (pt) | 2005-05-11 | 2015-05-13 | Eth Zuerich | Proteínas n-glicosiladas recombinantes de células procarióticas |
| CN107119095B (zh) * | 2008-01-03 | 2022-07-05 | 康乃尔研究基金会有限公司 | 原核生物中的糖基化蛋白表达 |
| DE112010001349A5 (de) | 2009-03-26 | 2012-06-21 | Ixetic Bad Homburg Gmbh | Vorrichtung zur Veränderung des Verdichtungsverhältnisses in einem Verbrennungsmotor |
| AU2011214871A1 (en) | 2010-02-11 | 2012-09-06 | The Governors Of The University Of Alberta | N-Linked Glycan Compounds. |
| US20130266604A1 (en) | 2010-09-03 | 2013-10-10 | The Governors of the University of Alberta a non-profit educational institution | Peptide containing multiple n-linked glycosylation sequons |
-
2014
- 2014-04-04 RU RU2015145325A patent/RU2671473C2/ru active
- 2014-04-04 ES ES14778134T patent/ES2753369T3/es active Active
- 2014-04-04 PL PL14778134T patent/PL2991675T3/pl unknown
- 2014-04-04 EP EP14778134.8A patent/EP2991675B1/en active Active
- 2014-04-04 US US14/782,558 patent/US10258680B2/en active Active
- 2014-04-04 CN CN201480020298.0A patent/CN105307677B/zh active Active
- 2014-04-04 WO PCT/CA2014/050341 patent/WO2014161090A1/en active Application Filing
- 2014-04-04 BR BR112015025288-5A patent/BR112015025288B1/pt active IP Right Grant
- 2014-04-04 CA CA2907795A patent/CA2907795C/en active Active
-
2016
- 2016-04-13 HK HK16104185.9A patent/HK1216149A1/zh unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2086259C1 (ru) * | 1994-08-03 | 1997-08-10 | Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности | Ассоциированная инактивированная вакцина против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза мелкого рогатого скота |
| US20120100177A1 (en) * | 2009-03-27 | 2012-04-26 | Eidge-Noessische Technische Hochschule Zurich | Salmonella enterica presenting c. jejuni n-glycan or derivatives thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MICHAEL WACKER et al. "N-linked glycosylation in Campylobacter jejuni and its functional transfer into E.coli".//SCIENCE, 29 NOVEMBER 2002, v. 298, p. 1790-1793. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2907795A1 (en) | 2014-09-09 |
| EP2991675B1 (en) | 2019-07-24 |
| ES2753369T3 (es) | 2020-04-08 |
| EP2991675A1 (en) | 2016-03-09 |
| BR112015025288B1 (pt) | 2023-02-23 |
| BR112015025288A2 (pt) | 2017-07-18 |
| RU2015145325A (ru) | 2017-05-11 |
| WO2014161090A1 (en) | 2014-10-09 |
| HK1216149A1 (zh) | 2016-10-21 |
| EP2991675A4 (en) | 2016-11-02 |
| CA2907795C (en) | 2023-09-05 |
| PL2991675T3 (pl) | 2020-03-31 |
| CN105307677A (zh) | 2016-02-03 |
| CN105307677B (zh) | 2019-08-02 |
| US10258680B2 (en) | 2019-04-16 |
| US20160045584A1 (en) | 2016-02-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2507253C2 (ru) | Презентируемый в salmonella enterica n-гликан из c. jejuni и его производные | |
| CN1922324B (zh) | 细菌毒力因子及其用途 | |
| ES2395022T3 (es) | Polipéptidos de Campylobacter y sus métodos de uso | |
| EA036764B1 (ru) | Ослабленный штамм streptococcus suis, индуцирующий иммунный ответ у свиней, и его применение | |
| MXPA03006042A (es) | Vacuna de escherichia colienterohemorragica. | |
| US20110243991A1 (en) | Process for production of vaccines | |
| RU2671473C2 (ru) | Вакцина против кампилобактериоза | |
| Jung et al. | Immunization with major outer membrane protein of Vibrio vulnificus elicits protective antibodies in a murine model | |
| US20220218810A1 (en) | New immunogenic compositions | |
| Amini et al. | Evaluation of the immunogenicity of diphtheria toxoid conjugated to salmonella typhimurium-derived OPS in a mouse model: a potential vaccine candidate against salmonellosis | |
| HUT77574A (hu) | Eljárás fokozott antigénaktivitású Helicobacter sp. és azt tartalmazó vakcina előállítására | |
| JP2721218B2 (ja) | ブタ赤痢ワクチン | |
| Deslauriers et al. | Evolution of bacterial vaccines: from Pasteur to genomics | |
| RU2683027C2 (ru) | Поливалентная иммунизирующая и/или терапевтическая композиция для применения при бактериальных инфекциях или пищевом отравлении, в частности сальмонеллёзе, способ получения этой композиции, её применение и вакцина, содержащая эту композицию | |
| US20220117997A1 (en) | Polysaccharide compositions for use in treating filariasis | |
| WO2007101262A2 (en) | Attenuated francisella bacteria | |
| EP1043029A1 (en) | Campylobacter vaccine | |
| WO2006129090A2 (en) | Vaccines | |
| Akerele | Evaluating the in vitro Characteristics and Protective Efficacy of Chitosan Nanoparticle Vaccines Against Necrotic Enteritis in Broiler Chickens | |
| Tiels | FedF as oral vaccine against F18+ Escherichia coli in piglets | |
| Gatsos | Development of live vectored vaccines targeting the alpha-toxin of Clostridium perfringens for the prevention of necrotic enteritis in poultry | |
| Abu-baker et al. | SYNTHESIS, CHARACTERIZATION, AND IMMUNOLOGICAL PROPERTIES OF LPS-BASED CONJUGATE VACCINE COMPOSED OF O-POLYSACCHARIDE AND RECOMBINANT EXOPROTEIN A FROM Pseudomonas aeruginosa. | |
| MXPA06002884A (en) | Campylobacter polypeptides and methods of use |