RU2669692C1 - Method for producing complex of biologically active peptides with neurotropic activity - Google Patents
Method for producing complex of biologically active peptides with neurotropic activity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2669692C1 RU2669692C1 RU2017128862A RU2017128862A RU2669692C1 RU 2669692 C1 RU2669692 C1 RU 2669692C1 RU 2017128862 A RU2017128862 A RU 2017128862A RU 2017128862 A RU2017128862 A RU 2017128862A RU 2669692 C1 RU2669692 C1 RU 2669692C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptides
- acetone
- temperature
- biologically active
- solution
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 31
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 28
- 230000002276 neurotropic effect Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 44
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 17
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 12
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims abstract description 6
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 29
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 6
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 6
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 206010003550 Asthenic conditions Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101000741065 Bos taurus Beta-casein Proteins 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102100029251 Phagocytosis-stimulating peptide Human genes 0.000 description 1
- 208000024777 Prion disease Diseases 0.000 description 1
- UEJYSALTSUZXFV-SRVKXCTJSA-N Rigin Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O UEJYSALTSUZXFV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 102000003667 Serine Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000083 Serine Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 1
- 108010084754 Tuftsin Proteins 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 206010008129 cerebral palsy Diseases 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000022077 chronic encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- GICLSALZHXCILJ-UHFFFAOYSA-N ctk5a5089 Chemical compound NCC(O)=O.NCC(O)=O GICLSALZHXCILJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- OFSHRWCWYJBWJP-CMAHKSKVSA-N neocasomorphin Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)N=C(O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](CCC(O)=O)N=C(O)[C@H](C(C)C)N=C(O)[C@@H]1N(C(=O)[C@H](N)CC=2C=CC(O)=CC=2)CCC1 OFSHRWCWYJBWJP-CMAHKSKVSA-N 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000009516 primary packaging Methods 0.000 description 1
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 108010091078 rigin Proteins 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 1
- 229940035670 tuftsin Drugs 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается выделения биологически активных веществ из органов животных. Выделенный целевой продукт представляет комплекс биологически активных пептидов проявляющих нейротропную активность.The invention relates to the pharmaceutical industry and relates to the allocation of biologically active substances from animal organs. The selected target product is a complex of biologically active peptides exhibiting neurotropic activity.
Биологически активные пептиды нейротропного действия широко и успешно используется в медицине в качестве лекарственных препаратов для профилактики и терапии нарушений мозгового кровообращения, черепно-мозговой травмы и ее последствий, энцефалопатии различного генеза, когнитивных нарушений (расстройства памяти и мышления), острых и хронических энцефалитов и энцефаломиелитов, эпилепсии, астенических состояний (надсегментарные вегетативные расстройства), сниженной способности к обучению, задержки психомоторного и речевого развития у детей, различных форм детского церебрального паралича.Biologically active peptides of neurotropic action are widely and successfully used in medicine as drugs for the prevention and treatment of cerebrovascular accident, traumatic brain injury and its consequences, encephalopathy of various origins, cognitive impairment (memory and thinking disorders), acute and chronic encephalitis and encephalomyelitis , epilepsy, asthenic conditions (suprasegmental autonomic disorders), decreased learning ability, delayed psychomotor and speech development in children, various forms of cerebral palsy.
Изобретение может использоваться при получении пептидных препаратов из ткани головного мозга в промышленных масштабах.The invention can be used to obtain peptide preparations from brain tissue on an industrial scale.
Известно несколько способов получения биологически активного пептидов из тканей различных участков головного мозга. Все они предусматривают операции гомогенизации ткани, кислотную экстракцию, отделение осадка и выделение из него целевого продукта (см., например (Патент РФ №2082429, кл. А61К 38/16, 1992 г., Патент РФ №2074726, кл. А61К 35/30, 1993, Патент РФ №2128511, кл. А61К 35/30, 1997 г.). Способы различаются условиями проведения технологических операций и веществами применяемые на данных стадиях. Известные способы не позволяют получать биологически активные пептиды из ткани головного мозга в достаточном количестве и высокого качества, а так же являются слишком сложными и длительными.Several methods are known for producing biologically active peptides from tissues of various parts of the brain. All of them include tissue homogenization operations, acid extraction, sediment separation and isolation of the target product from it (see, for example, (RF Patent No. 2082429, CL A61K 38/16, 1992, RF Patent No. 2074726, CL A61K 35 / 30, 1993, RF Patent No. 2158511, class A61K 35/30, 1997). The methods differ in the conditions of technological operations and the substances used at these stages. Known methods do not allow to obtain biologically active peptides from brain tissue in sufficient quantities and high quality, are also too complex and time consuming s.
Известен способ получения пептидов из головного мозга скота по патенту Российской Федерации №2049472. Согласно патенту дефростированный или свежий головной мозг измельчают и гомогенизируют в воде с нейтральным или слабо щелочным значением рН (6,8-8,4) и подвергают гидролизу сериновой эндопептидазой грибкового происхождения при температуре от +40 до +50°С в течение 4-5 ч. По окончании гидролиза реакционную массу при перемешивании нагревают до +90 - +95°С и выдерживают при этой температуре в течение 50 мин. После охлаждения до комнатной температуры в раствор добавляют 2,5 объема спирта и через 2 ч инкубации смесь последовательно фильтруют через мембранные фильтры с размерами пор 0,22-0,5 мкм и с молекулярным весом отсечения 5-15 кД. Спирт и воду отгоняют под вакуумом.A known method of producing peptides from the brain of livestock according to the patent of the Russian Federation No. 2049472. According to the patent, a defrosted or fresh brain is crushed and homogenized in water with a neutral or slightly alkaline pH value (6.8-8.4) and hydrolyzed with fungal serine endopeptidase at a temperature of +40 to + 50 ° C for 4-5 h. At the end of the hydrolysis, the reaction mass is heated to +90 - + 95 ° С with stirring and kept at this temperature for 50 minutes. After cooling to room temperature, 2.5 volumes of alcohol are added to the solution, and after 2 hours of incubation, the mixture is successively filtered through membrane filters with pore sizes of 0.22-0.5 μm and with a molecular weight cut-off of 5-15 kD. Alcohol and water are distilled off under vacuum.
Добавляют консервант (0.3% фенола) и проводят стерильную фильтрацию на мембранных фильтрах с диаметром пор 0,22-0,32 мкм. Целевой продукт представляет собой раствор янтарного цвета и содержит комплекс биологически активных пептидов. Недостатками метода являются использование в технологии этилового спирта, что делает производство взрывоопасным и дорогостоящим. К недостаткам так же следует отнести извлечение в процессе экстракции из тканей головного мозга веществ непептидной природы (липидной и полисахаридной природы), которые невозможно удалить при осаждении спиртом и ультрафильтрацией и которые являясь примесями, не определяют биологическую активность и ухудшают качество целевого продукта. К тому же использование в технологических операциях спирта и фенола так же ведет к ухудшению качества получаемого продукта.A preservative (0.3% phenol) is added and sterile filtration is carried out on membrane filters with a pore diameter of 0.22-0.32 microns. The target product is an amber-colored solution and contains a complex of biologically active peptides. The disadvantages of the method are the use of ethanol in the technology, which makes the production explosive and expensive. The disadvantages also include the extraction of substances of a non-peptide nature (lipid and polysaccharide nature) from the brain tissue that cannot be removed by precipitation with alcohol and ultrafiltration and which, being impurities, do not determine biological activity and impair the quality of the target product. In addition, the use of alcohol and phenol in technological operations also leads to a deterioration in the quality of the resulting product.
Наиболее близким решением к предлагаемому изобретению являются способ получения нейротропных пептидов по патенту Российской Федерации №2275924. В соответствии с патентом исходное количество головного мозга скота подвергают гомогенизации до получения гомогенной массы. Проводят экстракцию 3%-ным раствором уксусной кислоты (рН 3,5), содержащей хлористый цинк в концентрации 1,2 г/л при массовом соотношении измельченной массы и раствора уксусной кислоты 1:5. Экстракционную массу постоянно перемешивают при температуре +7 - +16°С в течение 48 ч. По окончании процесса экстрагирования экстракт подают на сепаратор. Осветленный и очищенный на сепараторе экстракт обрабатывают ацетоном при температуре +3 - +5°С и массовом соотношении экстракта и ацетона 1:5. Смесь перемешивают и оставляют на 4 часа для формирования осадка. Полученный осадок промывают охлажденным ацетоном и сушат при +35°С до остаточной влажности не более 10%. Получают порошок. Затем проводят дважды экстракцию водорастворимых пептидов из порошка путем добавления воды для инъекций. Первичный и вторичный экстракты объединяют. Объединенный экстракт очищают от высокомолекулярных белков с молекулярной массой более 15000 Да методом ультрафильтрации на мембранах. В очищенный раствор добавляют глицин (аминоуксусную кислоту) для стабилизации раствора. Далее проводят операцию стерилизующей фильтрации путем пропускания раствора через мембрану с отверстиями не более 0,22 мм. Очищенный раствор разливают по флаконам замораживают и лиофильно высушивают. Целевой продукт представляет собой лиофилизированный порошок белого или белого с желтоватым оттенком цвета, содержит комплекс биологически активных пептидов.The closest solution to the proposed invention is a method for producing neurotropic peptides according to the patent of the Russian Federation No. 2275924. According to the patent, the initial amount of the livestock brain is homogenized until a homogeneous mass is obtained. Extraction is carried out with a 3% solution of acetic acid (pH 3.5) containing zinc chloride at a concentration of 1.2 g / l at a mass ratio of the ground mass and the solution of acetic acid 1: 5. The extraction mass is constantly stirred at a temperature of +7 - + 16 ° C for 48 hours. At the end of the extraction process, the extract is fed to a separator. The extract clarified and purified on a separator is treated with acetone at a temperature of +3 - + 5 ° C and a mass ratio of extract and acetone of 1: 5. The mixture is stirred and left for 4 hours to form a precipitate. The resulting precipitate is washed with chilled acetone and dried at + 35 ° C to a residual moisture content of not more than 10%. Get the powder. Then, water-soluble peptides are extracted twice from the powder by adding water for injection. The primary and secondary extracts are combined. The combined extract is purified from high molecular weight proteins with a molecular weight of more than 15,000 Yes by ultrafiltration on membranes. Glycine (aminoacetic acid) is added to the purified solution to stabilize the solution. Next, a sterilizing filtration operation is carried out by passing the solution through a membrane with openings of not more than 0.22 mm. The purified solution is poured into vials, frozen and freeze-dried. The target product is a lyophilized powder of white or white with a yellowish tint, contains a complex of biologically active peptides.
В результате многочисленных экспериментов были выявлены следующие недостатки данного способа получения - низкий выход и качество целевого продукта (не более 7,0 гр 1 кг. сырья, количество пептидов составляет не более 37% от сухой массы продукта).As a result of numerous experiments, the following disadvantages of this production method were identified - low yield and quality of the target product (not more than 7.0 g 1 kg of raw material, the number of peptides is not more than 37% of the dry weight of the product).
Задача настоящего изобретения состоит в разработке способа получения биологически активного целевого продукта, обеспечивающего высокий процент выхода и качества, что делает его наиболее предпочтительными при использовании в промышленных масштабах.The objective of the present invention is to develop a method for producing a biologically active target product that provides a high percentage of yield and quality, which makes it most preferred when used on an industrial scale.
Техническим результатом настоящего изобретения является: увеличение выхода, активности и качества целевого продукта, оптимизация технологического процесса.The technical result of the present invention is: increasing the yield, activity and quality of the target product, optimization of the process.
Для достижения указанного технического результата предложен способ который включает в себя следующие стадии:To achieve the specified technical result, a method is proposed which includes the following stages:
Кору головного мозга убойных животных замораживают, замороженную ткань измельчают, гомогенизируют и проводят экстракцию 3% раствором уксусной кислоты, содержащей хлористый цинк в концентрации 1,2 г/л при массовом соотношении гомогената и раствора уксусной кислоты 1:5. Значение рН раствора должно быть рН 3.5. Для экстракции гомогенат выдерживают при температуре не выше +20°С при постоянном перемешивании в течение 48 часов. По окончании экстракции гомогенат сепарируют, отделяют твердую и жидкую фазы. К надосадочной жидкости добавляют охлажденный ацетона (температура не выше +5°С) в соотношении 1:5. Смесь перемешивают в течение 4 часов при температуре +5°С. Образовавшийся осадок отделяют на центрифуге и несколько раз промывают охлажденным ацетоном. Полученный влажный осадок сушат в вакуум-сушильном шкафу. Получают ацетоновый порошок. Ацетоновый порошок растворяют в воде для инъекций и устанавливают рН 7,0. добавляют фермент - сериновую эндопротеазу до конечной концентрации 0,3%, выдерживают при температуре +65°С при постоянном перемешивании в течении 3 часов. Затем инактивируют фермент при температуре +90°С в течение 30 минут, охлаждают до комнатной температуры, сепарируют, фильтруют и лиофилизируют. Далее проводят стерилизующую фильтрацию путем пропускания раствора через мембрану с диаметром пор 0,22 мм. Раствор разливают в емкости, замораживают и лиофилизируют. Целевой продукт представляет лиофилизированный порошок белого или белого с желтоватым оттенком цвета и содержит комплекс биологически активных пептидов.The cerebral cortex of slaughtered animals is frozen, the frozen tissue is crushed, homogenized, and extraction is carried out with a 3% solution of acetic acid containing zinc chloride at a concentration of 1.2 g / l at a weight ratio of homogenate and acetic acid solution of 1: 5. The pH of the solution should be pH 3.5. For extraction, the homogenate is maintained at a temperature not exceeding + 20 ° C with constant stirring for 48 hours. At the end of the extraction, the homogenate is separated, and the solid and liquid phases are separated. Chilled acetone (temperature not higher than + 5 ° C) is added to the supernatant in a ratio of 1: 5. The mixture is stirred for 4 hours at a temperature of + 5 ° C. The precipitate formed is centrifuged and washed several times with chilled acetone. The resulting wet cake is dried in a vacuum oven. Get acetone powder. Acetone powder is dissolved in water for injection and the pH is adjusted to 7.0. add the enzyme - serine endoprotease to a final concentration of 0.3%, incubated at a temperature of + 65 ° C with constant stirring for 3 hours. Then the enzyme is inactivated at a temperature of + 90 ° C for 30 minutes, cooled to room temperature, separated, filtered and lyophilized. Sterilization filtration is then carried out by passing the solution through a membrane with a pore diameter of 0.22 mm. The solution is poured into containers, frozen and lyophilized. The target product is a lyophilized powder of white or white with a yellowish tint and contains a complex of biologically active peptides.
Для производства используют кору головного мозга скота до 12-месячного возраста. Замороженную кору головного мозга используют не позднее чем через 8 месяцев после заморозки.For production, cattle cerebral cortex is used up to 12 months of age. Frozen cerebral cortex is used no later than 8 months after freezing.
Применение протеолитического фермента сериновой эндопротеазы, обладающей широкой субстрат - специфичностью, при высокой ионной силе, способствует более полному высвобождению и накоплению биологически активных пептидов из ацетонового порошка. Конечная концентрация фермента при ферментативном гидролизе составляет 0,3%. Проведенными нами исследованиями, по кинетики высвобождения пептидов из ацетонового порошка при ферментативном гидролизе, установлено, что максимальное количество пептидов накапливается в гидролизате в течении 3 часов. В течении данного времени интенсивно протекает протеолиз и происходит максимальное накопление продуктов промежуточного гидролиза белково-пептидных субстратов. Применение ограниченного ферментативного гидролиза способствует полному удалению высокомолекулярных белковых примесей из целевого продукта, которые могут вызывать негативные последствия, такие как аллергические реакции и прионные заболевания. В данном случае ферментативный гидролиз можно рассматривать, как альтернативный вариант методу ультрафильтрации с целью удаления белковых веществ проявляющие побочные свойства. Отсутствие белковых примесей в целевом продукте подтверждено методами ВЭЖХ и электрофореза по Леммли (Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклемновых кислот Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот М.: Наука, 1985. 536 с., Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие). М.: Наука, 1981. 288 с.).The use of the proteolytic enzyme of serine endoprotease, which has a wide substrate - specificity, with high ionic strength, contributes to a more complete release and accumulation of biologically active peptides from acetone powder. The final concentration of the enzyme during enzymatic hydrolysis is 0.3%. Our studies on the kinetics of the release of peptides from acetone powder during enzymatic hydrolysis, it was found that the maximum number of peptides accumulates in the hydrolyzate within 3 hours. During this time, proteolysis proceeds intensively and the maximum accumulation of products of intermediate hydrolysis of protein-peptide substrates occurs. The use of limited enzymatic hydrolysis promotes the complete removal of high molecular weight protein impurities from the target product, which can cause negative consequences, such as allergic reactions and prion diseases. In this case, enzymatic hydrolysis can be considered as an alternative to the ultrafiltration method in order to remove protein substances that exhibit side properties. The absence of protein impurities in the target product was confirmed by the methods of HPLC and electrophoresis according to Lemmli (Osterman L.A. Chromatography of proteins and nucleic acids Osterman L.A. Methods for the study of proteins and nucleic acids M .: Nauka, 1985.536 s., Electrophoresis and ultracentrifugation ( practical guide) .M .: Nauka, 1981. 288 p.).
Согласно литературным данным при ограниченном протеолизе белков происходит высвобождение низкомолекулярных пептидов, которые обладают выраженными биологически активными свойствами. Например, при протеолизе казеина (белок содержащийся в молоке) высвобождаются пептиды, которые обладают анальгетическими свойствами - казоморфины, при протеолизе иммуноглобулинов, в частности иммуноглобулинов G, образуются иммуномодулирующие пептиды - тафцин, ригин, пептиды коллагена и фибронектина участвующие в тканевом и клеточном гомеостазе (Структурные основы действия пептидных и белковых иммунорегуляторов под ред. Чипенса Г.И. Рига: Зинатне, 1990. 324 с., Jinsmaa Y, Yoshikawa М, 1999; «Enzymatic release of neocasomorphin and beta-casomorphinfrom bovine beta-casein»; Peptides 20:957-962.,).According to published data, with limited proteolysis of proteins, low molecular weight peptides are released that have pronounced biologically active properties. For example, during the proteolysis of casein (the protein contained in milk) peptides are released that have analgesic properties - casomorphins; during the proteolysis of immunoglobulins, in particular immunoglobulins G, immunomodulating peptides are formed - tuftsin, rigin, collagen and fibronectin peptides involved in tissue and cellular tissue the basics of the action of peptide and protein immunoregulators under the editorship of Chipens GI Riga: Zinatne, 1990. 324 pp., Jinsmaa Y, Yoshikawa M, 1999; “Enzymatic release of neocasomorphin and beta-casomorphinfrom bovine beta-casein”; Peptides 20: 957-962.,).
Использование ацетона на одной из стадий технологического процесса позволяет не только удалить липиды, пигменты и полисахариды, но и значительно сократить содержание уксусной кислоты и цинка хлористого в готовом продукте. Необходимо подчеркнуть, что из ацетонового порошка в основном извлекаются водорастворимые полипептиды и белки, что особенно важно при учете их фармакокинетики и биодоступности.The use of acetone at one of the stages of the technological process allows not only to remove lipids, pigments and polysaccharides, but also significantly reduce the content of acetic acid and zinc chloride in the finished product. It should be emphasized that water-soluble polypeptides and proteins are mainly extracted from acetone powder, which is especially important when considering their pharmacokinetics and bioavailability.
Сопоставимый анализ предлагаемого способа показал, что определяющим отличием заявляемого технического решения от прототипа является то, что биологически активные водорастворимые пептиды выделяют на стадии экстракции из ацетонового порошка при ферментативном гидролизе, при этом значительно повышается выход и качество целевого продукта (таблица 1 и таблица 2)A comparable analysis of the proposed method showed that the defining difference of the proposed technical solution from the prototype is that biologically active water-soluble peptides are isolated at the stage of extraction from acetone powder by enzymatic hydrolysis, while the yield and quality of the target product are significantly increased (table 1 and table 2)
Изобретение иллюстрируется примером конкретного выполнения способа: Замороженное сырье в количестве 22 кг подвергают измельчению и гомогенизации до получения гомогенной массы с помощью измельчителя. Далее проводят экстракцию 3% раствором кислоты уксусной при рН 3,5, содержащий цинк хлористый в концентрации 1,2 г\л при массовом соотношении измельченной массы и экстракционного раствора 1:5 Экстракцию проводят при постоянном перемешивании в течении 48 часов при температуре не более +20°С. По окончании процесса экстракции проводят отделение жидкой и твердой части экстракционной смеси при помощи сепаратора. Режим сепарации 2000-3000 об\мин. Отфильтрованный раствор экстракта охлаждается при перемешивании в течении 24 часов, после чего начинается процесс осаждения. К охлажденному экстракту добавляют охлажденный ацетон, в соотношении 1:5, при температура не выше +5°С. Далее смесь перемешивают и выдерживают в течение 4 часов для формирования осадка. Осадок отделяется от жидкой фазы при помощи центрифуги. Твердая фаза несколько раз (2-3 раза) промывается охлажденным ацетоном до тех пор, пока осадок не приобретет светло-серый или белый цвет. Полученный влажный осадок ацетонового порошка направляют в вакуумно-сушильный шкаф для сушки при температуре не выше +20°С. Время высушивания составляет 2,5-3,0 часа. Получают ацетоновый порошок в количестве 1,0 кг. Водно-ацетоновая смесь направляют на регенерацию ацетона.The invention is illustrated by an example of a specific implementation of the method: Frozen raw materials in an amount of 22 kg are subjected to grinding and homogenization to obtain a homogeneous mass using a grinder. Next, extraction is carried out with a 3% solution of acetic acid at pH 3.5, containing zinc chloride at a concentration of 1.2 g / l with a mass ratio of the crushed mass and extraction solution 1: 5. The extraction is carried out with constant stirring for 48 hours at a temperature of no more than + 20 ° C. At the end of the extraction process, the liquid and solid parts of the extraction mixture are separated using a separator. Separation mode 2000-3000 rpm The filtered extract solution is cooled with stirring for 24 hours, after which the precipitation process begins. Chilled acetone is added to the chilled extract in a ratio of 1: 5, at a temperature not exceeding + 5 ° C. Next, the mixture is stirred and incubated for 4 hours to form a precipitate. The precipitate is separated from the liquid phase using a centrifuge. The solid phase is washed several times (2-3 times) with chilled acetone until the precipitate acquires a light gray or white color. The obtained wet cake of acetone powder is sent to a vacuum drying oven for drying at a temperature not exceeding + 20 ° C. Drying time is 2.5-3.0 hours. Obtain acetone powder in an amount of 1.0 kg The water-acetone mixture is directed to the regeneration of acetone.
К ацетоновому порошку добавляют 19,5 л. воды для инъекций при рН 7,0. Затем вносят сериновую эндопротеазу (конечная концентрация 0,3%). После внесения фермента раствор полупродукта нагревают при постоянном перемешивании до +65°С. Нагрев осуществляют в течение 3 часов. Затем температуру реакционной массы увеличивают до +90°С и выдерживают в течение 30 минут для инактивации фермента. После окончания ферментативного гидролиза реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и подают на сепаратор для удаления твердой фазы. Режим сепарирования при 2000-3000 об/мин. Полученный фильтрат собирают и передают на стадию стерилизующей фильтрации.19.5 L was added to the acetone powder. water for injection at pH 7.0. Then make a serine endoprotease (final concentration of 0.3%). After making the enzyme, the intermediate product is heated with constant stirring to + 65 ° C. Heating is carried out for 3 hours. Then the temperature of the reaction mass is increased to + 90 ° C and maintained for 30 minutes to inactivate the enzyme. After enzymatic hydrolysis is complete, the reaction mixture is cooled to room temperature and fed to a separator to remove the solid phase. Separation mode at 2000-3000 rpm. The obtained filtrate is collected and transferred to the stage of sterilizing filtration.
Процессы стадии стерилизующей фильтрации осуществляют в помещении класса чистоты В. Санитарный статус фильтра для стерилизующей фильтрации предел отсечения 0,2 мкм. Фильтродержатель вместе с фильтром подвергают стерилизации на стерилизаторе температура стерилизации +134°С. Стерильный раствор разливают в предварительно подготовленные стерильные поддоны и передают на стадию лиофильной сушки. Процессы стадии осуществляются в помещении класса чистоты В с локальной зоной А в зоне загрузки/выгрузки сушки. Процесс производства осуществляют на лиофильной сушке в автоматическом режиме.The processes of the sterilizing filtration stage are carried out in a room of purity class B. The sanitary status of the filter for sterilizing filtration is a cutoff limit of 0.2 μm. The filter holder together with the filter is sterilized on a sterilizer with a sterilization temperature of + 134 ° C. The sterile solution is poured into previously prepared sterile trays and transferred to the stage of freeze drying. The stage processes are carried out in a room of cleanliness class B with a local zone A in the drying loading / unloading zone. The production process is carried out on freeze drying in automatic mode.
Высушенный готовый продукт представляет собой хорошо сформированный порошок белого или желтовато-белого цвета, потери в массе при высушивании не должны превышать 10%. Выход готового продукта составляет 0,4 кг сухого порошка. Высушенный готовый продукт упаковывается в первичную упаковку и передается в помещение для хранения, где маркируется и временно хранится в холодильнике.The dried finished product is a well-formed powder of white or yellowish white color, the mass loss during drying should not exceed 10%. The yield is 0.4 kg of dry powder. The dried finished product is packed in primary packaging and transferred to the storage room, where it is marked and temporarily stored in the refrigerator.
Далее проводят контроль параметров полученного продукта. Методы контроля указаны в таблице 3.Next, control the parameters of the resulting product. Control methods are shown in table 3.
Полученный заявляемым способом целевой продукт был проверен на биологическую активность. Биологическую активность продукта оценивают по влиянию на рост нервных элементов или выселяющихся клеток в зоне роста в культуре ткани коры головного мозга куриных эмбрионов.Obtained by the claimed method, the target product was tested for biological activity. The biological activity of the product is evaluated by the effect on the growth of nerve elements or evicted cells in the growth zone in the tissue culture of the cerebral cortex of chicken embryos.
Эксперименты проводят на эксплантатах, представляющих собой фрагменты коры головного мозга 10-ти суточных куриных эмбрионов. Куриные эмбрионы получают путем инкубирования яиц при 38,5°С в увлажненной атмосфере в СО2 - инкубаторе (Lamsystems, Россия) на протяжении 10-ти суток. Далее в стерильных условиях проводят препарирование эмбриона, извлечения головного мозга и отделение фрагментов коры головного мозга, которые помещают в одноразовые стерильные чашки Петри с коллагеновым покрытием (Thermo Scientific, США) и инкубируют 15-20 мин при 37 С. После чего к эксплантатам добавляют питательную среду, содержащую исследуемые образцы в концентрациях 20 нг/мл и инкубируют при 37,8°С в течение 48 часов. В качестве контроля используют эксплантаты, культивируемые в условиях только питательной среды.The experiments are carried out on explants, which are fragments of the cerebral cortex of 10-day-old chicken embryos. Chicken embryos are obtained by incubating eggs at 38.5 ° C in a humidified atmosphere in a CO 2 incubator (Lamsystems, Russia) for 10 days. Then, under sterile conditions, the embryo is prepared, the brain is extracted, and fragments of the cerebral cortex are separated, which are placed in disposable sterile collagen-coated Petri dishes (Thermo Scientific, USA) and incubated for 15-20 minutes at 37 ° C. After that, nutrient is added to the explants medium containing the studied samples at concentrations of 20 ng / ml and incubated at 37.8 ° C for 48 hours. As a control, use explants cultivated in conditions of a nutrient medium only.
Эксплантаты коры головного мозга куриных эмбрионов оценивают с помощью фазово-контрастного инвертируемого микроскопа (ЛОМО, Россия). Критерием биологической активности служило определение интенсивности роста эксплантатов посредством определения индекса площади (ИП) эксплантатов, который рассчитывают как соотношение площади всего эксплантата, включая периферическую зону роста (зону выселяющихся клеток), к исходной площади эксплантата (центральная зона). Значения ИП выражают в процентах, контрольное значение ИП принималось за 100%. За условную единицу площади принимают квадрат окуляр - сетки микроскопа (сторона квадрата при увеличении 3,5×10 равнялась 150 мкм). Значения ИП выражают в процентах, контрольное значение ИП принимают за 100%.Explants of the cerebral cortex of chicken embryos are evaluated using a phase-contrast inverted microscope (LOMO, Russia). The criterion of biological activity was the determination of the growth rate of the explants by determining the area index (PI) of the explants, which is calculated as the ratio of the area of the entire explant, including the peripheral growth zone (zone of evicted cells), to the original explant area (central zone). The IP values are expressed as a percentage, the control IP value was taken as 100%. A square eyepiece — the microscope mesh — is taken as a conventional unit of area (the side of the square with an increase of 3.5 × 10 was 150 μm). The IP values are expressed as a percentage, the control IP value is taken as 100%.
Общее количество проанализированных эксплантатов составило 62, из которых 22 являлись контрольными, 40 - опытными (n1,2=20).The total number of explants analyzed was 62, of which 22 were control, 40 were experimental (n 1,2 = 20).
Для расчетов используют программу STATISTICA 10. Статистическую достоверность рассчитывают с применением однопараметрического ANOVA теста с применением критерия Дункана, в качестве значимого уровня выбрана вероятность 0,5. Препарат считают биологически активным, если ИП ткани коры головного мозга после культивирования с добавлением целевого продукта в концентрации 20 нг/мл не менее чем на 20% больше ИП в контрольной группе, без целевого продуктаThe STATISTICA 10 program is used for calculations. Statistical reliability is calculated using the one-parameter ANOVA test using the Duncan criterion; a probability of 0.5 is chosen as a significant level. The drug is considered biologically active if the PI of the tissue of the cerebral cortex after cultivation with the addition of the target product at a concentration of 20 ng / ml is not less than 20% more than the PI in the control group, without the target product
Выявлено, что продукт полученный заявленным способом обладает выраженной биологической активностью - индексы площади эксплантатов коры головного мозга куриных эмбрионов достоверно превышали 20%, относительно контрольных значений (таблица 2)It was revealed that the product obtained by the claimed method has a pronounced biological activity - the area index of the explants of the cerebral cortex of the chicken embryos significantly exceeded 20%, relative to the control values (table 2)
Стоит отметить, что при добавлении в питательную среду продукта полученного по предлагаемому методу отмечалось более однородность образования монослоя клеток и формирование четких границ зоны роста эксплантатов. Проведенные испытания представлены в таблице 3.It should be noted that when the product obtained by the proposed method was added to the nutrient medium, a more uniform formation of a monolayer of cells and the formation of clear boundaries of the growth zone of explants were noted. The tests are presented in table 3.
Представленные в таблице 3 данные демонстрируют, что полученный заявленным способом целевой продукт имеет аналогичные качественные и количественные характеристики, а по некоторым параметрам заявленный продукт превосходит известный.The data presented in table 3 demonstrate that the target product obtained by the claimed method has similar qualitative and quantitative characteristics, and in some parameters the claimed product exceeds the known one.
Таким образом, целевой продукт, полученный предлагаемым способом, соответствует всем параметрам фармацевтического продукта - субстанции.Thus, the target product obtained by the proposed method meets all the parameters of a pharmaceutical product - substance.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017128862A RU2669692C1 (en) | 2017-08-14 | 2017-08-14 | Method for producing complex of biologically active peptides with neurotropic activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017128862A RU2669692C1 (en) | 2017-08-14 | 2017-08-14 | Method for producing complex of biologically active peptides with neurotropic activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2669692C1 true RU2669692C1 (en) | 2018-10-15 |
Family
ID=63862552
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017128862A RU2669692C1 (en) | 2017-08-14 | 2017-08-14 | Method for producing complex of biologically active peptides with neurotropic activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2669692C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995013823A1 (en) * | 1993-11-15 | 1995-05-26 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating neurological disorders |
| RU2090194C1 (en) * | 1994-09-30 | 1997-09-20 | Игорь Арнольдович Скворцов | Method for producing preparation for treating coordination disturbances in cerebellum and brain stem region |
| RU2266129C2 (en) * | 1996-03-05 | 2005-12-20 | Риджентс оф Дзе Юниверсити оф Калифорния | Method for treating neurodegenerative disorder or myelinogenesis disorder |
| RU2275924C2 (en) * | 2004-08-04 | 2006-05-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Герофарм" | Method for preparing complex of biologically active polypeptides for normalization of brain function and pharmaceutical agent based on thereof |
-
2017
- 2017-08-14 RU RU2017128862A patent/RU2669692C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995013823A1 (en) * | 1993-11-15 | 1995-05-26 | Celtrix Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating neurological disorders |
| RU2090194C1 (en) * | 1994-09-30 | 1997-09-20 | Игорь Арнольдович Скворцов | Method for producing preparation for treating coordination disturbances in cerebellum and brain stem region |
| RU2266129C2 (en) * | 1996-03-05 | 2005-12-20 | Риджентс оф Дзе Юниверсити оф Калифорния | Method for treating neurodegenerative disorder or myelinogenesis disorder |
| RU2275924C2 (en) * | 2004-08-04 | 2006-05-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Герофарм" | Method for preparing complex of biologically active polypeptides for normalization of brain function and pharmaceutical agent based on thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ГРОМОВА О.А. и др. Нейротрофический и антиоксидантный потенциал нейропептидов и микроэлементов//Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика, 2015;7(4):92-100. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2017209066C1 (en) | Walnut oligopeptide powder, preparation method and application thereof | |
| Samberkar et al. | Lion's Mane, Hericium erinaceus and Tiger Milk, Lignosus rhinocerotis (Higher Basidiomycetes) medicinal mushrooms stimulate neurite outgrowth in dissociated cells of brain, spinal cord, and retina: an in vitro study | |
| US8759497B2 (en) | Method for producing protein hydrolysates | |
| US20070017447A1 (en) | Avian eggshell membrane polypeptide extraction via fermentation process | |
| CN110317847B (en) | Extract from animal tissue, and preparation method and application thereof | |
| JP2008228727A (en) | Material including royal jelly-decomposing enzyme | |
| RU2428196C1 (en) | Method for preparing biologically active complex and biologically active protein-polypeptide complex | |
| CN104745665A (en) | Collagen peptide with function of promoting bone growth as well as preparation method and application thereof | |
| RU2386444C1 (en) | Method of preparing biologically active product of raw velvet antlers | |
| RU2669692C1 (en) | Method for producing complex of biologically active peptides with neurotropic activity | |
| RU2487152C2 (en) | Method of producing gelatine | |
| CN112795535A (en) | Composition for inducing mesenchymal stem cells to release exosomes with specific functions for promoting differentiation of skin epithelial cells and application of composition | |
| RU2669693C1 (en) | Method for obtaining a complex of biologically active peptides that restore the prostate gland function | |
| CN102440399A (en) | Instant egg white powder and preparation method thereof | |
| CN116217663A (en) | Antioxidant polypeptide KFTCAP derived from haematococcus pluvialis, preparation method and application | |
| US20220112267A1 (en) | Produce and isolate and/or extract collagen and/or gelatin from animal cell lines and/or tissue explants | |
| RU2669691C1 (en) | Method for producing a complex of biologically active peptides having immunostimulating activity | |
| RU2128511C1 (en) | Method of preparing drug used in sicknesses associated with central nervous system functional damages | |
| JP2013247927A (en) | Rice bran-originated cell proliferation promoter | |
| RU2563816C1 (en) | Method for producing immune stimulant | |
| WO2021145791A1 (en) | Extra-strong ultra-thin collagen membrane and method for producing same | |
| RU2049472C1 (en) | Method of preparing brain tissue hydrolyzate "cerebrolyzate" | |
| RU2673802C1 (en) | Method of manufacture of sterile pharmaceutical substance | |
| RU2671537C2 (en) | Hyaluronidase preparation and method of its preparation | |
| CN109627341B (en) | Hormone-induced zinc finger protein polypeptide, preparation method thereof and application thereof in pharmacy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200815 |