RU2665165C1 - Способ получения иммуносорбента - Google Patents

Способ получения иммуносорбента Download PDF

Info

Publication number
RU2665165C1
RU2665165C1 RU2017133079A RU2017133079A RU2665165C1 RU 2665165 C1 RU2665165 C1 RU 2665165C1 RU 2017133079 A RU2017133079 A RU 2017133079A RU 2017133079 A RU2017133079 A RU 2017133079A RU 2665165 C1 RU2665165 C1 RU 2665165C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
sorbent
hours
immunosorbent
protein
aerosil
Prior art date
Application number
RU2017133079A
Other languages
English (en)
Inventor
Аревик Аркадиевна Филь
Альберт Добаевич Болатчиев
Владимир Александрович Батурин
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Иммунотэкс"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Иммунотэкс" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Иммунотэкс"
Priority to RU2017133079A priority Critical patent/RU2665165C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2665165C1 publication Critical patent/RU2665165C1/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof

Landscapes

  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области получения сорбентов на основе модифицированного кремнезема, которые могут быть использованы в иммунохимии, биотехнологии и медицине в качестве иммуносорбентов. Способ предусматривает иммобилизацию основного белка миелина на неорганическом носителе - аэросиле, поверхность которого модифицирована декстраном. Изобретение позволяет увеличить уровень специфической емкости иммуносорбентов относительно антител к основному белку миелина. 1 табл., 3 пр.

Description

Изобретение относится к биотехнологии, иммунохимии, в частности к способам получения специфических иммуносорбентов, и может применяться в медицине в процессах гемосорбции, лимфосорбции и плазмосорбции.
Проблема сохранения внутренней среды организма и его здоровья решается использованием в медицинской практике методов сорбционной детоксикации организма Одно из основных направлений биотехнологии предусматривает разработку сорбционных материалов и дальнейшее их применение в медицине и медицинской промышленности в качестве незаменимых материалов для гемо-, лимфо-, плазмо- и энтеросорбции. Наиболее перспективный метод сорбционной детоксикации организма - гемосорбция, основанная на способности активных сорбентов удалять из крови вредные вещества различной природы, при определенных заболеваниях (онкологических, аутоиммунных, инфекционных, аллергических и т.д.) [Пьянова Л.Г. Углеродные сорбенты в медицине и протеомике // Химия в интересах устойчивого развития. Новосибирск, 2011. Т. 19. №1. С. 113-122].
В связи с высокими требованиями к чистоте биотехнологических продуктов все более актуальной становится задача разработки сорбционных материалов направленного действия, а именно селективных иммуносорбентов. В настоящее время особое внимание уделяется вопросам лечения демиелинизирующих заболеваний центральной нервной системы, среди которых самым распространенным является рассеянный склероз, посредством удаления из системного кровотока пациентов аутоантител, вызывающих деструкцию миелина, составляющего оболочку нервного волокна. Ключевым моментом в этом вопросе является создание механически стабильных сорбентов, способных обеспечивать высокий выход аутоантител к белку миелина [Huang D., Rae-Grant A. Advances in the immune pathogenesis and treatment of multiple sclerosis // Cent. Nerv. Syst. Agents Med. Chem. - 2009. - V. 9, №l. - P. 20-31].
Известен способ получения магноиммуносорбента по которому проводят эмульсионную полимеризацию смеси сомономеров полиакриламида и катализатора с обработанным магнитным порошком. Подготовленный магносорбент активируют 5%-ным глутаровым альдегидом в течение 18-20 ч и иммобилизуют специфичными иммуноглобулинами в растворе ФСБ при инкубации в течение 18-20 ч. Для блокировки несвязавшихся альдегидных групп магноиммуносорбенты дополнительно обрабатывают раствором альбумина в течение 1-3 ч (патент РФ №2068703, A61K 39/385, C12N 11/00 // G01N 33/53, опубл. 10.11.1996; Бюл. №31).
Недостатками способа являются длительность и многостадийность процесса его получения, использование дорогостоящих токсичных реактивов. Полученные по этому способу иммуносорбенты имеют недостаточную специфическую емкость и чувствительность, так как способны к неспецифической сорбции антител и белков из сыворотки крови.
Известен способ получения иммуносорбента (патент РФ №2253871, G01N 33/552, 33/553, опубл. 10.06.2005; Бюл. №16). Способ включает модифицирование аэросила 3-4% раствором хитозана в 3% растворе уксусной кислоты и активирование бензохиноном.
Недостатком указанного способа является низкая чувствительность иммуносорбента и неспецифическая сорбция, что обусловлено наличием на поверхности сорбента функциональных групп, способных к взаимодействию с различными видами иммуноглобулинов.
Наиболее близким к предлагаемому способу является «Способ получения иммуносорбента» (патент РФ №2102134, B01J 20/10. Опубл. 20.01.1998 г. Бюллетень №2). Способ включает модифицирование аэросила декстраном, с последующим окислением перхлоратом натрия.
Способ осуществляют следующим образом: смесь, состоящую из 5 г аэросила и 1 г магнитного порошка, суспендируют в 100 мл 0,5%-ного водного раствора декстрана и далее выдерживают при температуре 24°С 1 ч. Полученный сорбент высушивают при 100-110°С в течение 30 мин. К полученному препарату добавляют 50 мл водного раствора, содержащего 2 г перхлората натрия, инкубируют смесь в темноте 1 ч. Затем сорбент отмывают 100 мл дистиллированной воды. К 0,02 г носителя приливают 1 мл чумных иммуноглобулинов с концентрацией по белку 4 мг/мл. Смесь оставляют при 24°С в течение 2 ч, далее надсадочную жидкость удаляют, а носитель трижды по 10 мл промывают 0,9%-ным раствором хлорида натрия. Результаты определения специфической емкости иммуносорбента проводят методом иммунофлуоресценции.
Однако указанный способ обладает низким уровнем специфической активности иммуносорбента, обусловленной наличием функциональных групп на поверхности сорбента, способных к неспецифической сорбции компонентов сыворотки крови.
Поставлена цель повышение специфической емкости иммуносорбента.
Поставленная цель достигается получением иммуносорбента на основе неорганического носителя - аэросила, поверхность которого активирована полисахаридом - декстраном с дополнительной иммобилизацией конкретного антигена - основного белка миелина.
Способ осуществляют следующим образом.
К 10 г аэросила добавляют 150 мл дистиллированной воды, содержащей 1 г декстрана. Полученную суспензию оставляют созревать при комнатной температуре 24 ч. Время созревания обусловлено протеканием процессов конденсации с участием силанольных групп аэросила. При времени гелеобразования менее 24 ч, не происходит полного вызревания гидрогеля, а более 24 ч наблюдаются процессы старения гидрогеля. Формирование жесткого остова носителя проводят при тщательном перемешивании в течение 1 ч при температуре 110-130°С. Полученный сорбент просеивают через сито с размером ячеек 200-250 мкм, что объясняется максимально возможной рабочей поверхностью гранул. Далее его пятикратно отмывают дистиллированной водой по 100 мл до рН промывных вод 7,0. К 1 г влажного сорбента добавляют 2,0 мл раствора основного белка миелина с концентрацией 0,025-0,125 мг/мл. Объем раствора белка выбран с учетом полной смачиваемости носителя. Концентрация белка обусловлена возможностью более полного проведения процесса иммобилизации. Иммобилизацию проводят в течение 2 ч при температуре 22°С. По завершении процесса иммобилизации носитель с иммобилизованным белком отмывают трехкратно бидистиллированной водой объемом по 50 мл. Затем сорбент обрабатывают 0,1% раствором человеческого сывороточного альбумина в течение 2 ч для активации не связавшихся функциональных групп на поверхности сорбента. Проводят эту процедуру с целью исключения дальнейшей неспецифической сорбции.
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Получение иммуносорбента при концентрации белка 0,125 мг/мл. К 10 г аэросила добавляют 150 мл дистиллированной воды, содержащей 1 г декстрана. Полученную суспензию оставляют созревать при комнатной температуре в течение 24 ч. Формирование жесткого остова носителя проводят при тщательном перемешивании в течение 1 ч при температуре 110-130°С. Полученный сорбент просеивают через сито с размером ячеек 200-250 мкм. Далее его пятикратно отмывают дистиллированной водой по 100 мл до рН промывных вод 7,0. Для иммобилизации используют основной белок миелина. К 1 г влажного сорбента добавляют 2,0 мл раствора белка с концентрацией 0,125 мг/мл. Иммобилизацию проводят в течение 2 ч при температуре 22°С. По завершении процесса иммобилизации носитель с иммобилизованным белком отмывают трехкратно бидистиллированной водой объемом по 50 мл. Затем сорбент обрабатывают 0,1% раствором человеческого сывороточного альбумина в течение 2 ч. Сорбционная емкость иммуносорбента относительно специфических антител к основному белку миелина составила 79%.
Пример 2. Получение иммуносорбента при концентрации белка 0,075 мг/мл осуществляют по методике примера 1, но для иммобилизации используют основной белок миелина в концентрации 0,075 мг/мл. Сорбционная емкость иммуносорбента относительно специфических антител к основному белку миелина составила 60%.
Пример 3. Получение иммуносорбента при концентрации белка 0,025 мг/мл осуществляют по методике примера 1, но для иммобилизации используют основной белок миелина в концентрации 0,025 мг/мл. Сорбционная емкость иммуносорбента относительно специфических антител к основному белку миелина составила 34,8%.
В таблице 1 представлены сравнительные данные по сорбционной емкости предлагаемых сорбентов в сопоставлении с сорбентом, полученным известным способом.
Figure 00000001
Полученный иммуносорбент по предлагаемому способу позволяет увеличить уровень специфической емкости иммуносорбентов относительно антител к основному белку миелина, что позволяет с большей клинической эффективностью использовать разработанный сорбент в лечении аутоиммунных заболеваний, обусловленных повышением аутоантител к основному белку миелина.
Таким образом, дополнительная иммобилизация основного белка миелина на аэросиле и увеличение времени гелеобразования обеспечивает повышение специфичности и увеличение сорбционной емкости, что обусловливает повышение эффективности специфической терапии (по сравнению с лекарственной) больных демиелинизирующими заболеваниями, в частности рассеянным склерозом.

Claims (1)

  1. Способ получения иммуносорбента, включающий добавление к аэросилу водного раствора декстрана, созревание суспензии при комнатной температуре, высушивание сорбента, отмывание его дистиллированной водой, отличающийся тем, что гелеобразование суспензии аэросила с декстраном производят 24 ч с формированием жесткого остова носителя при тщательном перемешивании в течение 1 часа при температуре 110-130°С, с последующим просеиванием полученного сорбента через сито с ячейками 200-250 мкм и пятикратным отмываем полученных гранул дистиллированной водой по 100 мл до промывных вод 7,0 рН, дальнейшим добавлением к 1 г влажного сорбента 2,0 мл раствора основного белка миелина в концентрации 0,025-0,125 мг/мл с проведением 2 ч иммобилизации при температуре 22°С и дальнейшим трехкратным отмыванием носителя с иммобилизованным белком бидистиллированной водой объемом по 50 мл, а для активации не связавшихся функциональных групп на поверхности сорбента отмытый сорбент 2 ч обрабатывают 0,1% раствором человеческого сывороточного альбумина.
RU2017133079A 2017-09-21 2017-09-21 Способ получения иммуносорбента RU2665165C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017133079A RU2665165C1 (ru) 2017-09-21 2017-09-21 Способ получения иммуносорбента

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017133079A RU2665165C1 (ru) 2017-09-21 2017-09-21 Способ получения иммуносорбента

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2665165C1 true RU2665165C1 (ru) 2018-08-28

Family

ID=63459647

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017133079A RU2665165C1 (ru) 2017-09-21 2017-09-21 Способ получения иммуносорбента

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2665165C1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2102134C1 (ru) * 1995-12-09 1998-01-20 Ставропольская Государственная Сельскохозяйственная Академия Способ получения иммуносорбента
RU2246968C2 (ru) * 2003-03-31 2005-02-27 Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Способ получения магноиммуносорбента для обнаружения бактериальных антигенов
RU2294369C2 (ru) * 2004-05-17 2007-02-27 Ставропольский государственный университет Способ получения иммобилизованной уреазы

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2102134C1 (ru) * 1995-12-09 1998-01-20 Ставропольская Государственная Сельскохозяйственная Академия Способ получения иммуносорбента
RU2246968C2 (ru) * 2003-03-31 2005-02-27 Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Способ получения магноиммуносорбента для обнаружения бактериальных антигенов
RU2294369C2 (ru) * 2004-05-17 2007-02-27 Ставропольский государственный университет Способ получения иммобилизованной уреазы

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
БАРДАХИВСКАЯ К.И. И ДР. Иммуносорбция в лечении аутоиммунных заболеваний // БIOТЕХНОЛОГIЯ, 2009, Т.2, N 2, С.9-22. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4945876B2 (ja) ハイモビリティーグループタンパクの吸着材および体液浄化カラム
Weber et al. Development of specific adsorbents for human tumor necrosis factor-α: Influence of antibody immobilization on performance and biocompatibility
CN109621912A (zh) 一种血液灌流用活性炭吸附剂的包膜方法
RU2665165C1 (ru) Способ получения иммуносорбента
CN103502807A (zh) 用于样本制备的方法和装置
CN111701576B (zh) 西尼罗病毒免疫吸附剂的制备方法、免疫吸附剂及其应用
EP0230247A2 (en) Adsorbent for removing complement component
CN113426423B (zh) 用于血液体外循环去除ldl的吸附剂及其制备方法和灌流器
JPH05340948A (ja) 鶏卵抗体固定化担体およびその固定化方法
Uzun et al. Poly (hydroxyethyl methacrylate) based affinity membranes for in vitro removal of anti-dsDNA antibodies from SLE plasma
JPH01119264A (ja) 吸着体およびそれを用いた除去装置
JPH0667472B2 (ja) 血清アミロイドp蛋白用吸着体
CN104741086A (zh) 丙型肝炎病毒吸附剂的制备方法
RU2366958C2 (ru) Способ очистки крови от антител к тиреоидным гормонам с помощью иммобилизированного гранулированного магнитоуправляемого препарата
JPS6155415B2 (ru)
CN109627334A (zh) 一种纳米抗体、以该纳米抗体为配基的吸附剂及其用途
RU2027192C1 (ru) Способ очистки крови от ревматоидного фактора
JP3251547B2 (ja) 免疫複合体の除去装置
CN114540332B (zh) 一种尿酸酶固定化树脂的制备方法及其应用
Mullaney et al. Investigation of plasma protein adsorption on functionalized nanoparticles for application in apheresis
JPH0634633A (ja) 鶏卵抗体固定化担体およびその製造方法
JP2739232B2 (ja) 生物学的親和性を有するセルロースゲルの使用方法
RU2409384C1 (ru) Способ получения микрокапсул для доставки днк в макроорганизм
JP2983955B2 (ja) 腎糸球体基底膜付着性蛋白質の除去装置
JPH05261281A (ja) 生理活性物質固定化担体とその製法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190922